CN103549202A - 一种具有保护对虾肝脏功能的饲料添加剂及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种具有保护对虾肝脏功能的饲料添加剂，其具体为枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、植物乳杆菌、干酪乳杆菌通过培养发酵制得的微生物菌的饲料添加剂，以实现对对虾体内及整个水环境的调节，减少在对虾养殖中对虾肝胰脏的破坏、病变情况的发生。本发明还公开了一种制备上述饲料添加剂的方法。本发明所述的饲料添加剂安全、无污染、无残留、绿色环保，能有效提高对虾的免疫力和抗病毒的能力，促进对虾肝脏化学性损伤的修复，保护对虾肝脏，并能有效防止饲养水体污染，从而提高对虾的产量和质量；本发明所述的制备方法安全无污染、操作简便且生产成本低，适合各种规模的制备生产。

Description

一种具有保护对虾肝脏功能的饲料添加剂及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种对虾饲料添加剂，尤其涉及一种保护对虾肝胰脏化学性损伤、复合添加在对虾饲料中的微生物发酵产品及其制备方法。

背景技术

对虾的肝脏功能是分泌消化酶与吸收、贮存营养物质。同时，对虾肝脏有解毒功能；有防御功能；能制造凝血因子；代谢各种维生素、脂肪、蛋白质、激素；如果对虾的肝脏受损，对虾全身器官将会崩溃。

随着水产养殖业的技术发展以及人们对对虾的需求越来越大，养殖户需要扩大养殖面积以及对虾养殖的密度以满足市场的需求。对虾养殖的问题越来越突出显著。

目前在对虾养殖中常见问题有：

1、养殖户大多使用高蛋白高能量的全价配合饲料，以使饲料的营养含量越来越高，其中饲料中脂肪量过高，会导致对虾对过高的脂肪消化吸收不完全，导致大量的脂肪聚积在的肝部及体内，使虾肝脏负荷较重、严重影响其肝脏功能和正常生长；另外，饲料中的维生素含量过高，也会使对虾肝脏出现维生素代谢失调的状态。

2、饲养环境中有机物累积过多，病菌繁殖速度快，对对虾肝脏的损害较大；饲养水质指标，如pH值、氨氮、亚硝酸盐等指标超标，饲料发霉或添加抗生素等药物、长时间大剂量的使用一些不规范的药物等也会引起肝脏中毒。

3、水产动物因长期生活于高密度的环境中，在水中滥用抗生素、中药、杀虫剂等药物所造成的肝脏病变问题中，抗生素对肝脏损害最大，如四环素类、磺胺类、利福平类，特别是在对虾的苗期，如果使用大量的抗生素，就会对肝脏造成长期的伤害。

4、由于喂养时间和量的问题，对虾长时间处于饥饿状态或营养不足，也会对对虾肝脏功能造成严重的损伤，使肝细胞修复与代谢受到阻碍，新细胞无法及时生长，会使肝脏收缩或破碎。

在上述的因素作用下肝脏很容易受到各种有害菌的侵害和感染，最终导致肝脏发病。

现有的饲养技术中，主要是采用平衡饲料营养、合理使用抗生素、中药、杀虫剂以及内服营养保肝药物，如清毒散、生命素、肝胆康，帮助对虾体内排毒，清除虾体内的自由基来达到预防对虾肝脏病变的目的。

其中，专利CN103250873A公开了一种对虾用中草药饲料添加剂，包括以下重量份的组分：板蓝根20-30份、党参15-25份、当归10-15份、穿心莲5-15份、黄芪15-25份、黄岑10-20份。本发明所述对虾用中草药饲料添加剂以1-5‰的比例均匀加入到对虾普通饲料中拌料后再进行投喂，以增强对虾的机体免疫力和抗病能力，提高成活率。但是该专利所述的添加剂中的中药成分可能会对饲养的水质造成影响，不利于对虾的生长。

综上所述，现有的技术并无法为目前对虾养殖提供一种高效、低价、安全，无刺激、无污染、无残留的绿色饲料及其添加剂。

发明内容

本发明的目的是为了减少在对虾养殖中对虾肝胰脏的破坏、病变情况的发生，提供一种能抗氧化、清除自由基、促进对虾化学性肝损伤的修复、改善肝功能的安全，无刺激、无污染、无残留的绿色环保饲料或饲料添加剂及其制备方法。

本发明第一个方面是提供一种具有保护对虾肝脏功能的饲料添加剂。

本发明所述的饲料添加剂，包括以下重量百分比的菌种：

枯草芽孢杆菌优选为10-40%，更优选为20-30%；

地衣芽孢杆菌优选为5-35%，更优选为15-25%；

植物乳杆菌优选为10-40%，更优选为20-30%；

干酪乳杆菌优选为3-40%，更优选为13-30%。

上述的菌种中枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）优选为保藏编号为ACCCNo：10619的菌种，地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis）优选为保藏编号为ACCC No：0146的菌种；植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）优选为保藏编号为ACCC No：1118的菌种，干酪乳杆菌（Lactobacillus casei）优选为保藏编号为ACCC No：10639的菌种。

本发明第二个方面是提供一种如本发明所述的保护对虾肝脏的饲料添加剂的制备方法包括：

步骤1，生产制种：将枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、植物乳杆菌、干酪乳杆菌分别置于培养基中进行培养，待培养基表面菌苔布满，取出备用；

步骤2，菌株单独及复合培养：

步骤2.1，复合A菌种的培养：将称取的植物乳杆菌、干酪乳杆菌混合接种于培养基中，进行密闭静置培养，密闭培养静置过程中保持pH值为小于3.50-4.00，并释放产出的气体；

步骤2.2，复合B菌种的培养：将称取的枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌接种于培养基中搅拌、发酵，显微镜下观察90－95%生孢时结束培养；

步骤3，将A、B菌液混合，进行菌群驯化和扩大培养：将步骤2.1和2.2中复合培养的液体置于固体扩大培养基中，混合，进行发酵。

上述的制备方法还包括以下步骤：

步骤4，粉碎添加特殊载体：

步骤4.1，干燥：将第三步取得的产品进行干燥；

步骤4.1，添加载体：将干燥后的产品按重量比例添加载体，搅拌均匀、粉碎、过筛，得到所需产品；

步骤4.3，封装与检测：过筛后封装保存，取样检测。

上述的步骤1中将四种菌种分别装在培养基中进行培养，培养的温度优选为32-39℃，更优选为35-39℃。

上述的步骤1中将四种菌种分别装在培养基中进行培养，培养的时间优选为24-98h，更优选为48-72h。

上述的步骤1中去除培养基中培养的菌种的条件还包括菌苔白中带黄。

上述的步骤1完成后需放入2-4℃冰箱保存待用。

上述步骤2中，将步骤1培养的菌种按以下重量百分比称取：

枯草芽孢杆菌优选为10-40%，更优选为20-30%；

地衣芽孢杆菌优选为5-35%，更优选为15-25%；

植物乳杆菌优选为10-40%，更优选为20-30%；

干酪乳杆菌优选为3-40%，更优选为13-30%。

上述步骤2.1中使用茄子瓶对称取的植物乳杆菌、干酪乳杆菌进行复合培养，将茄子瓶中混合菌苔按比例接种于培养基中，其重量比例优选为1：（15-40），更优选为的1：（25-30）。

上述步骤2.1中接种混合菌苔的培养基配比的重量百分比为：糖蜜2-5%、尿素2-4%、蛋白胨0.5-1%、磷酸二氢钾0-1%、氯化钠0.1-0.5%以及无菌水配成100%溶液。

上述步骤2.1中接种混合菌苔的培养基还需经过121-130℃、30-45min的高温灭菌。

上述步骤2.1中搅拌是在发酵瓶中进行的，其搅拌的转速为200-240r/min。

上述步骤2.1中所述的静置为在150-300L的消毒后塑料桶中进行，塑料桶的体积大小范围更优选为150-250L，最优选为200L。

上述步骤2.1中所述的静置的时间优选为10-20天，更优选为12-15天，静置的温度优选为30-40℃，更优选为35-40℃。

上述步骤2.2中使用茄子瓶对所称取的枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌进行复合培养，并将茄子瓶中两种菌种按比例接种于培养基中，其重量比例优选为1：（15-45），更优选为1：（25-35）。

上述步骤2.2中，所述的培养基配比的重量百分比为：蛋白胨0.2-0.8%、葡萄糖1.0-1.8%、氯化钠0.01-0.07%、酵母膏1.8-2.8%、硫化镁0.01-0.06%以及无菌水配成100%溶液。

上述步骤2.2中，所需用的培养基还需进行高温灭菌，高温灭菌的温度优选为121-130℃，灭菌的时间为30-45min。

上述步骤2.2中搅拌的转速优选为200r/min-240r/min，其培养温度优选为35-40℃，通气量优选为1：1。

上述步骤2.2中其发酵时间优选为15-30h，更优选为22-26h。

上述步骤3中所述的步骤2.1和步骤2.2中得到的复合培养的液体按比例接种于固体扩大培养基中，其重量比例优选为1：（20-40），更优选为1：（29-32）。

上述步骤3中所述的固体扩大培养基其重量百分配比为：豆粕10-15%、麸皮40-50%、尿素1.5-2.8%、酵母粉2-3%、玉米粉8-13%、糖蜜10-15%、硫酸镁0.8-1.2%、加无菌水至100%。

上述步骤3中所述的发酵过程是在单向排气阀密封发酵袋中进行的。

上述步骤3中所述的固体扩大培养基经过高温灭菌，高温灭菌的温度优选为121-130℃，灭菌的时间为30-45min。

上述步骤3中所述搅拌速度时间优选为30-45min。

上述步骤3中所述的倒入单向排气阀密封发酵袋中，为消毒后的发酵袋，其发酵温度优选为30-40℃，更优选为30-37℃，发酵时间优选为10-20天，更优选为12-15天。

上述步骤3中所述的发酵过程中取样三次，发酵结束后取样一次，测定发酵液的水分含量为30-35℃，pH值为3.5-4.0。

上述步骤4.1中所述的喷雾干燥机流量为10ml/min，最后需喷入溶解于适量水中的保护剂，制粒机的进风温度为40-70℃，出风温度30-50℃，待喷雾器内温度降到25-35℃时出料。

上述步骤4.2中所述添加的载体具体为沸石粉和饲料用轻质碳酸钙，其重量百分配比为沸石粉60-80%、碳酸钙20-40%。

上述的步骤4.2中所述的添加载体为将干燥后产品按重量比例为1：（0.02-0.03）添加载体，再倒入搅拌机中搅拌均匀。

上述步骤4.2中还包括将添加载体后搅拌均匀的产物转入粉碎间进行粉碎，物料温度控制在38-45℃，粉碎后的物料过60-90目筛网，筛后粗料重新粉碎；

上述步骤4.3中包括过筛后装入带有内袋的桶或袋中，扎紧袋口，系好标识牌，转入成品库有序堆放。

上述步骤4.3中所述的取样检测，其检测的主要参数为：水分含量≤11.8%、活菌数优选为30-60亿/g，更优选为40-60亿/g。

上述步骤得到的产物其物理性状为淡黄色粉末状固体。

本发明第三个方面是提供一种对虾饲料，包括本发明第一个方面所述的任意一种饲料添加剂。

本发明第三个方面的一种优选实施例中，在所述对虾饲料中，所述饲料添加剂重量比例为0.5-2‰。

上述采用的枯草芽孢杆菌，地衣芽孢杆菌，植物乳杆菌，干酪乳杆菌，经过培养、混合处理后可以对对虾体内及整个水环境的调节，能有效提高对虾的免疫力和抗病毒的能力，还能促进对虾肝脏化学性损伤的修复，保护对虾肝脏，并能有效防止饲养水体污染，从而提高对虾的产量和质量。

其中，枯草芽孢杆菌能对水产中的弧菌、大肠杆菌和杆状病毒等有害微生物有很强的抑制作用，分泌大量可分解病原真菌细胞壁的酶，从而抑制真菌病害，分解养殖池中的有毒有害物质，净化水质；还可以减少对虾病害发生，可以大大提高对虾产量，从而提高经济效益，生物环保，刺激水产动物免疫器官的发育，增强机体免疫力；减少对虾病害发生，明显提高对虾产量。

地衣芽孢杆菌可以促使对虾分泌抗病毒物质，产生免疫调节因子和抗活性物质，并具有独特的生物夺氧作用机制，能抑制病原菌生长，减少抗生素和消毒剂的使用。

植物乳杆菌能抑制底部粪便和残饵料的腐烂，也就降低了氨氮和亚硝酸盐的增加，减少了化工降解素的用量，降低了养殖成本。

干酪乳杆菌能补充对虾的内源酶，增强消化功能，促进对饲料营养的消化吸收。

上述的杆菌之间会有协同作用，能更好的在投放饲料过程中或在随对虾的排泄物进入到对虾饲养的水域中，分解饲养对虾的水中的氨、氮、硫化氢、亚硝酸盐等，调节平衡养殖水中的pH值，降低有机耗氧量，间接增氧，改良水质，从而净化对虾生长的环境。

采用本发明所述的方法制得的产品具有独特发酵醇香和极强诱食效果，产品中还具有数量巨大的有益微生物复合种群，通过复合菌体代谢产生大量的酶及其他代谢物质，既能补充对虾的内源酶，增强消化功能，促进对饲料营养的消化吸收，通过有益微生物改善对虾肠道菌群品质，抑制病原菌生长，确保肝胰脏发育正常后进行胆汁合成，能将体内毒物，如肝内、肠内毒素、化学药物、毒物排出体外，起到保肝护肝和解毒排毒的作用，从而提高对虾的产量和质量。

本发明所述的制备方法安全无污染、操作简便且生产成本低，适合各种规模的制备生产。

附图说明

图1为本发明实施例1所述的添加剂对对虾蛋白酶活性的影响对照图；

图2为本发明实施例2所述的添加剂对对虾淀粉酶活性的影响对照图。

具体实施例

下面结合具体实施例和附图内容对本发明做进一步说明，但下述实施例不能作为本发明的限定。

实施例一

本实施例选用的菌种包括：枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）保藏编号为ACCC No：10619的菌种，地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis）保藏编号为ACCC No：0146的菌种；植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）保藏编号为ACCC No：1118的菌种，干酪乳杆菌（Lactobacillus casei）保藏编号为ACCCNo：10639的菌种。

步骤1，有益菌株的单独及复合培养：

选取上述四种菌种，以所述添加剂总重量为基准，其重量比例为：

枯草芽孢杆菌23%；

地衣芽孢杆菌20%；

植物乳杆菌30%；

干酪乳杆菌27%。

步骤2，菌株单独及复合培养：

步骤2.1，复合A菌种的培养：

将称取的植物乳杆菌、干酪乳杆菌混合在一起进行复合培养：将茄子瓶中混合菌苔种于121℃、3min高温灭菌的培养基中，在发酵罐中搅拌30min，其转速为200r/min，搅拌均匀后放入200L的消毒后塑料桶中静置15天，35℃密闭培养静置过程中每天测定pH值小于3.80，并释放产出的气体。

上述培养基重量百分配比为：糖蜜4%、尿素3%、蛋白胨0.5%、磷酸二氢钾0.5.%、氯化钠0.1%、无菌水配成100%溶液。

步骤2.2，复合B菌种的培养：

将称取的枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌复合培养：将茄子瓶中的枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌按1：25比例接种于121℃、30min高温灭菌的培养基中，搅拌转速为200r/min，培养温度为37℃，通气量为1：1，发酵时间为24小时，显微镜下观察95%生孢时结束。

上述培养基按重量百分比配比的原料；蛋白胨0.2%、葡萄糖1.0%、氯化钠0.01%、酵母膏1.8%、硫化镁0.01%，无菌水配成100%溶液。

步骤3，将A、B菌液混合，进行菌群驯化和扩大培养：

将步骤2中复合培养的液体按照1：29的重量比例121℃、30min高温灭菌的固体扩大培养基中，搅拌30min至均匀，倒入消毒后的单向排气阀密封发酵袋中，保持温度37℃、发酵时间为12天，发酵过程中取样三次，，发酵结束后取样一次，测定水分为30%、pH值为3.5。

驯化和扩大培养培养基重量百分配比为：豆粕10%、麸皮4%、尿素1.5%、酵母粉2%、玉米粉8%、糖蜜10%、硫酸镁0.8%、加无菌水至100%。

步骤4，粉碎添加特殊载体：

步骤4.1，干燥：将第三步取得的产品加入喷雾干燥机中，流量为10ml/min，最后喷入溶解于适量水中的保护剂，制粒机的进风温度60℃，出风温度45℃，待喷雾器内温度降到30℃时出料。

步骤4.2，添加载体：将干燥后的产品按1：0.02，倒入搅拌机中搅拌均匀；转入粉碎间进行粉碎，物料温度控制在38℃，粉碎后的物料过80目筛网，筛后粗料重新粉碎。

步骤4.3，封装检测：过筛后装入带有内袋的桶或袋中，扎紧袋口，系好标识牌，转入成品库有序堆放；取样检测，主要参数：水分含量为≤11.8%、活菌数40-60亿/g。

其中步骤4.2中添加的载体由沸石粉和饲料用轻质碳酸钙组成，其重量百分配比为沸石粉70%、碳酸钙30%。

上述步骤制得的保护对虾肝脏的饲料添加剂的物理性状为淡黄色粉末状固体。

实施例二

本实施例选用的菌种包括：枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）保藏编号为ACCC No：10619的菌种，地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis）保藏编号为ACCC No：0146的菌种；植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）保藏编号为ACCC No：1118的菌种，干酪乳杆菌（Lactobacillus casei）保藏编号为ACCCNo：10639的菌种。

步骤1，有益菌株的单独及复合培养：

选取上述四种菌种，其选取的重量百分比的比例为：

枯草芽孢杆菌25%；

地衣芽孢杆菌20%；

植物乳杆菌25%；

干酪乳杆菌30%。

步骤2，菌株单独及复合培养：

步骤2.1，复合A菌种的培养：

将称取的植物乳杆菌、干酪乳杆菌混合在一起进行复合培养：将茄子瓶中混合菌苔按1：30的重量比例接种于130℃、45min高温灭菌的培养基中，在发酵罐中搅拌30min，其转速为240r/min，搅拌均匀后放入200L的消毒后塑料桶中静置15天，在40℃密闭培养静置过程中每天测定pH值小于4.00，并释放产出的气体。

培养基重量百分配比为：糖蜜5%、尿素4%、蛋白胨1%、磷酸二氢钾1%、氯化钠0.5%、无菌水配成100%溶液。

步骤2.2，复合B菌种的培养：

将称取的枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌复合培养：将茄子瓶中的枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌按1：35的比例接种于130℃、45min高温灭菌的培养基中，搅拌转速为240r/min，培养温度为40℃，通气量为1：1，发酵时间为26小时，显微镜下观察95%生孢时结束。

上述培养基按重量百分配比的原料：蛋白胨0.8%、葡萄糖1.8%、氯化钠0.07%、酵母膏2.8%、硫化镁0.06%，无菌水配成100%溶液。

步骤3，将A、B菌液混合，进行菌群驯化和扩大培养：

将步骤2中复合培养的液体按照1：32的重量比例130℃、45min高温灭菌的固体扩大培养基中，搅拌45min至均匀，倒入消毒后的单向排气阀密封发酵袋中，保持温度37℃，发酵时间为15天，发酵过程中取样三次，测定水分和Ph值，发酵结束后取样，测定水分为32%、pH值为3.8。

驯化和扩大培养培养基重量百分配比为：豆粕15%、麸皮50%、尿素2.8%、酵母粉3%、玉米粉13%、糖蜜15%、硫酸镁1.2%、加无菌水至100%。

步骤4，粉碎添加特殊载体：

步骤4.1，干燥：将第三步取得的产品加入喷雾干燥机中，流量控制为10ml/分钟，最后喷入溶解于适量水中的保护剂，制粒机的进风温度为60℃，出风温度45℃，待喷雾器内温度降到30℃时出料，即得。

步骤4.2，添加载体；将干燥后的产品按1：0.03的重量比例添加载体，倒入搅拌机中搅拌均匀；转入粉碎间进行粉碎，物料温度控制在42℃，粉碎后的物料过80目筛网，筛后粗料重新粉碎；

步骤4.3，封装检测：过筛后装入带有内袋的桶或袋中，扎紧袋口，系好标识牌，转入成品库有序堆放；取样检测，主要参数：水分含量为≤11.8%、活菌数40-60亿/g。

添加载体由沸石粉和饲料用轻质碳酸钙组成，其重量百分配比为沸石粉60%、碳酸钙40%。

上述步骤制得的保护对虾肝脏的饲料添加剂的物理性状：淡黄色粉末状固体。

实验一：添加本发明实施例所述的添加剂的饲料与普通对虾饲料对对虾养殖水质影响的对比实验

实验方法：实验分为四组：实施例一试验塘、实施例二试验塘、对照塘一、对照塘二。实施例一与实施例二的试验塘中加入了分别添加2‰的实施例一和实施例二中所述的添加剂的对虾饲料，在四个对虾饲养塘中同时投入相同剂量的饲料，分别在使用添有本发明实施例所述的添加剂饲料前、持续使用45天后、持续使用90天后三个时间段，采用精密式水质检测盒（为常用的水质检测盒）检测四个对虾饲养塘水中的pH值，亚硝酸盐、氨氮以及溶解氧的含量，并判断记录其水色。

实验结果：如表1所示。

表1，本发明实施例所述的添加剂的饲料与普通对虾饲料对对虾养殖水质影响的对比实验

实验结果分析：在四组试验塘中，实施例一和二试验塘中亚硝酸盐及氨氮的含量明显增加，分别从0.02mg/L下降到0.005mg/L以及从0.05mg/L下降到0.01mg/L，而对照塘一与对照塘二中的亚硝酸盐及氨氮的含量则明显增加；

进一步的，实施1和2试验塘中，溶解氧含量增加，水的颜色也由墨绿色变成草绿色或由混绿色变成草绿色，而对照塘一和二中的溶解氧含量则明显下降，水色变深。

实验二：测定本发明所述的添加剂对对虾胰肝脏蛋白酶活性影响的实验

实验方法：在对虾胰肝脏内提取蛋白酶，实验参照GB/T23527-2009《蛋白酶活性的测定方法》中有关蛋白酶的测定进行。

实验结果如附图1所示。

实验结果分析：

随着饲料中添加剂用量的加大，相应的对虾胰脏内的蛋白酶的活性由8u/g逐渐上升到14u/g，其活性明显增强。因此，加入本发明所述的添加剂，可以有效的使对虾胰肝脏内的蛋白酶活性增强，有利于对虾的生长。

实验三：测定本发明所述的添加剂对对虾胰肝脏淀粉酶活性影响的实验

实验方法：在对虾胰肝脏内提取淀粉酶，取预先洁净灭菌干燥试管，编号。取提取的粗酶液1ml于各只试管中，于60℃水浴中预热5min柠檬酸淀粉缓冲液同时在60℃水中预热5min，取柠檬酸淀粉缓冲液1ml加入试管中，于60℃水浴中保温30min，然后加入1.5ml3,5-二硝基水杨酸，沸水中5min，加入氢氧化钠溶液终止反应，加蒸馏水至20ml。摇匀，用分光光度计测定OD520nm值。在上述条件下以单位体积样品在30min释放1mg麦芽糖所需的酶量为一个麦芽糖单位表示酶活性。

酶活力单位定义：在60℃、PH5.6条件下，每小时从2％的可溶性淀粉溶液中释放出1mg尔麦芽糖的酶量定义为1个酶活力单位（U）

淀粉酶活性U按下式计算：

$U=\frac{K\×(A-A_0)}{S\×(30\÷60)\×180}\×F$

其中：U——样品淀粉酶活性，U/ml；

K——标准曲线斜率；

F——样品溶液反应前的总量，ml；

S——样品测试量；表1中S＝1ml；

60——1小时为60min；

30——反应时间，min。

实验结果如附图2所示。

实验结果分析：随着饲料中添加剂用量由0增加到0.4‰，相应的对虾胰脏内的淀粉酶的活性也由7.3u/g逐渐上升到13.6u/g，活性明显增强。因此，加入本发明所述的添加剂，可以有效的增强对虾胰肝脏内的淀粉酶活性，有利于对虾对饲料消化及营养的吸收，促进对虾的生长。

实验四：测定本发明实施例1、实施例2所述的添加剂对对虾养殖的数量、大小以及发病率影响的实验

Z、W、X、D组中的养殖塘中分别加入相同大小的对虾，每组面积规格如表2所述。其中，Z、W、X、D四组具有对照实验组，对照实验组使用未加入添加剂的对虾饲料进行喂养。

实验方法：将Z、W、X、D四组中在同一时间加入相同大小的对虾，根据养殖池塘的亩数加入相近的对虾数量。使用本发明实施例1、实施例2中所述的添加剂与饲料按1：0.1‰重量比例混合，使用同等剂量的加入添加剂或未加入添加剂的饲料进行喂养。饲养一定的时间后，将池塘中的对虾捞出，对对虾产出数量、重量以及发病率进行统计。

实验结果如表2所示。

实验结果分析：由Z组可知，实施例1与2在放养时加入的对虾尾数16万尾以及20万尾，小于对照塘的24万尾，且实施例1与2中对虾的养殖密度大于对照塘。在经过四个月的对虾饲养后，对照塘中的对虾的总产量、亩产量及对虾的大小都明显小于实施例1和实施例2。实施例1和2中对虾的基本不发病，而对照塘中的对虾则出现重度发病的情况。

由W组可知，实施例1、实施例2与对照组相比，其情况与Z组相似，但是在发病情况中，使用实施例所述的添加剂加入对虾饲料中，对虾不会发病，而实施例2中会出现轻度发病症状，而在不使用本发明实施例所述的饲料添加剂的情况下，对照组对虾出现中度发病情况。

X组与D组的实验结果与Z组以及W组相似，实施例1与2实验组中对虾的大小、数量以及发病情况明显优于对照组。

因此，本发明实施例1和2可以有效的提高对虾的产量和质量，减少发病率，保护对虾肝脏等。

以上对本发明的具体实施例进行了详细描述，但其只作为范例，本发明并不限制于以上描述的具体实施例。对于本领域技术人员而言，任何对该实用进行的等同修改和替代也都在本发明的范畴之中。因此，在不脱离本发明的精神和范围下所作的均等变换和修改，都应涵盖在本发明的范围内。

Claims (10)

1.一种具有保护对虾肝脏功能的饲料添加剂，其特征在于，以所述饲料添加剂总重量为基准，包括以下重量百分比的菌种：

枯草芽孢杆菌优选为10-40%；

地衣芽孢杆菌优选为5-35%；

植物乳杆菌优选为10-40%；

干酪乳杆菌优选为3-40%。

2.一种如权利要求1所述的具有保护对虾肝脏功能的饲料添加剂的制备方法，其特征在于，包括：

步骤1，生产制种：将枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、植物乳杆菌、干酪乳杆菌分别置于培养基中进行培养，待培养基表面菌苔布满，取出备用；

步骤2，菌株单独及复合培养：

步骤2.1，复合A菌种的培养：将称取的植物乳杆菌、干酪乳杆菌混合接种于培养基中，进行密闭静置培养，密闭培养静置过程中保持pH值为小于3.50-4.00，并释放产出的气体；

步骤2.2，复合B菌种的培养：将称取的枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌接种于培养基中搅拌、发酵，显微镜下观察90-95%生孢时结束培养；

步骤3，将A、B菌液混合，进行菌群驯化和扩大培养：将步骤2.1和2.2中复合培养的液体置于固体扩大培养基中，混合，进行发酵，发酵后得到所述饲料添加剂。

3.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述的步骤1中培养的温度为32-39℃，培养的时间为24-98h。

4.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述的步骤2.1中植物乳杆菌、干酪乳杆菌按重量比例1：（15-40）接种于培养基中。

5.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述的步骤2.1中的培养基配比的重量比例为：糖蜜2-5%、尿素2-4%、蛋白胨0.5-1%、磷酸二氢钾0-1%、氯化钠0.1-0.5%以及无菌水配成100%溶液。

6.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述的步骤2.2中枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌按重量比例1：（15-45）接种于培养基中。

7.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述的步骤2.2中培养基配比的重量比例为：蛋白胨0.2-0.8%、葡萄糖1.0-1.8%、氯化钠0.01-0.07%、酵母膏1.8-2.8%、硫化镁0.01-0.06%以及无菌水配成100%溶液。

8.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述的步骤2.1和步骤2.2中的复合培养的液体与固体扩大培养基的重量比例为1：（20-40）。

9.如权利要求2或9所述的制备方法，其特征在于，所述的步骤3中所述的固体扩大培养基其重量百分配比为：豆粕10-15%、麸皮40-50%、尿素1.5-2.8%、酵母粉2-3%、玉米粉8-13%、糖蜜10-15%、硫酸镁0.8-1.2%、加无菌水至100%。

10.一种对虾饲料，其特征在于，包括权利要求1所述的饲料添加剂。

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