CN106365325B - 一种降解水产养殖污染的复合微生物制剂及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种降解水产养殖污染的复合微生物制剂的制备方法，还涉及一种上述制备方法所制得的复合微生物制剂。该方法包括以下步骤：将光合细菌、产碱菌、枯草芽胞杆菌、米曲霉按照8～9:3～4:3～4:2～3的细菌数比例混合均匀，得混合菌种；将培养基固型物、海泥浸出液、米糠等的发酵液、混合菌种按照5～6：1：1：60～65的重量比混合，于发酵罐内发酵得混合发酵菌液；将咖啡双眉藻和青岛大扁藻以3：1的质量比混合均匀，得混合藻粉；将辅料填充物、混合藻粉、膨润土、混合发酵菌液按照2：1：2：20～21的重量比混合，烘干，粉碎，即得。本发明能高效降解养殖水体氮污染，具有净化水质、显著改善养殖水环境的效果。

Description

一种降解水产养殖污染的复合微生物制剂及其制备方法
技术领域
本发明专利属于微生物及其应用领域，尤其涉及一种降解水产养殖污染的复合微生物制剂的制备方法，还涉及一种上述制备方法所制得的复合微生物制剂。
背景技术
海洋是人类获取高端食品和优质蛋白的“蓝色粮仓”。20世纪80年代以来，在野生资源匮乏受限和广大消费市场需求的驱动下，我国水产养殖业迅猛发展，养殖集约化程度越来越高。以循环水工厂化养殖为代表的集约化高密度养殖业，是我国目前水产养殖业的热门发展方向。
水体质量，是水产养殖的根本和基础，直接影响养殖质量、效益甚至生产的成败。为了提高水产养殖动物的生长速度，需要给水产养殖动物充足的饲料，而过量的投饵往往容易导致大量残饵的累积。残饵中溶解出的有机氮等有害物质不易被分解，水体中氮的累积超过养殖生物的耐受范围会对养殖动物产生直接的毒害作用。养殖水体中的氮主要以分子态氮、有机氮、无机氮形式存在。在无机态氮中，氨氮和亚硝氮态氮对养殖水生动物具有强烈地毒害作用，甚至会引起养殖生物死亡。此外，水体中的氮含量过高，会造成养殖水体中的浮游植物过量生长，大量消耗水体的氧气，严重影响养殖生物的正常生活和生长。因此水产养殖中的高浓度的氨氮和亚硝氮成为影响养殖生物生长和健康、制约养殖发展的重要因素。
随着微生物技术的发展，利用有益微生物进行微生物调控来改善和净化水质，受到越来越多的关注和研究。然而现有的应用于养殖水环境调控的益生菌制剂还存在以下问题：菌种单一，降解效果还不尽人意。因此开发出一种具有高效降解效果的复合微生物制剂具有重要的实践意义。
发明内容
本发明的目的之一是提供一种降解水产养殖污染的复合微生物制剂，可高效降解养殖水体污染，尤其是能高效降解养殖水体氮污染，具有净化水质、显著改善养殖水环境的效果。
为了解决上述技术问题，本发明采用以下技术方案，一种降解水产养殖污染的复合微生物制剂的制备方法，包括以下步骤：
(1)将光合细菌、产碱菌、枯草芽胞杆菌、米曲霉分别进行扩大培养至菌体浓度为108～109cfu/g，将光合细菌、产碱菌、枯草芽胞杆菌、米曲霉按照8～ 9:3～4:3～4:2～3的细菌数比例混合均匀，得混合菌种；
(2)将酵母粉、蛋白胨、氯化钠、豆粕粉、玉米粕和纯化水以2：6：1：2： 2：12的重量比混合均匀；
(3)将沸石粉、花生粕和麦饭石粉以1：1：1的重量比例混合，所得混合物作为辅料填充物；
(4)将海泥用粉碎机粉碎，过100目筛，过筛后加入提取罐中，将质量浓度为50％的酒精加入提取罐中，酒精用量为海泥重量的10倍，开启搅拌，将提取罐置于恒温水浴摇床，在140rpm、70～80℃条件下提取30min，100目过滤取滤液，滤渣返回提取罐中重复提取一次，100目过滤取滤液，合并两次所得滤液，得海泥浸出液；
(5)按照下列重量份数称取以下各组分：米糠18～25份、麦秸15～19份、苦瓜秧12～15份、荷叶10～14份、地肤子9～10份、锯末5～7份、西瓜皮5～ 6份、紫荆皮3～4份、槐花3～4份、尿素1～2份、干酒糟1份、干酵母1～2 份、贝壳粉1份，将称量好的各组分混匀，并向混合物中加入等量的纯化水，搅拌混匀，放入玻璃容器，28℃～30℃条件下避光发酵72小时，得发酵产物，将所得发酵产物用100目筛网，取过滤所得的发酵液；
(6)将步骤(2)所得的混合物、海泥浸出液、发酵液、混合菌种按照5～ 6：1：1：60～65的重量比例均匀混合，然后置于发酵罐内于28℃，搅拌速度 180～200rpm，通气量为4V/V.min，培养5d，得到混合发酵菌液；
(7)将从自然海区分离得到的咖啡双眉藻、青岛大扁藻分别进行扩大培养，将咖啡双眉藻藻液和青岛大扁藻藻液分别离心浓缩，再用去离子水冲洗离心浓缩所得的鲜藻，然后冷冻干燥，将冷冻干燥好的咖啡双眉藻和青岛大扁藻以3： 1的质量比混合均匀，得混合藻粉；
(8)将辅料填充物、混合藻粉、膨润土、混合发酵菌液按照2：1：2：20～ 21的重量比混合，置于50℃烘干机烘干，粉碎，制成复合微生物制剂。
本发明中，光合细菌、产碱菌、枯草芽胞杆菌、米曲霉均可市购或从有关微生物保藏机构获得，来源广泛，且任何商品化的光合细菌、产碱菌、枯草芽胞杆菌、米曲霉均可实现本发明。步骤(1)中将上述各菌株扩大培养时各种微生物培养液的制取方法均采用对应的标准培养基和培养液依常规进行。将光合细菌、产碱菌、枯草芽胞杆菌、米曲霉按照8～9:3～4:3～4:2～3的细菌数比例混合均匀的优点是可发挥上述各菌株的协调互补作用，不仅菌株生长快、无拮抗作用，而且所制得的复合菌制剂对水体中的NH4-N、NO2-N以及NO3-N的降解率高。本发明中的咖啡双眉藻、青岛大扁藻可以光合作用产生氧气，增加池塘容氧，还可提高混合发酵菌液对养殖水体氮污染的降解率，而且咖啡双眉藻和青岛大扁藻还可作为水产动物的饵料。将按照步骤(6)的操作方法所得的混合发酵菌液以特定比例与辅料填充物、混合藻粉、膨润土混合后所得的复合微生物制剂提高了混合发酵菌对水体中的NH4-N、NO2-N以及NO3-N的降解率，有利于混合发酵菌中的各菌株之间的协同降解作用。此外，本发明的复合微生物制剂对养殖动物无毒害，降解速度快、效果明显，无药物残留问题，不造成二次污染。
所用的光合细菌可以是球形红假单胞菌、沼泽红假单胞菌或荚膜红假单胞菌。
所用的产碱菌可以为菌株保藏编号为CICC 9010的海水产碱菌 (Alcaligenesaquamarinus)。
所用的枯草芽胞杆菌可以为枯草芽胞杆菌枯草亚种(Bacillus subtilissubsp.subtilis)，菌株保藏编号为CICC 21171。
所用的枯草芽胞杆菌也可以为菌株保藏编号为CICC 21312的枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis)。
所用的米曲霉可以为任何市场上或保藏机构购买的米曲霉，比如可以为购自中国工业微生物菌种保藏管理中心、菌株保藏编号为CICC 2118的米曲霉 (Aspergillusoryzae)。
本发明的另一目的是提供一种上述制备方法所得的复合微生物制剂。
优选地，所述沸石粉和麦饭石粉的粒径为100目，所述膨润土的粒径为200 目。由于比表面积的大小会对吸附效果产生影响，因此本发明的膨润土、沸石粉和麦饭石粉形成了不同比表面积的颗粒组团，实验结果表明，将膨润土、沸石粉和麦饭石粉粉碎至不同的粒径，有利于提高膨润土、沸石粉和麦饭石粉之间的协同吸附作用，进而提高复合微生物制剂对水产养殖污染物和氮污染物的降解率。
优选地，步骤(1)中，将光合细菌、产碱菌、枯草芽胞杆菌、米曲霉按照 9:3:4:2的细菌数比例混合均匀。经发明人反复研究表明，以该细菌数比例混合上述各菌株的优点是不仅菌株生长快、无拮抗作用，而且所制得的复合菌制剂对水体中的NH4-N、NO2-N以及NO3-N的降解率高。
优选地，步骤(5)中，称取的各组分的重量份数如下：米糠21份、麦秸 18份、苦瓜秧12份、荷叶12份、地肤子10份、锯末7份、西瓜皮5份、紫荆皮3份、槐花4份、尿素1份、干酒糟1份、干酵母2份、贝壳粉1份。
优选地，步骤(6)的具体操作为：将步骤(2)所得的混合物、海泥浸出液、发酵液、混合菌种按照6：1：1：60的重量比例均匀混合，然后置于发酵罐内于28℃，搅拌速度180～200rpm，通气量为4V/V.min，培养5d，得到混合发酵菌液。
优选地，步骤(8)中，将辅料填充物、混合藻粉、膨润土、混合发酵菌液按照2：1：2：21的重量比混合。
在本发明中，复合微生物制剂的降解效果显著优于单菌株，且具有存储和使用方便的优点，在水产养殖中具有广阔的应用前景。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：本发明中，光合细菌、产碱菌、枯草芽胞杆菌、米曲霉均可市购或从有关微生物保藏机构获得，来源广泛，且任何商品化的光合细菌、产碱菌、枯草芽胞杆菌、米曲霉均可实现本发明。步骤(1)中将上述各菌株扩大培养时各种微生物培养液的制取方法均采用对应的标准培养基和培养液依常规进行。将光合细菌、产碱菌、枯草芽胞杆菌、米曲霉按照8～9:3～4:3～4:2～3的细菌数比例混合均匀的优点是可发挥上述各菌株的协调互补作用，不仅菌株生长快、无拮抗作用，而且所制得的复合菌制剂对水体中的NH4-N、NO2-N以及NO3-N的降解率高。本发明中的咖啡双眉藻、青岛大扁藻可以光合作用产生氧气，增加池塘容氧，还可提高混合发酵菌液对养殖水体氮污染的降解率，而且咖啡双眉藻和青岛大扁藻还可作为水产动物的饵料。将按照步骤(6)的操作方法所得的混合发酵菌液以特定比例与辅料填充物、混合藻粉、膨润土混合后所得的复合微生物制剂提高了混合发酵菌对水体中的NH4-N、NO2-N以及NO3-N的降解率，有利于混合发酵菌中的各菌株之间的协同降解作用。此外，本发明的复合微生物制剂对养殖动物无毒害，降解速度快、效果明显，无药物残留问题，不造成二次污染。
具体实施方式
以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。
实施例1
一种降解水产养殖污染的复合微生物制剂的制备方法，包括以下步骤：
(1)将光合细菌、产碱菌、枯草芽胞杆菌、米曲霉分别进行扩大培养至菌体浓度为108～109cfu/g，将光合细菌、产碱菌、枯草芽胞杆菌、米曲霉按照 9:3:4:2的细菌数比例混合均匀，得混合菌种；
(2)将酵母粉、蛋白胨、氯化钠、豆粕粉、玉米粕和纯化水以2：6：1：2： 2：12的重量比混合均匀；
(3)将沸石粉、花生粕和麦饭石粉以1：1：1的重量比例混合，所得混合物作为辅料填充物，所述沸石粉和麦饭石粉的粒径为100目，所述膨润土的粒径为200目；
(4)将海泥用粉碎机粉碎，过100目筛，过筛后加入提取罐中，将质量浓度为50％的酒精加入提取罐中，酒精用量为海泥重量的10倍，开启搅拌，将提取罐置于恒温水浴摇床，在140rpm、70～80℃条件下提取30min，100目过滤取滤液，滤渣返回提取罐中重复提取一次，100目过滤取滤液，合并两次所得滤液，得海泥浸出液；
(5)按照下列重量份数称取以下各组分：米糠21份、麦秸18份、苦瓜秧 12份、荷叶12份、地肤子10份、锯末7份、西瓜皮5份、紫荆皮3份、槐花 4份、尿素1份、干酒糟1份、干酵母2份、贝壳粉1份，将称量好的各组分混匀，并向混合物中加入等量的纯化水，搅拌混匀，放入玻璃容器，28℃～30℃条件下避光发酵72小时，得发酵产物，将所得发酵产物用100目筛网，取过滤所得的发酵液；
(6)将步骤(2)所得的混合物、海泥浸出液、发酵液、混合菌种按照6： 1：1：60的重量比例均匀混合，然后置于发酵罐内于28℃，搅拌速度180～ 200rpm，通气量为4V/V.min，培养5d，得到混合发酵菌液；
(7)将从自然海区分离得到的咖啡双眉藻、青岛大扁藻分别进行扩大培养，将咖啡双眉藻藻液和青岛大扁藻藻液分别离心浓缩，再用去离子水冲洗离心浓缩所得的鲜藻，然后冷冻干燥，将冷冻干燥好的咖啡双眉藻和青岛大扁藻以3： 1的质量比混合均匀，得混合藻粉；
(8)将辅料填充物、混合藻粉、膨润土、混合发酵菌液按照2：1：2：21 的重量比混合，置于50℃烘干机烘干，粉碎，制成复合微生物制剂。
所用的光合细菌可以是球形红假单胞菌。
所用的产碱菌可以为菌株保藏编号为CICC 9010的海水产碱菌 (Alcaligenesaquamarinus)。
所用的枯草芽胞杆菌可以为枯草芽胞杆菌枯草亚种(Bacillus subtilissubsp.subtilis)，菌株保藏编号为CICC 21171。
所用的米曲霉可以为任何市场上或保藏机构购买的米曲霉，比如可以为购自中国工业微生物菌种保藏管理中心、菌株保藏编号为CICC 2118的米曲霉 (Aspergillusoryzae)。
一种上述制备方法所得的复合微生物制剂。
实施例2
一种降解水产养殖污染的复合微生物制剂的制备方法，包括以下步骤：
(1)将光合细菌、产碱菌、枯草芽胞杆菌、米曲霉分别进行扩大培养至菌体浓度为108～109cfu/g，将光合细菌、产碱菌、枯草芽胞杆菌、米曲霉按照 8:4:3:2的细菌数比例混合均匀，得混合菌种；
(2)将酵母粉、蛋白胨、氯化钠、豆粕粉、玉米粕和纯化水以2：6：1：2： 2：12的重量比混合均匀；
(3)将沸石粉、花生粕和麦饭石粉以1：1：1的重量比例混合，所得混合物作为辅料填充物，所述沸石粉和麦饭石粉的粒径为100目，所述膨润土的粒径为200目；
(4)将海泥用粉碎机粉碎，过100目筛，过筛后加入提取罐中，将质量浓度为50％的酒精加入提取罐中，酒精用量为海泥重量的10倍，开启搅拌，将提取罐置于恒温水浴摇床，在140rpm、70～80℃条件下提取30min，100目过滤取滤液，滤渣返回提取罐中重复提取一次，100目过滤取滤液，合并两次所得滤液，得海泥浸出液；
(5)按照下列重量份数称取以下各组分：米糠18份、麦秸18份、苦瓜秧 14份、荷叶10份、地肤子9份、锯末6份、西瓜皮6份、紫荆皮3份、槐花3 份、尿素1份、干酒糟1份、干酵母1份、贝壳粉1份，将称量好的各组分混匀，并向混合物中加入等量的纯化水，搅拌混匀，放入玻璃容器，28℃～30℃条件下避光发酵72小时，得发酵产物，将所得发酵产物用100目筛网，取过滤所得的发酵液；
(6)将步骤(2)所得的混合物、海泥浸出液、发酵液、混合菌种按照5： 1：1：62的重量比例均匀混合，然后置于发酵罐内于28℃，搅拌速度180～ 200rpm，通气量为4V/V.min，培养5d，得到混合发酵菌液；
(7)将从自然海区分离得到的咖啡双眉藻、青岛大扁藻分别进行扩大培养，将咖啡双眉藻藻液和青岛大扁藻藻液分别离心浓缩，再用去离子水冲洗离心浓缩所得的鲜藻，然后冷冻干燥，将冷冻干燥好的咖啡双眉藻和青岛大扁藻以3： 1的质量比混合均匀，得混合藻粉；
(8)将辅料填充物、混合藻粉、膨润土、混合发酵菌液按照2：1：2：20 的重量比混合，置于50℃烘干机烘干，粉碎，制成复合微生物制剂。
所用的光合细菌可以是沼泽红假单胞菌。
所用的产碱菌可以为菌株保藏编号为CICC 9010的海水产碱菌 (Alcaligenesaquamarinus)。
所用的枯草芽胞杆菌也可以为菌株保藏编号为CICC 21312的枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis)。
所用的米曲霉可以为任何市场上或保藏机构购买的米曲霉，比如可以为购自中国工业微生物菌种保藏管理中心、菌株保藏编号为CICC 2118的米曲霉 (Aspergillusoryzae)。
一种上述制备方法所得的复合微生物制剂。
实施例3
一种降解水产养殖污染的复合微生物制剂的制备方法，包括以下步骤：
(1)将光合细菌、产碱菌、枯草芽胞杆菌、米曲霉分别进行扩大培养至菌体浓度为108～109cfu/g，将光合细菌、产碱菌、枯草芽胞杆菌、米曲霉按照 8:4:3:3的细菌数比例混合均匀，得混合菌种；
(2)将酵母粉、蛋白胨、氯化钠、豆粕粉、玉米粕和纯化水以2：6：1：2： 2：12的重量比混合均匀；
(3)将沸石粉、花生粕和麦饭石粉以1：1：1的重量比例混合，所得混合物作为辅料填充物；
(4)将海泥用粉碎机粉碎，过100目筛，过筛后加入提取罐中，将质量浓度为50％的酒精加入提取罐中，酒精用量为海泥重量的10倍，开启搅拌，将提取罐置于恒温水浴摇床，在140rpm、70～80℃条件下提取30min，100目过滤取滤液，滤渣返回提取罐中重复提取一次，100目过滤取滤液，合并两次所得滤液，得海泥浸出液；
(5)按照下列重量份数称取以下各组分：米糠25份、麦秸15份、苦瓜秧 15份、荷叶11份、地肤子10份、锯末5份、西瓜皮6份、紫荆皮4份、槐花 4份、尿素2份、干酒糟1份、干酵母2份、贝壳粉1份，将称量好的各组分混匀，并向混合物中加入等量的纯化水，搅拌混匀，放入玻璃容器，28℃～30℃条件下避光发酵72小时，得发酵产物，将所得发酵产物用100目筛网，取过滤所得的发酵液；
(6)将步骤(2)所得的混合物、海泥浸出液、发酵液、混合菌种按照5： 1：1：60的重量比例均匀混合，然后置于发酵罐内于28℃，搅拌速度180～ 200rpm，通气量为4V/V.min，培养5d，得到混合发酵菌液；
(7)将从自然海区分离得到的咖啡双眉藻、青岛大扁藻分别进行扩大培养，将咖啡双眉藻藻液和青岛大扁藻藻液分别离心浓缩，再用去离子水冲洗离心浓缩所得的鲜藻，然后冷冻干燥，将冷冻干燥好的咖啡双眉藻和青岛大扁藻以3： 1的质量比混合均匀，得混合藻粉；
(8)将辅料填充物、混合藻粉、膨润土、混合发酵菌液按照2：1：2：21 的重量比混合，置于50℃烘干机烘干，粉碎，制成复合微生物制剂。
所用的光合细菌可以是荚膜红假单胞菌。
所用的产碱菌可以为菌株保藏编号为CICC 9010的海水产碱菌 (Alcaligenesaquamarinus)。
所用的枯草芽胞杆菌可以为枯草芽胞杆菌枯草亚种(Bacillus subtilissubsp.subtilis)，菌株保藏编号为CICC 21171。
所用的米曲霉可以为任何市场上或保藏机构购买的米曲霉，比如可以为购自中国工业微生物菌种保藏管理中心、菌株保藏编号为CICC 2118的米曲霉 (Aspergillusoryzae)。
一种上述制备方法所得的复合微生物制剂。
实施例4
一种降解水产养殖污染的复合微生物制剂的制备方法，包括以下步骤：
(1)将光合细菌、产碱菌、枯草芽胞杆菌、米曲霉分别进行扩大培养至菌体浓度为108～109cfu/g，将光合细菌、产碱菌、枯草芽胞杆菌、米曲霉按照 9:4:3:3的细菌数比例混合均匀，得混合菌种；
(2)将酵母粉、蛋白胨、氯化钠、豆粕粉、玉米粕和纯化水以2：6：1：2： 2：12的重量比混合均匀；
(3)将沸石粉、花生粕和麦饭石粉以1：1：1的重量比例混合，所得混合物作为辅料填充物；
(4)将海泥用粉碎机粉碎，过100目筛，过筛后加入提取罐中，将质量浓度为50％的酒精加入提取罐中，酒精用量为海泥重量的10倍，开启搅拌，将提取罐置于恒温水浴摇床，在140rpm、70～80℃条件下提取30min，100目过滤取滤液，滤渣返回提取罐中重复提取一次，100目过滤取滤液，合并两次所得滤液，得海泥浸出液；
(5)按照下列重量份数称取以下各组分：米糠24份、麦秸19份、苦瓜秧 12份、荷叶14份、地肤子10份、锯末5份、西瓜皮6份、紫荆皮3份、槐花 4份、尿素2份、干酒糟1份、干酵母2份、贝壳粉1份，将称量好的各组分混匀，并向混合物中加入等量的纯化水，搅拌混匀，放入玻璃容器，28℃～30℃条件下避光发酵72小时，得发酵产物，将所得发酵产物用100目筛网，取过滤所得的发酵液；
(6)将步骤(2)所得的混合物、海泥浸出液、发酵液、混合菌种按照6： 1：1：65的重量比例均匀混合，然后置于发酵罐内于28℃，搅拌速度180～ 200rpm，通气量为4V/V.min，培养5d，得到混合发酵菌液；
(7)将从自然海区分离得到的咖啡双眉藻、青岛大扁藻分别进行扩大培养，将咖啡双眉藻藻液和青岛大扁藻藻液分别离心浓缩，再用去离子水冲洗离心浓缩所得的鲜藻，然后冷冻干燥，将冷冻干燥好的咖啡双眉藻和青岛大扁藻以3： 1的质量比混合均匀，得混合藻粉；
(8)将辅料填充物、混合藻粉、膨润土、混合发酵菌液按照2：1：2：20 的重量比混合，置于50℃烘干机烘干，粉碎，制成复合微生物制剂。
所用的光合细菌可以是球形红假单胞菌。
所用的产碱菌可以为菌株保藏编号为CICC 9010的海水产碱菌 (Alcaligenesaquamarinus)。
所用的枯草芽胞杆菌可以为枯草芽胞杆菌枯草亚种(Bacillus subtilissubsp.subtilis)，菌株保藏编号为CICC 21171。
所用的米曲霉可以为任何市场上或保藏机构购买的米曲霉，比如可以为购自中国工业微生物菌种保藏管理中心、菌株保藏编号为CICC 2118的米曲霉 (Aspergillusoryzae)。
一种上述制备方法所得的复合微生物制剂。
实验结果
实施例1～实施例4所得的复合微生物制剂对水体污染物的降解实验
1、复合微生物制剂对市售红鳍东方鲀饵料浸出液的降解效果实验
实验所用的降解液：为市售红鳍东方鲀饵料20g研成细粉，灭菌陈海水 1000ml，浸泡48h后离心取上清，加亚硝酸钠0.06g，调pH 7.8，分装成100mL/ 瓶，于121℃，灭菌20min。
分别取实施例1～实施例4所得的复合微生物制剂1mg，分别添加到100mL 的红鳍东方鲀饵料降解液中，28±1℃、160r/min下震荡培养5d，每天定时取样，测定样品液中的氨氮(NH4-N)、亚硝酸氮(NO2-N)和硝酸氮(NO3-N)含量，每个处理设3次重复。
实验结果分别见表1～表4。实验结果表明：复合微生物制剂对红鳍东方鲀饵料降解液具有明显的降解效果，在实验期间随着细菌的生长，可显著降解饵料降解液中的无机氮成分。
表1实施例1所得的复合微生物制剂于不同培养时间对饵料降解液的降解效果(1～5d)
表2实施例2所得的复合微生物制剂于不同培养时间对饵料降解液的降解效果(1～5d)
表3实施例3所得的复合微生物制剂于不同培养时间对饵料降解液的降解效果(1～5d)
表4实施例4所得的复合微生物制剂于不同培养时间对饵料降解液的降解效果(1～5d)
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出：对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进，这些改进应视为本发明的保护范围。

Claims (7)

1.一种降解水产养殖污染的复合微生物制剂的制备方法，其特征在于包括以下步骤：
(1)将光合细菌、产碱菌、枯草芽胞杆菌、米曲霉分别进行扩大培养至菌体浓度为108～109cfu/g，将光合细菌、产碱菌、枯草芽胞杆菌、米曲霉按照8～9:3～4:3～4:2～3的细菌数比例混合均匀，得混合菌种；
(2)将酵母粉、蛋白胨、氯化钠、豆粕粉、玉米粕和纯化水以2：6：1：2：2：12的重量比混合均匀；
(3)将沸石粉、花生粕和麦饭石粉以1：1：1的重量比例混合，所得混合物作为辅料填充物；
(4)将海泥用粉碎机粉碎，过100目筛，过筛后加入提取罐中，将质量浓度为50％的酒精加入提取罐中，酒精用量为海泥重量的10倍，开启搅拌，将提取罐置于恒温水浴摇床，在140rpm、70～80℃条件下提取30min，100目过滤取滤液，滤渣返回提取罐中重复提取一次，100目过滤取滤液，合并两次所得滤液，得海泥浸出液；
(5)按照下列重量份数称取以下各组分：米糠18～25份、麦秸15～19份、苦瓜秧12～15份、荷叶10～14份、地肤子9～10份、锯末5～7份、西瓜皮5～6份、紫荆皮3～4份、槐花3～4份、尿素1～2份、干酒糟1份、干酵母1～2份、贝壳粉1份，将称量好的各组分混匀，并向混合物中加入等量的纯化水，搅拌混匀，放入玻璃容器，28℃～30℃条件下避光发酵72小时，得发酵产物，将所得发酵产物用100目筛网，取过滤所得的发酵液；
(6)将步骤(2)所得的混合物、海泥浸出液、发酵液、混合菌种按照5～6：1：1：60～65的重量比例均匀混合，然后置于发酵罐内于28℃，搅拌速度180～200rpm，通气量为4V/V·min，培养5d，得到混合发酵菌液；
(7)将从自然海区分离得到的咖啡双眉藻、青岛大扁藻分别进行扩大培养，将咖啡双眉藻藻液和青岛大扁藻藻液分别离心浓缩，再用去离子水冲洗离心浓缩所得的鲜藻，然后冷冻干燥，将冷冻干燥好的咖啡双眉藻和青岛大扁藻以3：1的质量比混合均匀，得混合藻粉；
(8)将辅料填充物、混合藻粉、膨润土、混合发酵菌液按照2：1：2：20～21的重量比混合，置于50℃烘干机烘干，粉碎，制成复合微生物制剂。
2.根据权利要求1所述的降解水产养殖污染的复合微生物制剂的制备方法，其特征在于：所述沸石粉和麦饭石粉的粒径为100目，所述膨润土的粒径为200目。
3.根据权利要求1所述的降解水产养殖污染的复合微生物制剂的制备方法，其特征在于：步骤(1)中，将光合细菌、产碱菌、枯草芽胞杆菌、米曲霉按照9:3:4:2的细菌数比例混合均匀。
4.根据权利要求1所述的降解水产养殖污染的复合微生物制剂的制备方法，其特征在于：步骤(5)中，称取的各组分的重量份数如下：米糠21份、麦秸18份、苦瓜秧12份、荷叶12份、地肤子10份、锯末7份、西瓜皮5份、紫荆皮3份、槐花4份、尿素1份、干酒糟1份、干酵母2份、贝壳粉1份。
5.根据权利要求1所述的降解水产养殖污染的复合微生物制剂的制备方法，其特征在于：步骤(6)的具体操作为：将步骤(2)所得的混合物、海泥浸出液、发酵液、混合菌种按照6：1：1：60的重量比例均匀混合，然后置于发酵罐内于28℃，搅拌速度180～200rpm，通气量为4V/V·min，培养5d，得到混合发酵菌液。
6.根据权利要求1所述的降解水产养殖污染的复合微生物制剂的制备方法，其特征在于：步骤(8)中，将辅料填充物、混合藻粉、膨润土、混合发酵菌液按照2：1：2：21的重量比混合。
7.一种权利要求1-6中任一项所述的降解水产养殖污染的复合微生物制剂的制备方法所制得的复合微生物制剂。
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