TWI662902B - 使用包含有三株乳酸菌菌株的混合物來改善水產養殖池的溶氧量 - Google Patents

Abstract

本發明揭示一包含有胚芽乳桿菌BCRC 910435、戊糖片球菌BCRC 910480以及發酵乳桿菌LF26的混合物可被用來提升一水產養殖池的溶氧量，其中，發酵乳桿菌LF26以寄存編號BCRC 910752被寄存於食品工業發展研究所(FIRDI)的生物資源保存及研究中心(BCRC)。

Description

使用包含有三株乳酸菌菌株的混合物來改善水產養殖池的溶氧量

本發明是有關於一種用於提升一水產養殖池的溶氧量的方法，其包括：對該水產養殖池投予一包含有胚芽乳桿菌BCRC 910435、戊糖片球菌BCRC 910480以及發酵乳桿菌LF26的混合物，其中，發酵乳桿菌LF26以寄存編號BCRC 910752被寄存於食品工業發展研究所的生物資源保存及研究中心。

在水產養殖池中，水產養殖動物的殘骸與排泄物以及剩餘飼料的持續累積會導致溶氧量下降，而此不僅會促進厭氧分解作用而產生有毒物質，還會促進病原菌的生長。而水產養殖動物的攝食、消化、代謝以及生長的速度以及活動力與抵抗力亦皆可能受低溶氧量影響，嚴重者甚至死亡。例如，就魚蝦養殖而言，溶氧量必須分別在4-8 mg/L以及6-8 mg/L以上才能滿足魚類與蝦類的生長。

目前用來改善水產養殖池的溶氧量的方法主要包括下面2種：(1)機械增氧：利用增氧機的機械作用來促進水體與空氣接觸，並且促進水體的對流；以及(2)化學增氧：將化學增氧劑(例如，過氧化鈉、過氧化鈣等)添加至水體中並藉由化學反應來釋放氧氣。然而，機械增氧需要大量的增氧機以及能源而大幅提升所需的成本，至於化學增氧會造成水體中的金屬離子與pH值增加而對水產養殖動物的健康產生不利的影響，甚至可能會造成有毒物質殘留於其體內進而被攝入人體中。因此，發展出低成本且沒有安全疑慮的增氧技術，已成為一個重要的研發課題。

乳酸菌(lactic acid bacteria, LAB)是一群能夠發酵醣類並以乳酸為主要代謝產物的革蘭氏陽性菌，它們普遍存在於乳製品、醃漬品以及人類或動物的腸道黏膜中。乳酸菌已廣為被接受的形態與生理特徵包括：(1)外形為球狀(cocci)或桿狀(rod)；(2)缺乏細胞色素及過氧化氫酶(catalase)；(3)不形成內生性孢子；以及(4)不具運動性。

乳酸菌是屬於一般被公認為安全的(generally recognized as safe, GRAS)並且是為人所熟悉與廣泛使用的益生菌(probiotics)。乳酸菌已被發現到具有抑制腸胃道病原菌生長、緩和乳糖不耐症(lactose intolerance)、免疫調節(immunoregulation)、抗癌(anti-cancer)以及降血壓等功效。可作為益生菌使用的乳酸菌有許多種類，例如乳桿菌屬( Lactobacillus)、乳球菌屬( Lactococcus)、小球菌屬( Pediococcus)、鏈球菌屬( Streptococcus)以及腸球菌屬( Enterococcus)等。

已有研究顯示，一些乳酸菌菌株具有減低水產養殖池的硝酸鹽濃度的效用。例如，在宋蓉等人(2013)，淡水漁業，43:1-8中，宋蓉等人發現乾酪乳桿菌( Lactobacillus casei) L821a能夠藉由胞內酵素分解作用(intracellular enzymolysis)以及代謝產物乳酸的直接與間接作用來去除養殖水體中的硝酸鹽。但就申請人所知，迄今尚無任何文獻或專利前案曾經揭示乳酸菌菌株具有改善水產養殖池的溶氧量的效用。

在先前研究中，申請人發現一包含有胚芽乳桿菌 ( Lactobacillus plantarum) BCRC 910435 (又被稱為胚芽乳桿菌LP28或植物乳桿菌LP28)、戊糖片球菌( Pediococcus pentosaceus) BCRC 910480 (又被稱為戊糖片球菌PP4012或戊糖片球菌PP49)、發酵乳桿菌( Lactobacillus fermentum)、鼠李糖乳桿菌( Lactobacillus rhamnosus)、副乾酪乳桿菌( Lactobacillus paracasei)以及枯草桿菌( Bacillus subtilis)的混合物(商品名為水益旺)能夠改善魚隻的腸胃道功能、增進魚蝦的免疫力、飼料換肉率以及生長速度。經進一步研究，申請人意外地發現，一包含有胚芽乳桿菌BCRC 910435、戊糖片球菌BCRC 910480以及發酵乳桿菌LF26的混合物能夠改善水產養殖池的溶氧量。

發明概要

於是，本發明提供一種用於提升一水產養殖池的溶氧量的方法，其包括：對該水產養殖池投予一包含有胚芽乳桿菌BCRC 910435、戊糖片球菌BCRC 910480以及發酵乳桿菌LF26的混合物，其中，發酵乳桿菌LF26以寄存編號BCRC 910752被寄存於食品工業發展研究所的生物資源保存及研究中心。

本發明的上述以及其它目的、特徵與優點，在參照以下的詳細說明與較佳實施例和隨文檢附的圖式後，將變得明顯。

發明的詳細說明

為了這本說明書之目的，將被清楚地瞭解的是：文字“包含有(comprising)”意指“包含但不限於”，以及文字“包括(comprises)”具有一對應的意義。

要被瞭解的是：若有任何一件前案刊物在此被引述，該前案刊物不構成一個下述承認：在台灣或任何其他國家之中，該前案刊物形成本技藝中的常見一般知識之一部分。

除非另外有所定義，在本文中所使用的所有技術性與科學術語具有熟悉本發明所屬技藝的人士所共同瞭解的意義。一熟悉本技藝者會認知到許多與那些被描述於本文中者相似或等效的方法和材料，它們可被用於實施本發明。當然，本發明決不受到所描述的方法和材料之限制。

為了開發低成本且沒有安全疑慮的水產養殖池增氧技術，申請人經戮力研究結果發現，一包含有胚芽乳桿菌BCRC 910435、戊糖片球菌BCRC 910480以及發酵乳桿菌LF26的混合物具有這方面的產業應用潛力。於是，本發明提供一種用於提升一水產養殖池的溶氧量的方法，其包括：對該水產養殖池投予一包含有胚芽乳桿菌BCRC 910435、戊糖片球菌BCRC 910480以及發酵乳桿菌LF26的混合物，其中，發酵乳桿菌LF26以寄存編號BCRC 910752被寄存於食品工業發展研究所的生物資源保存及研究中心。

依據本發明，該水產養殖池可以是蝦類的養殖池。較佳地，該蝦類是選自於由下列所構成之群組：南美白對蝦( Litopenaeus vannamei)(又被稱為太平洋白蝦)、淡水長臂大蝦( Macrobrachium rosenbergii)(又被稱為羅氏沼蝦)、草蝦( Penaeus monodon)(又被稱為斑節對蝦)，以及它們的組合。在本發明的一個較佳具體例中，該蝦類是南美白對蝦。

依據本發明，該蝦類的養殖池可具有一範圍落在50隻/平方公尺至250隻/平方公尺內的養殖密度(stocking density)。在本發明的一個較佳具體例中，該蝦類的養殖池具有約為91隻/平方公尺的養殖密度。

依據本發明，該水產養殖池可以是魚類的養殖池。較佳地，該魚類是選自於由下列所構成之群組：褐點石斑魚( Epinephelus fuscoguttatus)(又被稱為龍虎石斑魚)、鞍帶石斑魚( Epinephelus lanceolatus)(又被稱為龍膽石斑魚)、點帶石斑魚( Epinephelus coioides)(又被稱為青斑)，以及它們的組合。在本發明的一個較佳具體例中，該魚類是褐點石斑魚。

依據本發明，該魚類的養殖池可具有一範圍落在5隻/平方公尺至12隻/平方公尺內的養殖密度。在本發明的一個較佳具體例中，該魚類的養殖池具有約為6隻/平方公尺的養殖密度。

依據本發明，在該混合物當中，胚芽乳桿菌BCRC 910435、戊糖片球菌BCRC 910480以及發酵乳桿菌LF26可以呈一範圍落在1：1：1 (w/w/w)至1：2：1 (w/w/w)內的比例。在本發明的一個較佳具體例中，胚芽乳桿菌BCRC 910435、戊糖片球菌BCRC 910480以及發酵乳桿菌LF26是呈一為1：2：1 (w/w/w)的比例。

依據本發明，該混合物可具有一範圍落在10 ⁵CFU/g至10 ⁹CFU/g內的細菌濃度。在本發明的一個較佳具體例中，該混合物具有一範圍落在10 ⁶CFU/g至10 ⁹CFU/g內的細菌濃度。

依據本發明，該混合物可進一步包含有一被廣泛地使用於藥物製造技術之藥學上可接受的載劑(pharmaceutically acceptable carrier)。例如，該藥學上可接受的載劑可包含一或多種選自於由下列所構成之群組中的試劑：溶劑(solvent)、緩衝液(buffer)、乳化劑(emulsifier)、懸浮劑(suspending agent)、分解劑(decomposer)、分散劑(dispersing agent)、黏結劑(binding agent)、賦形劑(excipient)、安定劑(stabilizing agent)、螯合劑(chelating agent)、稀釋劑(diluent)、膠凝劑(gelling agent)、潤濕劑(wetting agent)、吸收延遲劑(absorption delaying agent)、脂質體(liposome)以及類似之物。有關這些試劑的選用與數量是落在熟習此項技術之人士的專業素養與例行技術範疇內。

依據本發明，該混合物可使用一具有本技藝中的通常技術者所熟知的標準技術而被添加至水產養殖飼料中，例如，它可直接地被添加至水產養殖飼料內，或者它可被用於生成一或多種中間組成物(intermediate compositions)[諸如，飼料添加劑(feed additives)或預混料(premixes)]，該中間組成物隨後被添加至水產養殖飼料內。在本發明的一個較佳具體例中，該混合物是在混合以一水產養殖飼料後而被投予至該水產養殖池。

依據本發明，該混合物與水產養殖飼料可以一範圍落在1：100 (w/w)至1：999 (w/w)內的比例而被混合。在本發明的一個較佳具體例中，該混合物與水產養殖飼料是以一為1：999 (w/w)的比例而被混合。

較佳實施例之詳細說明

本發明將就下面的實施例來做進一步說明，但應瞭解的是，該等實施例僅是供例示說明用，而不應被解釋為本發明的實施上的限制。 實施例 一般實驗材料： 1. 胚芽乳桿菌( Lactobacillus plantarum) BCRC 910435以及戊糖片球菌( Pediococcus pentosaceus) BCRC 910480：

在下面實施例中所使用的胚芽乳桿菌BCRC 910435 (又被稱為胚芽乳桿菌LP28或植物乳桿菌LP28)以及戊糖片球菌BCRC 910480 (又被稱為戊糖片球菌PP4012或戊糖片球菌PP49)已分別於西元2009年7月14日以及西元2010年7月22日被寄存於台灣的食品工業發展研究所(Food Industry Research and Development Institute, FIRDI)的生物資源保存及研究中心(Biosource Collection and Research Center, BCRC)(300新竹市食品路331號，台灣)，並且已可自由分讓。

另外，這2個菌株亦有依據布達佩斯條約(the Budapest Treaty)的規定，分別於西元2009年10月19日以及西元2011年9月9日以寄存編號CGMCC No. 3346以及CGMCC No. 5235被寄存於中國普通微生物菌種保藏管理中心(China General Microbiological Culture Collection Center, CGMCC)，並且已可自由分讓。 2. 發酵乳桿菌( Lactobacillus fermentum) LF26：

申請人先前使用乳製品作為樣品來源並且利用Difco Lactobacilli MRS瓊脂(Difco Lactobacilli MRS Agar)來進行乳桿菌的分離與篩選，而得到1株乳桿菌分離株LF26。該乳桿菌分離株LF26經由初步試驗而發現，其為革蘭氏陽性桿菌、不具觸酶，以及在厭氧條件下可生長。此外，該乳桿菌分離株LF26分別經由耐酸性、耐鹽性以及膽鹽耐受性試驗而發現，其可在pH 2.0、5% NaCl以及0.3%牛膽汁的環境下生存。

該乳桿菌分離株LF26是使用一組具有下面所示核苷酸序列的通用引子對(universal primer pair) F1與R1而被進行16S rDNA序列分析(委託明欣生物科技有限公司來進行)，並且利用NCBI網站所提供的Gene Blast軟體來進行比對： F1引子 5’-agagtttgatcmtggctcag-3’ (序列辨識編號：1) R1引子 5’-cggttaccttgttacgactt-3’ (序列辨識編號：2)

而比對結果發現，該乳桿菌分離株LF26的部分的16S rDNA序列(序列辨識編號：3)與發酵乳桿菌的16S rDNA序列之間具有最高的序列相似性(sequence similarity)。

該乳桿菌分離株LF26是使用一組具有下面所示核苷酸序列的通用引子對F2與R2而被進行 pheS基因序列分析(委託明欣生物科技有限公司來進行)，並且利用NCBI網站所提供的Gene Blast軟體來進行比對： F2引子 5’-cayccngchcgygayatgc-3’ (序列辨識編號：4) R2引子 5’- ccwarvccraargcaaarcc-3’ (序列辨識編號：5)

而比對結果發現，該乳桿菌分離株LF26的部分的 pheS基因(序列辨識編號：6)與發酵乳桿菌的 pheS基因序列之間具有最高的序列相似性。

該乳桿菌分離株LF26進一步利用API 50 CHL鑑定系統(API 50 CHL identification system)(bioMérieux)而被進行醣類發酵型態的分析。所得到的鑑定結果被顯示於下面的表1中。 表1. 乳桿菌分離株LF26的醣類發酵型態分析結果

醣類	能否利用所測試的醣類進行發酵並產酸
甘油(glycerol)	－
赤藻糖醇(erythritol)	－
D-阿拉伯糖(D-arabinose)	－
L-阿拉伯糖(L-arabinose)	－
核糖(ribose)	＋
D-木糖(D-xylose)	－
L-木糖(L-xylose)	－
核糖醇(adonitol)	－
甲基-β-D-吡喃木糖苷 (methyl-β-D-xylopyranoside)	－
半乳糖(galactose)	＋
葡萄糖(glucose)	＋
果糖(fructose)	＋
甘露糖(mannose)	＋
山梨糖(sorbose)	－
鼠李糖(rhamnose)	－
半乳糖醇(dulcitol)	－
肌醇(inositol)	－
甘露糖醇(mannitol)	－
山梨糖醇(sorbitol)	－
甲基-α-D-吡喃甘露糖苷(methyl-α-D-mannopyranoside)	－
甲基-α-D-葡萄哌喃糖苷(methyl-α-D-glucopyranoside)	＋
N-乙醯葡萄糖胺(N-acetylglucosamine)	－
苦杏仁苷(amygdalin)	－
熊果苷(arbutin)	－
栗糖苷(esculin)	＋
柳苷(salicin)	－
纖維雙醣(cellobiose)	－
麥芽糖(maltose)	＋
乳糖(lactose)	＋
蜜二糖(melibiose)	＋
D-蔗糖(D-saccharose)	＋
海藻糖(trehalose)	－
菊糖(inulin)	－
松三糖(melezitose)	－
棉子糖(raffinose)	＋
美沙酮(amidon)	－
肝醣(glycogen)	－
木糖醇(xylitol)	－
龍膽二糖(gentiobiose)	－
D-松二糖(D-turanose)	－
D-來蘇糖(D-lyxose)	－
塔格醣(tagatose)	－
D-鹿角藻糖(D-fucose)	－
L-鹿角藻糖(L-fucose)	－
D-阿拉伯糖醇(D-arabitol)	－
L-阿拉伯糖醇(L-arabitol)	－
葡萄糖酸(gluconate)	＋
2-酮葡萄糖酸鉀 (potassium 2-ketogluconate)	－
5-酮葡萄糖酸鉀 (potassium 5-ketogluconate)	＋

綜合上面的各項實驗結果，該乳桿菌分離株LF26被鑑定是發酵乳桿菌。該發酵乳桿菌LF26已於西元2016年11月3日以寄存編號BCRC 910752被寄存於台灣的食品工業發展研究所的生物資源保存及研究中心。 3. 實驗動物：

在下面實施例中所使用的南美白對蝦( Litopenaeus vannamei)(7天大，體重約為0.0034 g)以及褐點石斑魚( Epinephelus fuscoguttatus)(244天大，體重約為324 g)分別是購自於高雄市林園區的蝦苗養殖場(被稱為林園黑殼園區)以及高雄市永安區的石斑魚苗養殖場。所有的實驗動物皆被飼養於露天的水產養殖池(aquaculture pond)中，而且飼料被充分地供給。 實施例 1. 製備本發明之含有 3 株乳酸菌菌株的混合物 (a mixture of three lactic acid bacteria strains)

首先，將胚芽乳桿菌BCRC 910435、戊糖片球菌BCRC 910480以及發酵乳桿菌LF26分別以一為3% (v/v)的接種量接種至4.5 L之下面表2所示的種菌培養基中，並於37℃下進行培養歷時18小時。接著，收取所有的培養物並分別將之接種至150 L的種菌培養基中，繼而於37℃下進行培養歷時16小時。之後，將培養物分別在4℃下以12,000 rpm進行離心歷時30分鐘，接著倒除上澄液，而沉澱物(pellets)以適量的生理食鹽水予以洗滌。在以平板計數培養基來進行菌數計數之後，進行冷凍乾燥處理，藉此得到各個菌株的冷凍乾燥菌粉(各自具有一為10 ¹¹CFU/g的細菌濃度)。 表2. 種菌培養基的配方

成分	含量(g/L)
葡萄糖	20
脫脂奶粉	20
Tween-80	1
酵母萃取物	20
硫酸錳	0.05
磷酸氫二鉀	3
餘量為蒸餾水

之後，將各個菌株的冷凍乾燥菌粉與作為載劑的麥芽糊精(maltodextrin)以如下面表3所示的配方進行混合，藉此而得到本發明之含有3株乳酸菌菌株的混合物(具有10 ⁹CFU/g的細菌濃度)。 表3. 本發明之含有3株乳酸菌菌株的混合物的配方

成分	含量(%)(w/w)
胚芽乳桿菌BCRC 910435	0.25
戊糖片球菌BCRC 910480	0.5
發酵乳桿菌LF26	0.25
麥芽糊精	99

實施例 2. 本發明之含有 3 株乳酸菌菌株的混合物在改善蝦類的水產養殖池的溶氧量上的效用評估 實驗方法：

首先，將一含有約70,400隻南美白對蝦的水產養殖池作為實驗組，而一含有約88,000隻南美白對蝦的水產養殖池作為對照組，各組的養殖密度(stocking density)皆約為91隻/平方公尺，而水深皆約為100公分。接著，依照下面表4所示的時間、飼料種類以及劑量來對對照組的水產養殖池投予飼料。 表4. 不同時間所投予的飼料種類及其劑量

時間(天)	飼料種類	劑量(kg/天)
商品名	來源	貨號
0-20	草蝦粉末料	東立飼料廠	A005	0.6
21-50	草蝦0號料	A006	4.4
51-80	草蝦1號料	A007	14.5
81-112	草蝦2號料	A008	10.8

實驗組的水產養殖池的飼料投予大體上是參照對照組的投予方式來進行，不同之處在於：在被投予之前，飼料先以一為0.1% (w/w)的添加量而被添加以本發明之含有3株乳酸菌菌株的混合物並予以混合。各組每天被投予飼料3次，直到在開始投予乳酸菌飼料之後的第112天結束。

開始投予乳酸菌飼料之後的第49與112天，使用測氧計(oxygen meter)(廠牌為Lutron，型號為DO-5510)來分別測量各組水面下5公分以及100公分處的溶氧量(mg/L)，以分別作為上層溶氧量以及底層溶氧量。

所得到的實驗數據是以“平均值(mean)±平均值的標準誤差(standard error of the mean, SEM)”來表示。所有數據是藉由史徒登氏t-試驗(Student’s t-test)來作分析，俾以評估各組之間的差異性。若所得到的統計比對結果是 p＜0.05，代表有統計學顯著性(statistical significance)。 結果：

各組的溶氧量被顯示於下面的表5中。由表5可見，實驗組的上層溶氧量與底層溶氧量皆會隨著時間而呈現出上升的情形，而對照組的上層溶氧量與底層溶氧量皆會隨著時間而呈現出下降的情形。特別地，在第112天時，實驗組的上層溶氧量與底層溶氧量皆顯著地大於對照組所具者。這個實驗結果顯示：本發明之含有3株乳酸菌菌株的混合物能夠有效地提升蝦類的水產養殖池的溶氧量，而可利於蝦類的生長。 表5. 各組所測得的溶氧量(mg/L)

組別	溶氧量	時間
第49天	第112天
實驗組	上層	9.73±0.58	10.03±0.06***
底層	8.83±0.35**	9.37±0.21**
對照組	上層	9.5±0.2	8.77±0.32
底層	7.87±0.31	7.83±0.21

**：當與對照組作比較， p＜0.01。 ***：當與對照組作比較， p＜0.001。 實施例 3. 本發明之含有 3 株乳酸菌菌株的混合物在改善魚類的水產養殖池的溶氧量上的效用評估 實驗方法：

首先，將兩個各別含有約12,000隻褐點石斑魚的水產養殖池分別作為實驗組與對照組，各組的養殖密度皆約為6隻/平方公尺，而水深皆約為240公分。接著，依照下面表6所示的時間、飼料種類以及劑量來對對照組的水產養殖池投予飼料。 表6. 不同時間所投予的飼料種類及其劑量

時間(天)	飼料種類	劑量(kg/天)
商品名	來源
0-90	石斑五號	統一飼料廠	30-55
91-110	石斑六號	58-60

實驗組的水產養殖池的飼料投予大體上是參照對照組的投予方式來進行，不同之處在於：在被投予之前，飼料先以一為0.1% (w/w)的添加量而被添加以本發明之含有3株乳酸菌菌株的混合物並予以混合。各組每天被投予飼料2次，直到在開始投予乳酸菌飼料之後的第110天結束。

開始投予乳酸菌飼料之後的第82與110天，使用測氧計來分別測量各組水面下5公分、84公分以及240公分處的溶氧量(mg/L)，以分別作為上層溶氧量、中層溶氧量以及底層溶氧量。 結果：

各組的溶氧量被顯示於下面的表7中。由表7可見，在整個實驗期間，實驗組的上層溶氧量、中層溶氧量與底層溶氧量皆明顯地大於對照組所具者。這個實驗結果顯示：本發明之含有3株乳酸菌菌株的混合物能夠有效地提升魚類的水產養殖池的溶氧量，而可利於魚類的生長。 表7. 各組所測得的溶氧量(mg/L)

組別	溶氧量	時間
第82天	第110天
實驗組	上層	7.2	7.8
中層	5.8	7.2
底層	4.1	5.8
對照組	上層	5.5	6.1
中層	4.4	5.3
底層	3.2	4.7

於本說明書中被引述之所有專利和文獻以其整體被併入本案作為參考資料。若有所衝突時，本案詳細說明(包含界定在內)將佔上風。

雖然本發明已參考上述特定的具體例被描述，明顯地在不背離本發明之範圍和精神之下可作出很多的修改和變化。因此意欲的是，本發明僅受如隨文檢附之申請專利範圍所示者之限制。

TW中華民國；食品工業發展研究所生物資源保存及研究中心(BCRC of FIRDI)；2016/11/3；BCRC 910752。

＜110＞ 生合生物科技股份有限公司 ＜120＞ 使用包含有三株乳酸菌菌株的混合物來改善水產養殖池的溶氧量 ＜130＞ 包含有三株乳酸菌菌株的混合物 ＜160＞ 3 ＜170＞ PatentIn version 3.5 ＜210＞ 1 ＜211＞ 20 ＜212＞ DNA ＜213＞ 人工的序列 ＜220＞ ＜223＞ 用於擴增16S rDNA的F1引子 ＜400＞ 1 agagtttgat cmtggctcag 20 ＜210＞ 2 ＜211＞ 20 ＜212＞ DNA ＜213＞ 人工的序列 ＜220＞ ＜223＞ 用於擴增16S rDNA的R1引子 ＜400＞ 2 cggttacctt gttacgactt 20 ＜210＞ 3 ＜211＞ 1538 ＜212＞ DNA ＜213＞ 發酵乳桿菌 ＜220＞ ＜221＞ misc_特徵 ＜222＞ (276)..(276) ＜223＞ n代表a、c、g或t ＜400＞ 3 gctcaggatg aacgccggcg gtgtgcctaa tacatgcaag tcgaacgcgt tggcccaatt 60 gattgatggt gcttgcacct gattgatttt ggtcgccaac gagtggcgga cgggtgagta 120 acacgtaggt aacctgccca gaagcggggg acaacatttg gaaacagatg ctaataccgc 180 ataacaacgt tgttcgcatg aacaacgctt aaaagatggc ttctcgctat cacttctgga 240 tggacctgcg gtgcattagc ttgttggtgg ggtaanggcc taccaaggcg atgatgcata 300 gccgagttga gagactgatc ggccacaatg ggactgagac acggcccata ctcctacggg 360 aggcagcagt agggaatctt ccacaatggg cgcaagcctg atggagcaac accgcgtgag 420 tgaagaaggg tttcggctcg taaagctctg ttgttaaaga agaacacgta tgagagtaac 480 tgttcatacg ttgacggtat ttaaccagaa agtcacggct aactacgtgc cagcagccgc 540 ggtaatacgt aggtggcaag cgttatccgg atttattggg cgtaaagaga gtgcaggcgg 600 ttttctaagt ctgatgtgaa agccttcggc ttaaccggag aagtgcatcg gaaactggat 660 aacttgagtg cagaagaggg tagtggaact ccatgtgtag cggtggaatg cgtagatata 720 tggaagaaca ccagtggcga aggcggctac ctggtctgca actgacgctg agactcgaaa 780 gcatgggtag cgaacaggat tagataccct ggtagtccat gccgtaaacg atgagtgcta 840 ggtgttggag ggtttccgcc cttcagtgcc ggagctaacg cattaagcac tccgcctggg 900 gagtacgacc gcaaggttga aactcaaagg aattgacggg ggcccgcaca agcggtggag 960 catgtggttt aattcgaagc tacgcgaaga accttaccag gtcttgacat cttgcgccaa 1020 ccctagagat agggcgtttc cttcgggaac gcaatgacag gtggtgcatg gtcgtcgtca 1080 gctcgtgtcg tgagatgttg ggttaagtcc cgcaacgagc gcaacccttg ttactagttg 1140 ccagcattaa gttgggcact ctagtgagac tgccggtgac aaaccggagg aaggtgggga 1200 cgacgtcaga tcatcatgcc ccttatgacc tgggctacac acgtgctaca atggacggta 1260 caacgagtcg cgaactcgcg agggcaagca aatctcttaa aaccgttctc agttcggact 1320 gcaggctgca actcgcctgc acgaagtcgg aatcgctagt aatcgcggat cagcatgccg 1380 cggtgaatac gttcccgggc cttgtacaca ccgcccgtca caccatgaga gtttgtaaca 1440 cccaaagtcg gtggggtaac cttttaggag ccagccgcct aaggtgggac agatgattag 1500 ggtgaagtcg taacaaggta gccgtaggag aacctgcg 1538 ＜210＞ 4 ＜211＞ 19 ＜212＞ DNA ＜213＞ 人工的序列 ＜220＞ ＜223＞ 用於擴增 pheS基因的F2引子 ＜220＞ ＜221＞ misc_特徵 ＜222＞ (6)..(6) ＜223＞ n代表a、c、g或t ＜400＞ 4 cayccngchc gygayatgc 19 ＜210＞ 5 ＜211＞ 20 ＜212＞ DNA ＜213＞ 人工的序列 ＜220＞ ＜223＞ 用於擴增 pheS基因的R2引子 ＜400＞ 5 ccwarvccra argcaaarcc 20 ＜210＞ 6 ＜211＞ 431 ＜212＞ DNA ＜213＞ 發酵乳桿菌 ＜400＞ 6 gtgaccccgt ctgttttgat gcggacccaa acgtcgccaa tgcaggcccg gatgctggaa 60 caacacgact tctccaaggg gccgttgaag atgatctcac cggggaaggt ttaccgccgc 120 gacaccgatg acgctaccca cagccaccaa ttccaccagg ttgaaggaat cgtggtcggt 180 gaacacgtca cgatggccga tttaaagggg accctagagg cggtggccca aaacctgttt 240 ggcgaccagc tcaaggtgcg tctgcgcccg agttacttcc cgttcacgga accgtccgtc 300 gaggccgaca tcacttgctt taattgcctg ggggccggtt gctcaatctg taagggaact 360 ggttggatcg aggtgttggg ggccggaatg gtgcacccaa acgtcttgaa gatgtctggc 420 gtcgacccgg a 431

Claims (12)

1. 一種用於提升一水產養殖池的溶氧量的方法，其包括：對該水產養殖池投予一包含有胚芽乳桿菌BCRC 910435、戊糖片球菌BCRC 910480以及發酵乳桿菌LF26的混合物，其中，發酵乳桿菌LF26以寄存編號BCRC 910752被寄存於食品工業發展研究所的生物資源保存及研究中心。
2. 如請求項1的方法，其中該水產養殖池是蝦類的養殖池。
3. 如請求項2的方法，其中該蝦類是選自於由下列所構成之群組：南美白對蝦、淡水長臂大蝦、草蝦，以及它們的組合。
4. 如請求項3的方法，其中該蝦類是南美白對蝦。
5. 如請求項1的方法，其中該水產養殖池是魚類的養殖池。
6. 如請求項5的方法，其中該魚類是選自於由下列所構成之群組：褐點石斑魚、鞍帶石斑魚、點帶石斑魚，以及它們的組合。
7. 如請求項6的方法，其中該魚類是褐點石斑魚。
8. 如請求項1的方法，其中在該混合物當中，胚芽乳桿菌BCRC 910435、戊糖片球菌BCRC 910480以及發酵乳桿菌LF26是呈一範圍落在1：1：1 (w/w/w)至1：2：1 (w/w/w)內的比例。
9. 如請求項8的方法，其中在該混合物當中，胚芽乳桿菌BCRC 910435、戊糖片球菌BCRC 910480以及發酵乳桿菌LF26是呈一為1：2：1 (w/w/w)的比例。
10. 如請求項1的方法，其中該混合物是在混合以一水產養殖飼料後而被投予至該水產養殖池。
11. 如請求項1的方法，其中該混合物進一步包含有一藥學上可接受的載劑。
12. 如請求項11的方法，其中該藥學上可接受的載劑包含一或多種選自於由下列所構成之群組中的試劑：溶劑、緩衝液、乳化劑、懸浮劑、分解劑、分散劑、黏結劑、賦形劑、安定劑、螯合劑、稀釋劑、膠凝劑、潤濕劑、吸收延遲劑、脂質體以及類似之物。