CN103548687A - 灰毡毛忍冬渝蕾1号组培苗生根培养基及生根培养方法 - Google Patents
灰毡毛忍冬渝蕾1号组培苗生根培养基及生根培养方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一种灰毡毛忍冬渝蕾1号组培苗生根培养基及生根培养方法；所述生根培养基是以1/2MB培养基为基本培养基，并添加有吲哚乙酸0.1mg/L、吲哚-3-丁酸2.0mg/L、蔗糖30g/L、琼脂6g/L和活性炭50mg/L；所述生根培养的培养条件为：光照时间为12h/d，光照强度为1500-2000Lx，培养温度为20℃。本发明研究了不同基本培养基（MS、MB）、激素(IAA、IBA)以及培养温度（20℃、25℃）对灰毡毛忍冬渝蕾1号组培苗生根的影响，找出了最适合灰毡毛忍冬渝蕾1号组培苗生根的培养基配方，适宜的生根培养温度，提高了生根率，为其产业化生产奠定技术支撑。
Description
技术领域
本发明属于植物组织培养技术领域，涉及一种灰毡毛忍冬渝蕾1号组培苗生根培养基及生根培养方法。
背景技术
灰毡毛忍冬(Lonicera macranthoides Hand.Mazz)属忍冬科(Caprifoliaceae)忍冬属(Lonicera L.)，俗称拟大花忍冬，其花蕾绿原酸含量在全国各种金银花中最高，也是西南、中南地区商品金银花的主要品种之一，为我国重要的大宗中药材，它含有挥发油、黄酮类、三萜皂甙、有机酸等，具有抗病毒、抗氧化、增强免疫力等多种功能。据报道全国有20余种植物的花蕾当金银花入药，皆为忍冬科忍冬属植物。
‘渝蕾1号’是灰毡毛忍冬的一个品种，于2008年经重庆市林木品种审定委员会专家审定为新品种，该品种高产高抗，亩产鲜花达400千克以上，较传统种植灰毡毛忍冬增产30%～80%，抗逆性和适应性均较传统家种灰毡毛忍冬强。最显著的特点是花期可达20～30d，基本上不开花，整个花期都是花蕾，相比于传统家种灰毡毛忍冬的7～10d花蕾期，其采摘期大大延长，便于采摘用工安排和加工时间安排。该品种现在在重庆地区已列入推动重庆两翼农户“万元增收行动”的计划中。但其品种的植株性状变异较大，所以通常采用无性系育种方法，如扦插、嫁接繁殖优良单株无性系。但嫁接的砧木和接穗资源不多，扦插成活率低于40%，导致繁殖系数较低，推广缓慢，不能满足生产和市场需求。
利用组培快繁和“以苗繁苗”技术短时间内就可以繁育大数量的种苗，可规模化繁殖，实现工厂化育苗。通过以组织培养的方式繁育灰毡毛忍冬种苗，不仅可以使灰毡毛忍冬植株脱毒，提高植株性能，而且繁殖速度快、繁殖系数高，可更好地保持亲本品质。然而灰毡毛忍冬组培生根困难，制约了其产业化生产，无法满足当今社会对灰毡毛忍冬的大量需求。
发明内容
有鉴于此，本发明的目的在于提供一种灰毡毛忍冬渝蕾1号组培苗生根培养基及生根培养方法，选择最适合灰毡毛忍冬渝蕾1号组培苗生根的培养基配方及生根培养方法，提高生根率。
为达到上述目的，本发明提供如下技术方案：
本发明公开了一种灰毡毛忍冬渝蕾1号组培苗生根培养基，所述生根培养基是以1/2MB培养基为基本培养基，并添加有吲哚乙酸0.1mg/L、吲哚-3-丁酸2.0mg/L、蔗糖30g/L、琼脂6g/L和活性炭50mg/L。
进一步，所述生根培养基的pH为5.8～6.0。
本发明还公开了一种使用上述灰毡毛忍冬渝蕾1号组培苗生根培养基进行灰毡毛忍冬渝蕾1号组培苗生根培养的方法，将灰毡毛忍冬渝蕾1号的继代苗接种至所述生根培养基中进行生根培养，培养条件为：光照时间为12h/d，光照强度为1500-2000Lx，培养温度为20℃。
本发明中所述的1/2MS、1/2MB、1/3MB、1/4MB培养基为植物组织培养中常用的基本培养基，其具体配方如下表所示：
本发明的有益效果在于：本发明研究了不同基本培养基（MS、MB）、激素(IAA、IBA)以及培养温度（20℃、25℃）对灰毡毛忍冬渝蕾1号组培苗生根的影响，找出了最适合灰毡毛忍冬渝蕾1号组培苗生根的培养基配方为1/2MB+IAA0.1mg/L+IBA2.0mg/L，适宜的生根培养温度为20℃，提高了生根率，为其产业化生产奠定技术支撑。
附图说明
为了使本发明的目的、技术方案和有益效果更加清楚，本发明提供如下附图进行说明：
图1为苗长势好的灰毡毛忍冬渝蕾1号组培苗；
图2为根系粗长且有须根的灰毡毛忍冬渝蕾1号组培苗。
具体实施方式
下面将结合附图，对本发明的优选实施例进行详细的描述。
本发明实施例所用的试验材料灰毡毛忍冬渝蕾1号组培苗由重庆文理学院园林花卉工程中心组培车间提供。
1.基本培养基的筛选
将灰毡毛忍冬渝蕾1号的继代苗接种至生根培养基中进行生根培养；生根培养基的基本培养基为1/2MS、1/2MB、1/3MB、1/4MB四种，添加不同浓度配比的IAA、IBA，每种培养基添加蔗糖30g/L、琼脂6g/L和活性炭50mg/L，pH为5.8～6.0；各处理接种4瓶，每瓶接种10株生长状况相同的继代苗，培养温度为（20±1）℃，光照时间为12h/d，光照强度为1500-2000Lx，20d后观察组培苗的生根的情况并记录数据。
从表1可见，不同的基本培养基对灰毡毛忍冬渝蕾1号的生根影响较大。在接种数和植物激素浓度配比均相同的条件下，不同基本培养基生根苗的生根情况有明显差异。
当IAA=0.1mg/L，IBA=2.0mg/L时，基本培养基1/2MS与1/2MB的生根率差异显著，其余处理间的生根率差异不显著；基本培养基1/2MS与1/3MB的平均根系数均达到6以上，1/2MB的平均根系数最高达7.06，基本培养基1/2MB与1/4MB的平均根系数较低1/2MB平均根系数最低为4.14，基本培养基1/2MS与1/2MB的苗生长壮况较差，苗叶片都出现黄化现象。基本培养基1/3MB与1/4MB的苗生长状况较好。
当IAA=0.5mg/L，IBA=0.5mg/L时，基本培养基1/2MS、1/4MB与1/2MB生根率差异显著其余处理间的生根率差异不显著。基本培养基1/2MB与1/3MB的平均根系数较高，1/3MB的平均根系数最高达7.42，基本培养基1/2MS与1/4MB的平均根系数较低1/2MS平均根系数最低为4.00；基本培养基1/2MS、1/2MB、1/3MB的苗壮况好。基本培养基1/4MB的苗较弱且顶芽出现枯黄。
当IAA=0.5mg/L,IBA=2.0mg/L时,基本培养基1/2MS、1/3MB与1/2MB生根率差异显著，其余处理间的生根率差异不显著。基本培养基1/2MS的平均根系数最高达11.10，基本培养基1/2MB、1/3MB、1/4MB的平均根系数较低，1/2MB平均根系数最低为5.24；基本培养基1/2MS、1/2MB与1/3MB的苗壮况好。基本培养基1/2MB的苗部分出现顶芽枯黄，1/4MB的苗老叶出现黄化。
纵观表1可见，对比生根率，以MB为基本培养基的组培苗生根率都比以MS为基本培养基的组培苗生根率高，而以1/2MB为基本培养基的生根率高，最高达72.5%；对比平均根系数可见，不同基本培养基的平均根系数差异不大，相同基本培养基之间的差异主要是由不同的激素浓度配比造成，与基本培养的种类无较大关系；对比苗状况可见以1/2MB为基本培养基的生根苗长势均好且根粗长。因此，综合生根率、平均根系数和苗与根系状况三者的情况分析可得，灰毡毛忍冬渝蕾1号组培苗的最适生根基本培养基为1/2MB。
表1 基本培养基的选择
注：生根率一列中不同字母表示0.05水平上的差异显著性。
2.生长素浓度配比的选择
将灰毡毛忍冬渝蕾1号的继代苗接种至生根培养基中进行生根培养；生根培养基的基本培养基为1/2MB，添加不同浓度配比的IAA、IBA，每种培养基添加蔗糖30g/L、琼脂6g/L和活性炭50mg/L，pH为5.8～6.0；各处理接种4瓶，每瓶接种10株生长状况相同的继代苗，培养温度为（20±1）℃，光照时间为12h/d，光照强度为1500-2000Lx，20d后观察组培苗的生根的情况并记录数据。
从表2可见，在基本培养基与培养条件相同的条件下，不同生长素IAA与IBA浓度配比对灰毡毛忍冬渝蕾1号组培苗生根的影响很大，经不同激素处理组培苗生根率呈现出差异。
当α=0.05时，处理1、处理3、处理8、处理12与处理4的生根率，处理4与处理1处理3、处理5、处理6、处理8、处理12的生根率，处理5、处理6与处理7、处理10的生根率差异均显著，其他处理之间的生根率差异不显著。
对比生根率可见，在IAA浓度为0.2mg/L和0.5mg/L不变时，随着IBA浓度的升高组培苗生根率呈现先上升后下降的趋势；且在IAA=0.5mg/L时，随着IBA浓度的升高组培苗生根率没有较大的变化。当IAA浓度为0.1mg/L和0.5mg/L时，随激素IBA浓度的变化组培苗的生根率变化不大且生根率较高都达到了47.00%以上，当IAA=0.1mg/L，IBA=2.0mg/L时组培苗生根率最高达到87.50%。
当IAA=0.2mg/L，IBA浓度分别为0.5mg/L、1.0mg/L、2.0mg/L时组培苗生根率随IBA浓度的增长依次升高，但都相对IAA浓度为0.1mg/L和0.5mg/L时较低；当IAA=0.2mg/L，IBA=1.5mg/L时，组培苗生根率较高达67.50%。
对比平均生根数可见，处理4和处理10的平均根系数大，处理10的平均根系数最大达12.00；处理2、处理3、处理5、处理6、处理8、处理12的平均根系数较小；处理1、处理7、处理9和处理11的平均根系数最小，处理7的平均根系数最小为4.16。
对比苗与根系状况，处理1、处理2、处理3、处理4、处理8与处理11的苗长势好，处理3、处理4、处理8的根粗长而处理1、处理2、处理11的根细长，处理4的苗与根系状况如图1和图2所示；处理5的苗出现老叶枯黄且根细长；处理9、处理10和处理12的少数苗据均出现顶芽枯黄但根都粗长。
因此，综合生根率、平均根系数和苗与根系状况三者的情况分析可得，灰毡毛忍冬渝蕾1号组培苗的最佳生长素浓度配比为IAA0.1mg/L+IBA2.0mg/L。
表2 生长素浓度配比的选择
注：生根率一列中不同字母表示0.05水平上的差异显著性。
3.培养温度的选择
将灰毡毛忍冬渝蕾1号的继代苗接种至生根培养基中进行生根培养；生根培养基的基本培养基为1/2MS、1/2MB、1/3MB、1/4MB四种，添加不同浓度配比的IAA、IBA，每种培养基添加蔗糖30g/L、琼脂6g/L和活性炭50mg/L，pH为5.8～6.0；各处理接种8瓶，每瓶接种10株生长状况相同的继代苗；将每个配方的其中4瓶置于20℃下培养，另4瓶置于25℃下培养，光照时间为12h/d，光照强度为1500-2000Lx，培养20d后观察组培苗的生根的情况并记录数据。
从表3可见，培养温度对组培苗生根有一定的影响。在生根培养基相同条件下，对比生根率，当α=0.05时，经不同的培养温度培养的生根率之间差异不明显，且平均根系数之间差异也不大，但是都呈现出组培苗在20℃时的生根率都比25℃的生根率高。
由此可见，适当的低温能促进灰毡毛忍冬渝蕾1号组培苗的生根，培养温度为20℃时组培苗的生根率较高。
表3 培养温度的选择
注：同一列生根率的不同字母表示0.05水平上的差异显著性。
综上所述，本发明选择的最适合灰毡毛忍冬渝蕾1号组培苗生根的培养基配方为1/2MB+IAA0.1mg/L+IBA2.0mg/L，即以1/2MB培养基为基本培养基，并添加有吲哚乙酸0.1mg/L、吲哚-3-丁酸2.0mg/L、蔗糖30g/L、琼脂6g/L和活性炭50mg/L；适宜的生根培养条件为：光照时间为12h/d，光照强度为1500-2000Lx，培养温度为20℃。
最后说明的是，以上优选实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管通过上述优选实施例已经对本发明进行了详细的描述，但本领域技术人员应当理解，可以在形式上和细节上对其作出各种各样的改变，而不偏离本发明权利要求书所限定的范围。
Claims (3)
1.灰毡毛忍冬渝蕾1号组培苗生根培养基，其特征在于：所述生根培养基是以1/2MB培养基为基本培养基，并添加有吲哚乙酸0.1mg/L、吲哚-3-丁酸2.0mg/L、蔗糖30g/L、琼脂6g/L和活性炭50mg/L。
2.根据权利要求1所述的灰毡毛忍冬渝蕾1号组培苗生根培养基，其特征在于：所述生根培养基的pH为5.8～6.0。
3.使用权利要求1或2所述的灰毡毛忍冬渝蕾1号组培苗生根培养基进行灰毡毛忍冬渝蕾1号组培苗生根培养的方法，其特征在于：将灰毡毛忍冬渝蕾1号的继代苗接种至所述生根培养基中进行生根培养，培养条件为：光照时间为12h/d，光照强度为1500-2000Lx，培养温度为20℃。
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