CN103651119A - 一种江蓠愈伤组织的诱导方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种江蓠愈伤组织的诱导方法，以江蓠叶状体为外植体，洗涤剂和升汞消毒后接种于诱导培养基中，1LPESI培养基中添加2,4-D2mg，IAA1mg、KT1mg、蔗糖30g；先全黑暗诱导7d然后转入光照条件下继续培养，可以形成大量的愈伤组织。本发明方法首次成功的以江蓠叶状体作为外植体诱导愈伤组织形成，且愈伤组织的诱导率可以达到82%，愈伤组织可以进一步发育形成江蓠的芽或者叶状体，不但可行形成大量的江蓠叶状体，还可以为江蓠提供丰富的种质资源。
Description
技术领域
本发明涉及植物组织培养技术领域，具体涉及一种江蓠愈伤组织的诱导方法。
背景技术
江蓠（Gracilaria verrucosa）是我国常见的一种红藻，藻体内含有大量的琼脂和脂肪酸，不但广泛应用于琼脂生产工业，也是人们餐桌上的一道美食。目前，江蓠主要以野生资源为主，人工栽培技术还不成熟，限制人工育种的主要因素是种藻来源不稳定、种质资源匮乏。目前，江蓠主要采用孢子繁殖的方式进行人工育苗，育种周期比较长，孢子萌发率不高，相对于用来育种的种藻，得到的新藻的收率不理想。
植物组织培养技术可以快速繁殖，周年生产，不受季节限制；种苗整齐度高，可以进行新品种培育，。所需材料较少，繁殖系数大，可以在一年内由一个茎段培养出数百万种苗。目前，对于江蓠的消毒技术、诱导培养基成分和培养条件还处于探索阶段，所以江蓠的植物组织培养技术还比较落后，很难诱导出愈伤组织，或者愈伤组织的诱导率极低。
发明内容
针对现有技术存在的缺陷，本发明所要解决的技术问题是提供一种江蓠愈伤组织的诱导方法，可以短时间内、快速育繁大量的愈伤组织，为江蓠的人工育苗提供充足的种质资源。
为了解决上述技术问题，本发明的技术方案如下：
一种江蓠愈伤组织的诱导方法，包括如下步骤：江蓠去掉根部并洗净，将江蓠的叶状体用体积分数为0.2%的洗涤剂浸泡5min，无菌过滤海水清洗干净后，放入体积分数为1%的升汞溶液中浸泡3min，无菌过滤海水清洗赶紧后，放入无菌过滤海水中于紫外灯下照射10-min；将江蓠叶状体切成0.2-0.5mm的切段，接种于愈伤组织诱导培养基中，于15-17℃下全黑暗摇床培养7d，然后将接种有江蓠的培养基转移到20-22℃下，在2000-3000Lx下继续摇床培养14-21d即可形成江蓠愈伤组织。
进一步的，所述的诱导江蓠形成愈伤组织的培养为：1L PESI培养基中添加2,4-D 2-4mg，IAA 0.5-1mg、KT0.5-1mg、蔗糖30g。
优选的，1L PESI培养基中添加2,4-D 2mg，IAA 1mg、KT 1mg、蔗糖30g。
优选的，所述的摇床培养的转速为80-100r/min。
本发明的有益效果是：
首次成功的以江蓠叶状体作为外植体诱导愈伤组织形成，且愈伤组织的诱导率可以达到82%，愈伤组织可以进一步发育形成江蓠的芽或者叶状体，不但可行形成大量的江蓠叶状体，还可以为江蓠提供丰富的种质资源。
具体实施方式
以下通过实施例进一步阐述本发明的有益效果：
实施例1：
江蓠去掉根部并洗净，将江蓠的叶状体用体积分数为0.2%的洗涤剂浸泡5min，无菌过滤海水清洗干净后，放入体积分数为1%的升汞溶液中浸泡3min，无菌过滤海水清洗赶紧后，放入无菌过滤海水中于紫外灯下照射10-min；将江蓠叶状体切成0.2-0.5mm的切段，共100块接种于愈伤组织诱导培养基中，于15-17℃下全黑暗摇床培养7d，然后将接种有江蓠的培养基转移到20-22℃下，在2000-3000Lx下继续摇床培养。诱导江蓠形成愈伤组织的培养为：1L PESI培养基中添加2,4-D 2mg，IAA 0.5mg、KT0.5mg、蔗糖30g；摇床培养的转速为80r/min。培养1个月后，有60块外植体形成愈伤组织，愈伤组织诱导率为60%。
实施例2：
江蓠去掉根部并洗净，将江蓠的叶状体用体积分数为0.2%的洗涤剂浸泡5min，无菌过滤海水清洗干净后，放入体积分数为1%的升汞溶液中浸泡3min，无菌过滤海水清洗赶紧后，放入无菌过滤海水中于紫外灯下照射10-min；将江蓠叶状体切成0.2-0.5mm的切段，共100块接种于愈伤组织诱导培养基中，于15-17℃下全黑暗摇床培养7d，然后将接种有江蓠的培养基转移到20-22℃下，在2000-3000Lx下继续摇床培养。诱导江蓠形成愈伤组织的培养为：1L PESI培养基中添加2,4-D 2mg，IAA 0.5mg、KT0.5mg、蔗糖30g；摇床培养的转速为100r/min。培养1个月后，有65块外植体形成愈伤组织，愈伤组织诱导率为65%。
实施例3：
江蓠去掉根部并洗净，将江蓠的叶状体用体积分数为0.2%的洗涤剂浸泡5min，无菌过滤海水清洗干净后，放入体积分数为1%的升汞溶液中浸泡3min，无菌过滤海水清洗赶紧后，放入无菌过滤海水中于紫外灯下照射10-min；将江蓠叶状体切成0.2-0.5mm的切段，共100块接种于愈伤组织诱导培养基中，于15-17℃下全黑暗摇床培养7d，然后将接种有江蓠的培养基转移到20-22℃下，在2000-3000Lx下继续摇床培养。诱导江蓠形成愈伤组织的培养为：1L PESI培养基中添加2,4-D 4mg，IAA 1mg、KT1mg、蔗糖30g；摇床培养的转速为80r/min。培养1个月后，有40块外植体形成愈伤组织，愈伤组织诱导率为40%。
实施例4：
江蓠去掉根部并洗净，将江蓠的叶状体用体积分数为0.2%的洗涤剂浸泡5min，无菌过滤海水清洗干净后，放入体积分数为1%的升汞溶液中浸泡3min，无菌过滤海水清洗赶紧后，放入无菌过滤海水中于紫外灯下照射10-min；将江蓠叶状体切成0.2-0.5mm的切段，共100块接种于愈伤组织诱导培养基中，于15-17℃下全黑暗摇床培养7d，然后将接种有江蓠的培养基转移到20-22℃下，在2000-3000Lx下继续摇床培养。诱导江蓠形成愈伤组织的培养为：1L PESI培养基中添加2,4-D 4mg，IAA 1mg、KT1mg、蔗糖30g；摇床培养的转速为100r/min。培养1个月后，有42块外植体形成愈伤组织，愈伤组织诱导率为42%。
实施例5：
江蓠去掉根部并洗净，将江蓠的叶状体用体积分数为0.2%的洗涤剂浸泡5min，无菌过滤海水清洗干净后，放入体积分数为1%的升汞溶液中浸泡3min，无菌过滤海水清洗赶紧后，放入无菌过滤海水中于紫外灯下照射10-min；将江蓠叶状体切成0.2-0.5mm的切段，共100块接种于愈伤组织诱导培养基中，于15-17℃下全黑暗摇床培养7d，然后将接种有江蓠的培养基转移到20-22℃下，在2000-3000Lx下继续摇床培养。诱导江蓠形成愈伤组织的培养为：1L PESI培养基中添加2,4-D 4mg，IAA 0.5mg、KT0.5mg、蔗糖30g；摇床培养的转速为80r/min。培养1个月后，有44块外植体形成愈伤组织，愈伤组织诱导率为44%。
实施例6：
江蓠去掉根部并洗净，将江蓠的叶状体用体积分数为0.2%的洗涤剂浸泡5min，无菌过滤海水清洗干净后，放入体积分数为1%的升汞溶液中浸泡3min，无菌过滤海水清洗赶紧后，放入无菌过滤海水中于紫外灯下照射10-min；将江蓠叶状体切成0.2-0.5mm的切段，共100块接种于愈伤组织诱导培养基中，于15-17℃下全黑暗摇床培养7d，然后将接种有江蓠的培养基转移到20-22℃下，在2000-3000Lx下继续摇床培养。诱导江蓠形成愈伤组织的培养为：1L PESI培养基中添加2,4-D 4mg，IAA 0.5mg、KT0.5mg、蔗糖30g；摇床培养的转速为100r/min。培养1个月后，有48块外植体形成愈伤组织，愈伤组织诱导率为48%。
实施例7：
江蓠去掉根部并洗净，将江蓠的叶状体用体积分数为0.2%的洗涤剂浸泡5min，无菌过滤海水清洗干净后，放入体积分数为1%的升汞溶液中浸泡3min，无菌过滤海水清洗赶紧后，放入无菌过滤海水中于紫外灯下照射10-min；将江蓠叶状体切成0.2-0.5mm的切段，共100块接种于愈伤组织诱导培养基中，于15-17℃下全黑暗摇床培养7d，然后将接种有江蓠的培养基转移到20-22℃下，在2000-3000Lx下继续摇床培养。诱导江蓠形成愈伤组织的培养为：1L PESI培养基中添加2,4-D 2mg，IAA 1mg、KT1mg、蔗糖30g；摇床培养的转速为80r/min。培养1个月后，有75块外植体形成愈伤组织，愈伤组织诱导率为75%。
实施例8：
江蓠去掉根部并洗净，将江蓠的叶状体用体积分数为0.2%的洗涤剂浸泡5min，无菌过滤海水清洗干净后，放入体积分数为1%的升汞溶液中浸泡3min，无菌过滤海水清洗赶紧后，放入无菌过滤海水中于紫外灯下照射10-min；将江蓠叶状体切成0.2-0.5mm的切段，共100块接种于愈伤组织诱导培养基中，于15-17℃下全黑暗摇床培养7d，然后将接种有江蓠的培养基转移到20-22℃下，在2000-3000Lx下继续摇床培养。诱导江蓠形成愈伤组织的培养为：1L PESI培养基中添加2,4-D 2mg，IAA 1mg、KT1mg、蔗糖30g；摇床培养的转速为100r/min。培养1个月后，有82块外植体形成愈伤组织，愈伤组织诱导率为82%。
上述实例只是为说明本发明的技术构思以及技术特点，并不能以此限制本发明的保护范围。凡根据本发明的实质所做的等效变换或修饰，都应该涵盖在本发明的保护范围之内。
Claims (4)
1.一种江蓠愈伤组织的诱导方法，其特征在于，包括如下步骤：江蓠去掉根部并洗净，将江蓠的叶状体用体积分数为0.2%的洗涤剂浸泡5min，无菌过滤海水清洗干净后，放入体积分数为1%的升汞溶液中浸泡3min，无菌过滤海水清洗赶紧后，放入无菌过滤海水中于紫外灯下照射10-min；将江蓠叶状体切成0.2-0.5mm的切段，接种于愈伤组织诱导培养基中，于15-17℃下全黑暗摇床培养7d，然后将接种有江蓠的培养基转移到20-22℃下，在2000-3000Lx下继续摇床培养14-21d即可形成江蓠愈伤组织。
2.根据权利要求1所述的诱导方法，其特征在于，所述的诱导江蓠形成愈伤组织的培养为：1L PESI培养基中添加2,4-D 2-4mg，IAA 0.5-1mg、KT0.5-1mg、蔗糖30g。
3.根据权利要求1或权利要求2所述的诱导方法，其特征在于，所述的诱导江蓠形成愈伤组织的培养为：1L PESI培养基中添加2,4-D 2mg，IAA 1mg、KT 1mg、蔗糖30g。
4.根据权利要求1所述的诱导方法，其特征在于，所述的摇床培养的转速为80-100r/min。
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| C10 | Entry into substantive examination | ||
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| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| TR01 | Transfer of patent right | ||
| TR01 | Transfer of patent right |
Effective date of registration: 20181203 Address after: Room 1402, Ziyang Building, 99 Mingzhu Road, Huaishang District, Bengbu City, Anhui Province Patentee after: Bengbu HRABERO Intellectual Property Service Co. Ltd. Address before: 266061 Qingdao Hongkong Laoshan road 248, Pioneer Park, 239 Biological Park 239 Patentee before: Qingdao Wenchuang Science & Technology Co., Ltd. |
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| TR01 | Transfer of patent right |
Effective date of registration: 20181228 Address after: 221000 No. 0111, Hardware Market Area 1, Jiefangnan Road Science and Technology City, Xuzhou City, Jiangsu Province Patentee after: Ma Genying Address before: Room 1402, Ziyang Building, 99 Mingzhu Road, Huaishang District, Bengbu City, Anhui Province Patentee before: Bengbu HRABERO Intellectual Property Service Co. Ltd. |
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| TR01 | Transfer of patent right | ||
| CP02 | Change in the address of a patent holder |
Address after: 225300 building 30, Xianglong home, Mingzhu street, medical high tech Zone, Taizhou City, Jiangsu Province Patentee after: Ma Genying Address before: 221000 No. 0111, Hardware Market Area 1, Jiefangnan Road Science and Technology City, Xuzhou City, Jiangsu Province Patentee before: Ma Genying |
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| CP02 | Change in the address of a patent holder | ||
| TR01 | Transfer of patent right |
Effective date of registration: 20191217 Address after: 246400 Zhuanqiao village, Xincang Town, Taihu County, Anqing City, Anhui Province Patentee after: Anhui Manlin Agricultural Technology Development Co., Ltd Address before: 225300 building 30, Xianglong home, Mingzhu street, medical high tech Zone, Taizhou City, Jiangsu Province Patentee before: Ma Genying |
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| TR01 | Transfer of patent right |