CN103535282B - 杜鹃红山茶的组织培养基及其繁殖方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种杜鹃红山茶的组织培养基及其繁殖方法；该杜鹃红山茶的组织培养基包括诱导培养基、增殖培养基和生根培养基；使用所述杜鹃红山茶的组织培养基进行杜鹃红山茶繁殖的方法，包括芽的诱导、芽的增殖培养和生根培养三个步骤。本发明建立了通过组织培养技术对杜鹃红山茶进行繁殖的方法，并对方法中涉及的诱导培养基、增殖培养基和生根培养基进行了选择优化，具有芽诱导率高、增殖系数高、生根率高、植株抽高快、叶形叶色正常、根系发达等优点，能够满足市场对杜鹃红山茶的需要，并且成本低、性状稳定。

Description

杜鹃红山茶的组织培养基及其繁殖方法

技术领域

本发明属于植物组织培养技术领域，涉及一种杜鹃红山茶的组织培养基及其繁殖方法。

背景技术

杜鹃红山茶（Camellia azalea）因其外形极像杜鹃，实质却是山茶，故此得名。杜鹃红山茶为山茶科，山茶属，栽培名称为“四季杜鹃茶”或“杜鹃茶”。杜鹃红山茶是一个极其珍稀的山茶品种，有着“植物界大熊猫”之称、一度曾濒临灭绝的杜鹃红山茶。主要分布在云南、广西、广东、四川，野生数量稀少，茶花市场上也少见，目前处在研究开发阶段，是珍贵的四季开花古茶花品种之一。近年来广东、浙江等地已经逐渐市场化，但是全都是通过传统的嫁接和扦插获得，其繁殖速度慢，繁殖率低，仍然满足不了市场的需求。采用组织培养技术对杜鹃红山茶进行繁殖，可以有效解决市场供不应求的问题，但是通过组织培养技术对杜鹃红山茶进行繁殖的技术目前没有相关的报道。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种杜鹃红山茶的组织培养基及其繁殖方法，可以对杜鹃红山茶进行繁殖，为市场解决供不应求的问题，并且成本低、性状稳定。

为达到上述目的，本发明提供如下技术方案：

本发明公开了一种杜鹃红山茶的组织培养基，包括诱导培养基、增殖培养基和生根培养基；所述诱导培养基是以SH培养基为基本培养基，并添加有玉米素1.0mg/L、6-苄氨基嘌呤2.0mg/L和吲哚乙酸1.0mg/L；所述增殖培养基是以SH培养基为基本培养基，并添加有玉米素1.0mg/L、6-苄氨基嘌呤1.0mg/L和吲哚乙酸0.5mg/L；所述生根培养基是以1/2SH培养基为基本培养基，并添加有吲哚-3-丁酸2.0mg/L、吲哚乙酸0.1mg/L和活性炭100mg/L。

本发明公开了一种使用上述杜鹃红山茶的组织培养基进行杜鹃红山茶繁殖的方法，包括以下步骤：

1）芽的诱导：取杜鹃红山茶当年生幼嫩茎尖为外植体，经清洗消毒灭菌后，接种于所述诱导培养基中进行芽的诱导；

2）芽的增殖培养：将诱导出来的芽从老组织上切割下来，接种到所述增殖培养基中进行芽的增殖培养；

3）生根培养：从增殖的植株上切取健壮的单芽，接种到所述生根培养基中进行生根培养。

进一步，所述步骤1）中，进行芽的诱导时，前7天为暗培养，然后进行光照培养，光照时间为10～12h/d，光照强度为2000～3000lx，控制温度25±2℃。

本发明中所述的SH培养基和1/2SH培养基为植物组织培养中常用的基本培养基，其具体配方如下表所示：

本发明的有益效果在于：本发明建立了通过组织培养技术对杜鹃红山茶进行繁殖的方法，并对方法中涉及的诱导培养基、增殖培养基和生根培养基进行了选择优化，具有芽诱导率高、增殖系数高、生根率高、植株抽高快、叶形叶色正常、根系发达等优点，能够满足市场对杜鹃红山茶的需要，并且成本低、性状稳定。

具体实施方式

下面将对本发明的优选实施例进行详细的描述。

本发明实施例所用的试验材料杜鹃红山茶幼嫩茎尖由重庆市南山植物园提供，采取时间为2010年4月中旬。

1）芽的诱导：在4月中旬选取3～5cm长的当年生幼嫩茎尖为外植体，先用自来水冲洗干净后剪去叶片，留茎尖2～3cm，加少许洗衣粉溶解后浸泡剪好的材料5～10min除去表面灰尘，然后用流水冲洗干净，在超净工作台上开紫外灯晾干，放入0.1%的升汞中灭菌5～6min，再用无菌水冲洗4～5次，切掉茎尖基部，使茎尖控制在1cm左右长；将获得的无菌材料茎尖接种到不同组合组成的诱导培养基中，进行芽的诱导：前7天为培养室内暗培养，然后开双排灯进行光照培养，光照时间为10～12h/d，光照强度为2000～3000lx，控制温度25±2℃。

试验所用诱导培养基是以MS、SH或改良MS培养基为基本培养基，并添加有玉米素（ZT）1.0mg/L、6-苄氨基嘌呤（6-BA）2.0mg/L和吲哚乙酸（IAA）1.0mg/L；每种处理接种30瓶，每瓶接种1个外植体，重复3次；培养30d后观察并统计其生长情况、诱导率、成活率，以筛选出芽诱导的最适培养基；诱导率=（诱导出的芽数/接种的外植体数）×100%，成活率=（成活数/诱导出的芽数）×100%。

试验结果见表1，可见，在3种不同诱导培养基中诱导后，都能够促使杜鹃红山茶茎尖诱导；但在SH配方中诱导效果最好，其诱导率为64.4%，成活率为100%，且诱导出来的芽生长健壮、芽色绿、生长快；MS配方的诱导率最低为38.9%，并且诱导出来的芽顶芽容易枯死，影响成活率。因此，本发明选择的诱导培养基为：以SH培养基为基本培养基，并添加有玉米素1.0mg/L、6-苄氨基嘌呤2.0mg/L和吲哚乙酸1.0mg/L。

表1诱导培养基的选择

2）芽的增殖培养：将诱导出来的芽从老组织上切割下来，如果有几个茎段的将其切割成带有腋芽的茎段，接种到不同组合组成的增殖培养基中，进行芽的增殖培养。

试验所用增殖培养基是以SH为基本培养基，并添加有不同浓度的玉米素（ZT）、6-苄氨基嘌呤（6-BA）和吲哚乙酸（IAA）；每种处理接种30瓶，每瓶接种一个芽，重复3次；培养30d后统计其平均株高、增殖系数，平均株高=苗的总高度/苗的总数，增殖系数=增殖后的总芽数/接种的外植体数。

试验结果见表2，可见，在培养基中添加分裂素ZT的处理中，分化出来的芽颜色浓绿，增殖系数较不添加ZT高，平均株高也明显高于不添加ZT的处理；添加生长素IAA浓度对杜鹃红山茶增殖苗的平均株高和增殖系数的影响也很大，随IAA浓度的升高，平均株高逐渐增高，但是增殖系数且相反；C8处理中添加ZT1.0mg/L+6-BA1.0mg/L+IAA0.5mg/L对杜鹃红山茶的增殖苗长势最好，平均株高为2.18cm，增殖系数最高为2.36，且芽色浓绿，健壮且生长快。因此，本发明选择的增殖培养基为：以SH培养基为基本培养基，并添加有玉米素1.0mg/L、6-苄氨基嘌呤1.0mg/L和吲哚乙酸0.5mg/L。

表2增殖培养基的选择

3）生根培养：从增殖的植株上切取健壮的单芽，接种到不同组合组成的生根培养基中进行生根培养。

试验所用生根培养基是以SH、1/2SH或N6培养基为基本培养基，并添加有不同浓度的吲哚-3-丁酸（IBA）、萘乙酸（NAA）、吲哚乙酸（IAA）和活性炭；每种处理接种10瓶，每瓶接种6株，重复3次；培养40d后统计其生根率、平均根数及植株生长状况；平均根数=生根总数/接种外植体数；生根率=（生根的外植体数/接种外植体数）×100%。

试验结果见表3，可见，12种处理组合均可诱导杜鹃红山茶顶芽生根。比较基本培养基的处理，在添加相同植物生长调节剂的不同基本培养基的处理中，SH为最不理想的基本培养基，生根根数和生根率都是最低的，最高生根率仅为17.6%，平均生根根数最高为0.83条，接种在此处理中的植株生长缓慢，植株老化较其它处理快；在1/2SH基本培养基中的处理最适合杜鹃红山茶顶芽生根的诱导，其生根率最高达61.7%，平均根数为1.56条，且植株抽高快，叶形叶色都正常，根系较发达。比较植物生长调节剂种类及浓度对杜鹃红山茶顶芽生根的影响，IBA较NAA更适合，在添加NAA的处理中都发现植株基部容易产生愈伤，而只添加IBA的则不会，在各处理中添加少量的IAA有利杜鹃红山茶顶芽生根的诱导，其生根率明显提高。因此，本发明选择的生根培养基为：以1/2SH培养基为基本培养基，并添加有吲哚-3-丁酸2.0mg/L、吲哚乙酸0.1mg/L和活性炭100mg/L。

表3生根培养基的选择

最后说明的是，以上优选实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管通过上述优选实施例已经对本发明进行了详细的描述，但本领域技术人员应当理解，可以在形式上和细节上对其作出各种各样的改变，而不偏离本发明权利要求书所限定的范围。

Claims (2)

1.杜鹃红山茶的组织培养基，其特征在于：包括诱导培养基、增殖培养基和生根培养基；所述诱导培养基是以SH培养基为基本培养基，并添加有玉米素1.0mg/L、6-苄氨基嘌呤2.0mg/L和吲哚乙酸1.0mg/L；所述增殖培养基是以SH培养基为基本培养基，并添加有玉米素1.0mg/L、6-苄氨基嘌呤1.0mg/L和吲哚乙酸0.5mg/L；所述生根培养基是以1/2SH培养基为基本培养基，并添加有吲哚-3-丁酸2.0mg/L、吲哚乙酸0.1mg/L和活性炭100mg/L。

2.使用权利要求1所述的杜鹃红山茶的组织培养基进行杜鹃红山茶繁殖的方法，其特征在于：包括以下步骤：

1)芽的诱导：取杜鹃红山茶当年生幼嫩茎尖为外植体，经清洗消毒灭菌后，接种于所述诱导培养基中进行芽的诱导；进行芽的诱导时，前7天为暗培养，然后进行光照培养，光照时间为10～12h/d，光照强度为2000～3000lx，控制温度25±2℃；

2)芽的增殖培养：将诱导出来的芽从老组织上切割下来，接种到所述增殖培养基中进行芽的增殖培养；

3)生根培养：从增殖的植株上切取健壮的单芽，接种到所述生根培养基中进行生根培养。