CN103535279A

CN103535279A - 一种龙爪柳未生根组培苗的生根方法

Info

Publication number: CN103535279A
Application number: CN201310495800.0A
Authority: CN
Inventors: 张建国; 饶国栋; 睢金凯
Original assignee: Research Institute of Forestry of Chinese Academy of Forestry
Current assignee: Research Institute of Forestry of Chinese Academy of Forestry
Priority date: 2013-10-21
Filing date: 2013-10-21
Publication date: 2014-01-29
Anticipated expiration: 2033-10-21
Also published as: CN103535279B

Abstract

本发明提供了一种龙爪柳未生根组培苗的生根方法，通过包括MS、0.01～1mg/L萘乙酸（NAA）、0.01～1mg/L6-苄氨基腺嘌呤(6-BA)、30g/L蔗糖、6.5g/L琼脂粉和0.5～3g/L活性炭制备得到的培养基对龙爪柳未生根组培苗进行生根培养，根据本发明提供的方法未生根组培苗生根快，生根率高，并且在组织培养过程中无需更换培养基配方，简化组织培养操作，具有较高的科学价值、经济价值及实用价值。

Description

一种龙爪柳未生根组培苗的生根方法

技术领域

本发明涉及林木培育领域，尤其涉及植物组织培养。

背景技术

龙爪柳，又名龙须柳，拉丁名:Salix matsudana var.tortuosa，科名:杨柳科Salicaceae柳属，是生长在东北、华北、西北、华东等地的杨柳科柳属落叶灌木或小乔木，湿地、旱地皆能生长，生长快，其有阳性，耐寒等特点，春至夏季为适期，其枝条卷曲，姿态别致，在园林中广泛应用栽培。但其数量有限，并且自身繁殖不易，因此在园林应用中受到一定的限制，目前尚无良好的繁殖方法对其进行大规模繁殖。

龙爪柳的繁殖方法有播种法或扦插法繁殖。其中，播种法即是在适宜萌芽的条件下在土壤中播撒龙爪柳种子，等待龙爪柳自然萌芽。这种方法受气候、土壤、水源等自然条件限制严重，选种、播种工作繁重，劳动强度大，出芽率低，因此播种法逐渐被淘汰。

相对于播种法扦插法具有操作简单、繁殖速度快等特点。传统的龙爪柳扦插技术的生根方法主要有以下两种：

一种为自然生根法，即在不做任何处理的情况下，让扦插苗在土壤中自然生根，该方法成活率低，生根慢，会受限于土壤、天气、气候等自然条件；另一种方法为，在扦插前，用中国林业科学研究院生产的ATB生根粉对扦插苗进行处理，然后再使扦插苗在土壤中生根，该方法相对于不作处理的方法提高了生根率，但操作复杂，而且重复性不高。

以上两种扦插方法均会受到季节限制及数量限制，同时需要优选种条，种条用量大，在扦插过程中不便运输携带。

然而，植物组织培养则具有繁育速度快、组培苗成活率高、培养条件人为可控、不受自然环境影响等诸多优势，目前，存在大量通过组织培养的方法进行植物繁殖及所用培养基的报道，如中国专利CN102860261A中公开了一种花叶玉簪植物组织培养基配制方法，其分化培养基配方为：基本培养基MS、6-苄氨基嘌呤1.2～1.8毫克/升、1-萘乙酸0.08～0.12毫克/升、蔗糖25000～35000毫克/升、琼脂粉4000～6000毫克/升，该培养基主要用于多年生宿根草本花卉玉簪的组织分化培养，并未用于其组培苗的生根培养。再如中国专利CN101953307A中公开了一种通过植物组织培养生产福建道地金线莲的方法，将经过无菌处理后的福建道地金线莲小段组织在诱导培养基中进行组织诱导培养丛生芽，培养周期：10～60天，培养温度：10～35℃，光照培养时间：0～24小时/天，光照强度：0～2000lux；所述的诱导培养基为：MS培养基+蔗糖10～50g/L+琼脂6～8g/L+活性炭2.0～3.0g/L+萘乙酸0.1～3.0mg/L+6-苄氨基腺嘌呤0.1～5.0mg/L，PH值为5.0～7.0，该培养基适用于草本植物金线莲，并且在大规模使用时需要额外添加硝酸钙、香蕉泥等物质，并需降低培养环境的pH，在实际生产中存在较大的成本及能耗，并且操作繁琐，需要大量劳动，其是否适用于木本植物尚未可知。

因此，可以寻求通过植物组织培养的方法对龙爪柳进行大量快速的繁殖。然而，目前尚无对龙爪柳进行组织培养的相关报道。

发明内容

为了解决上述问题，本发明人经锐意研究，结果发现：龙爪柳未生根组培苗在包括MS、萘乙酸（NAA）、6-苄氨基腺嘌呤(6-BA)、蔗糖、琼脂粉和活性炭的培养基中生根率高，且生根后根生长迅速，成活率高。其中，萘乙酸和6-苄氨基腺嘌呤均为常用的植物生长激素，其不同浓度对植物生根生长所起的作用不同，浓度过高时会抑制植物生根，当浓度过小时对植物生根又不能起到足够的促进作用。本发明人经不断探索，确定该两种激素促进龙爪柳生根的最佳浓度，经多次试验证明，该两种激素在此浓度下能够有效诱导龙爪柳未生根组培苗生根。同时，本发明人在培养基中加入一定浓度的活性炭，一是可以吸附植物生长中产生的次生代谢物质，促进生根；二是其仅对根部提供黑暗环境，有利于龙爪柳根的生长。

因此，本发明以MS、萘乙酸（NAA）、6-苄氨基腺嘌呤(6-BA)、蔗糖、琼脂粉、活性炭制备培养基，并在此培养基中培养龙爪柳未生根组培苗使其生根，从而完成本发明。

本发明的目的在于提供以下几方面：

第一方面，本发明提供一种龙爪柳未生根组培苗的生根方法，其特征在于，包括以下步骤：

将龙爪柳未生根组培苗叶片的形态学上端剪去，保留0.5～1cm，将剪叶后的龙爪柳未生根组培苗的形态学下端插入培养基中，每个培养基中接种1个龙爪柳未生根组培苗，置于组织培养室中在以下培养条件下培养：

温度27℃，光照3000lx，10小时光周期；

其中，

所述培养基包括：

其中，所述g/L是基于每升培养基所述成分的重量。

第二方面，本发明提供上述龙爪柳未生根组培苗的生根方法，其特征在于，所述培养基包括：

其中，所述g/L是基于每升培养基所述成分的重量。

第三方面，本发明提供上述龙爪柳未生根组培苗的生根方法，其特征在于，所述培养基包括：

其中，所述g/L是基于每升培养基所述成分的重量。

第四方面，本发明提供上述龙爪柳未生根组培苗的生根方法，其特征在于，所述培养基由以下步骤制得：

（1）调节MS培养基pH至5.8～6.0，加入琼脂粉，后于121℃下高温蒸汽灭菌20～30min，冷却至50～60℃待用；

（2）萘乙酸和6-苄氨基腺嘌呤灭菌待用；

（3）将活性炭、步骤（2）中灭菌后的萘乙酸和6-苄氨基腺嘌呤加入步骤（1）中制备的琼脂-MS中，凝固制备完成。

第五方面，本发明提供上述龙爪柳未生根组培苗的生根方法，其特征在于，所述灭菌方式为通过滤膜过滤灭菌，其中，滤膜孔径为0.22μm。

第六方面，本发明还提供一种用于龙爪柳未生根组培苗生根的培养基，其特征在于，其包括：

其中，所述g/L是基于每升培养基所述成分的重量。

第七方面，本发明提供上述用于龙爪柳未生根组培苗生根的培养基，其特征在于，其包括：

其中，所述g/L是基于每升培养基所述成分的重量。

第八方面，本发明提供上述用于龙爪柳未生根组培苗生根的培养基，其特征在于，其包括：

其中，所述g/L是基于每升培养基所述成分的重量。

第九方面，本发明提供上述用于龙爪柳未生根组培苗生根的培养基，其特征在于，所述培养基由以下步骤制得：

（2）萘乙酸和6-苄氨基腺嘌呤灭菌待用；

第十方面，本发明提供上述种用于龙爪柳未生根组培苗生根的培养基，其特征在于，所述灭菌方式为通过滤膜过滤灭菌，其中，滤膜孔径为0.22μm。

本文中，所述“未生根组培苗”是指，通过增殖方法获得的龙爪柳未生根组培苗，例如通过以下方法获得的龙爪柳未生根组培苗：

（1）每年4～10月选取龙爪柳当年生嫩茎的形态学上端4～5节，每一节作为一个外植体，冰袋保存；

（2）将（1）中取得的外植体上叶片的形态学上端剪去，保留叶片的形态学下端0.5～1cm；

（3）将（2）处理过的外植体以流动水冲洗；

（4）将（3）中处理后的外植体移至超净工作台中进行以下操作：

①用75%酒精对外植体进行表面灭菌30～60s，后用灭菌水冲洗酒精灭菌后的外植体；

②在不断摇动的条件下，用0.5～1%次氯酸钠溶液对①处理后的外植体进行灭菌，6～8min；

③用灭菌水冲洗经②处理后的外植体；

（5）将步骤（4）处理后的外植体的形态学下端插入培养基中，每个培养基中接种4个外植体，置于组织培养室中在以下培养条件下培养：温度27℃，光照3000lx，14小时光周期；

（6）继代培养：（5）中接种的外植体约2周后腋芽开始膨大，3～4周后腋芽抽出新叶，5～6周幼苗长至3cm长后，继代至与（5）中所用培养基配比相同的培养基中进行继代培养，培养3个月左右，幼苗长至10～15cm；

（7）增殖培养：将（6）中继代培养获得的幼苗取出，按照细苗的节数，将每节叶片的形态学上端剪去，保留叶片的形态学下端0.5～1cm，移至与（6）中所用培养基配比相同的培养基中进行增殖培养；

（8）重复步骤（2）～（7）；

其中，

步骤（5）、（6）和（7）中所述培养基包括：

其中，所述g/L是基于每升培养基所述成分的重量。

本文中，所用术语“形态学上端”是指，龙爪柳枝条或节上分生迅速的上端。

本文中，所用术语“形态学下端”是指，龙爪柳枝条或节上分生缓慢的下端。

本文中，所用术语“光周期”是指，每天对龙爪柳进行光照的时长。

本发明提供的一种龙爪柳未生根组培苗的生根方法，具有如下有益效果：

（1）本发明提供的方法不受气候、天气、土壤、水源等自然因素的限制，可周年不间断生产；

（2）取材少，本发明取材为龙爪柳组织培养出来的组培苗，相对于传统的扦插培育方式，外植体丰富，取材方便；

（3）生根快，生根率高，利用本发明的方法可使龙爪柳未生根组培苗在2～3周后便开始生根，且生根后的组培苗生长迅速，生根率在90%以上；

（4）本发明方法不受土壤、温度、湿度、光照等自然条件影响，所有操作都在组织培养室中进行，无菌，温度、湿度、光照等条件可人工控制，培养条件稳定，重复性强；

（5）本发明在所用培养基中加入了一定浓度的活性炭，可以吸附植物生长中产生的次生代谢物质，以促进龙爪柳生根；同时，活性炭还为根的生长提供了黑暗环境，有利于根的生长；

（6）具有巨大的科研价值和推广价值，根据本发明的方法可为龙爪柳的转基因工程提供普通方法难以获得的无菌原生质体，同时，本发明的产品龙爪柳幼苗，成活率高，生长迅速，具有很强的实用价值；

（7）本发明提供的方法在组织培养过程中无需更换培养基配方，简化组织培养操作。

附图说明

图1示出实施例1中的未生根组培苗图片；

图2示出实施例1中生根后的组培苗图片。

具体实施方式

以下通过具体实施方式进一步解释或说明本发明内容，但实施例不应被理解为对本发明保护范围的限制。

本发明提供了一种龙爪柳未生根组培苗的生根方法，通过使用含有适当浓度的激素的培养基，诱导龙爪柳未生根组培苗生根，具体地：

将龙爪柳未生根组培苗叶片的形态学上端剪去，保留0.5～1cm，将剪叶后的龙爪柳未生根组培苗的形态学下端插入培养基中，每个培养基中接种1个龙爪柳未生根组培苗，置于组织培养室中，在27℃，光照3000lx，10小时光周期的条件下培养。

在高等植物正常的个体发育中，芽一般是只从茎尖或叶腋等的一定位置生出，这种在一定部位生出的芽，称为定芽；与此相对应，凡从叶、根、或茎节间或是离体培养的愈伤组织上等通常不形成芽的部位生出的芽，则统称为不定芽。植物组织培养即植物无菌培养技术，是根据植物细胞具有全能性的理论，利用植物体离体的器官如根、茎、叶、茎尖、花、果实等组织或细胞以及原生质体，在无菌和适宜的人工培养基及光照、温度等人工条件下，能诱导出愈伤组织、不定芽、不定根，最后形成完整的植株的技术。组织培养技术培养条件人工可控，能够有效避免自然环境的不确定因素对植株生长的影响，不受时间环境等因素限制，可周年进行，繁殖率、成活率均高于自然繁育，并且组织培养技术的重复性好。

植物细胞组织培养的成败与两个因素密切相关，一是培养基的组分；二是外植体本身，即由活体植物上切取下来，用以进行离体培养的那部分组织或器官。为了使外植体适于在离体培养条件下生根，有必要对外植体进行选择与处理。

（一）在外植体来源方面：茎尖是较好的外植体，由于茎形态已基本建成，生长速度快，遗传性稳定，也是获得无病毒苗的重要途径，但茎尖往往受到材料来源的限制，因此通常也会选用茎段、叶片等作为培养材料，本发明选取龙爪柳未生根组培苗作为外植体；

（二）在外植体大小方面：外植体大小对组培生根的成活率有直接的影响，如果外植体过大，则维持其生长所需的营养元素多，导致培养基中营养元素的浪费；如果外植体过小，则会导致在组织培养时难于成活；

（三）在取材季节方面：组织培养的外植体通常选择植物生长的最适时期取材，即在其生长开始的季节采样，若在生长末期或已经进入休眠期取样，则外植体会对诱导反应迟钝或无反应，而组织培养繁育出的组培苗不受此限制，新生芽即在最适取材期；

（四）在外植体的生理状态和发育年龄方面：越幼嫩，生理年限越短的外植体越具有较高的形态发生能力，组织培养越易成功。

综合上述各方面因素，本发明选择组织培养中增殖出的未生根组培苗，以便保证所取外植体在组培生根中的成功率。

在组织培养中使用的营养元素受到浓度和体积的限制，为防止不必要的营养消耗，使培养基中有限的营养元素更为充分的用于促使腋芽发育，同时保证植株的光合作用，因此本发明在组织培养中将龙爪柳枝条上叶片的形态学上端剪去，保留0.5cm～1cm的叶片的形态学下端部分。

本发明中所述培养基包括：

优选的包括：

更优选的，包括：

其中，所述g/L是基于每升培养基所述成分的重量。

MS培养基为目前在组织培养中使用最为广泛的一种基本培养基，其特点是无机盐和离子浓度较高，是较稳定的离子平衡溶液，它的硝酸盐含量高，其养分的数量和比例合适，能满足植物细胞的营养和生理需要，因而适用范围比较广。同时，它具有较高的无机盐浓度，能有效保证组织生长所需的矿质营养的供应，此外，由于配方中的离子浓度高，在配制、贮存、消毒等过程中，即使有些成分略有出入，也不致影响离子间的平衡。

萘乙酸（NAA），是一类生长调节类激素，其主要作用是促进细胞分裂与扩大，促进生根，其作用效果与之使用浓度密切相关，本发明人通过以萘乙酸浓度梯度对龙爪柳茎增殖进行实验，例如以0.1mg/L为浓度梯度，筛选出促进龙爪柳茎增殖的最佳萘乙酸浓度为0.01～1mg/L，更优选的为0.05～0.5mg/L，更为优选的为0.1～0.3mg/L。

6-苄氨基腺嘌呤(6-BA)，是第一个人工合成的细胞分裂素，其具有诱导芽的分化，促进侧芽生长，促进细胞分裂，抑制植物叶片内叶绿素、核酸、蛋白质的分解，保绿防老，将氨基酸、生长素、无机盐等向处理部位调运等多种效能。当其浓度大于1mg/L时，其会抑制龙爪柳枝条分生细胞的分裂；当其浓度小于0.01mg/L时，其对龙爪柳枝条分生细胞分裂的促进作用不显著。在本发明中，优选的6-苄氨基腺嘌呤浓度为0.01～1mg/L，更优选的为0.1～1mg/L，更为优选的为0.5～1mg/L。

由于萘乙酸和玉米素均为激素，高温蒸汽灭菌会导致其失活，因此通常采用过滤的方式对其进行除菌，本发明所选用的滤膜孔径为0.22μm。

当萘乙酸浓度为1mg/L，6-苄氨基腺嘌呤浓度为0.01mg/L时，或萘乙酸浓度为0.01mg/L，6-苄氨基腺嘌呤浓度为1mg/L时龙爪柳未生根组培苗的生根情况不良，选用萘乙酸浓度为0.1mg/L，6-苄氨基腺嘌呤浓度为1mg/L。

蔗糖，为培养基中为植物细胞提供能量的碳源，选用它作为碳源主要有以下几个方面的原因：

（1）与葡萄糖相比，蔗糖能更好地调节培养基内的渗透压。配制相同质量分数的培养基，蔗糖形成的渗透压要明显低于葡萄糖，因此若采用葡萄糖作为碳源，易使植物细胞脱水而导致生长不良。同时，植物细胞吸收蔗糖的速率要明显慢于吸收葡萄糖的速率，所以蔗糖形成的渗透压可相对长期的保持稳定。

（2）植物组织培养过程中，需要时刻注意防止培养基受到微生物的污染，而微生物生长所需的碳源最常用的是葡萄糖，一般很少利用蔗糖，因此，采用蔗糖作为培养基的碳源，可以在一定程度上减少或防止微生物的污染。

蔗糖作用组培植物的碳源，当蔗糖浓度不为30g/L时，未生根组培苗的生根不良，因此本发明优选蔗糖浓度为30g/L。

琼脂是培养基中常用的固体剂，其最主要的作用是使液体培养基凝固，为外植生长提供固相生根环境。

活性炭具有不定形微晶结构，具有极大的比表面积，并且容易分散在培养基中，其对各物质的吸附能力为中等极性有机物大于非极性或高极性有机物；芳香族物质大于烯烃类物质；而对酚类及其氧化物、生长素类、细胞分裂素类有着强烈的亲和性，而对糖类则几乎无亲和性。在组织培养中加入活性炭有以下几方面的作用：

（1）活性炭可以为外植体提供生根所需的暗环境，相对于其它提供暗环境的方法，活性炭在对根部提供暗环境同时，外植体上端可处于光环境中，两者互不干扰，能够实现外植体不间断生根发育；同时，活性炭提供的暗环境还可以削弱生长激素的光分解；

（2）活性炭可以有效吸附植物生长中产生的次生代谢物质及根生长的抑制物，对根的生长有促进作用；

（3）活性炭能吸附酚类物质，使多酚氧化酶与过氧化酶失活，从而有效地防止褐变。

活性炭的浓度对其作用效果有重要影响，当活性炭浓度大于3g/L时，其对培养基中的营养物质的吸附作用强于解吸附作用而导致组培苗生长状况不良；当活性炭浓度小于0.5g/L时，其对组培苗产生的次生代谢物质的吸附作用不足，则对根生长的促进作用不明显，因此，本发明优选活性炭的浓度为0.5～3g/L，更优选的为0.7～2g/L，更为优选的为0.8～1.2g/L。

本发明中所述培养基由以下步骤制得：

（2）萘乙酸、6-苄氨基腺嘌呤以过滤方式灭菌；其中，所述过滤方式为通过滤膜过滤，其中，滤膜孔径为0.22μm。

（3）将步骤（2）中灭菌后的萘乙酸、6-苄氨基腺嘌呤加入步骤（1）中制备的琼脂-MS中，凝固制备完成；

结合龙爪柳的生长特性，选择龙爪柳未生根组培苗的生根培养条件为：温度27℃，光照3000lx，10小时光周期。

本发明提供的龙爪柳未生根组培苗的生根方法具有以下优点：

第一，本发明提供的方法不受气候、天气、土壤、水源等自然因素的限制，可周年不间断生产；

第二，取材少，本发明取材为龙爪柳组织培养出来的组培苗，相对于传统的扦插培育方式，外植体丰富，取材方便；

第三，生根快，生根率高，利用本发明的方法可使未生根龙爪柳组培苗在2～3周后便开始生根，且生根之后的组培苗生长迅速，生根率在90%以上；

第四，本发明方法不受土壤、温度、湿度、光照等自然条件影响，所有操作都在组织培养室中进行，无菌，温度、湿度、光照等条件可人工控制，培养条件稳定，重复性强；

第五，本发明在所用培养基中加入了一定浓度的活性炭，吸附植物生长中产生的次生代谢物质，以促进龙爪柳生根；同时，活性炭还为根的生长提供了黑暗环境，有利于根的生长；

第六，具有巨大的科研价值和推广价值，根据本发明的方法可为龙爪柳的转基因工程提供普通方法难以获得的无菌原生质体，同时，本发明的产品龙爪柳幼苗，成活率高，生长迅速，具有很强的实用价值；

第七，本发明提供的方法在组织培养过程中无需更换培养基配方，简化组织培养操作。

实施例

实验部分：

MS培养基、萘乙酸和6-苄氨基腺嘌呤均购自Sigma公司

实施例1

1.培养基的制备

（1）将MS培养基用NaOH调节pH至5.8，加入琼脂粉6.5g，后于121℃下高温蒸汽灭菌20min，冷却至50℃待用；萘乙酸和6-苄氨基腺嘌呤，用孔径为0.22μm的滤膜过滤灭菌；将活性炭1g、灭菌后的萘乙酸0.15mg和6-苄氨基腺嘌呤1mg加入上述步骤中制备的琼脂-MS中，定容至1L，凝固制备完成。

2.组培过程

如图1所示，龙爪柳未生根组培苗的形态学下端插入培养基中，每个培养基中接种1个龙爪柳枝条，置于组织培养室中在温度27℃，光照3000lx，10小时光周的条件下培养；在此培养条件下共培养未生根组培苗100株。

3.组培结果

如图2所示，龙爪柳未生根组培苗在14天后便开始生根；生根率为90%；且生根之后的组培苗生长迅速，15天后组培苗植株高度可达10cm，即为龙爪柳幼苗。

实施例2

1.培养基的制备与组培过程与实施例1相同，区别仅在于制备培养基时加入活性炭、萘乙酸和6-苄氨基腺嘌呤的重量：

活性炭2.5g、萘乙酸0.4mg，6-苄氨基腺嘌呤0.8mg。

2.组织培养结果

龙爪柳未生根组培苗在14天后便开始生根；生根率为90%；且生根之后的组培苗生长迅速，18天后组培苗植株高度可达10cm，即为龙爪柳幼苗。

实施例3

活性炭0.75g、萘乙酸0.08mg，6-苄氨基腺嘌呤0.5mg。

2.组织培养结果

龙爪柳未生根组培苗在14天后便开始生根；生根率为90%；且生根之后的组培苗生长迅速，17天后组培苗植株高度可达10cm，即为龙爪柳幼苗。

实施例4

活性炭0.6g、萘乙酸0.02mg，6-苄氨基腺嘌呤0.1mg。

2.组织培养结果

龙爪柳未生根组培苗在18天后便开始生根；生根率为90%；且生根之后的组培苗生长迅速，22天后组培苗植株高度可达10cm，即为龙爪柳幼苗。

实施例5

活性炭1.5g、萘乙酸0.8mg，6-苄氨基腺嘌呤0.01mg。

2.组织培养结果

龙爪柳未生根组培苗在18天后便开始生根；生根率为90%；且生根之后的组培苗生长迅速，23天后组培苗植株高度可达10cm，即为龙爪柳幼苗。

对比例

对比例1

1.培养基的制备与组织培养过程与实施例1采用相同的组织培养方式，区别仅在于培养基中不添加活性炭：

2.组织培养结果

龙爪柳未生根组培苗在17天后便开始生根；生根率为80%；且生根之后的组培苗生长迅速，28天后组培苗植株高度可达10cm，即为龙爪柳幼苗。

由对比例1可知，不添加活性炭会降低龙爪柳未生根组培苗的生根率及生根后组培苗的成活率。

对比例2

1.培养基的制备与组织培养过程与实施例1采用相同的组织培养方式，区别仅在于制备培养基时加入萘乙酸的重量为2mg。

2.组织培养结果

龙爪柳未生根组培苗在16天后便开始生根；生根率为80%；且生根之后的组培苗生长迅速，28天后组培苗植株高度可达10cm，即为龙爪柳幼苗。

由对比例2可知，增加萘乙酸浓度，未明显提高龙爪柳未生根组培苗的生根率及生根后组培苗的成活率。

对比例3

1.培养基的制备与组织培养过程与实施例1采用相同的组织培养方式，区别仅在于制备培养基时加入6-苄氨基腺嘌呤的重量为2mg。

2.组织培养结果

龙爪柳未生根组培苗在18天后便开始生根；生根率为80%；且生根之后的组培苗生长迅速，27天后组培苗植株高度可达10cm，即为龙爪柳幼苗。

由对比例3可知，增加6-苄氨基腺嘌呤浓度，未明显提高龙爪柳未生根组培苗的生根率及生根后组培苗的成活率。

对比例4

1.培养基的制备与组织培养过程与实施例1采用相同的组织培养方式，区别仅在于制备培养基时加入萘乙酸的重量为0.005mg。

2.组织培养结果

龙爪柳未生根组培苗不生根。

由对比例4可知，当萘乙酸浓度过低时，龙爪柳未生根组培苗无法生根。

对比例5

1.培养基的制备与组织培养过程与实施例1采用相同的组织培养方式，区别仅在于制备培养基时加入6-苄氨基腺嘌呤的重量为0.005mg。

2.组织培养结果

龙爪柳未生根组培苗在20天后便开始生根；生根率为79%；且生根之后的组培苗生长迅速，32天后组培苗植株高度可达10cm，即为龙爪柳幼苗。

由对比例5可知，降低6-苄氨基腺嘌呤浓度，会降低龙爪柳未生根组培苗的生根率及生根后组培苗的成活率，并增加生根时间。

实验例

实验例1

将实施例1～5和对比例1～4中培养得到的龙爪柳幼苗进行移土栽培，幼苗成活率如表1所示：

表1龙爪柳幼苗成活率

龙爪柳幼苗	成活率（%）
		实施例1	97
实施例2	95
		实施例3	96
实施例4	93
		实施例5	95
对比例1	90
		对比例2	92
对比例3	91
		对比例4	—
对比例5	85

以上结合具体实施方式和范例性实例对本发明进行了详细说明，不过这些说明并不能理解为对本发明的限制。本领域技术人员理解，在不偏离本发明精神和范围的情况下，可以对本发明技术方案及其实施方式进行多种等价替换、修饰或改进，这些均落入本发明的范围内。本发明的保护范围以所附权利要求为准。