CN103506079A - 一种用于分离纯化抗体的介质及其制备方法 - Google Patents
一种用于分离纯化抗体的介质及其制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN103506079A CN103506079A CN201210202165.8A CN201210202165A CN103506079A CN 103506079 A CN103506079 A CN 103506079A CN 201210202165 A CN201210202165 A CN 201210202165A CN 103506079 A CN103506079 A CN 103506079A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- medium
- matrix
- pyridine
- triazine
- preparation
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title abstract description 7
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 claims abstract description 26
- 239000003446 ligand Substances 0.000 claims abstract description 24
- JIHQDMXYYFUGFV-UHFFFAOYSA-N 1,3,5-triazine Chemical compound C1=NC=NC=N1 JIHQDMXYYFUGFV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 20
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 claims abstract description 12
- 239000004005 microsphere Substances 0.000 claims abstract description 12
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims abstract description 12
- 239000000463 material Substances 0.000 claims abstract description 6
- 239000012190 activator Substances 0.000 claims abstract description 5
- DWPYQDGDWBKJQL-UHFFFAOYSA-N 2-pyridin-4-ylethanol Chemical compound OCCC1=CC=NC=C1 DWPYQDGDWBKJQL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 4
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 claims abstract description 4
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 claims description 10
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 8
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims description 8
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims description 6
- 238000011091 antibody purification Methods 0.000 claims description 5
- 239000000499 gel Substances 0.000 claims description 5
- BXGYBSJAZFGIPX-UHFFFAOYSA-N 2-pyridin-2-ylethanol Chemical compound OCCC1=CC=CC=N1 BXGYBSJAZFGIPX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 claims description 4
- 238000003452 antibody preparation method Methods 0.000 claims description 4
- 230000010148 water-pollination Effects 0.000 claims description 4
- IDLHTECVNDEOIY-UHFFFAOYSA-N 2-pyridin-4-ylethanamine Chemical compound NCCC1=CC=NC=C1 IDLHTECVNDEOIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- VBAOEVKQBLGWTH-UHFFFAOYSA-N 2-pyridin-4-ylethanethiol Chemical compound SCCC1=CC=NC=C1 VBAOEVKQBLGWTH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 3
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 claims description 3
- LRWZZZWJMFNZIK-UHFFFAOYSA-N 2-chloro-3-methyloxirane Chemical compound CC1OC1Cl LRWZZZWJMFNZIK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- NJUDGWVAKJCALG-UHFFFAOYSA-N 2-pyridin-2-ylethanethiol Chemical compound SCCC1=CC=CC=N1 NJUDGWVAKJCALG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- NAHHNSMHYCLMON-UHFFFAOYSA-N 2-pyridin-3-ylethanamine Chemical compound NCCC1=CC=CN=C1 NAHHNSMHYCLMON-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- WQQJXTMFJYSLPT-UHFFFAOYSA-N 2-pyridin-3-ylethanethiol Chemical compound SCCC1=CC=CN=C1 WQQJXTMFJYSLPT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- YPWSASPSYAWQRK-UHFFFAOYSA-N 2-pyridin-3-ylethanol Chemical compound OCCC1=CC=CN=C1 YPWSASPSYAWQRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- XPQIPUZPSLAZDV-UHFFFAOYSA-N 2-pyridylethylamine Chemical compound NCCC1=CC=CC=N1 XPQIPUZPSLAZDV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 239000004593 Epoxy Substances 0.000 claims description 2
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 claims description 2
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 claims description 2
- 125000002915 carbonyl group Chemical group [*:2]C([*:1])=O 0.000 claims description 2
- AFOSIXZFDONLBT-UHFFFAOYSA-N divinyl sulfone Chemical compound C=CS(=O)(=O)C=C AFOSIXZFDONLBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 claims description 2
- 238000011177 media preparation Methods 0.000 claims description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims description 2
- 150000003141 primary amines Chemical group 0.000 claims description 2
- -1 pyridines derivative compound Chemical class 0.000 claims description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 2
- 229920002554 vinyl polymer Polymers 0.000 claims description 2
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 abstract description 6
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 abstract description 5
- 239000008280 blood Substances 0.000 abstract description 5
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 abstract description 4
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 abstract description 4
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 abstract description 3
- 235000021277 colostrum Nutrition 0.000 abstract description 3
- 210000003022 colostrum Anatomy 0.000 abstract description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 abstract description 3
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 abstract description 3
- 239000008267 milk Substances 0.000 abstract description 3
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 abstract description 3
- 239000002994 raw material Substances 0.000 abstract description 3
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 abstract description 3
- 238000012258 culturing Methods 0.000 abstract 1
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 abstract 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 10
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 9
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 9
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 9
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 6
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000011806 microball Substances 0.000 description 4
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 4
- PXFBZOLANLWPMH-UHFFFAOYSA-N 16-Epiaffinine Natural products C1C(C2=CC=CC=C2N2)=C2C(=O)CC2C(=CC)CN(C)C1C2CO PXFBZOLANLWPMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000007836 KH2PO4 Substances 0.000 description 3
- 239000012930 cell culture fluid Substances 0.000 description 3
- ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L dipotassium hydrogen phosphate Chemical compound [K+].[K+].OP([O-])([O-])=O ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 3
- 229910000396 dipotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 3
- 235000019797 dipotassium phosphate Nutrition 0.000 description 3
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 3
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 3
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 description 3
- GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M potassium dihydrogen phosphate Chemical compound [K+].OP(O)([O-])=O GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 3
- 239000011435 rock Substances 0.000 description 3
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 3
- DAPOMFMFTBUAKL-UHFFFAOYSA-N 2-ethylpyridine-3-thiol Chemical compound CCC1=NC=CC=C1S DAPOMFMFTBUAKL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 2
- 229940125644 antibody drug Drugs 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 2
- 150000002605 large molecules Chemical class 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 2
- 125000000472 sulfonyl group Chemical group *S(*)(=O)=O 0.000 description 2
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 2
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 1
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 1
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 1
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 1
- 238000003453 ammonium sulfate precipitation method Methods 0.000 description 1
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 239000010836 blood and blood product Substances 0.000 description 1
- 229940125691 blood product Drugs 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 description 1
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 description 1
- 238000002086 displacement chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 1
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 125000000623 heterocyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 239000000017 hydrogel Substances 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 238000004191 hydrophobic interaction chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 239000012516 mab select resin Substances 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000012264 purified product Substances 0.000 description 1
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Landscapes
- Peptides Or Proteins (AREA)
- External Artificial Organs (AREA)
- Solid-Sorbent Or Filter-Aiding Compositions (AREA)
Abstract
本发明公开了一种新型生物分离材料及其制备方法：将亲水性凝胶微球作为基质在均三嗪活化剂中制成活化基质，然后以偶联法对活化基质键合4-(2-羟基乙基)-吡啶等两个小分子配体，具有更好的特异性与亲和选择性。本发明的分离介质配合亲和层析色谱或扩展床吸附用于工业化大规模抗体生产，极具成本优势，仅一步可从血液、血清、血浆、血浆组分、腹水、细胞培养液、细胞均化液、奶液、初乳等生物原料中直接提取生产高纯度的抗体产品，省时省事。
Description
技术领域
本发明涉及一种用于分离纯化抗体的介质及其制备方法，属于生物分离材料领域。具体地说涉及一种用于以亲和层析色谱或扩展床吸附法从血液、血清、血浆、血浆组分、腹水、细胞培养液、细胞均化液、奶液、初乳等生物原料中分离纯化抗体的新型生物分离材料及其制备方法。
发明背景
生物分离介质是专门用于提纯和精制生物相关产品的一类材料。分离介质广泛用于医药行业、发酵行业、生物制品、血液制品、疫苗和基因工程产品分离。在纯化产品时，分离介质具有分离效果好、产品纯度高、使用范围广，而且还具有可以进行大规模连续自动化生产的特点，使之成为目前对高纯度和高附加值产品进行分离的首选方法。依赖分离介质的产品涵盖基因重组药物、抗体、疫苗、诊断试剂、生化产品、血液净化、基因芯片以及抗生素等。
近年来，针对抗体的分离介质倍受重视。但是，抗体产品纯度往往要求较高，同时还要尽可能地保持其生物活性，传统分离介质难以满足要求。常规离子交换层析分离介质以及疏水作用层析分离介质能够结合抗体，但是特异性和选择性较差，造成分离步骤多，降低抗体的收率与活性；例如，人IgG抗体普遍使用Cohn-Oncley的四步分离法从血库血浆中提取，得到的IgG纯度仅85％，且易形成多聚体或聚集体；又例如使用离子交换层析法从单克隆抗体含3％牛血清的细胞培养液中直接提取IgG，抗体回收率仅为70％，且抗体仅占白蛋白的二分之一，使用硫酸铵沉淀法，纯度更低。
目前，使用昂贵的protein A或基因重组蛋白质大分子作为亲和配体、专门用于抗体药物分离纯化的亲和分离介质，其选择性非常好，例如美国GE公司已商品化的MabSelect以及IgSelect等专门针对抗体的亲和分离介质产品，但这些蛋白质大分子配体价格昂贵，容易受到从分离前段工序带来的蛋白酶的降解，既降低分离介质的重复使用次数或寿命、稳定性低，又可能产生肽链碎片污染抗体产品、影响其质量与安全。以高效的小分子亲和配体取代这些昂贵的大分子配体，可解决传统大分子配体分离介质的生产成本、保存稳定性、掉肽链(leaking，大分子配体从微球介质上断链或形成碎片)等问题。美国专利(USPatent 5,652、348、5,719,269、7,144,743)描述了利用杂环配体与抗体的疏水相互作用进行吸附分离的新型分离介质及其制备方法，中国专利CN101284224描述了一种以巯基乙基吡啶和砜基为配基、以纤维素/无机增重剂复合微球为基质的分离抗体的扩张床吸附介质及制备方法，但存在介质生物相容性不够，且需要在碱性条件下操作、砜基易产生非特异性吸附等缺点。所有这些小分子配体存在一个更致命的问题：选择性比protein A或基因重组蛋白质大分子亲和配体低得多。因此，本发明除选择生物相容性更好的亲水凝胶微球作为介质的基质，主要是设计、制备选择性更好的小分子作为配体，更有效地实现抗体的分离纯化过程。
发明内容
本发明的目的是，针对目前用于抗体药物分离纯化的亲和分离介质的诸多问题，提出一种用于分离纯化抗体的介质及其制备方法。这一方法具有如下具体特征：
1、本发明所述的一种用于分离纯化抗体的介质及其制备方法，其特征在于将亲水性凝胶微球作为基质悬浮于均三嗪活化剂中制成活化基质，然后以偶联法对活化基质键合两个小分子配体；所述分离介质的组成结构为：
其中Matrix表示基质，R1，R2表示两个相同或不同的小分子配体。
2、本发明所述的所述的介质，其特征在于，构成所述介质的基质Matrix为亲水性凝胶微球，包括亲水性琼脂糖凝胶微球、亲水性葡聚糖凝胶微球、亲水性聚丙烯酰胺凝胶微球；但优选亲水性琼脂糖凝胶微球作为基质材料；基质的粒径为50-160微米，交联度为4-10％范围。
3、本发明所述的介质，其特征在于，构成所述介质的基质Matrix与均三嗪之间可以通过-O-(醚键)，-NH-，-S-(硫醚键)相连接。
4、本发明所述的介质，其特征在于，构成所述介质的基质Matrix与均三嗪之间还可以以包括但不限于下列一种加长的连接臂相连接：
-O-CH2-CH2-CH2-X-，其中X＝O，N，S
-O-CH2-CH(OH)-CH2-X-，其中X＝O，N，S
-O-CH2-CH2-O-CH2-CH2-X，其中X＝O，N，S。
5、本发明所述的介质，其特征在于，构成所述介质的小分子配体R1、R2包括但不限于含羟基、伯胺基或巯基的吡啶类衍生化合物，具体包括但不限于2-(2-羟基乙基)-吡啶，3-(2-羟基乙基)-吡啶，4-(2-羟基乙基)-吡啶(又名吡啶乙醇)，2-(2-巯基乙基)-吡啶，3-(2-巯基乙基)-吡啶，4-(2-巯基乙基)- 吡啶，2-(2-氨基乙基)-吡啶，3-(2-氨基乙基)-吡啶，4-(2-氨基乙基)-吡啶。
6、本发明所述的介质制备方法，其特征在于，所述制备介质所使用的均三嗪活化剂可以是其本身；亦可是通过均三嗪与环氧氯丙烷、二乙烯砜、羰基二咪唑等反应后串联环氧基、砜乙烯基等其它基团的均三嗪衍生物，使得活化基质具备更丰富的表面化学活性有机官能团。
本发明以均三嗪活化介质为基质，同时连接巯基乙基吡啶等两个功能小分子配体；这两个小分子配体协同作用于抗体片段Fc的两条链，提高了分离介质与抗体结合的选择性，实现对抗体的选择性以及pH可调性吸附特点，并以以亲和层析色谱或扩展床吸附法从血液、血清、血浆、血浆组分、腹水、细胞培养液、细胞均化液、奶液、初乳等生物原料中分离纯化抗体。此项双配体技术未见任何报道。
具体实施方式
以下通过实例对本发明作进一步描述：
实施例1：
按上述化学反应简式所示，首先使用均三嗪对琼脂糖凝胶微球进行活化。将10g均三嗪(sym-triazine，无色结晶，熔点86℃，沸点114℃，C A S4719-04-4)溶解于100ml二氯甲烷中，过滤，使用旋转蒸发器蒸去溶剂，将残余固体重新溶解在100ml丙酮中，在冰盐浴中冷至-5℃。取琼脂糖凝胶微球(交联度6％， 平均粒径90μm)10g加入50ml的NaOH溶液中，在室温下搅拌15分钟，过滤除去NaOH溶液。将凝胶重新悬于4℃冷的NaOH溶液中，并在冰盐浴中冷至0℃。向此溶液中加入20ml均三嗪/丙酮冷溶液，在冰浴上持续搅拌70分钟、室温下持续搅拌30分钟。过滤，用50ml醋酸水溶液(1∶1体积比)、250ml水依次各洗涤三遍，得到均三嗪活化琼脂糖凝胶微球。
实施例2：
将8.5体积的0.2M的K2HPO4溶液与1.5体积的0.2M的KH2PO4溶液混合，制成偶联缓冲液。取10g实例1中的均三嗪活化琼脂糖凝胶微球，悬于10ml偶联缓冲液中。后按10mg/ml的比例加入4-(2-氨基乙基)-吡啶作为抗体的小分子亲和配体。室温下持续搅拌(或震荡、摇晃)24小时。用偶联缓冲液洗涤至在293nm波长下五吸收峰为止。所得介质配体密度130μmol/ml。将其保存于含0.02％叠氮酸钠(w/v)的醋酸钠溶液(0.2M，pH5.4)中待用。
实施例3：
将8.5体积的0.2M的K2HPO4溶液与1.5体积的0.2M的KH2PO4溶液混合，制成偶联缓冲液。取10g实例1中的均三嗪活化琼脂糖凝胶微球，悬于10ml偶联缓冲液中。后按20mg/ml的比例加入4-(2-羟基乙基)-吡啶作为抗体的小分子亲和配体。室温下持续搅拌(或震荡、摇晃)24小时。用偶联缓冲液洗涤至在293nm波长下五吸收峰为止。所得介质配体密度150μmol/ml。将其保存于含0.02％叠氮酸钠(w/v)的醋酸钠溶液(0.2M，pH5.4)中待用。
实施例4：
将8.5体积的0.2M的K2HPO4溶液与1.5体积的0.2M的KH2PO4溶液混合，制成偶联缓冲液。取10g实例1中的均三嗪活化琼脂糖凝胶微球，悬于10ml偶联缓冲液中。后按20mg/ml的比例加入4-(2-巯基乙基)-吡啶作为抗体的小分 子亲和配体。室温下持续搅拌(或震荡、摇晃)24小时。用偶联缓冲液洗涤至在293nm波长下五吸收峰为止。所得介质配体密度150μmol/ml。将其保存于含0.02％叠氮酸钠(w/v)的醋酸钠溶液(0.2M，pH5.4)中待用。
Claims (7)
1.一种用于分离纯化抗体的介质及其制备方法，其特征在于将亲水性凝胶微球作为基质悬浮于均三嗪活化剂中制成活化基质，然后以偶联法对活化基质键合两个小分子配体；所述分离介质的组成结构为：
其中Matrix表示基质，R1，R2表示两个相同或不同的小分子配体。
2.根据权利要求1所述的介质，其特征在于，构成所述介质的基质Matrix为亲水性凝胶微球，包括亲水性琼脂糖凝胶微球、亲水性葡聚糖凝胶微球、亲水性聚丙烯酰胺凝胶微球；但优选亲水性琼脂糖凝胶微球作为基质材料；基质的粒径为50-160微米，交联度为4-10％范围。
3.本发明所述的介质，其特征在于，构成所述介质的基质Matrix与均三嗪之间可以通过-O-(醚键)，-NH-，-S-(硫醚键)相连接。
4.根据权利要求1所述的介质，其特征在于，构成所述介质的基质Matrix与均三嗪之间还可以以包括但不限于下列一种加长的连接臂相连接：
-O-CH2-CH2-CH2-X-，其中X＝O，N，S
-O-CH2-CH(OH)-CH2-X-，其中X＝O，N，S
-O-CH2-CH2-O-CH2-CH2-X，其中X＝O，N，S。
5.根据权利要求1所述的介质，其特征在于，构成所述介质的小分子配体R1、R2包括但不限于含羟基、伯胺基或巯基的吡啶类衍生化合物，具体包括但不限于2-(2-羟基乙基)-吡啶，3-(2-羟基乙基)-吡啶，4-(2-羟基乙基)-吡啶(又名吡啶乙醇)，2-(2-巯基乙基)-吡啶，3-(2-巯基乙基)-吡啶，4-(2-巯基乙基)-吡啶，2-(2-氨基乙基)-吡啶，3-(2-氨基乙基)-吡啶，4-(2-氨基乙基)-吡啶。
6.根据权利要求1所述的介质制备方法，其特征在于，所述制备介质所使用的均三嗪活化剂可以是其本身；亦可是通过均三嗪与环氧氯丙烷、二乙烯砜、羰基二咪唑等反应后串联环氧基、砜乙烯基等其它基团的均三嗪衍生物，使得活化基质具备更丰富的表面化学活性有机官能团。
7.根据权利要求1所述介质用于以亲和层析色谱和扩展床吸附法分离纯化抗体。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201210202165.8A CN103506079B (zh) | 2012-06-19 | 2012-06-19 | 一种用于分离纯化抗体的介质及其制备方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201210202165.8A CN103506079B (zh) | 2012-06-19 | 2012-06-19 | 一种用于分离纯化抗体的介质及其制备方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN103506079A true CN103506079A (zh) | 2014-01-15 |
| CN103506079B CN103506079B (zh) | 2016-04-06 |
Family
ID=49889817
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201210202165.8A Active CN103506079B (zh) | 2012-06-19 | 2012-06-19 | 一种用于分离纯化抗体的介质及其制备方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN103506079B (zh) |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104667974A (zh) * | 2015-02-12 | 2015-06-03 | 中国科学院福建物质结构研究所 | 一种多孔有机材料的制备及催化转化二氧化碳应用 |
| CN104707574A (zh) * | 2015-03-23 | 2015-06-17 | 济南大学 | 葡聚糖凝胶固载溴化1-丙基-3甲基咪唑吸附剂的制备 |
| CN107876017A (zh) * | 2017-12-06 | 2018-04-06 | 苏州博进生物技术有限公司 | 具有双功能基团的疏水性电荷诱导层析介质 |
| CN108176386A (zh) * | 2018-01-16 | 2018-06-19 | 武汉轻工大学 | 一种三聚氰胺键合色谱固定相及其制备方法和金属离子改性三聚氰胺键合色谱固定相 |
| CN111004337A (zh) * | 2018-12-14 | 2020-04-14 | 泰州医药城国科化物生物医药科技有限公司 | 一种快速羧甲基化高亲水性琼脂糖衍生物的制备方法及其应用 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1548224A (zh) * | 2003-05-21 | 2004-11-24 | 中国科学院化学研究所 | 以磺胺二甲嘧啶为配基的亲和色谱填料 |
| CN1926146A (zh) * | 2004-02-27 | 2007-03-07 | 通用电气健康护理生物科学股份公司 | 抗体纯化 |
-
2012
- 2012-06-19 CN CN201210202165.8A patent/CN103506079B/zh active Active
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1548224A (zh) * | 2003-05-21 | 2004-11-24 | 中国科学院化学研究所 | 以磺胺二甲嘧啶为配基的亲和色谱填料 |
| CN1926146A (zh) * | 2004-02-27 | 2007-03-07 | 通用电气健康护理生物科学股份公司 | 抗体纯化 |
Cited By (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104667974A (zh) * | 2015-02-12 | 2015-06-03 | 中国科学院福建物质结构研究所 | 一种多孔有机材料的制备及催化转化二氧化碳应用 |
| CN104707574A (zh) * | 2015-03-23 | 2015-06-17 | 济南大学 | 葡聚糖凝胶固载溴化1-丙基-3甲基咪唑吸附剂的制备 |
| CN104707574B (zh) * | 2015-03-23 | 2017-01-18 | 济南大学 | 葡聚糖凝胶固载溴化1‑丙基‑3甲基咪唑吸附剂的制备 |
| CN107876017A (zh) * | 2017-12-06 | 2018-04-06 | 苏州博进生物技术有限公司 | 具有双功能基团的疏水性电荷诱导层析介质 |
| CN107876017B (zh) * | 2017-12-06 | 2020-06-19 | 苏州博进生物技术有限公司 | 具有双功能基团的疏水性电荷诱导层析介质的制备方法 |
| CN108176386A (zh) * | 2018-01-16 | 2018-06-19 | 武汉轻工大学 | 一种三聚氰胺键合色谱固定相及其制备方法和金属离子改性三聚氰胺键合色谱固定相 |
| CN108176386B (zh) * | 2018-01-16 | 2020-11-06 | 武汉轻工大学 | 一种三聚氰胺键合色谱固定相及其制备方法和金属离子改性三聚氰胺键合色谱固定相 |
| CN111004337A (zh) * | 2018-12-14 | 2020-04-14 | 泰州医药城国科化物生物医药科技有限公司 | 一种快速羧甲基化高亲水性琼脂糖衍生物的制备方法及其应用 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN103506079B (zh) | 2016-04-06 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US20220266170A1 (en) | Chromatography medium | |
| JP4848356B2 (ja) | 抗体精製法 | |
| CN103506079B (zh) | 一种用于分离纯化抗体的介质及其制备方法 | |
| KR101149969B1 (ko) | 항체 정제 | |
| JP6397422B2 (ja) | マルチモーダルアニオン交換マトリックス | |
| US7488422B2 (en) | Method and apparatus for separating a target molecule from a liquid mixture | |
| CN106397552A (zh) | 一种去除重组蛋白a溶液中内毒素的方法 | |
| US8956535B2 (en) | Single pass method and apparatus for separating a target molecule from a liquid mixture | |
| CN110066314A (zh) | 一种高效提高多聚体分离分辨率的亲和纯化工艺 | |
| EP2910943B1 (en) | Cation exchange chromatography carrier for refining of antibodies and its use and method for separation of antibody monomers from aggregates thereof | |
| CA2645675A1 (en) | Adsorbents for protein purification | |
| Hao et al. | Rapid and high-capacity loading of IgG monoclonal antibodies by polymer brush and peptides functionalized microspheres | |
| Kadoi et al. | Fabrication and characterization of a cellulose monolith-like particle for virus purification | |
| CN103505908A (zh) | 一种利用混合模式层析介质连续分离纯化抗体的方法 | |
| JP7357599B2 (ja) | 細胞外小胞分離法、コロイド粒子とその調製方法 | |
| JP2012032203A (ja) | 抗体の糖鎖を調製する方法 | |
| CN103073616A (zh) | 使用混合模式层析技术去除抗体聚集体的方法 | |
| CN110339829A (zh) | 以氨基苯（磺）酰胺吡啶为功能配基的层析介质 | |
| CN104387499B (zh) | 一种利用免疫亲和技术提纯硫酸软骨素的方法 | |
| US8258270B2 (en) | Prevention of leaching of ligands from affinity-based purification systems | |
| CN116836245B (zh) | 一种基于特征算法控制合成的重组蛋白及其应用 | |
| CN102553537B (zh) | 一种双功能配基的壳聚糖基膨胀床吸附介质及其制备方法 | |
| CN101279244A (zh) | 一种疏水性电荷诱导型亲硫扩张吸附床介质及其制备方法 | |
| JPH03157396A (ja) | ペクチン酸―セルロースゲルによる蛋白質分離方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| DD01 | Delivery of document by public notice |
Addressee: Wang Zhiyou Document name: Notification of Passing Examination on Formalities |
|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| DD01 | Delivery of document by public notice | ||
| DD01 | Delivery of document by public notice |
Addressee: Wang Zhiyou Document name: payment instructions |
|
| DD01 | Delivery of document by public notice | ||
| DD01 | Delivery of document by public notice |
Addressee: Wang Zhiyou Document name: Notice of Termination of Patent Rights |