CN103479730B - 一种从鲜荷叶中同步分离荷叶黄酮和叶绿素的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种从鲜荷叶中同步分离荷叶黄酮和叶绿素的方法，包括如下步骤：a、将鲜荷叶和浓度90-95%乙醇加入提取罐中，于30-80℃提取2-4次，每次提取1-2小时，合并提取液；b、向提取液中加入石油醚，搅拌静置，得到萃取液层和萃余液层；c、将所述步骤b得到的萃取液进行减压浓缩，得到绿色油状液体；d、将步骤b得到的萃余液通过超滤膜超滤，得到通过超滤膜的浓缩液；e、将步骤d得到的浓缩液加入纯净水稀释，将稀释后的溶液过大孔吸附树脂柱，荷叶黄酮被吸附在大孔吸附树脂上，经洗脱、浓缩干燥得到荷叶黄酮。本发明的方法能够从鲜荷叶中同步分离荷叶黄酮和叶绿素，方法简单易行，生产成本低，适应工业化应用。
Description
技术领域
本发明涉及一种荷叶提取物的提取方法，特别是涉及一种从荷叶中同步分离荷叶黄酮和叶绿素的方法。
背景技术
荷叶为睡莲科植物莲的叶子，为药食两用植物叶。荷叶中含有黄酮、生物碱等活性物质。现代医学研究表明，荷叶黄酮具有抗氧化、抗衰老、清热、降血脂、降胆固醇以及治疗心脑血管疾病等功能。荷叶生物碱具有降脂减肥、抑菌、抗病毒的作用。荷叶中还含有多糖，多糖具有特殊的生物活性，是一种免疫调节剂，并且没有毒副作用，可以作为临床用药或疫苗。荷叶中的叶绿素作为一种天然色素可以广泛的应用于医药、食品、化妆品等行业。
现有技术中对荷叶中荷叶黄酮的提取大多采用干荷叶，需要对鲜荷叶进行干燥粉碎，不仅增加了提取过程的操作步骤，而且浪费了荷叶中富含的叶绿素。另外，现有的荷叶黄酮的提取方法中，主要采用水提法或有机溶剂浸提法从荷叶中提取荷叶黄酮后，辅助其他方法进行提纯分离，如柱层析法、薄层层析法、铅盐沉淀法等，但均存在不同的缺点而限制了工业化应用。目前的提取技术所得到的荷叶黄酮杂质含量高，导致荷叶黄酮含量较低，限制了荷叶黄酮的应用。
因此，急需开发一种荷叶的提取方法，能够对鲜荷叶进行深度综合利用，从鲜荷叶中同时分离出荷叶黄酮和叶绿素，提高荷叶黄酮的纯度，并且能够进一步从荷叶中分离得到荷叶生物碱和多糖。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种从鲜荷叶中同步分离荷叶黄酮和叶绿素的方法，该方法简单易行，生产成本低，适于工业化应用，并且该方法能够获得高纯度的荷叶黄酮，而且能够进一步提取荷叶生物碱和多糖，实现对荷叶的深度综合利用。
为解决上述技术问题，本发明提供了一种从鲜荷叶中同步分离荷叶黄酮和叶绿素的方法，包括如下步骤：
a、将重量比为1:8-25的鲜荷叶和质量浓度为90-95%的乙醇加入提取罐中，于30-80℃提取2-4次，每次提取1-2小时，合并提取液，鲜荷叶是指含水量大于70%（质量）的新鲜荷叶；
b、向步骤a得到的提取液中加入石油醚，提取液与石油醚的体积比为2-3:1，搅拌，静置，得到含有石油醚和叶绿素的萃取液层以及含有乙醇、荷叶黄酮、荷叶生物碱和多糖的萃余液层；
c、将所述步骤b得到的含有石油醚和叶绿素的萃取液在真空度不小于700mmHg下进行减压浓缩，得到绿色油状液体，真空度=大气压强-绝对压强，也即真空表的表压；
d、将步骤b得到的萃余液通过超滤膜超滤，除去杂质和蛋白质等大分子物质，得到通过超滤膜的浓缩液，超滤膜优选截留分子量为10000的超滤膜；
e、将步骤d得到的浓缩液加入纯净水稀释，优选，纯净水与浓缩液的质量比为90-100:1，将稀释后的溶液过大孔吸附树脂柱，荷叶黄酮被吸附在大孔吸附树脂上，经洗脱、浓缩干燥得到荷叶黄酮。大孔吸附树脂采用能够吸附荷叶黄酮的树脂即可，如AB-8、D101、D201等已知能吸附荷叶黄酮的树脂。发明人在研究过程中发现大孔吸附树脂XDA-6对荷叶黄酮具有优异的选择吸附性能，采用XDA-6大孔吸附树脂可以使分离得到的荷叶黄酮纯度达到98%以上，XDA-6可以通过市场购买获得，生产厂商如扬州制药厂、西安蓝晓科技有限公司等，XDA-6树脂的比表面积为600m2/g，平均孔径为（音译为“埃”，10的负10次方米，纳米的十分之一），偶极矩0.4，平均粒径500μm，均一系数（D90/D40）1.6。
上述从鲜荷叶中同步分离荷叶黄酮和叶绿素的方法，其中，所述步骤c中，将减压浓缩得到的绿色油状液体进行微波真空干燥，真空度不小于740mmHg，温度不高于60℃，干燥后得到叶绿素粉末，叶绿素的色价可以达到200以上，可以直接应用于食品、化妆品、医药等领域。
上述从鲜荷叶中同步分离荷叶黄酮和叶绿素的方法，其中，所述步骤e中，用质量浓度为70%的乙醇洗脱大孔吸附树脂柱上吸附的荷叶黄酮，将洗脱液通过100分子量的膜浓缩，得到被100分子量膜截留的浓缩液，浓缩液经喷雾干燥得到荷叶黄酮。采用100分子量膜对洗脱液进行浓缩，避免了加热浓缩方法中高温对荷叶黄酮活性的破坏，有效的保持了荷叶黄酮的活性。
上述从鲜荷叶中同步分离荷叶黄酮和叶绿素的方法，其中，该方法还包括步骤f，将从步骤e中通过大孔吸附树脂流出的流出液再经过另一大孔吸附树脂柱，以使荷叶生物碱被吸附在该大孔吸附树脂上。吸附荷叶生物碱的大孔吸附树脂采用带有酰胺基团的大孔吸附树脂，优选为D306，D306可以通过市场购买获得，如扬州制药厂生产的D306树脂，D306树脂的比表面积为800m2/g，平均孔径为（音译为"埃"，10的负10次方米，纳米的十分之一），偶极矩1.4，平均粒径700μm，均一系数（D90/D40）1.6。
上述从鲜荷叶中同步分离荷叶黄酮和叶绿素的方法，其中，所述步骤f中，用质量浓度为70%的乙醇洗脱大孔吸附树脂柱上吸附的荷叶生物碱，将洗脱液通过100分子量的膜浓缩，得到被100分子量膜截留的浓缩液，浓缩液经喷雾干燥得到荷叶生物碱。
上述从鲜荷叶中同步分离荷叶黄酮和叶绿素的方法，其中，所述步骤d中超滤膜采用截留分子量为10000的超滤膜，该方法还包括步骤g，将步骤f中经过大孔吸附树脂D306流出的流出液经纳滤膜或反渗透膜截留后，得到密度为1.12-1.18g/cm3的截留液体，向截留液体中加入质量浓度为95%乙醇使液体中乙醇质量浓度达到70%，搅拌，静置，得到多糖沉淀。纳滤膜可以采用截留分子量为100分子量纳滤膜或200分子量纳滤膜。纳滤膜和反渗透膜均可以市场购买获得，采用的反渗透膜也即RO膜，可以采用美国陶氏化学生产的RO膜。该方法中采用1万分子量的超滤膜将蛋白质、大分子多糖等大分子物质截留下来，含有荷叶黄酮、荷叶碱和多糖的物质通过超滤膜，经过两次树脂吸附，荷叶黄酮和荷叶碱分别被吸附在树脂柱上，含有多糖的吸附余液在纳滤膜或反渗透膜的作用下除去小分子物质，得到含有多糖的截留液体，该方法能够分离得到10000分子量以下的多糖。本发明的方法采用纳滤膜或反渗透膜分离多糖，尤其是将应用于水处理领域中的反渗透膜用于分离多糖，为荷叶多糖的分离提供了全新的方法，增加了获得荷叶多糖的途径，并且分离得到的多糖纯度和收率均可以达到90%以上。
本发明的从鲜荷叶中同步分离荷叶黄酮和叶绿素的方法，具有如下有益效果：
1、直接采用鲜荷叶进行提取分离操作，减少了现有技术中将鲜荷叶干燥成干荷叶再进行提取的工艺步骤，同时充分利用了鲜荷叶中的叶绿素，为天然叶绿素的提取提供了新途径，将叶绿素分离后再将提取液过大孔吸附树脂柱，避免了对柱子的污染，同时能够有效分离荷叶黄酮，提高荷叶黄酮的纯度和收率；
2、本发明的方法采用XDA-6大孔吸附树脂对荷叶黄酮进行分离，能够使分离得到的荷叶黄酮纯度达到98%以上；
3、本发明的方法分离提取得到的叶绿素色价可以达到200以上；
4、本发明的方法在分离荷叶黄酮和叶绿素时，能够进一步分离得到荷叶生物碱和多糖，实现了从荷叶中同时分离荷叶黄酮、叶绿素、荷叶生物碱和多糖，对荷叶进行了深度开发综合利用，提高了荷叶的附加值，并且分离得到荷叶黄酮、叶绿素、荷叶生物碱和多糖收率均可以达到90%以上；
5、本发明的方法采用纳滤膜分离多糖，尤其采用反渗透膜分离多糖，为从荷叶中分离多糖提供了新的分离途径，并且提高了多糖的纯度，使分离后的多糖纯度可以达到90%以上。
具体实施方式
下面结合实施例详细描述本发明。
实施例1
将鲜荷叶粉碎，在提取罐中加入1重量份的鲜荷叶和15重量份质量浓度为90%的乙醇，于50℃提取3次，每次提取1.5小时，合并提取液，向提取液中加入石油醚，提取液与加入的石油醚的体积比为3:1，搅拌，静置，得到含有石油醚和叶绿素的萃取液层以及含有乙醇、荷叶黄酮、荷叶生物碱和多糖的萃余液层。
将含有石油醚和叶绿素的萃取液在真空度700mmHg下进行减压浓缩，得到绿色油状液体，将绿色油状液体进行微波真空干燥，真空度为740mmhg，温度为60℃，经微波真空干燥得到叶绿素粉末，所得叶绿素的色价达240，收率可达91%（收率=喷雾干燥所得到的叶绿素质量/鲜荷叶中所含叶绿素的质量）。
将含有乙醇、荷叶黄酮、荷叶生物碱和多糖的萃余液通过十万分子量超滤膜膜超滤，得到通过超滤膜的浓缩液，向浓缩液中加入纯净水稀释，纯净水与浓缩液的质量比为99:1，将稀释后的溶液过第一大孔吸附树脂柱，第一大孔吸附树脂柱采用XDA-6大孔吸附树脂，荷叶黄酮被吸附在第一大孔吸附树脂柱上，用质量浓度为70%的乙醇洗脱第一大孔吸附树脂柱上吸附的荷叶黄酮，将洗脱液通过100分子量的膜浓缩，得到被100分子量膜截留的浓缩液，浓缩液经喷雾干燥得到荷叶黄酮粉末。荷叶黄酮纯度即质量含量达到98.47%，收率可达93%（收率=喷雾干燥所得到的荷叶黄酮质量/鲜荷叶中所含黄酮的质量）。
将从第一大孔吸附树脂柱流出的流出液经过第二大孔吸附树脂柱，第二大孔吸附树脂柱采用D306大孔吸附树脂，使荷叶生物碱被吸附在第二大孔吸附树脂柱上。用质量浓度为70%的乙醇洗脱第二大孔吸附树脂柱上吸附的荷叶生物碱，将洗脱液通过100分子量的膜浓缩，得到被100分子量膜截留的浓缩液，浓缩液经喷雾干燥得到荷叶生物碱粉末。荷叶生物碱纯度即质量含量达到84.2%，收率可达92%（收率=喷雾干燥所得到的荷叶生物碱质量/鲜荷叶中所含荷叶生物碱的质量）。
实施例2
将鲜荷叶粉碎，在提取罐中加入1重量份的鲜荷叶和8重量份质量浓度为95%的乙醇，于80℃提取4次，每次提取2小时，合并提取液，向提取液中加入石油醚，提取液与加入的石油醚的体积比为2:1，搅拌，静置，得到含有石油醚和叶绿素的萃取液层以及含有乙醇、荷叶黄酮、荷叶生物碱和多糖的萃余液层。
将含有石油醚和叶绿素的萃取液在真空度750mmHg下进行减压浓缩，得到绿色油状液体，将绿色油状液体进行微波真空干燥，真空度为760mmhg，温度为55℃，经微波真空干燥得到叶绿素粉末，所得叶绿素的色价达260，收率可达92%（收率=喷雾干燥所得到的叶绿素质量/鲜荷叶中所含叶绿素的质量）。
将含有乙醇、荷叶黄酮、荷叶生物碱和多糖的萃余液通过10000分子量的超滤膜超滤，得到通过超滤膜的浓缩液，向浓缩液中加入纯净水稀释，纯净水与浓缩液的质量比为100:1，将稀释后的溶液过第一大孔吸附树脂柱，第一大孔吸附树脂柱采用XDA-6大孔吸附树脂，荷叶黄酮被吸附在第一大孔吸附树脂柱上，用质量浓度为70%的乙醇洗脱第一大孔吸附树脂柱上吸附的荷叶黄酮，将洗脱液通过100分子量的膜浓缩，得到被100分子量膜截留的浓缩液，浓缩液经喷雾干燥得到荷叶黄酮粉末。荷叶黄酮纯度即质量含量达到98.15%，收率可达92%（收率=喷雾干燥所得到的荷叶黄酮质量/鲜荷叶中所含黄酮的质量）。
将从第一大孔吸附树脂柱流出的流出液经过第二大孔吸附树脂柱，第二大孔吸附树脂柱采用D306大孔吸附树脂，使荷叶生物碱被吸附在第二大孔吸附树脂柱上。用质量浓度为70%的乙醇洗脱第二大孔吸附树脂柱上吸附的荷叶生物碱，将洗脱液通过100分子量的膜浓缩，得到被100分子量膜截留的浓缩液，浓缩液经喷雾干燥得到荷叶生物碱粉末。荷叶生物碱纯度即质量含量达到83.6%，收率可达91.5%（收率=喷雾干燥所得到的荷叶生物碱质量/鲜荷叶中所含荷叶生物碱的质量）。
将从第二大孔吸附树脂柱流出的流出液经100分子量纳滤膜截留，除去小分子物质，得到被100分子量纳滤膜截留的密度为1.12g/cm3的截留液体，向截留后的液体中加入质量浓度为95%乙醇使液体中乙醇质量浓度达到70%，搅拌，静置，得到多糖沉淀，过滤干燥得到多糖。多糖纯度即质量含量达到91.7%，收率达到91%（收率=过滤干燥所得到的多糖质量/鲜荷叶中所含多糖质量）。
实施例3
将鲜荷叶粉碎，在提取罐中加入1重量份的鲜荷叶和25重量份质量浓度为90%的乙醇，，于80℃提取2次，每次提取1小时，合并提取液，向提取液中加入石油醚，提取液与加入的石油醚的体积比为3:1，搅拌，静置，得到含有石油醚和叶绿素的萃取液层以及含有乙醇、荷叶黄酮、荷叶生物碱和多糖的萃余液层。
将含有石油醚和叶绿素的萃取液在真空度800mmHg下进行减压浓缩，得到绿色油状液体，将绿色油状液体进行微波真空干燥，真空度为800mmhg，温度为50℃，经微波真空干燥得到叶绿素粉末，所得叶绿素的色价达210，收率可达90.7%（收率=喷雾干燥所得到的叶绿素质量/鲜荷叶中所含叶绿素的质量）。
将含有乙醇、荷叶黄酮、荷叶生物碱和多糖的萃余液通过一万分子量超滤膜超滤，得到通过超滤膜的浓缩液，向浓缩液中加入纯净水稀释，纯净水与浓缩液的质量比为90:1，将稀释后的溶液过第一大孔吸附树脂柱，第一大孔吸附树脂柱采用XDA-6大孔吸附树脂，荷叶黄酮被吸附在第一大孔吸附树脂柱上，用质量浓度为70%的乙醇洗脱第一大孔吸附树脂柱上吸附的荷叶黄酮，将洗脱液通过100分子量的膜浓缩，得到被100分子量膜截留的浓缩液，浓缩液经喷雾干燥得到荷叶黄酮粉末。荷叶黄酮纯度即质量含量达到98.32%，收率可达93.5%（收率=喷雾干燥所得到的荷叶黄酮质量/鲜荷叶中所含黄酮的质量）。
将从第一大孔吸附树脂柱流出的流出液经过第二大孔吸附树脂柱，第二大孔吸附树脂柱采用D306大孔吸附树脂，使荷叶生物碱被吸附在第二大孔吸附树脂柱上。用质量浓度为70%的乙醇洗脱第二大孔吸附树脂柱上吸附的荷叶生物碱，将洗脱液通过100分子量的膜浓缩，得到被100分子量膜截留的浓缩液，浓缩液经喷雾干燥得到荷叶生物碱粉末。荷叶生物碱纯度即质量含量达到83.9%，收率可达92.3%（收率=喷雾干燥所得到的荷叶生物碱质量/鲜荷叶中所含荷叶生物碱的质量）。
将从第二大孔吸附树脂柱流出的流出液经反渗透膜截留，除去小分子物质，得到被反渗透膜截留的密度为1.15g/cm3的截留液体，向截留后的液体中加入质量浓度为95%乙醇使液体中乙醇质量浓度达到70%，搅拌，静置，得到多糖沉淀，过滤干燥得到多糖。多糖纯度即质量含量达到93.1%，收率达到92.6%（收率=过滤干燥所得到的多糖质量/鲜荷叶中所含多糖质量）。
本实施例中，经过超滤膜浓缩并经稀释的液体中含有荷叶黄酮、荷叶生物碱和多糖，将稀释液通过大孔吸附树脂XDA-6除去荷叶黄酮，之后流经大孔吸附树脂D306除去荷叶生物碱，由于该两种树脂对荷叶黄酮和荷叶生物碱的高选择性，使多糖基本不被二种树脂吸附，大大提高了多糖的收率。发明人在实验过程中发现，虽然两种树脂在处理只含有多糖的溶液时能够吸附多糖，但大孔吸附树脂XDA-6在处理含有多糖和荷叶黄酮的溶液时，以及大孔吸附树脂D306在处理含有多糖和荷叶生物碱的溶液时，表现出优异的选择性，两种树脂在这种情况下仅吸附微量的多糖，参见表1和表2中实验数据。
表1
注：实验中溶液流过XDA-6大孔吸附树脂柱的速率为2倍柱体积/小时。
表2
注：实验中溶液流过D306大孔吸附树脂柱的速率为2倍柱体积/小时。
对比例1-2
实施例1中，分别采用质量浓度为80%和70%的乙醇对鲜荷叶进行提取，其他与实施例1的方法相同，所得到的叶绿素收率为分别为73%和59%，见表3。
表3
| 实施例1 | 对比例1 | 对比例2 | |
| 乙醇浓度 | 90% | 80% | 70% |
| 叶绿素收率 | 91% | 73% | 59% |
注：表中乙醇浓度指对鲜荷叶提取时所采用乙醇的质量浓度。
通过表3中对比可知，采用高浓度乙醇能够有效的将鲜荷叶中的叶绿素提取出来，显著提高了叶绿素的收率。本发明采用高浓度乙醇对鲜荷叶进行提取，在有效分离叶绿素和荷叶黄酮的同时，使叶绿素的收率达到90%以上，为天然叶绿素提取提供了新途径。
对比例3-4
实施例1中，将含有石油醚和叶绿素的萃取液分别在相对真空度400mmHg和500mmHg下进行减压浓缩，其他与实施例1的方法相同，所得到的叶绿素的色价分别为80和95，见表4。
表4
| 实施例1 | 对比例3 | 对比例4 | |
| 真空度 | 700mmHg | 500mmHg | 400mmHg |
| 叶绿素色价 | 240 | 95 | 80 |
通过表4中对比可知，在对石油醚和叶绿素的浓缩分离过程中，所采用的真空度对最终叶绿素的色价影响很大，真空度较低也即绝对压力较高时会使减压浓缩时石油醚的沸点较高，使叶绿素分解，严重影响叶绿素的质量，甚至无法分离得到叶绿素。本发明采用了减压浓缩时真空度大于700mmHg，显著提高了叶绿素的色价，使从鲜荷叶中分离提取得到的天然叶绿素能够直接应用。
对比例5-7
实施例3中，第一大孔吸附树脂柱分别采用AB-8、D101和D201对荷叶黄酮进行吸附，其他与实施例1的方法相同，实验结果见表5。
表5
| 实施例3 | 对比例5 | 对比例6 | 对比例7 | |
| 第一大孔吸附树脂柱 | XDA-6 | AB-8 | D101 | D201 |
| 荷叶黄酮质量含量 | 98.32% | 83.1% | 61% | 64% |
| 荷叶黄酮收率 | 93.5% | 76.7% | 52% | 57% |
| 荷叶生物碱质量含量 | 83.9% | 74.2% | 57% | 59% |
| 荷叶生物碱收率 | 92.3% | 71.3% | 48% | 51% |
| 多糖质量含量 | 93.1% | 77.6% | 67.8 | 62.5% |
| 多糖收率 | 92.6 | 75.3% | 70.1 | 55.8% |
通过表5中对比可知，大孔吸附树脂XDA-6对荷叶黄酮具有极好地选择性吸附能力，可以使分离得到的荷叶黄酮纯度达到98%以上，由于大孔吸附树脂XDA-6能够将大部分荷叶黄酮吸附，并且不吸附荷叶生物碱，因此相应地也提高了后续分离得到的荷叶生物碱的纯度以及收率。大孔吸附树脂XDA-6虽然能够吸附多糖，但在吸附含有荷叶黄酮和多糖的溶液时，具有高选择性，基本不吸附多糖，参见表1。
本发明采用具有高选择性的大孔吸附树脂XDA-6对荷叶黄酮进行吸附，得到了纯度可以达到98%以上的荷叶黄酮，使分离得到的荷叶黄酮能够直接应用于医药领域。
对比例8-10
实施例1中，向经过超滤得到的浓缩液中加入不同比例的纯净水稀释，其他与实施1的方法相同，实验结果见表6。
表6
| 实施例1 | 对比例8 | 对比例9 | 对比例10 | |
| 纯净水：浓缩液（质量比） | 99：1 | 60：1 | 20：1 | 120：1 |
| 荷叶黄酮质量含量 | 98.47% | 98.26% | 98.41% | 98.35% |
| 荷叶黄酮收率 | 93% | 81% | 42% | 93.3% |
通过表6中的对比数据可知，向含有荷叶黄酮和荷叶生物碱的浓缩液中加入纯净水稀释，稀释后的溶液浓度对最终制得的荷叶黄酮的纯度影响不大，但对荷叶黄酮的最终收率具有显著影响，加入纯净水过少即浓缩液稀释后的浓度太高将会影响大孔吸附树脂对荷叶黄酮的吸附效果，从而降低了荷叶黄酮的最终收率，本发明通过实验优选采用加入的纯净水与浓缩液的质量比为90-100：1。
对比例11
实施例1中，采用质量浓度为50%的乙醇对第一大孔吸附树脂柱上的荷叶黄酮和第二大孔吸附树脂柱上的荷叶生物碱进行洗脱，其他与实施例1的方法相同，所得到的荷叶黄酮质量含量为98.34，收率为72%，所得到的荷叶生物碱质量含量为83.8%，收率为69%。可见，采用低浓度的乙醇会使吸附在树脂柱上的荷叶黄酮和荷叶生物碱洗脱不够充分，降低了收率，本发明采用质量浓度为70%的乙醇对荷叶黄酮和荷叶生物碱进行洗脱，显著提高了荷叶黄酮和荷叶生物碱的收率，均可以达到90%以上。
Claims (10)
1.一种从鲜荷叶中同步分离荷叶黄酮和叶绿素的方法，包括如下步骤：
a、将重量比为1:8-25的鲜荷叶和质量浓度为90-95%的乙醇加入提取罐中，于30-80℃提取2-4次，每次提取1-2小时，合并提取液；
b、向步骤a得到的提取液中加入石油醚，提取液与石油醚的体积比为2-3:1，搅拌，静置，得到含有石油醚和叶绿素的萃取液层以及含有乙醇、荷叶黄酮、荷叶生物碱和多糖的萃余液层；
c、将所述步骤b得到的含有石油醚和叶绿素的萃取液在真空度不小于700mmHg下进行减压浓缩，得到绿色油状液体；
d、将步骤b得到的萃余液通过超滤膜超滤，得到通过超滤膜的浓缩液；
e、将步骤d得到的浓缩液加入纯净水稀释，将稀释后的溶液过大孔吸附树脂柱，荷叶黄酮被吸附在大孔吸附树脂上，经洗脱、浓缩干燥得到荷叶黄酮。
2.如权利要求1所述的从鲜荷叶中同步分离荷叶黄酮和叶绿素的方法，其中，所述步骤c中，将减压浓缩得到的绿色油状液体进行微波真空干燥得到叶绿素粉末，真空度不小于740mmHg。
3.如权利要求1所述的从鲜荷叶中同步分离荷叶黄酮和叶绿素的方法，其中，所述步骤e中吸附荷叶黄酮的大孔吸附树脂为XDA-6。
4.如权利要求1或3所述的从鲜荷叶中同步分离荷叶黄酮和叶绿素的方法，其中，所述步骤e中，加入的纯净水与浓缩液的质量比为90-100:1。
5.如权利要求1或3所述的从鲜荷叶中同步分离荷叶黄酮和叶绿素的方法，其中，所述步骤e中，用质量浓度为70%的乙醇洗脱大孔吸附树脂柱上吸附的荷叶黄酮，将洗脱液通过100分子量的膜浓缩，浓缩液经喷雾干燥得到荷叶黄酮。
6.如权利要求3所述的从鲜荷叶中同步分离荷叶黄酮和叶绿素的方法，其中，该方法还包括步骤f，将从步骤e中通过大孔吸附树脂流出的流出液再经过另一大孔吸附树脂柱，以使荷叶生物碱被吸附在该大孔吸附树脂上，该大孔吸附树脂为带有酰胺基团的大孔吸附树脂。
7.如权利要求6所述的从鲜荷叶中同步分离荷叶黄酮和叶绿素的方法，其中，所述步骤f中，用质量浓度为70%的乙醇洗脱大孔吸附树脂柱上吸附的荷叶生物碱，将洗脱液通过100分子量的膜浓缩，浓缩液经喷雾干燥得到荷叶生物碱。
8.如权利要求6所述的从鲜荷叶中同步分离荷叶黄酮和叶绿素的方法，其中，所述步骤f中吸附荷叶生物碱的大孔吸附树脂为D306。
9.如权利要求8所述的从鲜荷叶中同步分离荷叶黄酮和叶绿素的方法，其中，所述步骤d中超滤膜采用截留分子量为10000的超滤膜，该方法还包括步骤g，将步骤f中经过大孔吸附树脂D306流出的流出液经纳滤膜或反渗透膜截留后，得到密度为1.12-1.18g/cm3的截留液体，向截留液体中加入质量浓度为95%乙醇使液体中乙醇质量浓度达到70%，搅拌，静置，得到多糖沉淀。
10.如权利要求9所述的从鲜荷叶中同步分离荷叶黄酮和叶绿素的方法，其中，所述步骤g中，所述纳滤膜为100分子量纳滤膜或200分子量纳滤膜。
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Effective date of registration: 20150728 Address after: 225800, crystal Road No. 7, Xi'an industrial center, Baoying County, Yangzhou, Jiangsu, Fengzhen Patentee after: JIANGSU BAOLIAN BIOTECHNOLOGY CO.,LTD. Address before: 225000, Jiangsu Province, Baoying County, Yangzhou, Xi'an Fengzhen Tian Ting Village House No. 10 Patentee before: Zhou Aiqin Patentee before: JIANGSU BAOLIAN BIOTECHNOLOGY CO.,LTD. |
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| PP01 | Preservation of patent right | ||
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Effective date of registration: 20170228 Granted publication date: 20141126 |
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| PD01 | Discharge of preservation of patent | ||
| PD01 | Discharge of preservation of patent |
Date of cancellation: 20170828 Granted publication date: 20141126 |
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| CP03 | Change of name, title or address | ||
| CP03 | Change of name, title or address |
Address after: 850000 building 1501, building A, building A, headquarters, Lhasa, Tibet economic and Technological Development Zone, Lhasa economic and Technological Development Zone Patentee after: BIOLOTUS Inc. Address before: 225800, crystal Road No. 7, Xi'an industrial center, Baoying County, Yangzhou, Jiangsu, Fengzhen Patentee before: JIANGSU BAOLIAN BIOTECHNOLOGY CO.,LTD. |
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Effective date of registration: 20190628 Address after: 225800 No. 1 Anfeng Avenue, Xianfeng Town Industrial Concentration Zone, Baoying County, Yangzhou City, Jiangsu Province Patentee after: Jiangsu Kelexin Biological Co.,Ltd. Address before: 850000 Room 1501, Building A, Building 5, Headquarters Economic Base Building, No. 5 Gesang Road, Lhasa Economic and Technological Development Zone, Tibet Autonomous Region Patentee before: BIOLOTUS Inc. |
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Effective date of registration: 20240105 Address after: 225000 No. 7, crystal Avenue, Xi'an Fengzhen industrial concentration zone, Baoying County, Yangzhou City, Jiangsu Province Patentee after: JIANGSU STEVEN BIOTECHNOLOGY Co.,Ltd. Address before: 225800 No. 1 Anfeng Avenue, Xianfeng Town Industrial Concentration Zone, Baoying County, Yangzhou City, Jiangsu Province Patentee before: Jiangsu Kelexin Biological Co.,Ltd. |