CN103463623A

CN103463623A - 一种聚乙二醇干扰素注射液及其制备方法

Info

Publication number: CN103463623A
Application number: CN2013103941568A
Authority: CN
Inventors: 刘芃实; 贺永山; 卡特琳娜·阿尔瓦斯; 杨春雨; 徐福平
Original assignee: CHANGCHUN HAIBOER BIO-TECHNOLOGY Co Ltd
Current assignee: CHANGCHUN HAIBOER BIO-TECHNOLOGY Co Ltd
Priority date: 2013-09-03
Filing date: 2013-09-03
Publication date: 2013-12-25
Anticipated expiration: 2033-09-03
Also published as: CN103463623B

Abstract

本发明公开了一种聚乙二醇干扰素注射液及其制备方法，其包括聚乙二醇干扰素与辅料，其特征在于，所述辅料中的稳定剂为吐温80与乙二胺四乙酸二钠，所述聚乙二醇干扰素为聚乙二醇干扰素α1b、聚乙二醇干扰素α2a与聚乙二醇干扰素α2b中的任一种，所述聚乙二醇干扰素的原液纯度≥95%。采用吐温80和乙二胺四乙酸二钠这一特定组合做为蛋白稳定剂，不仅有效避免了使用人血白蛋白做稳定剂所带来的风险，可以达到同样的稳定效果，相对于吐温80和苯甲醇的稳定剂系统更为安全稳定，提高了注射液的安全性与稳定性，还可以对成品进行蛋白纯度及含量的检控。使产品质量有了真正的保障，此工艺简单，原辅料来源方便，降低了聚乙二醇干扰素注射液的制造成本。

Description

一种聚乙二醇干扰素注射液及其制备方法

技术领域

本发明涉及生物制药领域，尤其涉及一种聚乙二醇干扰素注射液及其制备方法。

背景技术

干扰素是目前应用广泛且临床效果显著的治疗性药物，具有广谱抗病毒、抗肿瘤及免疫调节功能，是病毒性疾病治疗中有不可取代的药物，但普通干扰素治疗具有自身不可克服的缺点，半衰期短，其血清浓度在注射24小时后已经很低。而给药方案是每周注射３次，这就导致了较大的血药浓度波动。近年来，聚乙二醇化技术有效地解决蛋白质药物的此类缺陷。聚乙二醇干扰素系将干扰素与聚乙二醇共价结合在一起，以改善干扰素的生物活性。聚乙二醇化干扰素分子量大大增加，使血药浓度维持或接近于目标浓度的时间延长。注射后可维持血清峰浓度72小时-96小时，维持治疗浓度168小时。意味着每周１次给药可以维持有效的抗病毒效应。目前聚乙二醇干扰素是治疗慢性乙型肝炎或慢性丙型肝炎的首选治疗药物，可以有效地抑制或清除病毒，疗效持久，阻止肝硬化或肝癌的发生。

目前，市场上聚乙二醇干扰素制剂形式有二种，即冻干制剂和液体制剂，液体制剂因使用方便，成本低越来越被人们认可，但做为注射液，其稳定剂比冻干制剂有更高的要求，其要求是保护蛋白在水溶液状态保持长期稳定，通常选用人血白蛋白做为稳定剂，但人血白蛋白价格昂贵，且有感染血液疾病的潜在风险。无蛋白成分稳定剂应用越来越广泛，现有技术中存在以苯甲醇吐温80系统为稳定剂成分，但苯甲醇在高温或光照下易氧化，并很容易导致蛋白质分子改变，影响药物稳定性。而且经临床报告，苯甲醇具有引起小儿肌肉臀肌挛缩症的风险性，增加患者给药的风险。

因此，现有技术还有待于更进一步的改进和发展。

发明内容

鉴于上述现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种聚乙二醇干扰素注射液及其制备方法，以提高注射液的安全性与稳定性，提高对注射液品质的检控。

本发明的技术方案如下：

一种聚乙二醇干扰素注射液，其包括聚乙二醇干扰素与辅料，其中，所述辅料中的稳定剂为吐温80与乙二胺四乙酸二钠，所述聚乙二醇干扰素为聚乙二醇干扰素α1b、聚乙二醇干扰素α2a与聚乙二醇干扰素α2b中的任一种，所述聚乙二醇干扰素的原液纯度≥95%。

所述的聚乙二醇干扰素注射液，其中，所述聚乙二醇干扰素的含量为180μg/ml，所述吐温80的含量为0.1-0.3mg/ml。乙二胺四乙酸二钠的含量为1-2mg/ml；聚乙二醇干扰素注射液中还包括磷酸盐缓冲液，所述磷酸盐缓冲液的含量为0.1M-0.3M，分装规格为0.25-1.0 ml/支。

一种聚乙二醇干扰素注射液的制备方法，其包括以下步骤：

配制稀释液，在121℃条件下进行30分钟湿热灭菌，并冷却至2℃-8℃；将聚乙二醇干扰素的原液，吐温80、乙二胺四乙酸二钠加入所述稀释液中混合得到混合溶液，将所述混合溶液通过0．2μm微孔滤膜过滤，分装0.25-1.0ml/支不同规格，得到所述聚乙二醇干扰素注射液。

所述的制备方法，其中，所述聚乙二醇干扰素的含量为180μg/ml，

所述吐温80的含量为0.1-0.3mg/ml。乙二胺四乙酸二钠的含量为1-2mg/ml；所述稀释液的成分为磷酸盐缓冲液，含量为0.1M-0.3M。

所述的制备方法，其中，所述聚乙二醇干扰素为聚乙二醇干扰素α1b、聚乙二醇干扰素α2a与聚乙二醇干扰素α2b中的任一种，所述聚乙二醇干扰素的原液纯度≥95%。

所述的制备方法，其中，稳定剂为吐温80与乙二胺四乙酸二钠，乙二胺四乙酸二钠为一种螯合剂，经常用作蛋白质稳定剂，因为它具有很强的螯合作用，可以与溶液中痕迹量的金属离子结合，而这些金属离子可能会以不同的方式促进蛋白发生改变。加入EDTA后，这些痕量的金属离子被络合，从而稳定了蛋白质。

其中所述的吐温80为聚山梨醇的单油酸酯，是一种非离子型的表面活性剂，它加入到溶液中后，可以降低蛋白质溶液的表面张力，从而降低由于疏水作用而导致的蛋白质聚集。

本发明提供的一种聚乙二醇干扰素注射液及其制备方法，采用吐温80和乙二胺四乙酸二钠这一特定组合做为蛋白稳定剂，不仅有效避免了使用人血白蛋白做稳定剂所带来的风险，可以达到同样的稳定效果，相对于吐温80和苯甲醇的稳定剂系统更为安全稳定，本配方中不含主药外的任何蛋白质成分，可以对成品进行蛋白纯度及含量的检控，提高了注射液的安全性与稳定性，并且本发明工艺简单，原辅料来源方便，降低了聚乙二醇干扰素注射液的制造成本。

附图说明

图1为本发明中聚乙二醇干扰素注射液制备方法的流程示意图；

图2为本发明与现有技术中聚乙二醇干扰素注射液的SDS-PAGE检测对比示意图，其中，第1-6道分别是：分子量标准与实施例1、实施例2、实施例3、实施例4及PEG IFN的对照；

图3为本发明与现有技术中聚乙二醇干扰素注射液加速稳定性试验的ELISA检测对比示意图；

图4为0天， 3天， 7天与15天的样品ELISA法检测结果；

图5为为0天， 3天， 7天与15天的样品SDS-PAGE电泳纯度检测结果。

具体实施方式

本发明提供了一种聚乙二醇干扰素注射液及其制备方法，为使本发明的目的、技术方案及效果更加清楚、明确，以下对本发明进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

本发明提供了一种聚乙二醇干扰素注射液，其包括聚乙二醇干扰素与辅料，并且所述辅料中的稳定剂为吐温80与乙二胺四乙酸二钠，所述聚乙二醇干扰素为聚乙二醇干扰素α1b、聚乙二醇干扰素α2a与聚乙二醇干扰素α2b中的任一种，所述聚乙二醇干扰素的原液纯度≥95%。

在本发明的另一较佳实施例中，所述聚乙二醇干扰素的含量为180μg/ml，所述吐温80的含量为0.1-0.3mg/ml。乙二胺四乙酸二钠的含量为1-2mg/ml；聚乙二醇干扰素注射液中还包括磷酸盐缓冲液，所述磷酸盐缓冲液的含量为0.1M-0.3M，分装规格为0.25-1.0 ml/支。

本发明还提供了一种聚乙二醇干扰素注射液的制备方法，如图1所示的，其包括以下步骤：

步骤101：配制稀释液，在121℃条件下进行30分钟湿热灭菌，并冷却至2℃-8℃；

步骤102：将聚乙二醇干扰素的原液、吐温80与乙二胺四乙酸二钠加入所述稀释液中混合得到混合溶液；

步骤103：将所述混合溶液通过0．2μm微孔滤膜过滤，分装0.25-1.0 ml/支不同规格，得到所述聚乙二醇干扰素注射液。

在本发明的另一较佳实施例中，所述聚乙二醇干扰素的含量为180μg/ml，所述吐温80的含量为0.1-0.3mg/ml。乙二胺四乙酸二钠的含量为1-2mg/ml；聚乙二醇干扰素注射液中还包括磷酸盐缓冲液，所述磷酸盐缓冲液的含量为0.1M-0.3M。

更进一步的，其中，所述聚乙二醇干扰素为聚乙二醇干扰素α1b、聚乙二醇干扰素α2a与聚乙二醇干扰素α2b中的任一种，所述聚乙二醇干扰素的原液纯度≥95%。

为了更进一步描述本发明，以下列举更详尽的实施例进行说明。

实施例1

聚乙二醇干扰素α2b注射液的组分为：聚乙二醇干扰素α2b 180mg，吐温80 100mg，乙二胺四乙酸二钠 1g，磷酸氢二钠12.68g、磷酸二氢钠 3.43g、氯化钠4.89 g，注射用水适量，上述组分的总体积为1000ml。

聚乙二醇干扰素注射液制备方法包括以下步骤：

称取磷酸氢二钠12.68g、磷酸二氢钠3.43g、氯化钠 4.89 g，用适量注射用水溶解，加入上述溶液中，定容至规定体积，其pH值在6.5-7.5.之间，然后在121℃条件下进行30分钟湿热灭菌，并冷却至2℃-8℃，得到稀释液；

配制1%吐温的80溶液：称量吐温80 100mg，加入适量注射用水，搅拌直至溶液混合均匀；

取上述处方中聚乙二醇干扰素α2b、乙二胺四乙酸二钠及上述1%吐温的80溶液加入所述稀释液内，然后定容到1000ml，混合均匀，得到混合溶液；

用0．2μm微孔滤膜对所述混合溶液过滤；得到所述聚乙二醇干扰素注射液半成品；分装2ml西林瓶，每支西林瓶中为1ml，为所述聚乙二醇干扰素注射液。

实施例2

聚乙二醇干扰素α2b注射液的组分为：聚乙二醇干扰素α2b 180mg，吐温80 200mg，乙二胺四乙酸二钠 1g，磷酸氢二钠12.68g、磷酸二氢钠 3.43g、氯化钠4.89 g，注射用水适量，上述组分的总体积为1000ml。

聚乙二醇干扰素注射液制备方法包括以下步骤：

配制1%吐温的80溶液：称量吐温80 200mg，加入适量注射用水，搅拌直至溶液混合均匀；

实施例3

聚乙二醇干扰素α2b注射液的组分为：聚乙二醇干扰素α2b 180mg，吐温80 200mg，乙二胺四乙酸二钠 2g，磷酸氢二钠12.68g、磷酸二氢钠 3.43g、氯化钠4.89 g，注射用水适量，上述组分的总体积为1000ml。

聚乙二醇干扰素注射液制备方法包括以下步骤：

为了更进一步凸显本发明的先进性，以下列举部分现有技术中的聚乙二醇干扰素注射液及其制备方法，进行对比。

实施例4

现有技术中聚乙二醇干扰素α2b注射液的组分为：聚乙二醇干扰素α2b 180mg，吐温80 0.05mg/mL，苯甲醇10mg/ml，乙酸钠2.62mg/ml，乙酸0.05mg/ml 注射用水适量，调pH6.0±0.2，上述组分的总体积为1000ml。

现有技术中聚乙二醇干扰素注射液的制备方法，其包括以下步骤：

配制乙酸钠缓冲溶液；称取乙酸钠2.62g，以适量乙酸调节pH6.0±0.2然后在121℃条件下进行30分钟湿热灭菌，冷却至2-8℃，得到灭菌的乙酸钠缓冲溶液；,

称取吐温80 0.05g，苯甲醇10g，加入上述乙酸钠缓冲溶液中混合均匀；

然后再称取上述处方中聚乙二醇干扰素α2b加入上述溶液中混合均匀，得到混合液；

最后用0．22μm微孔滤膜过滤所述混合液，得到现有技术中聚乙二醇干扰素注射液半成品，分装2ml西林瓶，每支西林瓶中为1ml，即为所述现有技术中聚乙二醇干扰素注射液。

将实施例1、实施例2、实施例3获得的聚乙二醇干扰素注射液与实施例4获得的现有技术中聚乙二醇干扰素注射液在45℃情况下进行加速试验，分别取0天， 3天， 7天与15天的样品进行SDS-PAGE及ELISA分析，其对照结果如图2与图3所示的，SDS-PAGE法完全参照Laemmli方法进行。电泳电压30mA，电泳后采用考马斯亮蓝G250染色2小时，然后用10%甲醇-10%乙酸脱色至本底无色，观察蛋白条带。ELISA法以常规方法检测，以重组人干扰素α2b抗体为一抗包被，加入稀释的样品， 37℃反应30分钟。以洗液洗板，加入稀释的二抗（CBIFNA2-4辣根过氧化物酶结合物），置室温（25℃）1小时。以洗液洗板，加入底物溶液，显色后加入2.5M硫酸终止反应。于492nm读取吸光度。用高纯度重组人干扰素α2b作为参比，计算其含量。以下图4中为0天， 3天， 7天与15天的样品ELISA法检测结果，图5为0天， 3天， 7天与15天的样品SDS-PAGE电泳纯度检测结果。

从图5和图2中可以看出，以本发明的聚乙二醇干扰素注射液，，与做为对照的现有技术的聚乙二醇干扰素注射液,均可进行成品SDS-PAGE纯度检测，且在45℃情况下进行加速试验15天后纯度仍然可以保持在95%以上，同样说明此本发明的能够保护干扰素蛋白的稳定性。但从图4及图3中可以看出，实施例1、实施例2与实施例3的ELISA检测结果较为相似，与作为对照的也并无显著差异，但随时间的延长，衰减的速度要明显低于实施例4的结果。

而前述检测中可见，SDS-PAGE检测的结果好于ELISA检测结果，这显然与蛋白质的改变及两个检定方法的原理有关：蛋白质的某些结构发生了改变，但其分子大小并未改变；ELISA方法检测的是蛋白质的抗原性，与其表面结构有关，所以可以发现出现了较大的变化；而SDS-PAGE检测的是分子量，所以从电泳图谱上看不到有什么变化。综上所述，ELISA结果更客观地反映了制剂中聚乙二醇干扰素α2b真实情况。

现有技术中苯甲醇、吐温80组成的蛋白稳定系统对蛋白质的保护起着较好的保护作用，但苯甲醇是一种不稳定的有机试剂，在高温或光照下易氧化，并很容易导致蛋白质分子改变。而乙酰胺四乙酸二钠为一种螯合剂，它具有很强的螯合作用，可以与溶液中痕迹量的金属离子结合，而这些金属离子可能会以不同的方式促进蛋白发生改变。加入乙二胺四乙酸二钠后，这些痕量的金属离子被络合，从而稳定了蛋白质。

由此可见本发明中相比于现有技术，稳定性更好，安全性更高，此工艺简单，原辅料来源方便，降低了聚乙二醇干扰素注射液的制造成本。

应当理解的是，本发明的应用不限于上述的举例，对本领域普通技术人员来说，可以根据上述说明加以改进或变换，所有这些改进和变换都应属于本发明所附权利要求的保护范围。

Claims

1.一种聚乙二醇干扰素注射液，其包括聚乙二醇干扰素与辅料，其特征在于，所述辅料中的稳定剂为吐温80与乙二胺四乙酸二钠，所述聚乙二醇干扰素为聚乙二醇干扰素α1b、聚乙二醇干扰素α2a与聚乙二醇干扰素α2b中的任一种，所述聚乙二醇干扰素的原液纯度≥95%。

2.根据权利要求1所述的聚乙二醇干扰素注射液，其特征在于，所述聚乙二醇干扰素的含量为180μg/ml，所述吐温80的含量为0.1-0.3mg/ml。乙二胺四乙酸二钠的含量为1-2mg/ml；聚乙二醇干扰素注射液中还包括磷酸盐缓冲液，所述磷酸盐缓冲液的含量为0.1M-0.3M。

3.一种聚乙二醇干扰素注射液的制备方法，其包括以下步骤：

配制稀释液；在121℃条件下进行30分钟湿热灭菌，并冷却至2℃-8℃，将聚乙二醇干扰素的原液、吐温80与乙二胺四乙酸二钠加入所述稀释液中混合得到混合溶液，将所述混合溶液通过0．2μm微孔滤膜过滤，得到所述聚乙二醇干扰素注射液。

4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述聚乙二醇干扰素的含量为180μg/ml，所述吐温80的含量为0.1-0.3mg/ml。乙二胺四乙酸二钠的含量为1-2mg/ml；聚乙二醇干扰素注射液中还包括磷酸盐缓冲液，所述磷酸盐缓冲液的含量为0.1M-0.3M。

5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述聚乙二醇干扰素为聚乙二醇干扰素α1b、聚乙二醇干扰素α2a与聚乙二醇干扰素α2b中的任一种，所述聚乙二醇干扰素的原液纯度≥95%。