CN103271871A - 一种重组人干扰素注射液及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种重组人干扰素注射液及其制备方法，其包括干扰素与辅料，其中，所述辅料中的稳定剂为吐温80与苯甲醇，所述干扰素类型为重组人干扰素α1b、重组人干扰素α2b等任一种，所述干扰素原液纯度≥97%；及其制备方法。采用吐温80和苯甲醇这一特定组合做为蛋白稳定剂，不仅有效避免了使用人血白蛋白做稳定剂所带来的风险，可以达到同样的稳定效果，还可以对成品进行蛋白纯度及含量的检控，使产品质量有了真正的保障，高浓度低装量的规格适用于所有人群，此工艺简单，原辅料来源方便，降低了重组人干扰素注射液的制造成本。

Description

一种重组人干扰素注射液及其制备方法

技术领域

本发明涉及医药领域，尤其涉及一种重组人干扰素注射液及其制备方法。

背景技术

干扰素是目前应用广泛且临床效果显著的治疗性药物，具有广谱抗病毒、抗肿瘤及免疫调节功能，在治疗中有不可取代的地位，尤其是治疗病毒性肝炎的首选药物。现有技术中最常用的干扰素制剂应用较为广泛的有二种，即冻干制剂和液体制剂，液体制剂因使用方便，成本低越来越被人们认可，但做为注射液，其稳定剂比冻干制剂有更高的要求，其要求是保护干扰素蛋白在水溶液状态保持长期稳定，通常选用人血白蛋白做为稳定剂，但人血白蛋白价格昂贵，且有感染血液疾病的潜在风险，容易给患者造成感染。除此之外，多糖类、氨基酸、明胶等也来被做为干扰素液体剂型的稳定剂被使用。

目前大部分干扰素液体稳定剂成分中都含有氨基酸的成分，氨基酸（Amino acid）是构成蛋白质(protein)的基本单位，赋予蛋白质特定的分子结构形态，氨基酸或蛋白质成分的存在在HPLC检测上都会影响主药蛋白的分离。随着重组药物的发展，质量标准将逐步提高，早在2001年国家就提出对细胞因子成品控制中将增加主药（API）蛋白含量检测项目，并针对这一目的进行布置和研究，由于产品添加白蛋白类保护剂成分，目前使用的检测方法无法进行检测，上市产品往往只测控成品活性，而比活性偏低的原液，只要增加其投料，即可以达到其活性质控要求，对产品质量无法真正的检控，容易影响产品质量。

因此，现有技术还有待于更进一步的改进和发展。

发明内容

鉴于上述现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种重组人干扰素注射液及其制备方法，以提高注射液品质与稳定性，提高对注射液品质的检控。

本发明的技术方案如下：

一种重组人干扰素注射液，其包括干扰素与辅料，其中，所述辅料中的稳定剂为吐温80与苯甲醇，所述干扰素类型为重组人干扰素α1b、重组人干扰素α2b等任一种，所述干扰素原液纯度≥97%。 

所述的重组人干扰素注射液，其中，所述干扰素的含量为1.0×10⁷IU/ml，所述吐温80的含量为100-300μg/ml，所述苯甲醇含量为80-120mg/ml。

所述的重组人干扰素注射液，其中，所述重组人干扰素注射液还包括磷酸盐缓冲液，所述磷酸盐缓冲液含量为0.1-0.3M。

一种重组人干扰素注射液的制备方法，其包括以下步骤：

配制磷酸盐缓冲液，在121℃条件下进行湿热灭菌30分钟；

然后向所述磷酸盐缓冲液中加入吐温80，然后再向所述磷酸盐缓冲液中加入苯甲醇，最后再向所述磷酸盐缓冲液中加入干扰素原液得到混合液；

将上述混合液充分混匀，并通过0．22μm微孔滤膜过滤，得到所述重组人干扰素注射液。

所述的制备方法，其中，所述干扰素的含量为1.0×10⁷IU/ml，所述吐温80的含量为100-300μg/ml，所述苯甲醇含量为80-120mg/ml。

所述的制备方法，其中，所述磷酸盐缓冲液含量为0.1-0.3M。

本发明提供的一种重组人干扰素注射液及其制备方法，采用吐温80和苯甲醇这一特定组合做为蛋白稳定剂，不仅有效避免了使用人血白蛋白做稳定剂所带来的风险，可以达到同样的稳定效果，还可以对成品进行蛋白纯度及含量的检控，使产品质量有了真正的保障，高浓度低装量的规格适用于所有人群，此工艺简单，原辅料来源方便，降低了重组人干扰素注射液的制造成本，并且本发明采用高浓度低装量的方式，方便了用户使用。 

附图说明

图1为本发明中制备方法的流程示意图；

图2为本发明与现有技术中重组人干扰素注射液的HPLC检测对比图。

具体实施方式

本发明提供了一种重组人干扰素注射液及其制备方法，为使本发明的目的、技术方案及效果更加清楚、明确，以下对本发明进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

本发明提供了一种重组人干扰素注射液，其包括干扰素与辅料，并且所述辅料中的稳定剂为吐温80与苯甲醇，所述干扰素类型为重组人干扰素α1b、重组人干扰素α2b等任一种，所述干扰素原液纯度≥97%。采用吐温80与苯甲醇这一特定组合代替现有技术中的人血白蛋白或其他成分作为稳定剂，可以达到同样的稳定效果，还可以对成品进行蛋白纯度及含量的检控，使产品质量有了真正的保障。

其更具体的为：它包括干扰素和药物学上可接受的辅料，其中所述辅料中的稳定剂为吐温80和苯甲醇，所述干扰素类型可选用重组人干扰素α1b、重组人干扰素α2b等任意一种或多种，干扰素原液纯度≥97%，所述的重组人干扰素注射液，组成为重组人干扰素1.0×10⁷IU/ml，吐温80的含量为100-300μg/ml，苯甲醇含量为80-120mg/ml，磷酸盐缓冲液含量0.1-0.3M, 分装规格为0.3-1.0 ml/支。

更进一步的，所述干扰素的含量为1.0×10⁷IU/ml，所述吐温80的含量为100-300μg/ml，所述苯甲醇含量为80-120mg/ml。并且所述重组人干扰素注射液还包括磷酸盐缓冲液，所述磷酸盐缓冲液含量为0.1-0.3M。

本发明提供了一种重组人干扰素注射液的制备方法，如图1所示的，其包括以下步骤：

步骤101：配制磷酸盐缓冲液，在121℃条件下进行湿热灭菌30分钟；

然后向所述磷酸盐缓冲液中加入吐温80，然后再向所述磷酸盐缓冲液中加入苯甲醇，最后再向所述磷酸盐缓冲液中加入干扰素原液得到混合液；

步骤102：将上述混合液充分混匀，并通过0．22μm微孔滤膜过滤，得到所述重组人干扰素注射液。

其更具体的为：

1、配制磷酸盐缓冲液，121℃30分钟湿热灭菌；

2、称取吐温80，加入步骤1缓冲液中，混匀；

3、称取苯甲醇，加入步骤2所得溶液中混匀；

4、量取重组人干扰素原液加入步骤3所得溶液中混匀；

5、0．22μm微孔滤膜过滤，分装0.3-1.0ml/支不同规格，得到重组人干扰素注射液。

更进一步的，所述干扰素的含量为1.0×10⁷IU/ml，所述吐温80的含量为100-300μg/ml，所述苯甲醇含量为80-120mg/ml。所述磷酸盐缓冲液含量为0.1-0.3M。本发明制备方法工艺简明，原辅料来源方便，降低了重组人干扰素注射液的制造成本。

为了更进一步描述本发明，以下列举更具体的实施例进行说明。

实施例1

重组人干扰素注射液的组分为：重组人干扰素α2b  5.0×10⁹IU，吐温80 50mg，苯甲醇5g，磷酸氢二钠(Na₂HPO4.) 4.34g，磷酸二氢钠(NaH₂PO4 .H2O)3.18g，注射用水适量，上述组分的总体积为500ml。

重组人干扰素注射液制备方法包括以下步骤：

配制磷酸盐缓冲液：称取磷酸氢二钠(Na₂HPO₄.) 4.34g，磷酸二氢钠(NaH₂PO₄ .H₂O)3.18g，用注射用水溶解，调PH值为PH7.0±0.2，然后在121℃条件下进行30分钟湿热灭菌，得到磷酸盐缓冲液；

称取上述处方中吐温80和苯甲醇，加入所述磷酸盐缓冲液中溶解，得到第一混合溶液；

称取上述处方中重组人干扰素α2b加入所述第一混合溶液，然后定容到500ml，混合均匀，得到第二混合溶液；

用0．22μm微孔滤膜对所述第二混合溶液过滤；得到所述重组人干扰素注射液；

将所述重组人干扰素注射液分装2ml西林瓶，每支西林瓶中为0.3ml的所述重组人干扰素注射液。

实施例2

重组人干扰素注射液的组分为：重组人干扰素α2b  5.0×10⁹IU，吐温80 80mg，苯甲醇7.5g，磷酸氢二钠(Na₂HPO₄.) 4.34g，磷酸二氢钠(NaH₂PO₄ .H₂O)3.18g，注射用水适量，上述组分的总体积为500ml。

重组人干扰素注射液制备方法包括以下步骤：

配制磷酸盐缓冲液：称取磷酸氢二钠(Na₂HPO_4.) 4.34g，磷酸二氢钠(NaH₂PO₄ .H₂O)3.18g，用注射用水溶解，调PH值为PH7.0±0.2，然后在121℃条件下进行30分钟湿热灭菌，得到磷酸盐缓冲液；

称取上述处方中吐温80和苯甲醇，加入所述磷酸盐缓冲液中溶解，得到第一混合溶液；

称取上述处方中重组人干扰素α2b加入所述第一混合溶液，然后定容到500ml，混合均匀，得到第二混合溶液；

用0．22μm微孔滤膜对所述第二混合溶液过滤；得到所述重组人干扰素注射液；

将所述重组人干扰素注射液分装2ml西林瓶，每支西林瓶中为0.3ml的所述重组人干扰素注射液。

实施例3

重组人干扰素注射液的组分为：重组人干扰素α2b  5.0×10⁹IU，吐温80 120mg，苯甲醇10g，称取磷酸氢二钠(Na₂HPO₄.) 4.34g，磷酸二氢钠(NaH₂PO₄ .H₂O)3.18g，注射用水适量，上述组分的总体积为500ml。

重组人干扰素注射液制备方法包括以下步骤：

配制磷酸盐缓冲液：称取磷酸氢二钠(Na₂HPO₄.) 4.34g，磷酸二氢钠(NaH₂PO₄ .H₂O)3.18g，用注射用水溶解，调PH值为PH7.0±0.2，然后在121℃条件下进行30分钟湿热灭菌，得到磷酸盐缓冲液；

称取上述处方中吐温80和苯甲醇，加入所述磷酸盐缓冲液中溶解，得到第一混合溶液；

称取上述处方中重组人干扰素α2b加入所述第一混合溶液，然后定容到500ml，混合均匀，得到第二混合溶液；

用0．22μm微孔滤膜对所述第二混合溶液过滤；得到所述重组人干扰素注射液；

将所述重组人干扰素注射液分装2ml西林瓶，每支西林瓶中为0.3ml的所述重组人干扰素注射液。

为了更进一步凸显本发明的先进性，以下列举部分现有技术中的重组人干扰素注射液及其制备方法，进行对比。

实施例4

现有技术中重组人干扰素注射液的组分：重组人干扰素α2b  5.0×10⁹IU，氯化钠0.9%，人血白蛋白1%。注射用水适量，总体积500ml。

现有技术中重组人干扰素注射液的制备方法，其包括以下步骤：

配制灭菌0.9%氯化钠水溶液；

称取上述处方中人血白蛋白，加入灭菌后的0.9%氯化钠水溶液中溶解；

然后再称取上述处方中重组人干扰素α2b加入灭菌后的0.9%氯化钠水溶液中溶解，定容到500ml，混合均匀，得到混合液；

最后用0．22μm微孔滤膜过滤上述混合液，得到现有技术中重组人干扰素注射液，

将所述现有技术中重组人干扰素注射液分装2ml西林瓶，每支西林瓶中为0.3ml的所述现有技术中重组人干扰素注射液。

将实施例1、实施例2、实施例3获得的重组人干扰素注射液与实施例4获得的现有技术中重组人干扰素注射液在37℃情况下进行加速试验，分别取0天，15天， 30天与60天的样品进行活性检测及反相HPLC纯度检测，其中活性检测采用细胞病变抑制法，以WISH细胞VSV病毒为检测系统，反相HPLC纯度检测采用C8分析柱，以乙腈-三氟乙酸为流动相进行检测。其具体对比结果如表1与表2所示的，其中表1为活性检测结果，表2为纯度检测结果。

表1

表2纯度检测结果

从表1中可以看出，实施例1、实施例2与实施例3生物学活性检测 结果较为相似，与作为对照的实施例4并无显著差异，甚至略高于实施例4的结果，说明本发明的处方能够保护干扰素蛋白的稳定性，并且降低了其制造成本，有效避免了使用人血白蛋白做稳定剂所带来的风险。

从表2和图2中可以看出，以本发明为稳定剂的干扰素注射液，均可进行成品HPLC纯度检测，且在在37℃情况下进行加速试验60天后纯度仍然可以保持在95%以上，同样说明此本发明的能够保护干扰素蛋白的稳定性。而现有技术中重组人干扰素注射液由于稳定剂中蛋白组分的存在，使干扰素蛋白与其它蛋白无法分离，无法对其对产品质量进行真正的检控。

应当理解的是，本发明的应用不限于上述的举例，对本领域普通技术人员来说，可以根据上述说明加以改进或变换，所有这些改进和变换都应属于本发明所附权利要求的保护范围。

Claims (6)

1.一种重组人干扰素注射液，其包括干扰素与辅料，其特征在于，所述辅料中的稳定剂为吐温80与苯甲醇，所述干扰素类型为重组人干扰素α1b、重组人干扰素α2b中的任一种，所述干扰素原液纯度≥97%。

2.根据权利要求1所述的重组人干扰素注射液，其特征在于，所述干扰素的含量为1.0×10⁷IU/ml，所述吐温80的含量为100-300μg/ml，所述苯甲醇含量为80-120mg/ml。

3.根据权利要求1所述的重组人干扰素注射液，其特征在于，所述重组人干扰素注射液还包括磷酸盐缓冲液，所述磷酸盐缓冲液含量为0.1-0.3M。

4.一种重组人干扰素注射液的制备方法，其包括以下步骤：

配制磷酸盐缓冲液，在121℃条件下进行湿热灭菌30分钟；

然后向所述磷酸盐缓冲液中加入吐温80，然后再向所述磷酸盐缓冲液中加入苯甲醇，最后再向所述磷酸盐缓冲液中加入干扰素原液得到混合液；

将上述混合液充分混匀，并通过0．22μm微孔滤膜过滤，得到所述重组人干扰素注射液。

5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述干扰素的含量为1.0×10⁷IU/ml，所述吐温80的含量为100-300μg/ml，所述苯甲醇含量为80-120mg/ml。

6.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述磷酸盐缓冲液含量为0.1-0.3M。

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