CN103442710B - 检测点激酶1抑制剂和wee1激酶抑制剂的组合 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种CHK1抑制剂和WEE1抑制剂的组合。

Description

检测点激酶1抑制剂和WEE1激酶抑制剂的组合
发明背景
发明领域
本发明涉及CHK1激酶抑制剂与WEE1激酶抑制剂的组合及其使用方法。
现有技术
检测点激酶1(“CHK1”)是一种丝氨酸/苏氨酸激酶。CHK1调节细胞周期进程并且是细胞内DNA损伤反应的主要因子。CHK1抑制剂已证实会使肿瘤细胞对诸如化疗和辐射的多种遗传毒物变得敏感。（Tse,Archie N.等,“Targeting Checkpoint Kinase1in CancerTherapeutics.”Clin.Cancer Res.13(7)(2007)1955-1960）。已观察到许多肿瘤缺乏G1DNA损伤检测点途径，从而导致对S和G2检测点的依赖以修复DNA损伤和存活。（Janetka,JamesW.等,“Inhibitors of checkpoint kinases:From discovery to the clinic.”Drug Discovery&Development第10卷,No.4(2007)473-486）。S和G2检测点受CHK1调控。已表明抑制CHK1会抵消S和G2检测点的功能，从而削弱DNA修复并导致肿瘤细胞死亡增加。然而，非癌性细胞具有功能性G1检测点，从而允许DNA修复和存活。CHK1的主要标靶是CDC25A磷酸酶，该磷酸酶是细胞周期蛋白依赖性激酶(“CDK”)的激活因子。当CHK1使CDC25A磷酸化时，CDC25A降解作用会加速，进而减缓DNA复制并防止进入有丝分裂直至损伤被修复（Beck,Haldan等,“Regulators of cyclin dependent kinases are crucial for maintaininggenome integrity in S phase.”J.Cell Biol.第188卷,No.5(2010)629-638）。
CHK1抑制剂是已知的，参见例如国际公布WO2009/004329、国际公布WO2008/012635、国际公布WO2007/090493、国际公布WO2007/090494、国际公布WO2006/106326、国际公布WO2006/120573、国际公布WO2005/103036、国际公布WO2005/066163和国际公布WO03/028724。
CHK1抑制剂包括PF-00477736（也称为PF-477736）、AZD7762、XL844、IC-83、CHIR-124、PD-321852、LY2603618、LY2606368和SCH900776。
国际公布号WO2009/140320描述了包括以下的化合物：(R)-N-(4-(3-氨基哌啶-1-基)-5-溴-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)烟酰胺（下文称为“化合物1”）和(R)-N-(4-(3-氨基哌啶-1-基)-5-溴-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)异丁酰胺（下文称为“化合物2”）、(R)-N-(5-溴-4-(3-(甲基氨基)哌啶-1-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)烟酰胺（下文称为“化合物3”）、(R)-N-(4-(3-氨基哌啶-1-基)-5-溴-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-5-甲基烟酰胺（下文称为“化合物4”）、(R)-N-(4-(3-氨基哌啶-1-基)-5-溴-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)环丙烷羧酰胺（下文称为“化合物5”）、(R)-N-(4-(3-氨基哌啶-1-基)-5-溴-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-3-甲基丁酰胺（下文称为“化合物6”）以及(R)-N-(4-(3-氨基哌啶-1-基)-5-溴-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-2-环丙基乙酰胺（下文称为“化合物7”）。化合物1、2、3、4、5、6和7（统称为“′926CHK1抑制剂”）为经口CHK1抑制剂。
国际公布号WO2009/151589描述了CHK1抑制剂（下文称为“‘589申请案CHK1抑制剂”）。国际公布号WO2009/151598描述了CHK1抑制剂（下文称为“‘598申请案CHK1抑制剂”）。
Wee1样蛋白激酶(“WEE1”)是一种酪氨酸激酶。WEE1在正常细胞中在M期通过磷酸化和降解而失活。WEE1通过使Cdc2磷酸化而对进入有丝分裂进行负调节（Stathis,Anastaslos和Amit Oza,“Targeting Wee1-like Protein Kinase To Treat Cancer.”Drug News&Perspectives.23(7)(2010)425-429）。通过使Cdc2脱磷酸化的CDC25而触发进入有丝分裂。WEE1抑制会导致G2/M缺失并且即使DNA受损仍不受控制地进入有丝分裂。G2/M检测点处于失活状态时，细胞会变得更易受DNA损伤剂的影响，而具有正常G1/S检测点的健康细胞可继续存活。
WEE1抑制剂是已知的，参见例如国际公布WO2010/098367、国际公布WO2010/067886、国际公布WO2008/115742、国际公布WO2008/115738、国际公布WO2007/126122、国际公布WO2007/126128、国际公布WO2004/007499和美国专利申请公开2005/0037476。
WEE1抑制剂包括MK-1775、PD-166285（也称为PD0166285）和PF-00120130。
仍存在对疾病进行治疗的需求，尤其是过度增生疾病，诸如癌症。
发明概述
已发现，以组合方式施用CHK1抑制剂和WEE1抑制剂可用于治疗癌症。出乎意料地，此组合表现出协同潜力，从而使得该组合比单独施用任一抑制剂效果更好。
在一个方面，本发明提供CHK1抑制剂与WEE1抑制剂的组合的用途。
在另一方面，本发明提供CHK1抑制剂与WEE1抑制剂的组合在治疗诸如癌症的过度增生性疾病方面的用途。
本发明另一方面提供CHK1抑制剂在制造与WEE1抑制剂组合使用的药剂以治疗诸如癌症的过度增生性疾病方面的用途。
本发明另一方面提供包含CHK1抑制剂和WEE1抑制剂的药物组合物。
本发明另一方面提供用于治疗或预防诸如癌症的过度增生性疾病的药物组合物，其包含CHK1抑制剂和WEE1抑制剂。
本发明另一方面提供通过施用CHK1抑制剂与WEE1抑制剂的组合而治疗或预防诸如癌症的过度增生性疾病的方法。
本发明另一方面提供通过施用CHK1抑制剂与WEE1抑制剂的组合而治疗或预防诸如癌症的过度增生性疾病的方法，其中CHK1抑制剂以生物有效剂量与最大耐受剂量之间的量施用，并且WEE1抑制剂以生物有效剂量与最大耐受剂量之间的量施用。
本发明另一方面提供用于治疗或预防诸如癌症的过度增生性疾病的方法，包括将有效量的CHK1抑制剂与有效量的WEE1抑制剂的组合施用给有需要的哺乳动物。
本发明另一方面提供包含CHK1抑制剂和WEE1抑制剂的试剂盒。
本发明另一方面提供包含CHK1抑制剂和WEE1抑制剂的试剂盒，以便以组合方式用于治疗或预防诸如癌症的过度增生性疾病。
本发明另一方面提供包括CHK1抑制剂和WEE1抑制剂的单独容器的试剂盒，以便以组合方式用于治疗或预防诸如癌症的过度增生性疾病。
本发明另一方面提供包括容纳单一包装药物组合物的单独容器的试剂盒，以便以组合方式用于治疗或预防诸如癌症的过度增生性疾病，该试剂盒在一个容器中容纳含有有效量CHK1抑制剂的药物组合物并在第二容器中容纳含有有效量WEE1抑制剂的药物组合物。
附图简述
图1显示了HEL92.1.7细胞在用CHK1抑制剂处理后的细胞活力。
图2显示了HEL92.1.7细胞在用WEE1抑制剂处理后的细胞活力。
图3显示了在用CHK1抑制剂处理后的半胱天冬酶3/7活性。
图4显示了在用WEE1抑制剂处理后的半胱天冬酶3/7活性。
图5显示了Cdk2pY15磷酸化实验。
图6显示了Cdc2pT14/Y15磷酸化实验。
图7显示了H2A.X pS139磷酸化实验。
图8显示了CHK1pS345磷酸化实验。
图9显示了HEL92.1.7细胞核苷掺入实验。
具体实施方式
现在将详细地参照本发明的某些实施方案。虽然本发明将结合列举的实施方案加以说明，但是应当理解，它们不旨在将本发明限于那些实施方案。相反，本发明旨在涵盖可包括在由权利要求书限定的本发明范围内的所有替代形式、修改形式和等效形式。本领域的技术人员将认识到可用于本发明实践的与本文所述的那些方法和材料相似或等效的许多方法和材料。本发明不以任何方式被限制到所述的方法和材料。在并入的文献和类似材料的一或多者与本申请不同或矛盾时，包括但不限于所定义的术语、术语使用、所描述的技术等，以本申请为准。
定义
术语“癌症”和“癌性”是指或描述哺乳动物中特征通常在于不受调控的细胞生长的生理状况。“肿瘤”包含一个或多个癌细胞。癌症的实例包括但不限于恶性肿瘤、淋巴瘤、胚细胞瘤、肉瘤以及白血病或淋巴恶性肿瘤。此类癌症的更具体实例包括鳞状细胞癌（例如，上皮鳞状细胞癌)、肺癌（包括小细胞肺癌、非小细胞肺癌("NSCLC")、肺腺癌和肺鳞状细胞癌）、腹膜癌、肝细胞癌、肠道或胃癌（包括胃肠癌）、胰腺癌、恶性胶质瘤、宫颈癌、卵巢癌、肝癌、膀胱癌、肝细胞瘤、乳腺癌、结肠癌、直肠癌、结直肠癌、子宫内膜癌或子宫癌、唾液腺癌、肾脏或肾癌、前列腺癌、外阴癌、甲状腺癌、肝脏癌、肛门癌、阴茎癌、皮肤癌（包括黑素瘤）以及头颈癌。
术语“哺乳动物”是指患有本文所述的疾病或处于发生本文所述疾病风险之中的温血动物，并包括但不限于豚鼠、狗、猫、大鼠、小鼠、仓鼠和灵长类动物（包括人类）。
术语“药学上可接受的”表示该物质或组合物在化学和/或毒理学上与构成制剂的其他成分和/或用其治疗的哺乳动物相容。
术语“治疗有效量”或“有效量”意指当将本文所述的化合物施用给需要此治疗的哺乳动物时足以产生以下效果的量：(i)治疗或预防特定疾病、病症或障碍，(ii)减弱、舒缓或消除特定疾病、病症或障碍的一种或多种症状，或(iii)预防或延迟本文所述的特定疾病、病症或障碍的一种或多种症状的出现。将对应此量的化合物的量将根据诸如特定化合物、疾病状况及其严重性、需要治疗的哺乳动物的特征（例如，体重）等因素而变化，但是尽管如此，本领域的技术人员仍可通过常规方法加以确定。有效量可等于或高于生物有效量，但等于或低于最大耐受剂量。有效量可等于最大耐受剂量。就癌症而言，有效量的抑制剂可减少癌细胞数量；减小肿瘤大小；抑制（即，在一定程度上减缓并优选地停止）癌细胞浸润到周围器官中；抑制（即，在一定程度上减缓并优选地停止）肿瘤转移；在一定程度上抑制肿瘤生长；和/或在一定程度上缓解与癌症相关的一种或多种症状。在抑制剂可防止现有癌细胞生长和/或杀伤现有癌细胞的程度内，抑制剂可以是细胞抑制性的和/或细胞毒性的。就癌症疗法而言，功效例如通过评估疾病进展时间(“TTP”)和/或判定反应率(“RR”)而加以测量。
术语“处理”或“治疗”是指治疗性、预防性、缓解性或防止性措施。对于本发明而言，有益的或所需的临床结果包括但不限于缓和症状、减轻疾病程度、稳定（即不恶化）疾病状态、延迟或减慢疾病进程、改善或减轻疾病状态以及缓解（不论是部分的还是总体的），而不论是可检测的还是无法检测的。“治疗”也可意指相比未接受治疗时的预期存活期具有延长的存活期。需要治疗的那些动物包括已患有病症或障碍的那些动物以及易于罹患病症或障碍的那些动物或需要预防病症或障碍的那些动物。
CHK1和WEE1的组合
本发明提供CHK1抑制剂与WEE1抑制剂的组合在治疗过度增生性疾病方面的用途。在某些实施方案中，该过度增生性疾病为癌症。
细胞周期控制的利用是肿瘤细胞生长所依赖的基本特征。达到此目的的一种机理是对细胞周期检测点和DNA损伤修复的操纵。有证据表明，肿瘤细胞通过在G2/M检测点处高度活化DNA损伤修复（这是一种依赖CHK1的细胞过程）可以逐渐变成难以通过化疗治愈。抑制CHK1可阻断此存活路径。
CHK1激酶参与细胞周期检测点活化和响应DNA损伤的DNA修复。因此，CHK1抑制剂与DNA损伤剂组合已证明具有临床前活性。还已知的是，CHK1对未受干扰细胞（即，不存在外源性DNA损伤）中的细胞周期进程非常关键，并且CHK1的单一药剂抑制在体外培养的癌细胞系中具有抗增殖性（参见实施例2以及图1和图2)。与CHK1抑制剂相组合进行了合成致死siRNA筛选。在PC3、LNCaP和A549细胞系进行的此筛选的运行中，Wee1激酶的siRNA证实了具有增强CHK1抑制剂抗增殖作用的能力（参见实施例1)。
在HEL92.1.7细胞系中进行了后续研究。经证实，此细胞系在细胞增殖方面对CHK1抑制和WEE1抑制两者均比较敏感（参见实施例2以及图1和图2）。当以矩阵方式组合CHK1抑制剂和WEE1抑制剂时，观察到了协同效应（参见实施例2）。抑制剂的组合导致了与单纯相加后所预期的抗增殖活性相比增强高达约四倍。此外，当CHK1抑制剂和WEE1抑制剂作为单一药剂给药时均诱导了细胞凋亡（参见实施例3以及图3和图4）。与抗增殖协同作用相关联，抑制剂的组合导致了与相加所预期的细胞凋亡相比增强高达约五倍（参见实施例3）。
CHK1活性导致CDC25磷酸酶发生螯合和降解，从而促进CDK抑制性磷酸化。Wee1激酶在相同的残基上直接使CDK磷酸化。Cdk2和Cdc2是分别据信主要控制S期进程和有丝分裂进入的CDK。可以预知，CHK1抑制剂和WEE1抑制剂均会导致Cdk2和Cdc2的抑制性磷酸化降低，并且其组合会进一步降低磷酸化（参见实施例4以及图5和图6）。因此，CHK1抑制剂和WEE1抑制剂的组合会导致Cdk2和Cdc2的强力去抑制化。
CDK的去抑制化经证实会导致S期发生DNA损伤，这可能是DNA复制起点激发时去调节化的结果(Beck,supra)。据此，CHK1抑制剂和WEE1抑制剂两者均导致了H2A.X S139磷酸化作用（DNA损伤的生化标记物）增强，并且抑制剂的组合进一步增强了磷酸化作用（参见实施例5和图7）。DNA损伤会导致细胞周期检测点活化。与所观察到的DNA损伤相关联，CHK1抑制剂和WEE1抑制剂两者均会增加CHK1S345磷酸化（参见实施例5和图8）。此外，低浓度CHK1抑制剂和WEE1抑制剂的组合导致增强的CHK1S345磷酸化。
与CDK去抑制化相关的DNA损伤已表明是复制叉崩溃和/或过早进入有丝分裂的结果。这些事件均会导致DNA合成在S期受到抑制。支持此论点的是，CHK1抑制剂和WEE1抑制剂均会导致S期细胞的DNA合成受到抑制，并且当将抑制剂加以组合时，会增强此效应（参见图9）。
一个实施方案提供CHK1抑制剂与WEE1抑制剂的组合的用途。
另一实施方案提供CHK1抑制剂与WEE1抑制剂的组合在治疗诸如癌症的过度增生性疾病方面的用途。在又一实施方案中，该用途包括DNA损伤剂的用途。
另一实施方案提供包含CHK1抑制剂的药物组合物与包含WEE1抑制剂的药物组合物的组合在治疗诸如癌症的过度增生性疾病方面的用途。另一实施方案提供包含有效量CHK1抑制剂的药物组合物与包含有效量WEE1抑制剂的药物组合物的组合在治疗诸如癌症的过度增生性疾病方面的用途。在又一实施方案中，该用途包括DNA损伤剂的用途。
另一实施方案提供CHK1抑制剂在制造与WEE1抑制剂组合使用的药剂以治疗诸如癌症的过度增生性疾病方面的用途。
另一实施方案提供包含CHK1抑制剂和WEE1抑制剂的药物组合物。另一实施方案提供包含有效量CHK1抑制剂和有效量WEE1抑制剂的药物组合物。在又一实施方案中，该组合物还包含有效量的DNA损伤剂。
另一实施方案提供用于治疗或预防诸如癌症的过度增生性疾病的药物组合物，其包含CHK1抑制剂和WEE1抑制剂。另一实施方案提供用于治疗或预防诸如癌症的过度增生性疾病的药物组合物，其包含有效量的CHK1抑制剂和有效量的WEE1抑制剂。在又一实施方案中，该组合物还包含有效量的DNA损伤剂。
本发明另一方面提供通过施用CHK1抑制剂与WEE1抑制剂的组合而治疗或预防诸如癌症的过度增生性疾病的方法。本发明另一方面提供用于治疗或预防诸如癌症的过度增生性疾病的方法，包括施用有效量的CHK1抑制剂与有效量的WEE1抑制剂的组合。在又一实施方案中，该方法还包括施用有效量的DNA损伤剂。
另一实施方案提供通过施用CHK1抑制剂与WEE1抑制剂的组合而治疗或预防诸如癌症的过度增生性疾病的方法，其中CHK1抑制剂以生物有效剂量、最大耐受剂量或生物有效剂量与最大耐受剂量之间的量施用，并且WEE1抑制剂以生物有效剂量与最大耐受剂量之间的量施用。在又一实施方案中，该方法还包括施用有效量的DNA损伤剂。
另一实施方案提供用于治疗或预防诸如癌症的过度增生性疾病的方法，包括将有效量的CHK1抑制剂与有效量的WEE1抑制剂的组合施用给有需要的哺乳动物。在又一实施方案中，该方法还包括施用有效量的DNA损伤剂。
一个实施方案提供包含CHK1抑制剂和WEE1抑制剂的试剂盒。在又一实施方案中，该试剂盒包含DNA损伤剂。
试剂盒包括含有所述组合的容器。合适的容器包括例如瓶子、小瓶、注射器、泡罩包装等。容器可由诸如玻璃或塑料的多种材料形成。容器可容纳有效治疗病症的组合物，并可具有无菌入口（例如，容器可以是静脉注射溶液袋或具有可通过皮下注射针头刺穿的胶塞的小瓶）。
试剂盒可进一步包括在容器上或与容器相关的标签或包装说明书。术语“包装说明书”用于表示通常装在治疗产品的商业包装中的说明，其包含与适应症、用法、剂量、施用、禁忌和/或涉及此类治疗产品使用的警告相关的信息。在一个实施方案中，标签或包装说明书指明包含CHK1抑制剂和/或WEE1抑制剂的组合物可用于治疗一种障碍。标签或包装说明书还可指明组合物可用于治疗其他障碍。
在某些实施方案中，试剂盒适于递送CHK1抑制剂和WEE1抑制剂的固体口服剂型，诸如片剂或胶囊剂。此试剂盒优选地包含多个单位剂型。此类试剂盒可包括具有按预期用途的顺序排列剂量的卡片。此试剂盒的实例为“泡罩包装”。泡罩包装是包装工业中熟知的，并被广泛用于包装药物单位剂型。如果需要，可提供例如呈数字、字母或其他标记形式或具有日历插页的记忆辅助物，从而指定在治疗方案中可施用剂量的日期。
根据另一实施方案，试剂盒可包括(a)其中装有CHK1抑制剂的第一容器；和(b)其中装有WEE1抑制剂的第二容器。作为另外一种选择或除此之外，试剂盒可进一步包括装有药学上可接受的缓冲液（诸如抑菌注射用水(BWFI)、磷酸盐缓冲盐水、林格氏溶液和葡萄糖溶液）的第三容器。其可进一步包含从商业和使用者观点来看所需的其他材料，包括其他缓冲剂、稀释剂、过滤器、针头和注射器。
试剂盒可进一步包括关于CHK1抑制剂和WEE1抑制剂施用的指导。例如，试剂盒可进一步包括关于将CHK1抑制剂和WEE1抑制剂同时、依次或分开施用给有需要的患者的指导。
在某些其他实施方案中，试剂盒可包括用于容纳单独的组合物的容器，诸如分开的瓶子或分开的铝箔袋，然而，这些单独的组合物也可容纳在单个未分开的容器中。在某些实施方案中，试剂盒包括关于施用单独组分的指导。当单独的组分优选地以不同的剂型（例如，经口和非肠道）施用、以不同的给药间隔施用或当处方医生要求对组合中的各个组分进行调整时，该试剂盒形式尤为有利。
本发明另一方面提供包括CHK1抑制剂和WEE1抑制剂的单独容器的试剂盒，以便以组合方式用于治疗或预防诸如癌症的过度增生性疾病。在又一实施方案中，该试剂盒包含DNA损伤剂。
本发明另一方面提供包括容纳单一包装药物组合物的单独容器的试剂盒，以便以组合方式用于治疗或预防诸如癌症的过度增生性疾病，该试剂盒在一个容器中容纳含有有效量CHK1抑制剂的药物组合物并在第二容器中容纳含有有效量WEE1抑制剂的药物组合物。在又一实施方案中，该试剂盒还包含DNA损伤剂。
另一实施方案提供一种试剂盒，其包含：
(a)CHK1抑制剂，和
(b)WEE1抑制剂，
以便以组合方式用于治疗或预防诸如癌症的过度增生性疾病。
另一实施方案提供一种试剂盒，其包含：
(a)CHK1抑制剂，
(b)WEE1抑制剂，和
(c)DNA损伤剂，
以便以组合方式用于治疗或预防诸如癌症的过度增生性疾病。
另一实施方案提供一种试剂盒，其包含：
(a)含有CHK1抑制剂的药物组合物，和
(b)含有WEE1抑制剂的药物组合物，
以便以组合方式用于治疗或预防诸如癌症的过度增生性疾病。
另一实施方案提供一种试剂盒，其包含：
(a)含有CHK1抑制剂的药物组合物，
(b)含有WEE1抑制剂的药物组合物，和
(c)含有DNA损伤剂的药物组合物，
以便以组合方式用于治疗或预防诸如癌症的过度增生性疾病。
另一实施方案提供一种试剂盒，其包含：
(a)含有有效量CHK1抑制剂的药物组合物，和
(b)含有有效量WEE1抑制剂的药物组合物，
以便以组合方式用于治疗或预防诸如癌症的过度增生性疾病。
另一实施方案提供一种试剂盒，其包含：
(a)含有有效量CHK1抑制剂的药物组合物，
(b)含有有效量WEE1抑制剂的药物组合物，和
(c)含有有效量DNA损伤剂的药物组合物，
以便以组合方式用于治疗或预防诸如癌症的过度增生性疾病。
在本发明的某些实施方案中，CHK1抑制剂选自′926CHK1抑制剂。在本发明的某些实施方案中，CHK1抑制剂选自化合物1、化合物2、化合物3、化合物4、化合物5、化合物6和化合物7。在本发明的某些实施方案中，CHK1抑制剂为化合物1。在本发明的某些实施方案中，CHK1抑制剂为化合物2。在本发明的某些实施方案中，CHK1抑制剂为化合物3。在本发明的某些实施方案中，CHK1抑制剂为化合物4。在本发明的某些实施方案中，CHK1抑制剂为化合物5。在本发明的某些实施方案中，CHK1抑制剂为化合物6。在本发明的某些实施方案中，CHK1抑制剂为化合物7。
在本发明的某些实施方案中，CHK1抑制剂选自′926CHK1抑制剂、PF-00477736、AZD7762、XL844、IC-83、CHIR-124、PD-321852、LY2603618、LY2606368和SCH900776。在本发明的某些实施方案中，CHK1抑制剂选自PF-00477736、AZD7762、XL844、IC-83、CHIR-124、PD-321852、LY2603618、LY2606368和SCH900776。在本发明的某些实施方案中，CHK1抑制剂选自′926CHK1抑制剂、PF-00477736、AZD7762、XL844、IC-83和CHIR-124。在本发明的某些实施方案中，CHK1抑制剂选自PF-00477736、AZD7762、XL844、IC-83和CHIR-124。在某些实施方案中，CHK1抑制剂不包括′926CHK1抑制剂。
在某些实施方案中，CHK1抑制剂选自‘589申请案CHK1抑制剂和‘598申请案CHK1抑制剂。在某些实施方案中，CHK1抑制剂为‘589申请案CHK1抑制剂。在某些实施方案中，CHK1抑制剂为‘598申请案CHK1抑制剂。
经口CHK1抑制剂是可经口施用的CHK1抑制剂。当经口施用CHK1抑制剂时，其可与药学上可接受的载体或赋形剂一起配制成丸剂、硬或软胶囊剂、片剂、锭剂、水性或油性混悬剂、乳剂、可分散粉末或颗粒、糖浆剂、酏剂等。′926CHK1抑制剂是经口CHK1抑制剂。
在本发明的某些实施方案中，WEE1抑制剂选自MK-1775、PD-166285和PF-00120130。在本发明的某些实施方案中，WEE1抑制剂选自MK-1775和PD-166285。在本发明的某些实施方案中，WEE1抑制剂为MK-1775。在本发明的某些实施方案中，WEE1抑制剂为PD-166285。在本发明的某些实施方案中，WEE1抑制剂为PF-00120130。
经口WEE1抑制剂是可经口施用的WEE1抑制剂。当经口施用WEE1抑制剂时，其可与药学上可接受的载体或赋形剂一起配制成丸剂、硬或软胶囊剂、片剂、锭剂、水性或油性混悬剂、乳剂、可分散粉末或颗粒、糖浆剂、酏剂等。MK-1775是经口WEE1抑制剂。
CHK1和WEE1抑制剂可彼此先后或合并施用。各药剂按顺序施用可以间隔短时间或间隔长时间。
通常，CHK1和WEE1抑制剂在环境温度、适当的pH和所需的纯度下通过与生理上可接受的载体（即，在用于盖仑制剂施用形式的剂量和浓度下对受体无毒的载体）一起混合而单独地配制。制剂的pH主要取决于化合物的特定用途和浓度，但可在约3至约8之间的任何范围内。pH5的乙酸盐缓冲液中的制剂是合适的实施方案。在一个实施方案中，包含本发明化合物的制剂是无菌制剂。这些化合物通常将作为固体组合物而贮藏，但冻干制剂或水溶液剂也是可接受的。
包含CHK1和WEE1抑制剂的组合物可按符合良好医疗规范的方式而配制、给药和施用。针对此方面考虑的因素包括所治疗的特定障碍、所治疗的特定哺乳动物、各患者的临床状况、障碍原因、施用部位、施用方法、施用计划和医疗从业人员已知的其他因素。
抑制剂可按任何便利的施用形式施用，例如，片剂、散剂、胶囊剂、溶液剂、分散剂、混悬剂、糖浆剂、喷雾剂、栓剂、凝胶剂、乳剂、贴片等。此类组合物可含有药物制备物中常见的组分，例如稀释剂、载体、pH调节剂、甜味剂、填充剂和其他活性剂。若需要非肠道施用，则组合物将为无菌的并为适于注射或输注的溶液剂或混悬剂。
一般来讲，每剂非肠道施用抑制剂的初始药学有效量将在约0.01-100mg/kg/天的范围内，例如约0.1至20mg/kg患者体重/天，其中所用抑制剂化合物的典型初始范围为0.3至15mg/kg/天。诸如片剂和胶囊剂的经口单位剂型可含有约25至约1000mg的抑制剂。
CHK1和WEE1抑制剂可通过任何合适的方式单独地施用，包括经口、舌下、口腔、局部、透皮、非肠道、皮下、腹膜内、肺内和鼻内，并且若需要局部治疗，则可在病灶内施用。非肠道输注包括肌内、静脉内、动脉内、腹膜内或皮下施用。合适的经口剂型的例子为含有与约90-30mg无水乳糖、约5-40mg交联羧甲基纤维素钠、约5-30mg聚乙烯吡咯烷酮("PVP")K30和约1-10mg硬脂酸镁配混的约25mg、50mg、100mg、250mg或500mg抑制剂的片剂。首先将粉末成分混合在一起，随后与PVP溶液混合。将所得的组合物干燥、制粒、与硬脂酸镁混合，再用常规设备压成片剂。通过将例如5-400mg抑制剂溶在合适的缓冲溶液（例如，磷酸盐缓冲液）中并在需要时添加等张剂（例如，诸如氯化钠的盐）而制备气雾剂。通常例如使用0.2微米过滤器对溶液过滤以除去杂质和污染物。
可通过将抑制剂与载体或赋形剂混合而制备另一制剂。合适的载体和赋形剂是本领域技术人员熟知的，并在例如Ansel,Howard C.等,Ansel’s Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems.Philadelphia:Lippincott,Williams&Wilkins,2004；Gennaro,Alfonso R.等Remington:The Science and Practice of Pharmacy.Philadelphia:Lippincott,Williams&Wilkins,2000；以及Rowe,RaymondC.Handbook of Pharmaceutical Excipients.Chicago,Pharmaceutical Press,2005中有详细描述。制剂还可包含一种或多种缓冲剂、稳定剂、表面活性剂、润湿剂、润滑剂、乳化剂、助悬剂、防腐剂、抗氧化剂、避光剂、助流剂、加工助剂、着色剂、甜味剂、芳香剂、矫味剂、稀释剂以及为药物（即，CHK1抑制剂和/或WEE1抑制剂或其药物组合物）提供精致外观或有助于制造药品（即，药剂）的其他已知添加剂。
CHK1抑制剂和WEE1抑制剂必须至少以实现所需生物效应的水平给药。因此，有效给药方案将以至少实现所需生物效应的最小量或生物有效剂量给药。
然而，剂量不应过高而使得不可接受的副作用超过生物效应的益处。因此，有效给药方案将不超过最大耐受剂量(“MTD”)给药。最大耐受剂量定义为产生可接受的剂量限制性毒性(“DLT”)发生率的最高剂量。导致不可接受的DLT率的剂量视为非耐受剂量。通常，特定方案的MTD在1期临床试验中建立。开始时，常以在啮齿动物中严重毒性剂量的1/10量(“STD10”)为安全起始剂量在患者（以mg/m2为基础）中进行，并以三名患者为一组，依照经修改的Fibonacci序列递增剂量，其中越往后的步骤相对增量越小（例如，往后增加的剂量为100%、65%、50%、40%和30%至35%）。剂量递增以三位患者为一组进行直至达到非耐受剂量。将产生可接受DLT率的下一个剂量水平视为MTD。
另外，MTD根据具体的抑制剂、物种和给药方案而不同。例如，在7、14、21或28天给药周期中的仅第1天与第1和第2天与第1至第3天给药均可具有不同的MTD。另外，单独给药CHK1抑制剂或与DNA损伤剂组合给药可具有不同的MTD，将CHK1抑制剂与WEE1抑制剂组合给药也是如此。单独给药WEE1抑制剂或与DNA损伤剂组合给药可具有不同的MTD，将WEE1抑制剂与CHK1抑制剂组合给药也是如此。然而，如上所述，有效给药方案需要给予达到生物有效性所足够的抑制剂。仅在第1天给药可达到生物有效剂量，但可能无法足够长期地防止受损细胞进行DNA修复。作为另外一种选择，在第1至第3天给药的剂量持续时间可足够长，但可能不足以达到生物有效剂量。这是由于给药三天的MTD比生物有效剂量低。因此，有效给药方案将具有等于或大于生物有效剂量的MTD。通常，当治疗癌症时，以特定化合物的MTD向患者给药，使得能够达到治疗最大益处。
在本发明一个实施方案中，所需的CHK1抑制剂生物效应是使pCHK1受到80%或更大的抑制。在本发明另一实施方案中，所需的CHK1抑制剂生物效应是在施用DNA损伤剂之后（相对于单独施用DNA损伤剂）使pCHK1受到80%或更大的抑制。
在本发明另一实施方案中，所需的CHK1抑制剂生物效应是使pCHK1受到90%或更大的抑制。在本发明另一实施方案中，所需的CHK1抑制剂生物效应是在施用DNA损伤剂之后（相对于单独施用DNA损伤剂）使pCHK1受到90%或更大的抑制。
在本发明另一实施方案中，所需的CHK1抑制剂生物效应是使pCHK1受到95%或更大的抑制。在本发明另一实施方案中，所需的CHK1抑制剂生物效应是在施用DNA损伤剂之后（相对于单独施用DNA损伤剂）使pCHK1受到95%或更大的抑制。
在本发明另一实施方案中，所需的CHK1抑制剂生物效应是使p-cdc2受到66%或更大的抑制。在本发明另一实施方案中，所需的CHK1抑制剂生物效应是在施用WEE1抑制剂之后（相对于单独施用WEE1抑制剂）使p-cdc2受到66%或更大的抑制。在本发明另一实施方案中，所需的CHK1抑制剂生物效应是在施用DNA损伤剂之后（相对于单独施用DNA损伤剂）使p-cdc2受到66%或更大的抑制。
在本发明一个实施方案中，所需的WEE1抑制剂生物效应是使p-cdc2受到80%或更大的抑制。在本发明另一实施方案中，所需的WEE1抑制剂生物效应是在施用DNA损伤剂之后（相对于单独施用DNA损伤剂）使p-cdc2受到80%或更大的抑制。
在本发明另一实施方案中，所需的WEE1抑制剂生物效应是使p-cdc2受到90%或更大的抑制。在本发明另一实施方案中，所需的WEE1抑制剂生物效应是在施用DNA损伤剂之后（相对于单独施用DNA损伤剂）使p-cdc2受到90%或更大的抑制。
在本发明另一实施方案中，所需的WEE1抑制剂生物效应是使p-cdc2受到95%或更大的抑制。在本发明另一实施方案中，所需的WEE1抑制剂生物效应是在施用DNA损伤剂之后（相对于单独施用DNA损伤剂）使p-cdc2受到95%或更大的抑制。
在本发明另一实施方案中，所需的WEE1抑制剂生物效应是使p-cdc2受到66%或更大的抑制。在本发明另一实施方案中，所需的WEE1抑制剂生物效应是在施用CHK1抑制剂之后（相对于单独施用CHK1抑制剂）使p-cdc2受到66%或更大的抑制。在本发明另一实施方案中，所需的WEE1抑制剂生物效应是在施用DNA损伤剂之后（相对于单独施用DNA损伤剂）使p-cdc2受到66%或更大的抑制。
在一个实施方案中，CHK1抑制剂以抑制剂的生物有效剂量、最大耐受剂量或生物有效剂量与最大耐受剂量之间的量施用。在一个实施方案中，CHK1抑制剂以抑制剂的最大耐受剂量施用。
在一个实施方案中，WEE1抑制剂以抑制剂的生物有效剂量、最大耐受剂量或生物有效剂量与最大耐受剂量之间的量施用。在一个实施方案中，WEE1抑制剂以抑制剂的最大耐受剂量施用。
关于MK-1775与吉西他滨、卡铂和顺铂组合的MTD的一些数据已经发表（参见Leijen,S.等“A phase I pharmacological and pharmacodynamic study of MK-1775,aWee1tyrosine kinase inhibitor,in monotherapy and combination withgemcitabine,cisplatin,or carboplatin in patients with advanced solid tumors.”J.Clin.Oncol.28:15s(2010)(suppl;abstr3067);2010ASCO Annual Meeting和Schellens,J.H.等“A phase I and pharmacological study of MK-1775,aWee1tyrosine kinase inhibitor,in both monotherapy and in combination withgemcitabine,cisplatin,or carboplatin in patients with advanced solid tumors.”J.Clin.Oncol.27:15s(2009)(suppl;abstr3510);2009ASCO Annual Meeting）。MK-1775以单一剂量与吉西他滨(1000mg/m2)组合的MTD据报道为200mg。MK-1775以单一剂量与顺铂(75mg/m2)组合的MTD据报道为200mg。MK-1775以单一剂量与卡铂(AUC5)组合的MTD据报道为325mg。据报道，MK-1775以多剂量（BID第1天、BID第2天和QD第3天）与吉西他滨(1000mg/m2)组合的MTD为50mg（BID第1天）、25mg（BID第2天）和25mg（QD第3天）。据报道，MK-1775以多剂量（5个BID给药）与顺铂(75mg/m2)组合的MTD为125mg，而相应的试验仍在进行中。据报道，MK-1775以多剂量（5个BID给药）与卡铂(AUC5)组合的MTD为225mg，而相应的试验仍在进行中。
在本发明的某些实施方案中，CHK1和/或WEE1抑制剂的剂量可分成每日施用两次或更多次（即，BID给药意指每日两次）。可在一天中间隔地进行多次施用。这还包括在多天内进行多次施用。
在某些实施方案中，本发明提供组合物治疗癌症的用途。在某些实施方案中，本发明提供治疗癌症的方法。更具体地讲，通过本发明的组合物和方法可治疗的癌症包括但不限于：软组织癌：肉瘤（血管肉瘤、纤维肉瘤、横纹肌肉瘤、脂肉瘤）、黏液瘤、横纹肌肉瘤、纤维瘤、脂瘤和畸胎瘤；肺癌：支气管癌（鳞状细胞、未分化小细胞、未分化大细胞、腺癌）、肺泡（小支气管）癌、支气管腺瘤、肉瘤、淋巴瘤、软骨性错构瘤、间皮瘤；胃肠癌：食道（鳞状细胞癌、腺癌、平滑肌肉瘤、淋巴瘤）、胃（恶性肿瘤、淋巴瘤、平滑肌肉瘤）、胰脏（导管腺癌、胰岛腺瘤、胰高血糖素瘤、胃泌素瘤、类癌肿瘤、肠血管活性肠肽瘤）、小肠（腺癌、淋巴瘤、类癌肿瘤、卡波西氏肉瘤、平滑肌瘤、血管瘤、脂瘤、神经纤维瘤、纤维瘤）、大肠（腺癌、管状腺瘤、绒毛腺瘤、错构瘤、平滑肌瘤）；泌尿道癌：肾（腺癌、威尔姆斯肿瘤[肾胚细胞瘤]、淋巴瘤、白血病）、膀胱和尿道（鳞状细胞癌、移行细胞癌、腺癌）、前列腺（腺癌、肉瘤）、睾丸(精细胞瘤、畸胎瘤、胚胎癌、畸胎癌、绒毛膜癌、肉瘤、间质细胞癌、纤维瘤、纤维腺瘤、腺瘤状肿瘤、脂瘤）；肝脏癌：肝癌（肝细胞癌）、胆管癌、肝母细胞瘤、血管肉瘤、肝细胞腺瘤、血管瘤；骨癌：成骨肉瘤（骨肉瘤）、纤维肉瘤、恶性纤维组织细胞瘤、软骨肉瘤、尤因氏肉瘤、恶性淋巴瘤（网状细胞肉瘤）、多发性骨髓瘤、恶性巨细胞肿瘤脊索瘤、骨软骨瘤（骨软骨外生骨疣）、良性软骨瘤、软骨母细胞瘤、软骨黏液纤维瘤、骨样骨瘤和巨细胞肿瘤；神经系统癌：颅骨（骨瘤、血管瘤、肉芽肿、黄瘤、畸形性骨炎）、脑膜（脑膜瘤、脑膜肉瘤、神经胶质瘤病）、大脑（星形细胞瘤、神经管胚细胞瘤、神经胶质瘤、室管膜瘤、胚细胞瘤[松果体瘤]、多形性神经胶质母细胞瘤、寡树突胶质瘤、神经鞘瘤、视网膜母细胞瘤、先天性肿瘤）、脊髓神经纤维瘤、脑膜瘤、神经胶质瘤、肉瘤）；妇科癌：子宫（子宫内膜癌）、子宫颈(子宫颈癌、肿瘤前子宫颈发育不良）、卵巢（卵巢癌[浆液性囊腺癌、黏液性囊腺癌、未分类癌症]、粒层-膜细胞肿瘤、塞-莱二氏(Sertoli-Leydig）细胞肿瘤、恶性胚细胞瘤、恶性畸胎瘤）、外阴（鳞状细胞癌、上皮内癌、腺癌、纤维肉瘤、黑色素瘤）、阴道（透明细胞癌、鳞状细胞癌、葡萄状肉瘤[胚胎横纹肌肉瘤]、输卵管（癌））；血液癌病：血液和骨髓（骨髓性白血病[急性和慢性]、急性淋巴母细胞白血病、慢性淋巴母细胞白血病、骨髓增生性疾病、多发性骨髓瘤、骨髓增生异常综合征）、霍奇金氏病、非霍奇金氏淋巴瘤[恶性淋巴瘤]；皮肤癌：恶性黑色素瘤、基底细胞癌、鳞状细胞癌、卡波西氏肉瘤、发育不良痣、脂瘤、血管瘤、皮肤纤维瘤、瘢痕瘤、银屑病；和肾上腺癌：神经母细胞瘤。如本文所提供的术语“癌细胞”包括遭受以上所述病症中任一者的细胞。
在本发明的某些实施方案中，癌症选自结直肠癌（包括Ras突变）、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、神经胶质瘤、卵巢癌、转移性乳癌、胰腺癌、肝胆癌（包括肝细胞癌、胆道癌和胆管癌）、胃癌、睾丸癌、头和颈鳞状细胞癌、白血病（包括急性骨髓性白血病、急性淋巴细胞白血病、慢性骨髓性白血病和慢性淋巴细胞白血病）、淋巴瘤（包括套细胞淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤和非霍奇金氏淋巴瘤）和前列腺癌。
在本发明的某些实施方案中，癌症为实体肿瘤癌。
在本发明的某些实施方案中，癌症选自胰腺癌、卵巢癌和结直肠癌。
在本发明的某些实施方案中，癌症选自结直肠癌（包括Ras突变）、小细胞肺癌、非小细胞肺癌和神经胶质瘤。
在本发明的某些实施方案中，癌症选自非小细胞肺癌、卵巢癌、转移性乳癌、胰腺癌、肝胆癌（包括肝细胞癌、胆道癌和胆管癌）和胃癌。
在本发明的某些实施方案中，癌症选自结直肠癌（包括Ras突变）、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、卵巢癌、肝胆癌（包括肝细胞癌、胆道癌和胆管癌）、胃癌、睾丸癌以及头和颈鳞状细胞癌。
在本发明的某些实施方案中，癌症选自白血病（包括急性骨髓性白血病、急性淋巴细胞白血病、慢性骨髓性白血病和慢性淋巴细胞白血病）、淋巴瘤（包括套细胞淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤和非霍奇金氏淋巴瘤）和前列腺癌。
在某些实施方案中，组合进一步包含与DNA损伤剂组合。DNA损伤剂包括（吉西他滨）、（伊立替康或CPT-11）、（替莫唑胺）、（卡培他滨）、（拓扑替康）、顺铂、（奥沙利铂）、（卡铂）、喜树碱、ara-C（阿糖胞苷）、5-FU（氟尿嘧啶）、（环磷酰胺）、（磷酸依托泊苷）、（替尼泊苷）、或（多柔比星）、柔红霉素、（培美曲塞）和辐射。在某些实施方案中，DNA损伤剂选自吉西他滨、伊立替康、替莫唑胺、卡培他滨、喜树碱、顺铂、ara-C和5-FU。在某些实施方案中，DNA损伤剂选自吉西他滨、伊立替康、替莫唑胺和卡培他滨。在某些实施方案中，DNA损伤剂选自吉西他滨、伊立替康、顺铂、奥沙利铂、卡铂和阿糖胞苷。在某些实施方案中，DNA损伤剂选自吉西他滨和伊立替康。DNA损伤剂以其批准或推荐剂量施用。在一个实施方案中，DNA损伤剂以最大耐受剂量施用。
在某些实施方案中，DNA损伤剂选自顺铂、奥沙利铂和卡铂。
在某些实施方案中，DNA损伤剂为吉西他滨。
在又一实施方案中，DNA损伤剂为阿糖胞苷。
实施例
为了阐明本发明，包括了下列实施例。然而，应当理解，这些实施例不限制本发明而仅旨在建议实践本发明的方法。
实施例1
Wee1的siRNA增强Chk1抑制剂的抗增殖活性
在PC3、LNCaP（2个独立实验）和A549细胞系中利用197个基因的siRNA（每个基因3个siRNA）进行合成致死筛选。在96孔板中，将细胞用siRNA反转染，1天后用化合物2或媒介物处理，然后在处理后3天通过CellTiter Blue活力测定进行分析。所示的数据是利用WEE1激酶的3个siRNA（标记为A、B和C）获得的结果。数值表示对照的百分比，而对照为各个培养板所有数值的中值。
实施例2
组合Chk1抑制与Wee1抑制以抑制细胞增殖
将HEL92.1.7细胞铺在96孔板中，随后以单一药剂形式的化合物2或MK-1775处理。处理三天后，通过CellTiter Blue测定(Promega)评估细胞活力。数据表示平均值±S.E.（就化合物2而言，n=5；就MK-1775而言，n=2）。化合物2的IC50为30nM，而MK-1775则为103nM。参见图1和图2。将HEL92.1.7细胞铺在96孔培养板中，随后通过化合物2与MK-1775呈矩阵方式的组合以所示浓度进行处理。处理后三天，通过CellTiter Blue测定评估细胞活力。每一组合所报告的数值代表组合指数（将实际读值除以假设化合物为相加时的预期值；该预期值是将单一药剂的分项效应彼此相乘而得，例如，如果每单一药剂抑制生长达50%，则预期值将为0.5×0.5=0.25）。数据代表两个独立实验的平均值（每一个实验均取三个平行培养板的平均值）。
实施例3
组合Chk1抑制与Wee1抑制以诱导细胞凋亡
将HEL92.1.7细胞一式两份铺在96孔培养板中，随后通过化合物2或MK-1775处理。在处理2天后，通过Caspase-Glo3/7测定(Promega)分析其中一个培养板，通过CellTiterBlue测定分析另一个培养板。将Caspase-Glo3/7测定的读值除以CellTiter Blue测定的读值，使得可将半胱天冬酶活性针对细胞数量近似值归一化。图形代表通过化合物2和MK-1775单一药剂处理的半胱天冬酶3/7活化作用（参见图3和图4）。将化合物2和MK-1775以矩阵方式组合。数值代表实际值除以假设化合物以相加方式作用时的预期值（该预期值是单一药剂的分项效应彼此相乘而得）。
实施例4
Chk1抑制和Wee1抑制导致细胞周期蛋白依赖性激酶的抑制性磷酸化降低
通过化合物2、MK-1775或两者的组合（低组合=30nM化合物2+75nM MK-1775，中组合=150nM化合物2+375nM MK-1775，高组合=300nM化合物2+750nM MK-1775）处理HEL92.1.7细胞8小时。然后通过Western印迹使用对酪氨酸15上磷酸化的Cdk2(CDK2pY15)和苏氨酸14及酪氨酸15上磷酸化的Cdc2(Cdc2pT14/Y15)具有特异性的抗体分析细胞裂解物。谱带强度针对GAPDH负载对照进行归一化。所报告的数值针对媒介物对照进行归一化。参见图5和图6。
实施例5
Chk1抑制和Wee1抑制导致DNA损伤和细胞周期检测点活化的生化标记物增加
通过化合物2、MK-1775或两者的组合（低组合=30nM化合物2+75nM MK-1775，中组合=150nM化合物2+375nM MK-1775，高组合=300nM化合物2+750nM MK-1775）处理HEL92.1.7细胞8小时。然后通过Western印迹使用对丝氨酸139上磷酸化的H2A.X(H2A.X pS139)和丝氨酸345上磷酸化的Chk1(Chk1p345)具有特异性的抗体分析细胞裂解物。谱带强度针对GAPDH负载对照进行归一化。所报告的数值针对媒介物对照进行归一化。参见图7和图8。
实施例6
Chk1抑制和Wee1抑制导致DNA复制崩溃
用化合物2、MK-1775或两者的组合处理HEL92.1.7细胞16小时。然后通过Click-iTEdU流式细胞测定试剂盒(Invitrogen)按照制造商说明分析细胞。DNA复制崩溃的细胞定义为具有S期DNA含量，但EdU染色呈阴性。参见图9。
虽然本发明已结合列举的实施方案进行了说明，但是应当理解，它们不旨在将本发明限于那些实施方案。相反，本发明旨在涵盖可包括在由权利要求书限定的本发明范围内的所有替代形式、修改形式和等效形式。因此，上述说明仅应视为对本发明原理的展示。
词语“包含”、“包括”、“含有”当在本说明书和以下权利要求书中使用时欲指所述特征、整数、组分或步骤的存在性，但它们不排除存在或添加一个或多个其他特征、整数、组分、步骤或它们的组。

Claims (115)

1.CHK1抑制剂与WEE1抑制剂的组合在制备用于治疗或预防白血病的药物中的用途，所述CHK1抑制剂为(R)-N-(4-(3-氨基哌啶-1-基)-5-溴-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)异丁酰胺，并且其中WEE1抑制剂为MK-1775。
2.根据权利要求1所述的用途，其中所述CHK1和WEE1抑制剂彼此先后或合并施用。
3.根据权利要求1所述的用途，其中所述CHK1和WEE1抑制剂按顺序施用。
4.包含CHK1抑制剂的药物组合物与包含WEE1抑制剂的药物组合物的组合在制备用于治疗白血病的药物中的用途，所述CHK1抑制剂为
(R)-N-(4-(3-氨基哌啶-1-基)-5-溴-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)异丁酰胺，并且其中WEE1抑制剂为MK-1775。
5.根据权利要求4所述的用途，其中所述CHK1和WEE1抑制剂彼此先后或合并施用。
6.根据权利要求4所述的用途，其中所述CHK1和WEE1抑制剂按顺序施用。
7.根据权利要求1-6中任一项的用途，进一步包括在白血病的治疗中使用辐射。
8.一种药物组合物，包含CHK1抑制剂和WEE1抑制剂，所述CHK1抑制剂为(R)-N-(4-(3-氨基哌啶-1-基)-5-溴-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)异丁酰胺，并且其中WEE1抑制剂为MK-1775。
9.根据权利要求8所述的药物组合物，其中所述CHK1和WEE1抑制剂彼此先后或合并施用。
10.根据权利要求8所述的药物组合物，其中所述CHK1和WEE1抑制剂按顺序施用。
11.一种用于治疗或预防白血病的药物组合物，包含CHK1抑制剂和WEE1抑制剂，所述CHK1抑制剂为(R)-N-(4-(3-氨基哌啶-1-基)-5-溴-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)异丁酰胺，并且其中WEE1抑制剂为MK-1775。
12.根据权利要求11所述的药物组合物，其中所述CHK1和WEE1抑制剂彼此先后或合并施用。
13.根据权利要求11所述的药物组合物，其中所述CHK1和WEE1抑制剂按顺序施用。
14.一种CHK1抑制剂与WEE1抑制剂的组合产品，所述CHK1抑制剂为(R)-N-(4-(3-氨基哌啶-1-基)-5-溴-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)异丁酰胺，并且其中WEE1抑制剂为MK-1775。
15.根据权利要求14所述的组合产品，其中所述CHK1和WEE1抑制剂彼此先后或合并施用。
16.根据权利要求14所述的组合产品，其中所述CHK1和WEE1抑制剂按顺序施用。
17.一种CHK1抑制剂与WEE1抑制剂的组合产品，其中所述CHK1抑制剂以生物有效剂量、最大耐受剂量或生物有效剂量与最大耐受剂量之间的量施用，并且所述WEE1抑制剂以生物有效剂量与最大耐受剂量之间的量施用，所述CHK1抑制剂为(R)-N-(4-(3-氨基哌啶-1-基)-5-溴-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)异丁酰胺，并且其中WEE1抑制剂为MK-1775。
18.根据权利要求17所述的组合产品，其中所述CHK1和WEE1抑制剂彼此先后或合并施用。
19.根据权利要求17所述的组合产品，其中所述CHK1和WEE1抑制剂按顺序施用。
20.有效量CHK1抑制剂与有效量WEE1抑制剂的组合在制备用于治疗或预防有需要的哺乳动物中的白血病的药物中的用途，所述CHK1抑制剂为
(R)-N-(4-(3-氨基哌啶-1-基)-5-溴-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)异丁酰胺，并且其中WEE1抑制剂为MK-1775。
21.根据权利要求20所述的用途，其中所述CHK1和WEE1抑制剂彼此先后或合并施用。
22.根据权利要求20所述的用途，其中所述CHK1和WEE1抑制剂按顺序施用。
23.一种试剂盒，包含CHK1抑制剂和WEE1抑制剂，所述CHK1抑制剂为(R)-N-(4-(3-氨基哌啶-1-基)-5-溴-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)异丁酰胺，并且其中WEE1抑制剂为MK-1775。
24.根据权利要求23所述的试剂盒，其进一步包括关于将CHK1抑制剂和WEE1抑制剂同时、依次或分开施用的指导。
25.一种试剂盒，包含：
(a)CHK1抑制剂，所述CHK1抑制剂为(R)-N-(4-(3-氨基哌啶-1-基)-5-溴-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)异丁酰胺；和
(b)WEE1抑制剂，其中WEE1抑制剂为MK-1775，
以便以组合方式用于治疗或预防白血病。
26.根据权利要求25所述的试剂盒，其进一步包括关于将CHK1抑制剂和WEE1抑制剂同时、依次或分开施用的指导。
27.一种试剂盒，包含：
(a)CHK1抑制剂，所述CHK1抑制剂为(R)-N-(4-(3-氨基哌啶-1-基)-5-溴-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)异丁酰胺；和
(b)WEE1抑制剂，其中WEE1抑制剂为MK-1775，和
(c)DNA损伤剂，
以便以组合方式用于治疗或预防白血病。
28.根据权利要求27所述的试剂盒，其进一步包括关于将CHK1抑制剂和WEE1抑制剂同时、依次或分开施用的指导。
29.一种试剂盒，包含：
(a)含有CHK1抑制剂的药物组合物，所述CHK1抑制剂为(R)-N-(4-(3-氨基哌啶-1-基)-5-溴-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)异丁酰胺；和
(b)含有WEE1抑制剂的药物组合物，其中WEE1抑制剂为MK-1775，
以便以组合方式用于治疗或预防白血病。
30.根据权利要求29所述的试剂盒，其进一步包括关于将CHK1抑制剂和WEE1抑制剂同时、依次或分开施用的指导。
31.一种试剂盒，包含：
(a)含有CHK1抑制剂的药物组合物，所述CHK1抑制剂为(R)-N-(4-(3-氨基哌啶-1-基)-5-溴-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)异丁酰胺；
(b)含有WEE1抑制剂的药物组合物，其中WEE1抑制剂为MK-1775，和
(c)含有DNA损伤剂的药物组合物，
以便以组合方式用于治疗或预防白血病。
32.根据权利要求31所述的试剂盒，其进一步包括关于将CHK1抑制剂和WEE1抑制剂同时、依次或分开施用的指导。
33.根据权利要求1-7和20-22中任一项的用途，其中所述CHK1抑制剂以所述抑制剂的生物有效剂量、最大耐受剂量或生物有效剂量与最大耐受剂量之间的量施用。
34.根据权利要求8-13中任一项的组合物，其中所述CHK1抑制剂以所述抑制剂的生物有效剂量、最大耐受剂量或生物有效剂量与最大耐受剂量之间的量施用。
35.根据权利要求14-19中任一项的组合产品，其中所述CHK1抑制剂以所述抑制剂的生物有效剂量、最大耐受剂量或生物有效剂量与最大耐受剂量之间的量施用。
36.或根据权利要求23-32中任一项所述的试剂盒，其中所述CHK1抑制剂以所述抑制剂的生物有效剂量、最大耐受剂量或生物有效剂量与最大耐受剂量之间的量施用。
37.根据权利要求33所述的用途，其中所述CHK1抑制剂以所述抑制剂的最大耐受剂量施用。
38.根据权利要求34所述的组合物，其中所述CHK1抑制剂以所述抑制剂的最大耐受剂量施用。
39.根据权利要求35所述的组合产品，其中所述CHK1抑制剂以所述抑制剂的最大耐受剂量施用。
40.根据权利要求36所述的试剂盒，其中所述CHK1抑制剂以所述抑制剂的最大耐受剂量施用。
41.根据权利要求1-7和20-22中任一项的用途，其中所述WEE1抑制剂以所述抑制剂的生物有效剂量、最大耐受剂量或生物有效剂量与最大耐受剂量之间的量施用。
42.根据权利要求8-13中任一项的组合物，其中所述WEE1抑制剂以所述抑制剂的生物有效剂量、最大耐受剂量或生物有效剂量与最大耐受剂量之间的量施用。
43.根据权利要求14-19中任一项的组合产品，其中所述WEE1抑制剂以所述抑制剂的生物有效剂量、最大耐受剂量或生物有效剂量与最大耐受剂量之间的量施用。
44.根据权利要求23-32中任一项所述的试剂盒，其中所述WEE1抑制剂以所述抑制剂的生物有效剂量、最大耐受剂量或生物有效剂量与最大耐受剂量之间的量施用。
45.根据权利要求41所述的用途，其中所述WEE1抑制剂以所述抑制剂的最大耐受剂量施用。
46.根据权利要求42所述的组合物，其中所述WEE1抑制剂以所述抑制剂的最大耐受剂量施用。
47.根据权利要求43所述的组合产品，其中所述WEE1抑制剂以所述抑制剂的最大耐受剂量施用。
48.根据权利要求44所述的试剂盒，其中所述WEE1抑制剂以所述抑制剂的最大耐受剂量施用。
49.根据权利要求1-7和20-22中任一项的用途，其中所述白血病选自：骨髓性白血病、急性淋巴母细胞白血病和慢性淋巴母细胞白血病。
50.根据权利要求11-13中任一项的组合物，其中所述白血病选自：骨髓性白血病、急性淋巴母细胞白血病和慢性淋巴母细胞白血病。
51.根据权利要求25-32中任一项所述的试剂盒，其中所述白血病选自：骨髓性白血病、急性淋巴母细胞白血病和慢性淋巴母细胞白血病。
52.根据权利要求49的用途，其中骨髓性白血病为急性和慢性骨髓性白血病。
53.根据权利要求50的组合物，其中骨髓性白血病为急性和慢性骨髓性白血病。
54.根据权利要求51所述的试剂盒，其中骨髓性白血病为急性和慢性骨髓性白血病。
55.根据权利要求1-7和20-22中任一项的用途，其中白血病包括急性骨髓性白血病、急性淋巴细胞白血病、慢性骨髓性白血病和慢性淋巴细胞白血病。
56.根据权利要求11-13中任一项的组合物，其中白血病包括急性骨髓性白血病、急性淋巴细胞白血病、慢性骨髓性白血病和慢性淋巴细胞白血病。
57.根据权利要求25-32中任一项所述的试剂盒，其中白血病包括急性骨髓性白血病、急性淋巴细胞白血病、慢性骨髓性白血病和慢性淋巴细胞白血病。
58.根据权利要求1-7和20-22中任一项的用途，其中所述白血病选自急性骨髓性白血病、急性淋巴母细胞白血病、慢性骨髓性白血病和慢性淋巴细胞白血病。
59.根据权利要求11-13中任一项的组合物，其中所述白血病选自急性骨髓性白血病、急性淋巴母细胞白血病、慢性骨髓性白血病和慢性淋巴细胞白血病。
60.根据权利要求25-32中任一项所述的试剂盒，其中所述白血病选自急性骨髓性白血病、急性淋巴母细胞白血病、慢性骨髓性白血病和慢性淋巴细胞白血病。
61.根据权利要求1-7和20-22中任一项的用途，进一步包含DNA损伤剂。
62.根据权利要求8-13中任一项的组合物，进一步包含DNA损伤剂。
63.根据权利要求14-19中任一项的组合产品，进一步包含DNA损伤剂。
64.根据权利要求23-32中任一项所述的试剂盒，进一步包含DNA损伤剂。
65.根据权利要求61所述的用途，其中所述DNA损伤剂选自吉西他滨、伊立替康、替莫唑胺、卡培他滨、拓扑替康、顺铂、奥沙利铂、卡铂、喜树碱、阿糖胞苷、氟尿嘧啶、环磷酰胺、磷酸依托泊苷、替尼泊苷、多柔比星、柔红霉素、培美曲塞和辐射。
66.根据权利要求62所述组合物，其中所述DNA损伤剂选自吉西他滨、伊立替康、替莫唑胺、卡培他滨、拓扑替康、顺铂、奥沙利铂、卡铂、喜树碱、阿糖胞苷、氟尿嘧啶、环磷酰胺、磷酸依托泊苷、替尼泊苷、多柔比星、柔红霉素、培美曲塞和辐射。
67.根据权利要求63所述的组合产品，其中所述DNA损伤剂选自吉西他滨、伊立替康、替莫唑胺、卡培他滨、拓扑替康、顺铂、奥沙利铂、卡铂、喜树碱、阿糖胞苷、氟尿嘧啶、环磷酰胺、磷酸依托泊苷、替尼泊苷、多柔比星、柔红霉素、培美曲塞和辐射。
68.根据权利要求64所述的试剂盒，其中所述DNA损伤剂选自吉西他滨、伊立替康、替莫唑胺、卡培他滨、拓扑替康、顺铂、奥沙利铂、卡铂、喜树碱、阿糖胞苷、氟尿嘧啶、环磷酰胺、磷酸依托泊苷、替尼泊苷、多柔比星、柔红霉素、培美曲塞和辐射。
69.根据权利要求61所述的用途，其中所述DNA损伤剂选自吉西他滨、伊立替康、替莫唑胺、卡培他滨、喜树碱、顺铂、阿糖胞苷和氟尿嘧啶。
70.根据权利要求62所述的组合物，其中所述DNA损伤剂选自吉西他滨、伊立替康、替莫唑胺、卡培他滨、喜树碱、顺铂、阿糖胞苷和氟尿嘧啶。
71.根据权利要求63所述的组合产品，其中所述DNA损伤剂选自吉西他滨、伊立替康、替莫唑胺、卡培他滨、喜树碱、顺铂、阿糖胞苷和氟尿嘧啶。
72.根据权利要求64所述的试剂盒，其中所述DNA损伤剂选自吉西他滨、伊立替康、替莫唑胺、卡培他滨、喜树碱、顺铂、阿糖胞苷和氟尿嘧啶。
73.根据权利要求61所述的用途，其中所述DNA损伤剂选自吉西他滨、伊立替康、替莫唑胺和卡培他滨。
74.根据权利要求62所述的组合物，其中所述DNA损伤剂选自吉西他滨、伊立替康、替莫唑胺和卡培他滨。
75.根据权利要求63所述的组合产品，其中所述DNA损伤剂选自吉西他滨、伊立替康、替莫唑胺和卡培他滨。
76.根据权利要求64所述的试剂盒，其中所述DNA损伤剂选自吉西他滨、伊立替康、替莫唑胺和卡培他滨。
77.根据权利要求61所述的用途，其中所述DNA损伤剂选自吉西他滨、伊立替康、顺铂、奥沙利铂、卡铂和阿糖胞苷。
78.根据权利要求62所述的组合物，其中所述DNA损伤剂选自吉西他滨、伊立替康、顺铂、奥沙利铂、卡铂和阿糖胞苷。
79.根据权利要求63所述的组合产品，其中所述DNA损伤剂选自吉西他滨、伊立替康、顺铂、奥沙利铂、卡铂和阿糖胞苷。
80.根据权利要求64所述的试剂盒，其中所述DNA损伤剂选自吉西他滨、伊立替康、顺铂、奥沙利铂、卡铂和阿糖胞苷。
81.根据权利要求61所述的用途，其中所述DNA损伤剂选自吉西他滨和伊立替康。
82.根据权利要求62所述的组合物，其中所述DNA损伤剂选自吉西他滨和伊立替康。
83.根据权利要求63所述的组合产品，其中所述DNA损伤剂选自吉西他滨和伊立替康。
84.根据权利要求64所述的试剂盒，其中所述DNA损伤剂选自吉西他滨和伊立替康。
85.根据权利要求61所述的用途，其中所述DNA损伤剂选自顺铂、奥沙利铂和卡铂。
86.根据权利要求62所述的组合物，其中所述DNA损伤剂选自顺铂、奥沙利铂和卡铂。
87.根据权利要求63所述的组合产品，其中所述DNA损伤剂选自顺铂、奥沙利铂和卡铂。
88.根据权利要求64所述的试剂盒，其中所述DNA损伤剂选自顺铂、奥沙利铂和卡铂。
89.根据权利要求61所述的用途，其中所述DNA损伤剂为吉西他滨。
90.根据权利要求62所述的组合物，其中所述DNA损伤剂为吉西他滨。
91.根据权利要求63所述的组合产品，其中所述DNA损伤剂为吉西他滨。
92.根据权利要求64所述的试剂盒，其中所述DNA损伤剂为吉西他滨。
93.根据权利要求61所述的用途，其中所述DNA损伤剂为阿糖胞苷。
94.根据权利要求62所述的组合物，其中所述DNA损伤剂为阿糖胞苷。
95.根据权利要求63所述的组合产品，其中所述DNA损伤剂为阿糖胞苷。
96.根据权利要求64所述的试剂盒，其中所述DNA损伤剂为阿糖胞苷。
97.CHK1抑制剂与WEE1抑制剂的组合在制备用于治疗或预防白血病的药物中的用途，其中所述CHK1抑制剂以生物有效剂量、最大耐受剂量或生物有效剂量与最大耐受剂量之间的量施用，并且所述WEE1抑制剂以生物有效剂量与最大耐受剂量之间的量施用，所述CHK1抑制剂为
(R)-N-(4-(3-氨基哌啶-1-基)-5-溴-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)异丁酰胺，并且
其中WEE1抑制剂为MK-1775。
98.根据权利要求97所述的用途，其中所述CHK1和WEE1抑制剂彼此先后或合并施用。
99.根据权利要求97所述的用途，其中所述CHK1和WEE1抑制剂按顺序施用。
100.根据权利要求97所述的用途，其中所述CHK1抑制剂以所述抑制剂的最大耐受剂量施用。
101.根据权利要求97所述的用途，其中所述WEE1抑制剂以所述抑制剂的最大耐受剂量施用。
102.根据权利要求97所述的用途，其中所述白血病选自骨髓性白血病、急性淋巴母细胞白血病和慢性淋巴细胞白血病。
103.根据权利要求102所述的用途，其中骨髓性白血病为急性和慢性骨髓性白血病。
104.根据权利要求97所述的用途，其中白血病包括急性骨髓性白血病、急性淋巴细胞白血病、慢性骨髓性白血病和慢性淋巴细胞白血病。
105.根据权利要求97所述的用途，其中所述白血病选自急性骨髓性白血病、急性淋巴母细胞白血病、慢性骨髓性白血病和慢性淋巴细胞白血病。
106.根据权利要求97所述的用途，进一步包含DNA损伤剂。
107.根据权利要求106所述的用途，其中所述DNA损伤剂选自吉西他滨、伊立替康、替莫唑胺、卡培他滨、拓扑替康、顺铂、奥沙利铂、卡铂、喜树碱、阿糖胞苷、氟尿嘧啶、环磷酰胺、磷酸依托泊苷、替尼泊苷、多柔比星、柔红霉素、培美曲塞和辐射。
108.根据权利要求106所述的用途，其中所述DNA损伤剂选自吉西他滨、伊立替康、替莫唑胺、卡培他滨、喜树碱、顺铂、阿糖胞苷和氟尿嘧啶。
109.根据权利要求106所述的用途，其中所述DNA损伤剂选自吉西他滨、伊立替康、替莫唑胺和卡培他滨。
110.根据权利要求106所述的用途，其中所述DNA损伤剂选自吉西他滨、伊立替康、顺铂、奥沙利铂、卡铂和阿糖胞苷。
111.根据权利要求106所述的用途，其中所述DNA损伤剂选自吉西他滨和伊立替康。
112.根据权利要求106所述的用途，其中所述DNA损伤剂选自顺铂、奥沙利铂和卡铂。
113.根据权利要求106所述的用途，其中所述DNA损伤剂为吉西他滨。
114.根据权利要求106所述的用途，其中所述DNA损伤剂为阿糖胞苷。
115.根据权利要求97-114中任一项所述的用途，进一步包括在白血病的治疗中使用辐射。
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