CN105832741A

CN105832741A - Pi3k抑制剂与紫杉醇的药物组合物及其在制备抗肿瘤药物中的应用

Info

Publication number: CN105832741A
Application number: CN201510023509.2A
Authority: CN
Inventors: 郑媛婷; 赵贝; 蔡卫民; 李涛; 孙红
Original assignee: Fudan University
Current assignee: Fudan University
Priority date: 2015-01-16
Filing date: 2015-01-16
Publication date: 2016-08-10

Abstract

本发明属生物医药技术领域，具体涉及一种由治疗有效量的PI3K抑制剂5-(2,6-dimorpholinopyrimidin-4-yl)-4-(trifluoromethyl)pyridin-2-amine和紫杉醇组成的药物组合物。本发明的药物组合物作为联合制剂供同时、分开或顺序使用用于治疗肿瘤，经体外实验和体内实验，结果显示，能够获得优于两种药物单独使用的药效，对细胞的抑制作用更明显，对PANC-1体内移植瘤模型的抑制作用显著强。本发明的药物组合物可用于制备治疗肿瘤的药物。

Description

PI3K抑制剂与紫杉醇的药物组合物及其在制备抗肿瘤药物中的应用

技术领域

本发明属生物医药技术领域，涉及PI3K抑制剂与紫杉醇的药物组合物及其在制备抗肿瘤药物中的应用；所述的PI3K抑制剂为5-(2,6-dimorpholinopyrimidin-4-yl)-4-(trifluoromethyl)pyridin-2-amine。

背景技术

现有技术报道了近年来肿瘤的发病率呈逐年上升趋势。目前抗肿瘤药物治疗的方法包括化疗、分子靶向治疗、中医药以及支持对症治疗等。其中，分子靶向药物单独使用或联合化疗已成为肿瘤治疗领域新的研究热点。

研究显示，蛋白酪氨酸激酶是一类具有酪氨酸激酶活性的蛋白质，主要分布在细胞膜上，其功能是催化ATP的磷酸基转移到下游蛋白的酪氨酸(Tyr)残基上，使其发生磷酸化。蛋白酪氨酸激酶在细胞信号转导通路中占据了十分重要的地位，调节细胞的生长、分化、死亡等一系列生理生化过程，因此，酪氨酸激酶的功能和肿瘤的发生、发展密切相关；研究公开了磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)是脂激酶家族成员，可通过磷脂酰醇的3位磷酸化产生磷脂酰肌醇三磷酸脂(PIP3)来调节细胞代谢和生长。PI3K通路是人体癌细胞中最常发生的变异的位点之一，抑制该信号通路成为肿瘤预防和肿瘤靶向治疗的热点。

现有技术公开了紫杉醇是细胞有丝分裂抑制剂，因其独特的作用机制和良好的耐受性，被广泛用于多种肿瘤的治疗。

迄今为止，尚未见有关紫杉醇与PI3K抑制剂5-(2,6-dimorpholinopyrimidin-4-yl)-4-(trifluoromethyl)pyridin-2-amine联合应用于抗肿瘤的相关报道。

发明内容

本发明的目的是提供一种治疗肿瘤的药物组合物及其制备方法；具体涉及由PI3K抑制剂和紫杉醇组成的治疗肿瘤的药物组合物及其在制备抗肿瘤药物中的应用。

本发明所述的PI3K抑制剂为5-(2,6-dimorpholinopyrimidin-4-yl)-4-(trifluoromethyl)pyridine-2-amine。

具体的，本发明的治疗肿瘤的药物组合物，其特征在于，由治疗有效量的所述的PI3K抑制剂与治疗有效量的紫杉醇组成，其中紫杉醇与PI3K抑制剂的摩尔比为500:1～1:500。

本发明的治疗肿瘤的药物组合物，其中的紫杉醇与PI3K抑制剂作为联合制剂供同时、分开或顺序使用。

本发明中，紫杉醇可以碱基形式或者盐的形式存在，包括但不限于盐酸盐、硫酸盐等。

本发明中，PI3K抑制剂5-(2,6-dimorpholinopyrimidin-4-yl)-4-(trifluoromethyl)pyridine-2-amine可以碱基形式或者盐的形式存在，包括但不限于盐酸盐、硫酸盐等。

本发明还提供了一种试剂盒，其包括含有紫杉醇的第一单元和含有的PI3K抑制剂5-(2,6-dimorpholinopyrimidin-4-yl)-4-(trifluoromethyl)pyridine-2-amine的第二单元以及包装说明书或者标签，所述包装说明书或者标签指明试剂盒用于抗肿瘤的治疗。

所述的试剂盒中，紫杉醇可以碱基形式或者盐的形式存在，包括但不限于盐酸盐、硫酸盐等。

所述的试剂盒中，5-(2,6-dimorpholinopyrimidin-4-yl)-4-(trifluoromethyl)pyridine-2-amine可以碱基形式或者盐的形式存在，包括但不限于盐酸盐、硫酸盐等。

本发明还提供了一种产品，其包含5-(2,6-dimorpholinopyrimidin-4-yl)-4-(trifluor omethyl)pyridin-2-amine和紫杉醇，所述产品为在肿瘤治疗中分开、同时或先后使用的组合制品。

所述的产品中，紫杉醇可以碱基形式或者盐的形式存在，包括但不限于盐酸盐、硫酸盐等。

所述的产品中，5-(2,6-dimorpholinopyrimidin-4-yl)-4-(trifluoromethyl)pyridin-2-amine可以碱基形式或者盐的形式存在，包括但不限于盐酸盐、硫酸盐等。

本发明的药物组合物进行了体外人胰腺癌PANC-1、CFPAC-1细胞的细胞毒作用试验，结果显示，在PANC-1、CFPAC-1细胞实验中，5-(2,6-dimorpholinopyrimidin-4-yl)-4-(trifluoromethyl)pyridin-2-amine能明显增加紫杉醇的细胞毒作用，比单独使用紫杉醇或者5-(2,6-dimorpholinopyrimidin-4-yl)-4-(trifluoromethyl)pyridin-2-amine对细胞的抑制作用更明显，表明所述的紫杉醇与PI3K抑制剂作为联合制剂使用能显著增加抗肿瘤的效果。

本发明的药物组合物进行了实验动物体内实验，结果显示，其中的5-(2,6-dimorpholinopyrimidin-4-yl)-4-(trifluoromethyl)pyridin-2-amine与紫杉醇联用，具有显著的体内抗肿瘤作用，比单独使用紫杉醇或者5-(2,6-dimorpholinopyrimidin-4-yl)-4-(trifluoromethyl)pyridin-2-amine对PANC-1体内移植瘤模型的抑制作用更强。

本发明的有益效果：

本发明提供了紫杉醇和5-(2,6-dimorpholinopyrimidin-4-yl)-4-(trifluoromethyl)pyridin-2-amine的药物组合物，其中的紫杉醇与PI3K抑制剂作为联合制剂供同时、分开或顺序使用，其能明显增加各药物单独使用的抗肿瘤的作用，能提高临床肿瘤化疗的效果。

附图说明

图1为本发明的药物组合物对人胰腺癌细胞PANC-1(A)、CFPAC-1(B)的细胞毒作用试验结果，其中，细胞存活率采用MTT法测定。

图2为本发明的药物组合物对PANC-1细胞裸小鼠皮下移植瘤的生长抑制作用(A)以及对裸小鼠体重的影响(B)结果。

具体实施方式

以下结合具体实施例对本发明作进一步说明。但并不意味着本发明仅限于此。

实施例1

本发明的药物组合物对人胰腺癌PANC-1、CFPAC-1细胞的细胞毒作用试验

本实施例中，采用本发明的药物组合物，其由治疗有效量的所述的PI3K抑制剂与治疗有效量的紫杉醇组成，其中紫杉醇与PI3K抑制剂的摩尔比为500:1～1:500。

实验材料：

人胰腺癌PANC-1、CFPAC-1细胞(购自中科院上海细胞库)于37℃，5％CO₂条件下常规培养，培养基为含10％胎牛血清(Hyclone)的DMEM和IMDM(Gibco)。紫杉醇标准品购自中国药品生物制品检定所，母液50mM由DMSO配制。5-(2,6-dimorpholinopyrimidin-4-yl)-4-(trifluoromethyl)pyridin-2-amine购于Selleck公司(美国)，母液10mM DMSO配。MTT购自Sigma(美国)。

实验方法：

(1).分化良好的细胞经胰酶消化，悬浮于常规培养基中，并调节细胞密度为5×10⁴细胞/ml。100μl/孔接种于96孔培养板中，于培养箱中培养过夜；

(2).次日更换培养基，加入系列浓度的药物(具体浓度如图所示，DMSO的浓度小于0.2％)，将给药后的细胞于37℃，5％CO₂条件下培养48小时；

(3).每孔加入10μl MTT(5mg/ml)溶液，继续在培养箱中培养4小时；

(4).洗去培养基，加入100μl DMSO，置于摇床上37℃使充分溶解，以检测波长570nm测定吸光度的值。计算细胞的生长抑制率。N＝4，实验平行三次。

实验结果显示(如图1所示)：在PANC-1、CFPAC-1细胞试验中5-(2,6-dimorpholinopyrimidin-4-yl)-4-(trifluoromethyl)pyridin-2-amine能明显增加紫杉醇的细胞毒作用。

实施例2对裸小鼠皮下移植瘤的生长抑制作用实验

本实施例中，采用本发明的药物组合物，其中的紫杉醇与PI3K抑制剂作为联合制剂供同时、分开或顺序使用；其中紫杉醇与PI3K抑制剂的摩尔比为500:1～1:500；

实验材料：

裸小鼠购自上海西普尔—必凯实验动物有限公司；其余材料同实施例1。

实验方法：

(1).收集融合度80％～90％的PANC-1细胞，台盼蓝染色后计数，细胞活力大于90％，制成合适密度的细胞悬液，用1mL注射器(26Gauge针头)接种在裸小鼠的右侧皮下，每只0.1mL；

(2).平均肿瘤体积达100-200mm³时，随机分组给药，各组分别为：对照组、PI3K抑制剂单用组、紫杉醇单用组和联合用药组。肿瘤体积和动物体重每周测量2～3次，根据体重调整给药量，连续3周；

(3).用肿瘤生长体积计算肿瘤生长抑制率(TGI,tumor growth inhibition，％)，计算公式:

TGI(％)＝(ΔTVcontrol-ΔTVtest)/(ΔTVcontrol-ΔTVtest)×100％；

ΔTVcontrol为对照组肿瘤体积增加绝对值的平均值

ΔTVtest为药物受试组肿瘤体积增加绝对值的平均值；

()4.根据体重考察药物的毒性作用。

实验结果显示(如图2所示)：在PANC-1的裸小鼠皮下移植瘤模型上，紫杉醇与PI3K抑制剂5-(2,6-dimorpholinopyrimidin-4-yl)-4-(trifluoromethyl)pyridin-2-amine联用，具有良好的抗肿瘤作用，明显强于各药物单独使用的抗肿瘤的效果。

Claims

1.PI3K抑制剂与紫杉醇的药物组合物，其特征在于，由治疗有效量的PI3K抑制剂与治疗有效量的紫杉醇组成，其中紫杉醇与PI3K抑制剂的摩尔比为500:1～1:500；

其中的紫杉醇与PI3K抑制剂作为联合制剂供同时、分开或顺序使用；

所述的PI3K抑制剂为5-(2,6-dimorpholinopyrimidin-4-yl)-4-(trifluoromethyl)pyridin-2-amine。

2.根据权利要求1所述的PI3K抑制剂与紫杉醇的药物组合物，其特征在于，所述的紫杉醇以碱基形式或者盐的形式存在，所述盐选自盐酸盐或硫酸盐。

3.根据权利要求1所述的PI3K抑制剂与紫杉醇的药物组合物，其特征在于，所述的5-(2,6-dimorpholinopyrimidin-4-yl)-4-(trifluoromethyl)pyridine-2-amine以碱基形式或者盐的形式存在，所述盐选自盐酸盐或硫酸盐。

4.PI3K抑制剂与紫杉醇的药物组合物在制备治疗肿瘤的药物中的用途。

5.一种试剂盒，其特征在于，包括含有紫杉醇的第一单元和含有的5-(2,6-dimorpholinopyrimidin-4-yl)-4-(trifluoromethyl)pyridin-2-amine的第二单元以及包装说明书或者标签，所述包装说明书或者标签指明试剂盒用于抗肿瘤的治疗。

6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述的紫杉醇以碱基形式或者盐的形式存在，所述盐选自盐酸盐或硫酸盐。

7.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述的5-(2,6-dimorpholinopyrimidin-4-yl)-4-(trifluoromethyl)pyridin-2-amine以碱基形式或者盐的形式存在，所述盐选自盐酸盐或硫酸盐。

8.一种产品，其特征在于，包含5-(2,6-dimorpholinopyrimidin-4-yl)-4-(trifluoromethyl)pyridin-2-amine和紫杉醇，所述产品为在肿瘤治疗中分开、同时或先后使用的组合制品。

9.根据权利要求8所述的产品，其特征在于，所述的紫杉醇以碱基形式或者盐的形式存在，所述盐选自盐酸盐或硫酸盐。

10.根据权利要求8所述的产品，其特征在于，所述的5-(2,6-dimorpholinopyrimidin-4-yl)-4-(trifluoromethyl)pyridin-2-amine以碱基形式或者盐的形式存在，所述盐选自盐酸盐或硫酸盐。