CN105832758A

CN105832758A - 一种治疗肿瘤的药物组合物及其制备方法

Info

Publication number: CN105832758A
Application number: CN201510024274.9A
Authority: CN
Inventors: 郑媛婷; 李涛; 蔡卫民; 孙红; 赵贝
Original assignee: Fudan University
Current assignee: Fudan University
Priority date: 2015-01-16
Filing date: 2015-01-16
Publication date: 2016-08-10

Abstract

本发明属生物医药技术领域，具体涉及一种由治疗有效量的PI3K抑制剂5-(2,6-dimorpholinopyrimidin-4-yl)-4-(trifluoromethyl)pyridin-2-amine和吉西他滨组成的药物组合物及其制备方法。本发明的药物组合物作为联合制剂供同时、分开或顺序使用用于治疗肿瘤，经体外实验和体内实验，结果显示，能够获得优于两种药物单独使用的药效，对细胞的抑制作用更明显，对PANC-1体内移植瘤模型的抑制作用显著强。

Description

一种治疗肿瘤的药物组合物及其制备方法

技术领域

本发明属生物医药技术领域，涉及一种治疗肿瘤的药物组合物及其制备方法；具体涉及治疗肿瘤的PI3K抑制剂5-(2,6-dimorpholinopyrimidin-4-yl)-4-(trifluoromethyl)pyridin-2-amine和吉西他滨的药物组合物及其制备方法。

背景技术

据报道，近年来肿瘤的发病率呈逐年上升趋势。目前抗肿瘤药物治疗的方法包括化疗、分子靶向治疗、中医药以及支持对症治疗等。随着分子生物学和基因组学的发展，研究发现肿瘤的发生、发展和转移与多种基因突变及细胞信号传导通路的异常密切相关，因此，分子靶向药物单独使用或联合干预已成为肿瘤治疗技术领域中新的研究热点。研究显示，蛋白酪氨酸激酶是一类具有酪氨酸激酶活性的蛋白质，主要分布在细胞膜上，其功能是催化ATP的磷酸基转移到下游蛋白的酪氨酸(Tyr)残基上，使其发生磷酸化。蛋白酪氨酸激酶在细胞信号转导通路中占据了十分重要的地位，调节细胞的生长、分化、死亡等一系列生理生化过程，因此，酪氨酸激酶的功能和肿瘤的发生、发展密切相关；磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)的主要功能是催化PIP2转化为PIP3，从而激活下游信号Akt/mTOR。研究发现，PI3K-AKT-mTOR在广泛的人类肿瘤谱中失调，该通路中某些基因突变所致的功能异常或缺失会引起正常细胞转化，促进肿瘤细胞增殖和存活并介导肿瘤细胞的侵袭和迁移，因此，PI3K-AKT-mTOR信号通路已经成为一个很有希望的抗肿瘤治疗靶点。

迄今为止，尚未见有5-(2,6-dimorpholinopyrimidin-4-yl)-4-(trifluoromethyl)pyridine-2-amine与盐酸吉西他滨的组合药物用于抗肿瘤的相关报道。

发明内容

本发明的目的是提供一种治疗肿瘤的药物组合物及其制备方法；具体涉及由PI3K抑制剂和吉西他滨组成的治疗肿瘤的药物组合物及其制备方法。

本发明所述的PI3K抑制剂为5-(2,6-dimorpholinopyrimidin-4-yl)-4-(trifluoromethyl)pyridine-2-amine。

具体的，本发明的治疗肿瘤的药物组合物，其特征在于，由治疗有效量的所述的PI3K抑制剂与治疗有效量的吉西他滨组成，其中吉西他滨与PI3K抑制剂的摩尔比为500:1～1:500。

本发明的治疗肿瘤的药物组合物，其中的吉西他滨与PI3K抑制剂作为联合制剂供同时、分开或顺序使用。

本发明中，吉西他滨可以碱基形式或者盐的形式存在，包括但不限于盐酸盐、硫酸盐等。

本发明中，PI3K抑制剂5-(2,6-dimorpholinopyrimidin-4-yl)-4-(trifluoromethyl)pyridine-2-amine可以碱基形式或者盐的形式存在，包括但不限于盐酸盐、硫酸盐等。

本发明还提供了一种试剂盒，其包括含有吉西他滨的第一单元和含有的PI3K抑制剂5-(2,6-dimorpholinopyrimidin-4-yl)-4-(trifluoromethyl)pyridin-2-amine第二单元以及包装说明书或者标签，所述包装说明书或者标签指明试剂盒用于抗肿瘤的治疗。

所述的试剂盒中，吉西他滨可以碱基形式或者盐的形式存在，包括但不限于盐酸盐、硫酸盐等。

所述的试剂盒中，5-(2,6-dimorpholinopyrimidin-4-yl)-4-(trifluoromethyl)pyridin-2-amine可以碱基形式或者盐的形式存在，包括但不限于盐酸盐、硫酸盐等。

本发明还提供了一种产品，其包含

5-(2,6-dimorpholinopyrimidin-4-yl)-4-(trifluoromethyl)pyridin-2-amine和吉西他滨，所述产品为在肿瘤治疗中分开、同时或先后使用的组合制品。

所述的产品中，吉西他滨可以碱基形式或者盐的形式存在，包括但不限于盐酸盐、硫酸盐等。

所述的产品中，5-(2,6-dimorpholinopyrimidin-4-yl)-4-(trifluoromethyl)pyridin-2-amine可以碱基形式或者盐的形式存在，包括但不限于盐酸盐、硫酸盐等。

本发明的药物组合物进行了体外人胰腺癌PANC-1、CFPAC-1、Bxpc-3细胞的细胞毒作用试验，结果表明，所述的吉西他滨与PI3K抑制剂作为联合制剂使用能显著增加抗肿瘤的效果。

本发明中，将5-(2,6-dimorpholinopyrimidin-4-yl)-4-(trifluoromethyl)pyridine-2-amine与吉西他滨的组合物用于人胰腺癌PANC-1、CFPAC-1、Bxpc3细胞实验，结果显示，比单独使用吉西他滨或者5-(2,6-dimorpholinopyrimidin-4-yl)-4-(trifluoromethyl)pyridin-2-amine对细胞的抑制作用更明显。

本发明的药物组合物进行了实验动物体内实验，结果显示，其中的5-(2,6-dimorpholinopyrimidin-4-yl)-4-(trifluoromethyl)pyridin-2-amine与盐酸吉西他滨联用，具有显著的体内抗肿瘤作用，比单独使用吉西他滨或者5-(2,6-dimorpholinopyrimidin-4-yl)-4-(trifluoromethyl)pyridin-2-amine对PANC-1体内移植瘤模型的抑制作用显著强。

本发明的有益效果：本发明提供了治疗肿瘤的药物组合物，其中的吉西他滨与PI3K抑制剂作为联合制剂供同时、分开或顺序使用，其明显较单用增加了抗肿瘤的作用，提高了化疗的效果。

附图说明

图1为本发明的药物组合物对人胰腺癌细胞PANC-1(A)、CFPAC-1(B)、Bxpc-3(C)的细胞毒作用，其中细胞存活率采用MTT法测定；其中的盐酸吉西他滨和PI3K抑制剂5-(2,6-dimorpholinopyrimidin-4-yl)-4-(trifluoromethyl)pyridin-2-amine联用。

图2为本发明的药物组合物对对PANC-1细胞裸小鼠皮下移植瘤的生长抑制作用(A)以及对裸小鼠体重的影响(B)；其中，盐酸吉西他滨和5-(2,6-dimorpholinopyrimidin-4-yl)-4-(trifluoromethyl)pyridin-2-amine联用。

具体实施方式

以下结合具体实施例对本发明作进一步说明。但并不意味着本发明仅限于此。

实施例1

对人胰腺癌PANC-1、CFPAC-1、Bxpc-3细胞的细胞毒作用试验

本实施例中，采用本发明的药物组合物，其中的吉西他滨与PI3K抑制剂作为联合制剂供同时、分开或顺序使用；其中吉西他滨与PI3K抑制剂的摩尔比为500:1～1:500；

实验材料：

人胰腺癌PANC-1、CFPAC-1、Bxpc-3细胞(购自中科院上海细胞库)于37℃，5％CO₂条件下常规培养，培养基为含10％胎牛血清(Hyclone)的DMEM和IMDM(Gibco)；盐酸吉西他滨标准品购自中国药品生物制品检定所，母液50mM由DMSO配制；5-(2,6-dimorpholinopyrimidin-4-yl)-4-(trifluoromethyl)pyridin-2-amine购于Selleck公司(美国)，母液10mM DMSO配。MTT购自Sigma(美国)；

实验方法：

(1)分化良好的细胞经胰酶消化，悬浮于常规培养基中，并调节细胞密度为5×10⁴细胞/ml，100μl/孔接种于96孔培养板中，于培养箱中培养过夜；

(2)次日更换培养基，加入系列浓度的药物(具体浓度如图1所示，DMSO的浓度小于0.2％)，将给药后的细胞于37℃，5％CO₂条件下培养48小时；

(3)每孔加入10μl MTT(5mg/ml)溶液，继续在培养箱中培养4小时；

(4)洗去培养基，加入100μl DMSO，置于摇床上37℃使充分溶解，以检测波长570nm测定吸光度的值,。计算细胞的生长抑制率,N＝4，实验平行三次。

实验结果显示(如图1所示)，在PANC-1、CFPAC-1、Bxpc-3细胞上

5-(2,6-dimorpholinopyrimidin-4-yl)-4-(trifluoromethyl)pyridin-2-amine增加了盐酸吉西他滨的细胞毒作用。

实施例2

对裸小鼠皮下移植瘤的生长抑制作用实验

本实施例中，采用本发明的药物组合物，其中的吉西他滨与PI3K抑制剂作为联合制剂供同时、分开或顺序使用；其中吉西他滨与PI3K抑制剂的摩尔比为500:1～1:500；5-(2,6-dimorpholinopyrimidin-4-yl)-4-(trifluoromethyl)pyridin-2-amine和盐酸吉西他滨联用。

实验材料：

裸小鼠购自上海西普尔—必凯实验动物有限公司。其余材料同实施例1。

实验方法：

(1).收集融合度80％～90％的PANC-1细胞，台盼蓝染色后计数，细胞活力大于90％，制成合适密度的细胞悬液，用1mL注射器(26Gauge针头)接种在裸小鼠的右侧皮下，每只0.1mL；

(2).平均肿瘤体积达100-200mm³时，随机分组给药，各组分别为：对照组、PI3K抑制剂单用组、吉西他滨单用组和联合用药组,肿瘤体积和动物体重每周测量2～3次，根据体重调整给药量，连续3周；

(3).用肿瘤生长体积计算肿瘤生长抑制率(TGI,tumor growth inhibition，％)，计算公式:

TGI(％)＝(ΔTVcontrol-ΔTVtest)/(ΔTVcontrol-ΔTVtest)×100％；

ΔTVcontrol为对照组肿瘤体积增加绝对值的平均值,

ΔTVtest为药物受试组肿瘤体积增加绝对值的平均值,

(4).根据体重考察药物的毒性作用。

实验结果显示(如图2所示)，在PANC-1的裸小鼠皮下移植瘤模型上，盐酸吉西他滨联用5-(2,6-dimorpholinopyrimidin-4-yl)-4-(trifluoromethyl)pyridin-2-amine具有良好的抗肿瘤作用，明显强于两药单用的抗肿瘤作用。

Claims

1.一种治疗肿瘤的药物组合物，其特征在于，由治疗有效量的PI3K抑制剂与治疗有效量的吉西他滨组成，其中吉西他滨与PI3K抑制剂的摩尔比为500:1～1:500；

其中的吉西他滨与PI3K抑制剂作为联合制剂供同时、分开或顺序使用；

所述的PI3K抑制剂为5-(2,6-dimorpholinopyrimidin-4-yl)-4-(trifluoromethyl)pyridine-2-amine。

2.根据权利要求1所述的治疗肿瘤的药物组合物，其特征在于，所述的吉西他滨以碱基形式或者盐的形式存在，所述盐选自盐酸盐或硫酸盐。

3.根据权利要求1所述的治疗肿瘤的药物组合物，其特征在于，所述的5-(2,6-dimorpholinopyrimidin-4-yl)-4-(trifluoromethyl)pyridin-2-amine以碱基形式或者盐的形式存在，所述盐选自盐酸盐或硫酸盐。

4.一种试剂盒，其特征在于，包括含有吉西他滨的第一单元和含有的5-(2,6-dimorpholinopyrimidin-4-yl)-4-(trifluoromethyl)pyridin-2-amine第二单元以及包装说明书或者标签，所述包装说明书或者标签指明试剂盒用于抗肿瘤的治疗。

5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述的吉西他滨以碱基形式或者盐的形式存在，所述盐选自盐酸盐或硫酸盐。

6.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述的5-(2,6-dimorpholinopyrimidin-4-yl)-4-(trifluoromethyl)pyridin-2-amine以碱基形式或者盐的形式存在，所述盐选自盐酸盐或硫酸盐。

7.一种产品，其特征在于，包含5-(2,6-dimorpholinopyrimidin-4-yl)-4-(trifluoromethyl)pyridin-2-amine和吉西他滨，所述产品为在肿瘤治疗中分开、同时或先后使用的组合制品。

8.根据权利要求7所述的产品，其特征在于，所述的吉西他滨以碱基形式或者盐的形式存在，所述盐选自盐酸盐或硫酸盐。

9.根据权利要求7所述的产品，其特征在于，所述的5-(2,6-dimorpholinopyrimidin-4-yl)-4-(trifluoromethyl)pyridin-2-amine以碱基形式或者盐的形式存在，所述盐选自盐酸盐或硫酸盐。