CN103435673A

CN103435673A - 一种蚕用蜕皮甾酮的制备方法

Info

Publication number: CN103435673A
Application number: CN2013103893348A
Authority: CN
Inventors: 姚书兰
Original assignee: SICHUAN LONGHAIYANG ANIMAL PHARMACEUTICAL Co Ltd
Current assignee: SICHUAN LONGHAIYANG ANIMAL PHARMACEUTICAL Co Ltd
Priority date: 2013-08-30
Filing date: 2013-08-30
Publication date: 2013-12-11

Abstract

本发明公开了一种蚕用蜕皮甾酮的制备方法，把筋骨草熬煮回流提取，收集到的滤液经过澄清剂澄清后减压浓缩获得固体残留物，然后用甲醇-乙酸乙酯溶液溶解固体残留物，减压浓缩去除有机溶剂后得到蜕皮甾酮浸膏粗品，用大孔树脂和硅胶层析柱分离纯化蜕皮甾酮，最后减压浓缩获得蜕皮甾酮干品。本发明制得的蜕皮甾酮干品配成的蜕皮液纯度高，能够量化使用，蜕皮甾酮干品便于储存，保存时间长，使用该蜕皮甾酮干品配制的蜕皮液，家蚕生长发育整齐，上蔟整齐。

Description

一种蚕用蜕皮甾酮的制备方法

技术领域

本发明的实施方式涉及中兽药加工制造领域，更具体地，本发明的实施方式涉及一中用于配制蚕用蜕皮液的蜕皮甾酮的制备方法。

背景技术

现有的蚕用蜕皮液的制造工艺为传统的生产工艺，其制备方法为“取筋骨草5000g，切成小段，加水煎煮两次，每次1小时，过滤去除药渣，合并滤液，减压浓缩至约8000ml，加人乙醇25000ml，搅拌后静置24小时，滤过，滤液减压回收乙醇，将余液浓缩至约5000ml，加入乙醇20000ml，搅拌，静置12小时，滤过，滤液减压回收乙醇，余液浓缩至约900ml，滤过，加苯甲酸5g，加水适量，调节吸收度至规定范围，灌封，即得”。筋骨草含脱皮甾酮（ecdysterone）、杯苋甾酮(cyasterone)、筋骨草甾酮B和C（ajugasteroneB,C）、筋骨草内酯、筋骨草糖、黄酮甙、皂甙及生物碱等多种成分，而在这么多成分中，蚕用蜕皮液起治疗作用的只有脱皮甾酮（ecdysterone），其他均为无效成分。通过传统制造工艺方法提取的蚕用蜕皮液有效成分纯度不高，在使用上没有量化的标准，容易使家蚕生长不整齐，上蔟不整齐；而且传统工艺生产的蚕用蜕皮液在提取后必须在很短的时间内灌封完毕，不便于储存。

发明内容

本发明克服了现有技术制作的蚕用蜕皮液纯度低、不能制作使用的量化标准且不便于储存的不足，提供一种蚕用蜕皮甾酮的制备方法的实施方式，以期望提高蚕用蜕皮液的纯度，使其能够制作使用的量化标准且要便于储存。

为解决上述的技术问题，本发明的一种实施方式采用以下技术方案：

一种蚕用蜕皮甾酮的制备方法，包括以下步骤：

1）向粉碎的筋骨草中加入水，搅拌，升温至80℃-100℃，回流提取45分钟～75分钟，趁热过滤，得到滤液和药渣；

2）向药渣中加水，搅拌，升温至80℃-100℃，回流提取45分钟～75分钟，趁热过滤，得到滤液和药渣，重复回流提取一次，收集滤液；

3）控制温度在50℃-80℃，向滤液中加入澄清剂Ⅰ，每隔25分钟～30分钟搅拌一次，100分钟～120分钟后过滤，收集滤液；

4）控制温度在50℃-80℃，向滤液中加入澄清剂Ⅱ，每隔25分钟～30分钟搅拌一次，100分钟～120分钟后过滤，收集滤液，减压浓缩至干，得到固体残留物；

5）向固体残留物中加入甲醇-乙酸乙酯溶液，搅拌过滤，收集滤液，加入适量水，减压浓缩去除甲醇-乙酸乙酯溶液，得到蜕皮甾酮浸膏粗品；

6）先用大孔树脂吸附蜕皮甾酮浸膏粗品，然后用水洗脱，再用乙醇-水溶液梯度洗脱，收集洗脱液；

7）用硅胶柱层析纯化洗脱液，减压浓缩至干，得到蜕皮甾酮干品。更进一步的技术方案是：步骤1）所述向粉碎的筋骨草中加入水的量为每使用1kg筋骨草加10L。

更进一步的技术方案是：步骤2）所述向药渣中加入水的量为每使用1kg筋骨草加5L。

更进一步的技术方案是：步骤3）加入的所述澄清剂Ⅰ为1%的ZTCl+1的1%的醋酸溶液，所述澄清剂Ⅰ的量为每使用1kg筋骨草加1L。

更进一步的技术方案是：步骤4）加入的所述澄清剂Ⅱ为5%的ZTCl+1的水溶液，所述澄清剂Ⅱ的量为每使用1kg筋骨草加0.5L。

更进一步的技术方案是：步骤5）加入的所述甲醇-乙酸乙酯溶液的量为每使用1kg筋骨草加5L，甲醇与乙酸乙酯的比例为1:5。

更进一步的技术方案是：步骤6）所述用水洗脱使用的水为每使用1kg筋骨草用20L。

更进一步的技术方案是：步骤6）所述乙醇-水溶液进行梯度洗脱的浓度梯度依次为10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%。

更进一步的技术方案是：步骤6）所述大孔树脂为HPD600。

与现有技术相比，本发明的有益效果之一是：本发明制得的蜕皮甾酮干品配成的蜕皮液纯度高，能够量化使用，蜕皮甾酮干品便于储存，保存时间长，使用该蜕皮甾酮干品配制的蜕皮液，家蚕生长发育整齐，上蔟整齐。

具体实施方式

为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下通过实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

本发明使用筋骨草提取蜕皮甾酮，首先需要将蜕皮甾酮从筋骨草中分离出来，然后进行纯化得到纯度较高的蜕皮甾酮干品，蜕皮甾酮干品便于保存，且使用也很方便，只需按照普通的家蚕蜕皮甾酮使用处方即可配制蜕皮液使用。

实施例1

取5kg筋骨草，将其粉碎，然后加入50L水进行搅拌熬煮，温度控制在90℃左右，然后使用多功能提取罐回流提取1小时，趁热过滤，滤液保存待用，滤渣继续进行粗提取两次，其方法与上述粗提取方法相同，只是向药渣中加入的水每次均为25L，滤渣进行两次提取后弃之，收集上述三次粗提取所得的滤液待用。将粗提取过程中收集到的滤液的温度控制在70℃左右，向滤液中加入5L1%的ZTCl+1的1%的醋酸溶液，每隔30分钟搅拌一次，两小时后过滤，收集滤液，继续保持70℃左右的温度，向滤液中加入2.5L5%的ZTCl+1的水溶液，每隔30分钟搅拌一次，两小时后过滤，收集滤液，采用减压浓缩的方法获得滤液中的固体残留物。该固体残留物中有大量从筋骨草中提取出来的蜕皮甾酮。向该固体残留物中加入甲醇-乙酸乙酯溶液25L，甲醇与乙酸乙酯的比例为1:5，搅拌过滤，收集滤液，加入1L水，减压浓缩去除甲醇-乙酸乙酯溶液，得到蜕皮甾酮浸膏粗品。用HPD600大孔树脂吸附蜕皮甾酮浸膏粗品，然后用100L水洗脱，再用浓度梯度依次为10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%的乙醇-水溶液进行洗脱，收集洗脱液，用硅胶柱层析纯化洗脱液，减压浓缩至干，得到蜕皮甾酮干品，蜕皮甾酮干品可直接用于蜕皮液的配置。

根据多次测量提取蜕皮甾酮的收率获得如下数据：

批号	投料（g）	得量（g）	收率（%）
				01	5000	101	2.02%
02	5000	99	1.98%
				03	5000	100	2%

按照“脱皮甾酮”用于家蚕的处方量，每100g脱皮甾酮干品（5000g筋骨草原料）配制成蚕用蜕皮液可用于1000张蚕，而按照传统制造工艺生产每5000g筋骨草生产的蚕用蜕皮液只可用于200张蚕（参见《2010版中国兽药典》和《兽药国家标准兽药地方标准上升国家标准》第二册）。

通过蚕用蜕皮液的新型制造工艺提取脱皮甾酮是干品，容易储存，在常温下最长储存时间可达2年，而按照传统制造工艺生产蚕用蜕皮液的原料为液体，按照制剂规范，常温储存时间不得超过24小时。

实施例2

取2kg筋骨草，将其粉碎，然后加入20L水进行搅拌熬煮，温度控制在80℃左右，然后使用多功能提取罐回流提取45分钟，趁热过滤，滤液保存待用，滤渣继续进行粗提取两次，其方法与上述粗提取方法相同，只是向药渣中加入的水每次均为10L，滤渣进行两次提取后弃之，收集上述三次粗提取所得的滤液待用。将粗提取过程中收集到的滤液的温度控制在60℃左右，向滤液中加入2L1%的ZTCl+1的1%的醋酸溶液，每隔25分钟搅拌一次，100分钟后过滤，收集滤液，继续保持60℃左右的温度，向滤液中加入1L5%的ZTCl+1的水溶液，每隔25分钟搅拌一次，100分钟后过滤，收集滤液，采用减压浓缩的方法获得滤液中的固体残留物。该固体残留物中有大量从筋骨草中提取出来的蜕皮甾酮。向该固体残留物中加入甲醇-乙酸乙酯溶液10L，甲醇与乙酸乙酯的比例为1:5，搅拌过滤，收集滤液，加入0.5L水，减压浓缩去除甲醇-乙酸乙酯溶液，得到蜕皮甾酮浸膏粗品。用HPD600大孔树脂吸附蜕皮甾酮浸膏粗品，然后用40L水洗脱，再用浓度梯度依次为10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%的乙醇-水溶液进行洗脱，收集洗脱液，用硅胶柱层析纯化洗脱液，减压浓缩至干，得到蜕皮甾酮干品，蜕皮甾酮干品可直接用于蜕皮液的配置。

实施例3

取4kg筋骨草，将其粉碎，然后加入40L水进行搅拌熬煮，温度控制在100℃左右，然后使用多功能提取罐回流提取50分钟，趁热过滤，滤液保存待用，滤渣继续进行粗提取两次，其方法与上述粗提取方法相同，只是向药渣中加入的水每次均为20L，滤渣进行两次提取后弃之，收集上述三次粗提取所得的滤液待用。将粗提取过程中收集到的滤液的温度控制在80℃左右，向滤液中加入4L1%的ZTCl+1的1%的醋酸溶液，每隔27分钟搅拌一次，110分钟后过滤，收集滤液，继续保持80℃左右的温度，向滤液中加入2L5%的ZTCl+1的水溶液，每隔27分钟搅拌一次，110分钟后过滤，收集滤液，采用减压浓缩的方法获得滤液中的固体残留物。该固体残留物中有大量从筋骨草中提取出来的蜕皮甾酮。向该固体残留物中加入甲醇-乙酸乙酯溶液20L，甲醇与乙酸乙酯的比例为1:5，搅拌过滤，收集滤液，加入1L水，减压浓缩去除甲醇-乙酸乙酯溶液，得到蜕皮甾酮浸膏粗品。用HPD600大孔树脂吸附蜕皮甾酮浸膏粗品，然后用80L水洗脱，再用浓度梯度依次为10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%的乙醇-水溶液进行洗脱，收集洗脱液，用硅胶柱层析纯化洗脱液，减压浓缩至干，得到蜕皮甾酮干品，蜕皮甾酮干品可直接用于蜕皮液的配置。

实施例4

取10kg筋骨草，将其粉碎，然后加入100L水进行搅拌熬煮，温度控制在95℃左右，然后使用多功能提取罐回流提取75分钟，趁热过滤，滤液保存待用，滤渣继续进行粗提取两次，其方法与上述粗提取方法相同，只是向药渣中加入的水每次均为50L，滤渣进行两次提取后弃之，收集上述三次粗提取所得的滤液待用。将粗提取过程中收集到的滤液的温度控制在50℃左右，向滤液中加入10L1%的ZTCl+1的1%的醋酸溶液，每隔25分钟搅拌一次，两小时后过滤，收集滤液，继续保持50℃左右的温度，向滤液中加入5L5%的ZTCl+1的水溶液，每隔25分钟搅拌一次，两小时后过滤，收集滤液，采用减压浓缩的方法获得滤液中的固体残留物。该固体残留物中有大量从筋骨草中提取出来的蜕皮甾酮。向该固体残留物中加入甲醇-乙酸乙酯溶液50L，甲醇与乙酸乙酯的比例为1:5，搅拌过滤，收集滤液，加入2L水，减压浓缩去除甲醇-乙酸乙酯溶液，得到蜕皮甾酮浸膏粗品。用HPD600大孔树脂吸附蜕皮甾酮浸膏粗品，然后用200L水洗脱，再用浓度梯度依次为10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%的乙醇-水溶液进行洗脱，收集洗脱液，用硅胶柱层析纯化洗脱液，减压浓缩至干，得到蜕皮甾酮干品，蜕皮甾酮干品可直接用于蜕皮液的配置。

尽管这里参照本发明的多个解释性实施例对本发明进行了描述，但是，应该理解，本领域技术人员可以设计出很多其他的修改和实施方式，这些修改和实施方式将落在本申请公开的原则范围和精神之内。更具体地说，在本申请公开和权利要求的范围内，可以对主题组合布局的组成部件和/或布局进行多种变型和改进。除了对组成部件和/或布局进行的变型和改进外，对于本领域技术人员来说，其他的用途也将是明显的。

Claims

1.一种蚕用蜕皮甾酮的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：

7）用硅胶柱层析纯化洗脱液，减压浓缩至干，得到蜕皮甾酮干品。

2.根据权利要求1所述的蚕用蜕皮甾酮的制备方法，其特征在于：步骤1）所述向粉碎的筋骨草中加入水的量为每使用1kg筋骨草加10L。

3.根据权利要求1所述的蚕用蜕皮甾酮的制备方法，其特征在于：步骤2）所述向药渣中加入水的量为每使用1kg筋骨草加5L。

4.根据权利要求1所述的蚕用蜕皮甾酮的制备方法，其特征在于：步骤3）加入的所述澄清剂Ⅰ为1%的ZTCl+1的1%的醋酸溶液，所述澄清剂Ⅰ的量为每使用1kg筋骨草加1L。

5.根据权利要求1所述的蚕用蜕皮甾酮的制备方法，其特征在于：步骤4）加入的所述澄清剂Ⅱ为5%的ZTCl+1的水溶液，所述澄清剂Ⅱ的量为每使用1kg筋骨草加0.5L。

6.根据权利要求1所述的蚕用蜕皮甾酮的制备方法，其特征在于：步骤5）加入的所述甲醇-乙酸乙酯溶液的量为每使用1kg筋骨草加5L，甲醇与乙酸乙酯的比例为1:5。

7.根据权利要求1所述的蚕用蜕皮甾酮的制备方法，其特征在于：步骤6）所述用水洗脱使用的水为每使用1kg筋骨草用20L。

8.根据权利要求1所述的蚕用蜕皮甾酮的制备方法，其特征在于：步骤6）所述乙醇-水溶液进行梯度洗脱的浓度梯度依次为10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%。

9.根据权利要求1所述的蚕用蜕皮甾酮的制备方法，其特征在于：步骤6）所述大孔树脂为HPD600。