CN110204588B

CN110204588B - 一种制备黄芪甲苷的方法

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Publication number: CN110204588B
Application number: CN201910509745.3A
Authority: CN
Inventors: 向诗银; 徐剑; 杨跃军; 石万银; 巫岳; 唐万
Original assignee: Jing Brand Co ltd
Current assignee: Jing Brand Co ltd
Priority date: 2019-06-12
Filing date: 2019-06-12
Publication date: 2021-03-30
Anticipated expiration: 2039-06-12
Also published as: CN110204588A

Abstract

本申请提供一种制备黄芪甲苷的方法，属于微量成分的提纯技术领域。制备黄芪甲苷的方法，包括如下步骤：将含有黄芪醇提物的黄芪溶液置于高效液相色谱的色谱柱内，进行洗脱。当黄芪甲苷出峰时，收集黄芪甲苷的馏分。通过此方法能够得到纯度高的黄芪甲苷，该方法周期短，操作简单。

Description

一种制备黄芪甲苷的方法

技术领域

本申请涉及黄芪甲苷分离技术领域，具体而言，涉及一种制备黄芪甲苷的方法。

背景技术

黄芪是属于豆科黄芪属植物，其分类有蒙古黄芪和膜荚黄芪，主要在黑龙江、吉林、内蒙古等省区分布，被称为药中之上品。黄茂微温，性甘，脾经，归肺，有利于利尿托毒、补气固表、排脓、敛疮生肌。黄芪的主要包含有黄酮类物质、皂苷类、多糖类及有机酸，黄芪多糖和皂苷类是黄芪中的主要活性物质，黄芪皂苷(Ⅰ-Ⅷ)是黄芪中主要皂苷类物质。2015版《中国药典》规定，黄芪中黄芪甲苷的含量是药材质量控制的重要指标。黄芪甲苷是黄芪三萜皂苷中的黄芪皂苷Ⅳ，黄芪中含量黄芪甲苷极低，一般在0.1％左右，黄芪药材中成分较多，分离、提取非常困难。

黄芪中含有黄芪多糖、皂苷类(黄芪皂苷Ⅰ-Ⅷ)、黄酮类(山奈酚、鼠李柠檬素、棚皮素、黄酮苷等)、氨基酸类(天冬氨酸、刀豆氨酸、丙氨酸、脯氨酸、r-氨基丁酸、精氨酸等)及其他微量元素(铁、锰、锌等)。黄芪皂苷是主要的天然活性物质。药理实验表明，黄芪皂苷具有抗炎症、镇静、抗菌、降压、镇痛、抗氧化、治疗心脑血管相关疾病、糖尿病及慢性肾炎等生理活性以及药理作用，并且无毒副作用，其中的黄芪甲苷有利于心脏正性肌力作用，也是降压重要有效成分之一。

黄芪甲苷的提取方法一般以水提法得到黄芪提取液，然后再通过正丁醇萃取法、大孔法吸附树脂纯化分离皂苷单体，但该方法周期长、操作复杂，生产成本较高。

发明内容

本申请的目的在于提供一种制备黄芪甲苷的方法，得到的黄芪甲苷的纯度高，该方法周期短，操作简单。

第一方面，本申请实施例提供一种制备黄芪甲苷的方法，包括如下步骤：将含有黄芪醇提物的黄芪溶液置于高效液相色谱的色谱柱内，进行洗脱。当黄芪甲苷出峰时，收集黄芪甲苷的馏分。

使用高效液相色谱，能够有效将黄芪溶液中的各组分在色谱柱中分离，在洗脱的过程中，当黄芪甲苷出峰时，说明高效液相中产生的馏分是黄芪甲苷，开始收集黄芪甲苷的馏分。使得到的黄芪甲苷的纯度更高，容易操作。可选地，当黄芪甲苷出峰结束以后，停止收集黄芪甲苷的馏分，使黄芪甲苷的馏分收集完全，得到高纯度、高得率的黄芪甲苷。

结合第一方面，在另一实施例中，黄芪溶液中的溶剂为甲醇。使用甲醇作为黄芪溶液中的溶剂，可以有效减少高效液相色谱洗脱时出现杂峰，使得到的黄芪甲苷的纯度更高。

结合第一方面，在另一实施例中，洗脱的条件是：色谱柱为C18反向色谱柱，色谱柱的柱温为24-26℃，流动相为乙腈和水，流动相的流速为8-12mL/min，梯度洗脱的洗脱液为乙腈和水，检测波长为180-220nm。能够得到黄芪甲苷峰，且对黄芪甲苷的分离效果更好，得到的黄芪甲苷的纯度更高。

结合第一方面，在另一实施例中，黄芪溶液置于色谱柱之前，还包括使用孔径为0.22-0.25微米的微孔滤膜进行过滤的步骤。将黄芪溶液中的大分子物质、多糖等过滤掉，使黄芪溶液中剩余的大部分成分为皂苷组分，以便对黄芪甲苷进行精确分离，使黄芪甲苷的得率更高。

结合第一方面，在另一实施例中，收集黄芪甲苷的馏分以后，还包括使用氮吹仪吹干，并真空干燥的步骤。以便收集到纯度高的干燥的黄芪甲苷。

结合第一方面，在另一实施例中，黄芪醇提物的制备方法，包括：将黄芪与乙醇溶液混合，在温度为60-85℃的条件下进行提取，固液分离得到黄芪醇提物。

通过对黄芪进行醇提，能够使黄芪中的黄芪甲苷尽可能充分提取出来，以便黄芪甲苷的制备，使黄芪甲苷的得率更高。

结合第一方面，在另一实施例中，乙醇是体积浓度为65％-75％的乙醇。黄芪中黄芪甲苷的提取效果更好。

具体实施方式

为使本申请实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本申请实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。

下面对本申请实施例的制备黄芪甲苷的方法进行具体说明。

制备黄芪甲苷的方法，包括如下步骤：

(1)、制备黄芪醇提物：

将黄芪与乙醇溶液混合，在温度为60-85℃的条件下进行提取，固液分离得到黄芪醇提物。

可选地，黄芪与乙醇溶液的质量比为1：(6-12)。提取的方式可以是加热回流提取、索氏抽提、萃取法等。下面以加热回流提取为例进行说明。

例如，取黄芪药材，加6～12质量倍数的乙醇在温度为60℃～85℃的条件下加热回流提取1～3次，每次1～2小时，过滤得到黄芪提取液。

进一步地，采用体积浓度为65％-75％的乙醇作为提取溶剂，可使黄芪提取液中含有更多的黄芪甲苷。

进一步地，在过滤得到黄芪提取液之后，去除黄芪提取液中的溶剂，得到黄芪提取物粉末。溶剂可以通过干燥或蒸发的方式进行去除。可选地，将黄芪提取液置于旋转蒸发仪内，通过旋转蒸发仪干燥，去除溶剂，得到黄芪醇取物粉末。

当然，黄芪醇提物还可以使用甲醇、异丙醇或丙醇等提取溶剂进行提取。

(2)、获得黄芪溶液：

将黄芪提取物粉末混合于甲醇中。使用甲醇作为溶剂，可以有效减少高效液相色谱洗脱时出现杂峰，使得到的黄芪甲苷的纯度更高。当然，也可以将黄芪提取粉末溶于乙醇、异丙醇等溶剂中。

继续使用甲醇作为溶剂举例，可以使用孔径为0.22-0.25微米的微孔滤膜将溶有黄芪提取物粉末的甲醇进行过滤得到澄清的黄芪溶液。使用微孔滤膜可以过滤掉溶液中的多糖、大分子物质等，避免色谱柱堵塞。

可选地，黄芪提取物粉末与甲醇的质量体积比为(0.3-4)：(5-100)g/mL。

(3)、对黄芪溶液进行色谱柱分离：

将黄芪溶液置于高效液相色谱的色谱柱内，进行洗脱。进一步地，将黄芪溶液置于C18反向色谱柱内，以色谱柱的柱温为24-26℃，流动相为乙腈和水，流动相的流速为8-12mL/min，梯度洗脱的洗脱液为乙腈和水，检测波长为180-220nm为条件进行洗脱。

可选地，使用全波长进行扫描，确定黄芪甲苷的出峰时间。

其中，高效液相色谱的检测器为紫外检测器，此种高效液相色谱较为常见，价格较低，此高效液相色谱就能够有效提纯黄芪甲苷，黄芪甲苷的提纯成本降低。

(4)、收集黄芪甲苷的馏分：

当黄芪甲苷出峰时，收集黄芪甲苷的馏分，当黄芪甲苷峰出峰完全以后，停止收集黄芪甲苷的馏分，使得到的黄芪甲苷更加纯净。

(5)、获得黄芪甲苷。

使用氮吹仪吹干收集的黄芪甲苷的馏分，并进行真空干燥。得到纯净的黄芪甲苷粉末。

实施例1

制备黄芪甲苷的方法，包括如下步骤：

(1)、制备黄芪醇提物：

称取10g黄芪药材，粉碎成粉末，加入体积百分数为70％的乙醇溶液提取2次，提取温度为75℃得到黄芪提取液。其中，第一次加入100mL体积百分数为70％的乙醇溶液进行提取，提取时间为2h，第二次加入80mL体积百分数为70％的乙醇溶液进行提取，提取时间为1.5h。

将黄芪提取液置于旋转蒸发仪内干燥，得到2.11g黄芪提取物粉末。

(2)、获得黄芪溶液：

称取0.32g黄芪提取物粉末溶于7mL甲醇中，使用孔径为0.22微米的微孔滤膜进行过滤得到澄清的黄芪溶液。

(3)、对黄芪溶液进行色谱柱分离：

将黄芪溶液置于C18反向色谱柱内，进行洗脱。洗脱的条件如下：色谱柱的柱温为25℃，流动相为乙腈和水，流动相的流速为10mL/min，梯度洗脱的洗脱液为乙腈和水，检测波长为199nm。其中，梯度洗脱的条件如表1，

表1梯度洗脱的条件

(4)、收集黄芪甲苷的馏分：

当黄芪甲苷出峰时，收集黄芪甲苷的馏分，当黄芪甲苷峰出峰完全以后，停止收集黄芪甲苷的馏分。使用氮吹仪吹干收集的黄芪甲苷的馏分，在50℃条件下进行真空干燥，得到纯净的黄芪甲苷粉末。黄芪甲苷粉末得率为0.14％，纯度为97.34％。其中，得率是相对于黄芪提取物来说。

实施例2

制备黄芪甲苷的方法，包括如下步骤：

(1)、制备黄芪醇提物：

称取20g黄芪药材，粉碎成粉末，加入体积百分数为70％的乙醇溶液提取2次，提取温度为75℃得到黄芪提取液。其中，第一次加入200mL体积百分数为70％的乙醇溶液进行提取，提取时间为2h，第二次加入160mL体积百分数为70％的乙醇溶液进行提取，提取时间为1.5h。

将黄芪提取液置于旋转蒸发仪内干燥，得到4.3g黄芪提取物粉末。

(2)、获得黄芪溶液：

称取1.93g黄芪提取物粉末溶于42mL甲醇中，使用孔径为0.22微米的微孔滤膜进行过滤得到澄清的黄芪溶液。

(3)、对黄芪溶液进行色谱柱分离：

将黄芪溶液置于C18反向色谱柱内，进行洗脱。洗脱的条件如下：色谱柱的柱温为25℃，流动相为乙腈和水，流动相的流速为10mL/min，梯度洗脱的洗脱液为乙腈和水，检测波长为199nm。其中，梯度洗脱的条件如表2，

表2梯度洗脱的条件

时间(min)	乙腈(％)	水(％)
			0	5	95
5	10	90
			20	30	70
30	40	60
			43	40	60
60	100	0
			65	100	0

(4)、收集黄芪甲苷的馏分：

当黄芪甲苷出峰时，收集黄芪甲苷的馏分，当黄芪甲苷峰出峰完全以后，停止收集黄芪甲苷的馏分。使用氮吹仪吹干收集的黄芪甲苷的馏分，在50℃条件下进行真空干燥，得到纯净的黄芪甲苷粉末。黄芪甲苷粉末的得率为0.13％，纯度为98.20％。其中，得率是相对于黄芪提取物来说。

实施例3

制备黄芪甲苷的方法，包括如下步骤：

(1)、制备黄芪醇提物：

称取50g黄芪药材，粉碎成粉末，加入体积百分数为70％的乙醇溶液提取2次，提取温度为75℃得到黄芪提取液。其中，第一次加入500mL体积百分数为70％的乙醇溶液进行提取，提取时间为2h，第二次加入400mL体积百分数为70％的乙醇溶液进行提取，提取时间为1.5h。

将黄芪提取液置于旋转蒸发仪内干燥，得到10.80g黄芪提取物粉末。

(2)、获得黄芪溶液：

称取3.86g黄芪提取物粉末溶于82mL甲醇中，使用孔径为0.22微米的微孔滤膜进行过滤得到澄清的黄芪溶液。

(3)、对黄芪溶液进行色谱柱分离：

将黄芪溶液置于C18反向色谱柱内，进行洗脱。洗脱的条件如下：色谱柱的柱温为25℃，流动相为乙腈和水，流动相的流速为10mL/min，梯度洗脱的洗脱液为乙腈和水，检测波长为199nm。其中，梯度洗脱的条件如表3，

表3梯度洗脱的条件

(4)、收集黄芪甲苷的馏分：

当黄芪甲苷出峰时，收集黄芪甲苷的馏分，当黄芪甲苷峰出峰完全以后，停止收集黄芪甲苷的馏分。使用氮吹仪吹干收集的黄芪甲苷的馏分，在50℃条件下进行真空干燥，得到纯净的黄芪甲苷粉末。黄芪甲苷粉末得率为0.14％，纯度为97.12％。其中，得率是相对于黄芪提取物来说。

从实施例1-实施例3可以看出，不管黄芪药材的量多量少，黄芪提取物粉末的量多量少，均能够得到较为纯净的黄芪甲苷，且黄芪甲苷的得率均为0.13％以上，纯度在97％以上。说明使用本申请实施例提供的方法，能够有效提纯黄芪中的黄芪甲苷，且黄芪甲苷的得率高。

实施例4

制备黄芪甲苷的方法，包括如下步骤：

(1)、制备黄芪醇提物：

(2)、获得黄芪溶液：

称取0.32g黄芪提取物粉末溶于7mL乙醇中，使用孔径为0.22微米的微孔滤膜进行过滤得到澄清的黄芪溶液。

(3)、对黄芪溶液进行色谱柱分离：

将黄芪溶液置于C18反向色谱柱内，进行洗脱。洗脱的条件如下：色谱柱的柱温为25℃，流动相为乙腈和水，流动相的流速为10mL/min，梯度洗脱的洗脱液为乙腈和水，检测波长为199nm。其中，梯度洗脱的条件如表5，

表5梯度洗脱的条件

(4)、收集黄芪甲苷的馏分：

当黄芪甲苷出峰时，收集黄芪甲苷的馏分，当黄芪甲苷峰出峰完全以后，停止收集黄芪甲苷的馏分。使用氮吹仪吹干收集的黄芪甲苷的馏分，在50℃条件下进行真空干燥，得到纯净的黄芪甲苷粉末。黄芪甲苷粉末得率为0.12％，纯度为91.2％。其中，得率是相对于黄芪提取物来说。

实施例4与实施例1对比可以，在制备黄芪甲苷的过程中，黄芪溶液的溶剂使用乙醇，黄芪甲苷的得率和纯度都会下降，且纯度下降较多。

以上所描述的实施例是本申请一部分实施例，而不是全部的实施例。本申请的实施例的详细描述并非旨在限制要求保护的本申请的范围，而是仅仅表示本申请的选定实施例。基于本申请中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本申请保护的范围。

Claims

1.一种制备黄芪甲苷的方法，其特征在于，包括如下步骤：

将黄芪与乙醇溶液混合，在温度为60-85℃的条件下进行提取，固液分离得到黄芪醇提物；

将所述黄芪醇提物溶于甲醇中得到黄芪溶液，将所述黄芪溶液置于高效液相色谱的色谱柱内，进行洗脱；

当黄芪甲苷出峰时，收集所述黄芪甲苷的馏分。

2.根据权利要求1所述的制备黄芪甲苷的方法，其特征在于，所述洗脱的条件是：所述色谱柱为C18反向色谱柱，所述色谱柱的柱温为24-26℃，流动相为乙腈和水，所述流动相的流速为8-12mL/min，梯度洗脱的洗脱液为乙腈和水，检测波长为180-220nm。

3.根据权利要求1所述的制备黄芪甲苷的方法，其特征在于，所述黄芪溶液置于所述色谱柱之前，还包括使用孔径为0.22-0.25微米的微孔滤膜进行过滤的步骤。

4.根据权利要求1所述的制备黄芪甲苷的方法，其特征在于，收集所述黄芪甲苷的馏分以后，还包括使用氮吹仪吹干，并真空干燥的步骤。

5.根据权利要求1所述的制备黄芪甲苷的方法，其特征在于，所述乙醇是体积浓度为65％-75％的乙醇。