CN103429595A

CN103429595A - Hiv复制的抑制剂

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Publication number: CN103429595A
Application number: CN2011800650305A
Authority: CN
Inventors: A.S.贝尔; I.B.加德纳; D.C.普里德; F.M.瓦肯胡特; K.R.吉布森
Original assignee: ViiV Healthcare UK Ltd
Current assignee: ViiV Healthcare UK Ltd
Priority date: 2010-11-15
Filing date: 2011-11-01
Publication date: 2013-12-04
Anticipated expiration: 2031-11-01
Also published as: AU2011330850A1; RU2564445C2; JP2013542247A; EP2640729B1; AU2011330850B2; US20160355528A1; CN105330675A; AR083870A1; BR112013011991A2; US8809363B2; ZA201303433B; TW201300395A; US20140315927A1; MX343274B; JP5902704B2; RU2013121788A; US20120136023A1; WO2012066442A1; TWI445709B; US9447116B2

Abstract

本发明涉及新的2,3,4-取代的5,6,7,8-四氢[1]苯并噻吩并[2,3-b]吡啶化合物及其药物可接受的盐，并且涉及包含这类化合物的组合物以及这类化合物作为HIV复制抑制剂的用途。

Description

HIV复制的抑制剂

本发明涉及2,3,4-取代的5,6,7,8-四氢[1]苯并噻吩并[2,3-b]吡啶化合物及其药物可接受的盐以及它们作为人免疫缺陷病毒 (HIV)复制的抑制剂的用途。本发明的化合物适用于直接或间接抑制一种或多种HIV蛋白的活性并且适用于治疗由例如获得性免疫缺陷综合征 (AIDS)的HIV介导的疾病或疾病状态。尽管不期望受任何特定理论的束缚，但认为本发明的化合物通过直接或间接抑制HIV整合酶和内源性晶状体上皮细胞衍生生长因子 (LEDGF)之间的相互作用而抑制HIV复制。对于讨论该机制作为HIV治疗的可能靶标，参见Llano, M等人，Science，314，461-464 (2006)。

WO2010/130842公开了具有抗病毒活性，更具体地HIV复制抑制性质的噻吩并[2,3-b]吡啶衍生物。

尽管在该领域已经进行大量研究，但本领域仍亟需有效的HIV抑制剂。因此，本发明的一个目标是通过识别有效药物活性成分满足该迫切需要，所述药物活性成分对HIV有活性、毒性更小、更稳定 (即，化学稳定和代谢稳定)、有效对抗具有对目前可用药物的耐药性的病毒和/或其比现有抗病毒药物更耐受病毒突变并且能单独地或结合其它活性成分用于治疗哺乳动物并且更具体地人类的逆转录病毒感染，特别是慢病毒属感染，并且更特别地HIV感染。本领域技术人员还已知的是已知药物的物理化学性质以及它们的ADME-Tox (给药、分布、代谢、排泄和毒理学)性质可能限制或阻止它们用于治疗疾病。因此，必需优选克服的现有药物的问题可能选自差的或不充分的物理化学或ADME-Tox性质，例如溶解度、LogP、CYP抑制、肝稳定性和血浆稳定性。特别地，有利的是提供具有使其适合每天一次给药即提供吸收、代谢和排泄性质的适当平衡以实现与每天一次给药一致的暴露特性的药代动力学 (PK)性质的化合物。此外，本发明的另一目标是以使得生成的药物组合与各个单独的化合物相比具有增加的活性或对病毒突变增加的耐受性的方式补充现有抗病毒药物。再次，有利的是这样的组合提供了适用于每天一次给药的方案。

在第一方面中，本发明提供了选自下列的化合物或其药物可接受的盐，

Figure 2011800650305100002DEST_PATH_IMAGE001

Figure 2011800650305100002DEST_PATH_IMAGE003

。

在第一方面的其它实施方案中，本发明提供选自下列的化合物或其药物可接受的盐：

。

在第一方面的其它实施方案中，本发明提供式(I)化合物或其药物可接受的盐

其中：

R¹为CH₃、CH₂CH₃、Cl、Br、CHF₂或CF₃；

R²为H、OH或F；

X为CH₂或O；

条件是当R¹为CH₃且R₂为H时，X为O。

。

在第一方面的其它实施方案中，本发明提供了式(la)化合物或其药物可接受的盐

其中：

R¹为CH₃、CH₂CH₃、Cl、Br、CHF₂或CF₃；

R²为H、OH或F；

X为CH₂或O；

条件是当R¹为CH₃且R²为H时，X为O。

。

在第一方面的其它实施方案中，本发明提供了选自下列的化合物或其药物可接受的盐：

。

上述化合物的药物可接受的盐包括其酸加成盐和碱盐。

可从形成无毒盐的酸形成合适的酸加成盐。实例可包括醋酸盐、己二酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、碳酸氢盐/碳酸盐、硫酸氢盐/硫酸盐、硼酸盐、右旋樟脑磺酸盐、柠檬酸盐、环磺酸盐、乙二磺酸盐、乙磺酸盐、甲酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐、葡糖酸盐、葡糖醛酸盐、六氟磷酸盐、海苯酸盐、盐酸盐/氯化物、氢溴酸盐/溴化物、氢碘酸盐/碘化物、羟乙基磺酸盐、乳酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、甲磺酸盐、甲基硫酸盐、萘酸盐(naphthylate)、2-萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、乳清酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、双羟萘酸盐、磷酸盐/磷酸氢盐/磷酸二氢盐、焦谷氨酸盐、糖酸盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、丹宁酸盐、酒石酸盐、甲苯磺酸盐、三氟乙酸盐和昔萘酸盐。

可从形成无毒盐的碱形成合适的碱盐。实例可包括铝、精氨酸、苄星、钙、胆碱、二乙胺、二乙醇胺、甘氨酸、赖氨酸、镁、葡甲胺、乙醇胺、钾、钠、氨丁三醇和锌盐。

还可形成酸和碱的半盐，例如，半硫酸盐和半钙盐。

对于合适的盐的综述，参见Stahl和Wermuth的“Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use” (Wiley-VCH, Weinheim, Germany, 2002)。

本发明的化合物可以从完全无定形至完全结晶的连续固体状态形式存在。术语“无定形”是指其中物质在分子水平下缺乏长程序的状态并且依赖温度可能显示固体或液体的物理性质。通常这类物质不产生特征的X-射线衍射图并且尽管显示固体性质，但更正式地被描述为液体。当加热时，发生固体至液体性质的变化，其特征在于通常二级 (“玻璃转化”)的状态变化。术语“晶体”是指其中物质在分子水平下具有规则有序的内部结构的固相并且产生具有确定的峰的特征X-射线衍射图。这类物质在充分加热时也显示液体的性质，但从固体至液体的变化特征在于通常一级 (“熔点”)的相变化。

本发明的化合物可以非溶剂化和溶剂化形式二者存在。术语“溶剂化物”在本文用于描述包含本发明的化合物和化学计量的一种或多种药物可接受的溶剂分子，例如乙醇的分子复合物。当所述溶剂为水时，使用术语“水合物”。目前公认用于有机水合物的分类体系是定义分离位点、通道或金属离子配位水合物的体系 – 参见K. R. Morris的“Polymorphism in Pharmaceutical Solids” (Ed. H. G. Brittain，Marcel Dekker，1995)。分离位点水合物是其中通过插入有机分子从彼此直接接触分离水分子的水合物。在通道水合物中，水分子位于晶格通道中，在那里它们紧挨着其它水分子。在金属离子配位水合物中，水分子与金属离子结合。当溶剂或水被紧紧束缚时，复合物具有明确定义的化学计量独立的湿度。然而，当溶剂或水被弱地束缚时，例如在通道溶剂化物和吸湿性化合物中时，水/溶剂含量依赖湿度和干燥条件。在这种情况下，非化学计量是标准。

本发明范围内还包括的是多组分复合物 (除了盐和溶剂化物之外)，其中药物和至少一种其它组分以化学计量或非化学计量的量存在。该类型的复合物包括笼形物 (药物主体包含式复合物)和共晶。通常将后者定义为通过非共价相互作用结合在一起的中性分子成分的结晶复合物，但还能是中性分子与盐的复合物。可通过熔化结晶、通过从溶剂中重结晶或通过一起物理研磨组分制备共晶 – 参见O. Almarsson和M. J. Zaworotko的Chem Commun，17，1889-1896， (2004)。对于多组分复合物的一般综述，参见Haleblian的J Pharm Sci，64 (8)，1269-1288，(1975年8月)。

当经受合适的条件时，本发明的化合物还可以介晶态 (中间相或液体晶体)形式存在。介晶态是真正结晶状态和真正液体状态(熔化物或溶液)之间的中间体。将由于温度变化产生的介晶现象描述为“热致型”并将由于添加第二组分如水或另外的溶剂产生的介晶现象描述为“溶致型”。将具有形成溶致型中间相的可能的化合物描述为“两亲的”并由具有离子(如-COO^-Na⁺、-COO^-K⁺或–SO₃ ^-Na⁺)或非离子(如-N^-N⁺(CH₃)₃)极性头基团的分子组成。对于更多信息，参见N. H. Hartshorne和A. Stuart的“Crystals and the Polarizing Microscope”，第4版 (Edward Arnold, 1970)。

下文对化合物的所有引用包括对其盐、溶剂化物、多晶型物、晶习、多组分复合物及液体结晶的引用和对其盐的溶剂化物、多晶型物、晶习、多组分复合物及液体结晶的引用。

本发明的化合物具有临近羧基的手性中心。因此，还没有显示阻转异构现象 (下文更详细地描述)的化合物可以两种立体异构体 (即，对映异构体)形式存在，例如：

。

当4-取代基不对称地环绕4-位处的键平面时，也可出现阻转异构现象。这是因为4-取代基的芳香族环和5,6,7,8-四氢[1]苯并噻吩并[2,3-b]吡啶的吡啶部分彼此或多或少处于垂直位置并且围绕处于本发明的2,3,4-取代的5,6,7,8-四氢[1]苯并噻吩并[2,3-b]吡啶化合物的4-位的键的旋转可能受限制。因此，这类化合物可能以四种立体异构体 (即，非对映异构体)形式存在。例如：

。

式(I)化合物还包含其中能发生互变异构现象 (“互变异构”)的如咪唑环的芳香族部分。这能采取质子互变异构 (例如在咪唑环中)以及化合价互变异构 (例如在其它芳香族部分中)的形式。因此，单一化合物可能显示多于一种类型的异构现象。

本发明要求保护的化合物范围内包括的是化合物的所有立体异构体和互变异构体形式，包括显示多于一种类型的异构现象的化合物及其一种或多种的混合物。

在一个或多个手性中心处用规定立体化学描述化合物或式的情况下，这意图规定化合物或式具有至少80% (即，至少90%的规定异构体和至多10%的其它可能异构体)，优选至少90%，更优选至少94%且最优选至少99%的立体异构体过量。

用于制备/分离各个对映异构体/非对映异构体的常规技术包括从合适的光学纯前体手性合成或使用例如手性高压液相色谱(HPLC)拆分外消旋体(或盐或衍生物的外消旋体)。或者，外消旋体(或外消旋前体)可与合适的光学活性化合物，例如，醇反应，或者在式(I)化合物包含酸性或碱性部分的情况下，与酸或碱如酒石酸或1-苯基乙胺反应。生成的非对映异构体混合物可通过色谱和/或分级结晶进行分离并通过技术人员熟知的技术将非对映异构体之一或二者转化为相应纯的对映异构体。

可使用色谱，通常为HPLC在具有不对称固定相和由包含0%至50%异丙醇，通常2%至20%，和0%至5%的烷基胺，通常0.1%的二乙胺的烃通常为庚烷或己烷组成的流动相的树脂上获得对映异构体富集形式的本发明的手性化合物(及其手性前体)。浓缩洗脱液产生富集混合物。或者，可使用SFC在具有不对称固定相和由梯度的溶于甲醇的CO₂组成的流动相的树脂上进行分离。

可通过本领域技术人员已知的常规技术分离立体异构体的混合物。参见例如，E L Eliel的“Stereochemistry of Organic Compounds”(Wiley, New York, 1994)。

可使用本领域技术人员已知的技术通过解释结晶酶-化合物复合物的晶体结构确定本发明化合物的单一立体异构体的绝对构型。

可根据下列一般方法合成本发明的化合物。

方案1

通过已知步骤(胺化、Suzuki偶联、Negishi偶联、Stille偶联等)使式(A)化合物与合适的芳基(Ar)前体偶联提供式(B)化合物，能使用标准水解条件将其转化为本发明的目标化合物。

方案2

还可在化合物(C)酯基的水解之前或之后或同时通过使用标准脱保护条件去除酚类保护基，例如烯丙基、苄基获得式(D)化合物。

在第二方面中，本发明提供了包含本发明的化合物或其药物可接受的盐或溶剂化物连同药物可接受的赋形剂的药物组合物。

术语“赋形剂”在本文用于描述除了本发明的化合物之外的任何成分。赋形剂的选择在很大程度上依赖如特殊的给药模式、赋形剂对溶解度和稳定性的影响以及剂型的性质的因素。

适用于递送本发明化合物的药物组合物和它们的制备方法对于本领域技术人员而言容易显而易见。这类组合物和它们的制备方法可在例如，“Remington’s Pharmaceutical Sciences”，第19版(Mack Publishing Company, 1995)中获悉。

可口服给予本发明的化合物。口服给药可包括吞服，使得化合物进入胃肠道，或可采用通过其化合物从口直接进入血流的颊给药或舌下给药。适用于口服给药的制剂包括固体制剂和液体制剂二者。

固体制剂包括片剂, 胶囊剂(包含颗粒剂、液体剂或粉末剂)、锭剂(包括液体填充锭剂)、咀嚼剂、多颗粒剂和纳米颗粒剂、凝胶剂、固体溶液剂、脂质体制剂、膜剂、胚珠剂和喷雾剂。

液体制剂包括悬浮剂、溶液剂、糖浆剂和酏剂。这类制剂可用作软或硬胶囊中的填充剂，并且通常包含载体如水、乙醇、聚乙二醇、丙二醇、甲基纤维素或合适的油以及一种或多种乳化剂和/或悬浮剂。还可通过例如从小袋中恢复固体制备液体制剂。

本发明的化合物还可用于快速溶解、快速崩解的剂型，如在Liang和Chen的Expert Opinion in Therapeutic Patents, 11 (6), 981-986中描述的那些。

对于片剂剂型，依赖剂量，药物可构成剂型的1重量%至80重量%，更通常剂型的5重量%至60重量%。

除了药物之外，片剂通常包含崩解剂。崩解剂的实例包括羟基乙酸淀粉钠、羧甲基纤维素钠、羧甲基纤维素钙、交联羧甲基纤维素钠、交聚维酮、聚乙烯吡咯烷酮、甲基纤维素、微晶纤维素、低级烷基-取代的羟丙基纤维素、淀粉、预胶化淀粉和海藻酸钠。通常，崩解剂包含剂型的1重量%至25重量%，优选5重量%至20重量%。

粘合剂通常用于给予片剂制剂粘合性质。合适的粘合剂包括微晶纤维素、明胶、糖、聚乙二醇、天然和合成树胶、聚乙烯吡咯烷酮、预胶化淀粉、羟丙基纤维素和羟丙基甲基纤维素。

片剂还可包含稀释剂如乳糖(一水合物、喷雾干燥的一水合物、无水等)、甘露醇、木糖醇、葡萄糖、蔗糖、山梨醇、微晶纤维素、淀粉和磷酸氢钙二水合物。

片剂还可任选包含表面活性剂如十二烷基硫酸钠和聚山梨醇酯80和助流剂如二氧化硅和滑石。当存在时，表面活性剂可包含片剂的0.2重量%至5重量%，并且助流剂可包含片剂的0.2重量%至1重量%。

片剂还通常包含润滑剂如硬脂酸镁、硬脂酸钙、硬脂酸锌、硬脂富马酸钠以及硬脂酸镁与十二烷基硫酸钠的混合物。润滑剂通常包含片剂的0.25重量%至10重量%，优选0.5重量%至3重量%。

其它可能的成分包括抗氧化剂、着色剂、调味剂、防腐剂和掩味剂。

示例性片剂包含多达约80%的药物，约10重量%至约90重量%的粘合剂，约0重量%至约85重量%的稀释剂，约2重量%至约10重量%的崩解剂和约0.25重量%至约10重量%的润滑剂。

可直接地或通过滚筒压缩片剂混合物以形成片剂。或者，在压片之前，片剂混合物或混合物部分可被湿法-、干法-或熔融制粒、熔融凝结(melt congeale)或挤出。最终制剂可包含一个或多个层并可为包衣或未包衣的；甚至可将其胶囊化。

片剂制剂在“Pharmaceutical Dosage Forms: Tablets”第1卷，H. Lieberman和L. Lachman(Marcel Dekker, New York, 1980)中进行讨论。

可口服消耗膜剂通常为柔软水溶性或水可膨胀薄膜剂型，其可被迅速溶解或粘膜粘附并且通常包含式(I)化合物、成膜聚合物、粘合剂、溶剂、润湿剂、增塑剂、稳定剂或乳化剂、粘度调节剂和溶剂。制剂的一些组分可执行多于一种功能。成膜聚合物可选自天然多糖、蛋白质或合成水胶体并且通常以0.01重量%至99重量%，更通常30重量%至80重量%存在。其它可能的成分包括抗氧化剂、着色剂、调味剂和增味剂、防腐剂、唾液刺激剂、冷却剂、共溶剂(包括油)、软化剂、膨胀剂、防泡剂、表面活性剂和掩味剂。通常通过蒸发干燥涂覆在可剥离背托或纸上的薄水性膜制备本发明的膜剂。这可在干燥炉或干燥箱中进行，通常为联合涂布机干燥器，或通过冷冻干燥或真空处理进行。

可配制用于口服给药的固体制剂为立即释放和/或调节释放的。调节释放制剂包括延迟-、持续-、脉冲-、控制-、定向和程序化释放。

用于本发明用途的合适调节释放制剂在第6,106,864号美国专利中进行描述。其它合适释放技术如高能分散和渗透以及包衣颗粒的细节在“Pharmaceutical Technology On-line”，25(2)，1-14，Verma 等人，(2001)中获悉。使用咀嚼胶以实现控制释放在WO 00/35298中进行描述。

还可将本发明的化合物直接给予血流、肌肉或内部器官。肠胃外给药的合适方法包括静脉内、动脉内、腹膜内、鞘内、心室内、尿道内、胸骨内、颅内、肌内和皮下。肠胃外给药的合适设备包括针(包括微针)注射器、无针注射器和输注技术。

肠胃外制剂通常为水溶液，其可包含赋形剂如盐、碳水化合物和缓冲剂(优选达到3至9的pH)，但对于一些应用，更适合将它们配制为无菌非水性溶液或干燥形式以结合合适媒介物如无菌、无热原水使用。

例如通过冷冻干燥在无菌条件下制备肠胃外剂型可使用本领域技术人员熟知的标准制药技术容易地完成。

可通过使用适当的配制技术，例如结合溶解度增加剂，增加用于制备肠胃外溶液的本发明化合物的溶解度。

可配制用于肠胃外给药的制剂为立即释放和/或调节释放的。调节释放制剂包括延迟-、持续-、脉冲-、控制-、定向和程序化释放。因此，可将本发明的化合物配制为固体、半固体或触变性液体以用于作为植入储库给药提供活性化合物的调节释放。这种制剂的实例包括药物-涂层支架和聚(dl-乳酸-乙醇酸)共聚物(PGLA)微球。

还可将本发明的化合物局部给予皮肤或粘膜，即皮肤给药或透皮给药。用于该用途的典型制剂包括凝胶剂、水凝胶剂、洗剂、溶液剂、乳膏剂、软膏剂、隔离剂(dusting powders)、敷剂(dressings)、泡沫剂、膜剂、皮肤贴剂、薄片剂、埋植剂、棉球(sponge)、纤维、绷带和微乳剂。还可使用脂质体。典型的载体包括醇、水、矿物油、液体凡士林、白凡士林、甘油、聚乙二醇和丙二醇。可并入渗透增强剂 – 参见例如，Finnin和Morgan的J Pharm Sci，88(10)，955-958，(1999年10月)。

局部给药的其它方法包括通过电穿孔、离子电渗、超声透入、超声导入和微针或无针(例如，Powderject?、Bioject?等)注射递送。

可配制用于局部给药的制剂为立即释放和/或调节释放的。调节释放制剂包括延迟-、持续-、脉冲-、控制-、定向和程序化释放。

可直肠或阴道给予本发明的化合物，例如，以栓剂、阴道栓剂或灌肠剂的形式。可可脂是常规栓剂基质，但可酌情使用各种替代物。

可配制用于直肠/阴道给药的制剂为立即释放和/或调节释放的。调节释放制剂包括延迟-、持续-、脉冲-、控制-、定向和程序化释放。

可将本发明的化合物与可溶大分子实体如环糊精及其合适的衍生物或含聚乙二醇的聚合物混合以便提高它们的溶解度、溶解速率、掩味、生物利用度和/或稳定性以用于任何上述给药模式。

例如，发现药物-环糊精复合物通常用于大多数剂型和给药途径。可使用内含和非内含式复合物二者。作为与药物直接络合的替代，环糊精可用作辅助添加剂，即用作载体、稀释剂或增溶剂。大多数通常用于这些用途的是α-、β-和γ-环糊精，其实例可在第WO 91/11172号、第WO 94/02518号和第WO 98/55148号国际专利申请中获悉。

在第三方面中，本发明提供了本发明的化合物或其药物可接受的盐，其用作药物。

本发明该方面的具体实施方案是本发明的化合物或其药物可接受的盐，其用于治疗HIV感染。

在第四方面中，本发明提供了本发明的化合物或其药物可接受的盐在制备用于治疗HIV感染的药物中的用途。

在第五方面中，本发明提供了治疗哺乳动物包括人类以治疗HIV感染的方法，其包括给予所述哺乳动物有效量的本发明的化合物或其药物可接受的盐或溶剂化物。

本文使用的术语“治疗”包括疾病或病症的预防性和治愈性治疗。它还包括减慢、中断、控制或停止疾病或病症的发展。它还包括预防、治愈、减慢、中断、控制或停止疾病或病症的症状。

本发明的化合物可与一种或多种其他药剂组合给予，用于治疗患有HIV病毒感染，或与HIV病毒感染有关的任何其它疾病或疾病状态的哺乳动物(例如人类)。可与本发明化合物组合使用的药剂包括但不限于那些用作HIV蛋白酶抑制剂、HIV逆转录酶抑制剂、非核苷HIV逆转录酶抑制剂、HIV整合酶抑制剂、CCR5抑制剂、HIV融合抑制剂或其他HIV进入抑制剂、成熟抑制剂、作用是扰乱HIV衣壳多聚化或病毒核稳定性的药剂、靶向病毒复制或免疫逃避所需的宿主蛋白(例如但不限于PSIP1)的化合物、用作免疫调节剂的化合物、通过未知机制抑制HIV病毒的化合物、用于治疗疱疹病毒的化合物、用作抗感染药的化合物以及如下所述的其他化合物。

可与本发明化合物组合使用的用作HIV蛋白酶抑制剂的化合物包括但不限于141W94(安泼那韦)、CGP-73547、CGP-61755、DMP-450(mozenavir)、那非那韦、利托那韦、沙奎那韦(invirase)、洛匹那韦、TMC-126、阿扎那韦、帕利那韦、GS-3333、KN I-413、KNI-272、LG-71350、CGP-61755、PD 173606、PD 177298、PD 178390、PD 178392、U-140690、ABT-378、DMP-450、AG-1776、MK-944、VX-478、印地那韦、替拉那韦、TMC-114(地瑞那韦)、DPC-681、DPC-684、福沙那韦钙(Lexiva)、WO 03053435中公开的苯磺酰胺衍生物、R-944、Ro-03-34649、VX-385(brecanavir)、GS-224338、OPT-TL3、PL-100、SM-309515、AG-148、DG-35-VIII、DMP-850、GW-5950X、KNI-1039、L-756423、LB-71262、LP-130、RS-344、SE-063、UIC-94-003、Vb-19038、A-77003、BMS-182193、BMS-186318、SM-309515、JE-2147、GS-9005、替利那韦(SC-52151)、BILA-2185BS、DG-17、PPL-100、A-80987、GS-8374、DMP-323、U-103017、CGP-57813和CGP-53437。

可与本发明化合物组合使用的用作HIV逆转录酶抑制剂的化合物包括但不限于阿巴卡韦、恩曲他滨(FTC)、GS-840(阿德福韦)、拉米夫定、阿德福韦酯、β-氟-ddA、扎西他宾、地达诺新、司他夫定、齐多夫定、替诺福韦、富马酸替诺福韦酯、安多索韦、SPD-754(阿普瑞西他滨)、SPD-756、racivir、reverset(DPC-817)、MIV-210(FLG)、β-L-Fd4C(ACH-126443、elvucitabine)、MIV-310(阿洛夫定、FLT)、dOTC、DAPD、恩替卡韦、GS-7340、stampidine、D-d4FC(dexelvucitabine)、phospahzide、福齐夫定替酯和fosalvudine tidoxil。

可与本发明化合物组合使用的用作HIV逆转录酶的非核苷抑制剂的化合物包括但不限于依法韦仑、HBY-097、奈韦拉平、dapivirine(TMC-120)、TMC-125、依曲韦林、地拉夫定(delavirdine)、DPC-083、DPC-961、TMC-120、卡普韦林(capravirine)、GW-678248、GW-695634、calanolide、利匹韦林(TMC-278)、洛韦胺、乙米韦林(MKC-442)、DPC-963、MIV-150、BILR 355BS、VRX-840773、来司韦林(lersivirine)(UK-453061)、RDEA806以及如在WO 03062238中公开的三环嘧啶酮衍生物。

可与本发明化合物组合使用的用作CCR5抑制剂的化合物包括但不限于TAK-779、SC-351125、SCH-D、UK-427857(马拉韦罗)、PRO-140和GW-873140(aplaviroc、Ono-4128、AK-602)、SCH-417690(viciviroc、SCH-D)、INCB-9471、INCB-15050、TBR-220(TAK-220)、CCR5mAb004。可与本发明化合物组合使用的用作CCR5抑制剂的其他化合物包括但不限于(N-{(1S)-3-[3-异丙基-5-甲基-4H-1,2,4-三唑-4-基]-外-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基}-1-苯基丙基)-4,4-二氟环己烷甲酰胺)、1-内-{8-[(3S)-3-(乙酰氨基)-3-(3-氟苯基)丙基]-8-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基}-2-甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-5-羧酸甲酯和N-{(1S)-3-[3-内-(5-异丁酰基-2-甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-(3-氟苯基)丙基}乙酰胺)。

可与本发明化合物组合使用的用作HIV整合酶抑制剂的化合物包括但不限于雷特格韦、埃替拉韦(GS-9137、JTK-303)、GSK-364735、MK-2048、BMS-707035、S-1360(GW-810781)、L-870810、L-870812、AR-177、BA-011、WO 03062204中公开的1,5-萘啶-3-甲酰胺衍生物、WO 03047564中公开的化合物、WO 03049690中公开的化合物、WO 03035076中公开的5-羟基嘧啶-4-甲酰胺衍生物和L-000810810。

可与本发明化合物组合使用的用于治疗HIV的融合抑制剂包括但不限于恩夫韦地(T-20)、T-1249、AMD-3100、西夫韦肽、FB-006M、TRI-1144、PRO-2000以及JP 2003171381中公开的稠合三环化合物。

可与本发明化合物组合使用的用于治疗HIV的成熟抑制剂包括但不限于bevirimat和vivecon。

可与本发明化合物组合使用的用于治疗HIV的HIV固定药物组合包括但不限于可比韦、atripla、三协唯、特鲁瓦达、kaletra和epzicom。

可与本发明化合物组合使用的用于治疗HIV的CXCR4抑制剂包括但不限于AMD-070。

可与本发明化合物组合使用的用于治疗HIV的进入抑制剂包括但不限于SP-01A。

可与本发明化合物组合使用的用于治疗HIV的Gp 120抑制剂包括但不限于BMS-488043和BMS-378806。

可与本发明化合物组合使用的用于治疗HIV的G6PD和NADH-氧化酶抑制剂包括但不限于immunitin。

可与本发明化合物组合使用的用作HIV抑制剂的其他化合物包括但不限于可溶性CD4、PRO-542、ibalizumab (TNX-355)以及JP2003119137中公开的化合物。

可与本发明化合物组合使用的用于治疗或控制来自非HIV的病毒的感染的化合物包括但不限于阿昔洛韦、福米韦生、喷昔洛韦、HPMPC、奥塔诺新G、AL-721、西多福韦、细胞巨化病毒免疫球蛋白、赛美维、fomivganciclovir、泛昔洛韦、膦甲酸钠、Isis 2922、KNI-272、伐昔洛韦、病毒唑利巴韦林、缬更昔洛韦、ME-609、PCL-016、DES6、ODN-93、ODN-112、VGV-1、聚肌胞、HRG-214、cytolin、VGX-410、KD-247、AMZ-0026、CYT-99007A-221、DEBIO-025、BAY 50-4798、MDX-010(ipilimumab)、PBS-119、ALG-889、PA-1050040(PA-040)和filibuvir(PF-00868554)。

充当免疫调节剂且可与本发明化合物组合使用的化合物包括但不限于AD-439、AD-519、α-干扰素、AS-101、溴匹立明、乙酰吗喃、CL246,738、EL10、FP-21399、γ-干扰素、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子、IL-2、静脉内免疫球蛋白(immune globulin intravenous)、IMREG-1、IMREG-2、依木巯二乙基二巯代氨基甲酸酯、α-2干扰素、甲硫氨酸脑啡肽、MTP-PE、粒细胞集落刺激因子、remune、rCD4、重组可溶性人CD4、干扰素α-2、SK&F106528、可溶性T4 yhymopentin、肿瘤坏死因子(TNF)、妥卡雷琐、重组人干扰素β和干扰素α n-3。

可与本发明化合物组合使用的抗感染药包括但不限于阿托伐醌、阿齐红霉素、克拉霉素、甲氧苄氨嘧啶、曲伐沙星、乙胺嘧啶、柔红霉素、克林霉素与伯氨喹、pastill、盐酸依氟鸟氨酸注射剂、依氟鸟氨酸喷他眯、利福布丁、螺旋霉素、intraconazole-R51211、曲美沙特、柔红霉素、氯奎、重组体人红细胞生成素、重组体人生长激素、醋酸甲地孕酮、testerone和完全胃肠内营养。

可与本发明化合物组合使用的抗真菌药包括但不限于阿尼芬净、C31G、卡泊芬净、DB-289、氟康唑、依曲康唑、酮康唑、米卡芬净、泊沙康唑和伏立康唑。

可与本发明化合物组合使用的其他化合物包括但不限于乙酰吗喃、安沙霉素、LM 427、AR177、BMS-232623、BMS-234475、CI-1012、硫酸凝胶多糖、硫酸葡聚糖、STOCRINE EL10、金丝桃素、洛布卡韦、novapren、肽T octabpeptide序列、磷酸三钠甲酸盐、普罗布考和RBC-CD4。

另外，本发明的化合物可以与抗增殖药组合使用，用于治疗疾病状态如卡波西肉瘤。此类药剂包括但不限于金属-基质蛋白酶抑制剂、A-007、贝伐单抗、BMS-275291、溴氯哌喹酮、白介素-12、利妥昔单抗、紫杉醇、卟吩姆钠、rebimastat和COL-3。

可给予这种组合使得本发明的化合物存在于与上述其他药剂相同的药物组合物中。或者，可给予这种组合使得本发明的化合物存在于与其中发现其他药剂的药物组合物分开的药物组合物中。如果将本发明的化合物与其他药剂分开给予，则这种给药可共时发生或在二者之间的适当时间间隔下相继发生。

此外，本发明的化合物可与一种或多种具有增加哺乳动物暴露于本发明化合物的作用的其他药剂组合给予。如本文使用的，术语“暴露”是指在一段时间内检测的本发明的化合物在哺乳动物血浆中的浓度。能通过以适当形式向哺乳动物给予本发明的化合物、在预定时间下取出血浆样品并使用适当分析技术如液相色谱或液相色谱/质谱检测本发明的化合物在血浆中的量来检测哺乳动物对特定化合物的暴露。测定某一时间下本发明的化合物在血浆中存在的量并绘制来自所有样品的浓度和时间数据以提供曲线。计算该曲线下的面积并提供哺乳动物对化合物的暴露。术语“暴露”、“曲线下的面积”和“浓度/时间曲线下的面积”意图具有相同含义并可交换使用。

在可用于增加哺乳动物对本发明的化合物的暴露的药剂中，其是能充当至少一种细胞色素P450(CYP450)酶亚型的抑制剂的那些。可被有益抑制的CYP450亚型包括但不限于CYP1A2、CYP2D6、CYP2C9、CYP2C19和CYP3A4。可用于抑制CYP3A4的合适药剂包括但不限于利托那韦、地拉夫定、N-(3,4-二氟苄基)-2-{[(4-甲氧基吡啶-3-基)氨基]磺酰基}-N-甲基苯甲酰胺和N-(1-(5-(4-氟苄基)-3-(吡啶-4-基)-1H-吡唑-1-羰基)哌啶-4-基)甲磺酰胺。

可给予这种组合使得本发明的化合物存在于与上述其他药剂相同的制剂中。或者，可给予这种组合使得本发明的化合物存在于与其中发现其他药剂的药物组合物分开的药物组合物中。如果将本发明的化合物与其他药剂分开给予，则这种给药可共时发生或在二者之间的适当时间间隔下相继发生。

因为可能期望给予活性化合物的组合，例如，为了治疗特殊疾病或疾病状态的目的，在本发明范围内的是可以适用于组合物的共同给药的试剂盒形式方便地组合两种或多种药物组合物，其至少一种包含本发明的化合物。

因此，根据本发明，本发明的试剂盒包含两种或多种单独的药物组合物，其至少一种包含本发明的化合物，和用于单独保存所述组合物的装置，如容器、分装瓶或分装箔袋。这种试剂盒的实例是用于包装片剂、胶囊剂等的常见泡罩包装。

本发明的试剂盒特别适用于给予不同剂型，例如口服和肠胃外，用于在不同的剂量间隔下给予单独的组合物或用于相对彼此滴定单独的组合物。为了帮助依从性，试剂盒通常包含给药说明并且可具有所谓的记忆辅助物。

下列步骤例示适用于制备本发明的化合物的方法。

一般方法

LCMS(2 min酸性) A：0.1%甲酸/水，B：0.1%甲酸/乙腈，柱：具有3微米粒度的Agilent Extend C18相30 × 3 mm，梯度：1.8 min内90%-0% A，保持0.55 min，重新平衡0.15 min，1.6 mL/min流速，UV：210 nm - 450 nm DAD温度：50℃。

LCMS(5 min酸性) A：0.1%甲酸/水，B：0.1%甲酸/乙腈，柱：具有3微米粒度的Agilent Extend C 18相50 × 3 mm，梯度：3.5 min内95%-0% A，保持1 min，重新平衡0.4 min，1.2 mL/min流速，UV：210 nm - 450 nm DAD温度：50℃。

LCMS(12 min酸性) A：0.1%甲酸/水，B：0.1%甲酸/乙腈，柱：具有3微米粒度的Agilent SB C18相50 × 3 mm，梯度：95% A 保持1 min，8 min内95%-0% A，保持2.5 min，重新平衡0.50 min，1.2 mL/min流速，UV：210 nm - 450 nm DAD温度：50℃。

LCMS(5 min碱性) A：甲醇，B：10 mM 碳酸氢铵/水 pH10，柱：具有5微米粒度的XBridge C18 2.1 × 30 mm，梯度：2.9 min内95%-5% A，保持0.9 min，重新平衡0.1 min，0.5 mL/min流速，UV：215-350 nm DAD温度25℃。

在Varian Gemini 400 MHz上在30 C下采集H NMR。

制备1：2-氨基-4,5,6,7-四氢-1-苯并噻吩-3-甲酸乙酯

向氰基乙酸乙酯(427 mL, 4 mol)的乙醇(4 L)溶液添加硫(153.88 g, 4.80 mol)、吗啉(422 mL, 4.80 mol)和环己酮(497 mL, 4.80 mol)并将生成的溶液在50℃下搅拌18小时。将反应冷却至室温并过滤以去除固体。使用冷乙醇洗涤滤饼然后干燥以产生浅黄色固体形式的标题化合物，608.4 g。将母液在冰浴中冷却并通过过滤收集生成的沉淀物。通过使用乙酸乙酯/庚烷(20% - 30%)洗脱的干燥快速色谱纯化固体以产生更多的38.62 g的标题化合物。将两个固体混合以产生647.02 g的标题化合物，72%产率。¹H NMR(400 MHz, CDCl₃) δ ppm 1.34(t, 3 H), 1.73-1.75(m, 4 H), 2.46-2.49(m, 2 H), 2.63-2.69(m, 2 H), 4.25(q, 2 H), 5.92(br s, 2 H)。

制备2：3-乙氧基丁-2-烯酸乙酯

在氮气环境下，在25℃下向乙酰乙酸乙酯(2.7 kg, 20.74 mol)的乙醇(4 L)溶液添加浓H₂SO₄(4 ml)。在滴加原甲酸三乙酯(3073.6 g, 20.74 mol)之前将混合物加热至50℃。将混合物在50℃下搅拌16h。将混合物在减压下浓缩以产生黄色油状物形式的标题化合物(2.8 kg, 85 %)。¹H NMR(400 MHz, CDCl₃)：δ 4.9(s, 1 H), 4.1(m, 2H), 3.7(m, 2H), 2.2(s, 3H), 1.2(m, 3H), 1.1(m, 3H)。

制备3：(4-羟基-2-甲基-5,6,7,8-四氢[1]苯并噻吩并[2,3-b]吡啶-3-基)甲酸乙酯

在氩气下在室温下，在10 L反应瓶中，将对甲苯磺酸吡啶鎓(39.7 g, 158 mMol)添加至搅拌的2-氨基-4,5,6,7-四氢苯并[b]噻吩-3-甲酸乙酯(制备1)和3-乙氧基丁-2-烯酸乙酯(制备2)的甲苯(6.0 L)溶液。将生成的混合物加热至回流，并在回流下搅拌6小时。将混合物冷却40℃并在40℃下搅拌16小时。将混合物加热至50℃(以溶解沉淀物)并且将溶液从反应容器中倒出。将反应容器装入21 %(w/w)乙醇钠的/乙醇(1.1 L, 3.48 Mol)和乙醇(2.0 L)，并将生成的混合物加热至50℃。然后，将反应混合物倒回反应容器时间为5分钟。将生成的混合物加热至回流并在回流下搅拌2小时。将混合物冷却至30℃并分为2个大约相等批次。使用硅藻土?(约2 L)处理各个批次并在减压下浓缩。将生成的固体悬浮在水(2.0 L, 40℃)中并剧烈搅拌直至所有固体自由流动。通过硅藻土?垫过滤收集固体并用水(2.5 L, 40℃)洗涤滤饼。使用乙醚(2 × 1.3 L)洗涤滤液，然后冷却至15℃。小心添加6 M盐酸直至达到pH 4。通过过滤收集生成的沉淀物并使用稀释的盐酸(500 mL)洗涤滤饼。将滤饼在50 ℃下的干燥箱中干燥2天。这产生黄色固体形式的标题化合物(584 g, 64%)。

制备4：4-氯-2-甲基-5,6,7,8-四氢[1]苯并噻吩并[2,3-b]吡啶-3-甲酸乙酯

将4-羟基-2-甲基-5,6,7,8-四氢[1]苯并噻吩并[2,3-b]吡啶-3-甲酸乙酯(制备3, 150 g, 515 mmol)滴加至三氯氧磷(450 mL, 4.92 mol)并将生成的混合物在100℃下搅拌1小时，然后冷却至室温。真空去除挥发物，并将剩余物小心倾入剧烈搅拌的冰/水混合物。将乙酸乙酯(500 mL)添加至混合物。通过添加10 M氢氧化钠水溶液将混合物调整至pH 8。将层分离并使用乙酸乙酯(3 × 500 mL)进一步萃取水层。使用盐水(300 mL)洗涤混合的有机萃取物，在MgSO₄上干燥并真空浓缩。将生成的油倾入结晶盘，在那里其经静止凝固以产生标题化合物，140.69 g，88%产率。¹H NMR(400 MHz, CDCl₃) δ ppm 1.42(t, 3 H), 1.86-1.89(m, 4 H), 2.59(s, 3 H), 2.82-2.84(m, 2 H), 3.08-3.11(m, 2 H), 4.46(q, 2 H)。

制备5：(4-碘-2-甲基-5,6,7,8-四氢[1]苯并噻吩并[2,3-b]吡啶-3-基)甲酸乙酯

在室温下，在5分钟内将碘化钠(994.0 g, 6.63 Mol)添加至搅拌的乙酰氯(177 mL, 2.48 Mol)和(4-氯-2-甲基-5,6,7,8-四氢[1]苯并噻吩并[2,3-b]吡啶-3-基)甲酸乙酯(制备4, 257 g, 0.83 Mol)的乙腈(2.0 L)溶液。将生成的混合物加热至回流并搅拌30小时。使混合物冷却至室温并静置72小时。通过过滤收集固体并使用冷乙腈(500 mL)洗涤。将固体在二氯甲烷(1.5 L)和水(0.75 L)之间分层。通过添加2 M氢氧化钠溶液将水层碱化至pH 9并将两层分离。使用2 M硫代硫酸钠溶液(800 mL)、盐水(800 mL)洗涤有机层，干燥(Na₂SO₄)、过滤并在减压下浓缩以产生米黄色固体形式的标题化合物(260.0 g, 78%)。通过¹H NMR光谱确定该物质分别为13:1的(4-碘-2-甲基-5,6,7,8-四氢[1]苯并噻吩并[2,3-b]吡啶-3-基)甲酸乙酯和(4-氯-2-甲基-5,6,7,8-四氢[1]苯并噻吩并[2,3-b]吡啶-3-基)甲酸乙酯的混合物。

制备6：(4-碘-2-甲基-5,6,7,8-四氢[1]苯并噻吩并[2,3-b]吡啶-3-基)甲醇

在氩气下，在5℃下向(4-碘-2-甲基-5,6,7,8-四氢[1]苯并噻吩并[2,3-b]吡啶-3-基)甲酸乙酯(制备5, 260.2 g, 0.65 Mol)的CH₂Cl₂(2.0 L)溶液添加25%(w/w)二异丁基氢化铝(2.0 L, 1.97 Mol)时间为1.5小时。使生成的混合物升温至室温并搅拌16小时。使用二氯甲烷(1.0 L)稀释生成的混合物，冷却至0℃并非常小心添加2 M盐酸(200 mL)。然后，添加6M盐酸直至检测水溶液的pH处于pH 2。将生成的混合物剧烈搅拌1小时。通过过滤收集沉淀物并使用二氯甲烷(300 mL)和水(300 mL)洗涤滤饼。将固体悬浮在二氯甲烷(250 mL)和1 M氢氧化钠溶液(400 mL)中并剧烈搅拌直至固体自由流动。通过过滤收集固体，使用水(200 mL)洗涤滤饼。在减压下相继从丙-2-醇(500 mL)、甲醇(500 mL)和二氯甲烷(500 mL)中浓缩滤饼以产生奶油色固体形式的标题化合物(212.3 g, 91 %)。

制备7：(4-碘-2-甲基-5,6,7,8-四氢[1]苯并噻吩并[2,3-b]吡啶-3-基)甲醛

在5℃下，向(4-碘-2-甲基-5,6,7,8-四氢[1]苯并噻吩并[2,3-b]吡啶-3-基)甲醇(制备6, 150.0 g, 0.42 Mol)的三乙胺(174 mL, 1.25 Mol)和二甲基亚砜(1.1 L)的悬浮液分批添加三氧化硫吡啶络合物。将生成的混合物在室温下搅拌16小时。将混合物倾入剧烈搅拌冰水(1.0 L)中。通过过滤收集固体并用水(750 mL)洗涤滤饼。将生成的固体溶于二氯甲烷/乙酸乙酯(2.0 L, 9:1 )(需要升温)并将溶液干燥(MgSO₄)，过滤并在减压下浓缩以产生白色固体形式的标题化合物(135.0 g, 91 %)。¹H NMR(400 MHz, CDCl₃) δ 10.36(s, 1 H), 3.32-3.20(m, 2H), 2.89-2.79(m, 2H), 2.76(s, 3H) 1.95-1.83(m, 4H)。

制备8：2-(4-碘-2-甲基-5,6,7,8-四氢[1]苯并噻吩并[2,3-b]吡啶-3-基)-2-[(三甲基甲硅烷基)氧基]乙腈

向4-碘-2-甲基-5,6,7,8-四氢[1]苯并噻吩并[2,3-b]吡啶-3-甲醛(制备7, 115.31 g, 322.8 mmol)的二氯甲烷(1.75 L)悬浮液添加碘化锌(41.1 g, 128.8 mmol)并将生成的混合物冷却至5℃。滴加氰化三甲基甲硅烷(129 mL, 968.4 mmol)时间为10分钟，并使混合物升温至室温时间为2小时。添加水(750 mL)和二氯甲烷(1 L)并在搅拌1小时后，将层分离。使用二氯甲烷(500 mL)萃取水层并使用水(700 mL)和盐水(700 mL)洗涤混合的有机层，在Na₂SO₄上干燥并真空浓缩以产生标题化合物，145.61 g，99%产率。¹H NMR(400 MHz, CDCl₃) δ ppm 0.22(s, 9 H), 1.82-1.93(m, 4 H), 2.56-2.86(m, 2 H), 2.92(s, 3 H), 3.18-3.25(m, 2 H), 6.48(s, 1 H)。

制备9：2-[4-碘-2-甲基-5,6,7,8-四氢[1]苯并噻吩并[2,3-b]吡啶-3-基]-2-羟基乙酸甲酯

在5℃下，向搅拌的2-(4-碘-2-甲基-5,6,7,8-四氢[1]苯并噻吩并[2,3-b]吡啶-3-基)-2-三甲基甲硅烷基氧基乙腈(制备8, 168.0 g, 369.10 mMol)的甲醇(2.5 L)悬浮液添加浓硫酸(410 mL, 7.38 Mol)。将混合物加热至70℃并搅拌36小时。在使混合物冷却至室温后，用水(1.0 L)和乙酸乙酯(2.0 L)稀释混合物，然后冷却至5℃。通过小心添加6 M氢氧化钠水溶液将水层的pH调整至pH 8。这导致固体沉淀。通过过滤收集固体，并使用温水(500 mL)和乙酸乙酯(200 mL)洗涤滤饼。保留滤液用于进一步操作。将滤饼悬浮在甲醇(500 mL)中并剧烈搅拌直至固体自由流动。通过过滤收集固体并使用甲醇(2 × 200 mL)和乙醚(2 × 200 mL)洗涤滤饼。将生成的固体在50℃下干燥16小时。这产生白色固体形式的标题化合物(66.5 g, 43%)。将保留滤液的层分离并在减压下浓缩有机层。使用甲醇(100 mL)、乙酸乙酯(100 mL)和乙醚(100 mL)研磨生成的剩余物。通过过滤收集生成的固体并在50℃下干燥16小时。这产生白色固体形式的另外部分的标题化合物(38.3 g, 25%)。

制备10：叔丁氧基(4-碘-2-甲基-5,6,7,8-四氢[1]苯并噻吩并[2,3-b]吡啶-3-基)乙酸甲酯

在滴加高氯酸(70%, 6.15 mL, 71.90 mmol)之前，将羟基(4-碘-2-甲基-5,6,7,8-四氢[1]苯并噻吩并[2,3-b]吡啶-3-基)乙酸甲酯(制备9, 10.0 g, 23.97 mmol)的乙酸叔丁酯(250 mL)悬浮液剧烈搅拌5分钟。将生成的混合物在室温下搅拌20分钟。通过添加饱和碳酸氢钠水溶液(60 mL)将混合物中和并使用乙酸乙酯(250 mL)萃取。将层分离并使用乙酸乙酯(250 mL)进一步萃取水层。使用盐水(250 mL)洗涤混合的有机层，在MgSO₄上干燥并真空浓缩以产生粗产物。通过使用乙酸乙酯/庚烷(10%-40%)洗脱的快速柱色谱纯化剩余物以产生标题化合物，4.26 g，38%产率。¹H NMR(400 MHz, CDCl₃) δ ppm 1.23(s, 9 H), 1.81 -1.92(m, 4 H), 2.66(s, 3 H), 2.79-2.89(m, 2 H), 3.21-3.27(m, 2 H), 3.68(s, 3 H), 5.95(s, 1 H)。

制备11：2-叔丁氧基(4-碘-2-甲基-5,6,7,8-四氢[1]苯并噻吩并[2,3-b]吡啶-3-基)乙酸乙酯

将2-[4-碘-2-甲基-5,6,7,8-四氢[1]苯并噻吩并[2,3-b]吡啶-3-基]-2-羟基乙酸乙酯(3g, 7mmol)溶于20 mL二氯甲烷和乙酸叔丁酯(20mL, 170mmol)中并在冰/水浴中将混合物冷却至3℃。然后滴加浓硫酸(1.14mL, 21 mmol)并使混合物升温至室温时间为3小时。通过添加100 mL的1 M NaOH和100 mL水淬灭反应并将有机层分离。使用盐水(100mL)洗涤有机物，在MgSO₄上干燥并在减压下蒸发。通过使用梯度的EtOAc/庚烷作为洗脱液(0: 100至30:70)的快速层析纯化剩余物以产生白色固体形式的标题化合物(1.22g, 36%)。¹H NMR(400MHz, CDCl₃) δ 1.20(t, 3H), 1.23(s, 9H), 1.81 -1.94(m, 4H), 2.66(s, 3H), 2.80-2.87(m, 2H), 3.22-3.31(m, 2H), 4.10-4.22(m, 2H), 5.90(s, 1 H)。

制备12：叔丁氧基(4-碘-2-甲基-5,6,7,8-四氢[1]苯并噻吩并[2,3-b]吡啶-3-基)乙酸

向叔丁氧基(4-碘-2-甲基-5,6,7,8-四氢[1]苯并噻吩并[2,3-b]吡啶-3-基)乙酸甲酯(制备10, 63.95 g, 135 mmol)的四氢呋喃(1 L)和甲基化酒精(1 L)溶液滴加氢氧化钠水溶液(1 M, 811 mL, 811 mmol)。将生成的混合物在60℃下搅拌90分钟，然后使其冷却至室温过夜。真空去除挥发性溶剂，并使用水(400 mL)稀释剩余的水性剩余物并使用叔丁基甲基醚(600 mL)萃取。用水(400 mL)洗涤有机层然后在冰上冷却。添加2 M盐酸至pH 5并通过过滤收集生成的固体，用水洗涤。将固体溶于2-甲基四氢呋喃(300 mL)并搅拌10分钟。出现水层并将其分离。使用2-甲基四氢呋喃(2 × 300 mL)萃取水层。在MgSO₄上干燥混合的有机层并真空浓缩以产生浅黄色固体形式的标题化合物，54.35 g，88%产率。¹H NMR(400 MHz, CDCl₃) δ ppm 1.27(s, 9 H), 1.81-1.93(m, 4 H), 2.65(s, 3 H), 2.76-2.88(m, 2 H), 3.20-3.27(m, 2 H), 6.13(s, 1 H), 9.66(br s, 1 H)。

制备13：(4R)-4-苄基-3-[(2R)-2-叔丁氧基-2-(4-碘-2-甲基-5,6,7,8-四氢[1]苯并噻吩并[2,3-b]吡啶-3-基)乙酰基]-1,3-噁唑烷-2-酮(13A)和(4R)-4-苄基-3-[(2S)-2-叔丁氧基-2-(4-碘-2-甲基-5,6,7,8-四氢[1]苯并噻吩并[2.3-b]吡啶-3-基)乙酰基]-1,3-噁唑烷-2-酮(13B)

向叔丁氧基(4-碘-2-甲基-5,6,7,8-四氢[1]苯并噻吩并[2,3-b]吡啶-3-基)乙酸(制备12, 54.35 g, 118 mmol)的四氢呋喃(1 L)溶液添加[(苯并三唑-1-基氧基)-二甲基氨基-亚甲基]-二甲基-六氟磷酸铵(67.31 g, 177 mmol)和乙基-二异丙基胺(61.8 mL, 355 mmol)并将生成的反应混合物在40℃下搅拌2小时。在90分钟后，将(R)-4-苄基-2-噁唑烷酮(41.93 g, 237 mmol)溶于四氢呋喃(500 mL)并使用氢化钠(60%的矿物油)处理并在室温下搅拌30分钟。在该时间后，将两种混合物混合并在40℃下搅拌8小时。通过过滤收集沉淀物质。在乙酸乙酯(500 mL)和饱和碳酸氢钠水溶液(500 mL)之间将固体分层。将层分离并使用乙酸乙酯(2 × 500 mL)进一步萃取水层。使用盐水(500 mL)洗涤混合的有机层，在MgSO₄上干燥并真空浓缩以产生褐色油状物，1.2 g。使用饱和碳酸氢钠水溶液(500 mL)洗涤原始THF滤液并添加乙酸乙酯(1 L)以使层能够分离。使用乙酸乙酯(2 × 250 mL)洗涤水层。使用盐水(500 mL)洗涤混合的有机萃取物，在MgSO₄上干燥并真空浓缩。将粗剩余物与来自处理的固体的褐色油状物混合并通过使用梯度的庚烷和乙酸乙酯(0%至20%)洗脱的干燥快速柱色谱纯化。真空浓缩包含产物的部分以产生浅黄色半固体，72 g。通过使用庚烷和乙酸乙酯(0%至10%)梯度洗脱的柱色谱进一步纯化剩余物以分离非对映异构体。将二者从甲基化酒精中重结晶。分离白色固体形式的上部流出点，23.75 g，32%产率(13A)。分离白色固体形式的底部流出点，21.36 g，29%产率(13B)。13A：¹H NMR(400 MHz, CDCl₃) δ ppm 1.25(s, 9 H), 1.80-1.92(m, 4 H), 2.85(s, 3 H), 2.79-2.90(m, 2 H), 2.94(dd, 1 H), 3.15-3.30(m, 2 H), 4.16(dd, 1 H), 4.26(t, 1 H), 4.71-4.80(m, 1 H), 6.90(s, 1 H), 7.23-7.36(m, 4 H)。13B：¹H NMR(400 MHz, CDCl₃) δ ppm 1.17(s, 9 H), 1.82-1.95(m, 4 H), 2.84(s, 3 H), 2.78-2.87(m, 3 H), 3.18-3.31(m, 2 H), 4.17-4.22(m, 1 H), 4.30(t, 1 H), 4.70-4.78(m, 1 H), 6.93(s, 1 H), 7.17-7.33(m, 4 H)。

制备14：(2R)-叔丁氧基(4-碘-2-甲基-5,6,7,8-四氢[1]苯并噻吩并[2,3-b]吡啶-3-基)乙酸

在0℃下，向(4R)-4-苄基-3-[(2R)-2-叔丁氧基-2-(4-碘-2-甲基-5,6,7,8-四氢[1]苯并噻吩并[2,3-b]吡啶-3-基)乙酰基]-1,3-噁唑烷-2-酮(制备13A, 23.75 g, 38.40 mmol)的四氢呋喃(450 mL)和水(150 mL)溶液滴加氢氧化锂水合物(3.35 g, 80.64 mmol)和过氧化氢(27%水溶液, 18.3 mL, 161.27 mmol)的溶液。将生成的溶液在0℃下搅拌15分钟，然后在室温下搅拌2小时。添加亚硫酸钠(500 mL)的饱和溶液随后添加水(500 mL)，并将混合物搅拌15分钟。通过添加6 M盐酸将混合物酸化至pH 4。使用二氯甲烷(4 × 500 mL)萃取混合物。在MgSO₄上干燥混合的有机层并真空浓缩。伴随在回流下加热5分钟从甲基化酒精(150 mL)中结晶生成的白色固体。使混合物冷却至室温过夜。通过过滤收集生成的固体并使用冷甲基化酒精洗涤并真空干燥以产生白色固体形式的标题化合物，12.01 g，68%产率。¹H NMR(400 MHz, CDCl₃) δ ppm 1.27(s, 9 H), 1.81 - 1.93(m, 4 H), 2.65(s, 3 H), 2.75-2.88(m, 2 H), 3.18-3.28(m, 2 H), 6.13(s, 1 H), 9.66(br s, 1 H)。

制备15：(2S)-叔丁氧基(4-碘-2-甲基-5,6,7,8-四氢[1]苯并噻吩并[2,3-b]吡啶-3-基)乙酸

在0℃下，向(4R)-4-苄基-3-[(2S)-2-叔丁氧基-2-(4-碘-2-甲基-5,6,7,8-四氢[1]苯并噻吩并[2,3-b]吡啶-3-基)乙酰基]-1,3-噁唑烷-2-酮(制备13B, 21.36 g, 34.53 mmol)的四氢呋喃(400 mL)和水(130 mL)溶液滴加氢氧化锂水合物(3.04 g, 72.52 mmol)和过氧化氢(27%水溶液, 16.4 mL, 145.04 mmol)溶液。将生成的溶液在0℃下搅拌15分钟，然后在室温下搅拌2小时。添加亚硫酸钠(500 mL)的饱和溶液随后添加水(500 mL)，并将混合物搅拌15分钟。通过添加6 M盐酸将混合物酸化至pH 4。使用二氯甲烷(4 × 500 mL)萃取混合物。在MgSO₄上干燥混合的有机层并真空浓缩。伴随在回流下加热5分钟从甲基化酒精(150 mL)中结晶生成的白色固体。使混合物冷却至室温过夜。通过过滤收集生成的固体并使用冷甲基化酒精洗涤并真空干燥以产生白色固体形式的标题化合物，10.25 g，65%产率。¹H NMR(400 MHz, CDCl₃) δ ppm 1.27(s, 9 H), 1.81-1.93(m, 4 H), 2.65(s, 3 H), 2.75-2.88(m, 2 H), 3.18-3.28(m, 2 H), 6.13(s, 1 H)。

制备16：(2S)-叔丁氧基(4-碘-2-甲基-5,6,7,8-四氢[1]苯并噻吩并[2,3-b]吡啶-3-基)乙酸甲酯

向(2S)-叔丁氧基(4-碘-2-甲基-5,6,7,8-四氢[1]苯并噻吩并[2,3-b]吡啶-3-基)乙酸(制备15, 1.0 g, 2.178 mmol)的二氯甲烷(34 mL)溶液添加[(苯并三唑-1-基氧基)-二甲基氨基-亚甲基]-二甲基-六氟磷酸铵(1.24 g, 3.266 mmol)和乙基-二异丙基胺(600 μL, 3.266 mmol)并将生成的反应混合物在30℃下搅拌2小时。添加甲醇(17 mL)并将反应混合物在30℃下搅拌18小时。将反应冷却至室温并使用二氯甲烷(50 mL)稀释。使用饱和碳酸氢钠水溶液(50 mL)、水(50 mL)和盐水(50 mL)洗涤溶液。在MgSO₄上干燥有机层并真空浓缩。通过使用5%的乙酸乙酯/庚烷洗脱的快速色谱纯化剩余物以产生白色固体形式的标题化合物，963 mg，93%产率。¹H NMR(400 MHz, CDCl₃) δ ppm 1.22(s, 9 H), 1.85-1.88(m, 4 H), 2.65(s, 3 H), 2.82-2.86(m, 2 H), 3.23-3.26(m, 2 H), 3.68(s, 3 H), 5.94(s, 1 H)。

制备17：(4-氯-2-羟基苯基)硼酸

在0℃下，向(4-氯-2-甲氧基苯基)硼酸(1.0 g, 5.36 mmol)的二氯甲烷(5 mL)溶液添加三溴化硼(1 M的二氯甲烷, 10 mL, 10 mmol)。将反应在0℃下搅拌1小时，然后使其升温至室温并如此搅拌18小时。使用水小心淬灭反应。通过过滤收集生成的沉淀物以产生白色固体，260 mg。将层分离并在Na₂SO₄上干燥有机层并真空浓缩以产生白色固体，300 mg。将两个批次的固体混合以产生白色固体形式的标题化合物，560 mg，61%产率。将该物质用于制备18而不纯化。

制备18：5-氯-2-(4,4,5,5-四甲基-1,3.2-二氧杂硼杂环戊-2-基)苯酚

向(4-氯-2-羟基苯基)硼酸(制备15, 200 mg, 1.16 mmol)的二氯甲烷(15 mL)溶液添加频哪醇(274 mg, 2.32 mmol)并将生成的溶液在室温下搅拌18小时。使用水(10 mL)洗涤反应混合物，在Na₂SO₄上干燥并真空浓缩以产生浅黄色固体形式的标题化合物，280 mg，95%产率。¹H NMR(400 MHz, CDCl₃) δ ppm 1.35(s, 12 H), 6.86-6.88(m, 2 H), 7.51(d, 1 H), 7.89(s, 1 H)。

制备19：2-(2-氟-4-甲基苯基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷

向(2-氟-4-甲基苯基)硼酸(500 mg, 3.24 mmol)的乙醚(20 mL)溶液添加频哪醇(360 mg, 3.24 mmol)和4-甲苯磺酸一水合物(30 mg, 162 μmol)并将生成的溶液在室温下搅拌18小时。使用饱和碳酸氢钠水溶液(20 mL)洗涤反应混合物，在MgSO₄上干燥并真空浓缩以产生白色固体形式的标题化合物，740 mg，97%产率。¹H NMR(400 MHz, CDCl₃) δ ppm 1.33(s, 12 H), 2.34(s, 3 H), 6.82(d, 1 H), 6.93(d, 1 H), 7.60(d, 1 H)。

实施例1：叔丁氧基(2-甲基-4-嘧啶-5-基-5,6,7,8-四氢[1]苯并噻吩并[2,3-b]吡啶-3-基)乙酸

在碳酸钾和四(三苯基膦)钯(0)的存在下可使叔丁氧基[4-碘-2-甲基-5,6,7,8-四氢[1]苯并噻吩并[2,3-b]吡啶-3-基]乙酸甲酯(制备10)与嘧啶硼酸反应以提供上述化合物的甲基醚。使用氢氧化锂水溶液水解可用于提供最终产物。

抗病毒活性 > 20 μΜ(n=2)(S8737E)。

实施例2：(2S)-叔丁氧基(2-甲基-4-嘧啶-5-基-5,6,7,8-四氢[1]苯并噻吩并[2,3-b]吡啶-3-基)乙酸

可将来自实施例1的产物样品溶于负载在Chiralpak IC柱(250 × 20 mm 内径)上的甲醇和二氯甲烷(1:1)混合物中并在环境温度下和 60 g/min的流速下使用甲醇/CO₂(60:40)洗脱。可将包含单一对映异构体的部分混合并在减压下蒸发以提供产物对映异构体。可通过使用己烷/异丙醇洗脱的Chiralpak IC柱的手性hplc评价手性纯度。

实施例3：乙氧基[4-(2-羟基-4-甲基苯基)-2-甲基-5,6,7,8-四氢[1]苯并噻吩并[2,3-b]吡啶-3-基]乙酸

步骤1

向1-(2-羟基-4-甲基-苯基)-乙酮(10 g, 67 mmols)的二甲基甲酰胺(100 mL)溶液添加碳酸钾(18.4 g, 2 eq, 133 mmols)，随后添加烯丙基溴(8.06 g, 5.75 mL, 1 eq, 67 mmols)。将反应在室温下搅拌16小时。将剩余物在乙酸乙酯(200 mL)和水(800 mL)之间分层，将有机物分离并使用盐水(50 mL)洗涤，干燥(MgSO₄)，过滤并真空浓缩。在浓缩物冷却至室温后，无色片状形式的1-(2-烯丙基氧基-4-甲基-苯基)-乙酮结晶 12.40 g(98%产率)。LCMS(2 min酸性) 1.20 min 根据UV 72%-100%纯度，ES+/AP+ 191。HNMR(CDCl₃) >95%纯度 7.68(d, J=8.01 Hz, 1 H), 6.80 - 6.83(m, 1 H), 6.76(s, 1 H), 6.10(m, 1 H), 5.44(dq, J=17.5, 1.5 Hz, 1 H), 5.33(dq, J=11.0 Hz, 1.5 Hz, 1 H), 4.61 - 4.66(m, 2 H), 2.63(s, 3 H), 2.37(s, 3 H)。

步骤2

向1-(2-烯丙基氧基-4-甲基-苯基)-乙酮(13.9 g, 73 mmols)添加二甲基甲酰胺缩二甲醇(56 mL, 422 mols, 5.8 eq)，并将反应加热至回流过夜。然后将反应真空浓缩以产生1-(2-烯丙基氧基-4-甲基-苯基)-3-二甲基氨基-丙烯酮(17.9 g)的橙色油状物，将粗产物用于下一反应。

步骤3

向搅拌的粗1-(2-烯丙基氧基-4-甲基-苯基)-3-二甲基氨基-丙烯酮(14.1 g. 57.5 mmols)的甲醇(70 mL)溶液添加羟胺盐酸盐(4.4 g, 63 mmols, 1.1 eq)并将反应在室温下搅拌1小时。滤出并分析无色针状晶体并且发现为5-(2-烯丙基氧基-4-甲基-苯基)-异噁唑 7.3 g(58%产率)。LCMS(2 min酸性) 1.32 min 根据UV 64%-91%纯度，ES+/AP+ 216。HNMR(CDCl₃) >95%纯度 7.88(d, J=8.01 Hz, 1 H), 6.88 - 6.92(m, 1 H), 6.82(s, 1 H), 6.77(m, 1 H), 6.05 - 6.20(m, 1 H), 5.46(dq, J=17.0, 1.5 Hz, 1 H), 5.35(dq, J=10.5, 1.5 Hz, 1 H), 4.67(m, 2H), 2.40(s, 3H)。

步骤4

向搅拌的5-(2-烯丙基氧基-4-甲基-苯基)-异噁唑(7.3 g, 33.8 mmols)的乙醇(40 mL)悬浮液添加乙醇钠(21%的乙醇溶液, 40 mL, 110 mmols, 3.2 eq)并将反应在室温下搅拌3小时。使用盐酸(2N, 水溶液)将反应酸化至pH 2并滤出固体并空气干燥1小时。分析淡白色固体，4.8 g(66%产率)并发现为纯的3-(2-烯丙基氧基-4-甲基-苯基)-3-氧代-丙腈。LCMS(2 min酸性) 1.12 min 根据UV 51%-100%纯度，ES+/AP+ 216，ES-/AP- 214。HNMR(CDCl₃) >95%纯度 7.80(d, J=8.0 Hz, 1 H), 6.88(dd, J=8.0, 1.0 Hz, 1 H), 6.79(s, 1 H), 6.13(m, 1 H), 5.37-5.50(m, 2 H), 4.67-4.70(m, 2 H), 4.08(s, 2 H), 2.41(s, 3 H)。

步骤5

向搅拌的3-(2-烯丙基氧基-4-甲基-苯基)-3-氧代-丙腈(1 g, 4.6 mmols)的乙醇(20 mL)溶液添加环己酮(684 mg, 722 μL, 7 mmols, 1.5 eq)和硫(224 mg, 7 mmols, 1.5 eq)，随后添加吗啉(607 mg, 610 μL, 7 mmols, 1.5 eq)并将反应在40℃下搅拌过夜。将反应真空浓缩。使用具有Redisep硅胶40 g管柱的ISCO Companion和梯度的庚烷和乙酸乙酯(0%至40%)纯化剩余物。将包含目标产物的部分混合并真空浓缩以产生黄色胶状物形式的(2-烯丙基氧基-4-甲基-苯基)-(2-氨基-4,5,6,7-四氢-苯并[b]噻吩-3-基)-甲酮，1.1 g(72%产率)。LCMS(2 min酸性) 1.45 min 根据UV 58%-100%纯度，ES+/AP+ 328。HNMR(CDCl₃) >95%纯度 7.08(d, J=7.5 Hz, 1 H) 6.91(br. s., 2 H) 6.78(dq, J=7.5, 0.5 Hz, 1 H) 6.69(s, 1 H) 5.92(m, J=17.0, 10.5, 5.0, 5.0 Hz, 1 H) 5.13 - 5.28(m, 2 H) 4.52(dt, J=5.0, 2.0 Hz, 2 H) 2.47(tt, J=6.0, 2.0 Hz, 2 H) 2.36(s, 3 H) 1.78(tt, J=6.0, 2.0 Hz, 2 H) 1.64 - 1.71(m, 2 H) 1.44 - 1.51(m, 2 H)。

步骤6

向搅拌的(2-烯丙基氧基-4-甲基-苯基)-(2-氨基-4,5,6,7-四氢-苯并[b]噻吩-3-基)-甲酮(882 mg, 2.69 mmols)的乙醇(30 mL)溶液添加2,4-二氧代戊酸乙酯(426 mg, 378 μL, 1 eq)，随后添加乙酰氯(846 mg, 766 μL, 4 eq)，并将反应加热至50℃时间为1小时。然后，将反应真空浓缩以产生浅黄色油状物形式的[4-(2-烯丙基氧基-4-甲基-苯基)-2-甲基-5,6,7,8-四氢-苯并[4,5]噻吩并[2,3-b]吡啶-3-基]-氧代-乙酸乙基酯盐酸盐，1 g(86%产率)。LCMS(2 min酸性) 1.70 min 根据UV 54%-100%纯度，ES+/AP+ 450。HNMR(CDCl₃) >90%纯度 6.95(d, J=7.0 Hz, 1 H) 6.87(d, J=7.0 Hz, 1 H) 6.76(s, 1 H) 5.82(m, 1 H) 5.09 - 5.20(m, 2 H) 4.39 - 4.51(m, 2 H) 3.84 - 3.94(m, 2 H) 2.95(s, 3 H) 2.87 - 2.93(m, 2 H) 2.43(s, 3 H) 1.92 - 2.08(m, 2 H) 1.78 - 1.89(m, 2 H) 1.55 - 1.70(m, 2 H) 1.12(t, J=7.1 Hz, 3 H)。

步骤7

向搅拌的 [4-(2-烯丙基氧基-4-甲基-苯基)-2-甲基-5,6,7,8-四氢-苯并[4,5]噻吩并[2,3-b]吡啶-3-基]-氧代-乙酸乙基酯盐酸盐(1.1 g, 2.56 mmols)的乙醇(20 mL)溶液添加硼氢化钠(145 mg, 1.5 eq, 3.84 mmols)，并将反应在室温下搅拌5分钟。将反应真空浓缩，并将剩余物在乙酸乙酯(20 mL)和盐酸(水溶液, 1 N, 30 mL)之间分层。将有机物分离，使用盐水(10 mL)洗涤，干燥(MgSO₄)，过滤并真空浓缩以产生淡橙色胶状物形式的粗[4-(2-烯丙基氧基-4-甲基-苯基)-2-甲基-5,6,7,8-四氢-苯并[4,5]噻吩并[2,3-b]吡啶-3-基]-羟基-乙酸乙基酯，1.1 g(91 %产率)。LCMS(2 min酸性) 1.53 min 根据UV 52%-81%纯度，ES+/AP+ 452。HNMR(CDCl₃) >80%纯度 7.02(d, J=7.4 Hz, 1 H) 6.81 - 6.85(m, 1 H) 6.79(s, 1 H) 5.86(m, 1 H) 5.18(s, 1 H) 5.08 - 5.17(m, 2 H) 4.47 - 4.51(m, 2 H) 4.08 - 4.22(m, 2 H) 2.81(t, J=6.2 Hz, 2 H) 2.63(s, 3 H) 2.43(s, 3 H) 1.71 - 1.87(m, 4 H) 1.53 - 1.64(m, 2 H) 1.17 - 1.21(m, 3 H)。

步骤8

向搅拌的[4-(2-烯丙基氧基-4-甲基-苯基)-2-甲基-5,6,7,8-四氢-苯并[4,5]噻吩并[2,3-b]吡啶-3-基]-羟基-乙酸乙基酯(100 mg, 221 μmols, 1 eq)的MeCN(5 mL)溶液添加氧化银(102 mg, 442 μmols, 2 eq)，随后添加碘乙烷(172 mg, 89 μL, 5 eq)并将反应在60℃下搅拌16小时。添加另外的碘乙烷(1 mL, 50 eq)和氧化银(I)(102 mg, 2 eq)并将反应继续在60℃下加热16小时。使用MeCN(5 mL)稀释反应并过滤。然后，将滤液真空浓缩。使用具有Redisep硅胶12 g管柱的ISCO Companion和梯度的庚烷和乙酸乙酯(0%至30%)纯化剩余物。将包含[4-(2-烯丙基氧基-4-甲基-苯基)-2-甲基-5,6,7,8-四氢-苯并[4,5]噻吩并[2,3-b]吡啶-3-基]-乙氧基-乙酸乙酯的部分混合并真空浓缩以产生淡橙色油状物形式的目标产物，22 mg(22%产率)。LC-MS(12 min酸性) 7.55 mins 根据UV 100%纯度，ES+/APCI+ 480。

步骤9

向搅拌的[4-(2-烯丙基氧基-4-甲基-苯基)-2-甲基-5,6,7,8-四氢-苯并[4,5]噻吩并[2,3-b]吡啶-3-基]-乙氧基-乙酸乙基醚(22 mg, 46 μmols)的二氯甲烷(3 mL)溶液添加1,3-二甲基巴比妥酸(38 mg, 240 μmols, 5 eq)，并将反应抽真空并使用氮气填充。添加四(三苯基膦)钯(1.2 mg, 2 mol%)并将反应加热至回流时间为16小时。将反应真空浓缩。使用具有Redisep硅胶4 g管柱的ISCO Companion和梯度的庚烷和乙酸乙酯(0%至40%)纯化剩余物。将包含目标产物的部分混合并真空浓缩以产生淡黄色油状物形式的乙氧基-[4-(2-羟基-4-甲基-苯基)-2-甲基-5,6,7,8-四氢-苯并[4,5]噻吩并[2,3-b]吡啶-3-基]-乙酸乙基醚，20 mg(95%产率)。LC-MS(12 min酸性) 6.40 mins 根据UV 58%-69%纯度，ES+/APCI+ 440，ES-/APCI- 438；6.66 mins 根据UV 27%-31%纯度，ES+/APCI+ 440，ES-/APCI- 438。

步骤10

向搅拌的乙氧基-[4-(2-羟基-4-甲基-苯基)-2-甲基-5,6,7,8-四氢-苯并[4,5]噻吩并[2,3-b]吡啶-3-基]-乙酸乙基醚(20 mg, 45 μmols)的乙醇(1 mL)和四氢呋喃(1 mL)溶液添加氢氧化钠(2N水溶液, 0.5 mL, 20 eq)并将反应在60℃下搅拌5小时。将反应真空浓缩直至去除全部有机溶剂，然后使用盐酸(2N水溶液)将水性剩余物酸化至pH 2。滤出并分析淡黄色固体，4 mg(16%产率)并且发现包含乙氧基-[4-(2-羟基-4-甲基-苯基)-2-甲基-5,6,7,8-四氢-苯并[4,5]噻吩并[2,3-b]吡啶-3-基]-乙酸。LC-MS(12 min酸性) 5.04 mins 根据UV 47%-43%纯度，ES+/APCI+ 412，ES-/APCI- 410；5.80 mins 根据UV 12%-13%纯度，ES+/APCI+ 412，ES-/APCI- 410。

实施例4：2-叔丁氧基(4-碘-2-甲基-5,6,7,8-四氢[1]苯并噻吩并[2,3-b]吡啶-3-基)乙酸

将5-苯并噻唑-硼酸(150 μmol)和2-叔丁氧基(4-碘-2-甲基-5, 6,7,8-四氢[1]苯并噻吩并[2,3-b]吡啶-3-基)乙酸乙酯(制备11, 1 mL的0.1 M的二氧杂环己烷溶液, 100 μmol)添加至反应小瓶。然后，添加1 M的碳酸铯(200 μL, 200 μmol)的水溶液，随后5 μmol的Pd(dppf)Cl₂并在冷却至室温前将整体在100℃下搅拌16h并在减压下蒸发溶液以产生黄色剩余物。将2M氢氧化锂的水(200μL, 400 μmol)溶液添加至各个小瓶，随后添加1 mL的THF，将混合物在室温下摇动16h。在减压下将混合物蒸发至干燥之前使用1 M盐酸水溶液将溶液的pH调整至中性，然后使用乙腈和水的混合物作为流动相通过C18柱上的制备HPLC纯化剩余物。在减压下蒸发合适的部分提供白色固体形式的标题化合物(11 mg, 23%)。ESI/APC(+)：467(M+H)。

使用合适的芳基硼酸，根据实施例4中描述的方法合成下列实施例。

实施例44：(2S)-叔丁氧基[4-(4-氯苯基)-2-甲基-5,6,7,8-四氢[1]苯并噻吩并[2,3-b]吡啶-3-基]乙酸

步骤1：(2S)-叔丁氧基[4-(4-氯苯基)-2-甲基-5,6,7,8-四氢[1]苯并噻吩并[2,3-b]吡啶-3-基]乙酸甲酯

向(2S)-叔丁氧基(4-碘-2-甲基-5,6,7,8-四氢[1]苯并噻吩并[2,3-b]吡啶-3-基)乙酸甲酯(制备16, 100 mg, 212 μmol)的二氧杂环己烷(2 mL)溶液添加4-氯苯硼酸(66 mg, 422 μmol)、乙基-二异丙基胺(120 μL, 636 μmol)、水(500 μL)和四(三苯基膦)钯(25 mg, 20 μmol)。将反应混合物脱气并在密封管中在100℃下搅拌。将反应冷却至室温并使用乙酸乙酯(10 mL)稀释。将混合物通过硅藻土垫。使用水(10 mL)和盐水(10 mL)洗涤有机滤液，在MgSO₄上干燥并真空浓缩以产生粗产物。通过使用乙酸乙酯/庚烷(0%-6%)洗脱的快速色谱纯化剩余物以产生白色半固体形式的标题化合物，60 mg，62%产率。¹H NMR(400 MHz, CDCl₃) δ ppm 0.97(s, 9 H), 1.45-1.48(m, 1 H), 1.62- 1.73(m, 3 H), 1.78-1.82(m, 2 H), 2.71(s, 3 H), 2.78-2.81(m, 2 H), 3.66(s, 3 H), 4.99(s, 1 H), 7.18-7.21(m, 1 H), 7.39-7.42(m, 3H)。

步骤2：(2S)-叔丁氧基[4-(4-氯苯基)-2-甲基-5,6,7,8-四氢[1]苯并噻吩并[2,3-b]吡啶-3-基]乙酸

向(2S)-叔丁氧基[4-(4-氯苯基)-2-甲基-5,6,7,8-四氢[1]苯并噻吩并[2,3-b]吡啶-3-基]乙酸甲酯(60 mg, 131 μmol)的四氢呋喃(2 mL)和甲基化酒精(2 mL)溶液添加氢氧化钠水溶液(1 M, 790 μL, 790 μmol)。将生成的溶液在60℃下搅拌3小时。真空去除挥发性溶剂并使用水(10 mL)稀释剩余物。

将二氯甲烷(20 mL)添加至混合物，然后通过添加2 M盐酸水溶液将其酸化至pH 5。将有机层分离并使用水(10 mL)和盐水(10 mL)洗涤，在MgSO₄上干燥并真空浓缩。将剩余物从2-丙醇中重结晶并通过过滤收集生成的固体以产生白色固体形式的标题化合物，11.2 mg，19%产率。¹H NMR(400 MHz, CDCl₃) δ ppm 1.02(s, 9 H), 1.45-1.48(m, 1 H), 1.67-1.73(m, 3 H), 1.78-1.84(m, 2 H), 2.69(s, 3 H), 2.79-2.81(m, 2 H), 5.11(s, 1 H), 7.18-7.22(m, 1 H), 7.42-7.46(m, 2 H), 7.59-7.61(m, 1 H)。

抗病毒活性 = 0.036 μΜ(n=6)(S8737E)。

HTRF相互作用试验 = 576 nM(n=10)(S9118)。

实施例45：(2S)-叔丁氧基[4-(4-氯-2-氟苯基)-2-甲基-5,6,7,8-四氢[1]苯并噻吩并[2,3-b]吡啶-3-基]乙酸

步骤1：(2S)-叔丁氧基[4-(4-氯-2-氟苯基)-2-甲基-5,6,7,8-四氢[1]苯并噻吩并[2,3-b]吡啶-3-基]乙酸甲酯

使用与实施例44，步骤1中描述的相同方法由(2S)-叔丁氧基(4-碘-2-甲基-5,6,7,8-四氢[1]苯并噻吩并[2,3-b]吡啶-3-基)乙酸甲酯(制备16, 100 mg, 212 μmol)和(4-氯-2-氟苯基)硼酸(74 mg, 424 μmol)制备标题化合物以产生57 mg，56%。获得的物质为3:1比例的阻转异构体的混合物，¹H NMR(400 MHz, CDCl₃) δ ppm 1.01(s, 9 H), 1.48-1.55(m, 1 H), 1.69-1.75(m, 3 H), 1.95-2.03(m, 1 H), 2.72(s, 3 H), 2.80-2.86(m, 3H), 3.66(s, 3H), 4.98(s, 1H), 7.19-7.21(m, 1H), 7.25-7.27(m, 1H), 7.35-7.37(m, 1H)。

步骤2：(2S)-叔丁氧基[4-(4-氯-2-氟苯基)-2-甲基-5,6,7,8-四氢[1]苯并噻吩并[2,3-b]吡啶-3-基]乙酸

使用与实施例44，步骤2中描述的相同方法由(2S)-叔丁氧基[4-(4-氯-2-氟苯基)-2-甲基-5,6,7,8-四氢[1]苯并噻吩并[2,3-b]吡啶-3-基]乙酸甲酯(57 mg, 119 μmol)制备标题化合物。通过使用5%甲醇/二氯甲烷洗脱的快速柱色谱纯化产生标题化合物，24 mg，24%产率。物质是单一阻转异构体。第二阻转异构体未分离。¹H NMR(400 MHz, CDCl₃) δ ppm 1.04(s, 9 H), 1.45-1.51(m, 1 H), 1.62-1.76(m, 3 H), 1.82-1.84(m, 1 H), 2.05-2.10(m, 1 H), 2.69(s, 3 H), 2.80-2.84(m, 2 H), 5.08(s, 1 H), 7.22-7.28(m, 2 H), 7.59-7.61(m, 1 H)。

抗病毒活性 = 0.023 μΜ(n=6)(S8737E)。

HTRF相互作用试验 = 565 nM(n=10)(S9118)。

实施例46：(2S)-叔丁氧基[4-(4-氯-2-羟基苯基)-2-甲基-5,6,7,8-四氢[1]苯并噻吩并[2,3-b]吡啶-3-基]乙酸

步骤1：(2S)-叔丁氧基[4-(4-氯-2-羟基苯基)-2-甲基-5,6,7,8-四氢[1]苯并噻吩并[2,3-b]吡啶-3-基]乙酸甲酯

向(2S)-叔丁氧基(4-碘-2-甲基-5,6,7,8-四氢[1]苯并噻吩并[2,3-b]吡啶-3-基)乙酸甲酯(制备16, 200 mg, 422 μmol)的二氧杂环己烷(4 mL)溶液添加(4-氯-2-羟基苯基)硼酸(制备17, 191 mg, 761 μmol)、二氯[1,1’双(二叔丁基膦)]二茂铁钯(II)?(Pd-118)(Johnson-Matthey, 27 mg, 10 mol%, 42.2 μmol)、磷酸钾(180 mg, 844 μmol)和水(1 mL)。在密封管中将生成的混合物在105℃下搅拌18小时。添加另外部分的Pd-118(10 mg, 3.7 mol%, 15.6 μmol)并将混合物在105℃下搅拌72小时。将反应混合物冷却至室温并通过短二氧化硅垫过滤，用乙酸乙酯洗涤。真空去除溶剂。通过使用乙酸乙酯/庚烷(0% - 10%)洗脱的柱色谱纯化粗产物以产生褐色固体形式的标题化合物，37.5 mg，19%产率。获得的物质为约2: 1比例的阻转异构体的混合物并进行水解步骤2而不进一步纯化。

步骤2：(2S)-叔丁氧基[4-(4-氯-2-羟基苯基)-2-甲基-5,6,7,8-四氢[1]苯并噻吩并[2,3-b]吡啶-3-基]乙酸

使用与实施例44，步骤2中描述的相同方法从(2S)-叔丁氧基[4-(4-氯-2-羟基苯基)-2-甲基-5,6,7,8-四氢[1]苯并噻吩并[2,3-b]吡啶-3-基]乙酸甲酯(70 mg, 148 μmol)制备标题化合物。通过使用乙酸乙酯，然后使用20%的甲醇/乙酸乙酯洗脱的快速柱色谱纯化产生分离阻转异构体，46A：26 mg，24%产率和46B：7 mg，10%产率。46A：¹H NMR(400 MHz, CD₃OD) δ ppm 1.02(s, 9 H), 1.50-1.53(m, 1 H), 1.65-1.98(m, 4 H), 2.18-2.21(m, 1 H), 2.64(s, 3 H), 2.79-2.81(m, 2 H), 5.13(s, 1 H), 6.91(s, 1 H), 6.97(d, 1 H), 7.27(d, 1 H)。46B：¹H NMR(400 MHz, CD₃OD) δ ppm 1.00(s, 9 H), 1.49-1.51(m, 1 H), 1.65-1.85(m, 4 H), 2.20-2.26(m, 1 H), 2.69(s, 3 H), 2.79-2.81(m, 2 H), 5.05(s, 1 H), 6.88(s, 1 H), 6.92(d, 1 H), 7.40(d, 1 H)。

阻转异构体46A：抗病毒活性 = 0.014 μΜ(n=2)(S8737E)。

HTRF相互作用试验 = 558 nM(n=6)(S9118)

阻转异构体46B：抗病毒活性 = 0.040 μΜ(n=2)(S8737E)。

HTRF相互作用试验 = 798 nM(n=2)(S9118)。

实施例47：(2S)-叔丁氧基[4-(2-氟-4-甲基苯基)-2-甲基-5,6,7,8-四氢[1]苯并噻吩并[2,3-b]吡啶-3-基]乙酸

步骤1：(2S)-叔丁氧基[4-(2-氟-4-甲基苯基)-2-甲基-5,6,7,8-四氢[1]苯并噻吩并[2,3-b]吡啶-3-基]乙酸甲酯

使用与实施例44，步骤1中描述的相同方法从(2S)-叔丁氧基(4-碘-2-甲基-5,6,7,8-四氢[1]苯并噻吩并[2,3-b]吡啶-3-基)乙酸甲酯(制备16, 100 mg, 212 μmol)和2-(2-氟-4-甲基苯基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷(制备19, 99 mg, 424 μmol)制备标题化合物以产生100 mg, 96%。获得的物质为2: 1比例的阻转异构体的混合物。

¹H NMR(400 MHz, CDCl₃) δ ppm 0.99(s, 5.8 H), 1.05(s, 3.2 H), 1.26-2.08(m, 6 H), 2.45(s, 3 H), 2.71(s, 1.8H), 2.76-2.80(m, 2H), 2.81(s, 1.2 H), 3.58(s, 1.2 H), 3.66(s, 1.8 H), 5.06(s, 0.66 H), 5.07(s, 0.33 H), 6.94-7.02(m, 2.4 H), 7.23-7.25(m, 0.6 H)。

步骤2：(2S)-叔丁氧基[4-(2-氟-4-甲基苯基)-2-甲基-5,6,7,8-四氢[1]苯并噻吩并[2,3-b]吡啶-3-基]乙酸

使用与实施例44，步骤2中描述的相同方法从(2S)-叔丁氧基[4-(2-氟-4-甲基苯基)-2-甲基-5,6,7,8-四氢[1]苯并噻吩并[2,3-b]吡啶-3-基]乙酸甲酯(100 mg, 220 μmol)制备标题化合物。通过使用5%甲醇/二氯甲烷洗脱的快速柱色谱纯化未能分离阻转异构体，并且混合物仍为2:1比例的两个阻转异构体，40 mg, 41%。¹H NMR(400 MHz, CDCl₃) δ ppm 0.95(s, 5.8 H), 1.05(s, 3.2 H), 1.26-2.08(m, 6 H), 2.44(s, 1.2 H), 2.45(s, 1.8 H), 2.68(s, 1.8 H), 2.75(s, 1.2 H), 2.76-2.81(m, 2 H), 5.05(s, 0.66 H), 5.11(s, 0.33 H), 7.02-7.13(m, 2.4 H), 7.45-7.49(m, 0.6 H)。

抗病毒活性 = 0.071 μΜ(n=2)(S8737E)。

HTRF相互作用试验 = 657 nM(n=2)(S9118)。

实施例48：叔丁氧基[4-(2-羟基-4-甲基苯基)-2-甲基-5,6,7,8-四氢[1]苯并噻吩并[2,3-b]吡啶-3-基]乙酸

步骤1：1-[2-(烯丙基氧基)-4-甲基苯基]乙酮

向1-(2-羟基-4-甲基-苯基)-乙酮(10 g, 67 mmol)的二甲基甲酰胺(100 mL)溶液添加碳酸钾(18.4 g, 133 mmol)，随后添加烯丙基溴(5.75 mL, 67 mmol)。将反应在室温下搅拌16小时。将剩余物在乙酸乙酯(200 mL)和水(800 mL)之间分层，将有机物分离，并用盐水(50 mL)洗涤，在MgSO₄上干燥并真空浓缩。在浓缩物冷却至室温后，无色片状形式的标题化合物结晶，12.40 g，98%产率。LCMS(2 min酸性) 1.20 min 根据UV 72%-100%纯度，ES+/AP+ 191。¹HNMR(400 MHz, CDCl₃) δ ppm 2.37(s, 3H), 2.63(s, 3H), 4.61-4.66(m, 2H), 5.33(dq, 1 H), 5.44(dq, 1 H), 6.10(m, 1 H), 6.76(s, 1 H), 6.80-6.83(m, 1 H), 7.68(d, 1 H)。

步骤2：(2E)-1-[2-(烯丙基氧基)-4-甲基苯基]-3-(二甲基氨基)丙-2-烯-1-酮

向1-[2-(烯丙基氧基)-4-甲基苯基]乙酮(步骤1, 13.9 g, 73 mmol)添加二甲基甲酰胺缩二甲醇(56 mL, 422 mmol)，并将反应加热至回流时间为18小时。然后真空浓缩反应以产生橙色油状物形式的标题化合物，17.9 g，将粗产物用于下一反应。

步骤3：5-[2-(烯丙基氧基)-4-甲基苯基]异噁唑

向搅拌的粗(2E)-1-[2-(烯丙基氧基)-4-甲基苯基]-3-(二甲基氨基)丙-2-烯-1-酮(步骤2, 14.1 g, 57.5 mmol)的甲醇(70 mL)溶液添加羟胺盐酸盐(4.4 g, 63 mmol)并将反应在室温下搅拌1小时。滤出并分析无色针状晶体并且发现为标题化合物，7.3 g，58%产率。LCMS(2 min酸性) 1.32 min 根据UV 64%-91%纯度，ES+/AP+ 216。¹HNMR(400 MHz, CDCl₃) δ ppm 2.40(s, 3H), 4.67(m, 2H), 5.35(dq, 1 H), 5.46(dq, 1 H), 6.05-6.20(m, 1 H), 6.77(m, 1 H), 6.82(s, 1 H), 6.88-6.92(m, 1 H), 7.88(d, 1 H)。

步骤4：3-[2-(烯丙基氧基)-4-甲基苯基]-3-氧代丙腈

向搅拌的5-[2-(烯丙基氧基)-4-甲基苯基]异噁唑(步骤3, 7.3 g, 33.8 mmol)的乙醇(40 mL)悬浮液添加乙醇钠(21%的乙醇溶液, 40 mL, 110 mmol)并将反应在室温下搅拌3小时。使用盐酸(2N, 水溶液)将反应酸化至pH 2并滤出固体并空气干燥1小时以产生淡白色固体形式的标题化合物，4.8 g，66%产率。LCMS(2 min酸性) 1.12 min 根据UV 51%-100%纯度，ES+/AP+ 216，ES-/AP- 214。¹HNMR(400 MHz, CDCl₃) δ ppm 2.41(s, 3H), 4.08(s, 2H), 4.67-4.70(m, 2H), 5.37-5.50(m, 2H), 6.13(m, 1 H), 6.79(s, 1 H), 6.88(dd, 1 H), 7.80(d, 1 H)。

步骤5：[2-(烯丙基氧基)-4-甲基苯基](2-氨基-4,5,6,7-四氢-1-苯并噻吩-3-基)甲酮

向搅拌的3-[2-(烯丙基氧基)-4-甲基苯基]-3-氧代丙腈(步骤4, 1 g, 4.6 mmol)的乙醇(20 mL)溶液添加环己酮(722 μL, 7 mmol)和硫(224 mg, 7 mmol)，随后添加吗啉(610 μL, 7 mmol)并将反应在40℃下搅拌过夜。将反应真空浓缩。使用具有Redisep硅胶40 g管柱的ISCO Companion和梯度的庚烷和乙酸乙酯(0%至40%)纯化剩余物。将包含目标产物的部分混合并真空浓缩以产生黄色胶状物形式的标题化合物，1.1 g，72%产率。LCMS(2 min酸性) 1.45 min 根据UV 58%-100%纯度，ES+/AP+ 328。¹HNMR(400 MHz, CDCl₃) δ ppm 1.44-1.51(m, 2H), 1.64-1.71(m, 2H), 1.78(tt, 2H), 2.36(s, 3H), 2.47(tt, 2H), 4.52(dt, 2H), 5.13-5.28(m, 2H), 5.92(m, 1 H), 6.69(s, 1 H), 6.78(dq, 1 H), 6.91(br s, 2H), 7.08(d, 1 H)。

步骤6：{4-[2-(烯丙基氧基)-4-甲基苯基]-2-甲基-5,6,7,8-四氢[1]苯并噻吩并[2,3-b]吡啶-3-基}(氧代)乙酸乙酯盐酸盐

向搅拌的[2-(烯丙基氧基)-4-甲基苯基](2-氨基-4,5,6,7-四氢-1-苯并噻吩-3-基)甲酮(步骤5, 882 mg, 2.69 mmol)的乙醇(30 mL)溶液添加2,4-二氧代戊酸乙酯(378 μL, 2.69 mmol)，随后添加乙酰氯(766 μL, 10.8 mmol)，并将反应加热至50℃时间为1小时。然后，将反应真空浓缩以产生淡黄色油状物形式的作为盐酸盐的标题化合物的非对映异构体混合物，1 g，86%产率。LCMS(2 min酸性) 1.70 min 根据UV 54%-100%纯度，ES+/AP+ 450。¹HNMR(400 MHz, CDCl₃) δ ppm 1.12(t, 3H), 1.55-1.70(m, 2H), 1.78-1.89(m, 2H), 1.92-2.08(m, 2H), 2.43(s, 3H), 2.87-2.93(m, 2H), 2.95(s, 3H), 3.84-3.94(m, 2H), 4.39-4.51(m, 2H), 5.09-5.20(m, 2H), 5.82(m, 1 H), 6.76(s, 1 H), 6.87(d, 1 H), 6.95(d, 1 H)。

步骤7：{4-[2-(烯丙基氧基)-4-甲基苯基]-2-甲基-5,6,7,8-四氢[1]苯并噻吩并[2,3-b]吡啶-3-基}(羟基)乙酸乙酯

向搅拌的{4-[2-(烯丙基氧基)-4-甲基苯基]-2-甲基-5,6,7,8-四氢[1]苯并噻吩并[2,3-b]吡啶-3-基}(氧代)乙酸乙酯盐酸盐(步骤6, 1.1 g, 2.56 mmol)的乙醇(20 mL)溶液添加硼氢化钠(145 mg, 3.84 mmol)，并将反应在室温下搅拌5分钟。将反应真空浓缩，并将剩余物在乙酸乙酯(20 mL)和盐酸(水溶液, 1N, 30 mL)之间分层。将有机层分离并使用盐水(10 mL)洗涤并在MgSO₄上干燥，过滤并真空浓缩以产生淡橙色胶状物形式的标题化合物的非对映异构体的混合物，1.1 g，91 %产率。LCMS(2 min酸性) 1.53 min 根据UV 52%-81%纯度，ES+/AP+ 452。¹HNMR(400 MHz, CDCl₃)δ ppm 1.17-1.21(m, 3H), 1.53-1.64(m, 2H), 1.71-1.87(m, 4H), 2.43(s, 3H), 2.63(s, 3H), 2.81(t, 2H), 4.08-4.22(m, 2H), 4.47-4.51(m, 2H), 5.08-5.17(m, 2H), 5.18(s, 1 H), 5.86(m, 1H), 6.79(s, 1 H), 6.81-6.85(m, 1 H), 7.02(d, 1 H)。

步骤8：{4-[2-(烯丙基氧基)-4-甲基苯基]-2-甲基-5,6,7,8-四氢[1]苯并噻吩并[2,3-b]吡啶-3-基}(叔丁氧基)乙酸乙酯

向搅拌的{4-[2-(烯丙基氧基)-4-甲基苯基]-2-甲基-5,6,7,8-四氢[1]苯并噻吩并[2,3-b]吡啶-3-基}(羟基)乙酸乙酯(步骤7, 720 mg, 1.59 mmol)的二氯甲烷(2.5 mL)溶液添加乙酸叔丁酯(2.5 mL)，随后添加浓硫酸(244 μL, 4.78 mmol)并将反应在室温下搅拌2小时。通过添加1 M氢氧化钠水溶液直至溶液处于pH 5将反应混合物淬灭。真空去除挥发性溶剂，并使用乙酸乙酯(30 mL)萃取剩余的水层。使用盐水(10 mL)洗涤有机层，在MgSO₄上干燥并真空浓缩。使用具有Redisep硅胶12 g管柱的ISCO Companion和梯度的庚烷和乙酸乙酯(0%至40%)纯化剩余物。将包含产物的部分真空浓缩以产生无色油状物形式的标题化合物的非对映异构体的混合物，370 mg，45%产率。物质显示为约80:20比例的非对映异构体的混合物。

较多非对映异构体(约80%)

¹H NMR(400 MHz, CDCl₃) δ ppm 0.95(s, 9 H) 1.19(t, 3 H) 1.53-1.82(m, 4 H) 1.89-1.99(m, 2 H) 2.42(s, 3 H) 2.70(s, 3 H) 2.80(m, 2 H) 4.11(m, 2 H) 4.26-4.45(m, 2 H) 4.94-5.04(m, 2 H) 5.05(s, 1 H) 5.70-5.80(m, 1 H) 6.71(s, 1 H) 6.80(d, 1 H) 7.15(d, 1 H)。

较少非对映异构体(约20%)

¹H NMR(400 MHz, CDCl₃) δ ppm 1.00(s, 9 H) 1.13(t, 3 H) 1.53-1.82(m, 4 H) 1.89-1.99(m, 2 H) 2.42(s, 3 H) 2.70(s, 3 H) 2.80(m, 2 H) 4.11(m, 2 H) 4.26-4.45(m, 2 H) 4.94-5.04(m, 2 H) 5.05(s, 1 H) 5.70-5.80(m, 1 H) 6.73(s, 1 H) 6.78(d, 1 H) 6.93(d, 1 H)。

步骤9：叔丁氧基[4-(2-羟基-4-甲基苯基)-2-甲基-5,6,7,8-四氢[1]苯并噻吩并[2,3-b]吡啶-3-基]乙酸乙酯

向搅拌的{4-[2-(烯丙基氧基)-4-甲基苯基]-2-甲基-5,6,7,8-四氢[1]苯并噻吩并[2,3-b]吡啶-3-基}(叔丁氧基)乙酸乙酯(步骤8, 370 mg, 729 μmol)的二氯甲烷(10 mL)溶液添加1,3-二甲基巴比妥酸(569 mg, 3.64 mmol)，并将反应抽真空并填充氮气。添加四(三苯基膦)钯 (17 mg, 15 μmol)并将反应加热至回流时间为16小时。添加另外的四(三苯基膦)钯(17 mg, 15 μmol)并将反应加热至回流时间为另外4小时。将反应真空浓缩并预吸附在二氧化硅上。使用具有Redisep硅胶12 g管柱的ISCO Companion和梯度的庚烷和乙酸乙酯(0%至20%)纯化剩余物。将包含产物的部分真空浓缩以产生无色油状物形式的非对映异构体对的标题化合物，214 mg，63%产率。其它较少的非对映异构体对与未反应的起始原料共同洗脱并且未分离。LC-MS(12 min酸性) 6.89 mins 根据UV 100%纯度，ES+/APCI+ 468，ES-/APCI- 466 ¹H NMR(400 MHz, CDCl₃) δ ppm 1.01(s, 9 H) 1.20(t, 3 H) 1.62-1.85(m, 4 H) 2.02-2.14(m, 2 H) 2.41(s, 3 H) 2.74(s, 3 H) 2.78-2.85(m, 2 H) 4.08-4.18(m, 2 H) 5.14(s, 1 H) 6.78(s, 1 H) 6.82(d, 1 H) 7.17(d, 1 H)。

步骤10：叔丁氧基[4-(2-羟基-4-甲基苯基)-2-甲基-5,6,7,8-四氢[1]苯并噻吩并[2,3-b]吡啶-3-基]乙酸

向搅拌的叔丁氧基[4-(2-羟基-4-甲基苯基)-2-甲基-5,6,7,8-四氢[1]苯并噻吩并[2,3-b]吡啶-3-基]乙酸乙酯(步骤9, 214 mg, 458 μmol)的较多非对映异构体对的乙醇(5 mL)和四氢呋喃(5 mL)溶液添加氢氧化钠(2 N, 水溶液, 2 mL, 2.75 mmol)溶液并将反应在60℃下搅拌18小时。将反应真空浓缩直至所有有机溶剂被去除，然后，使用盐酸(2 N, 水溶液)将水性剩余物酸化至pH 2。通过过滤收集沉淀的固体并使用叔丁基甲基醚(10 mL)洗涤并真空干燥以产生白色固体形式的标题化合物的非对映异构体的混合物，76 mg，38%产率。LC-MS(12 min酸性) 5.51 mins 根据UV 81%纯度，ES+/APCI+ 440，ES-/APCI- 438。¹H NMR(400 MHz, CDCl₃) δ ppm 1.04(s, 9 H) 1.66-1.88(m, 4 H) 2.09-2.21(m, 2 H) 2.40(s, 3 H) 2.73(s, 3 H) 2.82(t, 2 H) 5.33(s, 1 H) 6.78(s, 1 H) 6.85(d, 1 H) 7.36(d, 1 H)。

步骤11：手性分离

使用Chiralpak IC柱，使用70:30庚烷:IPA洗脱，以18 mL每分钟，并且总的运行时间为9分钟，分离在步骤10中分离的非对映异构体对。根据UV监测第一个对映异构体在3.56分钟洗脱并且第二个对映异构体在4.54分钟洗脱。

第一个洗脱的对映异构体被确认为(2R)-叔丁氧基[4-(2-羟基-4-甲基苯基)-2-甲基-5,6,7,8-四氢[1]苯并噻吩并[2,3-b]吡啶-3-基]乙酸。

抗病毒活性 = 0.089 μΜ(n=2)(S8737E)

HTRF相互作用试验 = 4120 nM(n=2)(S9118)。

第二个洗脱的对映异构体被确认为具有下列显示的阻转异构体构型的(2S)-叔丁氧基[4-(2-羟基-4-甲基苯基)-2-甲基-5,6,7,8-四氢[1]苯并噻吩并[2,3-b]吡啶-3-基]乙酸(通过X-射线结构确认)：

抗病毒活性 = 0.013 μΜ(n=2)(S8737E)

HTRF相互作用试验 = 576 nM(n=2)(S9118)。

实施例49：(S)-2-(叔丁氧基)-2-(4-(4-(二氟甲基)苯基)-2-甲基-5,6,7.8-四氢苯并[4.5]噻吩并[2,3-b]吡啶-3-基)乙酸的制备

步骤1：(S)-2-(叔丁氧基)-2-(4-(4-(二氟甲基)苯基)-2-甲基-5,6,7,8-四氢苯并[4,5]噻吩并[2,3-b]吡啶-3-基)乙酸甲酯

在反应管中，将2-(4-(二氟甲基)苯基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷(1.04 g, 4.09 mmol)、磷酸钾(1.35 g, 6.36 mmol)、水(750 μL)和二氯[1,1’双(二叔丁基膦)]二茂铁钯(II)?(101 mg, 155 μmol)添加至搅拌的(S)-2-(叔丁氧基)-2-(4-碘-2-甲基-5,6,7,8-四氢苯并[4,5]噻吩并[2,3-b]吡啶-3-基)乙酸甲酯(750 mg, 1.58 mmol)的二氧杂环己烷(11 mL)溶液。并使用氩气将反应混合物脱气2分钟，密封，然后在100 ℃下搅拌16小时。将反应混合物冷却至室温，使用乙酸乙酯(30 mL)和水(30 mL)稀释，然后通过硅藻土垫。将滤液层分离并使用乙酸乙酯(3 × 30 mL)萃取水层。将混合的有机层干燥(Na₂SO₄)并真空浓缩以产生粗产物。通过使用乙酸乙酯/庚烷(10%)洗脱的快速柱色谱纯化剩余物以产生黄色油状物形式的标题化合物(639 mg, 85%)。¹H NMR(400 MHz, CDCl₃) δ = 0.96(s, 9H), 1.85-1.35(m, 6H), 2.72(s, 3H), 2.85-2.75(m, 2H), 3.67(s, 3H), 4.95(s, 1 H), 6.76(t, 1 H), 6.45(d, 1 H), 7.61 -7.51(m, 3H)。LCMS(运行时间 = 5分钟,碱性)：R_t = 3.37分钟；m/z 474.23 [M+H⁺]。

步骤2：(S)-2-(叔丁氧基)-2-(4-(4-(二氟甲基)苯基)-2-甲基-5,6,7,8-四氢苯并[4,5]噻吩并[2,3-b]吡啶-3-基)乙酸

在室温下，将2 M氢氧化钠水溶液(1.93 mL, 3.86 mmol)添加至(S)-2-(叔丁氧基)-2-(4-(4-(二氟甲基)苯基)-2-甲基-5,6,7,8-四氢苯并[4,5]噻吩并[2,3-b]吡啶-3-基)乙酸甲酯(183 mg, 0.39 mmol)的1:1 四氢呋喃 / 工业甲基化酒精(4 mL)溶液。将生成的混合物在室温下搅拌64 h。将反应混合物在乙酸乙酯(20 mL)和水(10 mL)之间分层。通过添加2 M盐酸水溶液将水性溶液调整至pH 4。将层分离并使用乙酸乙酯(2 × 10 mL)萃取水层。将混合的有机层干燥(MgSO₄)并真空浓缩以产生淡橙色固体形式的粗产物。通过使用甲醇/二氯甲烷(3%-5%)洗脱的二氧化硅上的快速柱色谱将其纯化以产生淡白色固体形式的标题化合物(111 mg, 63%)。¹H NMR(400 MHz, CDCl₃) δ = 1.01(s, 9H), 1.90-1.35(m, 6H), 2.70(s, 3H), 2.85-2.78(m, 2H), 5.07(brs, 1 H), 6.75(t, 1 H), 7.34-7.41(brm, 1 H), 7.61(d, 2H), 7.80-7.70(brm, 1 H).LCMS(运行时间 = 5分钟，碱性)：Rt = 3.04分钟；m/z 460.22 [M+H⁺]。

抗病毒活性 = 0.081 μΜ(n=6)(S8737E)。

HTRF相互作用试验 = 11010 nM(n=6)(S9118)。

实施例50：(S)-2-(叔丁氧基)-2-(2-甲基-4-(4-(三氟甲基)苯基)-5,6,7,8-四氢苯并[4,5]噻吩并[2,3-b]吡啶-3-基)乙酸的制备

步骤1：(S)-2-(叔丁氧基)-2-(2-甲基-4-(4-(三氟甲基)苯基)-5,6,7,8-四氢苯并[4,5]噻吩并[2,3-b]吡啶-3-基)乙酸甲酯

在反应管中，将2-(4-(三氟甲基)苯基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷(115 g, 0.42 mmol)、N-乙基-N-异丙基丙烷-2-胺(120 μL, 0.64 mmol)和水(500 μL)添加至搅拌的(S)-2-(叔丁氧基)-2-(4-碘-2-甲基-5,6,7,8-四氢苯并[4,5]噻吩并[2,3-b]吡啶-3-基)乙酸甲酯(100 mg, 0.21 mmol)的二氧杂环己烷(2 mL)溶液。使用氩气将反应混合物脱气2分钟，然后添加四(三苯基膦)钯(0)(25 mg, 21 μmmol)并将容器密封并在100℃下加热16小时。将反应混合物冷却至室温并使用乙酸乙酯(30 mL)和水(30 mL)稀释，并将混合物通过硅藻土垫过滤。将滤液层分离并使用盐水(30 mL)洗涤有机层，干燥(MgSO₄)并真空浓缩以产生褐色胶状物形式的粗产物。通过使用乙酸乙酯/庚烷(10%)洗脱的快速柱色谱纯化剩余物以产生黄色油状物形式的标题化合物(75 mg, 72%)。¹H NMR(400 MHz, CDCl₃) δ = 0.96(s, 9H), 1.85-1.35(m, 6H), 2.72(s, 3H), 2.85-2.75(m, 2H), 3.69(s, 3H), 4.91(s, 1 H), 7.40(d, 1 H), 7.61(d, 1 H), 7.71(m, 2H)。LCMS(运行时间 = 5分钟，碱性)：R_t = 3.64分钟；m/z 492.06 [M+H⁺]。

步骤2：(S)-2-(叔丁氧基)-2-(2-甲基-4-(4-(三氟甲基)苯基)-5,6,7,8-四氢苯并[4,5]噻吩并[2,3-b]吡啶-3-基)乙酸

在室温下，将1 M氢氧化钠水溶液(1.6 mL, 1.6 mmol)添加至(S)-2-(叔丁氧基)-2-(2-甲基-4-(4-(三氟甲基)苯基)-5,6,7,8-四氢苯并[4,5]噻吩并[2,3-b]吡啶-3-基)乙酸甲酯(75 mg, 0.15 mmol)的1:1四氢呋喃 / 工业甲基化酒精(4 mL)溶液。将生成的混合物在60℃下加热1.5 h。真空浓缩生成的溶液并将剩余物溶于水(10 mL)。通过添加2 M盐酸水溶液将水溶液调整至pH 4并使用二氯甲烷(20 mL)萃取生成的悬浮液。使用盐水洗涤有机层，干燥(MgSO₄)并真空浓缩以产生淡黄色固体形式的粗产物。通过使用甲醇/二氯甲烷(5%)洗脱的二氧化硅上的快速柱色谱将其纯化以产生淡黄色固体形式的标题化合物(40.3 mg, 56%)。¹H NMR(400 MHz, CDCl₃) δ = 1.01(s, 9H), 1.89-1.30(m, 6H), 2.71(s, 3H), 2.90-2.75(m, 2H), 5.02(s, 1 H), 7.48-7.34(m, 1 H), 7.90-7.64(m, 3H)。LCMS(运行时间 = 5分钟,碱性)：Rt = 3.30分钟；m/z 478.01 [M+H⁺]。

抗病毒活性 = 0.055 μΜ(n=4)(S8737E)。

HTRF相互作用试验 = 1500 nM(n=4)(S9118)。

实施例51：(S)-2-(4-(4-溴苯基)-2-甲基-5,6,7,8-四氢苯并[4,5]噻吩并[2,3-b]吡啶-3-基)-2-(叔丁氧基)乙酸的制备

步骤1：(S)-2-(4-(4-溴苯基)-2-甲基-5,6,7,8-四氢苯并[4,5]噻吩并[2,3-b]吡啶-3-基)-2-(叔丁氧基)乙酸甲酯

在反应管中，将4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯胺(140 mg, 0.63 mmol)、碳酸氢钠(178 mg, 2.1 mmol)和水(200 μL)添加至搅拌的(S)-2-(叔丁氧基)-2-(4-碘-2-甲基-5,6,7,8-四氢苯并[4,5]噻吩并[2,3-b]吡啶-3-基)乙酸甲酯(200 mg, 0.42 mmol)的N,N-二甲基乙酰胺(4 mL)溶液。使用氩气将反应混合物脱气2分钟，然后添加二(三叔丁基膦)钯(0)(22 mg, 42 μmmol)并将容器密封并在100℃下加热16小时。将反应混合物冷却至室温并在二氯甲烷(30 mL)和水(30 mL)之间分层。将层分离并将有机层干燥(MgSO₄)并真空浓缩以产生褐色胶状物形式的粗产物。通过使用乙酸乙酯/庚烷(25%)洗脱的二氧化硅上的快速柱色谱纯化剩余物以产生白色泡沫形式的标题化合物(114 mg, 67%)。¹H NMR(400 MHz, CDCl₃) δ = 0.97(s, 9H), 1.95-1.30(m, 6H), 2.68(s, 3H), 2.85-2.77(m, 2H), 3.65(s, 3H), 3.80(brs, 2H), 5.19(s, 1 H), 6.75-6.68(m, 2H), 6.99(d, 1 H), 7.19(d, 1 H)。

步骤2：(S)-2-(4-(4-溴苯基)-2-甲基-5,6,7,8-四氢苯并[4,5]噻吩并[2,3-b]吡啶-3-基)-2-(叔丁氧基)乙酸甲酯

在室温下，将溴化铜(II)(73 mg, 0.33 mmol)和亚硝酸叔丁酯(60 μL, 0.43 mmol) 的乙腈(2 mL)溶液添加至搅拌的(S)-2-(4-(4-氨基苯基)-2-甲基-5,6,7,8-四氢苯并[4,5]噻吩并[2,3-b]吡啶-3-基)-2-(叔丁氧基)乙酸甲酯(114 mg, 0.26 mmol)的乙腈(1 mL)溶液并将生成的混合物在室温下搅拌16小时。将混合物在2 M盐酸水溶液(5 mL)之间分层并添加二氯甲烷(10 mL)。将层分离并使用水(10 mL)、盐水(10 mL)洗涤有机层，干燥(MgSO₄)并真空浓缩以产生粗产物。通过使用乙酸乙酯/庚烷(10%)洗脱的二氧化硅上的快速柱色谱将其纯化以产生褐色油状物形式的标题化合物(83 mg, 63%)。¹HNMR(400 MHz, CDCl₃) δ = 0.96(s, 9H), 1.85-1.40(m, 6H), 2.71(S, 3H), 2.81-2.75(m, 2H), 3.65(s, 3H), 4.99(s, 1H), 7.12(s, 1H), 7.31(d, 1H), 7.60-7.50(m, 2H)。LCMS(运行时间 = 5分钟，碱性)：R_t= 3.57 分钟；m/z 504.12 [M+H⁺]。

步骤3：(S)-2-(4-(4-溴苯基)-2-甲基-5,6,7,8-四氢苯并[4,5]噻吩并[2,3-b]吡啶-3-基)-2-(叔丁氧基)乙酸

在室温下，将1 M氢氧化钠水溶液(1.6 mL, 1.6 mmol)添加至(S)-2-(4-(4-溴苯基)-2-甲基-5,6,7,8-四氢苯并[4,5]噻吩并[2,3-b]吡啶-3-基)-2-(叔丁氧基)乙酸甲酯(83 mg, 0.16 mmol)的1:1四氢呋喃 / 工业甲基化酒精(4 mL)溶液。将生成的混合物加热至60℃并在60℃下搅拌2小时。将生成的溶液真空浓缩并将剩余物溶于水(10 mL)。通过添加2 M盐酸水溶液将水性溶液调整至pH 5并使用二氯甲烷(20 mL)萃取生成的悬浮液。使用盐水洗涤有机层，干燥(MgSO₄)并真空浓缩以产生淡黄色固体形式的粗产物。通过使用工业甲基化酒精(5 mL)研磨将其纯化。通过过滤收集生成的固体以产生白色固体形式的标题化合物(27 mg, 34%)。¹H NMR(400 MHz, CDCl₃) δ = 1.02(s, 9H), 2.00-1.40(m, 6H), 2.69(s, 3H), 2.83-2.70(m, 2H), 5.11(s, 1 H), 7.25-7.06(m, 1 H), 7.63-7.42(m, 3H)。LCMS(运行时间 = 5分钟，碱性)：Rt = 3.19分钟；m/z 490.00 [M+H⁺]。

抗病毒活性 = 0.080 μΜ(n=2)(S8737E)

HTRF相互作用试验 = 1160 nM(n=2)(S9118)。

实施例52：叔丁氧基-(2-甲基-4-对甲苯基-5,8-二氢-6H-7-氧杂-9-硫杂-1-氮杂-芴-3-基)-乙酸

步骤1：(2-氨基-4,7-二氢-5H-噻吩并[2,3-c]吡喃-3-基)-对甲苯基-甲酮

将4-吡喃酮(2.31 mL, 24.97 mmol)和硫(801 mg, 24.97 mmol)添加至3-氧代-3-对甲苯基-丙腈(3.79 g, 23.8 mmol)的乙醇(40 mL)溶液，随后添加吗啉(2.18 mL, 24.97 mmol)并将反应在40℃下加热16小时。将反应混合物真空浓缩并通过使用0%-20%乙酸乙酯 /庚烷洗脱的二氧化硅上的快速色谱纯化剩余物以产生黄色固体形式的(2-氨基-4,7-二氢-5H-噻吩并[2,3-c]吡喃-3-基)-对甲苯基-甲酮(2.2 g, 36%产率)。LCMS(2 min酸性) 1.07 min ES+/AP+ 274(MH+)。¹HNMR(400 MHz, CDCl₃) δ ppm 2.00-2.03(m, 2H), 2.42(s, 3H), 3.80-3.84(m, 2H), 4.80(s, 2H), 6.60(br s, 2H), 7.20(d, 2H), 7.41(d, 2H)。

步骤2：(2-甲基-4-对甲苯基-5,8-二氢-6H-7-氧杂-9-硫杂-1-氮杂-芴-3-基)-氧代-乙酸乙酯

将2,4-二氧代-戊酸乙酯(1.2 mL, 8.6 mmol)添加至2-氨基-4,7-二氢-5H-噻吩并[2,3-c]吡喃-3-基)-对甲苯基-甲酮(2.3 g, 8.6 mmol)的乙醇(50 mL)溶液，随后添加乙酰氯(2.43 mL, 34.3 mmol)并将反应加热至50℃时间为1小时。然后将反应真空浓缩并预吸附在二氧化硅上。通过使用0%-40%的乙酸乙酯/庚烷洗脱的二氧化硅上的快速色谱纯化剩余物以产生红色固体形式的标题化合物(675 mg, 19%)。LCMS(2 min酸性) 2.78 mins ES+/AP+ 396(MH+)。

步骤3：羟基-(2-甲基-4-对甲苯基-5,8-二氢-6H-7-氧杂-9-硫杂-1-氮杂-芴-3-基)-乙酸乙酯

将硼氢化钠(97 mg, 2.56 mmol)添加至搅拌的羟基-(2-甲基-4-对甲苯基-5,8-二氢-6H-7-氧杂-9-硫杂-1-氮杂-芴-3-基)-乙酸乙酯(675 mg, 1.71 mmol)的乙醇(20 mL)溶液。添加2M HCl的水(3 mL)，然后将反应混合物真空浓缩。将剩余物在水(50 mL)和乙酸乙酯(30 mL)之间分层。将层分离并将有机物干燥(MgSO₄)并真空浓缩以产生奶油固体形式的标题化合物(543 mg, 80%)，不经进一步纯化使用。LCMS(2 min酸性) 1.20 min ES+/AP+ 398。¹HNMR(400 MHz, CDCl₃) δ ppm 1.20(t, 3H), 1.82-1.88(m, 2H), 2.41(s, 3H), 2.61(s, 3H), 3.68-3.72(m, 2H), 4.10-4.21(m, 2H), 4.81(s, 2H), 7.16-7.26(m, 4H)。

步骤4：叔丁氧基-(2-甲基-4-对甲苯基-5,8-二氢-6H-7-氧杂-9-硫杂-1-氮杂-芴-3-基)-乙酸乙酯

将乙酸叔丁酯(0.8 mL)添加至羟基-(2-甲基-4-对甲苯基-5,8-二氢-6H-7-氧杂-9-硫杂-1-氮杂-芴-3-基)-乙酸乙酯(100 mg, 0.252 mmol)的二氯甲烷(0.8 mL)溶液，随后添加浓硫酸(40 μL)，并将反应在室温下搅拌2小时。添加碳酸氢钠溶液(10%水溶液, 2 mL)并将反应真空蒸发直至仅剩余水溶液。使用乙酸乙酯(2 mL)萃取水溶液并使用盐水(1 mL)洗涤有机层，干燥并真空浓缩。通过使用0%-30%的乙酸乙酯/庚烷洗脱的二氧化硅上的快速色谱纯化剩余物以产生无色固体(66 mg, 45%)。LCMS(12 min酸性) 7.25 min, ES+/AP+ 454(MH+) ¹HNMR(400 MHz, CDCl₃) δ ppm 0.98(s, 9H), 1.20(t, 3H), 1.55-1.65(m, 2H), 2.43(s, 3H), 2.77(s, 3H), 3.57-3.61(m, 1 H), 3.78-3.82(m, 1 H), 4.06-4.20(m, 2H), 4.79-4.82(m, 2H), 7.16(d, 2H), 7.32(d, 2H)。

步骤5：叔丁氧基-(2-甲基-4-对甲苯基-5,8-二氢-6H-7-氧杂-9-硫杂-1-氮杂-芴-3-基)-乙酸

将氢氧化钠水溶液(2N, 2 mL, 4 mmol)添加至搅拌的叔丁氧基-(2-甲基-4-对甲苯基-5,8-二氢-6H-7-氧杂-9-硫杂-1-氮杂-芴-3-基)-乙酸乙酯(66 mg, 0.15 mmol)的乙醇(2 mL)和四氢呋喃(2 mL)溶液并将反应在60℃下搅拌2小时。将反应真空浓缩直至仅剩余水溶液。通过添加2N HCl水溶液将pH调整至2。通过过滤收集生成的固体并通过制备HPLC纯化以产生标题化合物。LCMS 3.63 min，ES+/AP+ 425.1(MH+)。

柱：Gemini-NX 3 μm C18 110A，环境温度；检测：UV 225 nm - MS

流速：1.5 mL / min；流动相：A：H₂O + 0.1%甲酸，B：MeCN +0.1%甲酸。梯度(时间/分钟，%B) -(0,5)，(3,95)，(4,95)，(4.1 ,5)，(5,5)

抗病毒活性 = 0.189 μΜ(n=2)(S8737E)

HTRF相互作用试验 = 2750 nM(n=2)(S9118)。

本发明化合物的抗HIV活性的评价

基于MT-2的抗病毒试验(S8737E)

与基于MT4的细胞病变作用试验非常相似，该试验被设计为测定小分子在类淋巴母细胞系(MT2)中对HIV-1复制的效应，且可检测化合物作用于HIV-1复制周期的任何阶段时的抗病毒效应。该试验与其相应的细胞毒性试验一起详细地描述在2005年Cao等的论文中(Antimicrobial Agents and Chemotherapy 2005；49(9)，p3833-3841)。

简要地；将MT2细胞感染HIV-1病毒(NL4.3株，Adachi et al., Journal of Virology 1986)，并转移至含有待测试化合物的系列稀释液的试验板上。将该试验板培育3天(MT2)以令数回合的病毒复制/感染发生。该时间结束时，将上清液转移至含有JC53BL细胞的新板上。

JC53BL细胞表达CXCR4、CCR5和CD4受体，以及HIV-1-LTR-β-Gal。在正常培养条件下，无法检测β-半乳糖苷酶的表达水平，但在HIV-1存在下，病毒Tat蛋白可将JC53BL细胞内的HIV-1-LTR激活，导致β-Gal酶的表达增加。该表达可使用‘FluorAce β-半乳糖苷酶受体’试验测量。β-Gal的水平正比于Tat水平(最高达阈值)以提供病毒的定量。抑制病毒复制的化合物会导致信号降低，因此可产生每一种化合物的剂量-反应曲线。然后将其用于测定每一种化合物的IC50以测量该化合物的效力。

基于MT-2抗病毒试验需要化合物的单独细胞毒性评估。其是使用如下的3日MT-2细胞毒性试验进行的。

3日MT2细胞毒性试验(S8738E)

该试验被设计为测试化合物在MT2细胞中是否具有细胞毒性作用，其是通过测量这些细胞在化合物存在下的存活力而进行的。该试验通过加入含有待筛检化合物的系列稀释液的MT2试验板而进行。培育3天后，将板中余留的细胞的存活力使用市售的试剂CellTiter-Glo(Promega Ltd)分析。然后将产生的数据用于计算导致50%细胞毒性所需的化合物浓度(CC50)。

所有实施例具有CC50 >20 μΜ。

参考文献：

Adachi, A.，Gendelman, H.，Koenig, S.，Folks, T.，Willey, R.，Rabson, A.和Martin, M(1986) Production of acquired immunodeficiency syndrome-associated retrovirus in human and nonhuman cells transfected with an infectious molecular clone，J. Virol.，59，284-291。

Cao J，Isaacson J，Patick AK，Blair WS.(2005) High-throughput Human immunodeficiency virus type 1(HIV-1) full replication assay that includes HIV-1 Vif as an antiviral target. Antimicrobial Agents and Chemotherapy；49(9)，p3833-3841。

检测本发明化合物的LEDGF-整合酶相互作用抑制活性的试验

HTRF相互作用试验(S9118)

均相时间分辨荧光(HTRF)试验是以类似于先前关于Mathis(Clin Chem.，2005)论述的HTRF蛋白蛋白试验的报告的方式进行的。该试验步骤进行如下：反应是以20μl终体积，于384-孔黑色低容量微量滴定板(Greiner)中进行。最终反应缓冲液含有29mM磷酸酶(phosphase)缓冲液(pH 7)、10mM HEPES缓冲液(pH 7.4)、68.5mM NaCl、1.4mM KCl、400mM KF 0.05%(w/v)普朗尼克酸(P104，Sigma Aldrich)和1%(v/v) DMSO。将His₆-标记整合酶(78nM终浓度)与稠合至LEDGF的Δ325羧基端整合酶结合域上的甘露糖结合蛋白在室温下，在化合物存在下培育2小时。这两种蛋白试剂均由Prof. Zeger Debyser of Katholieke Universiteit Leuven，Leuven，Belgium供应。以跨越从0.1高至100μM的宽范围内的不同浓度加入所述化合物。之后，加入8.3nM铕穴状化合物轭合性抗-MBP单克隆抗体和17nM与受体荧光团d2轭合的抗-His抗体。在室温下培育2小时后，将板在EnVision?微板读数器(Perkin Elmer)上使用320nM激发波长读数。在665nM和620nM下发射的荧光比用于评估蛋白-蛋白相互作用受抑制的程度。

参考文献：

Mathis G.，Probing molecular interactions with homogeneous techniques based on rare earth cryptates and fluorescence energy transfer. Clin. Chem.41(9)，1391-7(1995)。

Claims

1.式(I)化合物

其中：

R¹为CH₃、CH₂CH₃、Cl、Br、CHF₂或CF₃；

R²为H、OH或F；

X为CH₂或O；

条件是当R¹为CH₃且R²为H时，X为O

或其药物可接受的盐。

2.如权利要求1所述的化合物，其选自：

或其药物可接受的盐。

3.如权利要求1所述的化合物，其为式(la)化合物

其中：

R¹为CH₃、CH₂CH₃、Cl、Br、CHF₂或CF₃；

R²为H、OH或F；

X为CH₂或O；

条件是当R¹为CH₃且R²为H时，X为O

或其药物可接受的盐。

4.如权利要求1至3中任一项所述的化合物，其选自：

或其药物可接受的盐。

5.如权利要求1至4中任一项所述的化合物，其选自：

或其药物可接受的盐。

6.药物组合物，其包含权利要求1至5中任一项所述的化合物以及药物可接受的赋形剂。

7.权利要求1至5中任一项所述的化合物，其用作药物。

8.权利要求1至5中任一项所述的化合物，其用于治疗HIV感染。

9.权利要求1至5中任一项所述的化合物在制备用于治疗HIV感染的药物中的用途。

10.治疗哺乳动物包括人类以治疗HIV感染的方法，其包括给予所述哺乳动物有效量的权利要求1至5中任一项所述的化合物。

11.权利要求1至5中任一项所述的化合物，其与一种或多种其它药理学活性剂组合。

12.权利要求1至5中任一项所述的化合物，其与一种或多种用于治疗HIV感染的其它药剂组合。

13.产品，其包含权利要求1至5中任一项所述的化合物和一种或多种其它药理学活性剂作为用于在治疗中同时、单独或相继使用的联合制剂。

14.试剂盒，其包含两种或多种药物组合物和用于单独保存所述组合物的装置，所述药物组合物的至少一种包含权利要求1至5中任一项所述的化合物以及药物可接受的赋形剂。