CN103417499A - 生长抑素冻干粉针的制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种生长抑素冻干粉针的制备方法，该方法包括以下步骤：1）将甘露醇和生长抑素溶于注射用水制得甘露醇和生长抑素混合溶液，所述混合溶液中甘露醇的浓度为2g/100ml，生长抑素的浓度为0.05~0.6g/100ml；2）将甘露醇和生长抑素混合溶液用pH调节剂调节pH值到4.5~5.0；3）将调节pH值后的溶液用0.22μm的滤膜或滤芯过滤；4）将过滤后的溶液进行灌装半加塞，冷冻干燥，真空状态下全压塞，轧盖，即得。本发明制备出澄清度好、外观好、复溶性好、水分低、有关物质含量低（杂质少）、质量稳定的生长抑素冻干粉针，同时缩短了本品的生产周期，减少了能源消耗。

Description

生长抑素冻干粉针的制备方法

技术领域

本发明属于生物制药领域，涉及一种注射用生长抑素冻干粉针的制备方法。

背景技术

生长抑素（Somstostatin），即生长激素释放抑制因子，主要存在于丘脑下部和胃肠道，在1973年由Brazeau和Burgus等人由下丘脑分离得到并阐明了其结构，是一种内源性调节激素，在体内以十四肽或二十八肽两种形式存在，其有多种抑制作用，如抑制胃肠激素、内脏出血、胰高血糖素。七十年代末，瑞士Serono公司首先采用生物合成方法获得与天然生长抑素具有相同化学结构和生物活性的十四肽生长抑素，并开发成商品，接着在世界各地开始上市。生长抑素一般以冻干粉针的剂型用于临床，静脉注射生长抑素可抑制生长激素、胰岛素和胰高血糖素的分泌，并抑制胃酸的分泌。还能影响胃肠道的吸收、运动、内脏血流和营养功能。生长抑素能抑制胃泌素、胃酸以及胃蛋白酶等的分泌，可以在不引起体循环动脉血压显著变化的情况下明显减少内脏器官的血流量，还可以减少胰腺的内分泌和外分泌和抑制胰高血糖素的分泌，因而临床上主要用于治疗上消化道溃疡性出血、食道静脉曲张出血、预防和治疗胰腺手术后的并发症以及糖尿病酮症酸中毒。

生长抑素是人工合成的十四肽，其分子链中的肽键稳定性较差，在水溶液中易断裂，降解为小肽，影响产品的质量，将其制备成不含水的冻干粉针剂型能有效的解决这一问题。

但是，现有的生长抑素冻干粉针产品质量较差，主要表现在稳定性差，有关物质和微粒超标，复溶后的澄清度差，冻干干燥过程中易产生分层使产品外观不合格等，另外现有的生长抑素冻干粉针制备周期长，能耗和生产成本较高。

发明内容

本发明的目的是为了克服现有技术不足，提供一种生长抑素冻干粉针的制备方法，以提高生长抑素冻干粉针的质量。

上述目的是通过以下技术方案实现的：

一种生长抑素冻干粉针的制备方法，该方法包括以下步骤：

1）将甘露醇和生长抑素溶于注射用水制得甘露醇和生长抑素混合溶液，所述混合溶液中甘露醇的浓度为2g/100ml，生长抑素的浓度为0.05~0.6g/100ml；

2）将甘露醇和生长抑素混合溶液用pH调节剂调节pH值到4.5~5.0；

3）将调节pH值后的溶液用0.22μm的滤膜或滤芯过滤；

4）将过滤后的溶液进行灌装半加塞，冷冻干燥，真空状态下全压塞，轧盖，即得。

优选地，所述pH调节剂为乳酸。

优选地，所述生长抑素的浓度为0.15~0.4g/100ml。

优选地，所述注射用水是制备后不超过12小时的新鲜注射用水，其温度为20~30℃。

优选地，所述冷冻干燥包括以下步骤：

1）预冻：将过滤后的溶液置于-30℃保温3~4小时；

2）一次升华：在真空度低于10Pa，隔板温度为-10±1℃条件下升华14~16小时；

3）再干燥：在真空度低于10Pa，隔板温度为25±2℃再干燥3~4小时。

本发明的有益效果是：本发明对影响生长抑素冻干粉针质量的各个环节进行了大量的试验摸索，特别是对赋形剂的种类、原料与赋形剂的比例、pH值调节剂的种类及其调节范围、冷冻干燥各阶段的控制等关键工艺进行研究，从而制备出澄清度好、外观好、复溶性好、水分低、有关物质含量低、质量稳定的生长抑素冻干粉针，同时缩短了本品的生产周期，减少了能源消耗。

与现有的生长抑素冻干粉针相比，本发明制得的生长抑素冻干粉具有以下优点：1）使用弱酸乳酸为pH值调节剂能保证生长抑素不降解和产品有关物质更低；2）配液中间体控制pH值4.5~5.0，能使得产品冻干复溶后澄清度更好，成品pH值在合格范围内；3）工艺简单更易于控制且更节能降耗。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明进行详细说明。

实施例1

一种生长抑素冻干粉针的制备方法，该方法包括以下步骤：

1）称取甘露醇10.0g，用大约300ml新鲜制备（制备后不超过12小时）的20~30℃的注射用水溶解，称取生长抑素0.25g，用大约200ml新鲜制备20~30℃的注射用水溶解，将上述配置的两溶液混合，补加注射用水至500ml，制得甘露醇和生长抑素混合溶液；

2）将甘露醇和生长抑素混合溶液用质量浓度为25%的乳酸调节pH值到4.5；

3）将调节pH值后的溶液经灭过菌的0.22μm孔径气密性合格的平板滤器过滤；

4）将所得滤液每支0.5ml分装入3ml西林瓶中，得到半成品，放入冷冻干燥机，进行冷冻干燥，步骤如下：

①预冻：将半成品置于冻干机中，使温度降至-30℃以下，并在-30℃以下保温3小时。

②一次升华：在真空度低于10Pa条件下，设定隔板温度为-10±1℃，用30min将温度均匀升至-10±1℃，并在-10±1℃下保温14小时。

③再干燥：在真空度低于10Pa条件下，设定隔板温度为25±2℃，用60min将温度均匀升至25±2℃，并在25±2℃下保温3小时。

真空状态下全压塞，轧盖，即得到生长抑素冻干粉针制剂。

实施例2

一种生长抑素冻干粉针的制备方法，该方法包括以下步骤：

1）称取甘露醇10.0g，用大约300ml新鲜制备（制备后不超过12小时）的20~30℃的注射用水溶解，称取生长抑素0.75g，用大约200ml新鲜制备20~30℃的注射用水溶解，将上述配置的两溶液混合，补加注射用水至500ml，制得甘露醇和生长抑素混合溶液；

2）将甘露醇和生长抑素混合溶液用质量浓度为25%的乳酸调节pH值到4.5；

3）将调节pH值后的溶液经灭过菌的0.22μm孔径气密性合格的平板滤器过滤；

4）将所得滤液每支0.5ml分装入3ml西林瓶中，得到半成品，放入冷冻干燥机，进行冷冻干燥，步骤如下：

①预冻：将半成品置于冻干机中，使温度降至-30℃以下，并在-30℃以下保温3小时。

②一次升华：在真空度低于10Pa条件下，设定隔板温度为-10±1℃，用30min将温度均匀升至-10±1℃，并在-10±1℃下保温14小时。

③再干燥：在真空度低于10Pa条件下，设定隔板温度为25±2℃，用60min将温度均匀升至25±2℃，并在25±2℃下保温3小时。

真空状态下全压塞，轧盖，即得到生长抑素冻干粉针制剂。

实施例3

一种生长抑素冻干粉针的制备方法，该方法包括以下步骤：

1）称取甘露醇10.0g，用大约300ml新鲜制备（制备后不超过12小时）的20~30℃的注射用水溶解，称取生长抑素2.0g，用大约200ml新鲜制备20~30℃的注射用水溶解，将上述配置的两溶液混合，补加注射用水至500ml，制得甘露醇和生长抑素混合溶液；

2）将甘露醇和生长抑素混合溶液用质量浓度为25%的乳酸调节pH值到5；

3）将调节pH值后的溶液经灭过菌的0.22μm孔径气密性合格的平板滤器过滤；

4）将所得滤液每支0.5ml分装入3ml西林瓶中，得到半成品，放入冷冻干燥机，进行冷冻干燥，步骤如下：

①预冻：将半成品置于冻干机中，使温度降至-30℃以下，并在-30℃以下保温4小时。

②一次升华：在真空度低于10Pa条件下，设定隔板温度为-10±1℃，用30min将温度均匀升至-10±1℃，并在-10±1℃下保温15小时。

③再干燥：在真空度低于10Pa条件下，设定隔板温度为25±2℃，用60min将温度均匀升至25±2℃，并在25±2℃下保温4小时。

真空状态下全压塞，轧盖，即得到生长抑素冻干粉针制剂。

实施例4

一种生长抑素冻干粉针的制备方法，该方法包括以下步骤：

1）称取甘露醇10.0g，用大约300ml新鲜制备（制备后不超过12小时）的20~30℃的注射用水溶解，称取生长抑素3g，用大约200ml新鲜制备20~30℃的注射用水溶解，将上述配置的两溶液混合，补加注射用水至500ml，制得甘露醇和生长抑素混合溶液；

2）将甘露醇和生长抑素混合溶液用质量浓度为25%的乳酸调节pH值到4.8；

3）将调节pH值后的溶液经灭过菌的0.22μm孔径气密性合格的平板滤器过滤；

4）将所得滤液每支0.5ml分装入3ml西林瓶中，得到半成品，放入冷冻干燥机，进行冷冻干燥，步骤如下：

①预冻：将半成品置于冻干机中，使温度降至-30℃以下，并在-30℃以下保温3.5小时。

②一次升华：在真空度低于10Pa条件下，设定隔板温度为-10±1℃，用30min将温度均匀升至-10±1℃，并在-10±1℃下保温16小时。

③再干燥：在真空度低于10Pa条件下，设定隔板温度为25±2℃，用60min将温度均匀升至25±2℃，并在25±2℃下保温3.5小时。

真空状态下全压塞，轧盖，即得到生长抑素冻干粉针制剂。

实施例5  不同pH调节剂和pH值控制范围的效果对比

本发明通过对配料阶段pH调节剂和pH值控制范围两因素下产品澄清度的对比，及不同pH调节剂下，产品的含量、有关物质的对比，优选出最佳的pH调节剂和pH值控制范围，结果见表1、表2：

表1  不同pH调节剂和pH值控制范围下澄清度对比

注：括号中为溶液的特定编号

表2  不同pH调节剂下产品的含量和有关物质的对比表

结果表明，用25%的乳酸，调节pH值至4.5~5.0，生产出来的生长抑素冻干粉针的澄清度更好，另以25%乳酸为pH调节剂时，产品的有关物质更低，含量更稳定。总结：配料阶段用25%乳酸为pH调节剂， pH值调到4.5~5.0，生产出来的生长抑素冻干产品在澄清度、有关物质、含量等质量指标上都有较大的提高。

实施例6 本发明制备工艺生产的生长抑素冻干粉针与市场上同规格产品的质量比较

按实施例1、2、3、4制备的生长抑素冻干粉针制剂为产品Ⅰ，其他厂家已上市的同种规格产品作为对比产品Ⅱ。取产品Ⅰ和对比产品Ⅱ，分别进行如下试验：观察产品的外观、水分、溶液的澄清度与颜色、含量和有关物质。产品中生长抑素的含量和有关物质的检测方法为：采用高效液相色谱法（《中国药典》2010年版二部附录Ⅴ D）。

有关物质   取本品，加水制成每1ml中含0.5mg的溶液，摇匀，作为供试品溶液。精密量取供试品溶液1ml，置50ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以磷酸溶液（取磷酸11ml，加水800ml，用三乙胺调PH值至2.3，用水稀释至1000ml）为流动相A，乙腈为流动相B；流速为每分钟1.5ml；检测波长为215nm；按表3进行梯度洗脱。理论板数按生长抑素峰计算不低于1500。’

表3  梯度洗脱表

时间(min)	流动相A(％)	流动相B(％)
			0	79	21
18	60	40
			20	60	40
21	79	21
			26	79	21

取对照溶液50μl注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰高约为满量程的20％。精密量取供试品溶液和对照溶液各50μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。

供试品溶液的色谱图中如有杂质峰，除溶剂峰外，单个杂质峰面积不得大于对照溶液主峰面积的0.45倍，即不得过0.9％，各杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积的0.9倍，即不得过1.8％。

含量  取本品，加水制成每1ml中约含0.1mg的溶液，摇匀，作供试品溶液。精密称取生长抑素对照品（使用前按对照品说明书处理）10mg，加水溶解稀释至100ml，摇匀或取用工作对照品1支，稀释至相应浓度（加水制成每1ml中含0.1mg的溶液），作为对照品溶液。用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以磷酸溶液（取磷酸11ml，加水800ml，用三乙胺调节pH至2.3，加水至1000ml）——乙腈（75：25）为流动相。流速1.5ml/min，检测波长215nm。理论板数按生长抑素峰计算应不低于1500。精密量取供试品与对照品溶液各20μl，注入液相色谱仪中，记录色谱图，按外标法以峰面积计算。含生长抑素平均应为标示量的92.0%-108.0%。

其他相关项目的测定按照《中国药典》2010年版二部附录要求方法进行测定。

取本品加水制成每1ml中约含0.1mg的溶液，室温下放置，分别于0、2、4、6、8、10小时，进样20μl，测定含量，结果表4。

表4 本发明制备工艺产品复溶效果及含量

将本发明制备的产品Ⅰ，在6±2℃的恒温下，进行长期试验，并分别在0、3、6、9、12、16、18个月取样进行相关的项目的检测，结果见表5：

表5  本发明制备工艺下产品Ⅰ稳定性考察结果

将本发明制备工艺下的产品Ⅰ和已上市同类规格产品Ⅱ同条件下放置的数据进行比较，结果见表6：

表6  本发明制备的产品Ⅰ和已上市同类规格产品Ⅱ稳定性比较

以上试验数据表明，同已上市产品比较，本发明制备的生长抑素冻干粉针制剂具有产品水分低，外观好，杂质少，具有更优异的复溶性能，产品质量稳定等优点。本发明通过对配料、冷冻干燥等工艺的改进，使得生产出来的生长抑素冻干粉针制剂的质量有了全面的提升。

Claims (5)

1.一种生长抑素冻干粉针的制备方法，其特征在于该方法包括以下步骤：

1）将甘露醇和生长抑素溶于注射用水制得甘露醇和生长抑素混合溶液，所述混合溶液中甘露醇的浓度为2g/100ml，生长抑素的浓度为0.05~0.6g/100ml；

2）将甘露醇和生长抑素混合溶液用pH调节剂调节pH值到4.5～5.0；

3）将调节pH值后的溶液用0.22μm的滤膜或滤芯过滤；

4）将过滤后的溶液进行灌装半加塞，冷冻干燥，真空状态下全压塞，轧盖，即得。

2.根据权利要求1所述的生长抑素冻干粉针的制备方法，其特征在于：所述pH调节剂为乳酸。

3.根据权利要求1所述的生长抑素冻干粉针的制备方法，其特征在于：所述生长抑素的浓度分别为0.15~0.4g/100ml。

4.根据权利要求1所述的生长抑素冻干粉针的制备方法，其特征在于：所述注射用水是制备后不超过12小时的新鲜注射用水，其温度为20~30℃。

5.根据权利要求1所述的生长抑素冻干粉针的制备方法，其特征在于：所述冷冻干燥包括以下步骤：

1）预冻：将过滤后的溶液置于-30℃保温3~4小时；

2）一次升华：在真空度低于10Pa，隔板温度为-10±1℃条件下升华14~16小时；

3）再干燥：在真空度低于10Pa，隔板温度为25±2℃再干燥3~4小时。