CN103408615A - 藏茵陈药材中獐牙菜醇苷化学对照品的制备方法 - Google Patents

藏茵陈药材中獐牙菜醇苷化学对照品的制备方法 Download PDF

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CN103408615A CN2013103080516A CN201310308051A CN103408615A CN 103408615 A CN103408615 A CN 103408615A CN 2013103080516 A CN2013103080516 A CN 2013103080516A CN 201310308051 A CN201310308051 A CN 201310308051A CN 103408615 A CN103408615 A CN 103408615A
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Abstract

本发明涉及一种藏茵陈药材中獐牙菜醇苷化学对照品的制备方法，该方法包括以下步骤：⑴将藏茵陈药材经醇提、减压浓缩后得到藏茵陈提取物浸膏；⑵藏茵陈提取物浸膏溶解后，用氯仿、正丁醇进行萃取，分别得到氯仿部位、正丁醇部位和水部位；⑶正丁醇部位干燥至恒重后，得到正丁醇部位干燥粉末；⑷将正丁醇部位干燥粉末溶解后注入到制备型高效液相色谱中，经洗脱、在线紫外检测，收集洗脱液A；洗脱液A干燥后得到富含獐牙菜醇苷的馏分，此时化学物纯度>80%；⑸富含獐牙菜醇苷的馏分溶解后上样到凝胶分离柱中洗脱，得到洗脱液B；该洗脱液B干燥后得到纯度>98%的富含獐牙菜醇苷的馏分，即得獐牙菜醇苷化学对照品。本发明工艺简单、重复性高、回收率高。

Description

藏茵陈药材中獐牙菜醇苷化学对照品的制备方法
技术领域
本发明涉及一种化学对照品的制备方法，尤其涉及藏茵陈药材中獐牙菜醇苷化学对照品的制备方法。
背景技术
藏茵陈为治疗肝炎、胆囊炎及利胆退黄等肝胆系统疾病的一类著名藏药材，其主要活性成分为环烯醚萜类和口山酮类化合物，口山酮类化学物具有中枢神经系统兴奋和抑制、利尿、强心等作用及解肝毒、保肝、抗炎、抗病毒等活性。7-O-[α-L-吡喃鼠李糖-(1→2)-β-D-吡喃木糖]-1,8-二羟基-3-甲氧基口山酮（7-O-[α-L- rhamnopyranosyl-(1→2)-β-D-xylopyranosyl]-1,8- dihydroxy-3-methoxyxanthone）或被命名为獐牙菜醇苷（Swertioside），是藏茵陈药材中一种口山酮苷类成分，为藏茵陈治疗肝炎的活性成分之一，其化学结构如下：
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目前报道的獐牙菜醇苷的制备方法主要采用柱层析法，尚无有关獐牙菜醇苷制备方法的公开专利。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种工艺简单、重复性高、回收率高的藏茵陈药材中獐牙菜醇苷化学对照品的制备方法。
为解决上述问题，本发明所述的藏茵陈药材中獐牙菜醇苷化学对照品的制备方法，包括以下步骤：
⑴制备提取物浸膏：
将藏茵陈药材以1 g：5 mL ~30 mL的比例用体积浓度为5~95%的乙醇或体积浓度为5~100%的甲醇在提取温度为60~95℃、提取次数1~4次、每次1~4 h的条件下进行加热回流提取，合并提取液；所述提取液在压力为0.02~0.07MPa条件下经减压浓缩后得到藏茵陈提取物浸膏； 
⑵萃取：
将所述藏茵陈提取物浸膏用其质量的1~10倍去离子水溶解后，依次用氯仿、正丁醇进行萃取，分别得到氯仿部位、正丁醇部位和水部位；
⑶所述正丁醇部位干燥至恒重后，得到正丁醇部位干燥粉末；
⑷分离制备富含獐牙菜醇苷的馏分：
将所述正丁醇部位干燥粉末用其质量的1~10倍的体积浓度为5~100%的甲醇或体积浓度为5~95%的乙醇溶解，然后注入到制备型高效液相色谱中，依次用体积浓度为60%的甲醇溶液及体积浓度为70~100%的甲醇溶液进行洗脱，并采用200 nm~400 nm的检测波长进行在线紫外检测，收集体积浓度为70~100%的甲醇溶液中含有的獐牙菜醇苷的洗脱液A；所述洗脱液A在压力为0.02~0.07MPa条件下经浓缩干燥至恒重后得到富含獐牙菜醇苷的馏分，此时化学物纯度>80%；
⑸纯化：
将所述富含獐牙菜醇苷的馏分用其质量的1~10倍的体积浓度为100%的甲醇溶解后，上样到凝胶分离柱中，并采用体积浓度为100%的甲醇溶液进行洗脱，得到洗脱液B；该洗脱液B在压力为0.02~0.07MPa条件下经浓缩干燥至恒重后得到纯度>98%的富含獐牙菜醇苷的馏分，即得獐牙菜醇苷化学对照品。
所述步骤⑴中藏茵陈药材是指川西獐牙菜或抱茎獐牙菜。
所述步骤⑶中的干燥是指冷冻干燥、喷雾干燥、烘箱干燥中的一种。
所述冷冻干燥的条件是指冷肼温度为-20~-50℃，真空度为20Pa~50 Pa。
所述喷雾干燥的条件是指入料流量为200~1000 mL/h，入料温度为30~70℃，进风温度为170~210℃，进风量为16~28 m3/h。
所述烘箱干燥的温度为40~70℃。
所述步骤⑷中的洗脱条件是指洗脱流速为60 mL/min~200 mL/min，洗脱体积为色谱柱体积2~10倍。
所述步骤⑷中的制备型高效液相柱为市售产品，且其填料为C8或C18键合相填料，填料粒径为5~20um。
所述步骤⑸中的洗脱条件是指洗脱流速为0.2 mL/min~5 mL/min，洗脱体积是色谱柱体积2~10倍。
所述步骤⑸凝胶分离柱中的凝胶填料为Sephadex LH-20。
本发明与现有技术相比具有以下优点：
1、由于本发明采用制备高效液相与凝胶色谱相结合的分离纯化技术手段，获得纯度大于98%的獐牙菜醇苷，具有所用试剂量少、操作简单方便、回收率高，精密度高、稳定性好、重复性等特点，因此，适宜产业化生产。
2、由于本发明采用制备型高效液相色谱为分离手段，在保证高效分离的前提下，提高了獐牙菜醇苷化学品产量，可以获得克级纯度在98%以上的化学对照品。
3、本发明采用制备高效液相分离技术与凝胶色谱分离技术对样品分离，分别得到纯度在80%的獐牙菜醇苷（如图1、图2）与纯度在98%的獐牙菜醇苷（如图3），不同纯度的獐牙菜醇苷可以满足不同市场的需求。
4、本发明简单、快速，易于推广。
附图说明
下面结合附图对本发明的具体实施方式作进一步详细的说明。
图1为本发明中制备液相色谱分离獐牙菜醇苷效果检测图（其中A为獐牙菜醇苷）。
图2为本发明中獐牙菜醇苷紫外吸收图；其中獐牙菜醇苷的液相条件为0~15min，10%甲醇~40%甲醇，15~25min，40%甲醇~50%甲醇，25~35min，50%甲醇~60%甲醇，35~45min，60%甲醇·80%甲醇，流速为1ml/min，检测波长为254nm。
图3为本发明中凝胶色谱纯化獐牙菜醇苷效果检测图（其中A为獐牙菜醇苷）。
具体实施方式
实施例1    藏茵陈药材中獐牙菜醇苷化学对照品的制备方法，包括以下步骤：
⑴制备提取物浸膏：
将藏茵陈药材——川西獐牙菜以1 g：5 mL的比例用体积浓度为95%的乙醇在提取温度为60℃、提取次数4次、每次1h的条件下进行加热回流提取，合并提取液；提取液在压力为0.02MPa条件下经减压浓缩后得到藏茵陈提取物浸膏。 
⑵萃取：
将藏茵陈提取物浸膏用其质量的1倍去离子水溶解后，依次用氯仿、正丁醇进行萃取，分别得到氯仿部位、正丁醇部位和水部位。
⑶正丁醇部位在冷肼温度为-20℃，真空度为20Pa的条件下经冷冻干燥至恒重后，得到正丁醇部位干燥粉末。
⑷分离制备富含獐牙菜醇苷的馏分：
将正丁醇部位干燥粉末用其质量的1倍的体积浓度为5%的乙醇溶解，然后注入到制备型高效液相色谱中，依次用体积浓度为60%的甲醇溶液及体积浓度为100%的甲醇溶液进行洗脱，洗脱条件是指洗脱流速为200 mL/min，洗脱体积为色谱柱体积10倍，并采用400 nm的检测波长进行在线紫外检测，收集体积浓度为100%的甲醇溶液中含有的獐牙菜醇苷的洗脱液A；洗脱液A在压力为0.02MPa条件下经浓缩干燥至恒重后得到富含獐牙菜醇苷的馏分，此时化学物纯度>80%，制备液相色谱分离獐牙菜醇苷效果检测图如图1。
其中：制备型高效液相柱为市售产品，且其填料为C8或C18键合相填料，填料粒径为5~20um。
⑸纯化：
将富含獐牙菜醇苷的馏分用其质量的1倍的体积浓度为100 %的甲醇溶解后，上样到凝胶分离柱中，并采用体积浓度为100%的甲醇溶液进行洗脱，得到洗脱液B；该洗脱液B在压力为0.02MPa条件下经浓缩干燥至恒重后得到纯度>98%的富含獐牙菜醇苷的馏分，即得獐牙菜醇苷化学对照品，獐牙菜醇苷纯度检测图如图3。
其中：洗脱条件是指洗脱流速为5 mL/min，洗脱体积是色谱柱体积10倍。
凝胶分离柱中的凝胶填料为Sephadex LH-20。
实施例2    藏茵陈药材中獐牙菜醇苷化学对照品的制备方法，包括以下步骤：
⑴制备提取物浸膏：
将藏茵陈药材——川西獐牙菜以1 g：30 mL的比例用体积浓度为5%的乙醇在提取温度为95℃、提取次数2次、每次4 h的条件下进行加热回流提取，合并提取液；提取液在压力为0.07MPa条件下经减压浓缩后得到藏茵陈提取物浸膏。 
⑵萃取：
将藏茵陈提取物浸膏用其质量的10倍去离子水溶解后，依次用氯仿、正丁醇进行萃取，分别得到氯仿部位、正丁醇部位和水部位。
⑶正丁醇部位在入料流量为200mL/h，入料温度为30℃，进风温度为170℃，进风量为16 m3/h的条件下经喷雾干燥至恒重后，得到正丁醇部位干燥粉末。
⑷分离制备富含獐牙菜醇苷的馏分：
将正丁醇部位干燥粉末用其质量的10倍的体积浓度为100 %的甲醇溶解，然后注入到制备型高效液相色谱中，依次用体积浓度为60%的甲醇溶液及体积浓度为70%的甲醇溶液进行洗脱，洗脱条件是指洗脱流速为60 mL/min，洗脱体积为色谱柱体积2倍，并采用200 nm~400 nm的检测波长进行在线紫外检测，收集体积浓度为70%的甲醇溶液中含有的獐牙菜醇苷的洗脱液A；洗脱液A在压力为0.07MPa条件下经浓缩干燥至恒重后得到富含獐牙菜醇苷的馏分，此时化学物纯度>80%，制备液相色谱分离獐牙菜醇苷效果检测图如图1。
其中：制备型高效液相柱为市售产品，且其填料为C8或C18键合相填料，填料粒径为5~20um。
⑸纯化：
将富含獐牙菜醇苷的馏分用其质量的10倍的体积浓度为100%的甲醇溶解后，上样到凝胶分离柱中，并采用体积浓度为100%的甲醇溶液进行洗脱，得到洗脱液B；该洗脱液B在压力为0.07MPa条件下经浓缩干燥至恒重后得到纯度>98%的富含獐牙菜醇苷的馏分，即得獐牙菜醇苷化学对照品，獐牙菜醇苷纯度检测图如图3。
其中：洗脱条件是指洗脱流速为0.2 mL/min，洗脱体积是色谱柱体积2倍。
凝胶分离柱中的凝胶填料为Sephadex LH-20。
实施例3    藏茵陈药材中獐牙菜醇苷化学对照品的制备方法，包括以下步骤：
⑴制备提取物浸膏：
将藏茵陈药材——川西獐牙菜以1 g：10 mL的比例用体积浓度为20%的乙醇在提取温度为80℃、提取次数3次、每次3 h的条件下进行加热回流提取，合并提取液；提取液在压力为0.05MPa条件下经减压浓缩后得到藏茵陈提取物浸膏。
⑵萃取：
将藏茵陈提取物浸膏用其质量的5倍去离子水溶解后，依次用氯仿、正丁醇进行萃取，分别得到氯仿部位、正丁醇部位和水部位。
⑶正丁醇部位在温度为40℃的条件下经烘箱干燥至恒重后，得到正丁醇部位干燥粉末。
⑷分离制备富含獐牙菜醇苷的馏分：
将正丁醇部位干燥粉末用其质量的5倍的体积浓度为5%的甲醇溶解，然后注入到制备型高效液相色谱中，依次用体积浓度为60%的甲醇溶液及体积浓度为80%的甲醇溶液进行洗脱，洗脱条件是指洗脱流速为100 mL/min，洗脱体积为色谱柱体积5倍，并采用250 nm的检测波长进行在线紫外检测，收集体积浓度为80%的甲醇溶液中含有的獐牙菜醇苷的洗脱液A；洗脱液A在压力为0.04MPa条件下经浓缩干燥至恒重后得到富含獐牙菜醇苷的馏分，此时化学物纯度>80%，制备液相色谱分离獐牙菜醇苷效果检测图如图1。
其中：制备型高效液相柱为市售产品，且其填料为C8或C18键合相填料，填料粒径为5~20um。
⑸纯化：
将富含獐牙菜醇苷的馏分用其质量的3倍的体积浓度为100%的甲醇溶解后，上样到凝胶分离柱中，并采用体积浓度为100%的甲醇溶液进行洗脱，得到洗脱液B；该洗脱液B在压力为0.06MPa条件下经浓缩干燥至恒重后得到纯度>98%的富含獐牙菜醇苷的馏分，即得獐牙菜醇苷化学对照品，獐牙菜醇苷纯度检测图如图3。
其中：洗脱条件是指洗脱流速为2 mL/min，洗脱体积是色谱柱体积5倍。
凝胶分离柱中的凝胶填料为Sephadex LH-20。
实施例4    藏茵陈药材中獐牙菜醇苷化学对照品的制备方法，包括以下步骤：
⑴制备提取物浸膏：
将藏茵陈药材——川西獐牙菜以1 g：20 mL的比例用体积浓度为85%的乙醇在提取温度为85℃、提取次数2次、每次2.5 h的条件下进行加热回流提取，合并提取液；提取液在压力为0.05MPa条件下经减压浓缩后得到藏茵陈提取物浸膏。
⑵萃取：
将藏茵陈提取物浸膏用其质量的8倍去离子水溶解后，依次用氯仿、正丁醇进行萃取，分别得到氯仿部位、正丁醇部位和水部位。
⑶正丁醇部位在冷肼温度为-50℃，真空度为50 Pa的条件下经冷冻干燥至恒重后，得到正丁醇部位干燥粉末。
⑷分离制备富含獐牙菜醇苷的馏分：
将正丁醇部位干燥粉末用其质量的4倍的体积浓度为95%的乙醇溶解，然后注入到制备型高效液相色谱中，依次用体积浓度为60%的甲醇溶液及体积浓度为85%的甲醇溶液进行洗脱，洗脱条件是指洗脱流速为90 mL/min，洗脱体积为色谱柱体积7倍，并采用300 nm的检测波长进行在线紫外检测，收集体积浓度为85%的甲醇溶液中含有的獐牙菜醇苷的洗脱液A；洗脱液A在压力为0.05MPa条件下经浓缩干燥至恒重后得到富含獐牙菜醇苷的馏分，此时化学物纯度>80%，制备液相色谱分离獐牙菜醇苷效果检测图如图1。
其中：制备型高效液相柱为市售产品，且其填料为C8或C18键合相填料，填料粒径为5~20um。
⑸纯化：
将富含獐牙菜醇苷的馏分用其质量的5倍的体积浓度为100%的甲醇溶解后，上样到凝胶分离柱中，并采用体积浓度为100%的甲醇溶液进行洗脱，得到洗脱液B；该洗脱液B在压力为0.04MPa条件下经浓缩干燥至恒重后得到纯度>98%的富含獐牙菜醇苷的馏分，即得獐牙菜醇苷化学对照品，獐牙菜醇苷纯度检测图如图3。
其中：洗脱条件是指洗脱流速为2.5mL/min，洗脱体积是色谱柱体积4倍。
凝胶分离柱中的凝胶填料为Sephadex LH-20。
实施例5    藏茵陈药材中獐牙菜醇苷化学对照品的制备方法，包括以下步骤：
⑴制备提取物浸膏：
将藏茵陈药材——抱茎獐牙菜以1 g：25 mL的比例用体积浓度为5%的乙醇在提取温度为75℃、提取次数2次、每次3.2h的条件下进行加热回流提取，合并提取液；提取液在压力为0.05MPa条件下经减压浓缩后得到藏茵陈提取物浸膏。 
⑵萃取：
将藏茵陈提取物浸膏用其质量的4倍去离子水溶解后，依次用氯仿、正丁醇进行萃取，分别得到氯仿部位、正丁醇部位和水部位。
⑶正丁醇部位在冷肼温度为-35℃，真空度为35Pa的条件下经冷冻干燥至恒重后，得到正丁醇部位干燥粉末。
⑷分离制备富含獐牙菜醇苷的馏分：
将正丁醇部位干燥粉末用其质量的5倍的体积浓度为85 %的甲醇溶解，然后注入到制备型高效液相色谱中，依次用体积浓度为60%的甲醇溶液及体积浓度为85%的甲醇溶液进行洗脱，洗脱条件是指洗脱流速为100 mL/min，洗脱体积为色谱柱体积5倍，并采用340 nm的检测波长进行在线紫外检测，收集体积浓度为85%的甲醇溶液中含有的獐牙菜醇苷的洗脱液A；洗脱液A在压力为0.05MPa条件下经浓缩干燥至恒重后得到富含獐牙菜醇苷的馏分，此时化学物纯度>80%，制备液相色谱分离獐牙菜醇苷效果检测图如图1。
其中：制备型高效液相柱为市售产品，且其填料为C8或C18键合相填料，填料粒径为5~20um。
⑸纯化：
将富含獐牙菜醇苷的馏分用其质量的6倍的体积浓度为100 %的甲醇溶解后，上样到凝胶分离柱中，并采用体积浓度为100%的甲醇溶液进行洗脱，得到洗脱液B；该洗脱液B在压力为0.05MPa条件下经浓缩干燥至恒重后得到纯度>98%的富含獐牙菜醇苷的馏分，即得獐牙菜醇苷化学对照品，獐牙菜醇苷纯度检测图如图3。
其中：洗脱条件是指洗脱流速为1.2 mL/min，洗脱体积是色谱柱体积5倍。
凝胶分离柱中的凝胶填料为Sephadex LH-20。
实施例6    藏茵陈药材中獐牙菜醇苷化学对照品的制备方法，包括以下步骤：
⑴制备提取物浸膏：
将藏茵陈药材——抱茎獐牙菜以1 g：28 mL的比例用体积浓度为100%的甲醇在提取温度为70℃、提取次数2次、每次2.5h的条件下进行加热回流提取，合并提取液；提取液在压力为0.04MPa条件下经减压浓缩后得到藏茵陈提取物浸膏。 
⑵萃取：
将藏茵陈提取物浸膏用其质量的6倍去离子水溶解后，依次用氯仿、正丁醇进行萃取，分别得到氯仿部位、正丁醇部位和水部位。
⑶正丁醇部位在在入料流量为1000 mL/h，入料温度为70℃，进风温度为210℃，进风量为28 m3/h的条件下经喷雾干燥至恒重后，得到正丁醇部位干燥粉末。
⑷分离制备富含獐牙菜醇苷的馏分：
将正丁醇部位干燥粉末用其质量的3倍的体积浓度为60 %的甲醇溶解，然后注入到制备型高效液相色谱中，依次用体积浓度为60%的甲醇溶液及体积浓度为78%的甲醇溶液进行洗脱，洗脱条件是指洗脱流速为170 mL/min，洗脱体积为色谱柱体积8倍，并采用260 nm的检测波长进行在线紫外检测，收集体积浓度为78%的甲醇溶液中含有的獐牙菜醇苷的洗脱液A；洗脱液A在压力为0.04MPa条件下经浓缩干燥至恒重后得到富含獐牙菜醇苷的馏分，此时化学物纯度>80%，制备液相色谱分离獐牙菜醇苷效果检测图如图1。
其中：制备型高效液相柱为市售产品，且其填料为C8或C18键合相填料，填料粒径为5~20um。
⑸纯化：
将富含獐牙菜醇苷的馏分用其质量的4.5倍的体积浓度为100%的甲醇溶解后，上样到凝胶分离柱中，并采用体积浓度为100%的甲醇溶液进行洗脱，得到洗脱液B；该洗脱液B在压力为0.07MPa条件下经浓缩干燥至恒重后得到纯度>98%的富含獐牙菜醇苷的馏分，即得獐牙菜醇苷化学对照品，獐牙菜醇苷纯度检测图如图3。
其中：洗脱条件是指洗脱流速为2.5 mL/min，洗脱体积是色谱柱体积4倍。
凝胶分离柱中的凝胶填料为Sephadex LH-20。
实施例7    藏茵陈药材中獐牙菜醇苷化学对照品的制备方法，包括以下步骤：
⑴制备提取物浸膏：
将藏茵陈药材——抱茎獐牙菜以1 g：10 mL的比例用体积浓度为5%的甲醇在提取温度为90℃、提取次数1次、每次3 h的条件下进行加热回流提取，合并提取液；提取液在压力为0.04MPa条件下经减压浓缩后得到藏茵陈提取物浸膏。
⑵萃取：
将藏茵陈提取物浸膏用其质量的8倍去离子水溶解后，依次用氯仿、正丁醇进行萃取，分别得到氯仿部位、正丁醇部位和水部位。
⑶正丁醇部位在入料流量为600 mL/h，入料温度为50℃，进风温度为190℃，进风量为22 m3/h的条件下经喷雾干燥至恒重后，得到正丁醇部位干燥粉末。
⑷分离制备富含獐牙菜醇苷的馏分：
将正丁醇部位干燥粉末用其质量的4倍的体积浓度为55%的乙醇溶解，然后注入到制备型高效液相色谱中，依次用体积浓度为60%的甲醇溶液及体积浓度为85%的甲醇溶液进行洗脱，洗脱条件是指洗脱流速为90 mL/min，洗脱体积为色谱柱体积3倍，并采用360 nm的检测波长进行在线紫外检测，收集体积浓度为85%的甲醇溶液中含有的獐牙菜醇苷的洗脱液A；洗脱液A在压力为0.07MPa条件下经浓缩干燥至恒重后得到富含獐牙菜醇苷的馏分，此时化学物纯度>80%，制备液相色谱分离獐牙菜醇苷效果检测图如图1。
其中：制备型高效液相柱为市售产品，且其填料为C8或C18键合相填料，填料粒径为5~20um。
⑸纯化：
将富含獐牙菜醇苷的馏分用其质量的6倍的体积浓度为100 %的甲醇溶解后，上样到凝胶分离柱中，并采用体积浓度为100%的甲醇溶液进行洗脱，得到洗脱液B；该洗脱液B在压力为0.06MPa条件下经浓缩干燥至恒重后得到纯度>98%的富含獐牙菜醇苷的馏分，即得獐牙菜醇苷化学对照品，獐牙菜醇苷纯度检测图如图3。
其中：洗脱条件是指洗脱流速为3mL/min，洗脱体积是色谱柱体积5倍。
凝胶分离柱中的凝胶填料为Sephadex LH-20。
实施例8    藏茵陈药材中獐牙菜醇苷化学对照品的制备方法，包括以下步骤：
⑴制备提取物浸膏：
将藏茵陈药材——抱茎獐牙菜以1 g：18 mL的比例用体积浓度为50%的甲醇在提取温度为75℃、提取次数2次、每次3h的条件下进行加热回流提取，合并提取液；提取液在压力为0.06MPa条件下经减压浓缩后得到藏茵陈提取物浸膏。
⑵萃取：
将藏茵陈提取物浸膏用其质量的8倍去离子水溶解后，依次用氯仿、正丁醇进行萃取，分别得到氯仿部位、正丁醇部位和水部位。
⑶正丁醇部位在温度为55℃条件下经烘箱干燥至恒重后，得到正丁醇部位干燥粉末。
⑷分离制备富含獐牙菜醇苷的馏分：
将正丁醇部位干燥粉末用其质量的7倍的体积浓度为60%的甲醇溶解，然后注入到制备型高效液相色谱中，依次用体积浓度为60%的甲醇溶液及体积浓度为75%的甲醇溶液进行洗脱，洗脱条件是指洗脱流速为150 mL/min，洗脱体积为色谱柱体积6倍，并采用360 nm的检测波长进行在线紫外检测，收集体积浓度为75%的甲醇溶液中含有的獐牙菜醇苷的洗脱液A；洗脱液A在压力为0.06MPa条件下经浓缩干燥至恒重后得到富含獐牙菜醇苷的馏分，此时化学物纯度>80%，制备液相色谱分离獐牙菜醇苷效果检测图如图1。
其中：制备型高效液相柱为市售产品，且其填料为C8或C18键合相填料，填料粒径为5~20um。
⑸纯化：
将富含獐牙菜醇苷的馏分用其质量的5倍的体积浓度为100 %的甲醇溶解后，上样到凝胶分离柱中，并采用体积浓度为100%的甲醇溶液进行洗脱，得到洗脱液B；该洗脱液B在压力为0.05MPa条件下经浓缩干燥至恒重后得到纯度>98%的富含獐牙菜醇苷的馏分，即得獐牙菜醇苷化学对照品，獐牙菜醇苷纯度检测图如图3。
其中：洗脱条件是指洗脱流速为1.5 mL/min，洗脱体积是色谱柱体积6倍。
凝胶分离柱中的凝胶填料为Sephadex LH-20。
实施例9    藏茵陈药材中獐牙菜醇苷化学对照品的制备方法，包括以下步骤：
⑴制备提取物浸膏：
将藏茵陈药材——抱茎獐牙菜以1 g：26 mL的比例用体积浓度为95%的乙醇在提取温度为62℃、提取次数2次、每次4 h的条件下进行加热回流提取，合并提取液；提取液在压力为0.07MPa条件下经减压浓缩后得到藏茵陈提取物浸膏。
⑵萃取：
将藏茵陈提取物浸膏用其质量的10倍去离子水溶解后，依次用氯仿、正丁醇进行萃取，分别得到氯仿部位、正丁醇部位和水部位。
⑶正丁醇部位在在温度为70℃条件下经烘箱干燥至恒重后，得到正丁醇部位干燥粉末。
⑷分离制备富含獐牙菜醇苷的馏分：
将正丁醇部位干燥粉末用其质量的7倍的体积浓度为30 %的甲醇溶解，然后注入到制备型高效液相色谱中，依次用体积浓度为60%的甲醇溶液及体积浓度为80%的甲醇溶液进行洗脱，洗脱条件是指洗脱流速为75mL/min，洗脱体积为色谱柱体积5倍，并采用254nm的检测波长进行在线紫外检测，收集体积浓度为80%的甲醇溶液中含有的獐牙菜醇苷的洗脱液A；洗脱液A在压力为0.03MPa条件下经浓缩干燥至恒重后得到富含獐牙菜醇苷的馏分，此时化学物纯度>80%，制备液相色谱分离獐牙菜醇苷效果检测图如图1。
其中：制备型高效液相柱为市售产品，且其填料为C8或C18键合相填料，填料粒径为5~20um。
⑸纯化：
将富含獐牙菜醇苷的馏分用其质量的7倍的体积浓度为100 %的甲醇溶解后，上样到凝胶分离柱中，并采用体积浓度为100%的甲醇溶液进行洗脱，得到洗脱液B；该洗脱液B在压力为0.06MPa条件下经浓缩干燥至恒重后得到纯度>98%的富含獐牙菜醇苷的馏分，即得獐牙菜醇苷化学对照品，獐牙菜醇苷纯度检测图如图3。
其中：洗脱条件是指洗脱流速为2 mL/min，洗脱体积是色谱柱体积5倍。
凝胶分离柱中的凝胶填料为Sephadex LH-20。

Claims (10)

1.藏茵陈药材中獐牙菜醇苷化学对照品的制备方法，包括以下步骤：
⑴制备提取物浸膏：
将藏茵陈药材以1 g：5 mL ~30 mL的比例用体积浓度为5~95%的乙醇或体积浓度为5~100%的甲醇在提取温度为60~95℃、提取次数1~4次、每次1~4 h的条件下进行加热回流提取，合并提取液；所述提取液在压力为0.02~0.07MPa条件下经减压浓缩后得到藏茵陈提取物浸膏；
⑵萃取：
将所述藏茵陈提取物浸膏用其质量的1~10倍去离子水溶解后，依次用氯仿、正丁醇进行萃取，分别得到氯仿部位、正丁醇部位和水部位；
⑶所述正丁醇部位干燥至恒重后，得到正丁醇部位干燥粉末；
⑷分离制备富含獐牙菜醇苷的馏分：
将所述正丁醇部位干燥粉末用其质量的1~10倍的体积浓度为5~100%的甲醇或体积浓度为5~95%的乙醇溶解，然后注入到制备型高效液相色谱中，依次用体积浓度为60%的甲醇溶液及体积浓度为70~100%的甲醇溶液进行洗脱，并采用200 nm~400 nm的检测波长进行在线紫外检测，收集体积浓度为70~100%的甲醇溶液中含有的獐牙菜醇苷的洗脱液A；所述洗脱液A在压力为0.02~0.07MPa条件下经浓缩干燥至恒重后得到富含獐牙菜醇苷的馏分，此时化学物纯度>80%；
⑸纯化：
将所述富含獐牙菜醇苷的馏分用其质量的1~10倍的体积浓度为100%的甲醇溶解后，上样到凝胶分离柱中，并采用体积浓度为100%的甲醇溶液进行洗脱，得到洗脱液B；该洗脱液B在压力为0.02~0.07MPa条件下经浓缩干燥至恒重后得到纯度>98%的富含獐牙菜醇苷的馏分，即得獐牙菜醇苷化学对照品。
2.如权利要求1所述的藏茵陈药材中獐牙菜醇苷化学对照品的制备方法，其特征在于：所述步骤⑴中藏茵陈药材是指川西獐牙菜或抱茎獐牙菜。
3.如权利要求1所述的藏茵陈药材中獐牙菜醇苷化学对照品的制备方法，其特征在于：所述步骤⑶中的干燥是指冷冻干燥、喷雾干燥、烘箱干燥中的一种。
4.如权利要求3所述的藏茵陈药材中獐牙菜醇苷化学对照品的制备方法，其特征在于：所述冷冻干燥的条件是指冷肼温度为-20~-50℃，真空度为20Pa~50 Pa。
5.如权利要求3所述的藏茵陈药材中獐牙菜醇苷化学对照品的制备方法，其特征在于：所述喷雾干燥的条件是指入料流量为200~1000 mL/h，入料温度为30~70℃，进风温度为170~210℃，进风量为16~28 m3/h。
6.如权利要求3所述的藏茵陈药材中獐牙菜醇苷化学对照品的制备方法，其特征在于：所述烘箱干燥的温度为40~70℃。
7.如权利要求1所述的藏茵陈药材中獐牙菜醇苷化学对照品的制备方法，其特征在于：所述步骤⑷中的洗脱条件是指洗脱流速为60 mL/min~200 mL/min，洗脱体积为色谱柱体积2~10倍。
8.如权利要求1所述的藏茵陈药材中獐牙菜醇苷化学对照品的制备方法，其特征在于：所述步骤⑷中的制备型高效液相柱为市售产品，且其填料为C8或C18键合相填料，填料粒径为5~20um。
9.如权利要求1所述的藏茵陈药材中獐牙菜醇苷化学对照品的制备方法，其特征在于：所述步骤⑸中的洗脱条件是指洗脱流速为0.2 mL/min~5 mL/min，洗脱体积是色谱柱体积2~10倍。
10.如权利要求1所述的藏茵陈药材中獐牙菜醇苷化学对照品的制备方法，其特征在于：所述步骤⑸凝胶分离柱中的凝胶填料为Sephadex LH-20。
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