具体实施方式
下面以实施例和试验例的方式对本发明做进一步的说明。
为方便起见,将实施1-9所用原料及主要设备和仪器列表如下:
表1实施1-9主要原料汇总表
表2实施1-9主要设备和仪器汇总表
实施例1-9按以下方法完成实施例1-9的制备。
准确称取大黄酸100.0~120.0g,无水氯化锌2.0~2.4g,醋酐1700~1860g依次加入带有机械搅拌、温度计、冷凝管的3000mL的反应瓶中,在不断搅拌下升温至85~90℃,升温过程大约需要30min,在85~90℃保温反应约6h。反应完毕,将反应液温度降至25~30℃,抽滤至干。滤饼在75~80℃(0.09Mpa)真空干燥约15h,得到双醋瑞因粗品,测定含量和收率。
实施例1-9实际投料、含量和收率如表3所示。
表3实施例1-9投料、含量、收率汇总表
实施例10双醋瑞因的精制试验
为得到纯度更好的双醋瑞因,对实施1得到的样品按以下方法进行一次和二次精制。
一次精制
表4一次精制投料量及配比
试验方法及结果:
在3000mL的三口反应瓶中依次加入双醋瑞因粗品(实施例1)130g,NMP 720g,MEK755g,在搅拌下升温至80~85℃,至固体物料全部溶解。保温80~85℃趁热过滤,用30mL热的MEK淋洗。
将滤液及洗涤液转入另一洁净的3000mL反应瓶中,升温至溶液澄清,缓慢冷却析晶,在55~60℃范围内保温约40min,然后缓慢降温至0~5℃,在该温度下保温结晶约2h。待结晶充分析出后,抽滤,用40mL冷的MEK淋洗,抽干,真空干燥至恒重(100~105℃,0.094MPa),得到黄色结晶120.8g,含量99.22%(HPLC),一次精制收率92.9%。
二次精制
表5二次精制投料量及配比
试验方法及结果
在2000mL的三口反应瓶中依次加入双醋瑞因一次精制品120g,NMP 660g,MEK 685g,在不断搅拌下升温至80~85℃,至溶液澄清。然后缓慢冷却析晶,在55~60℃范围内保温约40min,然后缓慢降温至0~5℃,在该温度下保温结晶约2h。待结晶充分析出后,抽干。接着用80mL冷的MEK淋洗,抽干,真空干燥至恒重(100-105℃,0.094Mpa,10h),得到黄色结晶108.8g,含量99.77%(HPLC),二次精制收率90.7%。
试验例1双醋瑞因的结构确证资料
1、试验目的:通过红外光谱、质谱和核磁共振波谱来确证双醋瑞因的结构。
2、试验内容:
2.1红外光谱
仪器:Thermo Electron Corporation 330型傅里叶变换红外光谱仪;
测定方法:溴化钾压片法。
结果:所得红外光谱如附图1所示,可见以下特征吸收:ν(cm-1)3405(羟基伸缩振动);3006、2980(甲基和亚甲基的碳氢伸缩振动);1735、1704、1638(酯、羧酸及蒽醌上的羰基伸缩振动);1495、1452(芳环骨架振动)、1405、1368(甲基和亚甲基的碳氢弯曲振动);1245(酯的C-O-C伸缩振动)。
2.2质谱
仪器:LTQ-Orbitrap XL型高分辨质谱仪(Thermo Fischer Scientific);
测试条件:ESI源,正离子模式;鞘气50bar;辅助气10bar;毛细管温度275℃;毛细管电压25V;喷雾电压4.2kV。
结果:所得谱图见附图2。测得本品m/z 386.0874[M+NH4]+,推测分子式为C19H12O8。与理论计算值(m/z 386.0870)相对误差0.87ppm。
2.3核磁共振波谱
仪器:Bruker Advance 400型核磁共振波谱仪;
测试条件:溶剂DMSO-d6,内标TMS,室温。
结果:碳、氢共振信号的全归属详见表6、表7,其中的碳原子编号如图3所示。
表6双醋瑞因核磁共振碳谱数据(100MHz,in DMSO--d6)全归属
表7双醋瑞因核磁共振氢谱数据(400MHz,in DMSO--d6)全归属
3.综合解析:
高分辨质谱测得m/z 386.0874([M+NH4]+),推测分子式为C19H12O8。与计算值(m/z386.0870)的相对误差为0.87ppm。
以DMSO溶解制得浓度为5μg/ml的试样溶液,在200~400nm范围内扫描测定吸收光谱,结果在254nm处有强的最大吸收,显示分子中存在蒽醌母核的长链共轭结构。
以KBr压片法测定试样的红外吸收光谱,结果可见以下特征吸收:ν(cm-1)3405(羟基伸缩振动);3006、2980(甲基和亚甲基的碳氢伸缩振动);1735、1704、1638(酯、羧酸及蒽醌上的羰基伸缩振动);1495、1452(芳环骨架振动)、1405、1368(甲基和亚甲基的碳氢弯曲振动);1245(酯的C-O-C伸缩振动)。上述测定结果提示,分子中存在羧基、酯基及蒽醌的骨架结构。
以DMSO-d6为溶剂,TMS为内标,分别测试了试样的核磁共振氢谱和碳谱,测试仪器为Bruker Advance 400型核磁共振波谱仪。结果显示,在相同条件下测得的试样与文献报道值一致,确证本品为双醋瑞因。
试验例2双醋瑞因稳定性试验
根据《药物稳定性研究技术指导原则》的规定要求,对双醋瑞因原料进行了影响因素试验(高温试验、高湿度试验和强光照射试验)、长期试验等稳定性考察,考察项目包括性状、鉴别、酸碱度、干燥失重、有关物质、含量测定等项目。
1、影响因素试验
取本品(批号:S20090711)三份,分别置60℃恒温培养箱中;高湿RH=90%条件下(底部放有饱和KNO3溶液的干燥器);光照4500LX条件下(药物稳定性检查仪),分别于0、5、10天取样,对其性状、干燥失重、有关物质、含量进行测定。分析结果如下:
表8双醋瑞因60℃,RH=90%,LX=4500实验结果
由以上影响因素试验结果可以看出,双醋瑞因极易吸潮,对温度和光照不敏感,制备及保存环境温度应避免潮湿,且应密闭干燥保存。
2、加速稳定性试验
2.1稳定性考察的条件和方法
通过上述影响因素试验可知双醋瑞因易吸潮,因此在进行加速稳定性试验时将本品置药品包装复合袋(BOPET/Al/PE)中,热合封口,于40℃、相对湿度75%条件下放置考察,分别于1、2、3、6个月时取样检测。
2.2.稳定性试验考察方法
按双醋瑞因药品标准草案各项下以及中国药典2005年版一部方法依法检查。
2.3.考察结果
按双醋瑞因药品标准草案的方法和试验条件,对双醋瑞因进行了全面的质量考察,每个批号的考察结果按表格的形式分别汇总如下。见表9、10、11。
3、长期稳定性试验
3.1稳定性考察的条件和方法
将本品置药品包装复合袋(BOPET/Al/PE)中,热合封口,于25℃、相对湿度60%条件下放置考察,分别于3、6、9、12、18个月时取样检测。
3.2.稳定性试验考察方法
按双醋瑞因药品标准草案各项下以及中国药典2005年版一部方法依法检查。
3.3.考察结果
按双醋瑞因药品标准草案的方法和试验条件,对双醋瑞因进行了全面的质量考察,每个批号的考察结果按表格的形式分别汇总如下。见表12、13、14。
4、结论
考察结果与0月结果进行比较分析,双醋瑞因在密封、40℃下放置6个月、25℃下放置18个月时,各项指标均能达到质量标准中的各项规定和要求,结果表明双醋瑞因原料在18个月内稳定。
表9.双醋瑞因加速稳定性研究试验报告(批号:S20091119留样考察开始时间:2009.11.30)
表10.双醋瑞因加速稳定性研究试验报告(批号:S20091123留样考察开始时间:2009.11.30)
表11.双醋瑞因加速稳定性研究试验报告(批号:S20091127留样考察开始时间:2009.11.30)
表12、双醋瑞因长期稳定性研究试验报告(批号:S20091119留样考察开始时间2009.11.30)
表13、双醋瑞因长期稳定性研究试验报告(批号:S20091123留样考察开始时间2009.11.30)
表14、双醋瑞因长期稳定性研究试验报告(批号:S20091127留样考察开始时间2009.11.30)