CN103347540B - 用于治疗前列腺癌的抗-α-v整联蛋白抗体 - Google Patents

Abstract

本发明涉及通过抗体治疗前列腺癌。尤其是，本发明涉及将抗-α-v整联蛋白(受体)抗体给予罹患前列腺癌的患者，特别是去势抵抗性前列腺癌(CRPC)，任选伴有淋巴结和骨组织转移(mCRPC)。具体而言，本发明涉及通过抗-血管生成抗体DI17E6及其结构性突变体治疗所述患者。

Description

用于治疗前列腺癌的抗-α-v整联蛋白抗体

发明领域

本发明涉及通过抗体治疗前列腺癌。尤其是，本发明涉及将抗-α-v整联蛋白(受体)抗体给予罹患前列腺癌的患者，特别是未经化学治疗或经化学治疗后的去势抵抗性前列腺癌(CRPC)，任选伴有淋巴结和骨组织转移(mCRPC)。具体而言，本发明涉及通过抗-血管生成抗体DI17E6及其结构性突变体治疗所述患者。

发明背景

在美国，前列腺癌是除了皮肤癌之外最常见发生的癌症，并且是男性癌症死亡的第二大常见原因。

前列腺癌分为四个阶段：第一阶段前列腺癌仅在前列腺中发现，并且在直肠指检期间不能感触到，也不能通过成像看到。在第二阶段前列腺癌，肿瘤在前列腺内部生长但并不扩大到其外部，而在第三阶段，癌症扩散到前列腺外部，但仅至最小的程度。在第三阶段的前列腺癌经常仅扩散到附近的组织，例如精囊。最后在第四阶段，癌症在前列腺外部扩散到其他组织，例如淋巴结、骨、肝脏和/或肺/或脑。

不管睾酮的去势水平如何，发展中的前列腺癌的范围(spectrum)包括显示对初期激素治疗响应的各种程度和持续时间的肿瘤，和显示以下临床表现的肿瘤：单独增多的前列腺特异性抗原(PSA)、伴有骨和/或软组织扩散的增多的PSA、或主要的内脏疾病模式。

目前认可的前列腺癌疗法包括手术去势、化学去势或手术与化学去势的联合。睾丸(主要的睾酮产生器官)的去除降低循环的雄激素的水平至少于正常水平的5%。雄激素水平的降低抑制前列腺肿瘤的生长。尽管手术去势的抗肿瘤效果直接，但抗肿瘤效果可能是暂时的。手术去势经常引起雄激素非依赖性前列腺肿瘤细胞的克隆选择。这导致前列腺肿瘤以无需睾酮或DHT刺激而增生的方式再生长。化学去势(亦称药物去势)经常取代手术去势作为初始治疗。尽管其高的流行率，患有前列腺癌的男性的疗法选择仍相对有限，并且通常依赖于癌症的阶段。

疗法选择包括手术疗法例如根治性前列腺切除术(其中前列腺被完全去除)和放射(通过从体外引导剂量到前列腺的外束施用，或通过植入前列腺内部以局部杀死癌细胞的低剂量的放射性粒子来施用)。还可在前列腺癌的治疗中使用抗-雄激素的激素疗法，单独使用或与手术或放射联用。通常激素疗法目的在于通过使用去势或给予激素类似物来阻止垂体产生刺激睾酮产生的激素，并且要求患者长时间地注射这些激素类似物。最后，已使用化学治疗方法来治疗晚期前列腺癌，其通常当其他方法无效时作为最终的手段。几年以来，确立了多西他赛和泼尼松的组合作为护理在雄激素剥夺中发展的患者的新标准。

上述疗法中没有一种是可治愈的，尽管有基于手术和激素的疗法，起初为雄激素依赖性的前列腺癌经常将发展并且随时间变得有抵抗力，这导致称为“激素难治性癌症”或“去势抵抗性癌症(CRPC)”的癌症类型。

CRPC的临床疾病表现通常涉及骨转移，可包括疼痛、病理性骨折和脊髓压迫，伴随可与骨盆不适、由输尿管压迫引起的肾功能障碍、膀胱口阻塞和性功能障碍相关的局部复发。此外，当骨癌为CRPC的主要结果时，患者可出现软组织转移(淋巴结)和在肝脏、肺、脑以及其他器官中的内脏转移。患有CRPC的患者对化学疗法反应极低，多数患者在初始治疗的20个月内因进行性前列腺癌而死亡。二膦酸盐通常用于患有去势抵抗性前列腺癌并且有骨转移的患者。

已证明前列腺肿瘤保持休眠和临床不可检测直到它们开始分泌血管生成因子和下调血管生成抑制剂的表达。通常可以说，血管生成对前列腺肿瘤的发生很关键。因此，抗-血管生成剂抑制前列腺癌细胞的生长并不完全令人吃惊。

在前列腺癌中，肿瘤细胞表达异常整联蛋白库(repertoire)并且被明显异常的细胞外基质(ECM)包围。鉴于每种整联蛋白调节特定的细胞功能的能力，这些变化具有深远的重要性。β3和β1亚单元的表达激活特定的信号传导路径并支持不同的癌细胞功能。在癌细胞中，独特地需要β3用于提高cdc2水平以及cdc2激酶活性。这些作用对β3是特异性的，对β6并没有观察到。已描述β3和β6整联蛋白变体的上调。Zheng等(CancerResearch1999;59,1655–1664)使用分离自16例手术样本的人前列腺癌细胞证明这些细胞表达αvβ3，而正常的前列腺上皮细胞并非如此。类似地，发现αvβ6在腺癌中表达(Li等;MolecularandCellularBiology2007;27,4444)。

由于整联蛋白由肿瘤细胞以及内皮细胞表达，整联蛋白抑制剂的使用可能影响癌细胞存活和血管生成两者。尽管难以区分对肿瘤生长的作用和对血管生成的作用，但当靶整联蛋白由肿瘤和内皮细胞两者表达时可预测这些抑制剂的最大反应。

骨是前列腺癌最频繁的转移位点。Bisanz等(MolecularTherapy2005;12,634–643)阐明α-v整联蛋白对在骨中前列腺肿瘤的存活的积极作用。人前列腺癌的骨异种移植物分析表明脂质体包封的人α-vsiRNA的瘤内给予明显抑制骨中PC3肿瘤的生长并增加前列腺肿瘤细胞的凋亡。进一步的研究(McCabe等,Oncogene2007;26,6238–6243)证明αvβ3整联蛋白对肿瘤细胞的激活作用对关键的骨特异性基质蛋白的识别是必要的。这些数据表明αvβ3整联蛋白在远距离转移中调节前列腺癌的生长。

由于整联蛋白介导肿瘤细胞和骨微环境之间的相互作用并促进骨内的生长，整联蛋白抑制剂用途的潜在应用为预防前列腺癌的骨损伤。这些损伤为成骨细胞的和/或溶骨的，并在前列腺癌患者(超过80%的前列腺癌患者在尸检时确定为骨转移)内经常检测到。

近期研究表明αvβ3整联蛋白促进前列腺癌细胞介导的骨增加，该前列腺癌细胞转移到骨中并指向αvβ3作为潜在的阻止前列腺癌成骨细胞损伤的治疗靶。免疫组织化学分析已证实大部分的人前列腺癌组织样本中存在αv整联蛋白。

这些结果和其他结果表明抗-整联蛋白剂可具有直接和间接两者的抗肿瘤活性。但只有很少的临床试验报告了肽或非肽整联蛋白抑制剂为前列腺癌治疗中的有效试剂。

因此，有必要提供有效的用于前列腺癌(特别是出现骨转移的去势抵抗性前列腺癌)的治疗的抗-整联蛋白剂。

发明概述

本发明人发现已知的单克隆抗-αv抗体DI-17E6(本文亦称为EMR62242或EMD525797)在以下环境的前列腺癌治疗中高度有效：(i)基于单一疗法的临床环境和(ii)与激素剂和/或化学治疗剂和/或酪氨酸激酶抑制剂或其他血管生成抑制剂一起的组合临床环境。

本发明的第一方面，临床试验表明已知的特异性工程改造的杂交单克隆抗-α-v抗体DI17E6在前列腺肿瘤患者中很好地被耐受而无明显的副作用，其剂量为在至少4个月的治疗期中每两周通过输注给予的至少500mg的mAb(图3、表3)。

本发明的第二方面表明，在前列腺癌的治疗中以每两周至少500mg的剂量给予DI17E6是有效的，前列腺癌优选去势抵抗性前列腺癌(CRPC)。结果，在这些患者的血液中的源自前列腺的循环肿瘤细胞(CTC)的数量在治疗期间内明显减少，尤其是如果该数量最初(在治疗开始时)非常高(图1)。

本发明的第三方面表明，在CRPC患者中前列腺特异性抗原(PSA)值可明显降低。该效果依赖于治疗的持续时间和患者的疾病状态。通常在五个月或更多个月的治疗之后可获得PSA值，在发展较慢的病例中其与健康男性的PSA值一致，在其他更加严重的病例中(其中抗体治疗初期PSA值非常高)，治疗后的PSA值可降低至小于1/10(图4、5)。

本发明的第四方面，可证实通过以每两周至少500mg的剂量给予DI17E6，可明显降低骨和淋巴结的转移影响。

本发明的另一方面，可显示DI17E6揭示了在前列腺癌患者中的剂量依赖性反应，优选在去势抵抗性前列腺癌(CRPC)患者中，在较高剂量具有增加的功效，其中每两周约500mg和更高的剂量为有效的，而约250mg或更少的DI17E6剂量在前列腺癌患者中是无效的，优选CRPC患者(图3、5)。

应注意，DI17E6优选在单一疗法环境中有效，其中没有给予其他的细胞毒素药物(例如卡巴他赛(cabazitaxel)、多西他赛、多柔比星、伊立替康等)。这为首次表明工程改造的单克隆抗体在肿瘤治疗方法中有效而无需给予化学治疗剂。

还应注意，根据在所述临床试验中的最初结果，疾病越发展，DI17E6似乎越有效。因此，在无效的激素疗法和/或化学疗法后并且甚至在手术影响例如前列腺切除术后，与没有经过这样的手术或者甚至没有经过用化学疗法和/或激素预治疗而处于发展较慢的疾病状态中的患者相比较，DI17E6对患者中的PSA值、循环肿瘤细胞和转移引发更强的作用。总起来说，DI17E6非常有希望用于CRPC的治疗，尤其是用于化学疗法治疗后具有发展性的疾病状态或末期疾病状态的患者。

其他结果为DI17E6能引起肿瘤收缩和肿瘤损伤(图6)，尤其在对化学疗法和/或放射疗法有抵抗力的实体前列腺肿瘤或源自其的肿瘤转移中。

此外，有证据表明用DI17E6的治疗(在单一疗法中)降低疼痛，其通常发生在前列腺癌中。因此，该药物在疼痛和疼痛干扰评分方面提供益处(图4B、5B)。可观察到治疗期间疼痛的降低与所述患者中降低的PSA水平相关。

在没有前驱给药的情况下，DI17E6很好地被耐受，并且在评估的安全参数上没有显示临床上相应的剂量相关的变化，例如药物相关治疗突发的不良事件(TEAE)(表3)。

本发明的另一方面，可显示在骨代谢生物标记物(包括STC-1、ADAMTS-1、M30、M65、IL6和IL8)和剂量水平之间有强相关性(图7)。在>1500mg的高剂量下，在多数CRCP患者中可观察到骨桥蛋白明显降低。

在1500mg剂量水平下具有半衰期为约250小时的单次和多次剂量之后，DI17E6的药代动力学概况依赖于剂量。

1期的安全性结果，标签公开研究显示四个剂量水平中的每一个剂量的单剂DI17E6(EMD525797)的重复输注通常很好地被耐受，并且表现出在具有mCRPC和发展性疾病的患者中是安全的，优选在在前的化学疗法后。没有剂量限制性毒性(DLT)且没有输注反应。关于剂量，在TEAE、NCI-CTCAE(版本3.0)等级或药物关系的分布方面没有观察到趋势。此外，在个体组内没有任何特定事件积聚的证据。11个患者经历TEAE，其被认为是药物相关的。在这点上，皮肤症状例如瘙痒、红斑和皮疹(其在总共4个患者中被报告)为与DI17E6(EMD525797)相关联的可预知的不良事件，假定整联蛋白是上皮表型保持的原因。粘膜炎症和舌肿的症状也可为EMD525797的作用机理的特征，但与疲劳一起还可能是潜在疾病的征兆。在8个患者中观察到的血液学和生物化学毒性转变也可通过潜在疾病和伴随的药物治疗来解释。

研究药物的单次和多次剂量后的PK评估表明DI17E6(EMD525797)的行为与受体介导的清除模型(clearancemodel)(如对靶向膜相关受体的其他抗体所述)相一致。与在健康志愿者中较早期研究的发现相一致，在mCRPC患者中DI17E6(EMD525797)的PK为剂量依赖的，其清除率主要由未结合受体的可用性决定。在本研究所用的剂量下，可假设在1000mg或更高的剂量下，几乎所有的受体饱和并且对药物清除有很少的贡献。可在一些(16%)患者中检测到免疫触发的针对DI17E6的抗体；然而，没能发现对PK或安全性的影响。

在具有在先化学治疗后的骨转移的去势抵抗性前列腺癌患者中，无进展的存活率中值(medianprogressionfreesurviva)预期为8-10周。抗肿瘤活性评估显示作为单剂治疗的DI17E6(EMD525797)在500mg组的单一患者中获得客观的部分肿瘤反应(objectivepartialtumorresponse)。在18个以500mg或更高剂量接受DI17E6(EMD525797)的患者的9个(50%)中，16周或更长的时间内没能观察到放射照相的疾病发展。在两个患者中，用500mg剂量的DI17E6(EMD525797)长期治疗与PSA水平的明显降低和疼痛干扰方面的临床益处有关。至少一个患者还显示了原发性肿瘤收缩和靶淋巴结大小的正常化。因此，DI17E6(EMD525797)看来在至少一些具有晚期mCRPC的患者中表现出单剂活性。

总之，按单次和多次剂量给予的单剂EMD525797显示在具有在先化学治疗(没有自然康复)后的骨转移和进行性疾病的mCRPC患者中被很好地耐受。没能鉴别出安全性问题，并且在许多患者中有临床益处的初步证据。由于其靶标和安全性概况，DI17E6(EMD525797)为有希望用于联合治疗的试剂。

总而言之，本发明的主题涉及以下内容：

抗-αv整联蛋白抗体DI17E6或其生物学活性变体或修饰体在患者的治疗中的用途，或在制备用于患者治疗的药物中的用途，所述患者罹患前列腺癌，优选去势抵抗性前列腺癌(CRPC)，优选其中所述CRPC伴有在25-10,000ng/ml范围内的高水平的血清PSA，更具体地为超过25ng/ml的水平，或超过50ng/ml，或超过100ng/ml，或超过250ng/ml，或超过500ng/ml，或超过1000ng/ml，或超过2500ng/ml或超过5000ng/ml，或超过7500ng/ml。

DI17E6抗体相应的用途，其中所述癌症为转移性的，优选转移到骨和/或淋巴结组织。

DI17E6抗体的相应用途，其中在治疗期间所述前列腺特异性抗原(PSA)值与开始抗体治疗前的值相比，降低至小于1/5、1/10、1/20，优选1/10。

DI17E6抗体的相应用途，其中所述PSA值的降低在4-8个月的治疗内得到，优选在4个月后，更优选在6个月后。

DI17E6抗体的相应用途，其中在抗体治疗期间循环肿瘤细胞(CTC)的数量减少。

DI17E6抗体在其前列腺已被去除或者已经放射治疗的CRPC患者中的相应用途。

DI17E6抗体用于减少在前列腺癌中，优选在CRPC(其优选伴有骨转移)中产生的疼痛的相应用途。

DI17E6抗体的相应用途，其中所述患者用化学治疗剂和/或激素剂预先治疗，优选当用化学治疗剂和/或激素剂的预先治疗后癌症是进行性的。

DI17E6抗体的相应用途，其中所述抗体的有效剂量为每两周500-1500mg，优选每两周500-1000mg或每月1000-2000mg。

DI17E6抗体的相应用途，其中所述500-1000mg的有效剂量通过单次输注给予。

DI17E6抗体的相应用途，其中所述抗体在没有额外化学治疗剂的单一治疗环境下给予。

DI17E6抗体的相应用途，其中所述抗体在具有细胞毒素剂/细胞抑制剂或激素剂的组合环境下序贯或同时给予。

DI17E6抗体的相应用途，其中在所述组合环境下所述细胞抑制剂或细胞毒素剂选自：化学治疗剂、放射、酪氨酸激酶抑制剂和血管生成抑制剂；所述酪氨酸激酶抑制剂为选自抗-EGFR抗体、抗-Her2抗体和抗-Her3抗体的抗-ErbB抗体；和所述血管生成抑制剂为α-v整联蛋白抑制剂，优选RGD肽，例如西仑吉肽。

DI17E6抗体的相应用途，其中所述生物学活性变体或修饰体包含CDR区和重链和轻链可变区，其与DI17E6的可变区相比较，在氨基酸序列上具有80%-95%的同一性。

DI17E6抗体的相应用途，其中所述生物学活性变体或修饰体包含恒定区，其与DI17E6的恒定区相比较，在氨基酸序列上具有至少80-98%的同一性。

DI17E6抗体的相应用途，所述抗体在重链的框架区内包含一种或多种修饰

其中一个或多个粗体和下划线的位点被突变，并且与原始相应的序列相比较是不同的。

修饰的DI17E6抗体的相应用途，所述修饰的抗体包含代替人IgG2的人IgG1恒定区，或代替人IgG1铰链的人IgG2铰链区。

在患者中治疗去势抵抗性前列腺癌(CRPC)的方法，所述去势抵抗性前列腺癌优选伴有骨转移，所述方法包括给予抗-αv整联蛋白抗体DI17E6或其生物学活性变体或修饰体，优选以每两周500-1000mg的剂量给予，优选达至少3个月的时期。

降低罹患前列腺癌的患者的病理性增加的PSA血清水平至小于1/5、优选小于1/10的方法，所述前列腺癌优选去势抵抗性前列腺癌(CRPC)，所述方法通过以每两周至少500mg或每月至少1000mg的有效剂量给予所述患者杂交单克隆抗体DI17来进行，其中在开始抗体治疗前病理性增加的PSA血清水平为至少25ng/ml，优选至少50ng/ml。

相应的方法，其中所述癌症转移到骨和/或淋巴结组织。

附图简述

图1显示总结在(1)250mg、(2)500mg和(3)1000mg剂量水平的六个所选的CRPC患者中循环肿瘤细胞(CTC)的测定结果的图表。X轴表示治疗天数。Y轴表示循环肿瘤细胞(CTC)。

图2显示DI17E6(EMD525797)的剂量依赖性药代动力学概况，其中每4周给予250mg、500mg、1000mg和1500mgAb。X轴表示首次输注后的时间(h)；Y轴表示血清浓度(μg/ml)。

图3显示一组CRPC患者用DI17E6治疗后的治疗持续时间；X轴：治疗周数；Y轴：剂量水平(剂量水平1：250mg，剂量水平2：500mg，剂量水平3：1000mg，剂量水平4：1500mg)。

图4(A)显示在未经前列腺切除术表现出骨转移的特定CRPC患者(2001)在用DI17E6治疗期间(治疗起始自2009年8月24日)的PSA水平(ng/ml血清)的变化。(A)X轴表示治疗持续时间(天数)；Y轴表示PSA水平(ng/ml)。(B)显示(A)中同一患者的如下所定义的平均疼痛干扰评分。X轴表示治疗持续时间(天数)；Y轴表示平均疼痛干涉评分。

图5(A)显示在表现出骨转移的化学治疗和前列腺切除术后具有进行性疾病的另一个CRPC患者在用DI17E6治疗期间(治疗起始自2009年9月1日)的PSA进程。(A)X轴表示治疗持续时间(天数)；Y轴表示PSA水平(ng/ml)。(B)显示(A)中同一患者的如下所定义的平均疼痛干扰评分。X轴表示治疗持续时间(天数)；Y轴表示平均疼痛干扰评分。

图6显示500mg组的患者的CT扫描，其显示原发性肿瘤损伤明显收缩：(a)用DI-17E6治疗前，(b)用DI-17E6第17次治疗后(4个月后)。

图7显示用DI17E6治疗后出现的骨标记物/循环骨标记物。1=剂量水平1；2=剂量水平2。

发明详述

DI17E6为针对α-v整联蛋白(受体)的经工程改造的特别适应的IgG2杂交单克隆抗体。借助该抗体的癌症治疗减少与该类治疗有关的副作用，尤其是免疫反应，从而降低免疫原性。在WO2009/010290中详细描述了该抗体。

其高变区(CDR)源自鼠mAb17E6(EMD73034)。例如，Mitjans等(1995;J.CellSci.108,2825)和专利US5,985,278和EP719859描述了该亲本小鼠IgG1抗体。小鼠mAb17E6通过杂交瘤细胞系272-17E6产生，并在登记号DSMACC2160下保藏。

其轻链结构域源自人源化单克隆抗-EGFR抗体425(马妥珠单抗(matuzumab))。该抗体在例如EP0531472B1中详细描述，并且源自其鼠对应物425(小鼠MAb425，ATCCHB9629)。该抗体针对人A431癌细胞系而产生并发现其与人表皮生长因子受体(EGFR)的外结构域上的多肽表位结合。在临床试验中马妥珠单抗显示了高功效。

通常如本发明使用的DI17E6包含：

(i)源自小鼠单克隆抗-αv整联蛋白抗体17E6的CDR轻链和重链区；

(ii)取自人源化单克隆抗-EGFR抗体425的轻链框架区；

(iii)源自小鼠单克隆抗-αv整联蛋白抗体17E6的重链框架区，任选在特定位点上包含一个或多个氨基酸突变；和

(iv)源自人IgG2的重链恒定区和人κ轻链恒定区，其中在所述IgG2结构域中IgG2铰链区被人IgG1铰链结构域替换，且其中任选在IgG2内进行了一个或多个突变。

具体地，用于如要求保护的治疗和上文及下文所述的临床试验中的DI17E6(被称为“DI-17E6γ2h(N297Q)”或“EMD525797”)具有下列氨基酸序列：

(i)可变和恒定的轻链序列(SEQIDNo.1)：

和

(ii)可变和恒定的重链序列(SEQIDNo.2)：

其中下划线序列表示具有CDR(以粗体表示，与亲本小鼠抗体相同)的可变区。修饰的IgG1铰链区表示为EPKSSDKTHTCPPCP(SEQIDNo.3)，并且AQ是在IgG2结构域内的取代。

然而，如WO2009/010290中所示，根据本发明的教导，也可使用DI17E6的变体。因此，在以下重链框架区内包含一个或多个修饰的DI17E6变体可用于治疗所述的前列腺癌患者，

其中一个或多个粗体和下划线的位点被突变。更详细地，重链框架区在一个、多个或所有的下列位点上被突变的下列位点可被突变：A9、E13、M20、K38、R40、A72、S76、Q82、G85、T87、S91和S113。与由其上述序列定义的DI17E6相比较，这些变体显示相同或非常相似的生物学活性和功效。

通常，所述的本发明还包括DI17E6抗体的修饰体和变体，其在功能上和/或在药学上与未修饰的DI17E6相同或类似，并且其中CDR区及重链和轻链可变区与DI17E6相应的可变区相比较，在其氨基酸序列上具有至少80%、或至少85%、或至少90%、或至少95%的同一性。此外，本发明还包括DI17E6抗体的修饰体和变体，其在功能上和/或在药学上与未修饰的DI17E6相同或类似，并且其中恒定区与DI17E6相应的恒定区相比较，在其氨基酸序列上具有至少80%、或至少85%、或至少90%、或至少98%的同一性。该抗体的IgG链的恒定区的变化可改进特定的性质例如免疫原性、ADCC等。

另一方面，如本发明使用的DI17E6抗体可与细胞毒素剂融合，优选细胞因子，例如IL2、IL8、IFNb、IFNa、TNFa、GM-CSF、G-CSF或如下所说明。细胞因子可通过其N-末端与抗体重链的C-末端融合，或通过其C-末端与抗体的重链和轻链的N-末端融合。

根据本发明，DI17E6在罹患前列腺癌的患者中高度有效，尤其在化学治疗和/或激素治疗和/或前列腺手术例如前列腺切除术之后其肿瘤为进行性的患者中。

为加强或延长DI17E6或其所述的修饰体的功效，可应用与细胞毒素剂或细胞抑制剂一起的联合疗法。细胞抑制剂或细胞毒素剂可以在癌症的临床治疗上非常常见和方便的剂量与该抗体以序贯步骤给予，或同时给予。本发明优选的细胞毒素剂/细胞抑制剂为如下详细描述的抗-血管生成剂，抗-EGFR剂或抗-Her3剂(包括相应抗体)例如Herceptin?(曲妥单抗)、Erbitux?(西妥昔单抗)或帕尼单抗(panitumumab)。在优选的实施方案中，DI17E6与西妥昔单抗一起的联合疗法在前列腺癌中是有效的，尤其在本发明的CRPC中。

为相同的目的，依照已知的用药法，DI17E6可与激素剂一起(序贯或同时)给予。

本文所用术语“去势抵抗的”或“去势抵抗性”指前列腺癌的状态，其中该疾病为进行性的，且血清睾酮控制在低于某一去势水平(通常<50ng/100ml)。该术语与“激素抵抗性”或“激素难治性”或“雄激素非依赖性”同义使用。

术语“疼痛干扰(总)评分”指用于作为在给予有效的药物期间发生的疾病的结果的疼痛的评分。用简明疼痛量表(BriefPainInventory,BPI)评定疼痛干扰。按下列各项使用BIP评价疼痛干扰：(a)一般活动；(b)情绪；(c)行走能力；(d)正常工作；(e)与其他人的关系；(f)睡眠和(g)生活乐趣。对于疼痛干扰的总评分如下计算：(非缺失问题的平均评分)x(7/非缺失问题的数量)。如果4个或更多个问题为缺失的，疼痛干扰总评分设定为缺失的。

本文所用术语“细胞毒素剂”指通过引起细胞的破坏来抑制或阻止细胞功能的物质。该术语意指包括放射性同位素、化学治疗剂和毒素例如细菌、真菌、植物或动物来源的酶活性毒素或其片段。该术语还可包括细胞因子家族的成员，优选IFNγ以及同样具有细胞毒性活性的抗-肿瘤剂。

本文所用术语“细胞抑制剂”指抑制或压制细胞生长和增殖而不破坏细胞的物质。

术语“细胞因子”为由一个细胞群释放的蛋白质的通称，其作为细胞间介质对其他细胞起作用。这样的细胞因子的实例为淋巴因子、单核因子和传统的多肽激素。这些细胞因子包括生长激素例如人生长激素、N-甲硫氨酰基人生长激素和牛生长激素；甲状旁腺激素；甲状腺素；胰岛素；胰岛素原；松弛素；松弛素原(prorelaxin)；糖蛋白激素例如促卵胞激素(FSH)、促甲状腺激素(TSH)和黄体化激素(LH)；肝生长因子；成纤维细胞生长因子；催乳素；胎盘催乳素；小鼠促性腺素相关肽；抑制素；激活蛋白；血管内皮生长因子(VEGF)；整联蛋白；血小板生成素(TPO)；神经生长因子例如NGFβ；血小板生长因子；转化生长因子(TGF)例如TGFα和TGFβ；红细胞生成素(EPO)；干扰素例如IFNα、IFNβ和IFNγ；集落刺激因子例如M-CSF、GM-CSF和G-CSF；白介素例如IL-1、IL-1a、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9、IL-10、IL-11、IL-12；和TNFα或TNFβ。本发明优选的细胞因子为干扰素和TNFα。

“抗-血管生成剂”指阻断或干扰血管的发育至一定程度的天然或合成的化合物。抗-血管生成的分子可例如为结合和阻断血管生成生长因子或生长因子受体的生物分子。本文优选的抗-血管生成分子与受体结合，优选与整联蛋白受体或与VEGF受体结合。依照本发明，该术语还包括整联蛋白(受体)抑制剂。

术语“整联蛋白抑制剂”或“整联蛋白受体抑制剂”指阻断和抑制整联蛋白受体的天然或合成的分子。在某些情况下，该术语包括针对所述整联蛋白受体(例如对于α_vβ₃：玻连蛋白、纤维蛋白、纤维蛋白原、维勒布兰德氏因子、血小板反应蛋白、层粘连蛋白；对于α_vβ₅：玻连蛋白；对于α_vβ₁：纤连蛋白和玻连蛋白；对于α_vβ₆：纤连蛋白)的配体的拮抗剂。依照本发明，优选针对整联蛋白受体的拮抗剂。整联蛋白(受体)拮抗剂可以是天然或合成的肽、非肽、肽模拟物(peptidomimetica)、免疫球蛋白(例如抗体或其功能性片段)或免疫缀合物(融合蛋白)。本发明优选的整联蛋白抑制剂针对α_v整联蛋白(例如α_vβ₃、α_vβ₅、α_vβ₆和亚类)的受体。优选的整联蛋白抑制剂为α_v拮抗剂，具体而言为α_vβ₃拮抗剂。本发明优选的α_v拮抗剂为RGD肽、肽模拟物(peptidomimetic)(非肽)拮抗剂和抗-整联蛋白受体抗体例如阻断α_v受体的抗体。实例性的非免疫α_vβ₃拮抗剂在US5,753,230和US5,766,591的教导中描述。优选的拮抗剂为线性和环状的包含RGD的肽。通常，环状肽更稳定且引发延长的血清半衰期。然而，本发明最优选的整联蛋白拮抗剂为环-(Arg-Gly-Asp-DPhe-NMeVal)(EMD121974,西仑吉肽(Cilengitide^?),MerckKgaA,Germany;EP0770622)，其在阻断整联蛋白受体α_vβ₃、α_vβ₁、α_vβ₆、α_vβ₈、α_IIbβ₃中有效。依照本发明，在前列腺癌且优选CRPC的患者中，DI17E6与西仑吉肽一起的联合疗法是有效的。

依照本发明的理解，术语“化学治疗剂”或“抗-肿瘤剂”被看做如上列举的“细胞毒素剂”类的成员，并且包括直接对肿瘤细胞且非间接通过例如生物反应修饰的机制产生抗肿瘤作用(即，阻止肿瘤细胞的发展、成熟或扩散)的化学剂。本发明合适的化学治疗剂优选为天然或合成的化学化合物，但不明确排除生物分子例如蛋白质、多肽等。有大量的可用于商业用途、临床评价和临床前研发中的抗-肿瘤剂，其可包括在本发明中用于通过与TNFα和如上文引用的抗-血管生成剂的联合疗法治疗肿瘤/瘤形成。应指出，化学治疗剂可任选与上述的抗体药物一起被给予。化学治疗剂的实例包括烷化剂，例如氮芥、乙烯亚胺化合物、烷基磺酸酯和具有烷化作用的其他化合物例如亚硝基脲、顺铂和达卡巴嗪；抗代谢剂，例如叶酸、嘌呤或嘧啶拮抗剂；有丝分裂抑制剂，例如长春花生物碱和鬼臼毒素衍生物；细胞毒素抗生素和喜树碱衍生物。优选的化学治疗剂或化学疗法包括氨磷汀(阿密磷汀)、卡巴他赛、顺铂、达卡巴嗪(DTIC)、更生霉素、多西他赛、氮芥、链脲霉素、环磷酰胺、carrnustine(BCNU)、洛莫司汀(CCNU)、多柔比星(阿霉素)、多柔比星脂质体(doxil)、吉西他滨(健择)、柔红霉素、柔红霉素脂质体(daunoxome)、丙卡巴肼、酮康唑、丝裂霉素、阿糖胞苷、依托泊苷、甲氨蝶呤、5-氟尿嘧啶(5-FU)、长春碱、长春新碱、博来霉素、紫杉醇(泰素)、多西他赛(泰索帝)、阿地白介素、门冬酰胺酶、白消安、卡铂、克拉屈滨、喜树碱、CPT-11、10-羟基-7-乙基-喜树碱(SN38)、达卡巴嗪、氟尿苷、氟达拉滨、羟基脲、异环磷酰胺、伊达比星、美司钠、α干扰素、β干扰素、伊立替康、米托蒽醌、托泊替康、亮丙瑞林、甲地孕酮、美法仑、巯嘌呤、普卡霉素、米托坦、培门冬酶、喷司他丁、哌泊溴烷、普卡霉素、链脲菌素、他莫昔芬、替尼泊苷、睾内酪、硫鸟嘌呤、塞替派、乌拉莫司汀、长春瑞滨、苯丁酸氮芥及其组合。本发明与DI17E6组合的最优选化学治疗剂为卡巴他赛、顺铂、多西他赛、吉西他滨、多柔比星、紫杉醇(泰素)、伊立替康和博来霉素。

通常通过静脉内注射给予DI17E6，然而本领域方便用于抗体/蛋白药物的其他给药形式也可适用。所有的标准输注溶液和制剂是可适用的，例如在WO2005/077414或WO2003/053465中所述，包括脂质体制剂。此外，提供负载有DI17E6和任选(以增加细胞毒性)的化学治疗药物的人血清白蛋白毫微粒是有利的(Biomaterials2010,8,2388-98;Wagner等)。

下列实施例更详细地描述本发明，但不限制本发明和其要求保护的范围。

实施例

实施例1：研究设计

启动1期试验来确定用DI17E6治疗的CRPC患者的安全性、药代动力学和抗肿瘤活性，包括对前列腺特异性抗原、循环肿瘤细胞(CTC)和软组织和骨转移的作用。所有患者在化学治疗后罹患进行性疾病。通过在1小时内iv-输注250、500、1000或1500mg的DI17E6来治疗患者。

符合要求的患者为18岁或更大并且患有经组织学或细胞学证明的前列腺癌，具有在前的化学疗法后骨转移的证据。患者已经受双侧睾丸切除术或者正在接受持续的雄激素剥夺治疗(用促性腺激素释放激素激动剂或拮抗剂)，并且在登记前已停止抗-雄激素治疗至少4个周。要求患者正处于稳定的(即至少3个月)进行的二膦酸盐治疗中或没有任何二膦酸盐治疗，具有低于50ng/dL的总血清睾酮水平。所有的患者具有进行性疾病的证据，其定义为至少两个前列腺特异性抗原(PSA)值大于个体最低水平，在筛选前至少2个周时确定每个值最小增加了10%；结或内脏的进行性对于纳入是足够的，而不依赖于PSA。此外，患者必须具有0-2的美国东部协作肿瘤组(ECOG)的评分、至少3个月的寿命预期和适当的血液学、肾和肝功能。每个研究中心的机构审查委员会批准了研究方案，并且所有患者提供了书面的知情同意。

在该1期的多中心、标签公开、剂量递增的研究中，在第六周结束时的反应评估之前，给予mCRPC患者三次静脉内输注250、500、1000或1500mg剂量的EMD525797，该剂量在每两周的一小时内给予。没有进行性疾病证据的患者适宜接受另外每两周一次的给药直到疾病进展或无法接受的毒性。在第一个六周期间评估剂量限制性毒性(DLT)，并且对患者的安全性进行追踪直到最后一次给予EMD525797后四周。将患者加入到四个连续的剂量组中；在剂量组内的最后六个患者到达第六周结束之后，安全监测委员会决定后续的剂量递增。

26个年龄在43-80岁(年龄中值为66岁)的男性患者被登记并接受至少一次静脉内输注EMD525797，构成了安全性群。所有患者是高加索人来源。通常，四个剂量组之间的人口统计学特征具有可比性(表1a)，且从初次诊断以来的时间中值为5.2年(范围为2-18年)和从诊断至初次转移疾病的时间中值为0.1年(范围为0-16年)。两个患者在DLT时期结束之前退出，并且随后被替换，在整个6周的治疗中24个患者接受三次EMD525797给药。

表1a：患者的基线人口统计学(安全性群)

小结(表1b)：

1期临床试验的临床结果在德国的3个场所和比利时的1个场所进行处理，并在患有去势抵抗性前列腺癌的受试者(化学疗法后有骨转移和进行性疾病)中显示单剂和生物学活性。

实施例2：治疗持续时间

在第6周结束时的反应评估之前，24个患者(43-80岁)接受3次给药(第1周、第3周和第5周)。没有进行性疾病的患者可每2周接受进一步给药。在第一个6周内，评估剂量限制性毒性(DLT)，并且对患者的安全性进行追踪直到最后一次给予DI17E6后的4周。

表2总结了每组中每个患者的药物暴露。患者具有117.5天的平均EMD525797暴露持续时间(中值，74.5天；范围，14-534天)。24个患者中的13个具有比预期(>84天)更长的暴露时间，其中在500mg组中的2个患者继续治疗达297天和534天，并且在1000mg组中的1个患者接受治疗达310天。在6周的DLT期间内没有DLT被报告。所有的患者经历至少一次TEAE，并且没有观察到TEAE中的剂量依赖关系。

表2a：在每个剂量组中每个患者的DI17E6暴露

Pt	250 mg	500 mg	1000 mg	1500 mg
					1	42	297	113	91
2	42	380+	121	84+
					3	42	85	198+	72+
4	42	142	41	64+
					5	56	140	56	77+
6	98	56	43	57+
					7	14*			12 -->
8	28*

+=进行中的治疗；*中途退出的患者(仅1次和2次输注)

研究方案规定，受试者将每隔一周接受至少3种DI17E6剂量(每2周250、500、1000mg)，并且没有进行性疾病证据的受试者将每隔一周接受进一步的治疗给药。

在所有的4组中的治疗持续时间(规定(state)：2010年8月)。每2周500mg的第二组，处于晚期(估计的mOS<12个月)的2个患者(2001和2002)超过10个月具有对治疗意想不到的肿瘤反应。

表2b：该表显示治疗的持续时间值(规定(state)：2010年8月)。剂量水平1：250mgDI17E6；剂量水平2：500mgDI17E6；剂量水平3：1000mgDI17E6；和剂量水平4：1500mgDI17E6。

实施例3：安全性/副作用

表3总结了药物相关的TEAE。11个患者(42.3%)经历了药物相关的TEAE，其最通常在以下系统器官类别报告：“皮肤和皮下组织病症”(总共4个患者；全身性瘙痒症、红斑、皮疹)、“全身性病症和给药位点病况”(总共3个患者；疲劳、粘膜炎症、外周水肿)、“胃肠道病症”(总共2个患者；口干、舌肿、上胃肠道出血)和“感染与侵扰”(总共2个患者；鼻炎、败血病)。仅2个患者(7.7%)具有药物相关的3级或4级TEAE：在500mg组中一个患者经历了3级的γ-谷氨酰转移酶(GGT)增加和在1000mg组中的单个患者经历了3级的败血病。

2个患者经历严重的TEAE，其被认为与治疗相关。在250mg组中的1个患者具有1级上胃肠道出血，在1000mg组中的1个患者具有3级败血病。在筛查时，该后一个患者正诊断有尿路感染和复发的败血病事件，其中最后的事件被认为与DI17E6(EMD525797)有关。4个患者死亡，研究人员评估了所有的死亡，与EMD525797没有合理的相关性。

6个患者(23.1%)由于TEAE而永久停止治疗，包括在250mg组中的4个患者(第12天上胃肠道出血、第53天肌肉虚弱、第46天截瘫和第30天输尿管阻塞)以及分别在500mg组(第534天3级GGT增加)和在1500mg组(第85天转移到中枢神经系统)中的1个患者。未报告给药位点的皮肤反应。8个患者中出现基线后血液学和生物化学毒性转变为3级或4级。然而，在实验室发现、生命迹象或ECG记录中没有明显的趋势。总的说来，与基线相比，65.4%的患者对于治疗有相同最差的ECOG表现状态。

表3：药物相关治疗突发的不良事件^*(TEAE)。

观察到的副作用的实例：

(i)一个62岁的男性在初次并且仅输注DI17E6(250mg)后13天经历了1级上胃肠道出血。该受试者出现不严重的呕血并住院治疗。胃镜检查显示在远端食管上有损伤。活动性出血被排除，该受试者用奥美拉唑治疗而且该事件解决。

(ii)一个79岁的患者在最近输注DI17E6(EMD525797)(1000mg)后1天并且是在初次输注后9周由于粪肠球菌(e.faecalis)出现败血病(2级)。该患者住院治疗并且痊愈出院。1个月后，该患者在最近输注后4天并且是在初次输注后2.5个月再次由于粪肠球菌出现第二次败血病发作(3级)。该患者住院治疗并且痊愈出院。另1个月后，该患者在最近输注后4天并且是在初次输注后3.5个月出现第三次败血病发作(3级)，其归因于EMD525797。

小结：

积累的安全性数据在所有的4个SMC被审查。

总体上，没有观察到DLT：DLT被定义为直到第6周结束发生的任何3级或4级血液学或非血液学毒性，研究人员和/或赞助者怀疑其与研究产品合理相关，除了过敏/超敏反应和任何没有临床相关性的超范围的实验室值(在7天内可逆)以外。

直到现在没有达到MTD。

总体上，观察到仅2个SAE与研究药物相关。

实施例4：药代动力学和药效学

在单次和多次给药之后，EMD525797显示剂量依赖的非线性PK概况(图2)。在初次1小时静脉内输注后，通常在起始给药后1-2小时内达到DI17E6(EMD525797)的C_max。由于EMD525797清除率随剂量增加，消除半衰期随剂量增加，然而分布的平均体积在剂量范围内保持不变(表4)。

如图2(表4)中所描述，每2周给予第二组CRPC患者500mg，达到IC95的血清水平，而每2周给予第一组患者250mg却没有达到。在第二组(每2周500mg)中EMD525797的血清谷浓度(serumtroughconcentration)为大于IC₉₅，且达到非线性CL轨迹的IC₉₉(每2周250mg没有达到)。

表4：

以1500mg多次给药后，DI17E6(EMD525797)最大血清浓度和暴露分别剂量依赖性地积累达到最大值(给药期3/给药期1)1.33和1.70。

在大多数患者中，CTC浓度保持稳定在基线值附近(数据未显示)。在2个患者中，分别在起始治疗后的大约14天和42天观察到CTC浓度相当大的降低。

在25个可评价患者的4个(16.0%)中检测到抗-EMD525797抗体。4个患者都在250mg组；2个患者在两周后回复到血清阴性状态，1个患者没有追踪观察，1个患者在整个研究期间内保持血清阳性。

实施例5：循环肿瘤细胞(CTC)

使用CellSearch评价循环肿瘤细胞(CTC)已被美国食品与药品管理局明确为具有转移性前列腺癌的患者的预后因子。数个组已表明在CRPC中高频率地检测到CTC并且CTC与临床结果相关(deBono等2008,ClinCancerRes；Scher等TheLancet2009)。

在图1中描述了DI17E6对循环肿瘤细胞(CTC)的作用。来自每2周500mg剂量的组的2002号患者显示CTC降低。其他患者最初具有低水平的CTC，因此在3次输注后在第7周没有明显的变化。在每2周250mg的第一组中没有观察到该作用，其中在7个患者的5个中在第7周可观察到急剧增加。

实施例6：骨标记物

骨再吸收是造成前列腺癌主要发病(majormorbility)的原因。在前列腺癌的进展中，骨骼事件很重要。在本研究中评估用于评价骨再吸收和骨形成的标记物。对每组所有的标记物进行配对关联，观察到对第二组的潜在剂量作用。

骨标记物一起群集在第二组而未在第一组。生物学意义并不十分清楚，但这可表明在使用DI-17E6的前列腺癌治疗中与骨标记物有关的剂量作用。可能的是，DI-17E6使骨活性“正常化”使得骨再吸收标记物和骨形成标记物以更平衡的方式调节到比疾病状态下更接近于正常状态。已表明mCRPC中骨再吸收标记物经常为过表达的。可观察到与DI17E6的给予有关的显著标记物为ADAMTS-1、STC1、IL6和IL8。

如图7中所描述，比较了2个剂量水平(250mg和500mg)。500mg剂量显示配对关联的三个聚类(剂量水平2=500mg，视野右侧的框)。

实施例7：通过用DI17E6治疗后PSA水平和疼痛评分的变化

图4A和5A显示每2周用500mgDI17E6治疗期间两个患者中血清PSA水平的变化。

PSA水平与肿瘤生长有关，且与肿瘤负荷正相关。与基线相比较，PSA水平降低超过50%被提议作为生物学反应标准。

在临床实践中，精确并容易地测定PSA。大多数医师基于患者健康的整体印象和其PSA动力学做出继续治疗的决定。

来自500mg剂量组的2个患者(参见受试者2001和2002的图表)显示在治疗期间PSA值与基线值相比，降低至小于1/8(图4A、5A)。

使用简明疼痛量表(BPI)评价疼痛干扰。按以下项使用BPI评价疼痛干扰：(a)一般活动；(b)情绪；(c)行走能力；(d)正常工作；(e)与其他人的关系；(f)睡眠和(g)生活乐趣。疼痛干扰的总评分如下计算：(非缺失问题的平均评分)x(7/非缺失问题的数量)。如果4个或更多个问题缺失，疼痛干扰总评分设定为缺失的。

给药期间的疼痛评分进展在图4B、5B中描述。通过与PSA进展(图4A、5A)比较可见，在用DI17E6治疗期间改善的疼痛与PSA水平的降低相关。在图4B中第276天和第296天之间疼痛评分的增加归因于不依赖药物作用的关节痛事件。

实施例8：原发性肿瘤和软肿瘤损伤(淋巴结)的降低

进行骨扫描和计算机体层摄影扫描(CT)以检测疾病的稳定性/反应(stable/responsedisease)。用PCWG2和RECIST标准，在骨或CT扫描中具有进展的受试者停止治疗。

一些患者显示原发性肿瘤(前列腺)和靶损伤(淋巴结)在临床上明显的降低。阐明原发性肿瘤和靶损伤的收缩的CT扫描示于图6。

表6：患者2001，500mg/q2w，在CT扫描中评估的在原发性肿瘤和可测量的损伤中的部分减轻。

通过CT/MRI扫描评估反应并依照实体瘤的反应评价标准(RECIST)标准进行记载。在基线处，基于在至少一维上精确测量损伤的能力将肿瘤损伤分类为可测量的或不可测量的。将疾病进展定义为与新损伤的最低值或外观相比较，可测量损伤的最长直径的总和中至少20%的增加。

在筛选时和整个研究中(PSA和疼痛干扰总评分)或在第6周(反应评估)和在4周或12周的间隔时，分别评估次要功效(secondaryefficacy)测量，其后用于患者第6周后的继续治疗。

Claims (21)

1.抗-αv整联蛋白抗体DI17E6在制备用于治疗罹患去势抵抗性前列腺癌(CRPC)的患者的药物中的用途。

2.权利要求1的用途，其中所述癌症是转移性的。

3.权利要求2的用途，其中所述癌症与淋巴结转移有关。

4.权利要求2或3的用途，其中所述癌症与骨转移有关。

5.权利要求1-3中任一项的用途，其中在治疗期间前列腺特异性抗原(PSA)值与开始抗体治疗前的值相比较，减少至小于1/10。

6.权利要求5的用途，其中所述PSA值的减少在4-6个月的治疗中达到。

7.权利要求1-3中任一项的用途，其中循环肿瘤细胞(CTC)的数量在抗体治疗期间减少。

8.权利要求1-3中任一项的用途，其中所述患者的前列腺在治疗前被去除。

9.权利要求1-3中任一项的用途，其中所述患者用化学疗法和/或放射预治疗。

10.权利要求1-3中任一项的用途，其中所述抗体的有效剂量为每两周500-1000mg。

11.权利要求10的用途，其中所述有效剂量在单剂量中给予。

12.权利要求1-3中任一项的用途，其中所述抗体作为单一疗法给予。

13.权利要求1-3中任一项的用途，其中所述患者的CRPC在化学疗法后是进行性的。

14.权利要求1-3中任一项的用途，其中所述患者在前列腺切除术或其他前列腺癌相关的手术或放射疗法后被治疗。

15.权利要求1-3中任一项的用途，其中所述治疗包括序贯或同时给予激素剂。

16.权利要求1-3中任一项的用途，其中所述治疗包括序贯或同时给予

(a)选自以下的细胞抑制剂或细胞毒素剂：化学治疗剂和酪氨酸激酶抑制剂；和/或

(b)放射。

17.权利要求1-3中任一项的用途，其中所述治疗包括序贯或同时给予

(a)选自以下的细胞抑制剂或细胞毒素剂：化学治疗剂和血管生成抑制剂；和/或

(b)放射。

18.权利要求16的用途，其中所述酪氨酸激酶抑制剂为选自抗-EGFR抗体、抗-Her2抗体和抗-Her3抗体的抗-ErbB抗体。

19.权利要求17的用途，其中所述血管生成抑制剂为α-v整联蛋白抑制剂。

20.抗-αv整联蛋白抗体DI17E6在制备用于减少在伴有骨和/或淋巴结转移的CRPC中出现的疼痛的药物中的用途，其中所述抗体的有效剂量为每两周给予500-1500mg。

21.权利要求18或19的用途，其中与开始抗体给予前所述患者的PSA水平相比较，在治疗期间所述患者的PSA水平减少至低于1/10。