JP6320042B2 - 前立腺癌治療のための抗アルファ−ｖインテグリン抗体 - Google Patents

Description

本発明は抗体による前立腺癌治療に関する。とりわけ、本発明は、前立腺癌、特に、化学療法を受けていないかまたは化学療法後の去勢抵抗性前立腺癌（ＣＲＰＣ）、あるいはリンパ節および骨組織への転移を伴った去勢抵抗性前立腺癌（ｍＣＲＰＣ）に罹患した患者への抗アルファ−ｖインテグリン（受容体）抗体の投与に関する。具体的には、本発明は、抗血管新生抗体ＤＩ１７Ｅ６およびその構造変異体による前記患者の療法に関する。

前立腺癌は、米国内で、皮膚癌を別にすれば最もよく発症が見られる癌であり、２番目に多い男性の癌死亡原因である。
前立腺癌は４つの病期に分類される。第１期前立腺癌は前立腺にのみ見出され、直腸指診の際に感知されることも、イメージングにより視覚化されることもない。第２期前立腺癌では、腫瘍は前立腺の内部では増殖しているが、前立腺を超えて広がっていることはない。一方第３期では、癌は前立腺の外部に広がるが、その範囲は最小限のところに留まる。第３期の前立腺癌は、多くの場合、精嚢などの隣接組織にのみ広がっている。最後に、第４期では、癌は、前立腺の外部、リンパ節、骨、肝臓、および／または肺もしくは脳などの他の組織に広がっている。
去勢体レベルのテストステロンにもかかわらず進行する前立腺癌の範疇には、一次ホルモン治療に対して種々の程度および期間にわたり応答を示した腫瘍、ならびに前立腺特異抗原（ＰＳＡ）のみの上昇から、骨組織および／もしくは軟組織への広がりを伴ったＰＳＡの上昇、または主として内臓の疾患パターンに及ぶ範囲の臨床症状が含まれる。

現在承認された前立腺癌治療としては、去勢手術、化学的去勢、または去勢手術と化学的去勢との組合せが挙げられる。一次テストステロン産生器官である精巣の摘出は、末梢循環アンドロゲンレベルを、正常レベルの５％未満に低下させる。アンドロゲンレベルのこの低下は前立腺腫瘍増殖を阻害する。去勢手術の抗腫瘍効果は直接的であるが、この抗腫瘍効果は一時的であることがある。去勢手術は、アンドロゲン非依存性前立腺腫瘍細胞のクローン選択をもたらすことが多い。これにより、テストステロンまたはＤＨＴの刺激がなくても増殖する形態で前立腺腫瘍が再増殖するようになる。化学的去勢（内科的去勢とも呼ばれる）は、初期治療として、去勢手術の代わりに行われることが多い。高い有病率にもかかわらず、前立腺癌に罹患する男性の治療選択肢は依然として比較的限定されており、癌の病期に通例依存する。
治療選択肢には、前立腺を完全に切除する根治的前立腺摘除などの外科治療および体外から前立腺に線量を当てる外部ビームによって加えられる放射線または前立腺内部に移植された低線量放射性シードを介して癌細胞を局所的に死滅させる放射線が含まれる。抗アンドロゲンホルモン療法もまた、単独でまたは外科手術もしくは放射線との併用で前立腺癌治療に使用される。ホルモン療法は、通例、去勢の実施またはホルモンアナログの投与によって、テストステロン産生を刺激するホルモンを脳下垂体が産生するのを遮断することを目的とし、進行遅延の間、これらのホルモンアナログを患者に注射する必要がある。最後に、進行した前立腺癌を治療するために、通常、他の手法が失敗した場合の最後の手段として化学療法的手法が使用されてきた。ここ２、３年来、ドセタキセルとプレドニゾンとの併用が、アンドロゲンを枯渇させても進行した患者に対する医療の新基準として確立された。

上記の治療のいずれも治癒的ではなく、最初アンドロゲン依存的である前立腺癌は、外科療法およびホルモンベースの療法にもかかわらず、多くの場合進行性になり、時間経過とともに抵抗性になって、「ホルモン難治性癌」または「去勢抵抗性癌」（ＣＲＰＣ）と呼ばれる癌タイプに至る。
ＣＲＰＣの臨床的疾患症状は一般に骨転移と関連し、骨盤不快感、尿管圧迫による腎機能障害、膀胱出口閉塞、および性機能障害を伴いうる局所再発と共に、疼痛、病的骨折、および脊髄圧迫を含むことがある。さらに、骨癌がＣＲＰＣの主たる結果であるが、患者は軟組織転移（リンパ節）ならびに肝臓、肺、脳、および他の器官への内臓転移を発症することもある。ＣＲＰＣの患者は、化学療法に最小限の応答しかせず、大多数の患者は治療開始から２０か月以内に進行性前立腺癌により死亡する。骨転移がある去勢抵抗性前立腺癌の患者にはビスホスホネートが一般によく使用される。

前立腺腫瘍は、血管新生因子を分泌し、血管新生阻害物質の発現をダウンレギュレートし始めるまで、休止状態でかつ臨床的に検出不可能なままであることが示されている。一般に、血管新生は前立腺腫瘍の発生にとって極めて重要であると明言することができる。したがって、抗血管新生剤が前立腺癌細胞の増殖を阻害することは必ずしも驚くべきことではない。
前立腺癌では、腫瘍細胞は異常なインテグリンレパートリーを発現し、極めて異常な細胞外マトリックス（ＥＣＭ）に取り囲まれている。各インテグリンに特定の細胞機能を調節する能力があれば、これらの変化は深刻な結果をもたらす。β３およびβ１サブユニットの発現は、特定のシグナル伝達経路を活性化し、別々の癌細胞機能を支援する。β３は、ｃｄｃ２レベルおよびｃｄｃ２キナーゼ活性を増加させるために癌細胞でユニークに必要とされる。これらの効果はβ３に特異的であり、β６には観察されない。β３およびβ６インテグリン変異体のアップレギュレーションが記載されている。Ｚｈｅｎｇら（Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ １９９９；５９，１６５５−１６６４）は、１６の外科手術検体から単離したヒト前立腺癌細胞を使用して、これらの細胞ではαｖβ３が発現されるが、正常前立腺上皮細胞では発現されないことを示した。同様に、αｖβ６は、腺癌に発現されることが見出された（Ｌｉら；Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ａｎｄ Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ２００７；２７，４４４４）。

インテグリンが腫瘍細胞だけでなく内皮細胞によっても発現されるので、インテグリン阻害剤を使用すると癌細胞生存と血管新生の両方が影響を受ける可能性がある。腫瘍増殖に対する効果と血管新生に対する効果とを識別することは難しいが、標的インテグリンが腫瘍と内皮細胞の両方によって発現される場合、これらの阻害剤の応答が最大になることは予測することができる。
骨は前立腺癌の最も頻度の高い転移部位である。Ｂｉｓａｎｚら（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔｈｅｒａｐｙ ２００５；１２，６３４−６４３）は、骨における前立腺腫瘍の生存に対するアルファ−ｖインテグリンの正の役割を例証する。ヒト前立腺癌骨異種移植片の分析により、リポソームに被包されたヒトアルファ−ｖ ｓｉＲＮＡの腫瘍内投与が、骨におけるＰＣ３腫瘍の増殖を顕著に阻害し、前立腺腫瘍細胞のアポトーシスを増加させることが示される。さらなる研究（ＭｃＣａｂｅら，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ ２００７；２６，６２３８−６２４３）では、腫瘍細胞上でのαｖβ３インテグリン活性化が、鍵となる骨特異的基質タンパク質の認識にとって必須であることが実証される。これらのデータにより、αｖβ３インテグリンが遠隔転移での前立腺癌増殖を調節することが示唆される。

インテグリンが腫瘍細胞と骨微小環境との間の相互作用を媒介し、骨における増殖を促進する以上、インテグリン阻害剤使用の潜在的な用途として、前立腺癌骨病変を防止することが挙げられる。これらの病変は造骨細胞性および／または骨溶解性であり、前立腺癌患者に高頻度で検出される（前立腺癌患者の８０％超で剖検時に骨転移が確認されている）。
最近の研究では、骨に転移する前立腺癌細胞によって媒介される骨増加をαｖβ３インテグリンが促進することが示され、前立腺癌造骨細胞性病変を阻止するための潜在的な治療標的としてαｖβ３が強調されている。免疫組織化学分析により、大部分のヒト前立腺癌組織試料の中にαｖインテグリンの存在が実証されている。

これらおよび他の結果から、抗インテグリン剤が直接的および間接的抗腫瘍活性の両方を有しうることが示唆される。しかし、ペプチド性または非ペプチド性インテグリン阻害剤が前立腺癌療法において効果的な薬剤であると報告する臨床試験はほとんどない。
したがって、前立腺癌、特に、骨転移を発症する去勢抵抗性前立腺癌における使用のために有効な抗インテグリン剤を提供する必要性がある。

公知のモノクローナル抗アルファｖ抗体ＤＩ−１７Ｅ６（ＥＭＲ６２２４２またはＥＭＤ ５２５７９７としても本明細書で称される）は、前立腺癌治療における、（ｉ）単独療法をベースとした臨床設定、ならびに（ｉｉ）ホルモン剤および／または化学療法剤および／またはチロシンキナーゼ阻害剤もしくは他の血管新生阻害剤との併用臨床設定において高度に効果的であることを本発明者らは見出した。
本発明の第１の態様では、特別に操作された、公知のハイブリッドモノクローナル抗アルファ−ｖ抗体ＤＩ１７Ｅ６には、少なくとも４か月の治療期間の間、ｍＡｂを少なくとも５００ｍｇ用量で隔週点滴投与しても、顕著な副作用がなく、前立腺腫瘍患者において十分な耐容性があることが臨床試験で示された（図３、表３）。
本発明の第２の態様では、ＤＩ１７Ｅ６を少なくとも５００ｍｇ用量で隔週投与する場合が、前立腺癌、好ましくは去勢抵抗性前立腺癌（ＣＲＰＣ）の治療に効果的であることが示された。その結果、これらの患者の血液中の前立腺由来末梢循環腫瘍細胞（ＣＴＣ）の数を、とりわけ、この数が最初に（治療の初めに）極めて高い場合には、治療期間内に顕著に減少させることができる（図１）。
本発明の第３の態様では、前立腺特異抗原（ＰＳＡ）の値を、ＣＲＰＣ患者において顕著に低下させることができることが示された。この効果は、治療期間および患者の疾患状態に依存する。５か月以上の治療後には一般に、健常男性のＰＳＡ値に対して進行度が少ない症例に相当するＰＳＡ値を得ることができ、抗体治療の開始時にＰＳＡ値が極度に高い他のより重篤な症例では、治療後のＰＳＡ値を１０分の１未満に低下させることができる（図４および５）。
本発明の第４の態様では、ＤＩ１７Ｅ６を少なくとも５００ｍｇ用量で隔週投与することにより、骨およびリンパ節の転移疾患を顕著に減少させうることが実証されよう。

本発明のさらなる態様では、ＤＩ１７Ｅ６は、前立腺癌患者、好ましくは去勢抵抗性前立腺癌（ＣＲＰＣ）患者において、より高用量で効力が増加する用量依存的な応答を示し、ここで、前立腺癌患者、好ましくはＣＲＰＣ患者において、約５００ｍｇ以上の用量で隔週が効果的である一方、ＤＩ１７Ｅ６が約２５０ｍｇ以下の用量では効果的ではないことが示されうる（図３、５）。
ＤＩ１７Ｅ６は、好ましくは、さらなる細胞傷害性薬物（例えば、カバジタキセル（ｃａｂａｚｉｔａｘｅｌ）、ドセタキセル、ドキソルビシン、イリノテカン等）が投与されない単独療法設定で効果的であることに留意されたい。これは、操作されたモノクローナル抗体が、化学療法剤の投与を必要とすることなく、腫瘍治療手法において効果的である最初の例である。
前記臨床試験での第１の結果によると、疾患がより進行性であるほど、ＤＩ１７Ｅ６がより効果的に見えることにも留意されたい。したがって、ＤＩ１７Ｅ６は、前立腺摘除などの外科手術をしなくても、または化学療法および／もしくはホルモンによる前治療をしなくてもそれほど進行しない疾患状態の患者と比較して、効果が見られないホルモン療法および／または化学療法の後、また前立腺摘除などの外科手術の強い影響の後でさえ、患者におけるＰＳＡ値、末梢循環腫瘍細胞、および転移に対してより強い効果を誘発する。要約すると、ＤＩ１７Ｅ６は、とりわけ、化学療法による治療の後に進行性または最終段階の疾患状態にあるＣＲＰＣ患者の治療において極めて有望である。

さらなる結果は、ＤＩ１７Ｅ６が、特に化学療法および／または放射線療法に抵抗性がある固形前立腺腫瘍またはそれに由来する腫瘍転移において腫瘍縮小および腫瘍病変（図６）を誘導することができることである。
さらに、ＤＩ１７Ｅ６による（単独療法における）治療が、前立腺癌で通常発生する疼痛を軽減するという証拠がある。したがって、この薬物は、疼痛および疼痛障害スコア（ｐａｉｎ ｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅ ｓｃｏｒｅ）の観点から有益性を提供する（図４Ｂ、５Ｂ）。治療中の疼痛の軽減が前記患者のＰＳＡレベルの低下と相関することが観察されよう。
ＤＩ１７Ｅ６は、前投与なしで十分耐容性があり、薬物に関連して治療中に発生した有害反応（ＴＥＡＥ）など、安全性評価パラメーターの臨床に関連した用量依存的変化を示さない（表３）。
本発明のさらなる態様では、ＳＴＣ−１、ＡＤＡＭＴＳ−１、Ｍ３０、Ｍ６５、ＩＬ６、およびＩＬ８を含む骨代謝バイオマーカーと用量レベルとの間に強い相関があることを示すことができよう（図７）。１５００ｍｇ超の高用量では、ＣＲＣＰ患者の大多数において、オステオポンチンの顕著な低下を観察することができる。

単回投与および複数回投与後のＤＩ１７Ｅ６の薬物動態プロフィールは用量に依存しており、１５００ｍｇ用量レベルで約２５０時間の半減期である。
第１相の非盲検試験による安全性の結果から、４つの用量レベルのそれぞれにおける単剤ＤＩ１７Ｅ６（ＥＭＤ ５２５７９７）の反復点滴は、概ね十分な耐容性を示し、好ましくは前化学療法の後のｍＣＲＰＣおよび進行性疾患の患者において安全であるように見える。用量制限毒性（ＤＬＴ）および点滴反応はない。用量に関して、ＴＥＡＥ、ＮＣＩ−ＣＴＣＡＥ（第３．０版）グレード、または薬物関連の分布状態に何ら傾向は観察されない。さらに、個々のコホート内でいかなる特定事象も蓄積した証拠はない。１１名の患者が、薬物関連と考えられるＴＥＡＥを経験した。この点に関して、合計４名の患者で報告された掻痒、紅斑、および発疹などの皮膚症状は、インテグリンが上皮表現型の維持に関与していることを考慮すると、ＤＩ１７Ｅ６（ＥＭＤ ５２５７９７）に関連した予測可能な有害事象である。粘膜炎および舌腫脹の症状もまた、ＥＭＤ ５２５７９７の作用機序に特有なものである場合があるが、疲労と共に基礎疾患の徴候である場合もある。８名の患者に観察された血液学的および生化学的毒性の変化もまた、基礎疾患および併用薬によって説明することができよう。

試験薬の単回投与および複数回投与の後のＰＫ評価により、ＤＩ１７Ｅ６（ＥＭＤ ５２５７９７）は、膜結合受容体を標的とする他の抗体について記載されているように、受容体を媒介としたクリアランスモデルに従う挙動をしたことが示唆される。健常ボランティアにおける以前の試験結果と一致して、ｍＣＲＰＣ患者におけるＤＩ１７Ｅ６（ＥＭＤ ５２５７９７）のＰＫは用量依存的であり、結合していない受容体のアベイラビリティによって主に決定されるクリアランスを示す。本試験で使用される用量では、１０００ｍｇ以上の用量で、ほぼすべての受容体が飽和し、薬物クリアランスに対して僅かな寄与しかしていないと仮定することができる。免疫学的に誘発された、ＤＩ１７Ｅ６に対する抗体を、一部の患者（１６％）に検出することができる；しかしながら、ＰＫまたは安全性への影響は見出すことができなかった。

前化学療法の後に骨転移を有する去勢抵抗性前立腺癌患者では、無増悪生存期間の中央値は８〜１０週であると予想される。抗腫瘍活性評価から、ＤＩ１７Ｅ６（ＥＭＤ ５２５７９７）を単剤療法として使用して、５００ｍｇコホート中の１名の患者に腫瘍の他覚的部分寛解が得られたことがわかった。ＤＩ１７Ｅ６（ＥＭＤ ５２５７９７）を５００ｍｇ以上の用量で投与された１８名の患者のうちの９名（５０％）において、１６週間以上の間、Ｘ線検査によって疾患の進行を観察することができない。２名の患者では、用量５００ｍｇのＤＩ１７Ｅ６（ＥＭＤ ５２５７９７）による長期間治療に関連して、ＰＳＡレベルの顕著な低下および疼痛障害の観点からの臨床的有益性が示される。さらに、少なくとも１名の患者では、原発腫瘍の縮小および標的リンパ節サイズの正常化が示された。したがって、ＤＩ１７Ｅ６（ＥＭＤ ５２５７９７）は、後期ｍＣＲＰＣ患者の少なくとも一部において、単剤活性を示すように見える。

結論として、単回投与および複数回投与として投与された単剤ＥＭＤ ５２５７９７は、自然寛解が見られない前化学療法の後の骨転移および進行性疾患を有するｍＣＲＰＣ患者において十分耐容性があることが示される。安全性に関する懸念は確認することができない。また、数多くの患者において臨床的有益性を示す予備的証拠がある。その標的および安全性プロフィールから、ＤＩ１７Ｅ６（ＥＭＤ ５２５７９７）は、併用療法について有望な薬剤である。

要約すると、本発明の主題は以下のことに関する。
・患者の治療を目的とするまたは患者の治療用薬物の製造を目的とする、抗ａｖインテグリン抗体ＤＩ１７Ｅまたはその生物学的に活性な変異体もしくは改変体の使用であって、前記患者が前立腺癌、好ましくは去勢抵抗性前立腺癌（ＣＲＰＣ））に罹患し、好ましくは、前記ＣＲＰＣが、２５〜１０．０００ｎｇ／ｍｌの範囲、より具体的には、２５ｎｇ／ｍｌ超、または５０ｎｇ／ｍｌ超、または１００ｎｇ／ｍｌ超、または２５０ｍｇ／ｍｌ超、または５００ｎｇ／ｍｌ超、または１０００ｎｇ／ｍｌ、または２５００ｎｇ／ｍｌ超または５０００ｎｇ／ｍｌ超、または７５００ｎｇ／ｍｌ超のレベルの高血清ＰＳＡレベルを伴っている、使用。
・癌が骨および／またはリンパ節組織に転移している、ＤＩ１７Ｅ６抗体のそれぞれの使用。
・前立腺特異抗原（ＰＳＡ）の値が、抗体治療開始前の値と比較して、治療中に、５分の１未満、１０分の１未満、２０分の１未満、好ましくは１０分の１未満に低下する、ＤＩ１７Ｅ６抗体のそれぞれの使用。
・ＰＳＡ値の低下が、治療の４〜８か月以内、好ましくは４か月後、より好ましくは６か月後に達成される、ＤＩ１７Ｅ６抗体のそれぞれの使用。
・末梢循環腫瘍細胞（ＣＴＣ）の数が抗体治療中に低下する、ＤＩ１７Ｅ６抗体のそれぞれの使用。
・前立腺が切除されたか、あるいは放射線により治療されたＣＲＰＣ患者におけるＤＩ１７Ｅ６抗体のそれぞれの使用。
・前立腺癌、好ましくは、骨転移を好ましくは伴うＣＲＰＣにおいて発生する疼痛を軽減するためのＤＩ１７Ｅ６抗体のそれぞれの使用。
・患者が化学療法剤および／またはホルモン剤で前治療されており、好ましくは、化学療法剤および／またはホルモン剤による前記前治療の後に癌が進行性の場合である、ＤＩ１７Ｅ６抗体のそれぞれの使用。
・抗体の有効用量が、２週間当たり５００ｍｇ〜１５００ｍｇ、好ましくは２週間当たり５００〜１０００ｍｇ、または１か月当たり１０００〜２０００ｍｇである、ＤＩ１７Ｅ６抗体のそれぞれの使用。
・５００〜１０００ｍｇの有効用量が単回点滴によって投与される、ＤＩ１７Ｅ６抗体のそれぞれの使用。
・抗体が追加の化学療法剤なしの単独療法設定で投与される、ＤＩ１７Ｅ６抗体のそれぞれの使用。
・抗体が、細胞傷害性／細胞増殖抑制性薬剤またはホルモン剤と逐次的または同時に併用される設定で投与される、ＤＩ１７Ｅ６抗体のそれぞれの使用。
・前記併用設定において、細胞増殖抑制性薬剤または細胞傷害性薬剤が、化学療法剤、放射線、チロシンキナーゼ阻害剤、および血管新生阻害剤からなる群から選択され；前記チロシンキナーゼ阻害剤が、抗ＥＧＦＲ抗体、抗Ｈｅｒ２抗体、および抗Ｈｅｒ３抗体からなる群から選択される抗ＥｒｂＢ抗体であり、前記血管新生阻害剤が、アルファ−ｖインテグリン阻害剤、好ましくはシレンジタイドなどのＲＧＤペプチドである、ＤＩ１７Ｅ６抗体のそれぞれの使用。
・生物学的に活性な変異体または改変体が、ＤＩ１７Ｅ６の可変領域と比較して、アミノ酸配列が８０％〜９５％同一である、ＣＤＲ領域ならびに重鎖および軽鎖の可変領域を含む、ＤＩ１７Ｅ６抗体のそれぞれの使用。
・生物学的に活性な変異体または改変体が、ＤＩ１７Ｅ６の定常領域と比較して、アミノ酸配列が少なくとも８０％〜９８％同一である定常領域を含む、ＤＩ１７Ｅ６抗体のそれぞれの使用。
・以下の重鎖フレームワーク領域内の１つまたは複数の改変を含むＤＩ１７Ｅ６抗体のそれぞれの使用、
ＦＲ１：ＱＶＱＬＱＱＳＧＡＥＬＡＥＰＧＡＳＶＫＭＳＣＫＡＳＧＹＴＦＳ（配列番号１６）
ＦＲ２：ＷＶＫＱＲＰＧＱＧＬＥＷＩＧ（配列番号１７）
ＦＲ３：ＫＡＴＭＴＡＤＴＳＳＳＴＡＹＭＱＬＳＧＬＴＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＳ（配列番号１８）
ＦＲ４：ＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳ（配列番号１９）、
配列中、太字と下線付き位置の１つまたは複数は変異しており、それぞれのオリジナル配列と比較して異なる。
・ヒトＩｇＧ２の代わりにヒトＩｇＧ１定常領域またはヒトＩｇＧ１ヒンジの代わりにヒトＩｇＧ２ヒンジ領域を含む改変ＤＩ１７Ｅ６抗体のそれぞれの使用。
・好ましくは骨転移を伴う、患者の去勢抵抗性前立腺癌（ＣＲＰＣ）を治療する方法であって、抗ａｖインテグリン抗体ＤＩ１７Ｅ６またはその生物学的に活性な変異体もしくは改変体を、好ましくは少なくとも３か月間、好ましくは、５００〜１０００ｍｇの用量で隔週投与することを含む方法。
・前立腺癌、好ましくは去勢抵抗性前立腺癌（ＣＲＰＣ）に罹患した患者の病的に増加したＰＳＡ血清レベルを、前記患者にハイブリッドモノクローナル抗体ＤＩ１７を少なくとも５００ｍｇまたは１か月当たり少なくとも１０００ｍｇの有効用量で隔週投与することにより、５分の１未満、好ましくは１０分の１未満に低下させる方法であって、抗体治療開始前の病的に増加したＰＳＡ血清レベルが少なくとも２５ｎｇ／ｍｌ、好ましくは少なくとも５０ｎｇ／ｍｌである、方法。
・癌が骨および／またはリンパ節組織に転移している、それぞれの方法。

用量レベル（１）２５０ｍｇ、（２）５００ｍｇ、および（３）１０００ｍｇにおける、６名の選択されたＣＲＰＣ患者の末梢循環腫瘍細胞（ＣＴＣ）の測定結果の要約を示すグラフである。Ｘ軸は治療日数を示す。Ｙ軸は末梢循環腫瘍細胞（ＣＴＣ）を示す。 ４週ごとに投与された２５０ｍｇ、５００ｍｇ、１０００ｍｇ、および１５００ｍｇのＡｂについて、ＤＩ１７Ｅ６（ＥＭＤ ５２５７９７）の薬物動態プロフィールを示すグラフである。Ｘ軸は第１回の点滴後の時間（ｈ）を示す；Ｙ軸は血清濃度（μｇ／ｍｌ）を示す。 ＤＩ１７Ｅ６による治療後における、ＣＲＰＣ患者コホートの治療期間を示すグラフである。Ｘ軸：治療週数；Ｙ軸：用量レベル（用量レベル１：２５０ｍｇ、用量レベル２：５００ｍｇ、用量レベル３：１０００ｍｇ、用量レベル４：１５００ｍｇ） 図４Ａは、ＤＩ１７Ｅ６による治療期間中（治療開始２００９年８月２４日）における、前立腺摘除を受けていない、骨転移を示す特定ＣＲＰＣ患者（２００１）のＰＳＡレベル（ｎｇ／ｍｌ血清）の変化を示すグラフである。Ｘ軸は治療期間（日数）を示す；Ｙ軸はＰＳＡレベル（ｎｇ／ｍｌ）を示す。 図４Ｂは、図４Ａの同じ患者についての、下記に定義される平均疼痛障害スコアを示すグラフである。Ｘ軸は治療期間（日数）を示す；Ｙ軸は平均疼痛障害スコアを示す。 図５Ａは、ＤＩ１７Ｅ６による治療期間中における（治療開始２００９年９月１日）、前立腺摘除を受け、骨転移を示し、化学療法後に進行性疾患になっている第２のＣＲＰＣ患者のＰＳＡ経過を示すグラフである。Ｘ軸は治療期間（日数）を示す；Ｙ軸はＰＳＡレベル（ｎｇ／ｍｌ）を示す。 図５Ｂは、図５Ａの同じ患者についての、下記に定義される平均疼痛障害スコアを示すグラフである。Ｘ軸は治療期間（日数）を示す；Ｙ軸は平均疼痛障害スコアを示す。 原発腫瘍病変の顕著な縮小を示す、５００ｍｇコホートの患者のＣＴスキャンを示す図である。（ａ）ＤＩ−１７Ｅ６による治療前、（ｂ）ＤＩ−１７Ｅ６による１７回目の治療後（４か月後）。 ＤＩ１７Ｅ６による治療後の骨マーカー／末梢循環骨マーカーの出現を示す図である。１＝用量レベル１；２＝用量レベル２。

ＤＩ１７Ｅ６は、アルファ−ｖインテグリン（受容体）に対する、特別に作製された操作されたＩｇＧ２ハイブリッドモノクローナル抗体である。この抗体による癌治療は、このタイプの療法に関連した副作用、とりわけ免疫反応を低減する。そのため免疫原性は低下している。この抗体は、国際公開第２００９／０１０２９０号パンフレットに詳細に記載されている。
その超可変領域（ＣＤＲ）は、マウスｍＡｂ １７Ｅ６（ＥＭＤ ７３０３４）に由来する。このマウスＩｇＧ１親抗体は、例えば、Ｍｉｔｊａｎｓら（１９９５；Ｊ．Ｃｅｌｌ Ｓｃｉ．１０８，２８２５）ならびに米国特許第５，９８５，２７８号明細書および欧州特許第７１９８５９号明細書に記載されている。マウスｍＡｂ １７Ｅ６は、ハイブリドーマ細胞株２７２−１７Ｅ６により産生され、受託番号ＤＳＭ ＡＣＣ２１６０で寄託されている。
その軽鎖ドメインは、ヒト化モノクローナル抗ＥＧＦＲ抗体４２５（マツズマブ）に由来する。この抗体は、例えば欧州特許第０５３１４７２Ｂ１号明細書に詳細に記載されており、そのマウス対応物４２５（マウスＭＡｂ ４２５、ＡＴＣＣ ＨＢ９６２９）に由来する。この抗体は、ヒトＡ４３１癌細胞株に対して産生されたものであり、ヒト上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）の外部ドメイン上のポリペプチドエピトープに結合することが見出された。マツズマブは臨床試験で高い効力を示した。

概して、本発明に従って使用されるＤＩ１７Ｅ６は、以下のものを含む：
（ｉ）マウスモノクローナル抗αｖインテグリン抗体１７Ｅ６に由来するＣＤＲ軽鎖および重鎖領域、
（ｉｉ）ヒト化モノクローナル抗ＥＧＦＲ抗体４２５から得られる軽鎖フレームワーク領域、
（ｉｉｉ）マウスモノクローナル抗αｖインテグリン抗体１７Ｅ６に由来する重鎖フレームワーク領域（任意選択で、特定位置のアミノ酸の１つまたは複数の変異を含む）、および
（ｉｖ）ヒトＩｇＧ２に由来する重鎖定常領域およびヒト定常κ軽鎖領域、ここで、前記ＩｇＧ２ドメインでは、ＩｇＧ２ヒンジ領域がヒトＩｇＧ１ヒンジドメインで置換されており、任意選択で、ＩｇＧ２内で１つまたは複数の変異がなされている。

具体的には、特許請求の範囲にある治療ならびに上記および下記に記載の臨床試験における治療のために使用されるＤＩ１７Ｅ６（「ＤＩ−１７Ｅ６γ２ｈ（Ｎ２９７Ｑ）」または「ＥＭＤ ５２５７９７」と命名される）は、以下のアミノ酸配列を有する：
（ｉ）可変および定常軽鎖配列（配列番号１）：
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＩＳＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＹＴＳＫＩＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＴＦＴＩＳＳＬＱＰＥＤＩＡＴＹＹＣＱＱＧＮＴＦＰＹＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ、および
（ｉｉ）可変および定常重鎖配列（配列番号２）：
ＱＶＱＬＱＱＳＧＧＥＬＡＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＳＳＦＷＭＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＩＧＹＩＮＰＲＳＧＹＴＥＹＮＥＩＦＲＤＫＡＴＭＴＴＤＴＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＳＦＬＧＲＧＡＭＤＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＮＦＧＴＱＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＴＶＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＡＱＳＴＦＲＶＶＳＶＬＴＶＶＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＴＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＭＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ、
配列中、下線付き配列は、ＣＤＲ（太字、マウス親抗体と同一）を含有する可変領域を示す。改変ＩｇＧ１ヒンジ領域は、ＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰ（配列番号３）で示され、ＡＱはＩｇＧ２ドメイン内の置換である。

しかしながら、国際公開第２００９／０１０２９０号パンフレットで示されるように、ＤＩ１７Ｅ６の変異体もまた、本発明の教示に従って使用することができる。したがって、下記の重鎖フレームワーク領域内の１つまたは複数の改変を含むＤＩ１７Ｅ６変異体は、記載されるように、前立腺癌患者の治療に使用することができる：
ＦＲ１：ＱＶＱＬＱＱＳＧＡＥＬＡＥＰＧＡＳＶＫＭＳＣＫＡＳＧＹＴＦＳ（配列番号）
ＦＲ２：ＷＶＫＱＲＰＧＱＧＬＥＷＩＧ（配列番号１７）
ＦＲ３：ＫＡＴＭＴＡＤＴＳＳＳＴＡＹＭＱＬＳＧＬＴＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＳ（配列番号）
ＦＲ４：ＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳ（配列番号１９）、
配列中、太字および下線付き位置の１つまたは複数は変異している。より詳細には、重鎖フレームワーク領域の下記変異位置では、１つ、複数、またはすべての下記位置を変異させることができる：Ａ９、Ｅ１３、Ｍ２０、Ｋ３８、Ｒ４０、Ａ７２、Ｓ７６、Ｑ８２、Ｇ８５、Ｔ８７、Ｓ９１、およびＳ１１３。これらの変異体は、上記配列で定義されるＤＩ１７Ｅ６と比較して、同じかまたは極めて類似した生物活性および効力を示す。

一般に、記載の本発明はまた、非改変ＤＩ１７Ｅ６と機能的および／または薬学的に同一または同様であり、かつＣＤＲ領域ならびに重鎖および軽鎖可変領域が、ＤＩ１７Ｅ６のそれぞれの可変領域と比較して、アミノ酸配列において少なくとも８０％、または少なくとも８５％、または少なくとも９０％、または少なくとも９５％同一である、ＤＩ１７Ｅ６抗体の改変体および変異体を含む。加えて、本発明はまた、非改変ＤＩ１７Ｅ６と機能的および／または薬学的に同一または同様であり、かつ定常領域が、ＤＩ１７Ｅ６のそれぞれの定常領域と比較して、アミノ酸配列において少なくとも８０％、または少なくとも８５％、または少なくとも９０％、または少なくとも９８％同一である、ＤＩ１７Ｅ６抗体の改変体および変異体を含む。この抗体のＩｇＧ鎖の定常領域を変化させると、免疫原性、ＡＤＣＣ等の特定の性質を改善することができる。

さらなる態様では、本発明に従って使用されるＤＩ１７Ｅ６抗体は、細胞傷害性薬剤、好ましくは、ＩＬ２、ＩＬ８、ＩＦＮｂ、ＩＦＮａ、ＴＮＦａ、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｇ−ＣＳＦ、または下記に指定のもの等のサイトカインに融合することができる。サイトカインは、そのＮ末端を介して抗体重鎖のＣ末端に、またはそのＣ末端を介して抗体重鎖および軽鎖のＮ末端に融合することができる。

本発明によれば、ＤＩ１７Ｅ６は、前立腺癌に罹患した患者、とりわけ、化学療法および／またはホルモン療法および／または前立腺摘除などの前立腺外科手術の後に腫瘍が進行性になっている患者に高度に効果的である。
ＤＩ１７Ｅ６または記載されたその改変体の効力を強化するかまたは持続的にするために、細胞傷害性薬剤または細胞増殖抑制性薬剤との併用療法を適用することができる。細胞傷害性薬剤または細胞増殖抑制性薬剤は、癌の臨床治療においてかなり一般的でかつ好都合な用量で、抗体と逐次的にまたは同時に投与することができる。本発明の好ましい細胞傷害性／細胞増殖抑制性薬剤は、下記に記載の抗血管新生剤であり、より詳細には、Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）（トラスツズマブ）、Ｅｒｂｉｔｕｘ（登録商標）（セツキシマブ）、またはパニツムマブなど、それぞれの抗体を含む抗ＥＧＦＲ剤または抗Ｈｅｒ３剤である。好ましい実施形態では、セツキシマブとＤＩ１７Ｅ６の併用療法は、前立腺癌、特に本発明に記載のＣＲＰＣに効果的である。
同じ目的のために、ＤＩ１７Ｅ６を、公知レジメンに従ってホルモン剤と一緒に（逐次的または同時に）投与することができる。

本明細書で使用される用語「去勢抵抗性（ｃａｓｔｒａｔｅ−ｒｅｓｉｓｔａｎｔ）」または「去勢抵抗性（ｃａｓｔｒａｔｉｏｎ−ｒｅｓｉｓｔａｎｔ）」は、血清テストステロンが去勢レベル以下、通常は５０ｎｇ／１００ｍｌ未満に制御された状態で進行性である前立腺癌の状態を指す。この用語は、「ホルモン抵抗性（ｈｏｒｍｏｎｅ−ｒｅｓｉｓｔａｎｔ）」もしくは「ホルモン抵抗性（ｈｏｒｍｏｎｅ−ｒｅｆｒａｃｔｏｒｙ）」または「アンドロゲン非依存性」と同義的に使用される。
用語「疼痛障害（合計）スコア」は、疾患の結果として、有効薬物の投与期間中に生じる疼痛に対するスコアを意味する。疼痛障害は簡易疼痛調査票（Ｂｒｉｅｆ Ｐａｉｎ Ｉｎｖｅｎｔｏｒｙ）（ＢＰＩ）を使用して評価される。ＢＰＩを使用して下記に対する疼痛障害を評価する：（ａ）一般活動性、（ｂ）気分、（ｃ）歩行能力、（ｄ）通常の仕事、（ｅ）他の人々との関係、（ｆ）睡眠、および（ｇ）生活の楽しみ。疼痛障害に対する合計スコアは以下のように計算される：（回答のある質問の平均スコア）×（７／回答のある質問の数）。４つ以上の質問に回答がない場合は、疼痛障害合計スコアは不明に設定される。
本明細書で使用される用語「細胞傷害性薬剤」は、細胞を破壊することにより細胞機能を阻害または妨害する物質を指す。この用語は、放射性同位元素、化学療法剤、および細菌、菌類、植物、もしくは動物に由来する酵素的に活性な毒素などの毒素またはそれらの断片を含むように意図される。この用語はまた、サイトカインファミリーのメンバー、好ましくはＩＦＮγ、ならびに細胞傷害活性を有する抗新生物剤を含むことができる。

本明細書で使用される用語「細胞増殖抑制性薬剤」は、細胞を破壊することなく、細胞の成長および増殖を阻害または抑制する物質を指す。
用語「サイトカイン」は、細胞間メディエーターとして他の細胞に作用する、ある細胞集団から放出されるタンパク質に対する総称である。このようなサイトカインの例には、リンホカイン、モノカイン、および伝統的なポリペプチドホルモンがある。サイトカインの中には、ヒト成長ホルモン、Ｎ−メチオニルヒト成長ホルモン、およびウシ成長ホルモンなどの成長ホルモン；副甲状腺ホルモン；チロキシン；インスリン；プロインスリン；リラキシン；プロリラキシン；卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）、甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）、および黄体形成ホルモン（ＬＨ）などの糖タンパク質ホルモン；肝増殖因子；繊維芽細胞増殖因子；プロラクチン；胎盤性ラクトゲン；マウスゴナドトロピン関連ペプチド；インヒビン；アクチビン；血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）；インテグリン；トロンボポイエチン（ＴＰＯ）；ＮＧＦβなどの神経成長因子；血小板増殖因子；ＴＧＦαおよびＴＧＦβなどの形質転換増殖因子（ＴＧＦ）；エリトロポイエチン（ＥＰＯ）；ＩＦＮα、ＩＦＮβ、およびＩＦＮγなどのインターフェロン；Ｍ−ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、およびＧ−ＣＳＦなどのコロニー刺激因子；ＩＬ−１、ＩＬ−１ａ、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２などのインターロイキン；およびＴＮＦαまたはＴＮＦβが含まれる。本発明による好ましいサイトカインは、インターフェロンおよびＴＮＦａである。

「抗血管新生剤」は、血管の新生を阻止またはある程度妨害する天然または合成の化合物を指す。抗血管新生分子は、例えば、血管新生の増殖因子または増殖因子受容体に結合し、それを遮断する生体分子であってもよい。本明細書の好ましい抗血管新生分子は、受容体、好ましくはインテグリン受容体またはＶＥＧＦ受容体に結合する。この用語には、本発明に従って、インテグリン（受容体）阻害剤も含まれる。
用語「インテグリン阻害剤」または「インテグリン受容体阻害剤」は、インテグリン受容体を遮断および阻害する天然または合成の分子を指す。ある場合には、この用語には、前記インテグリン受容体のリガンド（例えば、α_vβ₃については：ビトロネクチン、フィブリン、フィブリノーゲン、ｖｏｎ Ｗｉｌｌｅｂｒａｎｄ因子、トロンボスポンジン、ラミニン；α_vβ₅については：ビトロネクチン；α_vｓ₁については：フィブロネクチンおよびビトロネクチン；α_vβ₆については：フィブロネクチン）に対するアンタゴニストが含まれる。インテグリン受容体に対するアンタゴニストは、本発明によれば好ましい。インテグリン（受容体）アンタゴニストは、天然または合成のペプチド、非ペプチド、ペプチドミメティカ、免疫グロブリン、例えば抗体もしくはその機能性断片、または免疫コンジュゲート（融合タンパク質）であってもよい。本発明の好ましいインテグリン阻害剤は、α_vインテグリン（例えば、α_vβ₃、α_vβ₅、α_vβ₆、およびサブクラス）の受容体に対するものである。好ましいインテグリン阻害剤は、α_vアンタゴニストであり、具体的には、α_vβ₃アンタゴニストである。本発明の好ましいα_vアンタゴニストは、ＲＧＤペプチド、ペプチドミメティック（非ペプチド）アンタゴニスト、およびα_v受容体を遮断する抗体などの抗インテグリン受容体抗体である。代表的な非免疫学的α_vβ₃アンタゴニストは、米国特許第５，７５３，２３０号明細書および米国特許第５，７６６，５９１号明細書の教示に記載されている。好ましいアンタゴニストは、直鎖状および環状のＲＧＤ含有ペプチドである。環状ペプチドは、通常、安定性が高く、血清半減期の延長を引き出す。しかしながら、本発明の最も好ましいインテグリンアンタゴニストは、インテグリン受容体であるα_vβ₃、α_vβ₁、α_vβ₆、α_vβ₈、α_IIbβ₃の遮断に効果的なシクロ−（Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−ＤＰｈｅ−ＮＭｅＶａｌ）（ＥＭＤ １２１９７４、Ｃｉｌｅｎｇｉｔｉｄｅ（登録商標），Ｍｅｒｃｋ ＫｇａＡ，Ｇｅｒｍａｎｙ）；欧州特許第０７７０６２２号明細書）である。前立腺癌および好ましくはＣＲＰＣの患者へのＤＩ１７Ｅ６とＣｉｌｅｎｇｉｔｉｄｅとの併用療法は、本発明に従って効果的である。

用語「化学療法剤」または「抗新生物剤」は、本発明の理解によると、上記に指定の「細胞傷害性薬剤」クラスのメンバーと見なされ、生物応答の修飾などの機序を介して間接的にではなく、腫瘍細胞上に直接抗新生物効果を及ぼす、すなわち、新生細胞の発生、成熟、または拡散を防止する化学薬剤を含む。本発明の適切な化学療法剤は、好ましくは天然または合成の化学物質であるが、タンパク質、ポリペプチド等の生体分子が完全に除外されるわけではない。商業用途、臨床評価、および前臨床開発で利用可能な数多くの抗新生物剤があり、これらは、ＴＮＦαおよび上記の抗血管新生剤との併用療法による腫瘍／新生物の治療のために、本発明に含めることができる。化学療法剤は、任意選択で、上の前記抗体医薬と一緒に投与することができることを指摘したい。化学療法剤の例としては、アルキル化剤、例えば、ナイトロジェンマスタード、エチレンイミン化合物、スルホン酸アルキル、ならびにニトロソ尿素、シスプラチン、およびダカルバジンなどのアルキル化作用を有する他の化合物；代謝拮抗剤、例えば、葉酸、プリン、またはピリミジンアンタゴニスト；有糸分裂阻害剤、例えば、ビンカアルカロイド、およびポドフィロトキシン誘導体；細胞傷害性抗生物質およびカンプトテシン誘導体が挙げられる。好ましい化学療法剤または化学療法としては、アミホスチン（エチオール（ｅｔｈｙｏｌ））、カバジタキセル、シスプラチン、ダカルバジン（ＤＴＩＣ）、ダクチノマイシン、ドセタキセル、メクロレタミン、ストレプトゾシン、シクロホスファミド、カルムスチン（ＢＣＮＵ）、ロムスチン（ＣＣＮＵ）、ドキソルビシン（アドリアマイシン）、ドキソルビシンリポ（ドキシル）、ゲムシタビン（ジェムザール）、ダウノルビシン、ダウノルビシンリポ（ダウノキソーム（ｄａｕｎｏｘｏｍｅ））、プロカルバジン、ケトコナゾール、マイトマイシン、シタラビン、エトポシド、メトトレキセート、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ブレオマイシン、パクリタキセル（タキソール）、ドセタキセル（タキソテール）、アルデスロイキン、アスパラギナーゼ、ブスルファン、カルボプラチン、クラドリビン、カンプトテシン、ＣＰＴ−１１、１０−ヒドロキシ−７−エチル−カンプトテシン（ＳＮ３８）、ダカルバジン、フロクスウリジン、フルダラビン、ヒドロキシ尿素、イホスファミド、イダルビシン、メスナ、インターフェロンアルファ、インターフェロンベータ、イリノテカン、ミトキサントロン、トポテカン、リュープロリド、メゲストロール、メルファラン、メルカプトプリン、プリカマイシン、ミトタン、ペガスパルガーゼ、ペントスタチン、ピポブロマン、プリカマイシン、ストレプトゾシン、タモキシフェン、テニポシド、テストラクトン、チオグアニン、チオテパ、ウラシルマスタード、ビノレルビン、クロランブシル、およびそれらの組合せが挙げられる。ＤＩ１７Ｅ６との併用における、本発明の最も好ましい化学療法剤は、カバジタキセル、シスプラチン、ドセタキセル、ゲムシタビン、ドキソルビシン、パクリタキセル（タキソール）、イリノテカン、およびブレオマイシンである。

ＤＩ１７Ｅ６は、静脈内注射により通常投与されるが、抗体／タンパク薬にとって当技術分野で好都合な他の投与形態が適用可能である。国際公開第２００５／０７７４１４号パンフレットまたは国際公開第２００３／０５３４６５号パンフレットに記載のものなど、リポソーム製剤を含むすべての標準輸液および製剤が適用可能である。加えて、ＤＩ１７Ｅ６および任意選択で（細胞傷害性を高めるために）化学療法薬（Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ ２０１０，８，２３８８−９８；Ｗａｇｎｅｒら）を負荷されたヒト血清アルブミンナノ粒子を準備することが好ましい。
以下の実施例は、より詳細に本発明を説明するが、本発明および特許請求の範囲を限定するものではない。

実施例１：試験計画
第１相試験は、ＤＩ１７Ｅ６で治療されたＣＲＰＣ患者について、前立腺特異抗原、末梢循環腫瘍細胞（ＣＴＣ）、ならびに軟組織転移および骨転移に対する効果を含む、安全性、薬物動態、および抗腫瘍活性を決定するために開始された。患者はすべて、化学療法後に進行性疾患に罹患していた。患者は、１時間にわたる、２５０、５００、１０００、または１５００ｍｇのＤＩ１７Ｅ６による静脈内点滴で治療された。
適格患者は、１８歳以上で、前化学療法後に骨転移の証拠がある、組織学的または細胞学的に確認された前立腺癌に罹患していた。患者は、両側性睾丸摘出を受けたか、またはゴナドトロピン放出ホルモンアゴニストもしくはアンタゴニストによる持続的アンドロゲン枯渇療法を受けているかのいずれかであり、登録前の少なくとも４週間、抗アンドロゲン療法を中止していた。患者は、持続して（すなわち、少なくとも３か月）ビスホスホネート療法を受け続けているか、または全血清テストステロンレベルが５０ｎｇ／ｄＬ未満の状態でビスホスホネート療法を受けないでいるかのいずれかである必要があった。すべての患者について、少なくとも２回の前立腺特異抗原（ＰＳＡ）値が、スクリーニングの少なくとも２週間前に測定された個人の最下点レベルから最低１０％増加しているとして定義される進行性疾患の証拠があった；結節性または内臓に関連する進行は、ＰＳＡとは別個に包含するのに十分であった。さらに、患者は、Ｅａｓｔｅｒｎ Ｃｏｏｐｅｒａｔｉｖｅ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ Ｇｒｏｕｐ（ＥＣＯＧ）スコアが０〜２、平均余命が少なくとも３か月、および十分な血液、腎臓、および肝臓機能があることが必要であった。各試験センターの治験審査委員会が、試験プロトコールを承認し、すべての患者が書面によるインフォームドコンセントを提出した。

この第１相の複数機関、非盲検、段階的用量増加試験では、ｍＣＲＰＣ患者に、２５０、５００、１０００、または１５００ｍｇの用量でＥＭＤ ５２５７９７を、隔週１時間にわたり、３回静脈内点滴投与した後、６週目の終わりに応答評価した。進行性疾患の証拠がない患者には、疾患進行または容認できない毒性が現れるまで、さらに隔週投与を行うのが適正であった。用量制限毒性（ＤＬＴ）を最初の６週間で評価し、ＥＭＤ ５２５７９７の最終投与の４週間後まで、安全性のために患者を経過観察した。患者を４系列の用量コホートで募集した；用量コホート内の６名の患者の最後の患者が６週目の終わりに達した後に、安全性モニタリング委員会（Ｓａｆｅｔｙ Ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ）が次の段階的用量増加を決定した。
４３〜８０歳の間（年齢の中央値、６６歳）の２６名の男性患者を登録し、少なくとも１回のＥＭＤ ５２５７９７静脈内点滴を行った。これらの患者は安全性集団を構成した。患者はすべて、白色人種であった。全体的に、人口統計的特性は、４つの用量コホートにわたって同等であり（表１ａ）、最初の診断からの期間の中央値は、５．２年（２〜１８年の範囲）であり、診断から最初の転移性疾患までの期間の中央値は、０．１年（０〜１６年の範囲）であった。ＤＬＴ期間の終了前に、２名の患者が取り消され、その後、後を継いで２４名の患者が６週間の治療を通して、ＥＭＤ ５２５７９７を３回投与された。

表１ａ．患者のベースライン人口統計(安全性集団)

BMI、肥満度指数; TNM、腫瘍、結節、転移。

要約 (表１ｂ):

この第Ｉ相試験から得られる臨床結果はドイツの３施設およびベルギーの１施設で実施されており、化学療法後に骨転移および進行性疾患を伴う去勢抵抗性前立腺癌の被験対象において、単剤生物活性を示す。

実施例２：治療期間
２４名の患者（４３〜８０歳）について、３回（１、３、および５週目）投与後、６週目の終わりに応答評価した。進行性疾患ではない患者には、さらに隔週投与することができた。用量制限毒性（ＤＬＴ）を最初の６週間にわたり評価し、ＤＩ１７Ｅ６の最終投与の４週間後まで安全性のために患者を経過観察した。
表２に、各コホートにおける患者ごとの薬物曝露を要約する。患者の平均ＥＭＤ ５２５７９７曝露期間は、１１７．５日であった（中央値７４．５日；範囲１４〜５３４日）。２４名の患者のうちの１３名は、曝露期間が期待より長期（８４日超）であり、５００ｍｇコホートの２名の患者は、２９７および５３４日間の治療継続中であり、１０００ｍｇコホートの１名の患者は、３１０日間治療を受けている。６週間のＤＬＴ期間内にＤＬＴは報告されなかった。すべての患者が少なくとも１つのＴＥＡＥを経験したが、ＴＥＡＥにおいて用量依存的な関係は観察されなかった。

表２ａ: 各用量コホートにおける患者ごとのDI17E6曝露期間

+ =治療進行中; *脱落患者(1回および2回の点滴のみ)

試験プロトコールでは、被験対象はＤＩ１７Ｅ６の少なくとも３用量（２５０、５００、１０００ｍｇ／隔週）を隔週で投与されることになること、および進行性疾患の証拠がない被験対象はさらに隔週で治療用量を投与されることになることが明示された。
４つのコホートすべてにおける治療期間（状況：２０１０年８月）。５００ｍｇ／隔週のコホート２では、後期（推定ｍＯＳ＜１２か月）の２名の患者（２００１および２００２）は、治療に対する予期しない腫瘍応答により１０か月を超える。

表２ｂ:治療期間の値を示す(2010年8月の状況)。用量レベル1: 250mg DI17E6、 用量レベル2: 500mg DI17E6、 用量レベル3: 1000mg DI17E6、および用量レベル4: 1500mg DI17E6

表２ｂ続き

実施例３：安全性／副作用
表３に薬物関連ＴＥＡＥを要約する。１１名の患者（４２．３％）が薬物関連ＴＥＡＥを経験し、それらは、器官別大分類の「皮膚および皮下組織障害」（合計４名の患者；全身性掻痒、紅斑、発疹）、「全身障害および投与局所様態」（合計３名の患者；疲労、粘膜炎、末梢性浮腫）、「胃腸障害」（合計２名の患者；口腔乾燥、舌腫脹、上部消化管出血）、および「感染症および寄生虫症」（合計２名の患者；鼻炎、敗血症）で、最も頻繁に報告があった。２名の患者（７．７％）のみが、薬物関連のグレード３または４のＴＥＡＥであった：５００ｍｇコホートの１名の患者が、γ−グルタミルトランスフェラーゼ（ＧＧＴ）のグレード３の増加を経験し、１０００ｍｇコホートの１名の患者がグレード３の敗血症を経験した。

２名の患者が、治療に関連すると考えられる重篤なＴＥＡＥを経験した。それらは、２５０ｍｇコホートの患者におけるグレード１の上部消化管出血、および１０００ｍｇコホートの１名の患者におけるグレード３の敗血症であった。スクリーニングでは、この後者の患者は、尿路感染症および最後の事象がＤＩ１７Ｅ６（ＥＭＤ ５２５７９７）に関連すると考えられる敗血症の再発事象が進行中との診断を受けた。４名の患者が死亡し、研究者は、死亡はすべて、ＥＭＤ ５２５７９７に合理的に関連づけられるものではないと評価した。

６名の患者（２３．１％）が、ＴＥＡＥにより治療を永続的に中止したが、これらには、２５０ｍｇコホートの４名の患者（１２日目に上部消化管出血、５３日目に筋無力症、４６日目に対麻痺、および３０日目に尿管閉塞）、ならびに５００ｍｇ（５３４日目にグレード３のＧＧＴ増加）および１５００ｍｇ（８５日目に中枢神経系転移）コホートのそれぞれ１名の患者が含まれる。投与部位の皮膚反応は報告されなかった。ポストベースラインの血液学および生化学毒性のグレード３または４への移行が、８名の患者で起こった。しかしながら、検査所見、生命徴候、またはＥＣＧ記録には明白な傾向はなかった。全体として、患者の６５．４％は、ベースラインと比較して、治療において同じ最悪のＥＣＯＧパフォーマンスステータスを示した。

表３．薬物に関連した、治療中に発生した有害事象^* (TEAE)

^*国際医学用語集（MedDRA）主要器官クラス系 国際医学用語集 好適用語第13版
^†最初の6週間(用量制限毒性期間)の後にグレード3が生じた。

観察された副作用の例：
（ｉ）６２歳男性が、ＤＩ１７Ｅ６（２５０ｍｇ）の最初の点滴でかつそれのみを受けて１３日後にグレード１の上部消化管出血を経験した。この被験対象は非重篤な吐血をして入院した。胃鏡検査により、食道下部に病変が示された。活発な出血を遮断し、被験対象をオメプラゾールで処置して、この事象は解決した。
（ｉｉ）７９歳の患者が、ＤＩ１７Ｅ６（ＥＭＤ ５２５７９７）（１０００ｍｇ）の最後の点滴の１日後で最初の点滴の９週間後に、フェカリス菌（ｅ．ｆａｅｃａｌｉｓ）による敗血症（グレード２）を発症した。この患者は入院し、回復して退院した。１か月後、この患者は、最後の点滴の４日後で最初の点滴の２．５か月後に、フェカリス菌（ｅ．ｆａｅｃａｌｉｓ）により、再び２回目の敗血症エピソード（グレード３）を発症した。この患者は入院し、回復して退院した。さらに１か月後、この患者は、最後の点滴の４日後で最初の点滴の３．５か月後に、ＥＭＤ ５２５７９７に起因する、３回目の敗血症エピソード（グレード３）を発症した。

要約：
・蓄積した安全性データを４つのＳＭＣすべてで精査した。
・全体として、ＤＬＴは観察されなかった：ＤＬＴは、アレルギー性／過敏性反応および７日以内に可逆的で臨床相関のない任意の範囲外臨床検査値を除いて、研究者および／または治験依頼者により治験薬に関連すると合理的に疑われる、６週目の終わりまでに発生するグレード３または４の任意の血液毒性または非血液毒性として定義される。
・現在までＭＴＤに達してない
・全体として、２つのＳＡＥのみが、試験薬に関連するものとして観察された。

実施例４：薬物動態および薬力学
単回投与および複数回投与の後、ＥＭＤ ５２５７９７は用量依存的で非線形のＰＫプロフィールを示した（図２）。最初の１時間静脈内点滴の後、投与開始後の１〜２時間以内に、ＤＩ１７Ｅ６（ＥＭＤ ５２５７９７）はＣ_maxに概ね到達した。排出半減期は、用量と共に増加するＥＭＤ ５２５７９７クリアランスの結果として、用量と共に増加したが、平均分布容積は、用量範囲全体にわたり一定のままであった（表４）。
図２（表４）に示されるように、コホート２のＣＲＰＣ患者への５００ｍｇ／隔週の投与では、ＩＣ９５の血清レベルに到達したが、２５０ｍｇ／隔週のコホート１の患者では、到達しなかった。５００ｍｇ／隔週のコホート２におけるＥＭＤ ５２５７９７の血清トラフ濃度は、ＩＣ₉₅を上回り、非線形ＣＬ経路のＩＣ₉₉に到達する（２５０ｍｇ／隔週は到達しなかった）。

表４

AUC_T'、1つの完全な投与間隔内の濃度時間曲線下面積；C_max' 最大血清濃度、C_min'血清トラフ濃度；比_AUC、相対的な曲線下面積[AUC_T(投与期間3)/AUC_T(投与期間1)]；比_C_max'、相対的な最大血清濃度[C_max(投与期間3)/C_max(投与期間1)]；t_max’、C_max' に到達する時間；V_ss'、定常状態の見かけの分布容積。

複数回投与の後、最大血清濃度および曝露は、１５００ｍｇでそれぞれ１．３３および１．７０の最大値（投与期間３／投与期間１）まで濃度依存的に累積した。
ほとんどの患者では、ＣＴＣ濃度はベースライン値周辺で安定なままであった（データを示さず）。２名の患者では、ＣＴＣ濃度の相当な減少が、治療の開始後それぞれ１４日目および４２日目ごろに観察された。
抗ＥＭＤ ５２５７９７抗体が、２５名（１６．０％）の評価可能患者のうちの４名に検出された。４名の患者すべてが２５０ｍｇコホートであった；２名の患者は２週間後に血清反応陰性の状態に戻り、１名の患者は経過観察を受けず、１名の患者は試験期間全体を通して血清反応陽性のままであった。

実施例５：末梢循環腫瘍細胞（ＣＴＣ）
ＣｅｌｌＳｅａｒｃｈを使用する末梢循環腫瘍細胞（ＣＴＣ）の評価は、転移性前立腺癌患者の予後因子として食品医薬品局（Ｆｏｏｄ ａｎｄ Ｄｒｕｇ Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ）によって承認されている。ＣＴＣがＣＲＰＣで高頻度に検出され、臨床成績と相関することがいくつかのグループにより示されている（ｄｅ Ｂｏｎｏら．２００８，Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ，Ｓｃｈｅｒら．Ｔｈｅ Ｌａｎｃｅｔ ２００９）。
図１に、末梢循環腫瘍細胞（ＣＴＣ）に対するＤＩ１７Ｅ６の効果を示す。隔週５００ｍｇ投与のコホートの患者番号２００２は、ＣＴＣの減少を示す。他の患者は、ＣＴＣレベルが初めから低く、したがって３回点滴後７週目で顕著な変化はなかった。この効果は、隔週２５０ｍｇのコホート１では観察されなかったが、７名の患者のうち５名において７週目に急激な上昇を観察することができる。

実施例６：骨マーカー
骨吸収は前立腺癌における主要な病的状態の原因である。骨格事象は前立腺癌の進行にとって重要である。骨吸収および骨形成の評価マーカーを本試験で評価した。コホートごとにすべてのマーカーに対して対相関を行ない、コホートＩＩについて潜在的な用量効果を観察した。

骨マーカーは、コホートＩＩではクラスターを形成し、コホートＩでは形成しない。生物学的意味は十分ではないが、これは、ＤＩ−１７Ｅ６による前立腺癌の治療において骨マーカーに関して用量効果があることを示している可能性がある。ＤＩ−１７Ｅ６が骨活性を「正常化」して、その結果、骨吸収マーカーおよび骨形成マーカーが、疾患状態よりも正常状態に近い、よりバランスのとれた形で調節されるという可能性がある。ｍＣＲＰＣでは、多くの場合、骨吸収マーカーが過剰発現されることが示されている。ＤＩ１７Ｅ６投与の文脈の中で観察することができる顕著なバイオマーカーは、ＡＤＡＭＴＳ−１、ＳＴＣ１、ＩＬ６、およびＩＬ８である。
図７で示されるように、２つの用量レベル（２５０ｍｇおよび５００ｍｇ）が比較される。５００ｍｇ用量では、対相関の３つのクラスターが示される（用量レベル２＝５００ｍｇの右の四角の囲い）。

実施例７：ＤＩ１７Ｅ６を用いる治療によるＰＳＡレベルおよび疼痛スコアの変化
図４Ａおよび５Ａに、５００ｍｇ／隔週のＤＩ１７Ｅ６による治療期間中の２名の患者の血清ＰＳＡレベルの変化を示す。
ＰＳＡレベルは、腫瘍増殖に関連し、腫瘍量と正に相関する。ベースラインと比較して、ＰＳＡレベルの５０％を超える低下が、生物応答基準として提案されている。
臨床診療では、ＰＳＡは正確かつ容易に測定される。ほとんどの医師は、患者の健康状態の全般的印象およびＰＳＡキネティクスに基づいて、治療継続について判定する。
５００ｍｇ用量コホートの２名の患者（被験対象２００１および２００２のチャートを参照のこと）が、治療期間中にベースライン値と比較して８分の１未満への低下を示す（図４Ａ、５Ａ）。

表５ スクリーニングから7週目までのすべての患者のPSA値

疼痛障害は簡易疼痛調査票（ＢＰＩ）を使用して評価した。ＢＰＩを使用して下記に対する疼痛障害を評価した：（ａ）一般活動性、（ｂ）気分、（ｃ）歩行能力、（ｄ）通常の仕事、（ｅ）他の人々との関係、（ｆ）睡眠、および（ｇ）生活の楽しみ。疼痛障害に対する合計スコアを以下のように計算した：（回答のある質問の平均スコア）×（７／回答のある質問の数）。４つ以上の質問に回答がない場合は、疼痛障害の合計スコアは不明に設定した。
投与期間中の疼痛スコアの経過を、図４Ｂ、５Ｂに示す。ＤＩ１７Ｅ６による治療期間中、疼痛の軽減がＰＳＡレベルの低下と相関することが、ＰＳＡの経過（図４Ａ、５Ａ）と比較することにより認めることができる。図４Ｂにおける、２７６日目と２９６日目の間の疼痛スコアの上昇は、薬物効果とは無関係な関節痛事象によるものであった。

実施例８：原発腫瘍および軟部組織腫瘍病変（リンパ節）の縮小
骨スキャンおよびコンピュータ断層撮影（ＣＴ）を実施して、安定／応答疾患を検出した。ＰＣＷＧ２およびＲＥＣＩＳＴの基準を使用して、骨またはＣＴスキャンで進行となった被験対象については、治療を中止した。
一部の患者では、原発腫瘍（前立腺）および標的病変（リンパ節）で臨床的に顕著な縮小が認められた。原発および標的病変の両方の縮小を示すＣＴスキャンを図６に示す。

表６ : 患者2001、500mg/q2w、CTスキャンの評価による原発腫瘍および計測可能病変の部分寛解

ＣＴ／ＭＲＩスキャンにより応答を評価し、固形腫瘍の効果判定基準（Ｒｅｓｐｏｎｓｅ Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ Ｃｒｉｔｅｒｉａ ｉｎ Ｓｏｌｉｄ Ｔｕｍｏｒｓ）（ＲＥＣＩＳＴ）に従って記録した。ベースラインでは、少なくとも１方向に病変を正確に測定できることに基づいて、計測可能または計測不能として腫瘍病変を分類する。疾患進行は、測定可能病変の最長径の合計が最下点と比較して少なくとも２０％増加したかまたは新たな病変が出現したとして定義される。
二次効力評価項目は、スクリーニング時および試験全体を通して（ＰＳＡおよび疼痛障害合計スコア）または６週目に（応答評価）、その後、６週を超えて治療を継続する患者に対してそれぞれ４週間または１２週間隔で評価した。

Claims (18)

1. 去勢抵抗性前立腺癌（ＣＲＰＣ）に罹患した患者の治療用医薬の調製のための、抗α_vインテグリン抗体ＤＩ１７Ｅ６の使用であって、前記医薬が、ＤＩ１７Ｅ６の有効用量を患者当たりに500mg〜1000mgの用量の隔週投与として、少なくとも４ヶ月間前記患者に投与するための医薬である、前記使用。
2. 癌が転移している、請求項１に記載の使用。
3. 癌がリンパ節転移を伴っている、請求項２に記載の使用。
4. 癌が骨転移を伴っている、請求項２または３に記載の使用。
5. 前立腺特異抗原（ＰＳＡ）値が、治療の開始前の値と比較して、治療期間中に１０分の１未満に低下する、請求項１〜４のいずれか一項に記載の使用。
6. ＰＳＡ値の低下が治療の４〜６か月以内に達成される、請求項５に記載の使用。
7. 末梢循環腫瘍細胞（ＣＴＣ）の数が治療期間中に低下する、請求項１〜６のいずれか一項に記載の使用。
8. 患者の前立腺が治療前に切除される、請求項１〜７のいずれか一項に記載の使用。
9. 患者が化学療法および／または放射線で前治療されている、請求項１〜８のいずれか一項に記載の使用。
10. 有効用量が単回投与で投与される、請求項１〜９のいずれか一項に記載の使用。
11. 医薬が単独療法として投与される、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の使用。
12. 治療がホルモン剤の逐次的投与または同時投与を含む、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の使用。
13. 治療が、化学療法剤、チロシンキナーゼ阻害剤、および血管新生阻害剤からなる群から選択される細胞増殖抑制性または細胞傷害性薬剤の逐次的投与または同時投与を含む、請求項１〜１０および１２のいずれか一項に記載の使用。
14. 治療が逐次的放射線投与または同時放射線投与を含む、請求項１〜１０および１２〜１３のいずれか一項に記載の使用。
15. 患者のＣＲＰＣが化学療法後に進行性である、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の使用。
16. 患者が、前立腺摘除術または他の前立腺癌関連外科手術または放射線療法の後に治療される、請求項１〜７および９〜１５のいずれか一項に記載の使用。
17. チロシンキナーゼ阻害剤が、抗ＥＧＦＲ抗体、抗Ｈｅｒ２抗体、および抗Ｈｅｒ３抗体からなる群から選択される抗ＥｒｂＢ抗体であり、血管新生阻害剤がアルファ−ｖインテグリン阻害剤である、請求項１３に記載の使用。
18. 癌が骨および／またはリンパ節組織に転移している、請求項１７に記載の使用。

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