CN103330924B - 一种中药活性素的生物提取方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种中药活性素的生物提取方法，以解决现有技术中药活性素提取方法易破坏中药有效成分，且提取剂用量大、提取效率低的问题。一种中药活性素的生物提取方法，包括以下步骤：1）配制仿生胃液；2）配制仿生肠液；3)将中药粉碎并过20-80目筛，得20-80目的中药粉末；4)将所述20-80目的中药粉末加入仿生胃液，发酵12-48h；5)发酵后的药物采用孔径为0.1-10um的微滤膜过滤；6)向微滤透过液中加入仿生肠液，采用所述仿生肠液调节所述透过液的PH为6.8-7.2。本发明方法提取的中药活性素，有效组分提取充分，吸收速度快、有效组分的结构或组成不变。本发明是中药应用领域的重要突破。
Description
技术领域
本发明涉及微生物提取技术领域，特别涉及一种中药活性素的生物提取方法。
背景技术
中药的成分异常复杂，且多种有效成分进入人体后相互配合、协同作用，而后起到治疗疾病的作用。传统的提纯分离技术，如煎煮法、回流、浸渍等，以及现代中药提取分离技术，如超微粉碎技术、超临界萃取技术、逆流动态提取技术、吸附分离纯化技术、膜分离技术等，均沿用纯粹传统的物理或化学手段，与吸收入人体的中药有效成分的协同作用无关，易破坏中药有效成分的结构或组成，难以将中药中含有的有效成分完全提取出来，且提取剂用量大、需反复提取、提取效率低、周期长。
仿生提取法是近几年提出的新方法，它是从生物药剂学的角度，将整体药物研究法与分子药物研究法相结合，模拟口服药物经胃肠道转运吸收的环境，采用活性指导下的导向分离法。该方法不仅能充分发挥中药混合物的综合作用，又能利用单体成分控制中药制剂的质量，有效成分损失少。但是现有仿生提取技术中使用的仿生液仅仅是模仿胃液或肠液的PH值，仿生程度低，有效成分的提取效率以及有效成分的损失依然没有明显改善。
比如，公布号为“CN102266370”的中国发明专利公开了一种杭白菊中抗胃癌活性物质的半仿生提取方法，包括以下步骤：1）将干燥的杭白菊粉碎后过40-60目筛，然后加入PH为2.0-2.2的缓冲液Ⅰ，置于36.5-37.5℃水浴中提取1-2小时；提取结束后过滤，弃去滤液Ⅰ；2）在步骤1）所得滤渣中加PH为7.8-8.2的缓冲液Ⅱ，置于36.5-37.5℃水浴中提取1-2小时；提取结束后，过滤，去滤液Ⅱ；滤液Ⅱ经干燥处理，得杭白菊抗癌提取物。
中药活性素是人或动物通过胃液消化分解再分段排入十二指肠、小肠吸收后通过门静脉到达肝脏，经肝脏分解后通过血液靶向性到达病灶起作用。目前尚没有高效且对有效成分无损害的中药活性素提取方法。
发明内容
本发明的目的在于提供一种中药活性素的生物提取方法，以解决现有技术的中药活性素提取方法，易破坏中药有效成分的结构或组成，难以将中药中含有的有效成分完全提取出来，且提取剂用量大、需反复提取、提取效率低、周期长的问题。
本发明的技术方案是这样实现的：
一种中药活性素的生物提取方法，包括以下步骤：
1)制备仿生胃液：
a.按照重量比或体积比2:1-5:1取浓度为80-120cfu/ml的乳酸杆菌菌液和浓度为80-120cfu/ml的酵母菌菌液，混合得混合菌液；
b.向所述混合菌液中加入氢离子浓度为1-5mol/L的稀盐酸，调节混合液的PH值至0.9-4.0；
c.加入氯化钠固体，调节溶液的密度至1.006-1.009g/ml，以保证所述仿生胃液的渗透压等同于人体胃液；
d.加入营养平衡剂，所述营养平衡剂包括山药粉和黄原胶，所述山药粉和所述黄原胶的浓度均为0.5-2g/100ml；
e.加入胃蛋白酶，所述胃蛋白酶的浓度为0.5-2g/100ml；
f．加入稳定调节剂，所述稳定调节剂包括枸橼酸钠和葡萄糖，所述枸橼酸钠的浓度为1-3g/100ml，所述葡萄糖的浓度为2-4g/100ml；
2)制备仿生肠液：
a．取浓度为80-120cfu/ml的芽孢杆菌菌液；
b．向所述芽孢杆菌菌液中加入磷酸二氢钾固体并使所述磷酸二氢钾固体溶解，所述仿生肠液中所述磷酸二氢钾的浓度为0.5-1.2g/100ml；
c．加入浓度为2.5g/100ml-15g/100ml的胰酶水溶液，所述仿生肠液中所述胰酶的浓度为0.5-10g/100ml；
d．采用浓度为0.05-0.3mol/L的氢氧化钠溶液调节PH至8-10；
3)将中药粉碎并过20-80目筛，得20-80目的中药粉末；
4)将所述20-80目的中药粉末加入所述仿生胃液，30-37℃温度条件下发酵12-48h，所述仿生胃液浸没所述中药粉末；
5)发酵后的药物采用孔径为0.1-10um的微滤膜过滤；
6)向微滤膜过滤后所得的透过液中加入所述仿生肠液，采用所述仿生肠液调节所述透过液的PH为6.8-7.2，得中药活性素提取物母液。
优选的，所述乳酸杆菌为开菲尔乳杆菌，所述酵母菌为酿酒酵母菌。
作为优选，所述仿生胃液中所述山药粉和所述黄原胶的浓度均为0.8-1.2g/100ml、所述胃蛋白酶的浓度为0.8-1.2g/100ml、所述枸橼酸钠的浓度为1.5-2g/100ml、所述葡萄糖的浓度为2.5-3g/100ml。
优选的，所述芽孢杆菌为嗜碱性枯草芽孢杆菌。
作为优选方案，所述仿生肠液中所述磷酸二氢钾的浓度为0.6-1.2g/100ml、所述胰酶的浓度为0.8-1.2g/100ml。
一种所述的中药活性素的生物提取方法得到的中药活性素提取物制备药物的方法，包括以下步骤：
Ⅰ)取所述中药活性素提取物母液；
Ⅱ)向所述中药活性素提取物母液中加入口服液复配制剂，所述中药活性素提取物母液与所述口服液复配制剂的重量比或体积比为1:2-2:1，制得含中药活性素的口服液。
优选的，所述口服液复配制剂包括生物甜味剂、天然维生素E、壳聚糖、纯净水。
一种利用所述的中药活性素的生物提取方法得到的中药活性素提取物制备药物的方法，将所述中药活性素提取物母液负压浓缩并干燥后进行超微粉碎，制成胶囊制剂或粉针剂。
本发明的中药活性素的生物提取方法中：
所述的开菲尔乳杆菌植入开菲尔乳杆菌培养基，在30-37℃、厌氧条件下培养12-48h，配制开菲尔乳杆菌菌液。
开菲尔乳杆菌培养基详情：酪蛋白胨10.0g，牛肉膏10.0g，酵母粉5.0g，葡萄糖5.0g，乙酸钠5.0g，柠檬酸二胺2.0g，Tween801.0g，磷酸氢二钾2.0g，MgSO4.7H2O0.2g，MnSO4.H2O0.05g，CaCO320.0g，琼脂15.0g，蒸馏水1.0L，pH6.8。
所述酿酒酵母菌植入酿酒酵母菌培养基，在25-30℃、厌氧条件下培养12-48h，配制酿酒酵母菌菌液。
酿酒酵母菌培养基详情：5°Bé麦芽汁1.0L，琼脂15.0g，（PH≦7）或自然PH值。
嗜碱性枯草芽孢杆菌植入枯草芽孢杆菌培养基，在30-35℃、有氧条件下培养12-48h，配制嗜碱性芽孢杆菌菌液。
枯草芽孢杆菌培养基详情：氯化钠0.5克，琼脂2克，牛肉膏1克，蛋白胨1克，水100毫升，PH7.2。
本发明的有益效果为：
本发明的中药活性素的生物提取方法，将中药一般性粉碎后，用仿生胃液对中药进行仿生学生物活性发酵，再采用膜分离法进行中药活性素的提取。然后采用仿生肠液将所提取的中药活性素溶液的PH调节6.8-7.2，使活性素溶液呈弱碱性、中性或弱酸性，适合服用，同时仿生肠液调节PH，可以提高中药活性素的吸收速度。
本发明中药活性素的生物提取方法中未使用对中药中的有效成分产生破坏性的手段，所提取的中药活性素有效成分的结构或组成不变；本发明方法对中药的中药活性素的提取率高。另外，采用本发明的中药活性素的生物提取方法所提取的中药活性素不需要胃、肠液消化分解，能够直接进入病灶，提高中药有效成分的吸收速度。
下面结合一临床病例进一步说明本发明：
周某，女，41岁，山东潍坊寒亭区人，2012年11月初诊，胃脘隐痛2年，胃部不舒，近两个月加重，胃痛喜温喜按，偶有呃逆，无泄泻。精神萎靡，四肢怕冷，喜热恶凉，睡觉时两脚怕冷加重。平素血压偏低（105/60mmHg），常觉头晕、眼花。舌质淡红苔中部薄白，边有齿痕，左寸关脉弦细，右关脉沉弦略弱。镜检所见：胃底粘膜粗糙，充血，胃体皱襞排列整齐，粘膜弥漫性充血水肿，密集斑点样糜烂有出血点，胃角形态正常粘膜充血，胃窦粘膜弥漫性充血水肿，散在斑片样糜烂，幽门粘膜充血。结论：非萎缩性胃炎。
采用本发明的中药活性素的生物提取方法制得的药物治疗，具体中药组成是：黄芪22%、当归11%、白芍22%、肉桂7.5%、干姜7.5%、甘草7.5%、海蛸15%、元胡7.5%。经本发明提取方法提取得到微黄色中药活性素液150毫升/瓶，每次50毫升，一日服用三次。服用后即痛疼见轻，共服用10瓶，总计1500毫升。以后患者自述已无胃痛至今。
注意事项：在应用本生物药品时，不得与其它抗生素共同使用。
附图说明
图1为采用本发明的中药活性素的生物提取方法制备含中药活性素药物的工艺流程图。
具体实施方式
下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
本发明的中药活性素的生物提取方法中用到的菌种由中国食品工业发酵研究院提供。
实施例1
如图1所示，本发明的中药活性素的生物提取方法包括以下步骤：
1、制备仿生胃液：
1）将开菲尔乳杆菌植入开菲尔乳杆菌培养基，在36℃、厌氧条件下培养30h，配制开菲尔乳杆菌浓度为106-108cfu/ml的菌液；
开菲尔乳杆菌培养基详情：酪蛋白胨10.0g，牛肉膏10.0g，酵母粉5.0g，葡萄糖5.0g，乙酸钠5.0g，柠檬酸二胺2.0g，Tween801.0g，磷酸氢二钾2.0g，MgSO4.7H2O0.2g，MnSO4.H2O0.05g，CaCO320.0g，琼脂15.0g，蒸馏水1.0L，pH6.8；
2）将酿酒酵母菌植入酿酒酵母菌培养基，在30℃、厌氧条件下培养30h，配制酿酒酵母菌浓度为103-104cfu/ml的菌液；
酿酒酵母菌培养基详情：5°Bé麦芽汁1.0L，琼脂15.0g，自然pH；
3）按照体积比3:1取浓度为106-108cfu/ml的乳酸杆菌菌液和浓度为103-104cfu/ml的酵母菌菌液，混合得混合菌液；
4）向混合菌液中加入氢离子浓度为2.75mol/L的稀盐酸，调节混合液的PH值至1.5；
5）加入氯化钠固体，调节溶液的密度至1.006-1.009g/ml，以保证仿生胃液的渗透压等同于人体胃液；
6）加入山药粉和黄原胶，山药粉和黄原胶的浓度均为1g/100ml，山药粉和黄原胶作为仿生胃液的营养平衡剂；
7）加入胃蛋白酶，胃蛋白酶的浓度为1g/100ml；
8）加入枸橼酸钠和葡萄糖，枸橼酸钠的浓度为2g/100ml，葡萄糖的浓度为3g/100ml，枸橼酸钠和葡萄糖作为仿生胃液的稳定调节剂，制得仿生胃液。
2、制备仿生肠液
1）将嗜碱性枯草芽孢杆菌植入枯草芽孢杆菌培养基，在35℃、有氧条件下培养30h，配制嗜碱性芽孢杆菌浓度为106-108cfu/ml的菌液。
枯草芽孢杆菌培养基详情：氯化钠0.5克，琼脂2克，牛肉膏1克，蛋白胨1克，水100毫升，PH7.2；
2）取嗜碱性芽孢杆菌浓度为106-108cfu/ml的菌液；
3）向芽孢杆菌菌液中加入磷酸二氢钾固体并使磷酸二氢钾固体溶解，仿生肠液中磷酸二氢钾的浓度为0.68g/100ml；
4）加入浓度为2.5g/100ml的胰酶水溶液，仿生肠液中胰酶的浓度为1g/100ml；
5）采用浓度为0.1mol/L的氢氧化钠溶液调节PH至9。
3、取100g中药，按照重量分数计，该中药组成为黄芪22%、当归11%、白芍22%、肉桂7.5%、干姜7.5%、甘草7.5%、海蛸15%、元胡7.5%，粉碎该中药并过40-80目筛。
4、向中药粉末中加入仿生胃液，仿生胃液浸没中药粉末，在37℃下，发酵30h。
5、发酵完成后，将发酵后的药物采用0.1um的微滤膜过滤。
6、向微滤膜过滤后所得的透过液中加入仿生肠液，采用仿生肠液调节PH至6.8-7.2，得中药活性素提取物母液。
7、向中药活性素提取物母液中加入口服液复配制剂，中药活性素提取物母液与口服液复配制剂的体积比为1:1，制得含中药活性素的口服液。其中，口服液复配制剂包括生物甜味剂、天然维生素E、壳聚糖与纯净水，其中生物甜味剂、天然维生素E、壳聚糖的浓度根据需要进行调配。
8、将中药活性素提取物母液负压浓缩并干燥后进行超微粉碎，制成胶囊制剂或粉针剂。
实施例2
如图1所示，本发明的中药活性素的生物提取方法包括以下步骤：
1、制备仿生胃液：
1）将开菲尔乳杆菌植入开菲尔乳杆菌培养基，在37℃、厌氧条件下培养36h，配制开菲尔乳杆菌浓度为80-85cfu/ml的菌液。
开菲尔乳杆菌培养基详情：酪蛋白胨10.0g，牛肉膏10.0g，酵母粉5.0g，葡萄糖5.0g，乙酸钠5.0g，柠檬酸二胺2.0g，Tween801.0g，磷酸氢二钾2.0g，MgSO4.7H2O0.2g，MnSO4.H2O0.05g，CaCO320.0g，琼脂15.0g，蒸馏水1.0L，pH6.8。
2）将酿酒酵母菌植入酿酒酵母菌培养基，在28℃、厌氧条件下培养36h，配制酿酒酵母菌浓度为80-85cfu/ml的菌液。
酿酒酵母菌培养基详情：5°Bé麦芽汁1.0L，琼脂15.0g，自然pH。
3）按照体积比3:1取浓度为80-85cfu/ml的乳酸杆菌菌液和浓度为80-85cfu/ml的酵母菌菌液，混合得混合菌液；
4）向混合菌液中加入氢离子浓度为5mol/L的稀盐酸，调节混合液的PH值至0.9；
5）加入氯化钠固体，调节溶液的密度至1.006-1.009g/ml，以保证仿生胃液的渗透压等同于人体胃液；
6）加入山药粉和黄原胶，山药粉和黄原胶的浓度均为0.5g/100ml，山药粉和黄原胶作为仿生胃液的营养平衡剂；
7）加入胃蛋白酶，胃蛋白酶的浓度为0.5g/100ml；
8）加入枸橼酸钠和葡萄糖，枸橼酸钠的浓度为1g/100ml，葡萄糖的浓度为2g/100ml，枸橼酸钠和葡萄糖作为仿生胃液的稳定调节剂，制得仿生胃液；
2、制备仿生肠液
1）将嗜碱性枯草芽孢杆菌植入枯草芽孢杆菌培养基，在35℃、有氧条件下培养36h，配制嗜碱性芽孢杆菌浓度为80-85cfu/ml的菌液；
枯草芽孢杆菌培养基详情：氯化钠0.5克，琼脂2克，牛肉膏1克，蛋白胨1克，水100毫升，PH7.2；
2）取嗜碱性芽孢杆菌浓度为80-85cfu/ml的菌液；
3）向芽孢杆菌菌液中加入磷酸二氢钾固体并使磷酸二氢钾固体溶解，仿生肠液中磷酸二氢钾的浓度为0.5g/100ml；
4）加入浓度为15g/100ml的胰酶水溶液，仿生肠液中胰酶的浓度为10g/100ml；。
5）采用浓度为0.05mol/L的氢氧化钠溶液调节PH至8。
3、取100g中药，按照重量分数计，该中药组成为黄芪22%、当归11%、白芍22%、肉桂7.5%、干姜7.5%、甘草7.5%、海蛸15%、元胡7.5%，粉碎该中药并过40-80目筛。
4、向中药粉末中加入仿生胃液，仿生胃液浸没中药粉末，在30-37℃发酵12-48h。
5、发酵完成后，将发酵后的药物采用1um的微滤膜过滤。
6、向微滤膜过滤后所得的透过液中加入仿生肠液，采用仿生肠液调节PH至6.8，得中药活性素提取物母液。
7、向中药活性素提取物母液中加入口服液复配制剂，中药活性素提取物母液与口服液复配制剂的重量比或体积比为1:2，制得含中药活性素的口服液。口服液复配制剂包括生物甜味剂、天然维生素E、壳聚糖与纯净水，其中生物甜味剂、天然维生素E、壳聚糖的浓度根据需要进行调配。
8、将中药活性素提取物母液负压浓缩并干燥后进行超微粉碎，制成胶囊制剂或粉针剂。
实施例3
如图1所示，本发明的中药活性素的生物提取方法包括以下步骤：
1、制备仿生胃液：
1）将开菲尔乳杆菌植入开菲尔乳杆菌培养基，在36℃、厌氧条件下培养48h，配制开菲尔乳杆菌浓度为120-125cfu/ml的菌液；
开菲尔乳杆菌培养基详情：酪蛋白胨10.0g，牛肉膏10.0g，酵母粉5.0g，葡萄糖5.0g，乙酸钠5.0g，柠檬酸二胺2.0g，Tween801.0g，磷酸氢二钾2.0g，MgSO4.7H2O0.2g，MnSO4.H2O0.05g，CaCO320.0g，琼脂15.0g，蒸馏水1.0L，pH6.8；
2）将酿酒酵母菌植入酿酒酵母菌培养基，在25℃、厌氧条件下培养48h，配制酿酒酵母菌浓度为120-125cfu/ml的菌液；
酿酒酵母菌培养基详情：5°Bé麦芽汁1.0L，琼脂15.0g，自然pH；
3）按照体积比3:1取浓度为120-125cfu/ml的乳酸杆菌菌液和浓度为120-125cfu/ml的酵母菌菌液，混合得混合菌液；
4）向混合菌液中加入氢离子浓度为1mol/L的稀盐酸，调节混合液的PH值至4；
5）加入氯化钠固体，调节溶液的密度至1.006-1.009g/ml，以保证仿生胃液的渗透压等同于人体胃液；
6）加入山药粉和黄原胶，山药粉和黄原胶的浓度均为2g/100ml，山药粉和黄原胶作为仿生胃液的营养平衡剂；
7）加入胃蛋白酶，胃蛋白酶的浓度为2g/100ml；
8）加入枸橼酸钠和葡萄糖，枸橼酸钠的浓度为3g/100ml，葡萄糖的浓度为4g/100ml，枸橼酸钠和葡萄糖作为仿生胃液的稳定调节剂，制得仿生胃液。
2、制备仿生肠液
1）将嗜碱性枯草芽孢杆菌植入枯草芽孢杆菌培养基，在35℃、有氧条件下培养48h，配制嗜碱性芽孢杆菌浓度为120-125cfu/ml的菌液；
枯草芽孢杆菌培养基详情：氯化钠0.5克，琼脂2克，牛肉膏1克，蛋白胨1克，水100毫升，PH7.2；
2）取嗜碱性芽孢杆菌浓度为120-125cfu/ml的菌液；
3）向芽孢杆菌菌液中加入磷酸二氢钾固体并使磷酸二氢钾固体溶解，仿生肠液中磷酸二氢钾的浓度为1.2g/100ml；
4）加入浓度为2.5g/100ml的胰酶水溶液，仿生肠液中胰酶的浓度为0.5g/100ml；
5）采用浓度为0.05mol/L的氢氧化钠溶液调节PH至8。
3、取100g中药，按照重量分数计，该中药组成为黄芪22%、当归11%、白芍22%、肉桂7.5%、干姜7.5%、甘草7.5%、海蛸15%、元胡7.5%，粉碎该中药并过20-80目筛。
4、向中药粉末中加入仿生胃液，仿生胃液浸没中药粉末，在37℃发酵48h。
5、发酵完成后，将发酵后的药物采用10um的微滤膜过滤。
6、向微滤膜过滤后所得的透过液中加入仿生肠液，采用仿生肠液调节PH至7.2，得中药活性素提取物母液。
7、向中药活性素提取物母液中加入口服液复配制剂，中药活性素提取物母液与口服液复配制剂的重量比或体积比为2:1，制得含中药活性素的口服液。口服液复配制剂包括生物甜味剂、天然维生素E、壳聚糖与纯净水，其中生物甜味剂、天然维生素E、壳聚糖的浓度根据需要进行调配。
8、将中药活性素提取物母液负压浓缩并干燥后进行超微粉碎，制成胶囊制剂或粉针剂。
实施例4
如图1所示，本发明的中药活性素的生物提取方法包括以下步骤：
1、制备仿生胃液：
1）将开菲尔乳杆菌植入开菲尔乳杆菌培养基，在36℃、厌氧条件下培养30h，配制开菲尔乳杆菌浓度为106-108cfu/ml的菌液；
开菲尔乳杆菌培养基详情：酪蛋白胨10.0g，牛肉膏10.0g，酵母粉5.0g，葡萄糖5.0g，乙酸钠5.0g，柠檬酸二胺2.0g，Tween801.0g，磷酸氢二钾2.0g，MgSO4.7H2O0.2g，MnSO4.H2O0.05g，CaCO320.0g，琼脂15.0g，蒸馏水1.0L，pH6.8；
2）将酿酒酵母菌植入酿酒酵母菌培养基，在30℃、厌氧条件下培养30h，配制酿酒酵母菌浓度为103-104cfu/ml的菌液；
酿酒酵母菌培养基详情：5°Bé麦芽汁1.0L，琼脂15.0g，自然pH；
3）按照体积比3:1取浓度为106-108cfu/ml的乳酸杆菌菌液和浓度为103-104cfu/ml的酵母菌菌液，混合得混合菌液；
4）向混合菌液中加入氢离子浓度为2.75mol/L的稀盐酸，调节混合液的PH值至1.5；
5）加入氯化钠固体，调节溶液的密度至1.006-1.009g/ml，以保证仿生胃液的渗透压等同于人体胃液；
6）加入山药粉和黄原胶，山药粉和黄原胶的浓度均为1.5g/100ml，山药粉和黄原胶作为仿生胃液的营养平衡剂；
7）加入胃蛋白酶，胃蛋白酶的浓度为1.5g/100ml；
8）加入枸橼酸钠和葡萄糖，枸橼酸钠的浓度为3g/100ml，葡萄糖的浓度为2g/100ml，枸橼酸钠和葡萄糖作为仿生胃液的稳定调节剂，制得仿生胃液。
2、制备仿生肠液
1）将嗜碱性枯草芽孢杆菌植入枯草芽孢杆菌培养基，在30℃、有氧条件下培养48h，配制嗜碱性芽孢杆菌浓度为106-108cfu/ml的菌液；
枯草芽孢杆菌培养基详情：氯化钠0.5克，琼脂2克，牛肉膏1克，蛋白胨1克，水100毫升，PH7.2；
2）取嗜碱性芽孢杆菌浓度为106-108cfu/ml的菌液；
3）向芽孢杆菌菌液中加入磷酸二氢钾固体并使磷酸二氢钾固体溶解，仿生肠液中磷酸二氢钾的浓度为0.8g/100ml；
4）加入浓度为5g/100ml的胰酶水溶液，仿生肠液中胰酶的浓度为3g/100ml；
5）采用浓度为0.15mol/L的氢氧化钠溶液调节PH至9。
3、取100g中药，按照重量分数计，该中药组成为黄芪22%、当归11%、白芍22%、肉桂7.5%、干姜7.5%、甘草7.5%、海蛸15%、元胡7.5%，粉碎该中药并过40-80目筛。
4、向中药粉末中加入仿生胃液，仿生胃液浸没中药粉末，在37℃发酵48h。
5、发酵完成后，将发酵后的药物采用0.5um的微滤膜过滤。
6、向微滤膜过滤后所得的透过液中加入仿生肠液，采用仿生肠液调节PH至7，得中药活性素提取物母液。
7、向中药活性素提取物母液中加入口服液复配制剂，中药活性素提取物母液与口服液复配制剂的重量比或体积比为3:2，制得含中药活性素的口服液。口服液复配制剂包括生物甜味剂、天然维生素E、壳聚糖与纯净水，其中生物甜味剂、天然维生素E、壳聚糖的浓度根据需要进行调配。
8、将中药活性素提取物母液负压浓缩并干燥后进行超微粉碎，制成胶囊制剂或粉针剂。
实施例5
如图1所示，本发明的中药活性素的生物提取方法包括以下步骤：
1、制备仿生胃液：
1）将开菲尔乳杆菌植入开菲尔乳杆菌培养基，在36℃、厌氧条件下培养30h，配制开菲尔乳杆菌浓度为106-108cfu/ml的菌液；
开菲尔乳杆菌培养基详情：酪蛋白胨10.0g，牛肉膏10.0g，酵母粉5.0g，葡萄糖5.0g，乙酸钠5.0g，柠檬酸二胺2.0g，Tween801.0g，磷酸氢二钾2.0g，MgSO4.7H2O0.2g，MnSO4.H2O0.05g，CaCO320.0g，琼脂15.0g，蒸馏水1.0L，pH6.8；
2）将酿酒酵母菌植入酿酒酵母菌培养基，在30℃、厌氧条件下培养30h，配制酿酒酵母菌浓度为103-104cfu/ml的菌液；
酿酒酵母菌培养基详情：5°Bé麦芽汁1.0L，琼脂15.0g，自然pH；
3）按照体积比2:1取浓度为106-108cfu/ml的乳酸杆菌菌液和浓度为103-104cfu/ml的酵母菌菌液，混合得混合菌液；
4）向混合菌液中加入氢离子浓度为2.75mol/L的稀盐酸，调节混合液的PH值至1.5；
5）加入氯化钠固体，调节溶液的密度至1.006-1.009g/ml，以保证仿生胃液的渗透压等同于人体胃液；
6）加入山药粉和黄原胶，山药粉和黄原胶的浓度均为1g/100ml，山药粉和黄原胶作为仿生胃液的营养平衡剂；
7）加入胃蛋白酶，胃蛋白酶的浓度为1g/100ml；
8）加入枸橼酸钠和葡萄糖，枸橼酸钠的浓度为2g/100ml，葡萄糖的浓度为3g/100ml，枸橼酸钠和葡萄糖作为仿生胃液的稳定调节剂，制得仿生胃液。
2、制备仿生肠液
1）将嗜碱性枯草芽孢杆菌植入枯草芽孢杆菌培养基，在35℃、有氧条件下培养30h，配制嗜碱性芽孢杆菌浓度为106-108cfu/ml的菌液。
枯草芽孢杆菌培养基详情：氯化钠0.5克，琼脂2克，牛肉膏1克，蛋白胨1克，水100毫升，PH7.2；
2）取嗜碱性芽孢杆菌浓度为106-108cfu/ml的菌液；
3）向芽孢杆菌菌液中加入磷酸二氢钾固体并使磷酸二氢钾固体溶解，仿生肠液中磷酸二氢钾的浓度为0.68g/100ml；
4）加入浓度为2.5g/100ml的胰酶水溶液，仿生肠液中胰酶的浓度为1g/100ml；
5）采用浓度为0.1mol/L的氢氧化钠溶液调节PH至9。
3、取100g中药，按照重量分数计，该中药组成为黄芪22%、当归11%、白芍22%、肉桂7.5%、干姜7.5%、甘草7.5%、海蛸15%、元胡7.5%，粉碎该中药并过40-80目筛。
4、向中药粉末中加入仿生胃液，仿生胃液浸没中药粉末，在37℃下，发酵30h。
5、发酵完成后，将发酵后的药物采用0.1um的微滤膜过滤。
6、向微滤膜过滤后所得的透过液中加入仿生肠液，采用仿生肠液调节PH至6.8-7.2，得中药活性素提取物母液。
7、向中药活性素提取物母液中加入口服液复配制剂，中药活性素提取物母液与口服液复配制剂的体积比为1:1，制得含中药活性素的口服液。其中，口服液复配制剂包括生物甜味剂、天然维生素E、壳聚糖与纯净水，其中生物甜味剂、天然维生素E、壳聚糖的浓度根据需要进行调配。
实施例6
如图1所示，本发明的中药活性素的生物提取方法包括以下步骤：
1、制备仿生胃液：
1）将开菲尔乳杆菌植入开菲尔乳杆菌培养基，在36℃、厌氧条件下培养30h，配制开菲尔乳杆菌浓度为106-108cfu/ml的菌液；
开菲尔乳杆菌培养基详情：酪蛋白胨10.0g，牛肉膏10.0g，酵母粉5.0g，葡萄糖5.0g，乙酸钠5.0g，柠檬酸二胺2.0g，Tween801.0g，磷酸氢二钾2.0g，MgSO4.7H2O0.2g，MnSO4.H2O0.05g，CaCO320.0g，琼脂15.0g，蒸馏水1.0L，pH6.8；
2）将酿酒酵母菌植入酿酒酵母菌培养基，在30℃、厌氧条件下培养30h，配制酿酒酵母菌浓度为103-104cfu/ml的菌液；
酿酒酵母菌培养基详情：5°Bé麦芽汁1.0L，琼脂15.0g，自然pH；
3）按照体积比5:1取浓度为106-108cfu/ml的乳酸杆菌菌液和浓度为103-104cfu/ml的酵母菌菌液，混合得混合菌液；
4）向混合菌液中加入氢离子浓度为2.75mol/L的稀盐酸，调节混合液的PH值至1.5；
5）加入氯化钠固体，调节溶液的密度至1.006-1.009g/ml，以保证仿生胃液的渗透压等同于人体胃液；
6）加入山药粉和黄原胶，山药粉和黄原胶的浓度均为1g/100ml，山药粉和黄原胶作为仿生胃液的营养平衡剂；
7）加入胃蛋白酶，胃蛋白酶的浓度为1g/100ml；
8）加入枸橼酸钠和葡萄糖，枸橼酸钠的浓度为2g/100ml，葡萄糖的浓度为3g/100ml，枸橼酸钠和葡萄糖作为仿生胃液的稳定调节剂，制得仿生胃液。
2、制备仿生肠液
1）将嗜碱性枯草芽孢杆菌植入枯草芽孢杆菌培养基，在35℃、有氧条件下培养30h，配制嗜碱性芽孢杆菌浓度为106-108cfu/ml的菌液。
枯草芽孢杆菌培养基详情：氯化钠0.5克，琼脂2克，牛肉膏1克，蛋白胨1克，水100毫升，PH7.2；
2）取嗜碱性芽孢杆菌浓度为106-108cfu/ml的菌液；
3）向芽孢杆菌菌液中加入磷酸二氢钾固体并使磷酸二氢钾固体溶解，仿生肠液中磷酸二氢钾的浓度为0.68g/100ml；
4）加入浓度为2.5g/100ml的胰酶水溶液，仿生肠液中胰酶的浓度为1g/100ml；
5）采用浓度为0.1mol/L的氢氧化钠溶液调节PH至9。
3、取100g中药，按照重量分数计，该中药组成为黄芪22%、当归11%、白芍22%、肉桂7.5%、干姜7.5%、甘草7.5%、海蛸15%、元胡7.5%，粉碎该中药并过40-80目筛。
4、向中药粉末中加入仿生胃液，仿生胃液浸没中药粉末，在37℃下，发酵30h。
5、发酵完成后，将发酵后的药物采用0.1um的微滤膜过滤。
6、向微滤膜过滤后所得的透过液中加入仿生肠液，采用仿生肠液调节PH至6.8-7.2，得中药活性素提取物母液。
7、将中药活性素提取物母液负压浓缩并干燥后进行超微粉碎，制成胶囊制剂或粉针剂。
所述中药可以更换为任意中药，即：任意中药均可采用本发明方法提取其所含的中药活性素。以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (8)
1.一种中药活性素的生物提取方法，其特征在于，包括以下步骤：1)制备仿生胃液：
a.按照重量比或体积比2:1-5:1取浓度为80-120cfu/ml的乳酸杆菌菌液和浓度为80-120cfu/ml的酵母菌菌液，混合得混合菌液；
b.向所述混合菌液中加入氢离子浓度为1-5mol/L的稀盐酸，调节混合液的 pH值至0.9-4.0；
c.加入氯化钠固体，调节溶液的密度至1.006-1.009g/ml，以保证所述仿生胃液的渗透压等同于人体胃液；
d.加入营养平衡剂，所述营养平衡剂包括山药粉和黄原胶，所述山药粉和所述黄原胶的浓度均为0.5-2g/100ml；
e.加入胃蛋白酶，所述胃蛋白酶的浓度为0.5-2g/100ml；
f.加入稳定调节剂，所述稳定调节剂包括枸橼酸钠和葡萄糖，所述枸橼酸钠的浓度为1-3g/100ml，所述葡萄糖的浓度为2-4g/100ml；
2)制备仿生肠液：
a.取浓度为80-120cfu/ml的芽孢杆菌菌液；
b.向所述芽孢杆菌菌液中加入磷酸二氢钾固体并使所述磷酸二氢钾固体溶解，所述仿生肠液中所述磷酸二氢钾的浓度为0.5-1.2g/100ml；
c.加入浓度为2.5g/100ml-15g/100ml的胰酶水溶液，所述仿生肠液中所述胰酶的浓度为0.5-10g/100ml；
d.采用浓度为0.05-0.3mol/L的氢氧化钠溶液调节 pH至8-10；
3)将中药粉碎并过20-80目筛，得20-80目的中药粉末，按照重量百分比计，所述的中药组成为黄芪22％、当归11％、白芍22％、肉桂7.5％、干姜7.5％、甘草7.5％、海蛸15％、元胡7.5％；
4)将所述20-80目的中药粉末加入所述仿生胃液，30-37℃温度条件下发酵12-48h，所述仿生胃液浸没所述中药粉末；
5)发酵后的药物采用孔径为0.1-10um的微滤膜过滤；
6)向微滤膜过滤后所得的透过液中加入所述仿生肠液，采用所述仿生肠液调节所述透过液的pH为6.8-7.2，得中药活性素提取物母液。
2.如权利要求1所述的中药活性素的生物提取方法，其特征在于：所述乳 酸杆菌为开菲尔乳杆菌，所述酵母菌为酿酒酵母菌。
3.如权利要求1所述的中药活性素的生物提取方法，其特征在于：所述仿生胃液中所述山药粉和所述黄原胶的浓度均为0.8-1.2g/100ml、所述胃蛋白酶的浓度为0.8-1.2g/100ml、所述枸橼酸钠的浓度为1.5-2g/100ml、所述葡萄糖的浓度为2.5-3g/100ml。
4.如权利要求1所述的中药活性素的生物提取方法，其特征在于：所述芽孢杆菌为嗜碱性枯草芽孢杆菌。
5.如权利要求1所述的中药活性素的生物提取方法，其特征在于：所述仿生肠液中所述磷酸二氢钾的浓度为0.6-1.2g/100ml、所述胰酶的浓度为0.8-1.2g/100ml。
6.一种利用权利要求1-5任一项所述的中药活性素的生物提取方法得到的中药活性素提取物制备药物的方法，其特征在于，包括以下步骤：Ⅰ)取所述中药活性素提取物母液；Ⅱ)向所述中药活性素提取物母液中加入口服液复配制剂，所述中药活性素提取物母液与所述口服液复配制剂的重量比或体积比为1:2-2:1，制得含中药活性素的口服液。
7.如权利要求6所述的制备药物的方法，其特征在于：所述口服液复配制剂包括生物甜味剂、天然维生素E、壳聚糖和纯净水。
8.一种利用权利要求1-5任一项所述的中药活性素的生物提取方法得到的中药活性素提取物制备药物的方法，其特征在于：将所述中药活性素提取物母液负压浓缩并干燥后进行超微粉碎，制成胶囊制剂或粉针剂。
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