CN106963805A - 一种抗肝癌的中药组合物及其制备方法 - Google Patents

一种抗肝癌的中药组合物及其制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明属于植物提取物领域，具体是一种抗肝癌的中药组合物及其制备方法。该中药组合物包括以下重量份的原料组分：中华卷柏250～400份、人参100～200份、柴胡50～100份、黄芪50～100份。本发明还提供了所述抗肝癌中药组合物的制备方法，将上述原料粉碎后，分别通过酶解辅助提取、超临界CO2萃取、复合酶超声辅助提取从而提取有效成分，所得提取液经浓缩干燥后，混合均匀即得。本发明抗肝癌中药组合物通过中药的合理配伍，具有良好的抗肝癌作用，且制备工艺简单。

Description

一种抗肝癌的中药组合物及其制备方法
技术领域
本发明涉及植物提取领域，具体是一种抗肝癌的中药组合物及其制备方法。
背景技术
癌症，亦称恶性肿瘤，为由控制细胞生长增殖机制失常而引起的疾病。恶性肿瘤发病率逐年上升，已经严重影响到人类的生存。中国是肝癌高发地区，其发病和死亡尤其男性位于世界较高水平，虽然近年其发病和死亡也相对稳定，生存率位于世界较高水平，但仍相对较低。预计未来世界和中国肝癌发病和死亡数将增加，加强肝癌防治已经刻不容缓。目前，随着中药抗肿瘤作用的发现，从中药中寻找开发抗肿瘤药物已经成为热点，吸引了众多研究人员的关注。
中华卷柏(拉丁名:Selaginella sinensis(Desv.)Spring)，是中国特有的一种卷柏科卷柏属植物。中华卷柏的有机成分有双黄酮类化合物，糖苷类、木脂索、有机酸类等，无机成分有Si、Ca、S和K；性淡、微苦，凉；归肝、胆、大肠三经；有清热利尿，清热化痰，止血、止泻之功效；用于湿热，小便不利，淋证，咳嗽、咳痰，外伤出血，痢疾等症。研究发现，中华卷柏提取物能有效的抑制肿瘤生长，表现出良好的抗肿瘤活性。
柴胡是常用解表药，别名地熏、山菜、菇草、柴草，性味苦、微寒，归肝、胆经，有和解表里，疏肝升阳之功效。柴胡主含柴胡皂苷、挥发油、α-菠菜甾醇、多糖等。研究表明，柴胡具有抗炎抗菌、保肝利胆、降血压、抗病毒、抗肿瘤等药理活性，其抗肿瘤活性愈来愈成为人们关注的焦点。
人参，多年生草本植物，喜阴凉、湿润的气候，多生长于昼夜温差小的海拔500～1100米山地缓坡或斜坡地的针阔混交林或杂木林中。由于根部肥大，形若纺锤，常有分叉，全貌颇似人的头、手、足和四肢，故而称为人参。性甘、微苦，平；归肺、脾、心经，有大补元气，补脾益肺，生津，安神益智之功效。人参中含多种人参皂苷、挥发油、氨基酸、微量元素及有机酸、糖类、维生素等成分。具有抗休克作用，人参注射液对失血性休克和急性中毒性休克患者比其他原因引起的休克，效果尤为显著，有抗疲劳，促进蛋白质、RNA、DNA的合成，促进造血系统功能，调节胆固醇代谢等作用，能增强机体免疫功能，能降低血糖。人参还具有抗炎、抗过敏、抗利尿等多种作用。现代研究表明人参还具有良好的抗肿瘤的活性。
黄芪，又称北芪或北蓍，亦作黄耆或黄蓍，常用中药之一，为豆科植物蒙古黄芪或膜荚黄芪的根。黄芪味甘微温。具有补气固表，利尿托毒，排脓，敛疮生肌的功效。用于气虚乏力，食少便溏，中气下陷，久泻脱肛，便血崩漏，表虚自汗，痈疽难溃，久溃不敛，血虚萎黄，内热消渴。现代研究表明，黄芪具有良好的保肝作用，抗肿瘤活性良好。
发明内容
本发明的目的在于克服以上问题的缺陷，提供一种抗肝癌的中药组合物及其制备方法。
本发明的目的可通过如下技术方案实现：
一种抗肝癌的中药组合物，包括以下重量份的原料组分：中华卷柏250～400份、人参100～200份、柴胡50～100份、黄芪50～100份。
优选地，一种抗肝癌的中药组合物，包括以下重量份的原料组分：中华卷柏250份、人参100份、柴胡100份、黄芪50份。
上述一种抗肝癌的中药组合物可以制成任何一种药剂学上的剂型。
上述一种抗肝癌的中药组合物的制备方法，包括以下步骤：
(1)中华卷柏的制备
将250g中华卷柏放入50℃烘箱中干燥24h，取出后磨成细粉，过80目筛，加入2000ml水作为提取溶剂，40℃下超声处理10min后，将复合酶加入到中华卷柏溶液中，在水浴锅中55℃下加热1h，在90℃下灭酶处理10min，过滤，使用severag法去蛋白后将溶液浓缩至原体积的三分之一，冻干即得中华卷柏干燥粉；
(2)人参的制备
取100g人参干粉，使用80％乙醇1000ml浸泡三天，过滤后收集滤液，重复上述操作三次，合并所得滤液，滤液浓缩至原体积的十分之一，石油醚脱脂三次，加去离子水稀释至1000ml，经大孔吸附树脂进一步提取分离，所得乙醇洗脱液再经树脂柱脱色，浓缩至原体积的十分之一，冻干即得人参干燥粉；
(3)柴胡的制备
将100g柴胡取根部，在50℃烘箱中干燥24h，取出后磨成细粉，过20目筛，加入萃取罐中，加入100ml的夹带剂，室温下浸泡10h，使用超临界CO2萃取法制备柴胡的有效成分，萃取压力为30MPa，萃取温度为45℃，CO2流速为12L/h，萃取时间为5h，重复萃取3次，得到的萃取液浓缩至原体积的五分之一，冻干即得柴胡干燥粉；
(4)黄芪的制备
将50g黄芪洗净，适当切片，60℃下干燥至恒质量后粉碎，石油醚脱脂3次，过60目筛，得到黄芪干粉，干粉加入1000ml的80％乙醇作为提取溶剂，在360W的功率下，使用超声细胞破碎机超声40分钟，抽滤后得到黄芪提取液，再浓缩至原体积的十分之一，冻干即得黄芪干燥粉；
(5)组合物的制备
将步骤(1)～(4)中得到的中华卷柏干燥粉、人参干燥粉、柴胡干燥粉、黄芪干燥粉，分别过40目筛后，混合均匀，即得抗肝癌中药组合物。
上述一种抗肝癌的中药组合物的制备方法，步骤(1)中所用复合酶是纤维素酶与酸性蛋白酶按质量比2：1的混合物，所用复合酶的量为中华卷柏粉质量的3％。
上述一种抗肝癌的中药组合物的制备方法，步骤(3)中所使用夹带剂为70％乙醇；
上述抗肝癌中药组合物在制备治疗肝癌的药物和保健品中的应用。
本发明与现有技术相比有如下有益效果：本发明提供了一种新的抗肝癌中药组合物，其制备工艺简单，抗肝癌效果好；本发明通过多种中药的合理配伍，有效的发挥了中华卷柏等的药用效果，起到抗肝癌的作用；通过浸提中药组合物的有效成分，提高了药物的稳定性及生物利用度，有利于药用有效成分的吸收，还可使用常规中药制剂的方法制备成各种剂型。
具体实施方式
以下结合具体实施例对本发明做进一步说明。
实施例1
一种抗肝癌的中药组合物，包括以下重量份的原料组分：中华卷柏300g、人参100g、柴胡80g、黄芪80g。
上述抗肝癌的中药组合物的制备方法，包括以下步骤：
(1)中华卷柏的制备
将300g中华卷柏放入50℃烘箱中干燥24h，取出后磨成细粉，过80目筛，加入2400ml水作为提取溶剂，40℃下超声处理10min后，将6g纤维素酶和3g酸性蛋白酶的混合物加入到中华卷柏溶液中，在水浴锅中55℃下加热1h，在90℃下灭酶处理10min，过滤，使用severag法去蛋白后将溶液浓缩至原体积的三分之一，冻干即得；
(2)人参的制备
取100g人参干粉，使用80％乙醇1000ml浸泡三天，过滤后收集滤液，重复上述操作三次，合并所得滤液，滤液浓缩至原体积的十分之一，石油醚脱脂三次，加去离子水稀释至1000ml，经大孔吸附树脂进一步提取分离，所得乙醇洗脱液再经树脂柱脱色，浓缩至原体积的十分之一，冻干即得；
(3)柴胡的制备
将80g柴胡根部50℃烘箱中干燥24h，取出后磨成细粉，过20目筛，加入萃取罐中，加入100ml的70％乙醇，室温下浸泡10h，使用超临界CO2萃取法制备柴胡的有效成分，萃取压力为30MPa，萃取温度为45℃，CO2流速为12L/h，萃取时间为5h，重复萃取3次，得到的萃取液浓缩至原体积的五分之一，冻干即得；
(4)黄芪的制备
将80g黄芪洗净，适当切片，60℃下干燥至恒质量后粉碎，石油醚脱脂3次，过60目筛，得到黄芪干粉，干粉加入1600ml的80％乙醇作为提取溶剂，在360W的功率下，使用超声细胞破碎机超声40分钟，抽滤后得到黄芪提取液，再浓缩至原体积的十分之一，冻干即得；
(5)组合物的制备
将步骤(1)～(4)中得到的中华卷柏干燥粉、人参干燥粉、柴胡干燥粉、黄芪干燥粉，分别过40目筛后，混合均匀，即得中药组合物。组合物加入适量糊精，混合均匀，用整粒机制成颗粒后，装入胶囊中，制成硬胶囊剂，即得。
实施例2
一种抗肝癌的中药组合物，包括以下重量份的原料组分：中华卷柏300g、人参150g、柴胡100g、黄芪50g。
上述抗肝癌的中药组合物的制备方法，包括以下步骤：
(1)中华卷柏的制备
将300g中华卷柏放入50℃烘箱中干燥24h，取出后磨成细粉，过80目筛，加入2400ml水作为提取溶剂，40℃下超声处理10min后，将6g纤维素酶和3g酸性蛋白酶的混合物加入到中华卷柏溶液中，在水浴锅中55℃下加热1h，在90℃下灭酶处理10min，过滤，使用severag法去蛋白后将溶液浓缩至原体积的三分之一，冻干即得；
(2)人参的制备
取150g人参干粉，使用80％乙醇1500ml浸泡三天，过滤后收集滤液，重复上述操作三次，合并所得滤液，滤液浓缩至原体积的十分之一，石油醚脱脂三次，加去离子水稀释至1500ml，经大孔吸附树脂进一步提取分离，所得乙醇洗脱液再经树脂柱脱色，浓缩至原体积的十分之一，冻干即得；
(3)柴胡的制备
将100g柴胡根部50℃烘箱中干燥24h，取出后磨成细粉，过20目筛，加入萃取罐中，加入200ml的70％乙醇，室温下浸泡10h，使用超临界CO2萃取法制备柴胡的有效成分，萃取压力为30MPa，萃取温度为45℃，CO2流速为12L/h，萃取时间为5h，重复萃取3次，得到的萃取液浓缩至原体积的五分之一，冻干即得；
(4)黄芪的制备
将50g黄芪洗净，适当切片，60℃下干燥至恒质量后粉碎，石油醚脱脂3次，过60目筛，得到黄芪干粉，干粉加入1000ml的80％乙醇作为提取溶剂，在360W的功率下，使用超声细胞破碎机超声40分钟，抽滤后得到黄芪提取液，再浓缩至原体积的十分之一，冻干即得；
(5)组合物的制备
将步骤(1)～(4)中得到的各中药干燥粉，分别过40目筛后，混合均匀，即得中药组合物。组合物加入适量糊精，混合均匀，采用直接压片法压片，制成片剂，即得。
实施例3
一种抗肝癌的中药组合物，包括以下重量份的原料组分：中华卷柏400g、人参100g、柴胡80g、黄芪100g。
上述抗肝癌的中药组合物的制备方法，包括以下步骤：
(1)中华卷柏的制备
将400g中华卷柏放入50℃烘箱中干燥24h，取出后磨成细粉，过80目筛，加入3000ml水作为提取溶剂，40℃下超声处理10min后，将8g纤维素酶和4g酸性蛋白酶的混合物加入到中华卷柏溶液中，在水浴锅中55℃下加热1h，在90℃下灭酶处理10min，过滤，使用severag法去蛋白后将溶液浓缩至原体积的三分之一，冻干即得；
(2)人参的制备
取100g人参干粉，使用80％乙醇1000ml浸泡三天，过滤后收集滤液，重复上述操作三次，合并所得滤液，滤液浓缩至原体积的十分之一，石油醚脱脂三次，加去离子水稀释至1000ml，经大孔吸附树脂进一步提取分离，所得乙醇洗脱液再经树脂柱脱色，浓缩至原体积的十分之一，冻干即得；
(3)柴胡的制备
将80g柴胡根部50℃烘箱中干燥24h，取出后磨成细粉，过20目筛，加入萃取罐中，加入100ml的70％乙醇，室温下浸泡10h，使用超临界CO2萃取法制备柴胡的有效成分，萃取压力为30MPa，萃取温度为45℃，CO2流速为12L/h，萃取时间为5h，重复萃取3次，得到的萃取液浓缩至原体积的五分之一，冻干即得；
(4)黄芪的制备
将100g黄芪洗净，适当切片，60℃下干燥至恒质量后粉碎，石油醚脱脂3次，过60目筛，得到黄芪干粉，干粉加入2000ml的80％乙醇作为提取溶剂，在360W的功率下，使用超声细胞破碎机超声40分钟，抽滤后得到黄芪提取液，再浓缩至原体积的十分之一，冻干即得；
(5)组合物的制备
将步骤(1)～(4)中得到的各中药干燥粉，分别过40目筛后，混合均匀，即得中药组合物。组合物加入适量淀粉，混合均匀，采用直接压片法压片，制成片剂，即得。
动物毒性试验：
1、取实验小鼠120只，雌雄各半，体重140～180g，分别分为三组1～3，每组各40只，每组小鼠体征良好，体重等生理表现无异常，具有可比性。
2、给三组小鼠分别使用本发明实施例1～3制备的抗肝癌中药组合物灌胃给药，每天三次，连续服用一个月，在实验期间观察并记录所有小鼠的体征情况。
3、实验过程中所有小鼠的体征表现无异常，实验结束后未出现小鼠死亡情况，对每组小鼠中随机抽取5只进行解剖检查，主要器官均未发现异常，由实验结果可知，本发明的抗肝癌中药组合物无明显毒性，可安全服药。
本发明中药组合物对人肺癌细胞株A549细胞的增殖抑制作用：
噻唑蓝比色法(MTT)检测细胞生长情况，将A549细胞种于96孔培养板，每个孔细胞数为5×103，培养于RPMI 1640培养液中，在37℃，5％CO2条件下培养24h。之后，以PBS冲洗细胞，然后加入新的RPMI 1640培养液和系列浓度的待测样品。经初步筛选后确定实验组设6个药物浓度组，每组药物的终浓度为2，4，6，8，10mg/ml，对照组加入同样浓度的二甲基亚砜(DMSO)，培养24h。培养结束前4h每孔加入20μl MTT溶液，离心后弃去上清液，加入200μlDMSO充分溶解结晶物，通过酶标仪测定吸光度值。通过吸光度值可以计算对人肺癌细胞株A549细胞的抑制率。
实验数据统计：
实验结果表明，不同浓度的中药组合物对人肺癌细胞株A549细胞均有一定的抑制作用，且与对照组有显著差异，具有良好的药用前景。
肝癌疾病状态的调理改善临床观察统计资料：
1、病例选取：临床上选取确诊的肝癌患者90例，年龄20～80岁，男性60例，女性30例，分为三组实验组1～3，每组30例。
2、实验方法：给实验组1～3分别使用本发明实施例1～3制备的组合物，每日三次，连续服药一个月，观察并记录患者的恢复情况。
3、疗效判定标准：完全缓解：肿瘤消失并持续一个月以上；临床症状痊愈。部分缓解：肿瘤两个最大的相互垂直直径乘积缩小50％以上并持续一个月以上；临床症状痊愈。稳定：肿瘤两个最大的相互垂直直径乘积缩小不足50％，增大不超过25％并持续一个月以上；临床症状痊愈。恶化：肿瘤两个最大的相互垂直直径乘积增大超过25％；临床症状无改善。实验数据统计：
类别 病例数 完全缓解 部分缓解 稳定 恶化 有效率
实施例1 30 0 15 13 2 93.3
实施例2 30 0 16 13 1 96.7
实施例3 30 0 15 12 3 90.0
主要不良反应为消化道反应，三组实验组出现食欲下降、恶心及呕吐分别为1例、3例和2例，三组均未见血液学不良反应。
4、实验结果：由以上实验数据可以看出，本发明制备的抗肝癌中药组合物对于肝癌治疗的总有效率为93.3％，可以提高机体免疫力，显著抑制肿瘤作用，因此说明，本发明的抗肝癌中药组合物是治疗肝癌的安全有效药物，具有很好的临床推广意义。

Claims (7)

1.一种抗肝癌的中药组合物，其特征在于，包括以下重量份的原料组分：中华卷柏250～400份、人参100～200份、柴胡50～100份、黄芪50～100份。
2.如权利要求1所述的一种抗肝癌的中药组合物，其特征在于，包括以下重量份的原料组分：中华卷柏250份、人参100份、柴胡100份、黄芪50份。
3.如权利要求1所述的一种抗肝癌的中药组合物，其特征在于，所述抗肝癌的中药组合物可以制成任何一种药剂学上的剂型。
4.如权利要求2所述的一种抗肝癌的中药组合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)中华卷柏的制备
将250g中华卷柏放入50℃烘箱中干燥24h，取出后磨成细粉，过80目筛，加入2000ml水作为提取溶剂，40℃下超声处理10min后，将复合酶加入到中华卷柏溶液中，在水浴锅中55℃下加热1h，在90℃下灭酶处理10min，过滤，使用severag法去蛋白后将溶液浓缩至原体积的三分之一，冻干即得中华卷柏干燥粉；
(2)人参的制备
取100g人参干粉，使用80％乙醇1000ml浸泡三天，过滤后收集滤液，重复上述操作三次，合并所得滤液，滤液浓缩至原体积的十分之一，石油醚脱脂三次，加去离子水稀释至1000ml，经大孔吸附树脂进一步提取分离，所得乙醇洗脱液再经树脂柱脱色，浓缩至原体积的十分之一，冻干即得人参干燥粉；
(3)柴胡的制备
将100g柴胡取根部，在50℃烘箱中干燥24h，取出后磨成细粉，过20目筛，加入萃取罐中，加入100ml的夹带剂，室温下浸泡10h，使用超临界CO2萃取法制备柴胡的有效成分，萃取压力为30MPa，萃取温度为45℃，CO2流速为12L/h，萃取时间为5h，重复萃取3次，得到的萃取液浓缩至原体积的五分之一，冻干即得柴胡干燥粉；
(4)黄芪的制备
将50g黄芪洗净，适当切片，60℃下干燥至恒质量后粉碎，石油醚脱脂3次，过60目筛，得到黄芪干粉，干粉加入1000ml的80％乙醇作为提取溶剂，在360W的功率下，使用超声细胞破碎机超声40分钟，抽滤后得到黄芪提取液，再浓缩至原体积的十分之一，冻干即得黄芪干燥粉；
(5)组合物的制备
将步骤(1)～(4)中得到的中华卷柏干燥粉、人参干燥粉、柴胡干燥粉、黄芪干燥粉，分别过40目筛后，混合均匀，即得抗肝癌中药组合物。
5.如权利要求4所述的一种抗肝癌的中药组合物的制备方法，其特征在于，步骤(1)中所用复合酶是纤维素酶与酸性蛋白酶按质量比2：1的混合物，所用复合酶的量为中华卷柏粉质量的3％。
6.如权利要求4所述的一种抗肝癌的中药组合物的制备方法，其特征在于，步骤(3)中所使用夹带剂为70％乙醇。
7.如权利要求1～3任一项所述的抗肝癌中药组合物在制备治疗肝癌的药物和保健品中的应用。
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