CN103305532A - 大豆90kDa热激蛋白家族编码基因及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了大豆90kDa热激蛋白家族编码基因及其应用。本发明中公开的大豆90kDa热激蛋白及其编码基因GmHSP90包括12个成员，分别定位于细胞质，内质网，叶绿体以及线粒体。将其中具有代表性的5个基因分别构建的植物过表达载体35S‐GmHSP90‐pEarleyGate103转化拟南芥获得过表达的转基因拟南芥，并且得到mRNA高水平表达，过表达转GmHSP90基因植株表现出了对热胁迫和低温胁迫的耐受性提高，对渗透和干旱胁迫都表现出了一定的抗性，并且还对高浓度的钙离子表现出耐性。表明这类基因可作为目的基因过表达导入植物，提高转基因植物的综合抗性。
Description
技术领域
本发明属于植物基因工程领域，涉及大豆90kDa热激蛋白家族编码基因及其应用。
背景技术
逆境胁迫对作物的产量和品质有着很大的影响，而植物在生长过程中经常面临着各种不同的逆境胁迫如高温，低温和干旱胁迫等，研究一些逆境相关蛋白的功能及作用机制并应用基因工程技术进行育种已经成为提高作物耐逆性的重要方法之一。
热激蛋白Heat Shock Protein（HSP）又称热休克蛋白或应激蛋白，是细胞在应激源（如高温）刺激下所产生的一组蛋白质。90kDa热激蛋白（HSP90）是一类高度保守并且普遍存在于原核生物以及真核生物中的分子伴侣。他的分子量范围是86-92kDa，大多数HSP90定位于细胞质，部分定位于内质网，叶绿体及线粒体中。动物的HSP90被认为是一种逆境敏感蛋白，不仅与热激逆境有关，也与冷逆境等其他逆境相关。在植物中，虽然已有多个物种如拟南芥、玉米、水稻和小麦的HSP90已被克隆，但是他们在非生物逆境中的功能却鲜有报道。对拟南芥中的HSP90进行研究发现，他们对非生物逆境有一定的应答，但是这些基因进行拟南芥过表达之后发现并没有提高拟南芥的耐逆性，因此虽然拟南芥的HSP90基因在非生物逆境中的功能已有部分研究，由于其过表达并没有提高植物的耐逆性，因此无法在植物基因工程中得到有用的应用。
发明内容
本发明的目的是提供大豆90kDa热激蛋白家族及其编码基因与耐逆性基因工程应用，该类蛋白及基因可导入植物，提高植物综合耐逆性，以进行植物品种改良。
技术方案
大豆90kDa热激蛋白家族GmHSP90s的编码基因在通过基因工程手段培育耐逆性植物中的应用，其中所述的大豆90kDa热激蛋白家族包含12个成员，其编码基因分别为SEQ ID NO.1所示的大豆90kDa热激蛋白基因GmHSP90C2.1，SEQ ID NO.2所示的大豆90kDa热激蛋白基因GmHSP90C2.2，SEQ ID NO.3所示的大豆90kDa热激蛋白基因GmHSP90A3，SEQ ID NO.4所示的大豆90kDa热激蛋白基因GmHSP90A4，SEQ ID NO.5所示的大豆90kDa热激蛋白基因GmHSP90A5，SEQ ID NO.6所示的大豆90kDa热激蛋白基因GmHSP90A6，SEQ ID NO.7所示的大豆90kDa热激蛋白基因GmHSP90B1，SEQ ID NO.8所示的大豆90kDa热激蛋白基因GmHSP90B2，SEQ ID NO.9所示的大豆90kDa热激蛋白基因GmHSP90C1.1，SEQ ID NO.10所示的大豆90kDa热激蛋白基因GmHSP90C1.2，SEQ ID NO.11所示的大豆90kDa热激蛋白基因GmHSP90A1，SEQ ID NO.12所示的大豆90kDa热激蛋白基因GmHSP90A2。
大豆90kDa热激蛋白家族GmHSP90s在培育耐逆性植物中的应用，所述的大豆90kDa热激蛋白家族包含12个成员，分别为SEQ ID NO.13所示的大豆90kDa热激蛋白GmHSP90C2.1，SEQ ID NO.14所示的大豆90kDa热激蛋白GmHSP90C2.2，SEQ ID NO.15所示的大豆90kDa热激蛋白GmHSP90A3，SEQ ID NO.16所示的大豆90kDa热激蛋白GmHSP90A4，SEQ ID NO.17所示的大豆90kDa热激蛋白GmHSP90A5，SEQ ID NO.18所示的大豆90kDa热激蛋白GmHSP90A6，SEQID NO.19所示的大豆90kDa热激蛋白GmHSP90B1，SEQ ID NO.20所示的大豆90kDa热激蛋白GmHSP90B2，SEQ ID NO.21所示的大豆90kDa热激蛋白GmHSP90C1.1，SEQ ID NO.22所示的大豆90kDa热激蛋白GmHSP90C1.2，SEQ ID NO.23所示的大豆90kDa热激蛋白GmHSP90A1，SEQ IDNO.24所示的大豆90kDa热激蛋白GmHSP90A2。
大豆90kDa热激蛋白家族GmHSP90s，所述的大豆90kDa热激蛋白家族包含12个成员，分别为SEQ ID NO.13所示的大豆90kDa热激蛋白GmHSP90C2.1，SEQ ID NO.14所示的大豆90kDa热激蛋白GmHSP90C2.2，SEQ ID NO.15所示的大豆90kDa热激蛋白GmHSP90A3，SEQ ID NO.16所示的大豆90kDa热激蛋白GmHSP90A4，SEQ ID NO.17所示的大豆90kDa热激蛋白GmHSP90A5，SEQ ID NO.18所示的大豆90kDa热激蛋白GmHSP90A6，SEQ ID NO.19所示的大豆90kDa热激蛋白GmHSP90B1，SEQ ID NO.20所示的大豆90kDa热激蛋白GmHSP90B2，SEQ ID NO.21所示的大豆90kDa热激蛋白GmHSP90C1.1，SEQ ID NO.22所示的大豆90kDa热激蛋白GmHSP90C1.2，SEQ ID NO.23所示的大豆90kDa热激蛋白GmHSP90A1，SEQ ID NO.24所示的大豆90kDa热激蛋白GmHSP90A2。
大豆90kDa热激蛋白家族GmHSP90s的编码基因，分别为SEQ ID NO.1所示的大豆90kDa热激蛋白基因GmHSP90C2.1，SEQ ID NO.2所示的大豆90kDa热激蛋白基因GmHSP90C2.2，SEQID NO.3所示的大豆90kDa热激蛋白基因GmHSP90A3，SEQ ID NO.4所示的大豆90kDa热激蛋白基因GmHSP90A4，SEQ ID NO.5所示的大豆90kDa热激蛋白基因GmHSP90A5，SEQ ID NO.6所示的大豆90kDa热激蛋白基因GmHSP90A6，SEQ ID NO.7所示的大豆90kDa热激蛋白基因GmHSP90B1，SEQ ID NO.8所示的大豆90kDa热激蛋白基因GmHSP90B2，SEQ ID NO.9所示的大豆90kDa热激蛋白基因GmHSP90C1.1，SEQ ID NO.10所示的大豆90kDa热激蛋白基因GmHSP90C1.2，SEQ ID NO.11所示的大豆90kDa热激蛋白基因GmHSP90A1，SEQ ID NO.12所示的大豆90kDa热激蛋白基因GmHSP90A2。
含有任一所述大豆90kDa热激蛋白家族GmHSP90s编码基因的表达载体。
所述的表达载体为pEarleyGate103-GmHSP90植物过量表达载体。
含有所述大豆90kDa热激蛋白家族GmHSP90s编码基因的宿主菌。
所述的宿主菌是将任一所述的豆90kDa热激蛋白家族GmHSP90s编码基因转入根癌农杆菌菌株EHA105所得。
有益效果
GmHSP90s mRNA表达分析表明其有参与热激的应答。进一步的研究过量表达GmHSP90s的拟南芥在热激，低温胁迫和高浓度钙离子胁迫情况下的表型及生理指标表明，GmHSP90s在提高植物耐热，耐冷和耐高浓度钙离子方面可能发挥了重要的调控作用。本发明公开了该类基因进行植物耐热，耐冷性和耐高浓度钙离子的基因工程改良方法。该方法对培育具有较高耐热，耐冷和耐高浓度钙离子的植物品种具有一定的作用，可以通过提高植物的耐热，耐冷和耐高浓度钙离子进而为提高植物的产量和品质服务。
细胞质GmHSP90s和叶绿体GmHSP90s对盐胁迫和渗透胁迫有应答。进一步的研究过表达细胞质GmHSP90s和叶绿体GmHSP90s的拟南芥在盐胁迫和渗透胁迫下的表型及生理指标表明，细胞质GmHSP90s和叶绿体GmHSP90s在提高植物耐盐和耐旱方面可能发挥了重要的作用。本发明公开了该类基因进行植物耐盐和耐旱性的基因工程改良方法。该方法对培育具有较高耐盐和耐旱型的植物品种具有一定的作用，可以通过提高植物的耐盐性和耐旱性进而为提高植物的产量和品质服务。
细胞质GmHSP90s具有与脯氨酸等渗透保护物质类似功能或者重叠的功能。进一步的研究过表达细胞质GmHSP90s的拟南芥表明，在渗透胁迫条件下，所有植株体内的脯氨酸含量都有了极显著的提升，而转化细胞质GmHSP90基因的拟南芥的脯氨酸增加量明显少于其他植株，但是却具有一定的耐渗透胁迫的能力，以上结果说明细胞质GmHSP90基因具有与脯氨酸等渗透保护物质类似或者重叠的功能，在逆境胁迫下可以替代脯氨酸等渗透胁迫类物质行使功能，使得在逆境胁迫时，无需表达大量的脯氨酸就可以起到一定的耐逆性作用。本发明公开了细胞质GmHSP90s基因进行提高植物渗透胁迫保护特性的基因工程改良方法。该方法对培育具有在各种产生渗透胁迫的逆境情况下培育具有较高具有渗透胁迫保护作用的植物新品种具有一定的作用，可以通过提高植物渗透胁迫保护能力，进而为提高植物的产量和品质服务。
利用植物表达载体将本发明的GmHSP90s导入植物细胞，可获得耐逆性改变的转基因细胞及转基因植株。
使用GmHSP90s构建植物表达载体时，在其转录起始核苷酸前可加上任何一种增强型的启动子或诱导性启动子。为了便于对转基因植物细胞或植物进行鉴定及筛选，可对所用植物表达载体进行加工，如可加入植物中表达的选择性标记基因（GUS基因、GFP基因等）或具有抗性的抗生素标记物（庆大霉素标记物、卡那霉素标记物等）。从转基因植物的安全性考虑，也可不加入任何选择性标记基因，直接以表型筛选转化植株。
携带有本发明的植物表达载体可通过使用Ti质粒、Ri质粒、植物病毒载体、直接DNA转化、显微注射、电导、农杆菌介导等常规生物学方法转化植物细胞或组织，并将转化的植物组织培养成植株。被转化的植物宿主既可以是水稻、小麦、玉米、大麦等单子叶植物，也可以是大豆，棉花，番茄，苜蓿等双子叶植物。
附图说明
图1为胁迫条件下GmHSP90s编码基因在大豆叶片中的表达分析
A图，B图为GmHSP90s基因在热胁迫处理0、0.5、1、3、6、12、24小时时在mRNA水平的实时荧光定量PCR分析。
C图为.GmHSP90A1和GmHSP90A2基因在盐胁迫和渗透胁迫处理0、0.5、1、3、6、12、24小时时在mRNA水平的实时荧光定量PCR分析。
其中，A1表示GmHSP90A1编码基因，A2表示GmHSP90A2编码基因，A3表示GmHSP90A3编码基因，A4表示GmHSP90A4编码基因，A5表示GmHSP90A5编码基因，A6表示GmHSP90A6编码基因，B1表示GmHSP90B1编码基因，B2表示GmHSP90B2编码基因，C1.1表示GmHSP90C1.1编码基因，C1.2表示GmHSP90C1.2编码基因，C2.1表示GmHSP90C2.1编码基因，C2.2，GmHSP90C2.2编码基因。
图2为含有GmHSP90s的植物表达载体示意图
图3为在正常生长条件和胁迫处理下，过表达GmHSP90A2、GmHSP90A4、GmHSP90B1、GmHSP90C1.1和GmHSP90C2.1转基因拟南芥植株生理指标检测。
A图为热胁迫处理下转基因拟南芥叶绿素总含量与正常条件下的比较；
B图为盐胁迫处理下转基因拟南芥鲜重与正常条件下的比较；
C图为渗透胁迫处理下转基因拟南芥脯氨酸含量与正常条件下的比较;
D图为80mMCaCl2处理下转基因拟南芥与转空载拟南芥的植株表型比较。
其中control表示转化空载体pEarleyGate103的拟南芥植株，A2表示GmHSP90A2转基因拟南芥植株，A4表示GmHSP90A4转基因拟南芥植株，B1表示GmHSP90B1转基因拟南芥植株，C1.1表示GmHSP90C1.1转基因拟南芥植株，C2.1表示GmHSP90C2.1转基因拟南芥植株。
具体实施方式
下述实施例中所用方法如无特殊说明，均为本领域的常规方法
1）大豆90kDa热激蛋白编码基因GmHSP90s的克隆
利用已报道的大豆GmHSP90蛋白序列（GmHSP90-1，登录号FJ222390）为种子序列，采用生物信息学方法搜索大豆基因组数据库，找到12条同源性介于44%-95%之间的序列，设计引物，引物序列见表1。
表1GmHSP90s基因克隆引物
应用RT-PCR方法，从大豆品种齐黄22叶片中克隆了GmHSP90s基因。取大豆叶片，用研钵研碎，加入盛有裂解液的1.5ml EP管，充分震荡后抽提总RNA（RNAprep pure Plant Kit，Tiangen,Beijing）。按照日本东洋纺公司提供的反转录试剂盒
qPCR RT Kit(TOYOBO,Japan)进行反转录，得到cDNA第一链后进行PCR扩增，PCR程序如下：94℃预变性5分钟，95℃变性30秒，复兴30秒（温度根据引物而定），72℃延伸2.5分钟，共35个循环，随后72℃保温10分钟，最后12℃恒温。随后进行PCR产物割胶纯化、连接至pMD19-simple载体后将载体转化大肠杆菌感受态细胞DH5α，挑起阳性单克隆测序。编码区序列为SEQ IDNO.1至SEQ ID NO.12所述的DNA序列。
2）大豆GmHSP90s基因的系统命名。
根据前人研究结果及生物信息分析结果，将获得的GmHSP90s基因进行了系统命名。细胞质GmHSP90s基因命名为GmHSP90As，内质网GmHSP90s基因命名为GmHSP90Bs，叶绿体GmHSP90s基因命名为GmHSP90C1s，线粒体GmHSP90s命名为GmHSP90C2s。多拷贝的基因以数字标示。
根据上述系统命名规则，所述的大豆90kDa热激蛋白家族12个成员的命名如表2所示：
表2大豆90kDa热激蛋白家族12个成员的命名
| 序列 | 基因名称 | 蛋白名称 |
| SEQ ID NO.1 | GmHSP90C2.1 | GmHSP90C2.1 |
| SEQ ID NO.2 | GmHSP90C2.2 | GmHSP90C2.2 |
| SEQ ID NO.3 | GmHSP90A3 | GmHSP90A3 |
| SEQ ID NO.4 | GmHSP90A4 | GmHSP90A4 |
| SEQ ID NO.5 | GmHSP90A5 | GmHSP90A5 |
| SEQ ID NO.6 | GmHSP90A6 | GmHSP90A6 |
| SEQ ID NO.7 | GmHSP90B1 | GmHSP90B1 |
| SEQ ID NO.8 | GmHSP90B2 | GmHSP90B2 |
| SEQ ID NO.9 | GmHSP90C1.1 | GmHSP90C1.1 |
| SEQ ID NO.10 | GmHSP90C1.2 | GmHSP90C1.2 |
| SEQ ID NO.11 | GmHSP90A1 | GmHSP90A.1 |
| SEQ ID NO.12 | GmHSP90A2 | GmHSP90A2 |
3）GmHSP90s在大豆不同组织和逆境胁迫下的表达分析
在正常田间生长条件下，取大豆根、茎、叶片、花和花后10天的荚，液氮速冻后于-80℃保存。将人工气候箱培养的3周大的大豆品种齐黄22进行热激（42℃），低温（4℃），干旱（20%PEG）和盐（200mM NaCl）胁迫处理，取样时间分别为处理后0，0.5,1,3,6,12,24小时，液氮速冻后于-80℃保存。
总RNA的提取及cDNA的反转同步骤1）。以大豆组成型表达的β-tublin基因为内部参照，对来自栽培大豆品种齐黄22不同组织的cDNA为模板，进行定量荧光实时定量PCR分析。结果表明，GmHSP90s在叶片中的表达丰度最高。GmHSP90s基因能够受到热激，盐和渗透胁迫的诱导(图1)。但是对低温胁迫没有应答。说明该类基因在逆境胁迫中具有重要的作用。
4）过表达拟南芥的GmHSP90s基因的选择
生物信息分析结果和实时荧光定量PCR分析结果表明同一细胞器中的GmHSP90s基因功能是部分冗余的。其中细胞质GmHSP90A1和GmHSP90A2属于诱导型的HSP90基因，与其余细胞质GmHSP90s基因有差异。根据以上结果，选择GmHSP90A2，GmHSP90A4，GmHSP90B1，GmHSP90C1.1和GmHSP90C2.1进行了进一步基因工程应用的研究。
5）GmHSP90s的基因工程应用
根据GmHSP90s的cDNA序列，设计扩增出完整编码开放阅读框（ORF）的引物，并在引物中引入接头引物，引物序列见表3，利用Invitrogen公司的gateway技术进行载体构建。将完整的GmHSP90s基因ORF插入到Invitrogen公司开发的表达载体-pEarleyGate103中,构建完成植物过表达载体35S-GmHSP90-GFP-pEarleyGate103（图2）。将其和空载分别通过冻融法转入根癌农杆菌EHA105，然后通过农杆菌介导的浸花法转入拟南芥。对获得的阳性植株进行PCR，以及半定量PCR引物和具体PCR步骤同步骤1）。验证后将纯和至T3代的拟南芥进行植物的耐逆性评价。
表3GmHSP90s载体构建引物
在2cm×2cm的穴盘中种植纯合的转GmHSP90s基因及空载的拟南芥，拟南芥种植于人工气候箱，温度22/20℃，光周期16/8h(昼/夜)。将2周的幼苗分别进行盐胁迫（150mM NaCl），渗透胁迫（8%PEG），热胁迫(30℃)，低温胁迫（4℃），钙离子胁迫（80mM CaCl2）处理。结果表明，在热胁迫过程中，过表达GmHSP90s基因的拟南芥植株都表现出了抗性，虽然转基因植株的结荚率和鲜重与正常情况相比有一定比例的下降，但是空载植株的下降程度远高于转基因植株，对这些植株叶片的叶绿素含量进行测定发现，空载植株的叶绿素含量明显低于正常情况下的生长，而过表达GmHSP90基因的转基因拟南芥植株则没有显著差异（图3A），以上结果说明过表达GmHSP90s基因的拟南芥植株具有一定的耐热性。在盐胁迫时，细胞质GmHSP90A基因和叶绿体GmHSP90C1基因都对盐胁迫表现出了一定的抗性，通过测定过表达GmHSP90s的拟南芥植株和空载植株在盐胁迫和正常条件下的鲜重发现，过表达细胞质GmHSP90A基因和叶绿体GmHSP90C1基因的转基因拟南芥植株鲜重都明显增加，而空载拟南芥植株的鲜重则显著下降（图3B）。在渗透胁迫条件下，所有植株体内的脯氨酸含量都有了极显著的提升，而细胞质GmHSP90A基因的脯氨酸增加量明显少于其他植株（图3C），但是却具有一定的抵抗渗透胁迫的能力，说明细胞质GmHSP90A基因具有与脯氨酸等渗透保护物质类似或者重叠的功能，在逆境胁迫下可以替代脯氨酸等渗透胁迫类物质行使功能，使得在逆境胁迫时，无需表达大量的脯氨酸就可以起到一定的耐逆性作用。在钙离子胁迫条件下，转空载的拟南芥植株表现出了植株发黄，变矮，结荚率严重降低的表型，而转基因植株则表现出了极强的抗性（图3D）,说明了转基因转基因拟南芥对高浓度的钙离子有抗性。因此我们认为GmHSP90s在植物耐逆性方面发挥了重要的作用。利用GmHSP90s基因获得的具有一定耐逆性的新材料可用作于植物的育种应用。
Claims (8)
1.大豆90kDa热激蛋白家族GmHSP90s的编码基因在通过基因工程手段培育耐逆性植物中的应用，其中所述的大豆90kDa热激蛋白家族包含12个成员，其编码基因分别为SEQ ID NO.1所示的大豆90kDa热激蛋白基因GmHSP90C2.1，SEQ ID NO.2所示的大豆90kDa热激蛋白基因GmHSP90C2.2，SEQ ID NO.3所示的大豆90kDa热激蛋白基因GmHSP90A3，SEQ ID NO.4所示的大豆90kDa热激蛋白基因GmHSP90A4，SEQ ID NO.5所示的大豆90kDa热激蛋白基因GmHSP90A5，SEQ ID NO.6所示的大豆90kDa热激蛋白基因GmHSP90A6，SEQ ID NO.7所示的大豆90kDa热激蛋白基因GmHSP90B1，SEQ ID NO.8所示的大豆90kDa热激蛋白基因GmHSP90B2，SEQ ID NO.9所示的大豆90kDa热激蛋白基因GmHSP90C1.1，SEQ ID NO.10所示的大豆90kDa热激蛋白基因GmHSP90C1.2，SEQ ID NO.11所示的大豆90kDa热激蛋白基因GmHSP90A1，SEQ ID NO.12所示的大豆90kDa热激蛋白基因GmHSP90A2。
2.大豆90kDa热激蛋白家族GmHSP90s在培育耐逆性植物中的应用，所述的大豆90kDa热激蛋白家族包含12个成员，分别为SEQ ID NO.13所示的大豆90kDa热激蛋白GmHSP90C2.1，SEQ ID NO.14所示的大豆90kDa热激蛋白GmHSP90C2.2，SEQ ID NO.15所示的大豆90kDa热激蛋白GmHSP90A3，SEQ ID NO.16所示的大豆90kDa热激蛋白GmHSP90A4，SEQ ID NO.17所示的大豆90kDa热激蛋白GmHSP90A5，SEQ ID NO.18所示的大豆90kDa热激蛋白GmHSP90A6，SEQ ID NO.19所示的大豆90kDa热激蛋白GmHSP90B1，SEQ ID NO.20所示的大豆90kDa热激蛋白GmHSP90B2，SEQ ID NO.21所示的大豆90kDa热激蛋白GmHSP90C1.1，SEQ ID NO.22所示的大豆90kDa热激蛋白GmHSP90C1.2，SEQ ID NO.23所示的大豆90kDa热激蛋白GmHSP90A1，SEQ ID NO.24所示的大豆90kDa热激蛋白GmHSP90A2。
3.大豆90kDa热激蛋白家族GmHSP90s，其特征在于所述的大豆90kDa热激蛋白家族包含12个成员，分别为SEQ ID NO.13所示的大豆90kDa热激蛋白GmHSP90C2.1，SEQ ID NO.14所示的大豆90kDa热激蛋白GmHSP90C2.2，SEQ ID NO.15所示的大豆90kDa热激蛋白GmHSP90A3，SEQ ID NO.16所示的大豆90kDa热激蛋白GmHSP90A4，SEQ ID NO.17所示的大豆90kDa热激蛋白GmHSP90A5，SEQ ID NO.18所示的大豆90kDa热激蛋白GmHSP90A6，SEQ ID NO.19所示的大豆90kDa热激蛋白GmHSP90B1，SEQ ID NO.20所示的大豆90kDa热激蛋白GmHSP90B2，SEQ ID NO.21所示的大豆90kDa热激蛋白GmHSP90C1.1，SEQ ID NO.22所示的大豆90kDa热激蛋白GmHSP90C1.2，SEQ ID NO.23所示的大豆90kDa热激蛋白GmHSP90A1，SEQ ID NO.24所示的大豆90kDa热激蛋白GmHSP90A2。
4.大豆90kDa热激蛋白家族GmHSP90s的编码基因，其特征在于所述的大豆90kDa热激蛋白家族包含12个成员，其编码基因分别为SEQ ID NO.1所示的大豆90kDa热激蛋白基因GmHSP90C2.1，SEQ ID NO.2所示的大豆90kDa热激蛋白基因GmHSP90C2.2，SEQ ID NO.3所示的大豆90kDa热激蛋白基因GmHSP90A3，SEQ ID NO.4所示的大豆90kDa热激蛋白基因GmHSP90A4，SEQ ID NO.5所示的大豆90kDa热激蛋白基因GmHSP90A5，SEQ ID NO.6所示的大豆90kDa热激蛋白基因GmHSP90A6，SEQ ID NO.7所示的大豆90kDa热激蛋白基因GmHSP90B1，SEQ ID NO.8所示的大豆90kDa热激蛋白基因GmHSP90B2，SEQ ID NO.9所示的大豆90kDa热激蛋白基因GmHSP90C1.1，SEQ ID NO.10所示的大豆90kDa热激蛋白基因GmHSP90C1.2，SEQ ID NO.11所示的大豆90kDa热激蛋白基因GmHSP90A1，SEQ ID NO.12所示的大豆90kDa热激蛋白基因GmHSP90A2。
5.含有任一权利要求4所述大豆90kDa热激蛋白家族GmHSP90s编码基因的表达载体。
6.根据权利要求5所述的表达载体，其特征在于所述的表达载体为pEarleyGate103-GmHSP90植物过量表达载体。
7.含有任一权利要求4所述大豆90kDa热激蛋白家族GmHSP90s编码基因的宿主菌。
8.根据权利要求7所述的宿主菌，其特征在于所述的宿主菌是将任一所述的豆90kDa热激蛋白家族GmHSP90s编码基因转入根癌农杆菌菌株EHA105所得。
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