CN103271969A - 一种用于跌打损伤的中药组合物及其制备方法和质量控制方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种用于跌打损伤的中药组合物及其制备方法和质量控制方法，该中药组合物是由三七、川芎、白芷、当归、土鳖虫、红花共六味中药制备而成；该药具有活血止痛、去瘀生新的功效；主要用于跌打损伤，筋骨瘀血肿痛，风湿麻木。本发明工艺先进，有效成分含量高，其临床药效学试验效果显著，生物利用度高，且无任何毒副作用。

Description

一种用于跌打损伤的中药组合物及其制备方法和质量控制方法

技术领域

本发明涉及一种用于跌打损伤的中药组合物及其制备方法和质量控制方法，属于制药技术领域。

技术背景

跌打损伤、筋骨瘀血肿痛、风湿麻木是临床中比较常见和多发的一种骨科疾病，临床治疗比较困难；目前临床上使用的中成药也较多，但大多疗效不理想。现有技术：部颁标准《中药成方制剂》第二十册WS3-B-4028-98项下跌打红药片是一种纯中药制剂，本发明人经过多年临床实践，发现由以上工艺制成的中成药，存在工艺较粗，制成的制剂不稳定，有效成分含量低等缺陷，在实际应用的过程中疗效不够理想。在近几年的时间里，我们通过发掘祖国丰富的中药资源，结合大量的中医理论及临床药效学研究，应用现代制药技术对该产品工艺作出重大改进，通过大量的实验摸索，意外的发现将原工艺“红花、土鳖虫用60％乙醇回流提取三次”改为“红花、土鳖虫用75％-85％乙醇回流提取三次”后，用此工艺制成的制剂，有效成分含量高，制剂稳定性好，疗效显著，临床药效学试验效果显著提高，且患者长期服用无任何毒副作用。我们按常规工艺制成了片剂。

发明内容

本发明的目的是提供一种工艺先进，有效成分含量高，制剂稳定性好，疗效更为显著的一种用于跌打损伤的中药组合物及其制备方法和质量控制方法。此制剂具有活血止痛、去瘀生新的功效；主要用于跌打损伤，筋骨瘀血肿痛，风湿麻木。

现有技术：部颁标准《中药成方制剂》第二十册WS3-B-4028-98项下跌打红药片是一种纯中药制剂，本发明人经过多年临床实践，发现由以上工艺制成的中成药，存在工艺较粗，制成的制剂不稳定，有效成分含量低等缺陷，在实际应用的过程中疗效不够理想。为克服现有技术存在的缺陷，申请人通过大量的中医理论及临床药效学研究，应用现代制药技术对该产品工艺作出重大改进，通过大量的实验摸索，意外的发现将原工艺“红花、土鳖虫用60％乙醇回流提取三次”改为“红花、土鳖虫用75％-85％乙醇回流提取三次”后，用此工艺制成的制剂，有效成分含量高，制剂稳定性好，疗效显著，临床药效学试验效果显著提高，且患者长期服用无任何毒副作用。我们按常规工艺制成了片剂。

本发明是这样构成的：它主要是由如下重量配比的六味中药材经加工制成的片剂；

1、本发明片剂：

三七  101.4g 川芎    23.6g  白芷  23.6g

当归  23.6g  土鳖虫  23.6g  红花  23.6g；

制备方法为：以上六味，三七、川芎、白芷、当归分别粉碎成细粉，过100目筛，备用；红花、土鳖虫用75％-85％乙醇回流提取三次，第一次加3.5倍量，提取6小时，第二次加2.5倍量，提取4小时，第三次加2倍量，提取2小时，合并乙醇提取液，浓缩成稠膏状，加入三七等细粉及淀粉适量，混匀，制粒，干燥，压制成1000片，即得片剂。

2、本发明片剂：

三七  101.4g 川芎    23.6g  白芷  23.6g

当归  23.6g  土鳖虫  23.6g  红花  23.6g；

制备方法为：以上六味，三七、川芎、白芷、当归分别粉碎成细粉，过100目筛，备用；红花、土鳖虫用80％乙醇回流提取三次，第一次加3.5倍量，提取6小时，第二次加2.5倍量，提取4小时，第三次加2倍量，提取2小时，合并乙醇提取液，浓缩成稠膏状，加入三七等细粉及淀粉适量，混匀，制粒，干燥，压制成1000片，即得片剂。

本发明的质量控制方法如下：

定性检测方法：

a、取本品5片，除去糖衣，研细，加水数滴使湿润，再加水饱和的正丁醇15ml，振摇10分钟，密塞，静置2小时，滤过，取滤液加3倍量正丁醇饱和的水，摇匀，放置分层，取正丁醇液，蒸干，残渣甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取三七皂苷R1对照品、人参皂苷Rb1对照品、人参皂苷Rg1对照品适量，分别加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典2005年版一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取上述四种溶液各10μl，分别点于同一羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以比例为15∶40∶22∶10的三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色的斑点；置365nm紫外光灯下检视，显相同的荧光斑点；

b、取本品6片，除去糖衣，研细，加乙醚10ml，浸泡1小时，时时振摇，滤过，滤液挥干乙醚，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液；另取白芷对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液；照中国药典2005年版一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以比例为3∶2的30～60℃石油醚-乙醚为展开剂，在25℃以下展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

c、取本品6片，除去糖衣，研细，加80％丙酮溶液10ml，密塞，振摇15分钟，静置，吸取上清液，作为供试品溶液；另取红花对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液；照中国药典2005年版一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液10μl，分别点于同一羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶H薄层板上，以比例为7∶2∶3∶0.4的乙酸乙酯-甲酸-水-甲醇为展开剂，展开，取出，晾干；供试品色谱中，在与对照品药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

定量检测方法：

色谱条件与系统适用性试验  以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以比例为17∶83的乙腈-0.085％磷酸溶液为流动相；检测波长为316nm；柱温35℃；理论板数按阿魏酸峰计算，应不低于5000；

对照品溶液的制备  取阿魏酸对照品适量，精密称定，置棕色量瓶中，用70％甲醇溶液制成每1ml含10μg的溶液，摇匀，即得；

供试品溶液的制备  取本品20片，除去糖衣，精密称定，研细，取相当于6片的量细粉适量，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70％甲醇20ml，密塞，称定重量，加热回流30分钟，放冷，再称定重量，用70％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

测定法  分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；

本品每片含当归与川芎以阿魏酸C₁₀H₁₀O₄计，不得少于30μg。

主要药效学试验

一、药物：

本发明跌打红药片组：按照本发明说明书实施例1的方法制得。

a组：按照部颁标准《中药成方制剂》第二十册WS3-B-4028-98项下跌打红药片处方工艺制得，具体如下：

处方：

三七  101.4g 红花  23.6g  当归    23.6g

川芎  23.6g  白芷  23.6g  土鳖虫  23.6g

制备方法：

以上六味，三七、川芎、白芷、当归分别粉碎成细粉，备用。红花、土鳖虫用60％乙醇回流提取三次，第一次加3.5倍，提取6小时，第二次加2.5倍，提取4小时，第三次加2倍，提取2小时，合并乙醇提取液，浓缩成稠膏状，加入三七等细粉及辅料混匀，制成颗粒，干燥，压制成1000片，包糖衣，即得。

二、：试验过程及试验结果

实验目的：通过对本发明跌打红药片和a组的抗炎、镇痛、活血化瘀、对软组织损伤的保护等作用的药理实验研究，将本发明跌打红药片与a组进行对比，观察其药理作用的强弱。

试验方法：本发明跌打红药片组和a组对巴豆油诱导小鼠耳廓肿胀的影响；对大鼠棉球肉芽肿的影响；小鼠光热致痛的影响；对醋酸所致小鼠扭体反应的影响；对家兔眼结膜微循环的影响；对大鼠急性软组织损伤的影响。

一、对巴豆油诱导小鼠耳廓肿胀的影响

实验材料

1、动物：昆明种小鼠，雌雄兼有，体重18～22g。

2、药物：a组；本发明跌打红药片大、中、小三个剂量组。药物在实验前用蒸馏水配置，灌胃给药。

实验方法

昆明种小鼠50只，雌雄各半，体重18～22g，随机分成5组，每组10只。对照组灌胃同体积的蒸馏水；a组灌胃给药0.4g生药/kg；本发明跌打红药片大、中、小剂量组分别灌胃给药为0.4g、0.2g、0.1g生药/kg。连续给药7d，每日1次，末次给药1h后，将当日现配的巴豆油合剂0.05ml涂于小鼠右耳廓前后两面致炎，左耳涂等量生理盐水作为对照用，2h后将小鼠乙醚麻醉处死，沿耳廓线剪下两耳，用直径8mm的角膜环钻在左右耳廓的同一部位切下耳片，分别精确称重，两耳片重量之差作为肿胀度。实验结果：见表1

表1  对巴豆油诱导小鼠耳廓肿胀的影响

与对照组相比＊＊P＜0.01；与a组比△P＜0.05。

结果表明：本发明跌打红药片组和a组可显著减轻由巴豆油诱导小鼠耳廓的肿胀，与对照组相比较有极显著性差异(P＜0.01)；本发明跌打红药片大剂量组与a组相比较有显著性差异(P＜0.05)。可见，本发明跌打红药片比a组抗急性炎症作用强。

二、对大鼠棉球肉芽肿的影响

实验材料

1、动物：SD种大鼠，雌雄兼有，体重180～220g。

2、药物：a组；本发明跌打红药片大、中、小三个剂量组。药物在实验前用蒸馏水配置，灌胃给药。

实验方法

SD种大鼠50只，雌雄各半，体重180～220g，随机分为5组，每组10只。试验时，乙醚浅麻醉，剪除大鼠胸毛，碘酒消毒，切开胸部皮肤，从切口向两前肢腋下分别塞入20mg无菌棉球各一个(高压灭菌后用青链霉素混合液0.2ml浸泡并烘干)，缝合皮肤，肌注青、链酶素抗感染。术后1h灌胃给药，对照组灌胃同体积的蒸馏水；a组灌胃给药0.28g生药/kg；本发明跌打红药片大、中、小剂量组分别灌胃给药为0.28g、0.14g、0.07g生药/kg。连续给药7d，每日1次，于第8d颈椎脱臼处死大鼠，剥离棉球肉芽组织，于70℃烘箱内烘干后，称量。将称得的重量减去棉球重量即得肉芽肿重量。实验结果：见表2

表2  对大鼠棉球肉芽肿的影响

与对照组相比＊＊P＜0.01；与a组比△P＜0.05。

结果表明：本发明跌打红药片组和a组对棉球引起大鼠的肉芽肿有明显的抑制作用，与对照组相比有极显著性差异(P＜0.01)；本发明跌打红药片大剂量组与a组相比较有显著性差异(P＜0.05)。可见，本发明跌打红药片比a组抗慢性炎症作用强。

三、对小鼠光热致痛的影响

实验材料

1、动物：昆明种小鼠，雌雄兼有，体重18～22g。

2、药物：a组；本发明跌打红药片大、中、小三个剂量组。药物在实验前用蒸馏水配置，灌胃给药。

实验方法

试验前先用75％乙醇擦净鼠尾，以尾部下1/3处作为光刺激点，测定小鼠该处甩尾反应的潜伏期作为痛阈值。先测定小鼠给药前的基础痛阈值，基础痛阈值小于2s或大于10s的反应过敏或迟钝动物剔除。筛选后的小鼠50只，雌雄各半，随机分成5组，每组10只。对照组灌胃同体积的蒸馏水；a组灌胃给药0.4g生药/kg；本发明跌打红药片大、中、小剂量组分别灌胃给药为0.4g、0.2g、0.1g生药/kg。连续给药7d，每日1次，末次给药1h后，将小鼠进行光热刺激，痛阈值大于15s时停止刺激，以免烫伤皮肤。记录给药后出现甩尾反应的时间，用药后的痛阈值减去用药前痛阈值作为差值。实验结果：见表3

表3  对小鼠光热致痛的影响

与对照组相比＊＊P＜0.01；与a组比△P＜0.05。

结果表明：本发明跌打红药片组和a组可显著提高光热致痛小鼠的痛阈值，与对照组相比有极显著性差异(P＜0.01)；本发明跌打红药片大剂量组与a组相比较有显著性差异(P＜0.05)。可见，本发明跌打红药片比a组的镇痛作用强。

四、对醋酸所致小鼠扭体反应的影响

实验材料

1、动物：昆明种小鼠，雌雄兼有，体重18～22g。

2、药物：a组；本发明跌打红药片大、中、小三个剂量组。药物在实验前用蒸馏水配置，灌胃给药。

实验方法

昆明小鼠50只，雌雄各半，体重18～22g，随机分成5组，每组10只。对照组灌胃同体积的蒸馏水；a组灌胃给药0.4g生药/kg；本发明跌打红药片大、中、小剂量组分别灌胃给药为0.4g、0.2g、0.1g生药/kg。连续给药7d，每日1次，末次给药1h后，每鼠均腹腔注射0.5％醋酸0.2ml/只，小鼠出现腹部内凹，躯干与后肢伸张，臀部高起等扭体反应，记录15min内小鼠扭体次数。实验结果：见表4

表4  对醋酸所致小鼠扭体反应的影响

与对照组相比＊＊P＜0.01；与a组比△P＜0.05。

结果表明：本发明跌打红药片组和a组可显著减少小鼠由冰醋酸引起疼痛扭体的次数，与对照组相比有极显著性的差异(P＜0.01)；本发明跌打红药片大剂量组与a组相比较有显著性差异(P＜0.05)。可见，本发明跌打红药片比a组的镇痛作用强。

五、对家兔眼结膜微循环的影响

实验材料

1、动物：家兔，雌雄兼有，体重1.8～2.2kg。

2、药物：a组；本发明跌打红药片大、中、小三个剂量组。药物在实验前用蒸馏水配置，灌胃给药。

实验方法

采用家兔眼结膜微血管荧光测定法。家兔50只，雌雄各半，体重1.8～2.2kg，随机分成5组，每组10只。对照组灌胃同体积的蒸馏水；a组灌胃给药0.12g生药/kg；本发明跌打红药片大、中、小剂量组分别灌胃给药为0.12g、0.06g、0.03g生药/kg。连续给药7d，每日1次，每次15ml/kg，于末次给药后1h，耳静脉注射10％的荧光素纳生理盐水溶液1ml/kg(相当于荧光素100mg/kg)，记录兔眼结膜出现荧光的时间。实验结果：见表5

表5  对家兔眼结膜微循环的影响

与对照组相比＊＊P＜0.01；与a组比△P＜0.05。

结果表明：本发明跌打红药片组和a组明显加速家兔眼结膜微循环血流，促进血液循环，与对照组相比有极显著性差异(P＜0.01)；本发明跌打红药片大剂量组与a组相比较有显著性差异(P＜0.05)。可见，本发明跌打红药片比a组活血化瘀的作用强。

六、对大鼠急性软组织损伤的影响

实验材料

1、动物：SD种大鼠，雌雄兼有，体重180～220g。

2、药物：a组；本发明跌打红药片大、中、小三个剂量组。药物在实验前用蒸馏水配置，灌胃给药。

实验方法

在大鼠右后肢外侧局部区面积约2cm×2cm，经脱毛后次日，将大鼠固定在木板上，取一内径为1.5cm，长100cm的PVC空心管垂直置于大鼠右后肢外侧软组织上，然后把一根重80g的钝头铁杵从上而下自由落体冲击大鼠右后肢外侧软组织连续3次，造成面积约4cm²有明显皮下出血及肿胀的非开放性软组织损伤模型，操作时尽可能使每只大鼠的损伤部位相近。将按上法制成组织损伤模型的SD种大鼠50只，雌雄各半，体重180～220g，随机分成5组，每组10只。对照组灌胃同体积的蒸馏水；a组灌胃给药0.28g生药/kg；本发明跌打红药片大、中、小剂量组分别灌胃给药为0.28g、0.14g、0.07g生药/kg。连续给药7d，每日1次，末次给药1h后，用软尺测量右肢损伤部位与左肢同一部位周长之差，作为肿胀度数值。实验结果：见表6

表6  对大鼠急性软组织损伤的影响

与对照组相比＊＊P＜0.01；与a组比△P＜0.05。

结果表明：本发明跌打红药片组和a组对打击所致大鼠急性软组织肿胀具有明显的减轻作用，与对照组相比有极显著性差异(P＜0.01)；本发明跌打红药片大剂量组与a组相比较有显著性差异(P＜0.05)。可见，本发明跌打红药片比a组对急性软组织损伤的保护强。

实验结果：本发明跌打红药片组和a组可显著减轻由巴豆油诱导小鼠耳廓的肿胀；对棉球引起大鼠的肉芽肿有明显的抑制作用；可显著提高光热致痛小鼠的痛阈值；可显著减少小鼠由冰醋酸引起疼痛扭体的次数；明显加速家兔眼结膜微循环血流，促进血液循环；对打击所致大鼠急性软组织肿胀具有明显的减轻作用。

结论：本发明跌打红药片比a组的抗炎、镇痛、活血化瘀、对软组织损伤的保护等药理作用强，因此，本发明跌打红药片比a组用于治疗活血止痛，去瘀生新的临床疗效好。

毒理实验：

急性毒性实验结果表明：将本发明跌打红药片组最大浓度、最大容积灌胃给药，在24h内连续给药3次，每次间隔4h，累积药物总量达4g生药/kg，相当于临床拟用量的273.5倍。给药后7d内，小鼠活动、进食、排泄均正常，生长良好，毛色光亮，其平均体重均随试验时间的延长而增加。第8d处死后解剖每只小鼠肉眼观察心、肝、脾、肺、肾、脑、胸腺、子宫、胃、肠等均未发现颜色及形态异常，未能测出LD₅₀。表明本发明跌打红药片组无急性毒性反应。

长期毒性实验结果表明：本发明跌打红药片组分为低、中、高剂量分别为0.5、1.0、2.0g生药/kg/d，相当于临床剂量的34.2、68.4、136.7倍，灌胃给药12周后，本发明跌打红药片组对动物的一般状况、血液学指标、血液生化指标均无明显的影响，系统解剖、脏器系数及组织病理学检查也未发现异常病理改变。停药2周也未见明显改变。本发明跌打红药片组在长期毒性试验中，未发现明显毒性反应和延迟毒性反应。可见，本发明跌打红药片组无毒性反应，长期用药安全可靠。

具体实施方式

1、本发明片剂：

三七  101.4g 川芎    23.6g  白芷  23.6g

当归  23.6g  土鳖虫  23.6g  红花  23.6g；

制备方法为：以上六味，三七、川芎、白芷、当归分别粉碎成细粉，过100目筛，备用；红花、土鳖虫用80％乙醇回流提取三次，第一次加3.5倍量，提取6小时，第二次加2.5倍量，提取4小时，第三次加2倍量，提取2小时，合并乙醇提取液，浓缩成稠膏状，加入三七等细粉及淀粉适量，混匀，制粒，干燥，压制成1000片，即得片剂。

2、本发明片剂：

三七  101.4g 川芎    23.6g  白芷  23.6g

当归  23.6g  土鳖虫  23.6g  红花  23.6g；

制备方法为：以上六味，三七、川芎、白芷、当归分别粉碎成细粉，过100目筛，备用；红花、土鳖虫用75％乙醇回流提取三次，第一次加3.5倍量，提取6小时，第二次加2.5倍量，提取4小时，第三次加2倍量，提取2小时，合并乙醇提取液，浓缩成稠膏状，加入三七等细粉及淀粉适量，混匀，制粒，干燥，压制成1000片，即得片剂。

3、本发明片剂：

三七  101.4g 川芎    23.6g  白芷  23.6g

当归  23.6g  土鳖虫  23.6g  红花  23.6g；

制备方法为：以上六味，三七、川芎、白芷、当归分别粉碎成细粉，过100目筛，备用；红花、土鳖虫用85％乙醇回流提取三次，第一次加3.5倍量，提取6小时，第二次加2.5倍量，提取4小时，第三次加2倍量，提取2小时，合并乙醇提取液，浓缩成稠膏状，加入三七等细粉及淀粉适量，混匀，制粒，干燥，压制成1000片，即得片剂。

Claims (4)

1.一种用于跌打损伤的中药组合物的制备方法，其特征在于所述中药组合物的原料药重量配比为：

三七  101.4g 川芎    23.6g  白芷  23.6g

当归  23.6g  土鳖虫  23.6g  红花  23.6g；

制备方法为：以上六味，三七、川芎、白芷、当归分别粉碎成细粉，过100目筛，备用；红花、土鳖虫用75％-85％乙醇回流提取三次，第一次加3.5倍量，提取6小时，第二次加2.5倍量，提取4小时，第三次加2倍量，提取2小时，合并乙醇提取液，浓缩成稠膏状，加入三七等细粉及淀粉适量，混匀，制粒，干燥，压制成1000片，即得片剂。

2.根据权利要求1所述的中药组合物的制备方法，其特征在于所述中药组合物的原料药重量配比为：

三七  101.4g 川芎    23.6g  白芷  23.6g

当归  23.6g  土鳖虫  23.6g  红花  23.6g；

制备方法为：以上六味，三七、川芎、白芷、当归分别粉碎成细粉，过100目筛，备用；红花、土鳖虫用80％乙醇回流提取三次，第一次加3.5倍量，提取6小时，第二次加2.5倍量，提取4小时，第三次加2倍量，提取2小时，合并乙醇提取液，浓缩成稠膏状，加入三七等细粉及淀粉适量，混匀，制粒，干燥，压制成1000片，即得片剂。

3.根据权利要求1或2所述中药组合物的定性检测方法，其特征在于包括如下步骤：

a、取本品5片，除去糖衣，研细，加水数滴使湿润，再加水饱和的正丁醇15ml，振摇10分钟，密塞，静置2小时，滤过，取滤液加3倍量正丁醇饱和的水，摇匀，放置分层，取正丁醇液，蒸干，残渣甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取三七皂苷R1对照品、人参皂苷Rb1对照品、人参皂苷Rg1对照品适量，分别加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典2005年版一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取上述四种溶液各10μl，分别点于同一羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以比例为15∶40∶22∶10的三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色的斑点；置365nm紫外光灯下检视，显相同的荧光斑点；

b、取本品6片，除去糖衣，研细，加乙醚10ml，浸泡1小时，时时振摇，滤过，滤液挥干乙醚，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液；另取白芷对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液；照中国药典2005年版一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以比例为3∶2的30～60℃石油醚-乙醚为展开剂，在25℃以下展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

c、取本品6片，除去糖衣，研细，加80％丙酮溶液10ml，密塞，振摇15分钟，静置，吸取上清液，作为供试品溶液；另取红花对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液；照中国药典2005年版一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液10μl，分别点于同一羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶H薄层板上，以比例为7∶2∶3∶0.4的乙酸乙酯-甲酸-水-甲醇为展开剂，展开，取出，晾干；供试品色谱中，在与对照品药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

4.根据权利要求1或2所述中药组合物的定量检测方法，其特征在于包括如下步骤：

色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以比例为17∶83的乙腈-0.085％磷酸溶液为流动相；检测波长为316nm；柱温35℃；理论板数按阿魏酸峰计算，应不低于5000；

对照品溶液的制备取阿魏酸对照品适量，精密称定，置棕色量瓶中，用70％甲醇溶液制成每1ml含10μg的溶液，摇匀，即得；

供试品溶液的制备取本品20片，除去糖衣，精密称定，研细，取相当于6片的量细粉适量，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70％甲醇20ml，密塞，称定重量，加热回流30分钟，放冷，再称定重量，用70％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；

本品每片含当归与川芎以阿魏酸C₁₀H₁₀O₄计，不得少于30μg。