CN103261413B - 三剂并用抗癌剂感受性判定标记 - Google Patents

三剂并用抗癌剂感受性判定标记 Download PDF

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Abstract

本发明提供能够判别各个患者的治疗反应性的抗癌剂感受性判定标记和利用该抗癌剂感受性判定标记的新的癌治疗方法。一种抗癌剂感受性判定标记，该抗癌剂包括奥沙利铂或其盐、氟尿嘧啶或其盐和左亚叶酸或其盐，所述抗癌剂感受性判定标记包含选自ALAD基因、C20orf43基因、CABLES1基因、CDC14B基因、GDA基因、HOXB6基因、RPL7AP27基因、TMEM18基因和UGT2B10基因中的1种以上的基因。

Description

三剂并用抗癌剂感受性判定标记
技术领域
本发明涉及用于判定作为对象的患者的癌对抗癌剂是否具有治疗反应性而使用的抗癌剂感受性判定标记及其应用。
背景技术
抗癌剂中包括烷基化剂、铂制剂、代谢拮抗剂、抗癌性抗生素、抗癌性植物生物碱等种类。这些抗癌剂中，根据癌的种类不同，有时显示效果，有时不显示效果。但是，已知即使是认为有效的种类的癌，也因各个患者而异有时显示效果，有时不显示效果。这种抗癌剂对于各个患者的癌是否显示效果称为抗癌剂感受性。
奥沙利铂（L-OHP）是铂配位化合物类抗恶性肿瘤药。据认为，其作用机理与其他的铂配位化合物类抗恶性肿瘤药顺铂（CDDP）和卡铂（CBDCA）同样，通过与DNA碱基形成交联而导致DNA合成抑制、蛋白合成抑制，但奥沙利铂（L-OHP）即使对于CDDP和CBDCA无效的大肠癌而言也表现出抗肿瘤效果，表现出和以往的铂配位化合物类抗恶性肿瘤药不同的抗肿瘤谱。美国已经在2004年1月承认其与氟尿嘧啶（5-FU）／左亚叶酸盐（LV）的并用作为转移性结肠-直肠癌的第一线治疗，在日本，在2005年4月在国民健康保险的药价中也收载了对于“不能切除治愈的晚期、复发的结肠-直肠癌”，其与LV和5-FU的静脉内持续给药法的并用（FOLFOX4法）。对于晚期复发大肠癌的治疗而言，在二十世纪90年代前半叶之前一直采用的5-FU／LV疗法的生存率是10～12个月，与此相对，加入了L-OHP的FOLFOX疗法的生存期为19.5个月，达到几乎2倍。进而，在2009年8月，作为效能-效果同样追加了与5-FU／LV的静脉内持续给药法的并用的“结肠癌的术后辅助化学疗法”，是在大肠癌患者中能够扩大使用和期待有益性的药剂。
5-FU是1957年开发的氟化嘧啶类抗癌剂，现在是消化器官癌的化学疗法的基本药剂。进入癌细胞的5-FU通过下述作用机理发挥杀细胞效果，即，主要通过活性代谢物一磷酸氟代脱氧尿苷（fluorodeoxyuridine-5’-monophosphate，FdUMP）引起胸苷酸合酶（thymidylate synthase，TS）抑制，从而引起DNA合成抑制，此外，通过作为相同的活性代谢物的5-氟尿苷三磷酸（5-fluorouridinetriphosphate，FUTP）引起RNA功能抑制等。
对晚期-转移大肠癌的化学疗法，通过并用二十世纪90年代登场的伊立替康（CPT-11）、L-OHP等关键药物（key drug）和当时作为大肠癌治疗的中心药剂的以5-FU为中心的氟化嘧啶制剂，能够戏剧般的改善以生存率为首的临床成绩，但是现状是治疗有效的患者为大约一半左右，冒着很重的副作用这种高风险投与抗癌剂的患者，有一半是无效的。在提供癌化学疗法中最适宜治疗时，确立判别个体的治疗反应性（反应-无反应）的抗癌剂感受性预测标记是当务之急。
一般而言，癌化学疗法的疗程需要经过长期的时间，在出现副作用的同时反复若干次疗程进行治疗后，才能判断是否获得效果、是否应该继续原来的给药，但事实上，在此之前已经花费了长时间和高额医疗费，而且也产生了副作用。因此，如果存在对于各个患者在治疗早期可以预测是否能够得到效果的手段，就能够减轻患者的负担和副作用的产生，削减医疗费。
在以晚期大肠癌患者为对象的化学疗法的治疗反应性生物标记相关的大规模前瞻性临床试验（FOCUS Trial）的报告中，作为5-FU／L-OHP并用疗法的效果预测因子，只有Topoisomerase-1（Topo1）显示了弱关联（非专利文献1）。因此，尚未确立可靠预测对5-FU／L-OHP并用疗法具有感受性的患者的方法，确立能够进行L-OHP／5-FU／LV三剂并用的FOLFOX疗法的效果预测或者治疗反应性的早期诊断的生物标记是当务之急。
现有技术文献
非专利文献
非专利文献1：J Clin Oncol2008;26:2690-2698.
发明内容
发明要解决的课题
本发明的课题在于提供一种能够判别各个患者的治疗反应性的抗癌剂感受性判定标记和利用该抗癌剂感受性判定标记的新的癌治疗方法。
用于解决课题的方法
为此，本发明的发明人使用接受氟尿嘧啶、左亚叶酸和奥沙利铂并用治疗的癌症患者的癌组织，网罗性分析其基因表达和治疗的感受性，确定了认为与感受性相关的9个基因，其中发现5个基因特别有用。基于上述见解进一步进行研究，结果发现，如果测定来自癌症患者机体的试样中的该基因的表达量，就能够判定该癌症患者的癌对抗癌剂是否具有感受性，此外，通过将该基因的表达量代入特定的计算式，就能够计算出抗癌剂的感受性，具体而言，能够计算出最佳肿瘤缩小效果（比）。此外，如果将该基因的表达变化作为指标，就能够进行抗癌剂感受性增强剂的筛选，如果并用该感受性增强剂和作为感受性增强对象的抗癌剂，就能够大幅度提升该抗癌剂的治疗效果，由此，完成了本发明。
即，本发明提供一种抗癌剂感受性判定标记，该抗癌剂包括奥沙利铂或其盐、氟尿嘧啶或其盐和左亚叶酸或其盐，所述抗癌剂感受性判定标记包含选自ALAD基因、C20orf43基因、CABLES1基因、CDC14B基因、GDA基因、HOXB6基因、RPL7AP27基因、TMEM18基因和UGT2B10基因中的1种以上的基因。
此外，本发明提供上述的判定标记，其中，基因为ALAD基因、C20orf43基因、GDA基因、TMEM18基因和UGT2B10基因。
此外，本发明提供上述的判定标记，其是预测最佳肿瘤缩小效果（比）的标记。
此外，本发明提供一种抗癌剂感受性判定方法，该抗癌剂包括奥沙利铂或其盐、氟尿嘧啶或其盐和左亚叶酸或其盐，所述抗癌剂感受性判定方法的特征在于，测定检体中的选自ALAD基因、C20orf43基因、CABLES1基因、CDC14B基因、GDA基因、HOXB6基因、RPL7AP27基因、TMEM18基因和UGT2B10基因中的1种以上的基因的表达量。
此外，本发明提供上述的判定方法，其中，测定表达量的基因测定表达量的基因是ALAD基因、C20orf43基因、GDA基因、TMEM18基因和UGT2B10基因。
此外，本发明提供提供上述的判定方法，其中，由下式（1）计算最佳肿瘤缩小效果（比），
最佳肿瘤缩小效果（比）＝0.37664＋96.360×A－8.5128×B＋42.420×C＋26.810×D＋747.00×E……（1）
（式中，A为ALAD基因的表达量，B为C20orf43基因的表达量，C为GDA基因的表达量，D为TMEM18基因的表达量，E为UGT2B10基因的表达量。）
此外，本发明提供一种用于实施上述判定方法的试剂盒，其特征在于，包括用于测定检体中的选自ALAD基因、C20orf43基因、CABLES1基因、CDC14B基因、GDA基因、HOXB6基因、RPL7AP27基因、TMEM18基因和UGT2B10基因中的1种以上的基因的表达量的方案。
此外，本发明提供一种针对抗癌剂的感受性增强剂的筛选方法，该抗癌剂包括奥沙利铂或其盐、氟尿嘧啶或其盐和左亚叶酸或其盐，所述筛选方法的特征在于，以检体中的选自ALAD基因、C20orf43基因、CABLES1基因、CDC14B基因、GDA基因、HOXB6基因、RPL7AP27基因、TMEM18基因和UGT2B10基因中的1种以上的基因的表达变化作为指标。
本发明还提供一种由上述筛选方法得到的针对抗癌剂的感受性增强剂，该抗癌剂包括奥沙利铂或其盐、氟尿嘧啶或其盐和左亚叶酸或其盐。
本发明还提供一种癌治疗用组合物，其包含上述感受性增强剂、和包括奥沙利铂或其盐、氟尿嘧啶或其盐和左亚叶酸或其盐的抗癌剂。
发明的效果
如果使用本发明的抗癌剂感受性判定标记，就能够在抗癌剂给药前或抗癌剂给药开始后早期准确判定各个患者的抗癌剂感受性，从而能够选择治疗效果更高的抗癌剂，作为其结果，能够防止不能得到治疗效果的抗癌剂的继续给药所导致的癌进展、副作用增大，还能够有助于减轻患者的负担，减少医疗费。而且，如果使用该标记，就能够筛选增强抗癌剂感受性的药剂，如果将作为其对象的抗癌剂与抗癌剂感受性增强剂并用，就能够飞跃性地提高癌治疗效果。
附图说明
图1是表示使用本发明的5个基因的表达量的L-OHP／5-FU／LV三剂并用给药带来的最佳肿瘤缩小效果（比）的预测式和其预测性的有用性的图。
具体实施方式
本发明的抗癌剂感受性判定标记是选自ALAD基因、C20orf43基因、CABLES1基因、CDC14B基因、GDA基因、HOXB6基因、RPL7AP27基因、TMEM18基因和UGT2B10基因中的1种以上的基因。本发明的基因是通过使用接受氟尿嘧啶、左亚叶酸和奥沙利铂并用治疗的癌症患者的癌组织进行网罗性基因表达量分析结果的相关分析而认为与抗癌剂的感受性相关的基因，其中，ALAD基因、C20orf43基因、GDA基因、TMEM18基因和UGT2B10基因这5个基因特别有用，使用该5个基因能够预测作为对象的癌症患者的最佳肿瘤缩小效果（比）。
这里，ALAD基因是指表达GenBank登录号NM_000031所示的碱基序列的mRNA的基因及其同源物，
C20orf43基因是指表达GenBank登录号NM_016407所示的碱基序列的mRNA的基因及其同源物，
CABLES1基因是指表达GenBank登录号NM_138375所示的碱基序列的mRNA的基因及其同源物，
CDC14B基因是指表达GenBank登录号NM_033331所示的碱基序列的mRNA的基因及其同源物，
GDA基因是指表达GenBank登录号NM_004293所示的碱基序列的mRNA的基因及其同源物，
HOXB6基因是指表达GenBank登录号NM_018952所示的碱基序列的mRNA的基因及其同源物，
RPL7AP27基因是指表达Enterz Gene ID152663所示的基因及其同源物，
TMEM18基因是指表达GenBank登录号NM_152834所示的碱基序列的mRNA的基因及其同源物，
UGT2B10基因是指表达GenBank登录号NM_001075所示的碱基序列的mRNA的基因及其同源物，
此外，基因不限于双链DNA，也包括构成该基因的正义链和反义链的各单链DNA，其长度不受任何限制。作为核酸（多核苷酸），可以示例RNA、DNA，DNA可以举出cDNA、基因组DNA、合成DNA，RNA可以举出mRNA、rRNA、siRNA。这里，多核苷酸也包括由多个碱基序列构成的寡核苷酸。
此外，本发明中的抗癌剂感受性判定方法能够通过测定检体中的选自上述9个基因中的1个以上的基因的表达量而进行。上述9个基因中，ALAD基因、C20orf43基因、GDA基因、TMEM18基因和UGT2B10基因这5个基因特别有用，测定检体中的这5个基因的表达量，使用其表达量，由式（1）计算最佳肿瘤缩小效果（比），能够判定作为对象的患者对抗癌剂的感受性。
具体而言，通过多元回归分析（文献名：Shimokuni T等，“Chemosensitivity prediction in esophageal squamous cell carcinoma：novel marker genes and efficacy-prediction formulae using their expressiondata.”Int J Oncol2006.5.）分析癌症患者的癌组织检体中各基因的表达量与各患者的最佳肿瘤缩小效果（比），明确了代入ALAD基因、C20orf43基因、GDA基因、TMEM18基因和UGT2B10基因这5个基因的表达量的式（1）与最佳肿瘤缩小效果（比）具有非常高的相关性。因此，通过测定检体中的上述5个基因的表达量，代入下式（1），就能够判定抗癌剂的感受性，具体而言，能够预测最佳肿瘤缩小效果（比）。
最佳肿瘤缩小效果（比）＝0.37664＋96.360×A－8.5128×B＋42.420×C＋26.810×D＋747.00×E……（1）
（式中，A为ALAD基因表达量，B为C20orf43基因表达量，C为GDA基因表达量，D为TMEM18基因表达量，E为UGT2B10基因表达量）
使用本发明的对抗癌剂的感受性判定标记判定感受性时，测定检体中上述9个基因的表达量即可。这里，作为检体，可以举出来自患有癌的被验者（癌症患者）机体的试样，例如，血液、血清、血浆、尿、肿瘤组织-细胞、腹水、胸水、脑脊液、便、痰等，特别优选肿瘤组织。检体也能够通过适宜公知的方法处理而作为组织提取液、组织标本等使用。
另外，作为本发明对象的癌，可以列举以喉癌为代表的口唇、口腔和喉癌、以食道癌、胃癌、结肠-直肠癌等为代表的消化器官癌、以肺癌为代表的呼吸器官和胸腔内脏器官癌、骨及关节软骨癌、皮肤的恶性黑色素瘤、鳞状细胞癌及其它皮肤癌、以间皮瘤为代表的间皮和软组织癌、以乳腺癌、子宫癌、卵巢癌为代表的女性性器官癌、以前列腺癌为代表的男性性器官癌、以膀胱癌为代表的尿路癌、以脑肿瘤为代表的眼、脑和中枢神经系统癌、甲状腺和其它内分泌腺癌，以非何杰金氏淋巴瘤和淋巴细胞性白血病为代表的淋巴组织、造血组织和关联组织癌、以及以这些癌为原发病灶的转移组织的癌等，但特别是能够对结肠-直肠癌（大肠癌）适宜地利用，特别优选化学疗法未治愈的癌。
基因表达量的测定能够使用可以检测本发明的基因或来自基因的mRNA的探针或引物，用RNA印记杂交法、DNA微阵列、实时PCR法、RT-PCR法等测定作为标的的基因的拷贝数或表达量而进行。此外，作为测定对象，也可以例举由该基因编码的多肽，只要是反应基因的表达量的，就没有特别限定，但是优选将来自该基因的mRNA作为测定对象。这里，基因的表达量的测定也包括确认基因的表达的有无。
这里，对PCR法进行说明。当使用mRNA作为测定对象时，根据需要对检体进行以过滤、离心分离、色谱法等公知的方法进行的前处理，之后，例如能够使用异硫氰酸胍-氯化铯超速离心法、酸-异硫氰酸胍-苯酚-氯仿法（AGPC法）、磁珠法、二氧化硅柱法等通用的方法从检体中提取RNA。此外，也能够使用市售的试剂盒（QIAGEN RNeasyKIt、TRIZOL等）提取RNA。
mRNA的测定例如能够通过下述方法进行，即，（1）使用可以与目的mRNA特异性杂交的核酸片段和来自检体的RNA，通过PCR法求出扩增产物量的方法，（2）求出与目的mRNA特异性杂交的核酸片段与来自检体的RNA的杂交效率的方法，或者（3）通过使用其他公知方法的定量方法而求出的方法。
这里，当使用PCR法时，“可以与目的mRNA特异性杂交的核酸片段”的设计能够通过比较目的基因具有的碱基序列和其他基因具有的碱基序列，选择目的基因的mRNA中特异的序列而进行。这里，目的基因的mRNA的碱基序列例如能够通过参考数据库（GenBank等）而获得。此外，能够用软件（Clustal X等）对碱基序列进行比对，以目测等方法找出特异性的序列。该核酸片段的长度没有特别限定，优选为5～50个碱基构成的核酸片段，更优选18～25个连续的碱基构成的核酸片段。
作为可以与目的基因的mRNA杂交的核酸片段，并不限于这样设计的序列，只要遵照公知的技术常识，则能够使用适当设想的序列，也能够使用与该碱基序列互补的碱基序列或能够在目的基因的mRNA的测定中同样使用的相同的碱基序列，例如，a）该碱基序列中的1到10个、优选1或者多个碱基取代、添加或者缺失的碱基序列、b）与该碱基序列具有90%以上、优选95%以上、更优选99%以上的同一性的碱基序列、c）与由与该碱基序列互补的碱基序列构成的DNA在严格的条件下杂交的碱基序列构成的核酸片段等。
此外，这样的核酸片段可以为其两端或单端、优选在5’端添加任意数目、优选100个、更优选20个、更加优选10个以下的碱基的核酸片段。
这样设计的核酸片段，例如能够按照其碱基序列通过DNA合成机人工合成。作为该片断，优选合成后确认其特异性的片断，这里，作为特异性的确认，例如在以目的mRNA为模板的情况下，能够通过与适当的对照相比较，确认得到特异的PCR扩增产物而进行。
作为这样的核酸片段，例如，如果为ALAD基因，可以举出由GenBank登录号NM_000031的碱基序列的一部分或者与其互补的碱基序列构成的核酸片段、或者由与它们相同的碱基序列构成并且功能上等价的核酸片段。这里，由与它们相同的碱基序列构成并且功能上等价的核酸片段，可以举出例如以下表示的（a）～（c）所示的核酸片段，其能够在目的基因的mRNA的测定中使用。ALAD基因以外的情况下也是同样的。
（a）在由NM_000031所示的碱基序列的一部分或者与其互补的碱基序列构成的核酸片段中，1个或数个碱基缺失、取代或者添加的核酸片段。
（b）与由NM_000031所示的碱基序列的一部分或者与其互补的碱基序列具有90%以上、优选95%以上、更优选99%以上的同一性的碱基序列构成的核酸片段。
（c）与由NM_000031所示的碱基序列的一部分或者与其互补的碱基序列构成的DNA在严格条件下杂交的碱基序列构成的核酸片段。
这里，碱基序列的同一性使用GENETYXTM的同源性分析程序计算。
此外，作为“严格的条件”，是指2个DNA片段在通过SambrookJ等记载的标准的杂交条件下相互杂交（Expression of cloned genes in E.coli（Molecular Cloning：A laboratory manual（1989）Cold Spring harborLaboratory Press，New York，USA，9.47-9.62和11.45-11.61）。
通过使用这样制作的核酸片段和来自检体的RNA进行PCR法，优选进行包括由mRNA制作cDNA的工序的实时RT-PCR法，能够测定检体的mRNA。这里，RT-PCR法能够使用Two-Step RT-PCR、One-StepRT-PCR等公知的方法进行，但是，从特别简便并且防止交叉污染的观点出发，优选One-Step RT-PCR。这样的One-step RT-PCR法例如能够使用市售的试剂盒进行（QIAGEN One-Step RT-PCR kit等）。作为RT反应中使用的具有逆转录活性的酶，能够使用MMLV reversetranscriptase等各种逆转录酶。此外，在扩增DNA的PCR反应中使用的DNA聚合酶优选在90℃以上的温度具有耐热性的酶。
这样的PCR反应，例如，能够通过在下述温度条件下，即，将双链DNA变成单链DNA的热变性反应为90～98℃，使引物与模板cDNA杂交的退火反应为37～72℃，在DNA聚合酶作用下的延伸反应为50～75℃，将其作为一个循环，进行1～数十个循环而进行。其中，优选的反应条件的一例为热变性95℃·30秒、退火60℃·30秒，延伸反应72℃·40秒。PCR反应时，优选将2种引物作为1组使用，这种情况下两者必须为正义链和反义链的组合。本发明的核酸片段也能够作为探针使用，还能够组合使用其他公知的通用引物、寡聚核苷酸等。
作为包含作为该RT-PCR反应的模板的mRNA的检体材料，优选作为RNA总量含有1pg～1μg的RNA的材料，更优选含有2ng～50ng的材料。
在进行适当的PCR反应的情况下，通常“PCR扩增产物量”、“PCR循环数”和“PCR的模板量”之间具有相关关系。因此，参考由这样进行的PCR反应扩增得到的扩增产物量和PCR循环数进行适宜计算，就能够求出目的基因的mRNA量，即目的基因的表达量。
PCR扩增产物量和PCR循环数的决定没有特别限定，能够通过所有的方法进行，但是例如能够通过确定达到任意设定的一定量的DNA量时的PCR循环数进行。这样的确定例如能够使用“并用标记PCR产物的PCR法，对标记进行经时计测的PCR法”，确定达到设定的一定的荧光强度时的PCR循环数而进行。这里，作为标记，例如可以举出利用荧光色素的标记，作为标记的计测，可以举出荧光强度的计测。这里，作为利用荧光色素的标记，例如可以举出利用嵌入剂性荧光色素的标记，作为嵌入剂性荧光色素，可以举出SYBR（R）Green I。嵌入剂性荧光色素因嵌入双链核酸中而具有增强荧光强度的性质，因此可以发出反应扩增得到的PCR产物的强度的荧光。此外，利用荧光色素的标记还能够通过使用荧光色素标记的TaqMan探针、MoleculerBeacon等而进行。TaqMan探针或Moleculer Beacon是与PCR扩增的区域的内部序列具有相同性的寡聚核苷酸中结合有荧光色素和猝光剂的探针，并在PCR反应中共存使用。通过探针接合的荧光色素与猝光剂的相互作用，发出与PCR扩增反应相应的荧光，因此，通过测定在各PCR阶段的荧光强度，就能够经时观察所扩增的PCR产物。
此外，如前所述，检体中的目的基因的mRNA量例如也能够通过知晓与目的mRNA特异性杂交的核酸片段和来自检体的RNA的杂交效率而求出。
这里，与目的基因的mRNA特异性杂交的核酸片段，例如能够使用如前所述设计和制作得到的核酸片段。此外，作为这样的核酸片段，优选带标记的核酸片段。这里，作为标记，能够举出酶、顺磁离子、生物素、荧光色素、发色团、重金属或者放射性同位素，更优选作为标记物可以举出酶，这里，作为酶可以举出辣根过氧物酶、碱性磷酸酶。这样的标记能够通过公知的方法进行。测定含有来自检体的RNA的试样与这样的核酸片段的杂交程度，通过公知的换算方法就能够得知检体中的目的基因mRNA量。这样的杂交的程度的计测没有特别限定，能够以公知的方法为基准进行，例如能够通过在核酸片段上添加的标记的计测进行。即，例如，在使用由荧光色素标记的核酸片段的情况下，能够通过计测荧光强度进行。
此外，目的基因的表达量的测定也能够将与目的基因或其mRNA的碱基序列特异性杂交的核酸片段作为探针使用而进行。例如，如果是ALAD基因，则能够将由上述的GenBank登录号NM_000031记载的碱基序列的一部分（例如GAGGAGTCCCCAGCTATTGAGGCAA）（序列编号1）或者与其互补的碱基序列构成的核酸片段、或者由与它们相同的碱基序列构成并且在功能上等价的核酸片段作为探针使用。这些探针能够固定在任意的固相上，作为DNA芯片、基因芯片、cDNA微阵列、寡DNA阵列等利用。
此外，作为探针，除了上述例举的之外，还可以使用以能够特异性检测目的基因或其mRNA的碱基序列的方式从目的基因或其mRNA的碱基序列中选择的多个适宜的位置，并用多个与该区域特异性杂交的核酸片段而设计的探针。
探针的固定所使用的固相只要是能够固定多核苷酸的就没有特别限定，例如能够举出玻璃板、尼龙膜、微珠子、硅胶片、毛细管等。此外，也可以将固相标记。标记没有特别限定，例如能够举出荧光色素、放射性同位素等。多核苷酸在固相上的固定可以采用在固相上负载预先合成的多核苷酸的方法，也可以采用在固相上合成作为目的的多核苷酸的方法。固定方法，只要是例如DNA微阵列，则利用市售的轻便装等，对应于固定化探针的种类，使用适宜公知的方法（利用喷墨法的多核苷酸印刷，in situ合成，照相平版印刷）即可。
将由上述方法制作的DNA芯片等与以由培养细胞、组织、组织切片或者血液的裂解液等检体制备的RNA为基础所制备的标记DNA或者RNA、或者由这些检体直接制备的标记DNA或者RNA进行杂交，作为来自探针的标记物的信号测定所形成的该探针与标记DNA或者RNA的双链的量，由此能够测定目的基因的表达量。这里，信号的检测通过常规方法，例如用放射线检测器或荧光检测器等进行测定而进行。
除了上述方法以外，还能够通过微珠子法测定目的基因的表达量。例如，在标记了各自不同的荧光标记的微珠子上固定针对来自各个目的基因的mRNA的探针，使其与由培养细胞、组织、组织切片或者血液的裂解液等检体制备的目的基因的mRNA杂交，并检测其荧光，由此能够识别各自的目的基因，同时，通过针对与固定在微珠子上的探针杂交的来自目的基因的mRNA而杂交标记探针并检测该探针的标记，测定mRNA量，由此还能够同时测定多个目的基因的表达量。
此外，使用上述探针，采用DNA印记杂交法、RNA印记杂交法、FISH法、CGH法等的公知的方法能够测定目的基因的复制数和表达量。此外，在将目的基因编码的多肽作为测定对象的情况下，通过使用对该多肽特异性的抗体的公知的免疫染色法（ELISA法、蛋白质印迹法、EIA法、RIA法、IHC法等）测定目的基因的表达量即可。
判定对抗癌剂的感受性时，测定抗癌剂给药前或给药中的来自癌症患者机体的试样中的目的基因的表达量，例如CABLES1基因、GDA基因、HOXB6基因和TMEM18基因的情况下，当表达量在规定的基准值以上的数值时，能够判定该癌没有抗癌剂感受性，当小于规定的基准值的数值时，能够判定该癌具有抗癌剂感受性。
此外，使用ALAD基因、C20orf43基因、GDA基因、TMEM18基因和UGT2B10基因这5种基因的表达量，由上述式（1）计算最佳肿瘤缩小效果（比），当在规定的基准值以上的数值时，能够判定该癌具有抗癌剂感受性，当小于规定的基准值的数值时，能够判定该癌没有抗癌剂感受性。这里，规定的基准值能够根据作为对象的癌症患者的状态或癌症的种类、与包括含有奥沙利铂或其盐、氟尿嘧啶或其盐、左亚叶酸或其盐的抗癌剂组合使用的其他抗癌剂的药剂的种类等，根据后述的实施例适宜设定，但是，例如在氟尿嘧啶、左亚叶酸和奥沙利铂并用给药的情况下，最佳肿瘤缩小效果（比）优选设为0.5以上，特别优选设为0.7以上。
当在抗癌剂给药前通过各个基因的表达量能够判定为没有感受性的情况下、当通过上述式（1）得到的数值小于规定的基准值的情况下，能够判定该癌对抗癌剂没有感受性，无法期待其药效，在将这种无法期待药效的抗癌剂继续进行给药的情况下，会有癌症进展、副作用增大的危险。这样，本发明中的感受性判定方法不仅是抗癌剂治疗反应性的判定，对于防止不能期待药效的抗癌剂的继续给药所伴随的副作用的增大也能够作出很大的贡献，因此，特别适宜抗癌剂给药前的癌症患者利用。此外，也能够作为用于积极地选择能够期待治疗效果的患者的判定方法使用。
此外，测定抗癌剂给药中的来自癌症患者机体的试样中的目的基因的表达量，在每个疗程中测定各个基因的表达量或上式（1）得到的数值并进行监测，由此能够经时地评价该癌的感受性，因此，也能够作为是否继续治疗的判定方法。在对抗癌剂没有感受性的情况下，可以认为不能期待其药效，而仅显现抗癌剂带来的副作用，因此，本发明的感受性判定方法还能够作为用于回避不必要的副作用的显现或继续无效的治疗所伴随的癌症进展或副作用增大的判定方法使用。
作为判定感受性的参数，除了最佳肿瘤缩小效果（比）以外，还能够使用作为表示有效性的参数的总生存期间（日）、无增恶生存期间（日）、总奏效期间（日）、稳定期间（日）、治疗成功期间（日）、作为表示副作用的参数的抗癌剂及其代谢物的血浓度和消失半衰期、机体内利用率、浓度时间曲线下面积、清除率、分布容积等。
作为与包括奥沙利铂或其盐、氟尿嘧啶或其盐、左亚叶酸或其盐的抗癌剂组合使用的其他的抗癌剂，没有特别限定，例如可以举出环磷酰胺（cyclophosphamide）、异磷酰胺（ifosfamide）、噻替哌（thiotepa）、美法仑（melphalan）、白消安（busulfan）、尼莫司汀（nimustine）、雷莫司汀（ranimustine）、达卡巴嗪（dacarbazine）、丙卡巴肼（procarbazine）、替莫唑胺（temozolomide）、顺铂（cisplatin）、卡铂（carboplatin）、奈达铂（nedaplatin）、甲氨蝶呤（methotrexate）、培美曲塞（pemetrexed）、替加氟／尿嘧啶（tegaful／uracil）、脱氧氟尿苷（doxifluridine）、替加氟／吉美拉西／奥替拉西（tegaful／gimeracil／oteracil）、卡培他滨（capecitabine）、阿糖胞苷（cytarabine）、依诺他滨（enocitabine）、吉西他滨（gemcitabine）、6-巯基嘌呤（6-mercaptopurine）、氟达拉滨（fludarabin）、喷司他汀（pentostatin）、克拉屈滨（cladribine）、羟基脲（hydroxyurea）、多柔比星（doxorubicin）、表柔比星（epirubicin）、佐柔比星（daunorubicin）、依达比星（idarubicine）、吡柔比星（pirarubicin）、米托蒽醌（mitoxantrone）、氨柔比星（amurubicin）、放线菌素D（actinomycin D）、博来霉素（bleomycine）、派来霉素（pepleomycin）、丝裂霉素C（mytomycin C）、阿柔比星（aclarubicin）、净司他丁（zinostatin）、长春新碱（vincristine）、长春地辛（vindesine）、长春碱（vinblastine）、长春瑞滨（vinorelbine）、紫杉醇（paclitaxel）、多西紫杉醇（docetaxel）、伊立替康（irinotecan）、伊立替康活性代谢物（SN-38）、托泊替康（nogitecan，topotecan）、依托泊苷（etoposide）、泼尼松龙（prednisolone）、地塞米松（dexamethasone）、他莫昔芬（tamoxifen）、托瑞米芬（toremifene）、甲羟孕酮（medroxyprogesterone）、阿那曲唑（anastrozole）、依西美坦（exemestane）、来曲唑（letrozole）、利妥昔（rituximab）、伊马替尼（imatinib）、吉非替尼（gefitinib）、吉姆单抗奥佐米星（gemtuzumab ozogamicin）、硼替佐米（bortezomib）、厄洛替尼（erlotinib）、西妥昔单抗（cetuximab）、贝伐单抗（bevacizumab）、舒尼替尼（sunitinib）、索拉非尼（sorafenib）、达沙替尼（dasatinib）、帕尼单抗（panitumumab）、门冬酰胺酶（asparaginase）、维甲酸（tretinoin）、三氧化二砷（arsenic trioxide）、或它们的盐、或它们的活性代谢物等。其中，优选伊立替康、SN-38或它们的盐或贝伐单抗，特别优选贝伐单抗。
实施本发明的抗癌剂感受性的判定方法时，优选使用包括测定检体中的选自ALAD基因、C20orf43基因、CABLES1基因、CDC14B基因、GDA基因、HOXB6基因、RPL7AP27基因、TMEM18基因和UGT2B10基因中的一种以上的基因的表达量的方案的试剂盒。基因的表达量测定方案中例如包括记载了用于测定目的基因的表达量的方法的方案、用于测定目的基因的表达量的方法中使用的试剂、固定有可以与目的基因的mRNA特异性杂交的核酸片段的DNA芯片等。此外，该试剂盒中还可以包括用于判定有无抗癌剂感受性的基准值，该基准包括各个基因的标准表达量、判断为高的表达量、判断为低的表达量、影响表达量的原因及其影响程度等，该基准值能够根据作为为对象的患者的状态及检体-癌的种类、与包括奥沙利铂或其盐、氟尿嘧啶或其盐、左亚叶酸或其盐的抗癌剂组合使用的含有其他抗癌剂的药剂的种类、判定感受性的参数而适宜设定。使用该基准值能够如上所述进行判定。
在使用ALAD基因、C20orf43基因、GDA基因、TMEM18基因和UGT2B10基因这5种基因的表达量，通过上式（1）计算出最佳肿瘤缩小效果（比）的情况下，作为感受性判定用试剂盒，包括：（A）上述5个基因的表达量测定方案、和（B）用于计算上述最佳肿瘤缩小效果（比）用的方案。这里，（A）上述5个基因的表达量测定方案中，例如包括：（A1）记载用于测定目的基因的表达量的方法的方案、（A2）用于测定目的基因的表达量的方法中使用的试剂、（A3）固定有可以与目的基因的mRNA特异性杂交的核酸片段的DNA芯片等。另一方面，在（B）的方案中，除了（B1）用于通过式（1）计算出最佳肿瘤缩小效果（比）的方案以外，可以举出（B2）用于判定有无抗癌剂的感受性的基准值等。该基准值包括最佳肿瘤缩小效果（比）的基准值、影响基准值的因素及其影响程度等，这些基准值能够根据与包括奥沙利铂或其盐、氟尿嘧啶或其盐、左亚叶酸或其盐的抗癌剂组合使用的包含其他抗癌剂的药剂的种类等适宜设定。使用该基准值能够如上所述进行判定。
本发明的试剂盒并不限于这些，而是集合了进行这样的方法的全部或部分工序所需要的内容的全部或一部分的试剂盒。这里，“进行工序所需要的内容”例如可以举出缓冲液等。
此外，如果将检体中的选自ALAD基因、C20orf43基因、CABLES1基因、CDC14B基因、GDA基因、HOXB6基因、RPL7AP27基因、TMEM18基因和UGT2B10基因中的一种以上的基因的表达变化作为指标，就能够筛选针对抗癌剂的感受性增强剂。
具体而言，在CABLES1基因、GDA基因、HOXB6基因和TMEM18基因的情况下，如果将这些基因的表达抑制作为指标，就能够筛选针对抗癌剂的感受性增强剂。即，在体外（in vitro）或体内（in vivo）抑制这些基因表达的物质增强抗癌剂感受性。例如，在荷癌动物中的抗癌剂给药前后，促进基因表达降低的物质是增强抗癌剂感受性的物质（抗癌剂感受性增强剂）。在体外（in vitro），在各种癌细胞株中，在抗癌剂的存在下促进基因表达降低的物质是增强抗癌剂感受性的物质（抗癌剂感受性增强剂）。
此外，如果以上述式（1）得到的最佳肿瘤缩小效果（比）的增加作为指标，就能够筛选针对抗癌剂的感受性增强剂。即，在体外（invitro）或体内（in vivo），增加该数值的物质增强抗癌剂感受性。例如，在荷癌动物中的抗癌剂给药前后，促进该数值增加的物质是增强抗癌剂感受性的物质（抗癌剂感受性增强剂）。此外，在体外（in vitro），在各种癌细胞株中，在抗癌剂的存在下促进该数值增加的物质是增强抗癌剂的感受性的物质（抗癌剂感受性增强剂）。
如果采用抗癌剂感受性增强剂，则各个基因的表达变化和通过上式（1）得到的数值的增加能够比肿瘤的缩小或杀细胞效果更早的发现，因此能够在更短的时间内判定该物质作为抗癌剂感受性增强剂是否有用，在能够减少筛选所耗的劳力和费用方面也能够期待很大的效果。
如果并用这样得到的抗癌剂感受性增强剂和作为感受性增强对象的抗癌剂，就能够大幅度提高该抗癌剂的治疗效果。本发明的组合物可以口服给药液可以非口服给药。在给药时，将包含抗癌剂感受性增强剂和作为感受性增强对象的抗癌剂的组合物与适宜口服给药、直肠内给药、注射等给药方法的固体或液体的医药用无毒性载体混合，以惯用的医药品制剂的形态给药。这里，包含抗癌剂感受性增强剂和作为感受性增强对象的抗癌剂的组合物，可以是包括这些成分两者的一个组合物，也可以是分别各自的制剂的组合。此外，这些成分也可以分别为不同的给药路径。
作为这样的制剂，例如，可以举出片剂、颗粒剂、散粉、胶囊剂等固态制剂、溶液剂、悬浮剂、乳剂等液剂、冷冻干燥剂等。这些制剂能够通过制剂上的常用方法制备。作为上述医药用无毒性载体，例如能够举出淀粉、糊精、脂肪酸甘油脂、聚乙二醇、羟乙基淀粉、乙二醇、聚氧乙烯山梨糖醇酐脂肪酸酯、氨基酸、明胶、白蛋白、水、生理食盐水等。根据需要，能够适宜添加稳定剂、湿润剂、乳化剂、结合剂、等张剂、赋形剂等惯用的添加剂。
此外，上式（1）中的第一项的数值和各基因的系数以实时RT-PCR法获得的各基因的表达量为基础决定，如果实时RT-PCR法获得的基因表达量与实时RT-PCR法以外的其他方法获得的基因表达量的测定值具有一定的相关，则也能够在上式（1）的第一项数值和各基因系数中追加调整实时RT-PCR法与其以外的其他方法的测定值的系数而使用，在该式中代入实时RT-PCR法以外的其他方法的基因表达量即可。此外，即使在使用实时RT-PCR法的情况下，根据作为对象的癌症患者的状态和病例数、癌症的种类、与包括奥沙利铂或其盐、氟尿嘧啶或其盐、左亚叶酸或其盐的抗癌剂组合使用的包含其他抗癌剂的药剂的种类等，各基因的表达量也会存在若干差异，因此，在这种情况下，追加调整上式（1）的第一项的数值和各基因的系数的系数而使用上式（1）即可。
实施例
以下，举出实施例更详细地说明本发明，但本发明不受这些实施例的任何限定。
mFOLFOX6疗法的人临床试验的探讨
1.mFOLFOX6疗法的人临床试验
在实施了癌化学疗法（mFOLFOX6疗法）的癌症患者中，为了明确与癌化学疗法的效果相关的基因并对其进行验证，进行了前瞻性基因组药理学临床研究，其中，该癌化学疗法并用投与氟尿嘧啶400mg/平方米（急速静注）、左亚叶酸200mg/平方米、氟尿嘧啶2400～3000mg/平方米（持续点滴静注）、奥沙利铂85mg/平方米。对象为不能够根治切除的IV期大肠癌药物疗法未治愈例，在姑息性手术时能够采取肿瘤检体的病例。具体的选择基准为：（1）在组织学上可确诊大肠癌的病例、（2）不能根治切除的IV期大肠癌术后病例、（3）具有可能测定的病变（Response Evaluation Criteria in Solid Tumors，RECIST：实体肿瘤的疗效评价标准）的病例、（4）生理功能（骨髓、肝、肾、心等）充分保持的病例中，临时登录和本登录前1周以内的检查值满足以下基准。白细胞4000/μL以上且12000/μL以下，嗜中性粒细胞数2000/μL以上、血小板数100000/μL以上、血红蛋白量9.0g/dl以上、血清AST-ALT设备正常值上限的2倍以下（但是在肝转移病例中为3倍以下）、血清总胆红素1.5mg/dl以下、血清肌氨酸酐1.5mg/dl以下、肌氨酸酐清除率50mL/min以上、BUN25mg/dl以下、CRP1mg/dl以下、PerformanceStatus（Eastern Cooperative Oncology Group：ECOG）的分类为0～2的病例、手术以外没有进行前治疗的病例、从手术到本登录经过21日以上的病例、预测生存时间3个月以上的病例、没有重症并发疾病或活动性复发癌的病例、年龄20岁以上且小于75岁的病例、在手术时得到用于基因分析的组织的病例、参加包括试样提供的研究并在术前得到患者本人书面同意的病例，除外基准为：（1）具有严重并发症的病例、（2）并发感染症的病例、（3）有腹泻（水样便）的病例、（4）有肠管麻痹、肠梗阻、亚急性肠阻塞的病例（只在本次登录前）、（5）具有间质性肺炎或肺纤维症的病例、（6）有大量腹水、胸水的病例、（7）、有黄疸的病例、（8）具有需要治疗的程度的缺血性心脏病、心律不齐等心脏病的病例（伴有高血压的左室肥大或轻度的左室过载、轻度的右束支传导阻滞等可以登录）、（9）具有6个月以内发病的心肌梗塞的既往病史的病例、（10）并发肝硬化的病例、（11）需要反复输血的确认消化管新鲜出血的病例、（12）精神病药治疗中或者认为需要治疗的具有精神障碍的病例、（13）并发难以控制的糖尿病的病例、（14）具有其他的重症术后并发症的病例、（15）具有对其他的药剂具有严重的过敏症的既往病史的病例、（16）妊娠中或哺乳中的女性和希望怀孕的男女、（17）肝炎病毒、HIV病毒、梅毒的阳性例。mFOLFOX6疗法在术后28日内开始给药，给药开始日为day1，将每2周给药1次、停药1周作为一个疗程进行给药。
计56例参加研究，其中54例中能够进行标的病变中肿瘤缩小效果的评价。54例中，除去上述检查值脱离基准的4例（参考病例），得到用于评价基因表达量需要的RNA的病例为44例。这些病例中能够使用DNA微阵列进行分析的为37例，探索与对于抗癌剂治疗的感受性存在相关的基因。
DNA微阵列使用Whole Human Genome4×44k（Agilent公司生产），按照下述的顺序进行：（1）从total RNA合成cDNA、（2）从cDNA合成标记的cRNA、（3）cRNA的片段化、（4）片段化的cRNA与微阵列的杂交、（5）微阵列的清洗、（6）微阵列的扫描、（7）基因表达分析。
TOTAL RNA使用RNeasy TM Minikit（Qiagen公司生产），按照附加的方案从54例的人大肠癌组织样品中提取，在-80℃保存。
（1）从total RNA合成cDNA
使用Quick Amp Labeling Kit（Agilent公司生产），按照其方案，进行double-strand cDNA合成。即，将total RNA500ng以Nuclease-freeWater调整到5.3μl，混合该试剂盒中所含的1.2μl T7Promoter Primer和作为阳性对照而稀释的5μl Spike-Mix（Agilent公司生产），在65℃对计11.5μl进行10分钟加温，之后，在冰上5分钟急冷。在冰上加入该试剂盒所含的4μl的5×First-strand Buffer、1μl的10mM dNTP mix、2μl的0.1M DTT、0.5μl的RNase Inhibitor、1μl的MMLV ReverseTranscriptase，计20μl，在40℃加温2小时。为了停止cDNA合成反应，在65℃加温15分钟，然后在冰上急冷5分钟。
（2）从cDNA合成标记的cRNA
接着，使用Quick Amp Labeling Kit（Agilent公司生产），按照其方案进行in vitro transcription（IVT）反应，合成cRNA。即，均匀混合该试剂盒中所含的20μl的4×Transcription Buffer、6μl的0.1M DTT、8μl的NTP mix、6.4μl的50%PEG、0.5μl的RNase Inhibitor、0.6μl的Inorganic Pyrophosphatase、0.8μl的T7RNA Polymerase、2.4μl的Cyanine3-CTP、15.3μl的Nuclease-free water，将计60μl添加到（1）调整得到的20μl的cDNA溶液中，之后，在40℃加温2小时。反应结束后，使用RNeasy Mini Kit（Qiagen公司生产），按照方案纯化所合成的cRNA。即，向反应液（80μl）中添加20μl的Nuclease-free Water，向该合计100μl的溶液中添加该试剂盒中包含的350μl的Buffer RLT，均匀混合，再添加250μl的100%乙醇并均匀混合，将总量（700μl）添加到该试剂盒包含的Rneasy小型离心柱中，以13000rpm离心30秒，将RNeasy小型离心柱放置在新的2ml管中，将该试剂盒中包含的500μl的Buffer RPE添加到柱中，以13000rpm离心30秒，除去洗脱液。再次将小型离心柱安装在原来的2ml管中，向柱中添加500μl的Buffer RPE，以13000rpm离心1分钟，除去洗脱液。将小型离心柱移到新的1.5ml管中，在膜上直接添加30μl的Nuclease-free water，在室温下静置1分钟，之后，以13000rpm离心30秒，洗脱cRNA样品。
cRNA的定量通过NanoDrop（Thermo scientific公司生产）进行，测定样品溶液的260nm和280nm吸光度，定量cRNA浓度，并且确认了Cy3-CTP色素的进入率在9pmol/μg以上。cRNA的品质检测使用Agilent2100Bioanalyzer，按照所附加的方案进行电泳，确认拖尾峰（smear peak）的长度在500碱基以上。
（3）cRNA的片段化
按照Gene Expression Hybridization Kit（Agilent公司生产）的方案将cRNA片段化。即，使用Nuclease-free water将1.65μg的cRNA稀释为41.8μl，添加该试剂盒中包含的2.2μl的25×Fragmentation Buffer和11μl的10×Blocking Agent，在60℃加热30分钟，之后，在冰上急冷1分钟。在含有片段化的cRNA的55μl溶液中加入该试剂盒中所包含的55μl的2×Hybridization Buffer HI-RPM，调整计110μl的杂交溶液。
（4）片段化cRNA与微阵列的杂交
使用杂交炉（Agilent公司生产）和杂交转子（Agilent公司生产），按照方案进行杂交。即，在Whole Human Genome4×44K阵列面上加上（3）调整得到的杂交溶液，之后，以Gasket slide（Agilent公司生产）覆盖，用寡聚DNA阵列用杂交腔室（Agilent公司生产）固定。固定的阵列装在杂交转子上，在杂交炉中，在65℃边以10rpm旋转边加温17小时。
（5）微阵列的清洗
杂交后，取出由寡聚DNA阵列用杂交腔室固定的微阵列，进行清洗。即，将微阵列移动到装满添加有0.005%Triton X-102的GeneExpression Wash Buffer1（Agilent公司生产）的容器中，边由搅拌子搅拌边在室温下清洗1分钟。接着，将微阵列移动到装满添加有0.005%Triton X-102的Gene Expression Wash Buffer2（Agilent公司生产）的带有搅拌器的恒温槽中，边用搅拌子搅拌边在37℃清洗1分钟。（6）微阵列的扫描
将结束清洗的微阵列装在滑动架上，提供给Agilent G2565BA（Agilent公司生产）扫描仪，读取荧光参数，作为TIFF image保存。用Agilent Feature Extraction Ver.9.5软件处理TIFF image，将阵列上的各基因点的信号强度数值化。
（7）基因表达分析
使用GeneSpring GX（Agilent公司生产）微阵列基因表达分析软件对上述得到的信号强度数据标准化（Normalization）并进行分析。即，从点信号减去背景信号，其值不足0.01的为0.01，除以阵列的全部点信号的3/4分位值，变换为以2为底的对数值，作为各个基因的标准化的相对表达量。
2.感受性关联基因的探索
使用能够进行DNA微阵列分析的37例分析结果，进行能够预测最佳肿瘤缩小效果（比）的基因的探索。根据37例得到的DNA微阵列的分析结果，针对与最佳肿瘤缩小效果（比）的关联，进行皮尔逊积矩相关分析和的斯皮尔曼秩相关分析，作为相关系数R的绝对值超过0.5，通过相关系数ρ的检定，p值不足0.2，并且平均表达量的相对值超过0.5的基因，确定了17个基因（表1）。此外，对加上参考病例4例的41例实施同样的分析，作为相关系数R的绝对值超过0.5，通过相关系数ρ的检定，p值不足0.05，并且平均表达量的相对值超过0.5的基因，确定了10个基因（表2）。在根据37例分析结果确定的17个基因和根据41例的分析结果确定的10个基因中，确定两者共通的9个基因（表3）。这9个基因是条件不同的分析集团共通确认的基因，判断为在临床中更具有有用性，并评价了各个基因与最佳肿瘤缩小效果的相关性。
[表1]
[表2]
[表3]
为了对确定的9个基因分别确认与最佳肿瘤缩小效果的相关，使用利用TaqManTM Gene Expression Assays的实时RT-PCR法，定量各基因的表达量，进行回归分析。其结果分别表示在表4中。其中，由于RPL7AP27基因不能做成RT-PCR用的适宜的引物或探针，所以从分析对象中排除。
[表4]
此外，进行了区分各基因的表达量高的组和低的组的t检验。其结果如表5所示。由于RPL7AP27基因不能做成RT-PCR用的适宜的引物或探针，所以从分析对象中排除。
[表5]
此外，根据RECIST基准，将最佳肿瘤缩小效果区分为CR和PR组以及SD和PD组，以t检验区别为CR和PR组、SD组和PD组这3个组，并进行单因素方差分析，其结果分别表示在表6中。CABLES1基因、GDA基因、HOXB6基因和TMEM18基因，与确认了对治疗有效的CR和PR组比较，在确认没有效果的SD和PD组中统计上显示更高的表达量。此外，由于RPL7AP27基因不能做成RT-PCR用的适宜的引物或探针，所以从分析对象中排除。
[表6]
3.感受性预测式的制作和验证
以上的结果，使用DNA微阵列确定的感受性相关的9个基因中除去RPL7AP27基因的8个基因，确认这些基因单独与抗癌剂感受性在统计上有意相关。此外，对于这8个基因，使用多元回归分析方法，代入确定的基因的组的定量表达量，由此求出预测最佳肿瘤缩小效果的式，确认了其预测性。将获得用于评价上述基因表达量所需的RNA的病例44例分为用于预测式的制作的26例（研究组）和用于对其进行验证的18例（验证组），使用实时RT-PCR法，求出8个基因的表达量。使用研究组26例中的8个基因的表达量，通过多元回归分析的方法求出预测最佳肿瘤缩小效果的式。其结果，作为能够最好地预测最佳肿瘤缩小效果的式，得到使用8个基因中的5个基因（ALAD基因、C20orf43基因、GDA基因、TMEM18基因和UGT2B10基因）的预测式。
最佳肿瘤缩小效果（肿瘤直径基线比）＝0.37664＋96.360×A－8.5128×B＋42.420×C＋26.810×D＋747.00×E……（1）
（式中，A为ALAD基因表达量，B为C20orf43基因表达量，C为GDA基因表达量，D为TMEM18基因表达量，E为UGT2B10基因表达量）
式（1）中，R＝0.8695，暗示了AICPS（Akaike’s information criterionper sample）＝-3.367294这样很高的预测性。
为了验证上述式（1）的妥当性，使用在上述验证组18例中构成式（1）的5个基因的表达量，进行皮尔逊积矩相关分析，明确了其为R＝0.5840392（p＝0.01093）的良好的预测式（图1）。
其中，在上述预测式的研究中，研究了2～8个基因的全部组合，但是使用ALAD基因、C20orf43基因、GDA基因、TMEM18基因和UGT2B10基因这5个基因能够得到具有惊异的精度的预测式。选择在各个基因的研究中与感受性相关比较低的ALAD基因、C20orf43基因、作为5个基因中的一个，另一方面，不选择与感受性相关比较高的HOXB6基因作为5个基因中的一个，这是预想之外的结果。

Claims (7)

1.用于测定检体中的ALAD基因、C20orf43基因、GDA基因、TMEM18基因和UGT2B10基因的表达量的试剂在抗癌剂感受性判定用试剂盒的制造中的用途，该抗癌剂为并用投与奥沙利铂或其盐、氟尿嘧啶或其盐和左亚叶酸或其盐，所述试剂是能够检测所述基因或来自所述基因的mRNA的探针或引物。
2.如权利要求1所述的用途，其特征在于：
检体是来自患有癌的被验者机体的试样。
3.如权利要求1或2所述的用途，其特征在于：
检体是来自患有大肠癌的被验者机体的试样。
4.如权利要求1或2所述的用途，其特征在于：
基因的表达量是来自该基因的mRNA量。
5.一种抗癌剂感受性判定用试剂盒，该抗癌剂为并用投与奥沙利铂或其盐、氟尿嘧啶或其盐和左亚叶酸或其盐，所述试剂盒的特征在于：
包括用于测定检体中的ALAD基因、C20orf43基因、GDA基因、TMEM18基因和UGT2B10基因的表达量的方案，
所述用于测定表达量的方案包括：(A1)记载用于测定目的基因的表达量的方法的方案；以及下述(A2)或者(A3)，
(A2)用于测定目的基因的表达量的方法中使用的试剂，所述试剂是能够检测所述基因或来自基因的mRNA的探针或引物；
(A3)固定有可以与目的基因的mRNA特异性杂交的核酸片段的DNA芯片。
6.如权利要求5所述的试剂盒，其特征在于：
检体为来自患有癌的被验者机体的试样。
7.如权利要求5或6所述的试剂盒，其特征在于：
检体为来自患有大肠癌的被验者机体的试样。
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