CN103255093B

CN103255093B - 一种嗜酸乳杆菌的制备方法

Info

Publication number: CN103255093B
Application number: CN201310187056.8A
Authority: CN
Inventors: 廖庄旺
Original assignee: XIAMEN LIUWEI BIO-TECHNOLOGY Co Ltd
Current assignee: XIAMEN LIUWEI BIO-TECHNOLOGY Co Ltd
Priority date: 2013-05-20
Filing date: 2013-05-20
Publication date: 2015-04-22
Anticipated expiration: 2033-05-20
Also published as: CN103255093A

Abstract

本发明提出了一种嗜酸乳杆菌的制备方法。包括接种CGMCC No.2122的嗜酸乳杆菌进行液态发酵、固体发酵、烘干和检测的步骤。本发明的方法所制备得到的嗜酸乳杆菌还伴有大量其他有益代谢产物：乳酸菌素和L-乳酸，正丁酸，乙酸，甲酸等有机酸。这些产物是动物肠道重要的能量来源，而且能与益生菌协同作用，作用于动物，能显著提高动物的胃肠道功能、提高免疫力、促进生长；将本发明所得产物制备成饲料，动物对饲料的消化和吸收率得到提高。

Description

一种嗜酸乳杆菌的制备方法

技术领域

本发明涉及发酵工程领域，具体涉及一种嗜酸乳杆菌的制备方法。

背景技术

嗜酸乳杆菌（Lactobacillus acidophilus）不仅在胃中，它还是人体小肠内的主要益生菌，具有调整肠道菌群平衡，抑制肠道不良微生物的增殖的作用。

现有嗜酸乳杆菌的制备方法产物单一，同时只重视嗜酸乳杆菌活菌数量的增长，同时，现有方法制备得到的嗜酸乳杆菌在改善动物胃肠道功能、促进生长方面的效果方面不尽人意。

因而，目前的工艺仍有待改进。

发明内容

本发明的目的在于提供一种既能制备优良嗜酸乳杆菌，又能制备大量其他有益代谢产物的制备方法。

为实现上述目的，本发明的技术解决方案是：提供一种嗜酸乳杆菌的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

液态发酵： 3%接种嗜酸乳杆菌于发酵罐中，边加边搅拌，添加结束后，继续搅拌5-10分钟，静置培养，保持一定温度，发酵过程pH值不低于6-6.5；

所述嗜酸乳杆菌为保藏号为CGMCC No.2122的嗜酸乳杆菌。

所述液态发酵为800升液体培养基添加入1000升发酵罐中，3%接种保藏号为CGMCC No.2122的嗜酸乳杆菌于所述发酵罐中，边加边搅拌，搅拌速度：30-60rpm，添加结束后，继续搅拌5-10分钟，静置培养24小时，保持温度30℃，发酵过程pH值不低于6-6.5；

所述液体培养基成分为：葡萄糖2重量%，蛋白胨1重量%，牛肉膏1重量%，酵母浸膏0.5重量%，磷酸氢二钾0.2重量%，NaAc0.5重量%，硫酸镁0.05重量%，硫酸锰0.025重量%，吐温-80 0.1体积%，柠檬酸二胺0.2重量%，琼脂1.5重量%，番茄汁5重量%；

固体发酵：50%接种液态发酵所得到的发酵液于固体培养基中，进行封闭式厌氧发酵一定时间，保持一定温度，发酵过程pH值不低于6-6.5；具体为50%接种液态发酵所得到的发酵液于固体培养基中，进行封闭式厌氧发酵80-110小时，保持温度30—35℃，发酵过程pH值不低于6-6.5。

所述固体培养基成分为：红糖1重量%，玉米粉50重量%，麸皮42.3重量%，豆粕粉5重量%，硫酸镁0.5重量%，硫酸铵0.5重量%，磷酸氢二钾0.5重量%，吐温-80 0.2体积%；

烘干和检测。

所述烘干采用低温沸腾干燥。所述低温为不高于40℃。

所述检测为GB/T 20191-2006方法检测活菌总数；pH值用pH计进行检测；牛津杯法检测乳酸菌素得率；检测乳酸菌素的抑菌特性和乳酸菌素活性；液相色谱仪检测有机酸。本发明还保护所述方法制备的嗜酸乳杆菌，和或其他成分。所述其他成分为乳酸菌素和/或有机酸，优选所述有机酸为L-乳酸，正丁酸，乙酸，甲酸中的至少一种。

本发明与现有方法相比，增加了固体、厌氧式发酵阶段，在这个阶段中，通过调整培养基组份以及发酵工艺，使得嗜酸乳杆菌数量只能缓慢生长，但产生大量代谢产物，使得最终产品既含有益生菌-嗜酸乳杆菌，更重要的是还含有L-乳酸、短链脂肪酸等代谢产物，它们是动物肠道重要的能量来源，而且能与益生菌协同作用，作用于动物，能显著提高动物的胃肠道功能、提高免疫力、促进生长；将本发明所得产物制备成饲料，经过试验验证，发现动物对饲料的消化和吸收率得到了提高。而现有的方法只重视活菌数量的增长，最终产物只有嗜酸乳杆菌本身，使用效果不好

同时本发明的方法简单，成本低廉。便于工业化实施。

具体实施方式

下面详细描述本发明的实施例，所述实施例的示例旨在用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。

实施例1： 液态发酵

1、培养基组份：葡萄糖2重量%，蛋白胨1重量%，牛肉膏1重量%，酵母浸膏0.5重量%，磷酸氢二钾0.2重量%，NaAc0.5重量%，硫酸镁0.05重量%，硫酸锰0.025重量%，吐温-80 0.1体积%，柠檬酸二胺0.2重量%，琼脂1.5重量%，番茄汁5重量%。

2、接种量：3%嗜酸乳杆菌（Lactobacillus acidophilus），来自浙江工商大学食品与生物工程学院，保藏于CGMCC，保藏号CGMCC No.2122，专利号ZL200710156323.X（一种嗜酸乳杆菌、用该菌种发酵豆乳的方法及发酵豆乳饮料），公开日为2008年05月21日。

3、温度：30℃

4、发酵过程pH值：不低于6-6.5

5、发酵时间：厌氧培养24小时。以1000升发酵罐为例：3%接种量接种嗜酸乳杆菌CGMCCNO.2122于800升培养基中，培养基加入1000升发酵罐（江苏科海生物工程设备有限公司，KRH-CPJ1000L）中，边加边搅拌（搅拌速度：30-60rpm），添加结束后，继续搅拌5-10分钟，静置培养。

实施例2： 固体发酵

1、培养基组份：红糖1%，玉米粉50%，麸皮42.3%，豆粕粉5%，硫酸镁0.5%，硫酸铵0.5%，磷酸氢二钾0.5%，吐温-80 0.2%

2、接种量：50%（使用实施例1所得到的发酵液）

3、发酵方式：封闭式厌氧发酵

4、发酵过程温度：30—35℃

5、发酵时间：96小时

实施例3：烘干及检测

采用低温沸腾干燥，烘干温度不高于40℃。

实施例1使用1000升发酵罐，最终产量818千克（直接烘干后称重），得率97.5%。（得率=最终产物重量*100%/（800+液体培养基干物质重））

检测方法：

1、嗜酸乳杆菌活菌检测：活菌总数用GB/T 20191-2006规定的方法检测， pH值用pH计进行检测。嗜酸乳杆菌活菌总数大于或等于20亿/克， pH值4-5。

2、乳酸菌素检测：用反相高效液相色谱法进行乳酸菌素的定性、定量检测，产品中乳酸菌素活性可达75WU/mL。

3、有机酸检测：用高效液相色谱仪进行定性、定量检测，定量检测总有机酸含量5.50%。定性检测确定有机酸分别为L-乳酸，正丁酸，乙酸，甲酸。

尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例，可以理解的是，上述实施例是示例性的，不能理解为对本发明的限制，本领域的普通技术人员在不脱离本发明的原理和宗旨的情况下在本发明的范围内可以对上述实施例进行变化、修改、替换和变型。

Claims

1.一种嗜酸乳杆菌的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

液态发酵：3％接种嗜酸乳杆菌于发酵罐中，边加边搅拌，添加结束后，继续搅拌5-10分钟，静置培养，保持一定温度，发酵过程pH值不低于6.5；

液体培养基成分为：葡萄糖2重量％，蛋白胨1重量％，牛肉膏1重量％，酵母浸膏0.5重量％，磷酸氢二钾0.2重量％，NaAc0.5重量％，硫酸镁0.05重量％，硫酸锰0.025重量％，吐温-800.1体积％，柠檬酸二胺0.2重量％，琼脂1.5重量％，番茄汁5重量％；

固体发酵：50％接种液态发酵所得到的发酵液于固体培养基中，进行封闭式厌氧发酵80-110小时，保持温度30—35℃，发酵过程pH值不低于6.5；

所述固体培养基成分为：红糖1重量％，玉米粉50重量％，麸皮42.3重量％，豆粕粉5重量％，硫酸镁0.5重量％，硫酸铵0.5重量％，磷酸氢二钾0.5重量％，吐温-800.2体积％；

烘干和检测；所述液态发酵为800升液体培养基添加入1000升发酵罐中，3％接种保藏号为CGMCC No.2122的嗜酸乳杆菌于所述发酵罐中，边加边搅拌，搅拌速度：30-60rpm，添加结束后，继续搅拌5-10分钟，静置培养24小时，保持温度30℃，发酵过程pH值不低于6.5。

2.权利要求1的嗜酸乳杆菌的制备方法，其特征在于，所述烘干采用低温沸腾干燥。

3.权利要求2的嗜酸乳杆菌的制备方法，其特征在于，所述低温为不高于40℃。

4.权利要求1的嗜酸乳杆菌的制备方法，其特征在于，所述检测为GB/T 20191-2006方法检测活菌总数；牛津杯法检测乳酸菌素得率；液相色谱仪检测有机酸。