CN103254054B - 一种具有癌症预防作用的化合物及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种具有癌症预防作用的化合物，为式II结构的化合物。本发明还公开了一种具有抗癌活性的化合物的制备方法，其制备简单、易于控制、可操作性强。本发明中，式II结构的具有癌症预防作用的化合物为全新结构的化合物，通过醌还原酶诱导实验表明，该化合物均能诱导醌还原酶的表达，且细胞毒性低，可用来作为安全、副作用小的癌症预防药物。本发明具有癌症预防作用的化合物的制备方法，其制备简单、易于控制、可操作性强，易于工业化生产，具有广阔的应用前景。

Description

一种具有癌症预防作用的化合物及其制备方法
技术领域
本发明属于生物化学医药领域，具体涉及从啤酒花中提取分离的具有癌症预防作用的新化合物及其制备方法。
背景技术
啤酒花（Humulus lupulus），为多年生草本植物，蔓长6m以上，通体密生细毛，并有倒刺，叶对生、纸质，卵形或掌形，3～5裂，边缘具粗锯齿。花单生、雌雄异株，雄花排列成圆锥花序，雌花穗状，花期7～8月，果期9～10月。啤酒花的雌花序简称酒花，是啤酒酿造中不可缺少的原料之一。啤酒花亦是一种药食同源的植物，含有酒花树脂、多酚、黄酮等多种药用成分。现代药理研究表明，啤酒花具有较强的雌激素样作用、抗肿瘤作用、抗氧化作用以及癌症化学预防作用，而啤酒花中异戊烯基化的查尔酮类成分，被认为是啤酒花的主要活性成分。
癌症化学预防是指通过化合物直接调整癌症发生过程中的特殊步骤，阻断致癌原、防止DNA受自由基损伤、调节细胞的分化和凋亡等。人体二相代谢酶中的醌还原酶，可以将致癌物如苯等的代谢产物醌还原为氢醌，从而防止对人体有害的超氧化物的产生。因此，具有醌还原酶诱导活性的化合物，被认为是具有癌症预防作用的化合物。
公开号为CN1390537A（申请号为02133523.0）的中国发明专利申请公开了一种预防或治疗癌症的药物及其用途，为式①结构的化合物酒花新查尔酮，该化合物从植物啤酒花中提取，先用乙醇浸泡，溶剂回收至小体积，分别用石油醚和乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯部分回收溶剂后，乙酸乙酯部分用适量硅胶拌样后，进行硅胶柱层（200～300目），用CHCl3-MeOH梯度洗脱，得含h17段。该馏段进一步进行硅胶柱层析，CHCl3-Acetone梯度洗脱，得到酒花新查尔酮，并且通过实验表征该酒花新查尔酮具有抗癌活性。
发明内容
本发明提供了一种具有抗癌活性的化合物，从啤酒花雌花中提取，能够用于预防癌症。
一种具有抗癌活性的化合物，为式I结构的化合物；
式I结构的化合物波谱数据如表1所示，其标注如下：
表1（1H NMR400MHz,13C NMR100MHz,in CDCl3）
本发明还提供了一种具有癌症预防作用的化合物，从啤酒花雌花中提取，能够用于预防癌症。
一种具有癌症预防作用的化合物，为式II结构的化合物；
式II结构的化合物波谱数据如表2所示，其标注如下：
表2(1H NMR400MHz,13C NMR100MHz,in DMSO-d6)
δC δH(J in Hz) HMBC(C→H)
C=O 191.6 α,β
Α 122.4 7.77,d(15.6) β
Β 143.6 7.78,d(15.6) 2,6
1 126.0 α,β,3,5
2,6 130.5 7.56,d(8.4) 3,5,2/6
3,5 116.0 6.84,d(8.4) 2,6,3/5,4-OH
4 160.0 2,6,3,5,4-OH
4-OH 10.09,s
1′ 104.4 3′
2′ 160.9 3′
2′-OH 15.26,s
3′ 91.2 6.08,s
4′ 162.7 3′,7′
4′-OH 9.18,br s
5′ 106.5 3′,7′
6′ 159.2 7′,6′-OCH3
6′-OCH3 62.8 3.53,s
7′ 16.6 3.81,s
C=O′ 192.1 α′,β′
α′ 123.5 7.67,d(15.6) β′
β′ 143.0 7.69,d(15.6) 2′′,6′′
1′ 125.9 α′,β′,3′′,5′′
2′′,6′′ 130.6 7.58,d(8.4) 3′′,5′′,2′′/6′′
3′′,5′′ 116.1 6.85,d(8.4) 2′′,6′′,3′′/5′′,4′′-OH
4′′ 160.1 2′′,6′′,3′′,5′′,4′′-OH
4′′-OH 10.11,s
1′′′ 107.9 2′′-OH
2′′′ 160.7 1′′′′,2′′′-OH
2′′′-OH 13.56,s
3′′′ 110.9 1′′′′,2′′′-OH
4′′′ 164.9 7′
4′′′-OH 10.92,br s
5′′′ 113.2 7′
6′′′ 160.7 6′′′-OCH3
6′′′-OCH3 55.8 3.87,s
1′′′′ 21.7 3.22,d(6.8) 2′′′′
2′′′′ 122.8 5.12,t(6.8) 1′′′′,4′′′′,5′′′′
3′′′′ 130.2 1′′′′,4′′′′,5′′′′
4′′′′ 17.8 1.71,s 5′′′′
5′′′′ 25.5 1.61,s 4′′′′
本发明还提供了一种具有抗癌活性的化合物的制备方法，其制备简单、易于控制、可操作性强。
所述的具有抗癌活性的化合物的制备方法，包括以下步骤：
1）将啤酒花雌花序用提取溶剂浸提或回流提取，得到提取液；
2）将步骤1）中得到的提取液浓缩，用水稀释后再用萃取溶剂萃取，得到萃取液；
3）将步骤2）中得到的萃取液浓缩后进行硅胶柱层析，经薄层色谱检识或高效液相色谱检识得到所需要的馏分，再通过葡聚糖凝胶柱层析纯化，得到式I结构的具有抗癌活性的化合物。
步骤1）中，作为优选，所述的提取溶剂为醇或含醇质量百分含量为50%～99.99%的醇水溶液，采用醇或者特定质量百分含量的醇水溶液，其极性大小较为合适，适合本发明式I结构的具有抗癌活性的化合物的提取，同时采用醇或者醇水溶液作为溶剂，使用安全并且廉价。进一步优选，所述的醇为乙醇或甲醇，选择这两种醇时，提取溶剂的提取效率较高。更进一步优选，所述的醇为乙醇。
步骤2）中，作为优选，所述的萃取溶剂至少包括氯仿、二氯甲烷、乙酸乙酯中的一种，氯仿、二氯甲烷以及乙酸乙酯对本发明式I结构的具有抗癌活性的化合物的萃取效果较好，进一步优选，所述的萃取溶剂至少包括二氯甲烷，二氯甲烷非常适合对本发明式I结构的具有抗癌活性的化合物的萃取，萃取效果最好。
步骤3）中，作为优选，所述的硅胶柱层析中采用的洗脱溶剂为石油醚-乙酸乙酯体系、石油醚-丙酮体系、环己烷-丙酮体系、二氯甲烷-甲醇体系、氯仿-甲醇体系中的一种，当选用某一个具体的体系后，对体系内组分的体积比进行调整，并按极性由小到大进行洗脱，如实施例1中石油醚-乙酸乙酯体系，依次采用石油醚与乙酸乙酯体积比为10:1、10:2、10:3、10:4、10:5、10:6、10:7、10:8、10:9、10:10的石油醚-乙酸乙酯体系，该不同体积比的石油醚-乙酸乙酯体系的极性由小到大，依次进行洗脱，即按极性由小到大进行洗脱。进一步优选，所述的硅胶柱层析中采用的洗脱溶剂为石油醚-乙酸乙酯体系，石油醚-乙酸乙酯体系有利于本发明式I结构的具有抗癌活性的化合物的分离，分离得到纯度较高的式I结构的具有抗癌活性的化合物。
作为优选，所述的葡聚糖凝胶柱层析中采用的洗脱溶剂为二氯甲烷-甲醇体系、氯仿-甲醇体系中的一种，葡聚糖凝胶柱层析有利于本发明式I结构的具有抗癌活性的化合物的纯化。葡聚糖凝胶具有分子筛特性，可按分子量大小将化合物进行分离，同时它还有一定的反相分配色谱的作用，在由不同极性的溶剂组成的体系中，将化合物根据极性大小进行分离，另外对于带酚羟基的黄酮类化合物，能够根据酚羟基数目进行分离。进一步优选，所述的葡聚糖凝胶柱层析中采用的洗脱溶剂为二氯甲烷-甲醇体系，本发明式I结构的具有抗癌活性的化合物采用纯甲醇也能分离，但是采用二氯甲烷-甲醇体系，进行梯度洗脱，其洗脱效果更好。采用梯度洗脱，即在二氯甲烷与甲醇的体积比1:1至0:1范围内，依次选用体积比不同的二氯甲烷-甲醇体系，再依次进行洗脱。
本发明还提供了一种具有癌症预防作用的化合物的制备方法，其制备简单、易于控制、可操作性强。
所述的具有癌症预防作用的化合物的制备方法，包括以下步骤：
a）将啤酒花雌花序用提取溶剂浸提或回流提取，得到提取液；
b）将步骤a）中得到的提取液浓缩，用水稀释后再用萃取溶剂萃取，得到萃取液；
c）将步骤b）中得到的萃取液浓缩后进行硅胶柱层析，经薄层色谱检识或高效液相色谱检识得到所需要的馏分，再通过葡聚糖凝胶柱层析纯化，得到式II结构的具有癌症预防作用的化合物。
步骤a）中，作为优选，所述的提取溶剂为醇或含醇质量百分含量为50%～99.99%的醇水溶液，采用醇或者特定质量百分含量的醇水溶液，其极性大小较为合适，适合本发明式II结构具有癌症预防作用的化合物的提取，同时采用醇或者醇水溶液作为溶剂，使用安全并且廉价。进一步优选，所述的醇为乙醇或甲醇，选择这两种醇时，提取溶剂的提取效率较高。更进一步优选，所述的醇为乙醇。
步骤b）中，作为优选，所述的萃取溶剂至少包括氯仿、二氯甲烷、乙酸乙酯中的一种，氯仿、二氯甲烷以及乙酸乙酯对本发明式II结构的具有癌症预防作用的化合物的萃取效果较好，进一步优选，所述的萃取溶剂至少包括二氯甲烷，二氯甲烷非常适合对本发明式II结构的具有癌症预防作用的化合物的萃取，萃取效果最好。
步骤c）中，作为优选，所述的硅胶柱层析中采用的洗脱溶剂为石油醚-乙酸乙酯体系、石油醚-丙酮体系、环己烷-丙酮体系、二氯甲烷-甲醇体系、氯仿-甲醇体系中的一种，当选用某一个具体的体系后，对体系内组分的体积比进行调整，并按极性由小到大进行洗脱，如实施例1中石油醚-乙酸乙酯体系，依次采用石油醚与乙酸乙酯体积比为10:1、10:2、10:3、10:4、10:5、10:6、10:7、10:8、10:9、10:10的石油醚-乙酸乙酯体系，该不同体积比的石油醚-乙酸乙酯体系的极性由小到大，依次进行洗脱，即按极性由小到大进行洗脱。进一步优选，所述的硅胶柱层析中采用的洗脱溶剂为石油醚-乙酸乙酯体系，石油醚-乙酸乙酯体系有利于本发明式II结构的具有癌症预防作用的化合物的分离，分离得到纯度较高的式II结构的具有癌症预防作用的化合物。
作为优选，所述的葡聚糖凝胶柱层析中采用的洗脱溶剂为二氯甲烷-甲醇体系、氯仿-甲醇体系中的一种，葡聚糖凝胶柱层析有利于式II结构的具有癌症预防作用的化合物的纯化。葡聚糖凝胶具有分子筛特性，可按分子量大小将化合物进行分离，同时它还有一定的反相分配色谱的作用，在由不同极性的溶剂组成的体系中，将化合物根据极性大小进行分离，另外对于带酚羟基的黄酮类化合物，能够根据酚羟基数目进行分离。进一步优选，所述的葡聚糖凝胶柱层析中采用的洗脱溶剂为二氯甲烷-甲醇体系，本发明式II结构的具有癌症预防作用的化合物采用纯甲醇也能分离，但是采用二氯甲烷-甲醇体系，进行梯度洗脱，其洗脱效果更好。采用梯度洗脱，即在二氯甲烷与甲醇的体积比1:1至0:1范围内，依次选用体积比不同的二氯甲烷-甲醇体系，再依次进行洗脱。
本发明中，对式I结构的具有抗癌活性的化合物、式II结构的具有癌症预防作用的化合物进行醌还原酶诱导实验，发现其具有醌还原酶诱导活性。人体二相代谢酶中的醌还原酶，可以将致癌物如苯等的代谢产物醌还原为氢醌，从而防止对人体有害的超氧化物的产生。因此，具有醌还原酶诱导活性的化合物，被认为是具有癌症预防作用的化合物，醌还原酶诱导值越大，癌症预防作用越强。通过实验结果可知，式I结构的具有抗癌活性的化合物和式II结构的具有癌症预防作用的化合物均能诱导醌还原酶的表达，且细胞毒性低，可用来作为安全、副作用小的癌症预防药物。
与现有技术相比，本发明具有如下优点：
本发明中，式I结构的具有抗癌活性的化合物和式II结构的具有癌症预防作用的化合物为全新结构的化合物，通过醌还原酶诱导实验表明，上述两种化合物均能诱导醌还原酶的表达，且细胞毒性低，可用来作为安全、副作用小的癌症预防药物。
本发明具有抗癌活性的化合物的制备方法以及具有癌症预防作用的化合物的制备方法，其制备简单、易于控制、可操作性强，易于工业化生产，具有广阔的应用前景。
附图说明
图1为实施例1中式I结构的具有抗癌活性的化合物的1H-NMR核磁共振氢谱；
图2为实施例1中式I结构的具有抗癌活性的化合物的13C-NMR核磁共振碳谱；
图3为实施例1中式I结构的具有抗癌活性的化合物的HSQC异核单量子相关谱；
图4为实施例1中式I结构的具有抗癌活性的化合物的HMBC多键碳氢相关谱；
图5为实施例1中式I结构的具有抗癌活性的化合物的1H-1H COSY氢-氢相关谱；
图6为实施例1中式II结构的具有癌症预防作用的化合物的1H-NMR核磁共振氢谱；
图7为实施例1中式II结构的具有癌症预防作用的化合物的13C-NMR核磁共振碳谱；
图8为实施例1中式II结构的具有癌症预防作用的化合物的HSQC异核单量子相关谱；
图9为实施例1中式II结构的具有癌症预防作用的化合物的HMBC多键碳氢相关谱；
图10为实施例1中式II结构的具有癌症预防作用的化合物的1H-1HCOSY氢-氢相关谱。
具体实施方式
实施例1
1）500g啤酒花雌花序用4.5L的乙醇水溶液（乙醇水溶液中乙醇的质量百分数为95%）过夜浸提2次，每次浸提的时间为12h，提取液合并浓缩至干，得到提取浸膏；
2）再将提取浸膏用热水分散后，依次用石油醚、二氯甲烷萃取，将所得的二氯甲烷萃取液浓缩得到48克萃取浸膏；
3）萃取浸膏用50克100～200目硅胶拌样，在500g硅胶柱上进行第一次层析，第一洗脱溶剂依次采用石油醚与乙酸乙酯体积比为10:1、10:2、10:3、10:4、10:5、10:6、10:7、10:8、10:9、10:10的石油醚-乙酸乙酯体系；
4）取步骤3）中石油醚与乙酸乙酯体积比为10:4、10:5、10:6的石油醚-乙酸乙酯体系得到的洗脱部位，合并后在500g硅胶柱上进行第二次层析，第二洗脱溶剂依次采用石油醚与乙酸乙酯体积比为5:1、5:2、5:3的石油醚-乙酸乙酯体系，经薄层色谱检识并合并第一化合物的馏分，合并后用Sephadex LH-20葡聚糖凝胶柱层析纯化，葡聚糖凝胶柱层析中采用的洗脱溶剂为二氯甲烷-甲醇体系，采用梯度洗脱，按极性有小到大，依次选用二氯甲烷与甲醇的体积比为500：1、二氯甲烷与甲醇的体积比为250：1、二氯甲烷与甲醇的体积比为100：1、二氯甲烷与甲醇的体积比为50：1、二氯甲烷与甲醇的体积比为25：1、二氯甲烷与甲醇的体积比为10：1的二氯甲烷-甲醇体系进行梯度洗脱，二氯甲烷与甲醇的体积比为10：1的二氯甲烷-甲醇体系已经能够将式I结构的具有抗癌活性的化合物完全洗脱下来了，重结晶得到2.2mg式I结构的具有抗癌活性的化合物；
5）取步骤3）中石油醚与乙酸乙酯体积比为10:4、10:5、10:6的石油醚-乙酸乙酯体系得到的洗脱部位，合并后进行二次硅胶柱层析，第二洗脱溶剂依次采用石油醚与乙酸乙酯体积比为5:2、5:3的石油醚-乙酸乙酯体系，经薄层色谱检识并合并第二化合物的馏分（在硅胶柱层析中，第一化合物的馏分先流出，第二化合物的馏分后流出），合并后用Sephadex LH-20葡聚糖凝胶柱层析纯化，葡聚糖凝胶柱层析中采用的洗脱溶剂为二氯甲烷-甲醇体系，采用梯度洗脱，按极性有小到大，依次选用二氯甲烷与甲醇的体积比为500：1、二氯甲烷与甲醇的体积比为250：1、二氯甲烷与甲醇的体积比为100：1、二氯甲烷与甲醇的体积比为50：1、二氯甲烷与甲醇的体积比为25：1、二氯甲烷与甲醇的体积比为10：1的二氯甲烷-甲醇体系进行梯度洗脱，二氯甲烷与甲醇的体积比为10：1的二氯甲烷-甲醇体系已经能够将式II结构的具有癌症预防作用的化合物完全洗脱下来了，重结晶得到3.1mg式II结构的具有癌症预防作用的化合物；
将步骤4）得到的式I结构的具有抗癌活性的化合物通过HR-ESI-MS高分辨质谱分析，确定该化合物的分子式为C27H32O5，并结合图1至图5以及核磁共振分析结果归纳的表1，δH7.55(2H,d,J=8.6Hz),δH6.84(2H,d,J=8.6Hz)为对位取代的苯环，δH7.79(1H,d,J=15.6Hz),δH7.83(1H,d,J=15.6Hz)为反式共轭碳碳双键，一个羰基及六个化学位移大于100的碳，代表了查尔酮的母核结构。另外δH5.24(1H,t,J=7.3Hz),δH3.32(2H,d,J=7.3Hz),δH1.80(3H,s),δH1.68(3H,s)为异戊烯基，而δH1.38(3H,s),δH1.37(3H,s)，δH2.98(1H,dd,J=16.8,5.0Hz)，δH2.73(1H,dd,J=16.8,6.0Hz)，δH3.85(1H,t,J=5.6Hz)和δC77.0则为环化异戊烯基，两个取代基的的连接位置由HMBC多键碳氢相关谱确定，最后确定结构如式I所示。
将步骤5）得到的式II结构的具有癌症预防作用的化合物通过HR-ESI-MS高分辨质谱分析，确定该化合物的分子式为C38H36O10，并结合图6至图10以及核磁共振分析结果归纳的表2，δH7.56(2H,d,J=8.4Hz),δH6.84(2H,d,J=8.4Hz);δH7.58(2H,d,J=8.4Hz),δH6.85(2H,d,J=8.4Hz)为两个对位取代的苯环，δH7.77(1H,d,J=15.6Hz),δH7.78(1H,d,J=15.6Hz);δH7.67(1H,d,J=15.6Hz),δH7.69(1H,d,J=15.6Hz)为两个反式共轭碳碳双键,两个羰基及另外十二个化学位移大于100的碳，表示该化合物有两个查尔酮母核结构。δH5.12(1H,t,J=6.8Hz),δH3.22(2H,d,J=6.8Hz),δH1.71(3H,s),δH1.61(3H,s)为异戊烯基，δH3.81(2H,s),δC16.5为亚甲基，由HMBC多键碳氢相关谱确定一个异戊烯基取代在一个查尔酮上，两个查尔酮则由亚甲基连接，最后确定结构如式II所示。
醌还原酶诱导实验
细胞毒性测定：鼠肝癌细胞株Hepa 1c1c7细胞养于96孔板中，每孔种104个左右细胞，在37℃、含5%（体积百分数）CO2的空气的环境条件下生长24小时，然后给药，再培养24小时后，弃去培养基，每孔加入100μL结晶紫溶液（结晶紫溶液由2g的结晶紫与100mL的乙醇配置而成，即结晶紫溶液的质量体积百分数为2%，结晶紫采用厂家sigma生产的产品），常温25℃下放置染色10分钟。弃去结晶紫溶液，用水迅速洗涤3次，甩干后每孔加入200μL0.5%的SDS溶液（SDS溶液由0.5g SDS与100mL的质量百分数为50%的乙醇水溶液配置而成，其中，SDS中文名为：十二烷基磺酸钠，采用厂家sigma生产的产品），常温25℃下振荡5min，595nm下测吸光度值。每组实验应至少独立重复3次并取平均值作为最后结果。
细胞存活率=加药组吸光度/空白组吸光度。
鼠肝癌细胞株Hepa 1c1c7中能够被诱导出的醌还原酶很容易进行测定。醌还原酶诱导测定的基本原理是葡萄糖-6-磷酸可在辅因子NADP存在的条件下被葡萄糖-6-磷酸脱氢酶还原，这时可产生NADPH，NADPH一旦形成便作为一种供电子体使甲萘醌还原为甲萘氢醌，甲萘氢醌可使MTT还原为甲臜，最后可对甲臜进行吸光度的测定。NADP和甲萘醌在该催化循环过程中可再生，在实验中不用对其进行补充。醌还原酶诱导剂可增加甲萘氢醌的产生，使更多的甲臜形成。
醌还原酶诱导活性测定：鼠肝癌细胞株Hepa 1c1c7细胞养于96孔板中，每孔种104个左右细胞，在37℃、含5%（体积百分数）CO2的空气的环境条件下生长24小时，然后给药，再培养24小时后，弃去培养基，每孔加入50μl细胞裂解液[细胞裂解液的质量体积百分数（w/v）为0.8%，即细胞裂解液由0.8g洋地黄皂苷与100mL的浓度为2mM（mmol/L）EDTA（乙二胺四乙酸）水溶液配制而成，其中洋地黄皂苷采用厂家百灵威生产的产品]。振摇裂解10min后，然后在每孔加入现配的混合液200μL[该混合液应临用前配制，所加试剂的溶剂均为去离子水，将7.5mL0.5M的Tris-HCl（三羟甲基氨基甲烷盐酸盐）缓冲液（pH7.4）、1mL1.5%的Tween-20（吐温，由1.5g的Tween-20与100mL的去离子水配置）、0.1mL7.5mM的FAD（黄素腺嘌呤二核苷酸）水溶液、1mL150mM的葡萄糖-6-磷酸水溶液、90μL50mM的NADP（烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸）水溶液、300单位葡萄糖-6-磷酸脱氢酶、100mg小牛血清以及45mg MTT，再加入去离子水配制成150mL的溶液，在加入混合液之前，应在150mL的溶液加入0.2mL50mM甲萘醌（溶剂为乙腈）]。待加入完成后将96孔板轻轻振摇5分钟，酶标仪595nm测定吸光值。每组实验应至少独立重复3次。
醌还原酶诱导值=[(加药组吸光度-空白组吸光度）/（阴性对照组吸光度-空白组吸光度）]/(加药组吸光度/空白组吸光度)。
将实施例1制备的式I结构的具有抗癌活性的化合物和式II结构的具有癌症预防作用的化合物分别溶于DMSO(二甲基亚砜)后给药，96孔板中给药后，使得96孔板中，在一些孔中，式I结构的具有抗癌活性的化合物的给药浓度为20μM（μmol/L）或10μM，该给药浓度为给药后化合物在孔中的浓度，在还有一些孔中，式II结构的具有癌症预防作用的化合物的给药浓度为20μM或10μM，式I结构的具有抗癌活性的化合物和式II结构的具有癌症预防作用的化合物在孔中都是单独给药，在另外一些孔中，加入等量的DMSO，作为阴性对照，即作为空白组。经过醌还原酶诱导实验，其实验结果如表3所示。
表3
由表3的数据可知，式I结构的具有抗癌活性的化合物和式II结构的具有癌症预防作用的化合物均能诱导醌还原酶的表达，且细胞毒性低，可用来作为安全、副作用小的癌症预防药物。

Claims (2)

1.一种具有癌症预防作用的化合物，其特征在于，为式II结构的化合物；
2.根据权利要求1所述的具有癌症预防作用的化合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)500g啤酒花雌花序用4.5L的乙醇水溶液过夜浸提2次，乙醇水溶液中乙醇的质量百分数为95％，每次浸提的时间为12h，提取液合并浓缩至干，得到提取浸膏；
2)再将提取浸膏用热水分散后，依次用石油醚、二氯甲烷萃取，将所得的二氯甲烷萃取液浓缩得到48克萃取浸膏；
3)萃取浸膏用50克100～200目硅胶拌样，在500g硅胶柱上进行第一次层析，第一洗脱溶剂依次采用石油醚与乙酸乙酯体积比为10:1、10:2、10:3、10:4、10:5、10:6、10:7、10:8、10:9、10:10的石油醚-乙酸乙酯体系；
4)取步骤3)中石油醚与乙酸乙酯体积比为10:4、10:5、10:6的石油醚-乙酸乙酯体系得到的洗脱部位，合并后进行二次硅胶柱层析，第二洗脱溶剂依次采用石油醚与乙酸乙酯体积比为5:2、5:3的石油醚-乙酸乙酯体系，经薄层色谱检识并合并第二化合物的馏分，在硅胶柱层析中，第一化合物的馏分先流出，第二化合物的馏分后流出，合并后用Sephadex LH-20葡聚糖凝胶柱层析纯化，葡聚糖凝胶柱层析中采用的洗脱溶剂为二氯甲烷-甲醇体系，采用梯度洗脱，按极性有小到大，依次选用二氯甲烷与甲醇的体积比为500：1、二氯甲烷与甲醇的体积比为250：1、二氯甲烷与甲醇的体积比为100：1、二氯甲烷与甲醇的体积比为50：1、二氯甲烷与甲醇的体积比为25：1、二氯甲烷与甲醇的体积比为10：1的二氯甲烷-甲醇体系进行梯度洗脱，二氯甲烷与甲醇的体积比为10：1的二氯甲烷-甲醇体系已经能够将式II结构的具有癌症预防作用的化合物完全洗脱下来了，重结晶得到3.1mg式II结构的具有癌症预防作用的化合物。
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Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1893963A (zh) * 2003-12-16 2007-01-10 生物动力公司 具有雌激素和抗增殖活性的啤酒花提取物的生产方法
CN101272689A (zh) * 2005-07-29 2008-09-24 生物活性股份有限公司 异戊二烯类黄酮制剂
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Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1893963A (zh) * 2003-12-16 2007-01-10 生物动力公司 具有雌激素和抗增殖活性的啤酒花提取物的生产方法
CN101272689A (zh) * 2005-07-29 2008-09-24 生物活性股份有限公司 异戊二烯类黄酮制剂
CN101440029A (zh) * 2008-11-04 2009-05-27 中国食品发酵工业研究院 一种从啤酒花中提取黄腐酚的方法

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