CN102633808B - 一种去氧鬼臼毒素的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及天然药物和化学药物领域，具体涉及一种去氧鬼臼毒素的制备方法。其特征是：将鬼臼毒素与NaBH4和CF3COOH反应即得，即通过加入还原试剂和质子酸将鬼臼毒素还原成去氧鬼臼毒素。本发明中所使用的原料来源广泛且价格低廉，适于工业化生产。
Description
技术领域
本发明涉及天然药物和化学药物领域，具体涉及一种去氧鬼臼毒素的制备方法。
背景技术
去氧鬼臼毒素(简称DPT)是从木质素类植物中提取纯化而得的化合物。化学名：5R-5，8，8a，9-四氢-5-(3，4，5-三甲氧苯基)呋喃(3’，4’：6，7)萘并-[2，3-d]-1，3-间二氧杂环烯-6(5aH)-酮，结构式如下：
从上世纪90年代开始即有药理实验报道，证明DPT对P-388白血病、人肺癌A-549及结肠癌HT-29的细胞株具有体外抑制作用(Arch Pharm(Weinheim).1994Mar；327(3)：157-9.PlataMed.1993June；59(3)：246-9)，但仅仅停留在体外活性试验阶段。十多年来之所以没有体内活性的试验报导，其主要原因是该化合物不溶于水，无法制成可供静脉注射的制剂。发明人在前期研究中，将DPT制备成环糊精包合物从而制成水溶性制剂，见专利CN 101693112，使其可以进行动物体内外试验、进而开发成治疗多种癌症的药物。然而目前市面上尚未见高纯度的去氧鬼臼毒素销售，所有文献报道的作者所用去氧鬼臼毒素均为自给自用，制备方法均为自我摸索，不利于规模生产，且大多数均为通过植物提取而得。刘发等(刘发，尚天民，傅永丰，华贵臼化学成分研究，药学学报，1979，14(4)：241-245)用氧化铝柱从华鬼臼中分离制备了去氧鬼臼毒素，洗脱剂为苯-乙醇，该方法不仅周期长，而且使用了毒性极大的有机溶剂-苯；蒋子华等(蒋子华，陈泗英，川八角莲的化学成分，云南植物研究，1989，11(4)：479-481)用多次硅胶柱层析和重结晶方法从川八角莲中分离制备了去氧鬼臼毒素，该方法的主要不足是需要经过多次硅胶柱层析，制备周期长、生产成本高；尚明英等(尚明英，李军，蔡少青等，藏药小叶莲的化学成分研究，中草药，2000，31(8)：569-571)用硅胶柱层析法，以石油醚-乙酸乙酯梯度洗脱，经反复精制(即多次硅胶柱层析)，从小叶莲中分离制备了去氧鬼臼毒素，该方法的主要不足也是需要经过多次硅胶柱层析，制备周期长、生产成本高。用硅胶柱分离、制备化合物的常规方法是使用径-高比大于1∶10的硅胶柱，空白硅胶用量大，达浸膏量的30倍以上(中国科学院上海药物所编著，中草药有效成分提取与分离(第二版).上海科学技术出版社，1983：90-95)，对于桃儿七药材而言，由于药材的提取浸膏得率为5％-15％，折算成常规硅胶用量应为药材的150％-450％，而且需要经过多次上柱精制，具有生产周期长，溶剂用量大，产品成本高等不足。虽然在药用植物中可以提取出去氧鬼臼毒素，但是据试验报道，其结构类似物鬼臼毒素的含量在植物中的含量10倍于去氧鬼臼毒素(程俊侠，苏世平，杨永智，等.西北农林科技大学学报：自然科学版，2005，33(4)：57-60.王继栋，张兴.西北农业大学学报，2000，28(5)：14-17.)。
鬼臼毒素化学名：5R-5，8，8a，9-四氢-9-羟-5-(3，4，5-三甲氧苯基)呋喃(3’，4’：6，7)萘并-[2，3-d]-1，3-间二氧杂环烯-6(5aH)-酮，结构式如下：
如果能通过鬼臼毒素转化为去氧鬼臼毒素，这样就能大大提高去氧鬼臼毒素的产量，以便于进行去氧鬼臼毒素的抗癌症方面的药理毒理研究，开发出新型的抗肿瘤药。在CN 101497618、US 6284789中均是通过氢气、钯碳还原的方法是鬼臼毒素转化为去氧鬼臼毒素，该方法最主要的缺点就是在生产中必须用到高压，而且用到易燃性气体氢气，这都为生产过程中带来了安全隐患，而且该法制备去氧鬼臼毒素耗能高，产率低，大大增加了生产中所需要投入的资金。如何更高效地使得鬼臼毒素转化为去氧鬼臼毒素是本研究的重点。
发明内容
本发明公开了一种制备去氧鬼臼毒素，通过鬼臼毒素转化为去氧鬼臼毒素，即通过加入还原试剂和质子酸将鬼臼毒素还原成去氧鬼臼毒素。本发明制备方法反应条件温和，制备简单。通过研究本发明发现还原试剂优选NaBH4，质子酸优选CF3COOH可得到高收率、纯度高的产品。
本发明的制备方法包括：将鬼臼毒素与NaBH4和CF3COOH反应即得。
其中鬼臼毒素与NaBH4的摩尔比优选1∶2～1∶20。
鬼臼毒素与NaBH4的摩尔比更优选1∶10。
鬼臼毒素与CF3COOH的重量体积比优选1g∶5ml～1g∶50ml。
鬼臼毒素与CF3COOH的重量体积比更优选1g∶15ml。
反应温度优选20℃～90℃。
反应温度更优选50℃～70℃。
上述反应物可用一般的后处理即可得到产品，优选的方法是用乙酸乙酯萃取产物，干燥即得。
为了得到更纯的产品，本发明在上述制备的基础上还包括进一步对产品重结晶纯化，优选用乙酸乙酯和甲醇的混合溶剂对产品进行重结晶。
重结晶的混合溶剂中乙酸乙酯∶甲醇的体积比优选1∶4～1∶10。
本发明还原反应的反应溶剂优选自二氯甲烷、氯仿、四氯化碳、正己烷、苯、甲苯、氯苯、硝基苯、二甲苯、乙醚、叔丁基醚、N，N-二甲基甲酰胺、N，N-二甲基乙酰胺、乙腈、乙酸乙酯、四氢呋喃、二氧六环中的一种或几种。
本发明的反应时间10分钟以上即可，考虑成本因素优选10分钟到72小时，更优选反应时间为20分钟。
本发明的制备方法相比于CN 101497618、US 6284789中钯碳还原，本发明中所使用的NaBH4来源更广泛、且价格更低廉；CN 101497618、US 6284789中应用了可燃性气体氢气，增加了生产中的危险系数，在本发明中所用试剂CF3COOH更安全可靠；在后处理方面，本发明只需要将反应液中倾入水中，进而通过有机溶剂萃取，较CN 101497618、US 6284789更简便；本发明经过生产重结晶所得产品纯度≥99％，产率约为80％，故而本发明制备去氧鬼臼毒素方法更适于工业化生产。
具体实施方式
实施例1
在50ml单颈瓶中加入1.0g鬼臼毒素和0.91g NaBH4，再加入25ml无水四氢呋喃；缓慢滴加15ml CF3COOH，待滴加完毕，升温至70℃，反应约20分钟，反应完毕。将反应液倾至100ml水中，用10ml乙酸乙酯萃取三遍，分离得有机层。再用50ml饱和食盐水洗涤有机层，无水硫酸钠干燥有机层。减压除去溶剂即得去氧鬼臼毒素粗品，再经过乙酸乙酯∶甲醇＝1∶6的混合溶剂重结晶即得纯度99.2％的去氧鬼臼毒素纯品，产率为80％。白色结晶性粉末，mp 165～167℃；
UV：在甲醇溶液中，λmax 292.1、204.3nm为取代苯环的B带和K带特征吸收收；
IR：1589、1506、1483cm-1：苯环骨架，1765cm-1：C＝O伸缩振动；1223、1157cm-1：C-O-C伸缩振动。说明本品结构中有内酯结构；1241、1035、930cm-1：C-O-C伸缩振动。说明本品结构中有芳烷醚(ArOR)和环醚结构；
质谱(ESI+)：测得本品的[M+H]+和[M+Na]+峰的质荷比分别为421和399；
NMR进一步证实上述母核的存在：δH 6.66(1H，s)、6.51(H，s)、5.93(1H，d)、5.91(1H，d)、4.58(1H，m)、4.43(1H，m)、3.89(1H，m)、3.05(1H，m)、2.80～2.70(3H，m)及δC32.9、71.9、101.0(3个仲C)、32.6、43.6、47.3(3个饱和叔C)、108.3、10.3(2个芳叔C)、174.7、146.9、146.6、130.5、128.2(5个不饱和季C)。
实施例2
在50ml单颈瓶中加入1.0g鬼臼毒素，1.0g NaBH4，再加入25ml无水四氢呋喃；缓慢滴加20ml CF3COOH，待滴加完毕，升温至50℃，反应约2小时，反应完毕。将反应液倾至100ml水中，用10ml乙酸乙酯萃取三遍，分离得有机层。再用50ml饱和食盐水洗涤有机层，无水硫酸钠干燥有机层。减压除去溶剂即得去氧鬼臼毒素粗品，再经过乙酸乙酯∶甲醇＝1∶10的混合溶剂重结晶即得纯度98.2％的去氧鬼臼毒素纯品，产率为82％。
实施例3
在50ml单颈瓶中加入1.0g鬼臼毒素，1.20g NaBH4，再加入25ml无水四氢呋喃；缓慢滴加25ml CF3COOH，待滴加完毕，室温下反应，反应约72小时，反应完毕。将反应液倾至100ml水中，用10ml乙酸乙酯萃取三遍，分离得有机层。再用50ml饱和食盐水洗涤有机层，无水硫酸钠干燥有机层。减压除去溶剂即得去氧鬼臼毒素粗品，再经过乙酸乙酯∶甲醇＝1∶4的混合溶剂重结晶即得纯度99.1％的去氧鬼臼毒素纯品，产率为73％。
实施例4
在50ml单颈瓶中加入1.0g鬼臼毒素，1.8g NaBH4，再加入25ml无水四氢呋喃；缓慢滴加50mlCF3COOH，待滴加完毕，升温至70℃，反应约20分钟，反应完毕。将反应液倾至100ml水中，用10ml乙酸乙酯萃取三遍，分离得有机层。再用50ml饱和食盐水洗涤有机层，无水硫酸钠干燥有机层。减压除去溶剂即得去氧鬼臼毒素粗品，再经过乙酸乙酯∶甲醇＝1∶6的混合溶剂重结晶即得纯度99.3％的去氧鬼臼毒素纯品，产率为80％。
实施例5
在50ml单颈瓶中加入1.0g鬼臼毒素，0.18g NaBH4，再加入25ml无水四氢呋喃；缓慢滴加5mlCF3COOH，待滴加完毕，升温至70℃，反应约20小时，反应完毕。将反应液倾至100ml水中，用10ml乙酸乙酯萃取三遍，分离得有机层。再用50ml饱和食盐水洗涤有机层，无水硫酸钠干燥有机层。减压除去溶剂即得去氧鬼臼毒素粗品，再经过乙酸乙酯∶甲醇＝1∶6的混合溶剂重结晶即得纯度97.2％的去氧鬼臼毒素纯品，产率为67％。
实施例6
在50ml单颈瓶中加入1.0g鬼臼毒素，0.70g NaBH4，再加入25ml无水四氢呋喃；缓慢滴加35mlCF3COOH，待滴加完毕，升温至50℃，反应约2小时，反应完毕。将反应液倾至100ml水中，用10ml乙酸乙酯萃取三遍，分离得有机层。再用50ml饱和食盐水洗涤有机层，无水硫酸钠干燥有机层。减压除去溶剂即得去氧鬼臼毒素粗品，再经过乙酸乙酯∶甲醇＝1∶8的混合溶剂重结晶即得纯度97.7％的去氧鬼臼毒素纯品，产率为78％。
Claims (7)
1.一种去氧鬼臼毒素的制备方法，包括：将鬼臼毒素与NaBH4和CF3COOH反应即得，其中鬼臼毒素与NaBH4的摩尔比为1:2～1:20；鬼臼毒素与CF3COOH的重量体积比为1g:5ml～1g:50ml；反应温度为20℃～90℃。
2.权利要求1的制备方法，其中鬼臼毒素与NaBH4的摩尔比为1:10。
3.权利要求1的制备方法，其中鬼臼毒素与CF3COOH的重量体积比为1g:15ml。
4.权利要求1的制备方法，其中反应温度为50℃～70℃。
5.权利要求1的制备方法，还包括用乙酸乙酯和甲醇的混合溶剂对产品进行重结晶。
6.权利要求5的制备方法，其中乙酸乙酯:甲醇的体积比为1:4～1:10。
7.权利要求1的制备方法，其中反应溶剂选自二氯甲烷、氯仿、四氯化碳、正己烷、苯、甲苯、氯苯、硝基苯、二甲苯、乙醚、叔丁基醚、N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺、乙腈、乙酸乙酯、四氢呋喃、二氧六环中的一种或几种。
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