CN101805344A

CN101805344A - 白鲜皮中单体化合物的提纯方法

Info

Publication number: CN101805344A
Application number: CN201010156107A
Authority: CN
Inventors: 刘东锋; 郭琴; 杨成东
Original assignee: Nanjing Zelang Medical Technology Co Ltd
Current assignee: Nanjing Zelang Medical Technology Co Ltd
Priority date: 2010-04-27
Filing date: 2010-04-27
Publication date: 2010-08-18

Abstract

本发明属于医药技术领域，具体涉及一种从白鲜皮中分离纯化高纯度的单体化合物白鲜碱的方法。该方法包括用酸醇经液泛法提取，大孔树脂吸附和氧化镁柱层析分离精制、重结晶。本发明制备的白鲜碱含量达95％以上，适于工业化生产，能够提取纯度较高的白鲜碱。

Description

白鲜皮中单体化合物的提纯方法

技术领域：

本发明属于医药技术领域，涉及白鲜皮中单体化合物的提纯方法，尤其是分离纯化白鲜碱的方法。

背景技术：

白鲜属芸香科植物白鲜Dictammus dasycarpus Turcz.的干燥根皮。具有清热燥湿，祛风解毒功效。用于湿热疮毒，黄水淋漓，湿疹，风疹，疥癣疮癞，风湿热痹，黄疸尿赤。白鲜碱(dicatamine)属于喹啉类生物碱，分子式C₁₂H₉NO₂，分子量199.20；为棱柱结晶，熔点133℃，溶于热乙醇及氯仿，略微溶于乙醚，实际不溶于水。中药白鲜皮主要化学成分为生物碱，自鲜碱为其重要活性成分，含量0.022-0.1％。

药理研究表明白鲜碱可通过间接影响真菌细胞遗传物质的正常合成从而抑制真菌生长甚至导致死亡，其在紫外线长波UVA照射下，可钝化小鼠MCMV和togavirus，具有体外抗癌活性，另外白鲜碱还具有动脉血管舒张效应，为钙离子拮抗剂，能与DNA双螺旋结构中的嘧啶碱基形成加成物，有可能成为牛皮癣治疗药物，发展前景可观。白鲜碱具有多样生物活性，需要进行更加深入的研究，这就需要较多的高含量白鲜碱，然而目前国内尚无白鲜碱提取工艺方面的相关专利，李翔等公开的文献“从白鲜皮中同时制备梣酮、白鲜碱、黄柏酮单体的方法”采用乙酸乙酯回流提取，硅胶常压柱层析，石油醚-丙酮梯度洗脱，丙酮重结晶，该方法提取率低，且晶形不理想。国外文献主要通过人工合成白鲜碱，反应条件不易控制，且产品不稳定，产率低。

发明内容：

本发明的目的是客服现有技术的缺陷，提供一种适合工业生产，并且提取纯化白鲜皮中重要活性成分白鲜碱的工艺。

本发明的目的是通过以下技术方案实现的：

(1)提取：将粉碎后的白鲜皮用4-6倍(V/W)水回流提取杂质，残渣干燥后用8-15倍(V/W)的80％-95％体积浓度的乙醇-酸水溶液液泛法提取3-6小时，提取液冷却、减压浓缩成稀浸膏；

(2)树脂吸附分离：将上述稀浸膏调pH10-11，乙酸乙酯反复萃取，至萃余液生物碱反应为阴性。将乙酸乙酯萃取液上D101、AB-8、XAD-4或XAD-7大孔吸附树脂饱和吸附，石油醚洗脱杂质，氯仿-乙醇(50∶1-4∶1)洗脱，HPLC跟踪检识，洗脱至无白鲜碱流分，收集白鲜碱流分；

(3)氧化镁柱层析：将白鲜碱流分干法上氧化镁柱层析，戊醇-乙酸乙酯(6∶1-2∶1)洗脱，收集白鲜碱流分；

(4)重结晶：将白鲜碱流分减压浓缩，真空干燥得粗品。将粗品用热无水乙醇饱和溶解，冷却，缓慢加入去离子水，静置结晶，过滤冷冻干燥即得产品。

所述乙醇-酸水溶液为乙醇与盐酸水溶液的混合溶液，盐酸浓度为总提取溶剂体积的0.1-0.5％。

所述调pH所用碱可选氨水溶液、氢氧化钠溶液或碳酸氢钠溶液。

所述大孔树脂洗脱条件：洗脱流速控制在0.5-1BV/h，每500ml洗脱液接收一部分，洗脱至HPLC检识无白鲜碱；树脂用量为药材等倍量。

所述氧化镁为与原料的比例为10∶1-5∶1，优选比例7∶1。

综合以上所述，本发明具有以下特点：

1)水回流提取杂质，可除去部分水溶性杂质，初步提高了产品质量。

2)以液泛法代替传统的回流提取法、索式提取法、渗漉法、浸提法，快速、高效。

3)酸醇提取提取，且较乙酸乙酯提取成本低。

具体实施方式：

下面结合实施例对本发明做进一步的说明。

实施例1：

将白鲜皮粉碎，取10kg投入自制液泛提取罐，加入50L水提取，弃去提取液，残渣真空干燥后加入100L含0.1％盐酸的85％乙醇溶液提取4小时，将提取液趁热过滤，冷却，减压浓缩至密度为1.2，加10％氨水调pH至10，加乙酸乙酯反复萃取至萃余液生物碱反应为阴性。将乙酸乙酯萃取液上预处理好的XAD-4大孔吸附树脂饱和吸附，先用4BV石油醚洗脱杂质，再用氯仿-乙醇(48∶2)洗脱，HPLC跟踪检识，收集白鲜碱流分，减压浓缩得到粗提物；将相当于粗提物5倍量的氧化镁装柱，预处理，将流分进行氧化镁柱层析，用戊醇-乙酸乙酯(65∶25)洗脱，将流分分别减压浓缩、真空干燥得粗晶。将粗晶用无水乙醇加热饱和溶解，冷却，缓慢加入1倍饱和液的去离子水，静置结晶，过滤，冷冻干燥后称重得白鲜碱3.8g(含量为95.4％)。

实施例2：

将白鲜皮粉碎，取20kg投入自制液泛提取罐，加入80L水提取，弃去提取液，残渣真空干燥后加入300L含0.5％盐酸的80％乙醇溶液提取6小时，将提取液趁热过滤，冷却，减压浓缩至密度为1.3，加5％氢氧化钠调pH至11，加乙酸乙酯反复萃取至萃余液生物碱反应为阴性。将乙酸乙酯萃取液上预处理好的D101大孔吸附树脂饱和吸附，先用5BV石油醚洗脱杂质，再用氯仿-乙醇(75∶5)洗脱，HPLC跟踪检识，收集白鲜碱流分，减压浓缩得到粗提物；将相当于粗提物8倍量的氧化镁装柱，预处理，将流分进行氧化镁柱层析，用戊醇-乙酸乙酯(75∶25)洗脱，将流分分别减压浓缩、真空干燥得粗晶。将粗晶用无水乙醇加热饱和溶解，冷却，缓慢加入1.5倍饱和液的去离子水，静置结晶，过滤，冷冻干燥后称重得白鲜碱7.8g(含量为96.1％)。

实施例3：

将白鲜皮粉碎，取50kg投入自制液泛提取罐，加入300L水提取，弃去提取液，残渣真空干燥后加入400L含0.2％盐酸的90％乙醇溶液提取3小时，将提取液趁热过滤，冷却，减压浓缩至密度为1.2，加10％氢氧化钠调pH至10，加乙酸乙酯反复萃取至萃余液生物碱反应为阴性。将乙酸乙酯萃取液上预处理好的XAD-7大孔吸附树脂饱和吸附，先用4BV石油醚洗脱杂质，再用氯仿-乙醇(85∶15)洗脱，HPLC跟踪检识，收集白鲜碱流分，减压浓缩得到粗提物；将相当于粗提物7倍量的氧化镁装柱，预处理，将流分进行氧化镁柱层析，用戊醇-乙酸乙酯(6∶1)洗脱，将流分分别减压浓缩、真空干燥得粗晶。将粗晶用无水乙醇加热饱和溶解，冷却，缓慢加入1.5倍饱和液的去离子水，静置结晶，过滤，冷冻干燥后称重得白鲜碱19.6g(含量为96.3％)。

实施例4：

将白鲜皮粉碎，取50kg投入自制液泛提取罐，加入200L水提取，弃去提取液，残渣真空干燥后加入600L含0.1％盐酸的95％乙醇溶液提取4小时，将提取液趁热过滤，冷却，减压浓缩至密度为1.2，加5％氨水调pH至11，加乙酸乙酯反复萃取至萃余液生物碱反应为阴性。将乙酸乙酯萃取液上预处理好的AB-8大孔吸附树脂饱和吸附，先用5BV石油醚洗脱杂质，再用氯仿-乙醇(65∶15)洗脱，HPLC跟踪检识，收集白鲜碱流分，减压浓缩得到粗提物；将相当于粗提物10倍量的氧化镁装柱，预处理，将流分进行氧化镁柱层析，用戊醇-乙酸乙酯(5∶1)洗脱，将流分分别减压浓缩、真空干燥得粗晶。将粗晶用无水乙醇加热饱和溶解，冷却，缓慢加入1倍饱和液的去离子水，静置结晶，过滤，冷冻干燥后称重得白鲜碱20.1g(含量为95.8％)。

Claims

1.白鲜皮中单体化合物的提纯方法，其特征在于它包括以下步骤：

(2)树脂吸附分离：将上述稀浸膏调pH，乙酸乙酯反复萃取，至萃余液生物碱反应为阴性。将乙酸乙酯萃取液上D101、AB-8、XAD-4或XAD-7大孔吸附树脂饱和吸附，石油醚洗脱杂质，氯仿-乙醇(50∶1-4∶1)洗脱，HPLC跟踪检识，洗脱至无白鲜碱流分，收集白鲜碱流分；

2.根据权利要求1所述的白鲜皮中单体化合物的提纯方法，其特征在于所述乙醇-酸水溶液为乙醇与盐酸水溶液的混合溶液，盐酸浓度为总提取溶剂体积的0.1-0.5％。

3.根据权利要求1所述的白鲜皮中单体化合物的提纯方法，其特征在于所述调pH所用碱可选氨水溶液、氢氧化钠溶液或碳酸氢钠溶液。

4.根据权利要求1所述的白鲜皮中单体化合物的提纯方法，其特征在于所述大孔树脂洗脱条件：洗脱流速控制在0.5-1BV/h，每500ml洗脱液接收一部分，洗脱至HPLC检识无白鲜碱；树脂用量为药材质量的等倍量。

5.根据权利要求1所述的白鲜皮中单体化合物的提纯方法，其特征在于所述氧化镁与原料的比例为10∶1-5∶1。