CN103251681A

CN103251681A - 一种沙苁蓉提取物及其制备方法和应用

Info

Publication number: CN103251681A
Application number: CN2013101688688A
Authority: CN
Inventors: 马志国; 杨振亚; 李承花; 卢丹逸
Original assignee: Jinan University
Current assignee: Guangxi Wuzhou Pharmaceutical Group Co Ltd
Priority date: 2013-05-09
Filing date: 2013-05-09
Publication date: 2013-08-21
Anticipated expiration: 2033-05-09
Also published as: CN103251681B

Abstract

本发明涉及中药有效部位提取物，公开了一种沙苁蓉提取物及其制备方法和应用。该提取物含有2’-乙酰基金石蚕苷和金石蚕苷；其中，2’-乙酰基金石蚕苷的重量不低于沙苁蓉提取物总重量的10%，金石蚕苷的重量不低于沙苁蓉提取物总重量的20%。其提取方法为，先用乙醇回流提取，然后用非极性大孔树脂纯化即得。该提取物具有很好的治疗老年痴呆症的作用。

Description

一种沙苁蓉提取物及其制备方法和应用

技术领域

本发明涉及中药有效部位提取物，更具体地，涉及一种沙苁蓉提取物及其制备方法和应用。

背景技术

沙苁蓉（拉丁名Cistanche sinensis G. Beck）是一味传统中药，具有温阳益精、润肠通便的功效，多用于肠燥便秘。现代研究发现，苁蓉中所含的苯乙醇苷类成分具有延缓神经细胞衰老的作用，但由于苯乙醇苷类成分复杂，并不是所有的苯乙醇苷类成分都具有延缓神经细胞衰老的作用，至今未能确定其中能够发挥抗衰老作用的具体成分。现有技术中也尚未对沙苁蓉进行抗神经细胞衰老作用的研究。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是，为了克服现有技术中存在的沙苁蓉的开发利用不足，提供一种沙苁蓉提取物。

本发明所要解决的另一技术问题是，提供一种沙苁蓉提取物的制备方法和应用。

本发明的上述技术问题通过以下技术方案予以实现：

一种沙苁蓉提取物，含有2’-乙酰基金石蚕苷和金石蚕苷；其中，2’-乙酰基金石蚕苷的重量不低于沙苁蓉提取物总重量的10%，金石蚕苷的重量不低于沙苁蓉提取物总重量的20%。

对于沙苁蓉，根据现有技术报道并不知道其中有哪些成分具有抗神经细胞衰老作用。发明人经大量实验筛选发现，2’-乙酰基金石蚕苷和金石蚕苷都具有抗神经细胞衰老的作用，且当二者共同作用时，效果最佳。因此，沙苁蓉提取物中只要含有这两种物质，并达到一定量，即具有抗神经细胞衰老的作用。

作为一种优选方案，所述的2’-乙酰基金石蚕苷的重量为沙苁蓉提取物总重量的10~20%，金石蚕苷的重量为沙苁蓉提取物总重量的20~30%。

作为一种最优选方案，所述的2’-乙酰基金石蚕苷的重量为沙苁蓉提取物总重量的13~15%，金石蚕苷的重量为沙苁蓉提取物总重量的25~27%。

作为一种优选方案，所述的沙苁蓉提取物，还含有毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷和2’-乙酰基毛蕊花糖苷，三者的总重量不超过沙苁蓉提取物总重量的5%。

作为一种优选方案，所述的沙苁蓉提取物，苯乙醇总苷的含量不低于沙苁蓉提取物总量的50%。

作为一种最优选方案，所述苯乙醇总苷的含量为沙苁蓉提取物总量的50~70%。

一种制备本发明所述沙苁蓉提取物的方法，包含如下步骤：取沙苁蓉药材，用60~80体积%乙醇水溶液回流提取1~6小时后，将滤液浓缩，然后用非极性大孔树脂进行纯化，非极性大孔树脂的洗脱条件为先水洗除杂，再用30~50体积%的乙醇水溶液洗脱，收集乙醇洗脱液，浓缩、干燥，即得沙苁蓉提取物。

作为一种优选方案，所述方法的具体步骤为：取沙苁蓉药材，粉碎，加5~15倍药材量的60~80体积%的乙醇水溶液浸泡0.5~1小时后回流提取1~2小时，滤过，滤液备用；药渣再加5~15倍量体积分数为60~80体积%的乙醇水溶液回流提取1~2小时，滤过，滤液备用；合并各次滤液，减压回收乙醇至药液无醇味，并继续浓缩至每毫升药液相当于1~1.5克药材的浓度，然后将药液加入1~2倍于药材量的非极性大孔树脂柱内，静置3~5小时后，先以3~5倍柱体积的水洗脱除杂，弃去水洗脱液；再以35%~45体积%乙醇水溶液洗脱，收集4~6倍柱体积的乙醇洗脱液，减压浓缩，干燥，即得沙苁蓉提取物。

上述加5~15倍药材量的60~80体积%的乙醇水溶液，是指每千克药材加5~15升的60~80体积%的乙醇，或每克药材加5~15毫升的60~80体积%水溶液的乙醇。

上述将药液加入1~2倍于药材量的非极性大孔树脂柱内，是指相当于1kg药材的药液加入到含有1~2kg非极性大孔树脂的柱内。

作为一种最优选方案，所述方法的具体步骤为：取沙苁蓉药材，粉碎成最粗粉，加8~12倍药材量的70体积%乙醇水溶液浸泡0.5小时后回流提取1.5小时，滤过，滤液备用；药渣再加8~12倍药材量的70体积%乙醇水溶液回流提取1.5h，滤过；合并2次滤液，减压回收乙醇至药液无醇味，并继续浓缩至每毫升药液相当于1.2克药材的浓度，将药液加入1倍于药材量的非极性大孔树脂柱内，静置4小时后，先以4倍柱体积的水洗脱除杂，弃去水洗脱液；再以40％乙醇洗脱，收集5倍柱体积的40体积％乙醇水溶液洗脱液，减压浓缩，干燥，即得沙苁蓉提取物。

作为一种优选方案，所述的非极性大孔树脂为X-5型大孔树脂或D-101型大孔树脂。

一种本发明所述的沙苁蓉提取物在制备用于治疗老年痴呆症的药物中的用途。

作为一种优选方案，所述的老年痴呆症为阿尔茨海默氏病、血管性痴呆或混合性痴呆。

本发明所述的提取物加入常规辅料，可制成临床所需的多种剂型，包括片剂、胶囊剂或颗粒剂。

用高效液相色谱法对上述沙苁蓉提取物中主要有效成分含量进行测定：

液相条件：固定性为十八烷基硅烷键合硅胶，流动相为甲醇(A)-0.1%甲酸(B)，梯度洗脱(0 min，35%A；30 min，50%A)，流速 1.0 mL·min^-1；检测波长 330 nm。

对照品溶液的制备：精密称取金石蚕苷和2’-乙酰基金石蚕苷对照品适量，加50%甲醇制成每1 mL含1.0mg的溶液，作为对照品溶液。

供试品溶液的制备：取沙苁蓉提取物50mg，置于25mL量瓶中，加50%甲醇适量，超声处理使溶解，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，用0.45μm滤膜滤过，即得。

测定方法及结论：分别精密吸取对照品溶液及供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪，测定金石蚕苷和2’-乙酰基金石蚕苷的色谱峰的峰面积，采用外标一点法计算含量即得。

同法还可以测定沙苁蓉提取物中还含有毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷、2’-乙酰基毛蕊花糖苷。

用紫外分光光度法对上述沙苁蓉提取物中的苯乙醇总苷含量进行测定：

标准曲线的制备：取适量金石蚕苷40%乙醇配制成浓度为0.6mg/mL的对照品储备液，分别取0.1mL、0.2mL、0.4mL、0.6mL和 0.8mL 加入10mL量瓶中40%乙醇稀释至刻度，在333 nm 波长处测定紫外吸收度，计算得到标准曲线。

供试品溶液的制备：取沙苁蓉提取物50mg，置于50mL量瓶中，加40%乙醇适量，超声使溶解，加40%乙醇稀释至刻度，摇匀，滤过，精密吸取续滤液1mL置25mL量瓶中，加40%乙醇稀释到刻度，即得。

测定方法及结论：采用紫外分光光度法在333 nm 波长处测定供试品溶液紫外吸收值，代入标准曲线计算的沙苁蓉提取物中苯乙醇总苷的含量。

本发明具有如下有益效果：本发明首次以沙苁蓉为原料提取含有2’-乙酰基金石蚕苷和金石蚕苷的提取物，该提取物具有很好的治疗老年痴呆症的作用；本发明所述的提取方法工艺简单，提取效率高，适合工业化生产。

具体实施方式

以下结合具体实施例来进一步解释本发明，但实施例对本发明不做任何形式的限定。

实施例1

取沙苁蓉药材，粉碎成最粗粉，加8倍药材量的70%乙醇浸泡0.5小时后回流提取1.5小时，滤过，滤液备用；药渣再加8倍药材量的70%乙醇回流提取1.5h，滤过；合并2次滤液，减压回收乙醇至药液无醇味，并继续浓缩至每毫升药液相当于1.2克（药液：药材＝1：1.2）药材的浓度，将药液加入1倍（药材：树脂＝1：1）于药材量的X-5型大孔树脂柱内，静置4小时后，先以4倍柱体积的水洗脱除杂，弃去水洗脱液；再以40％乙醇洗脱，收集5倍柱体积的40％乙醇洗脱液，减压浓缩，干燥，即得沙苁蓉提取物50g。

本发明实施例中涉及的乙醇百分比均为体积百分比。

实施例2 对实施例1沙苁蓉提取物中苯乙醇总苷的含量及金石蚕苷和2’-乙酰基金石蚕苷的含量进行测定。

色谱条件：固定性为十八烷基硅烷键合硅胶，流动相为甲醇(A)-0.1%甲酸(B)，梯度洗脱(0 min，35%A；30 min，50%A)，流速 1.0 mL·min^-1；检测波长 330 nm。

测定方法及结论：分别精密吸取对照品溶液及供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪，测定金石蚕苷和2’-乙酰基金石蚕苷的色谱峰的峰面积，采用外标一点法计算含量即得，金石蚕苷的含量为25重量%，2’-乙酰基金石蚕苷的含量为13重量%。

测定方法及结论：采用紫外分光光度法在333 nm 波长处测定供试品溶液紫外吸收值，代入标准曲线计算的沙苁蓉提取物中苯乙醇总苷的含量为70%重量份。

实施例3

将沙苁蓉药材1kg粉碎成黄豆粒大的颗粒，加10倍量水浸泡1h后回流提取2h，滤过，滤液备用。药渣再加10倍量水回流提取2次，每次1h，滤过。合并3次滤液，减压浓缩至（药液：药材＝1：1）的浓缩液，加入95%乙醇使含醇量达到60%，4℃放置12h后，滤过，取上清液，减压回收乙醇至无醇味，继续浓缩至（药液：药材＝1：1.5）的浓缩液，将浓缩液缓缓加入已处理好的X-5型大孔树脂柱（药材：树脂＝1：2）内，静置2h后，先以4倍柱体积量的水洗脱除杂，弃去水洗脱液；再以40％乙醇洗脱，收集5倍柱体积量的40％乙醇洗脱液，减压浓缩，干燥，即得沙苁蓉提取物50g。

参照实施2中的含量测定方法，测得，金石蚕苷的含量为25%，2’-乙酰基金石蚕苷的含量为14%，苯乙醇总苷的含量为55%

实施例4

将沙苁蓉药材1kg粉碎成最粗粉，加10倍量50%乙醇浸泡1h后回流提取2h，滤过，滤液备用。药渣再加8倍量50%乙醇回流提取2次，每次1h，滤过。合并3次滤液，减压回收乙醇至无醇味并继续浓缩至（药液：药材＝1：1.5）的浓缩液，将浓缩液缓缓加入已处理好的D-101型大孔树脂柱（药材：树脂＝1：1.5）内，静置4h后，先以6倍柱体积量水洗脱除杂，弃去水洗脱液；再以50％乙醇洗脱，收集5倍柱体积量的50％乙醇洗脱液，减压浓缩，干燥，即得沙苁蓉提取物50g。

参照实施2中的含量测定方法，测得，金石蚕苷的含量为27%，2’-乙酰基金石蚕苷的含量为15%，苯乙醇总苷的含量为58%

实施例5

将沙苁蓉药材饮片1kg，加14倍量60%乙醇浸泡2h后回流提取2h，滤过，滤液备用。药渣再加10倍量60%乙醇回流提取2次，每次1.5h，滤过。合并3次滤液，减压回收乙醇至无醇味并继续浓缩至（药液：药材＝1：1）的浓缩液，将浓缩液缓缓加入已处理好的AB-8型大孔树脂柱（药材：树脂＝1：2）内，静置1h后，先以4倍柱体积量水洗脱除杂，弃去水洗脱液；再以40％乙醇洗脱，收集6倍柱体积量的40％乙醇洗脱液，减压浓缩，干燥，即得沙苁蓉提取物50g。

实施例6 对实施例5沙苁蓉提取物中的苯乙醇总苷及金石蚕苷和2’-乙酰基金石蚕苷的含量进行测定。

测定方法及结论：采用紫外分光光度法在333 nm 波长处测定供试品溶液紫外吸收值，代入标准曲线计算的沙苁蓉提取物中苯乙醇总苷的含量为60%重量份。

色谱条件：固定性为十八烷基硅烷键合硅胶，流动相为甲醇(A)-0.1%甲酸(B)，梯度洗脱(0 min，35%A；40 min，55%A)，流速 1.0 mL·min^-1；检测波长 334 nm。

对照品溶液的制备：精密称取金石蚕苷和2’-乙酰基金石蚕苷对照品适量，加50%甲醇制成每1 mL含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。

测定方法及结论：分别精密吸取对照品溶液及供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪，测定金石蚕苷和2’-乙酰基金石蚕苷的色谱峰的峰面积，采用外标一点法计算含量即得，金石蚕苷的含量为20重量%，2’-乙酰基金石蚕苷的含量为10重量%。

实施例7 含有沙苁蓉提取物（本发明实施例1制得）的制剂对老年痴呆（AD）模型小鼠迷宫实验的影响

实验开始时先训练小鼠，让小鼠在起步区(小鼠开始所在的臂) 适应，然后按一定规律或随机转换键开关以变换安全区与电击区的位置，观察动物学会逃离电击区而进入安全区的反应能力开始训练时，小鼠受电击逃离起步区后可能跑向非安全区，并在电击作用下最终才跑至安全区，故会出现错误反应，多次训练后，安全区灯亮，小鼠立即逃往安全区每训练 10 次让小鼠休息直到10 次中有 9 次及以上的正确反应，代表训练完成分组后对所有小鼠进行Y 型迷宫试验观察各组小鼠的学习能力，给药40天治疗完成后，再次检测，给药前后小鼠 Y 型迷宫试验见表 1。

Figure 2013101688688100002DEST_PATH_IMAGE001

由实验结果可知，给药前，造模动物在训练时间、训练次数方面均明显多于空白组 (p < 0. 01);给药后，高剂量组的训练时间比模型组的训练时间明显缩短，差异具有统计学意义(p < 0. 01)本实验采用痴呆动物模型，通过进行痴呆模型小鼠Y 型迷宫试验来反映沙苁蓉提取物对 AD 的治疗作用结果显示， D-半乳糖小鼠老年痴呆模型的学习记忆能力明显降低，高剂量的沙苁蓉提取物对小鼠 AD 模型的记忆能力有明显的改善作用，表现为训练时间的明显偏短。

实施例8 含有沙苁蓉提取物（本发明实施例1制得）的制剂对老年痴呆模型大鼠学习记忆能力影响

大鼠分组后灌胃给药6周，同时每天腹腔注射1%D-半乳糖50mg/kg造模，给药1 周后对各组大鼠进行避暗学习、记忆能力测试。测试装置分明暗两室,暗室底部铜栅通电( 40v)。两室之间有一直径为6cm 的圆洞,测试时将大白鼠背对洞口放入明室, 同时启动计算机自动控制系统,大白鼠因嗜暗习性,进入暗室则遭电击,动物自放入明室至进入暗室,遭电击所需时间为潜伏期,动物受电击后可自行逃出暗室,控制系统可显示出 5min 内动物受电击的次数( 错误次数) 及潜伏时间,第一天为学习测试, 24h 后重测, 为记忆测试。沙苁蓉提取物对老年痴呆实验大鼠学习记忆能力的作用结果，见表2。

老年痴呆模型组与空白组比较,错误次数明显增加, 潜伏期明显延长 ( P < 0. 05或 P < 0. 01) , 应用沙苁蓉提取物低、高剂量及喜得镇后可明显减少错误次数，缩短潜伏期,与模型组比较,有显著性差异 ( P < 0. 05 或P < 0. 01) , 喜得镇组与沙苁蓉提取物组比较无明显差异( P > 0. 05) 。沙苁蓉提取物能缩短模型大鼠避暗学习、记忆潜伏期,减少错误次数，能改善 AD 大鼠学习记忆能力。

实施例9 含有沙苁蓉提取物（本发明实施例1制得）的制剂对老年痴呆模型大鼠脑组织酶活性的影响

上述学习记忆能力测试后进行, 断椎处死大鼠, 在冰台上迅速取脑,取海马、丘脑、皮层等组织,称重后用预冷生理盐水制成 1: 10( w / v) 的匀浆，3000rpm 离心 10min，取上清液, 按说明书方法测定蛋白、AchE、Na+K+-ATP、Ca2+- ATP酶的含量，沙苁蓉提取物对老年痴呆实验大鼠 AchE、Ca²⁺- ATP、Na⁺K⁺- ATP 酶活性的影响,见表 3。

Figure 2013101688688100002DEST_PATH_IMAGE003

由表3可知，造模后模型组与空白组相比, 胆碱酯酶含量明显升高, ATP含量明显减少 ( P < 0.05或 P < 0.01) ,有显著差异。应用沙苁蓉提取物低、高剂量及西药喜得镇后可减少胆碱酯酶含量, ATP含量升高, 有显著差异 ( P < 0. 05 或 P < 0. 01) 。喜得镇组与中药组比较无明显差异 (P > 0. 05)。降低大鼠脑组织中 AchE 的含量, 提高 ATP 酶的含量，改善脑组织的能量代谢, 防止AT-Pase活性降低, 并可维持乙酰胆碱(AchE)的正常水平。

Claims

1.一种沙苁蓉提取物，其特征在于，含有2’-乙酰基金石蚕苷和金石蚕苷；其中，2’-乙酰基金石蚕苷的重量不低于沙苁蓉提取物总重量的10%，金石蚕苷的重量不低于沙苁蓉提取物总重量的20%。

2.根据权利要求1所述的沙苁蓉提取物，其特征在于，所述的2’-乙酰基金石蚕苷的重量为沙苁蓉提取物总重量的10~20%，金石蚕苷的重量为沙苁蓉提取物总重量的20~30%。

3.根据权利要求2所述的沙苁蓉提取物，其特征在于，所述的2’-乙酰基金石蚕苷的重量为沙苁蓉提取物总重量的13~15%，金石蚕苷的重量为沙苁蓉提取物总重量的25~27%。

4.根据权利要求1所述的沙苁蓉提取物，其特征在于，还含有毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷和2’-乙酰基毛蕊花糖苷，三者的总重量不超过沙苁蓉提取物总重量的5%。

5.根据权利要求1~4任一项所述的沙苁蓉提取物，其特征在于，苯乙醇总苷的含量不低于沙苁蓉提取物总量的50%。

6.根据权利要求5所述的沙苁蓉提取物，其特征在于，所述苯乙醇总苷的含量为沙苁蓉提取物总量的50~70%。

7.制备权利要求1、2、3、4或6所述的沙苁蓉提取物的方法，其特征在于，包含如下步骤：取沙苁蓉药材，用60~80体积%乙醇水溶液回流提取1~6小时后，将滤液浓缩，然后用非极性大孔树脂进行纯化，非极性大孔树脂的洗脱条件为先水洗除杂，再用30~50体积%的乙醇水溶液洗脱，收集乙醇洗脱液，浓缩、干燥，即得沙苁蓉提取物。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，具体步骤为：取沙苁蓉药材，粉碎，加5~15倍药材量的60~80体积%的乙醇水溶液浸泡0.5~1小时后回流提取1~2小时，滤过，滤液备用；药渣再加5~15倍量体积分数为60~80体积%的乙醇水溶液回流提取1~2小时，滤过，滤液备用；合并各次滤液，减压回收乙醇至药液无醇味，并继续浓缩至每毫升药液相当于1~1.5克药材的浓度，然后将药液加入1~2倍于药材量的非极性大孔树脂柱内，静置3~5小时后，先以3~5倍柱体积的水洗脱除杂，弃去水洗脱液；再以35%~45体积%乙醇水溶液洗脱，收集4~6倍柱体积的乙醇洗脱液，减压浓缩，干燥，即得沙苁蓉提取物。

9.根据权利要求6~8任一项所述的方法，其特征在于，所述的非极性大孔树脂为X-5型大孔树脂或D-101型大孔树脂。

10.权利要求1、2、3、4或6任一项所述的沙苁蓉提取物在制备用于治疗老年痴呆症的药物中的应用。