CN103242393A - 大孔树脂分离甘草酸提取液分离纯化方法 - Google Patents

Abstract

大孔树脂分离甘草酸提取液分离纯化方法，其步骤为：首先将甘草酸浸膏配成0.3～2mg/mL的溶液，先用聚酰胺树脂吸附溶液中的黄酮类化合物，再用大孔吸附树脂混合床进行吸附3～6h，吸附温度为30～60^oC；将吸附后的大孔吸附树脂用蒸馏水洗涤，然后将大孔树脂放入70%乙醇水溶液进行解吸2～6h，解吸温度30～60^oC；将乙醇解吸液蒸发浓缩，烘干温度为30～60^oC，即得甘草酸。

Description

大孔树脂分离甘草酸提取液分离纯化方法

技术领域

本发明涉及一种中草药有效成分的分离纯化方法。

背景技术

甘草的主要有效成分是甘草酸，其具有抗炎、抗病毒、保肝解毒及增强免疫等多项功能的中药材。

目前从甘草提取液中分离出甘草酸所涉及的方法主要包括下述几种方法，

（1）超滤法：如毛丽珍等发表的论文“薄层一紫外法测定八珍颗粒剂中甘草酸含量”（《中成药》，1992, 14(8): 18）所述，甘草酸的相对分子质量较小，而甘草酸中的杂质如淀粉、蛋白质、糖类、黄酮化合物等都属于大分子物质，故采用拦截分子量为几千的超滤膜可以阻截大分子，将甘草酸分离出来，从而去除杂质。但是超滤法成本较高，不利于工业化生产。

（2）结晶法：如王其灏等发表的论文“甘草酸的提取分离和纯化”（《医药工业》1987, 18(11): 481-487），文中所述的结晶法利用甘草酸转化为铵盐后在某些特定溶剂中溶解度下降而结晶出来的性质达到纯化的目的。较为常用的有晶种法和反复结晶法，晶种法是先将甘草提取液进行酸析，再用适量甲醇回流提取沉淀物，提取液氨化后减压蒸干得糖浆状物，趁热加入适量冰醋酸使溶解，静置，投入甘草酸单铵盐晶种，隔日吸滤，冰醋酸洗涤，减压蒸干即得甘草酸单铵盐。反复结晶法也是先将甘草提取液进行酸析，再经乙醇或丙酮溶解提取，氨化成盐析出，再经活性炭脱色，反复重结晶得精品，但是结晶法甘草酸损失太大，不符合生产成本要求。

（3）大孔树脂法：如崔杏雨等发表的论文“甘草酸制备新工艺的研究”（《太原理工大学学报》, 2001, 32(3): 271-273），及现在大多数采用一种大孔树脂来分离甘草酸，秦伍根等，通过对甘草酸的提取和纯化研究， 确定出D-101树脂对甘草酸的吸附及脱附的条件 ，甘草酸纯度高达82.38%，此种方法的到的甘草酸纯度较低。

尽管现有的工艺能满足现有企业对中药材加甘草酸成分的分离，但是，现有的工艺都是它的不足之处，例如：超滤法，成本太高，不利于工业化生产，即采用单一的树脂来分离甘草酸，得到的甘草酸纯度很低，不利于回收。

虽然目前对MAR应用的研究已经相当广泛，但研究主要集中在利用合成或市售的某一种MAR对底物的吸附分离实验。由于不同的MAR在极性、功能基、孔径、孔容及比表面积等结构参数方面都有所不同，而某一种MAR对多种成分也有不同程度的吸附，因此，对于一些物质结构较为相似的成分分离，采用单一类型的MAR往往很难达到预期的分离效果，这在一定程度上限制了MAR应用研究更好地发展。

发明内容

本发明的目的是提供一种大孔树脂分离甘草酸提取液分离纯化方法。

本发明是大孔树脂分离甘草酸提取液分离纯化方法，其步骤为： 

(1) 首先将甘草酸浸膏配成0.3～2 mg/mL的溶液，先用聚酰胺树脂吸附溶液中的黄酮类化合物，溶液的pH=7；

（2）再用大孔吸附树脂混合床进行吸附3～6h，吸附温度为30～60 ^oC；

(3) 将吸附后的大孔吸附树脂用蒸馏水洗涤，然后将大孔树脂放入70%乙醇水溶液进行解吸2～6h，解吸温度30～60 ^oC。；

(3) 将乙醇解吸液蒸发浓缩，烘干温度为30～60 ^oC，即得甘草酸。

本发明的有益之处是：

(1)在最佳工艺条件下，采用树脂（MAR）混合床法实现了对甘草酸的更高效分离，为甘草酸的工业化生产打下了基础;

(2) 本发明所设计到的工艺路线、所用试剂等均为国际上所公认的绿色环保技术。

附图说明

    图1为甘草酸测定标准曲线，图2为分离出来甘草酸的色谱图。

具体实施方式

本发明是大孔树脂分离甘草酸提取液分离纯化方法，其步骤为： 

(1) 首先将甘草酸浸膏配成0.3～2 mg/mL的溶液，先用聚酰胺树脂吸附溶液中的黄酮类化合物，溶液的pH=7；

（2）再用大孔吸附树脂混合床进行吸附3～6h，吸附温度为30～60 ^oC；

(3) 将吸附后的大孔吸附树脂用蒸馏水洗涤，然后将大孔树脂放入70%乙醇水溶液进行解吸2～6h，解吸温度30～60 ^oC。；

(3) 将乙醇解吸液蒸发浓缩，烘干温度为30～60 ^oC，即得甘草酸。

根据以上所述的分离纯化方法，步骤(2)中，所述大孔吸附树脂混合床采用接枝法进行筛选，即先用单一大孔吸附树脂对甘草酸标准液进行吸附/解吸，然后选出吸附分离效果最好的大孔吸附树脂为干枝，分离效果较好和一般的为侧枝，进行接枝，以此类推，最后筛选出效果好的大孔吸附树脂组成混合床。

根据以上所述步骤（2）的大孔树脂，是从极性树脂和非极性树脂中选出的。

根据以上所述步骤（2）的大孔树脂，最终选用的大孔吸附混合床是从极性树脂和非极性树脂中选出来的几种混合在一起。

本发明中所采用的大孔吸附树脂为：从极性树脂和非极性树脂中选出来的几种混合在一起。

本发明中大孔吸附树脂含水率的测定及其活化方法如下:

(1)大孔吸附树脂含水率的测定

称取一定量的MAR，在110℃的真空干燥箱中烘36 h，取出并置于干燥器内冷却0.5 h，称重；在同样的温度条件下再烘30 min，取出并置于干燥器内冷却0.5 h，称重。重复前面测重过程，直到前后两次质量差 ≤ 0.05 mg。根据烘干前后的质量差计算其含水率。每种树脂在测定含水率时取两份平行样，以保证称量的精确性。

（2）大孔吸附树脂的活化与纯化

称取干重约为1.2 g的MAR，装入由200目滤网制成的，大小为 2×6 cm的茶袋中，之后将茶袋放入100 mL锥形瓶中，加入50 mL乙醇浸泡24 h后，回收浸泡液。再加入适量乙醇洗涤至加入3倍体积的蒸馏水已无白色浑浊物出现。加入适量的蒸馏水洗涤树脂，浸泡5 min以后弃去洗涤液，如此反复三次，使得残留在树脂中的乙醇能够较充分的被水逐渐替换。

本发明中，纯度的测定和计算方法如下：

用移液管分别移取对照品溶液1、2、3、4、5、6、7、8、9 mL，分别置于25 mL容量瓶中，向容量瓶中加入 蒸馏水至刻度 。在波长254 nm处通过HPLC测峰面积，绘制标准曲线，结果见图1。所得线性回归方程为：y= 573572.1x-1863.46（R² = 0.996），且在0.08 ~ 0.8 mg/mL浓度范围内线性关系良好。

（2）甘草酸纯度的计算

将活化处理过的MAR按编号放入150 mL锥形瓶中，准确移取100 mL，总浓度为2.00 mg/mL的甘草酸提取物溶液，置于40℃的多功能水浴恒温振荡器中振荡吸附4.5 h后，。将吸附后的MAR用蒸馏水洗涤3次，每次间隔5 min，将锥形瓶倒置10 min，然后依次准确移取120 mL的70 %乙醇（V/V），在多功能水浴恒温振荡器中进行解吸附，解吸温度40℃，解吸时间2 h。静置20 min后，依式（1）-（5）计算MAR的吸附率、解吸率、吸附量及解吸附量；依式（5）计算经吸附解吸附分离过程后所得样品的纯度。

吸附率：

                      (1)

吸附量：

                           (2)

其中，F代表吸附率（%），q _a代表吸附量（mg/g）；C ₀和C ₁分别代表甘草酸的原液浓度和残液浓度（mg/L）；m是所用MAR干重质量（g）；V是所用甘草酸溶液体积（mL）。

解吸率：

                        (3)

解吸量：

                               (4)

其中，D是解吸率（%）；q _d是解吸附量（mg/g）；C _d是解吸液中总黄酮浓度（mg/mL）；V _d是解吸液体积（mL）。

甘草酸纯度：

                               (5)

其中，r _i 是经吸附/解吸附分离过程后所得甘草酸样品的纯度，C_i是经过HPLC后的出的浓度，V_i是配成溶液的体积，m ₀是配溶液的样品质量。

本发明的实施例如下：

实施例1：

称取总干重约为1.2 g的MAR LS-809C + LX38，装入由200目滤网制成的，大小为 2×6 cm的茶袋中，之后将茶袋放入150 mL烧杯中，加入50 mL乙醇浸泡24 h后，回收浸泡液。再加入适量乙醇洗涤至加入3倍体积的蒸馏水已无白色浑浊物出现。加入适量的蒸馏水洗涤树脂，浸泡5 min以后弃去洗涤液，如此反复三次，使得残留在树脂中的乙醇能够较充分的被水逐渐替换。将活化处理过的LS-809C + LX38放入150 mL锥形瓶中，准确移取120 mL，总浓度为2.00 mg/mL的甘草酸提取物溶液，置于40℃的多功能水浴恒温振荡器中振荡吸附5 h后，静置20 min。将吸附后的LS-809C + LX38用蒸馏水洗涤3次，每次间隔5 min，然后依次准确移取100 mL的70 %乙醇（V/V），在多功能水浴恒温振荡器中进行解吸附，解吸温度45℃，解吸时间4 h。解吸结束后静置20 min，解吸附率D=0.69，吸附量q_a=34.1 mg，解吸量q_d=23.52 mg，纯度r_i=64.5%

实施例2：

称取总干重约为1.2 g的MAR LS-809C + LX38+ LS-809A，装入由200目滤网制成的，大小为 2×6 cm的茶袋中，之后将茶袋放入150 mL烧杯中，加入50 mL乙醇浸泡24 h后，回收浸泡液。再加入适量乙醇洗涤至加入3倍体积的蒸馏水已无白色浑浊物出现。加入适量的蒸馏水洗涤树脂，浸泡5 min以后弃去洗涤液，如此反复三次，使得残留在树脂中的乙醇能够较充分的被水逐渐替换。将活化处理过的LS-809C + LX38放入150 mL锥形瓶中，准确移取120 mL，总浓度为2.00 mg/mL的甘草酸提取物溶液，置于40℃的多功能水浴恒温振荡器中振荡吸附5 h后，静置20 min。将吸附后的LS-809C + LX38+ LS-809A用蒸馏水洗涤3次，每次间隔5 min，然后依次准确移取100 mL的70 %乙醇（V/V），在多功能水浴恒温振荡器中进行解吸附，解吸温度45℃，解吸时间4 h。解吸结束后静置20 min，解吸附率D=0.85，吸附量q_a=42.6 mg，解吸量q_d=36.21 mg，纯度r_i=84.9%

实施例3：

称取总干重约为1.2 g的MAR LS-809C + LX38+ LS-809A+ LS100，装入由200目滤网制成的，大小为 2×6 cm的茶袋中，之后将茶袋放入150 mL烧杯中，加入50 mL乙醇浸泡24 h后，回收浸泡液。再加入适量乙醇洗涤至加入3倍体积的蒸馏水已无白色浑浊物出现。加入适量的蒸馏水洗涤树脂，浸泡5 min以后弃去洗涤液，如此反复三次，使得残留在树脂中的乙醇能够较充分的被水逐渐替换。将活化处理过的LS-809C + LX38+ LS-809A+ LS100放入150 mL锥形瓶中，准确移取120 mL，总浓度为2.00 mg/mL的甘草酸提取物溶液，置于40℃的多功能水浴恒温振荡器中振荡吸附5 h后，静置20 min。将吸附后的LS-809C + LX38+ LS-809A+ LS100用蒸馏水洗涤3次，每次间隔5 min，然后依次准确移取100 mL的70 %乙醇（V/V），在多功能水浴恒温振荡器中进行解吸附，解吸温度45℃，解吸时间4 h。解吸结束后静置20 min，解吸附率D=0.92，吸附量q_a=58.7 mg，解吸量q_d=54 mg，纯度r_i=92.5%。

Claims (4)

1.大孔树脂分离甘草酸提取液分离纯化方法，其步骤为： 

(1) 首先将甘草酸浸膏配成0.3～2 mg/mL的溶液，先用聚酰胺树脂吸附溶液中的黄酮类化合物，溶液pH=7；

（2）再用大孔吸附树脂混合床进行吸附3～6h，吸附温度为30～60 ^oC；

(3) 将吸附后的大孔吸附树脂用蒸馏水洗涤，然后将大孔树脂放入70%乙醇水溶液进行解吸2～6h，解吸温度30～60 ^oC；

(3) 将乙醇解吸液蒸发浓缩，烘干温度为30～60 ^oC，即得甘草酸。

2.根据权利要求1所述的大孔树脂分离甘草酸提取液分离纯化方法，其特征在于步骤(2)中，所述大孔吸附树脂混合床采用接枝法进行筛选，即先用单一大孔吸附树脂对甘草酸标准液进行吸附/解吸，然后选出吸附分离效果最好的大孔吸附树脂为干枝，分离效果较好和一般的为侧枝，进行接枝，以此类推，最后筛选出效果好的大孔吸附树脂组成混合床。

3.根据权利要求1所述的大孔树脂分离甘草酸提取液分离纯化方法，其特征在于步骤（2）所述的大孔树脂，是从极性树脂和非极性树脂中选出的。

4.根据权利要求根据权利要求1根据权利要求1所述的大孔树脂分离甘草酸提取液分离纯化方法，其特征在于步骤（2）所述的大孔树脂，最终选用的大孔吸附混合床是从极性树脂和非极性树脂中选出来的几种混合在一起。

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