CN103238071A - 纤维化生物标志物的测定 - Google Patents
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Abstract
对纤维化进行诊断或定量的方法，所述方法包括进行免疫测定来测量生物流体样品中天然存在的包含新表位的蛋白质片段，以及将所述患者中所述测量相对于正常水平的升高与纤维化的存在或程度相关联。通过包括如下步骤的方法来进行所述免疫测定：将所述样品中天然存在的蛋白质片段与免疫结合伴侣相接触，所述免疫结合伴侣与蛋白酶切割蛋白质形成的新表位反应，以及测量肽片段与所述免疫结合伴侣的结合程度从而测量其中的包含所述新表位的蛋白质片段，并且其中所述蛋白质是III型胶原、I型胶原、IV型胶原、V型胶原或VI型胶原、弹性蛋白、双糖链蛋白聚糖、饰胶蛋白聚糖、光亮蛋白聚糖、多功能蛋白聚糖、基底膜蛋白聚糖、神经蛋白聚糖、短小蛋白聚糖、纤调蛋白聚糖、丝甘蛋白聚糖、黏结蛋白聚糖、β蛋白聚糖、波形蛋白或C-反应蛋白。
Description
本发明涉及对生物标志物的测定，其可用于纤维化疾病的诊断和其发展的预后，包括指示慢性损伤后发生纤维化之风险的生物标志物。
特别地，根据本发明，发现如下所述生物标志物是可用的：与I、III、IV、V和VI型胶原、弹性蛋白、C-反应蛋白，以及蛋白聚糖，包括双糖链蛋白聚糖(Biglycan)、饰胶蛋白聚糖(Decorin)、多功能蛋白聚糖(Versican)和基底膜蛋白聚糖(Perlecan)的降解片段有关的生物标志物。
纤维化疾病(包括表1中列出的那些疾病)是发病和死亡的一个主要原因，例如，在全世界范围内，每年有800,000人死于肝硬化1。
表1.不同的纤维化疾病2
“纤维化疾病”是产生纤维化的任何疾病，无论是主要或是次要症状。
纤维化是由多种刺激诱导的慢性炎症反应的最后结果，所述刺激包括持续感染、自身免疫反应、变态反应、化学损伤、辐射和组织损伤。纤维化的特征是细胞外基质(ECM，extracellular matrix)的积聚和再组织。尽管具有明显的病因学和临床差异，大多数慢性纤维化疾病都具有持续性的刺激物，所述刺激物使得下列项持续产生：生长因子、蛋白水解酶、血管生成因子和纤维化细胞因子，其共同刺激结缔组织成分(尤其是胶原和蛋白聚糖)的沉积，所述成分进展性地重塑并破坏正常组织架构3，4。尽管对人类健康影响巨大，但目前尚没有获得批准的直接靶向纤维化机制的治疗5。
纤维化的关键细胞介导物是成肌纤维细胞，其在被激活时作为主要的产胶原细胞。
细胞外基质(ECM，Extracellular Matrix)
纤维发生是一个涉及复杂的细胞和分子机制的动力学过程，其通常来源于组织损伤6。纤维发生是正常ECM调节失衡的结果，所述失衡改变大分子的浓度，导致组织的大小和密度增加，伴有进展性的功能受损。这些大分子主要是具有结构和粘附功能的纤维蛋白，例如胶原和蛋白聚糖。
胶原
胶原在人体内分布广泛，即人体内蛋白质量的～30％是由胶原构成的。胶原负责大多数结缔组织之ECM的结构完整性。ECM含量来自合成和降解之间的精细平衡，所述平衡不仅通过基因表达和蛋白质分泌的调节而受到严格控制，而且还通过内源性蛋白酶抑制以及金属蛋白酶和半胱氨酸蛋白酶对蛋白质的降解而受到严格控制7-9。表2列出了主要的胶原类型及其主要的组织分布。
表2.主要胶原类型及其组织分布。
I型胶原是含量最丰富的胶原，其见于大多数结缔组织中。其对于主要的胶原组分是I和III型胶原的骨和皮肤的结构来说尤其重要10。
I和III型胶原是肝和肺的主要组分，其在健康组织中的比例为1∶1。此外，IV和VI型胶原见于大多数组织的基底膜中。V型胶原的最常见定位是在特征性的胶原原纤维中，与I和III型胶原相关联10。
有些胶原具有有限的组织分布：例如，II型，几乎仅见于软骨中11。
在纤维发生的过程中，胶原的净量增加12-14。表3以示例的方式显示了肝纤维化的过程中胶原的增加。
表3.从正常到硬化的人肝脏的胶原组分的变化15。
弹性蛋白
弹性蛋白存在于很多结缔组织中，主要是那些有弹性的结缔组织。其具有非常高的氨基酸甘氨酸、缬氨酸、丙氨酸和脯氨酸的含量，分子量为64至66kDa。其组织成为由830个氨基酸组成的不规则或随机的卷曲构象。弹性蛋白的形成如下所述：在由赖氨酰氧化酶催化的反应中，很多可溶性弹性蛋白原蛋白分子相连接，产生了巨大的、不可溶的、耐久的交联阵列。
弹性蛋白在动脉中作为压力波传播的介导物而发挥重要功能，以帮助血液流动，并且在大的弹性血管(例如主动脉)中尤其丰富。弹性蛋白在肺、弹性韧带和皮肤中也非常重要。
尽管在研究弹性蛋白的合成和周转中投入了很多的努力，但目前为止尚未将来自蛋白水解切割该基质分子的新表位与纤维化的疾病发生相关联。
波形蛋白
波形蛋白是中间丝蛋白质家族的成员。中间丝是真核细胞的重要结构特征。它们与微管和肌动蛋白微丝一起组成细胞骨架。尽管多数中间丝是稳定的结构，但是在成纤维细胞中，波形蛋白以动态结构的形式存在。该中间丝被用作中胚层来源组织的标志物，并因此被用作肉瘤的免疫组织化学的标志物。
Hertig及合作者(Hertig等，J Am Soc Nephrol.2008 Aug；19(8)：1584-91)研究了，在患有慢性同种异体移植物肾病的受试者肾小管上皮细胞中，上皮向间质的转变是否能够预测同种异体移植物中纤维化的进展，并在来自这些的83个活检样品中测量了波形蛋白的表达。他们的确发现了波形蛋白表达升高与手术后1年时肠纤维化评分之间的相关性。
在肝纤维化另一项研究中，Meriden及其同事(Meriden等，ClinGastro & Hepatol 2010；8：289-296)发现波形蛋白表达(在F0期获取的活检样品中)与纤维化发展之间的显著相关性，其水平的升高预测肝纤维化的快速进展。
因此，我们想要研究，循环中波形蛋白片段是否可以充当灵敏且特异性的纤维化生物标志物。
蛋白聚糖
蛋白聚糖是一组多种多样的大分子，其将不同数目的糖胺聚糖(GAG，glycosaminoglycan)侧链与核心蛋白共价连接16。这些GAG是二糖重复(例如N-乙酰葡糖胺或N-乙酰半乳糖胺)的聚合物，由于二糖单元上的羟基、羧基化和硫酸化的侧基，其是酸性的(带负电荷)。这使它们高度亲水，因而协助水和阳离子(例如来自细胞外液的钠)的扩散17。另外，GAG具有以下能力：与例如透明质酸链形成非共价连接，以形成甚至更大的分子复合物16。表4列出了研究最多的与结缔组织相关的蛋白聚糖。
表4.结缔组织之细胞外基质的蛋白聚糖
C-反应蛋白
C-反应蛋白(CRP，C-reactive protein)是应答于不同的临床疾病(例如炎症、感染或外伤)而由肝所产生的急性期血清蛋白29。CRP的产生是由受影响的或损伤的组织释放的细胞因子(例如IL-6)所诱导的。CRP的生理学作用尚不清楚，且对其促炎或抗炎作用的讨论仍在进行中。
蛋白酶
纤维发生过程中，ECM的合成与降解间的失衡是由低密度的内皮下基质转化成为富含间质胶原的基质所导致的。这种胶原和蛋白聚糖的增加可能是如下原因中的一种或两种所引起的：(1)蛋白质产生的减少，和(2)蛋白质降解减少，因此基质降解较少。蛋白质降解的减少最近获得了越来越多的关注。在该过程的调节中，基质金属蛋白酶(MMP，matrixmetalloproteinase)及其组织抑制剂(TIMP)与其他蛋白酶及其抑制剂(例如半胱氨酸蛋白酶和胱抑素)一起发挥重要的作用。
MMP
MMP是一大组内肽酶，其能够降解大多数(如果不是所有)ECM组分。目前，已发现超过25种MMP。MMP的特征在于包含金属原子(一般为锌)的活性位点，其以酶原的形式分泌。不同的MMP在不同的组织中表达。表5中显示肝脏中的MMP。
表5.肝脏中的MMP30-32。
TIMP通过以底物和组织特异性的方式结合MMP以及三分子复合物中的膜-1型金属蛋白酶来阻断MMP的蛋白酶水解活性(表6)。在纤维化过程中，TIMP水平显著增加，而MMP水平中等增加或保持相对稳定(除了MMP-2以外)，其总体上使得胶原降解减少。
表6.肝中的TIMP31
成纤维细胞激活蛋白
成纤维细胞激活蛋白α亚基(FAPa或FAP，α)是属于丝氨酸蛋白酶家族的膜整合明胶酶。FAPa是异二聚化膜结合蛋白酶复合物(也被称为170kDa黑素瘤膜明胶酶、整合膜丝氨酸蛋白酶和Seprase)的α亚基，而DPP4(CD26)是β亚基。有些细胞仅产生FAPa同二聚体，有些仅产生DPP4同二聚体。单体是无活性的。FAP，α在上皮癌的反应性间质成纤维细胞、愈合中伤口的肉芽组织以及骨和软组织肉瘤的恶性细胞中选择性表达33。该蛋白被认为参与成纤维细胞生长的控制或者发育、组织修复和上皮癌变过程中上皮-间质的相互作用。已证明，FAP的表达随纤维化的阶段而增加34，35。
纤维化生物标志物
已经提出了许多针对纤维化疾病的生物化学标志物，但不是该疾病的特异性产物。表7中是临床试验中使用的肝脏纤维化的生物化学标志物的例子。此外，有其他纤维化疾病的生物标志物的很多例子12，36-42。
表7 一些已知的肝纤维化标志物的总结。
US5387504描述了通过溶基质蛋白酶(stromelysin)在聚集蛋白聚糖(aggrecan)位点N341-F342的作用所释放的新表位VDIPEN，以及应用所述新表位的特异性单克隆抗体的RIA测定。更一般地说，描述了特异性针对聚集蛋白聚糖片段的单特异性抗体，其由特异性的溶基质蛋白酶切割所产生。在骨关节炎、类风湿性关节炎、粥样硬化病变、痛风、炎性肠病(inflammatory bowel disease，IBD)、特发性肺纤维化(idiopathicpulmonary fibrosis，IPF)、某些癌症、关节损伤和多种炎性疾病中发生溶基质蛋白酶的升高。据报道，在特发性肺纤维化中溶基质蛋白酶升高，据说所述测定可在血液或其他生物流体中进行，以检测聚集蛋白聚糖的溶基质蛋白酶切割产物，对所述片段的定量可用于诊断IPF和其他疾病。然而，对此没有提供证据，并且据我们所知，没有后续的出版物来验证这一预测。此RIA测定已经商业化很多年了，没有出现其成功用于诊断或监测任何纤维化疾病的报道。
美国专利7,225,080公开了在患者中诊断炎症、纤维化或癌症疾病的方法，其通过下述步骤进行：测量选自下列的至少四个生物化学标志物的值：所述患者的血清或血浆中的α2-巨球蛋白、AST(天冬氨酸氨基转移酶，aspartate aminotransferase)、ALT(丙氨酸氨基转移酶，alanineaminotransferase)、GGT(γ谷氨酰转肽酶，gammaglutamyltranspeptidase)、γ-球蛋白、总胆红素、白蛋白、α1球蛋白、α2球蛋白、结合珠蛋白、β-球蛋白、apoA1、IL-10、TGF-β1、apoA2和apoB，以及随后综合所述值，以确定所述患者中肝纤维化和/或坏死性炎症病变的存在。该专利没有教导对携带纤维化疾病过程中产生的新表位的肽片段进行定量测量。
美国专利6,060,255描述了用于诊断肝纤维化程度的方法，所述方法包括以下步骤：在样品中使用特异性结合IV型胶原的抗体测量高分子量形式的IV型胶原浓度，以及将测量结果与肝纤维化的程度相关联。同样，没有利用体内发挥作用的蛋白水解酶所产生的新表位。所述样品事实上是被胃蛋白酶所消化的，其可掩盖样品中胶原切割的天然模式。
美国专利4,628,027(Gay)公开了结缔组织蛋白特异性抗体的生产，更具体来说，公开了通过针对人胶原和参与胶原降解之酶的融合细胞杂合体来生产单克隆抗体。描述了使用针对结缔组织蛋白的单克隆抗体来建立组织学、细胞学和生物学流体样品的胶原特征谱。然而，该专利没有描述基于抗体与所述结缔组织蛋白上新表位的结合来测量结缔组织蛋白。
Rosen HN等，Calcif Tissue Int，2004100在接受激素替代治疗(HRT，hormone replacement treatment)的女性中评价了骨周转标志物I型胶原的N-端肽(NTX)和I型胶原的C-端肽(CTX)。在该研究中，观察到了骨周转标志物随着治疗而降低。NTX中使用的抗体是针对组织蛋白酶K在I型胶原的N-末端中的切割位点而产生的，并依赖于新表位JYDGKGVG↓。CTX中使用的抗体是针对组织蛋白酶K在I型胶原的C-末端中的切割位点而产生的，并依赖于新表位EKAHDGGR↓。与本发明不同，这些抗体被用于评价骨代谢而非评价纤维化。
Lein M等，Eur Urol，2007101在接受唑来膦酸治疗的前列腺癌患者中评价了新表位特异性的骨周转标志物I型胶原的N-端肽(NTX)和I型胶原的C-端肽(CTX)。在该研究中，观察到了骨周转标志物随着治疗而降低。NTX中使用的抗体是针对组织蛋白酶K在I型胶原的N-末端中的切割位点而产生的，并依赖于新表位JYDGKGVG↓。CTX中使用的抗体是针对组织蛋白酶K在I型胶原的C-末端中的切割位点而产生的，并依赖于新表位EKAHDGGR↓。与本发明不同，这些抗体被用于评价骨转移的侵袭过程中的骨代谢，而非纤维化。
PIIINP已在很多研究中用于评价纤维化疾病的严重性102，用于严重烧伤后患有皮肤纤维化的患者中103，用于在非硬化性原发性胆汁性肝硬化中评价疾病的进展104，用于原发性胆汁性肝硬化和慢性丙型病毒性肝炎中105。
在患有心肌纤维化的患者中测量PIIINP和ICTP106。
很多报道将一组生物化学标志物进行联合以改善生物化学指标的预测。在205位患有F0至F4期纤维化的患者中测量了11种不同的血清标志物，提供最多信息的标志物是α2巨球蛋白、α2球蛋白(或触珠蛋白)、γ球蛋白、载脂蛋白A1、γ谷氨酰转肽酶和总胆红素107。获得了这些标志物的指标具有评分在0至0.10范围内(全部患者的12％[41])的阴性预测值(100％确定没有F2、F3或F4)，和评分在0.60至1.00范围内(全部患者的34％[115])的高阳性预测值(＞90％确定存在F2、F3或F4)。
然而，上述的报道中没有一个如本发明所主张的那样提出，基于与新表位结合的抗体来测量肽片段可用于评价患有纤维化疾病的患者。
本发明现在提供诊断纤维化的方法，其包括：进行免疫测定以测量患者体液样品中天然存在的包含新表位的蛋白质片段，以及将所述患者中所述测量值相对于正常值的升高与纤维化的存在相关联，其中所述免疫测定通过包括如下步骤的方法进行：将所述样品中天然存在的蛋白质片段与免疫结合伴侣(immunological binding partner)相接触，所述免疫结合伴侣与蛋白酶切割蛋白质所形成的新表位反应，以及测量肽片段与所述免疫结合伴侣的结合程度从而测量其中的包含所述新表位的蛋白质片段，并且其中所述蛋白质是I型胶原、III型胶原、IV型胶原、V型胶原或VI型胶原、双糖链蛋白聚糖、饰胶蛋白聚糖、光亮蛋白聚糖、多功能蛋白聚糖、基底膜蛋白聚糖、神经蛋白聚糖(neurocan)、短小蛋白聚糖(brevican)、纤调蛋白聚糖(fibromodulin)、丝甘蛋白聚糖(serglycin)、黏结蛋白聚糖(syndecan)、β蛋白聚糖(betaglycan)、CRP或波形蛋白，前提是当切割I型胶原形成新表位时，该切割不在组织蛋白酶K切割I型胶原的位点处。公开于2009年5月14日(在本申请优先权日之后)的WO2009/059972公开了针对III型胶原新表位的测定，但没有公开此测量水平的升高与纤维化的存在或程度相关联。任选地，根据本发明的测定是基于上文所述蛋白质中除III型胶原之外的一种，或者如果基于III型胶原，则应用针对在下述切割位点形成的新表位之一的免疫结合伴侣：PGIPGRNGDP*SEQ ID NO1、*ESCPTGPQNY SEQ ID NO2或PKGDTGPRGP*SEQ ID NO3(其中，*指示切割位点)。
为了这些目的，心血管疾病可能不被认为是纤维化，或根据本发明检测的纤维化可以是除伴有心血管疾病的纤维化之外的纤维化。任选地，根据本发明的免疫测定中升高的结果与皮肤纤维化、肺纤维化或肝纤维化相关联。
该方法可包括获得患者生物流体样品的预备步骤。
本发明包括免疫测定方法，其测量在体液样品中天然存在的包含新表位的蛋白质片段，其中所述免疫测定通过包括如下步骤的方法进行：
将所述样品中天然存在的蛋白质片段与免疫结合伴侣相接触，所述免疫结合伴侣与蛋白酶切割蛋白质所形成的新表位反应，以及测量肽片段与所述免疫结合伴侣的结合程度从而测量其中的包含所述新表位的蛋白质片段，并且其中所述蛋白质是神经蛋白聚糖、短小蛋白聚糖、纤调蛋白聚糖、丝甘蛋白聚糖、黏结蛋白聚糖、β蛋白聚糖、I型胶原、IV型胶原、V型胶原、VI型胶原、CRP或波形蛋白，前提是当切割I型胶原形成新表位时，该切割不在组织蛋白酶K切割I型胶原的位点处。任选地，根据本发明的测定是基于上文所述蛋白质中除III型胶原之外的一种，或者如果基于III型胶原，则应用针对在下述切割位点处形成的新表位之一的免疫结合伴侣：PGIPGRNGDP*SEQ ID NO1、*ESCPTGPQNY SEQ IDNO2或PKGDTGPRGP*SEQ ID NO3(其中*指示切割位点)。
所述免疫结合伴侣可具有对肽片段的特异性结合亲和力，所述肽片段包含C-末端新表位或N-末端新表位。
与新表位的特异反应性或对新表位的免疫亲和力暗示相关的免疫结合伴侣不与所述新表位所来源的完整蛋白质反应。优选地，如果所述序列延长越过各自的切割位点，则所述免疫结合伴侣不与新表位序列(例如下文列出的序列)反应。
本文中使用的术语“免疫结合伴侣”包括多克隆和单克隆抗体以及抗体的特异性结合片段，例如Fab或F(ab’)2。因此，所述免疫结合伴侣可为单克隆抗体或具有特异性结合亲和力的单克隆抗体片段。
优选地，所述肽片段是I、III、IV、V或VI型胶原、弹性蛋白、C-反应蛋白或者是下列蛋白聚糖之一的片段：双糖链蛋白聚糖、饰胶蛋白聚糖、多功能蛋白聚糖和基底膜蛋白聚糖。结缔组织蛋白是优选的。优选地，免疫结合伴侣所结合的新表位序列不存在于任何其他蛋白中，或者不存在于本发明方法相关的任何其他蛋白质中。
多个候选蛋白酶可负责消化纤维化组织中的蛋白质。很可能地，这是大范围的复杂过程的结果，其导致依赖于疾病水平的不同新表位特征谱。
胶原测定
I型胶原
我们已经确定下表中列出的酶至少在如下切割位点(标记为“.”)切割I型胶原：
表8.I型胶原切割位点。
P表示羟脯氨酸，M表示氧化的甲硫氨酸，和K表示羟赖氨酸。
免疫结合伴侣可以是与切割I型胶原形成的C-末端或N-末端新表位特异性反应的免疫结合伴侣，其不包括在组织蛋白酶K的I型胶原位点处的切割。
因此，合适的免疫结合伴侣可以与肽N末端下述任意序列特异性地反应：
表9.蛋白酶产生的I型胶原肽片段的N-末端序列。(符号‘.’表示切割位点)
或者，合适的免疫结合伴侣可以与肽C末端下述任意序列特异性地反应：
表10.蛋白酶产生的I型胶原肽片段的C-末端序列(符号‘.’表示切割位点)。
III型胶原
我们已经确定下表中所列的酶至少在下列切割位点(标记为*)切割III型胶原：
表11.III型胶原中的切割位点。
所述免疫结合伴侣可以是与切割III型胶原所形成的C-末端或N-末端新表位特异性反应的免疫结合伴侣。
因此，合适的免疫结合伴侣可以与肽N末端任意下述序列特异性地反应：
表12.蛋白酶产生的III型胶原肽片段的N-末端序列。
或者与肽C末端下述任意序列特异性地反应：
表13.蛋白酶产生的III型胶原肽片段的C-末端序列。
IV型胶原
我们已经确定了下表中列出的酶在至少如下的切割位点(标记为“.”)切割IV型胶原：
表14.IV型胶原的切割片段
所述免疫结合伴侣可以是与切割IV型胶原所形成的C-末端或N-末端新表位特异性反应的免疫结合伴侣。
因此，合适的免疫结合伴侣可以与肽N末端下述任意序列特异性地反应：
表15.蛋白酶产生的IV型胶原肽片段的N-末端序列。
| IV型胶原 | ||
| IDGYRG SEQ ID NO609 | MGPPGT SEQ ID NO610 | DGLPGS SEQ ID NO611 |
| PGSKGE SEQ ID NO612 | RGFPGP SEQ ID NO613 | PGPPGL SEQ ID NO614 |
| GPPGPP SEQ ID NO100 | GLPGSM SEQ ID NO615 | GLPGQQ SEQ ID NO616 |
| LGSKGE SEQ ID NO617 | GIGPPG SEQ ID NO611 | PGLPGISEQ ID NO504 |
| PGIGVQ SEQ ID NO618 | SPGIPG SEQ ID NO619 | PGMQGE SEQ ID NO620 |
| PGPKGF SEQ ID NO621 | KGQPGL SEQ ID NO622 | RGPPGP SEQ ID NO148 |
| PPSDEI SEQ ID NO623 | PGLKGD SEQ ID NO624 | GPLGEK SEQ ID NO625 |
| IRGEPG SEQ ID NO626 | FPGPPG SEQ ID NO627 | LQGIRG SEQ ID NO628 |
| DGVIGM SEQ ID NO629 | PGNPGI SEQ ID NO630 | PGLPGP SEQ ID NO58 |
| IKGDKG SEQ ID NO631 | PGSPGC SEQ ID NO632 | GAPGPQ SEQ ID NO445 |
| GPPGVP SEQ ID NO633 | DQGDQG SEQ ID NO634 | DRGPQG SEQ ID NO442 |
| KGSIGI SEQ ID NO635 | PPGRLG SEQ ID NO636 | EKGQKG SEQ ID NO637 |
| ERGSPG SEQ ID NO38 | GIPGAP SEQ ID NO372 | DGGVPN SEQ ID NO638 |
| SGRDGL SEQ ID NO639 | GPPGEK SEQ ID NO640 | AEGLPG SEQ ID NO641 |
| DGYRGP SEQ ID NO642 | GPPGLM SEQ ID NO643 | LPGFAG SEQ ID NO644 |
| GIPGMP SEQ ID NO645 | PGPMGP SEQ ID NO25 | .PGIPGT SEQ ID NO2227 |
| .ILGHVP SEQ ID NO2212 | .LPGPDG SEQ ID NO2214 | .PGDIVF SEQ ID NO2215 |
| .PGLPGQ SEQ ID NO2213 | .LRGIPG SEQ ID NO760 | .GNKGDP SEQ ID NO2216 |
| .SGYPGN SEQ ID NO2217 | .PGFPGA SEQ ID NO2218 | .PGPRGK SEQ ID NO2219 |
| .VSGPPG SEQ ID NO2220 | .QQGNRG SEQ ID NO2221 | .PGPPGP SEQ ID NO458 |
| .KRGPPG SEQ ID NO2223 | .VGQPGP SEQ ID NO2222 | .SKGEKG SEQ ID NO2226 |
| .LHGFPG SEQ ID NO2225 | .GEPGMQ SEQ ID NO2224 | .GEPGPP SEQ ID NO675 |
或者与肽C末端下述任意序列特异性地反应：
表16.蛋白酶产生的IV型胶原肽片段的C-末端序列。
| IV型胶原 | ||
| RGPPGP SEQ ID NO148 | SVDHGF SEQ ID NO646 | PSVDHG SEQ ID NO647 |
| VDHGFL SEQ ID NO648 | PGQPGY SEQ ID NO649 | QPGYTN SEQ ID NO650 |
| PGLPGS SEQ ID NO651 | GTPSVD SEQ ID NO652 | SVGSPG SEQ ID NO653 |
| LPGSMG SEQ ID NO654 | GPPGVP SEQ ID NO633 | PGFPGL SEQ ID NO655 |
| PGLPGE SEQ ID NO656 | GDPGPP SEQ ID NO373 | HQGEMG SEQ ID NO657 |
| GPPGLV SEQ ID NO658 | PGIPGP SEQ ID NO659 | PGFPGT SEQ ID NO660 |
| PGLPGP SEQ ID NO58 | DGIPGP SEQ ID NO661 | SGPKGY SEQ ID NO662 |
| PGPRGE SEQ ID NO663 | GQGPPG SEQ ID NO664 | KVDMGS SEQ ID NO665 |
| GIGPPG SEQ ID NO611 | PGIDGV SEQ ID NO666 | KGHMGE SEQ ID NO667 |
| PGAIGP SEQ ID NO668 | PPGPPG SEQ ID NO 119 | KGLPGP SEQ ID NO669 |
| GPKGPP SEQ ID NO671 | SPGPPG SEQ ID NO672 | GPKGLP SEQ ID NO670 |
| GSVGYP SEQ ID NO673 | PQGPPG SEQ ID NO389 | PPGSPG SEQ ID NO674 |
| GEPGPP SEQ ID NO675 | AGNPGP SEQ ID NO676 | PGIKGS SEQ ID NO677 |
| PGYTNG SEQ ID NO678 | FPGPQG SEQ ID NO679 | PGPQGP SEQ ID NO453 |
| LSGPPG SEQ ID NO680 | PGAPGL SEQ ID NO467 | GVMGTP SEQ ID NO681 |
| GVSGPK SEQ ID NO682 | PGPPGP SEQ ID NO458 | |
| HVPGML.SEQ ID NO2228 | LPVPGQ.SEQ ID NO2229 | LGPPGL.SEQ ID NO2230 |
| GVPGQA.SEQ ID NO2231 | VPGQAQ.SEQ ID NO2232 | GPDGFL.SEQ ID NO2233 |
| QEGPLG.SEQ ID NO2234 | LPGEVL.SEQ ID NO2235 | RGIPGF.SEQ ID NO2236 |
| NRGLGF.SEQ ID NO2238 | IPSDTL.SEQ ID NO2239 | PAGEKG.SEQ ID NO2240 |
| GEKGNK.SEQ ID NO2241 | PVGPPG.SEQ ID NO2242 | DIVFRK.SEQ ID NO2243 |
| PPGPKG.SEQ ID NO167 | RGKPGM.SEQ ID NO2244 | PGTRGL.SEQ ID NO2245 |
| GEKGSK.SEQ ID NO2246 | EKGSKG.SEQ ID NO2247 | SGQPGL.SEQ ID NO2248 |
| AGIPQK.SEQ ID NO2237 |
V型胶原
我们已经确定了下表中列出的酶在至少如下的切割位点(标记为“.”或者，当没有‘.’时在所述序列的末端)切割V型胶原：
表14A.V型胶原的切割片段
| 蛋白酶 | 新表位(COV) |
| MMP2，α3 | K.GDPGPPGPIGSLG.H SEQ ID NO683 |
| MMP2，α3 | G.LRGIPGPVGEPG.L SEQ ID NO684 |
| MMP2，α3 | V.IGPPGLQGLPGPPGE.K SEQ ID NO685 |
| MMP2，α3 | G.KDGIPGPLGPLGPPG.A SEQ ID NO686 |
| MMP2，α3 | G.LRGIPGPVGEPGLL.G SEQ ID NO687 |
| MMP2，α3 | G.VLGPQGKTGEVGPLG.E SEQ ID NO688 |
| MMP2，α3 | K.DGIPGPLGPLGPPGAA.G SEQ ID NO689 |
| MMP2，α3 | G.EDGERGAEGPPGPTG.Q SEQ ID NO690 |
| MMP2，α3 | G.LQGPPGFPGPKGPPG.H SEQ ID NO691 |
| MMP2，α3 | P.IGSLGHPGPPGVAGPLG.Q SEQ ID NO692 |
| MMP2，α3 | G.IRGPPGTVIMMPFQ.F SEQ ID NO693 |
| MMP2，α3 | G.QMGPPGPLGPSGLPGLK.G SEQ ID NO694 |
| MMP2，α3 | G.LLGAPGQMGPPGPLGPSG.L SEQID NO695 |
| MMP2，α3 | G.LRGIPGPVGEPGLLGAPG.Q SEQ ID NO696 |
| MMP2，α3 | G.LLGPRGSPGPTGRPGVTG.I SEQ ID NO697 |
| MMP2，α3 | G.IRGPPGTVIMMPFQF.A SEQ ID NO698 |
| MMP2，α3 | G.KDGIPGPLGPLGPPGAAGP.S SEQ ID NO699 |
| MMP2，α3 | G.KDGIPGPLGPLGPPGAAGPSG.E SEQ ID NO700 |
| MMP2，α3 | Q.GLPGLEGREGAKGELGPPGPLG.K SEQ ID NO701 |
| MMP2，α3 | L.GPIGEKGKSGKTGQPGLEGERGPPGSRG.E SEQ ID NO702 |
| MMP2，α3 | G.LRGIPGPVGEPGLLGAPGQMGPPGPLGPSG.L SEQ ID NO703 |
| MMP2，α3 | G.ANGSPGERGPLGPAGGIGLPGQSGSEGPVGPAG.K SEQ ID NO704 |
| MMP2，α3 | G.LIGTPGEKGPPGNPGIPGLPGSDGPLGHPGHEGPTG.E SEQ ID NO705 |
| MMP2，α1 | G.LPGEPGPRG.L SEQ ID NO706 |
| MMP2，α1 | L.ALRGPAGPMG.L SEQ ID NO707 |
| MMP2，α1 | R.LALRGPAGPMG.L SEQ ID NO708 |
| MMP2，α1 | G.LTGRPGPVGPPGSGG.L SEQ ID NO709 |
| MMP2，α1 | G.LLGPKGPPGPPGPPG.V SEQ ID NO710 |
| MMP2，α1 | G.IPGRPGPQGPPGPAG.E SEQ ID NO711 |
| MMP2，α1 | P.GPDGPPGPMGPPGLP.G SEQ ID NO712 |
| MMP2，α1 | G.QPGPSGADGEPGPRG.Q SEQ ID NO713 |
| MMP2，α1 | G.ETGFQGKTGPPGPPG.V SEQ ID NO714 |
| MMP2，α1 | G.LRGFPGDRGLPGPV.G SEQ ID NO715 |
| MMP2，α1 | G.LRGFPGDRGLPGPVG.A SEQ ID NO716 |
| MMP2，α1 | G.KTGPIGPQGAPGKPGPDG.L SEQ ID NO717 |
| MMP2，α1 | G.PPGRPGLPGADGLPGPPG.T SEQ ID NO718 |
| MMP2，α1 | G.LKGNEGPPGPPGPAGSPGE.R SEQ ID NO719 |
| MMP2，α1 | G.LRGFPGDRGLPGPVGALG.L SEQ ID NO720 |
| MMP2，α1 | G.ERGHPGPPGPPGEQGLPG.L SEQ ID NO721 |
| MMP2，α1 | I.GPPGEQGEKGDRGLPGPQG.S SEQ ID NO722 |
| MMP2，α1 | G.EAGHPGPPGPPGPPGEVIQPLP.I SEQ ID NO723 |
| MMP2，α1 | K.PGPKGNSGGDGPAGPPGERGPNGP.Q SEQ ID NO724 |
| MMP2，α1 | G.EQGLPGSPGPDGPPGPMGPPGLPG.L SEQ ID NO725 |
| MMP2，α1 | E.GPPGEKGGQGPPGPQGPIGYPGPRG.V SEQ ID NO726 |
| MMP2，α1 | G.FPGPKGPPGPPGKDGLPGHPGQRG.E SEQ ID NO727 |
| MMP2 | L.PFRFGGGGDA SEQ ID NO728 |
| MMP2和9 | GSKGPMVSAQ.E SEQ ID NO729 |
| MMP2和9 | Q.ESQAQAILQQ SEQ ID NO730 |
| MMP9，α1 | L.ALRGPAGPMG.L SEQ ID NO707 |
| MMP9，α1 | G.AIGPPGEKGPLG.K SEQ ID NO731 |
| MMP9，α1 | G.GPNGDPGPLGPPG.E SEQ ID NO732 |
| MMP9，α1 | P.PGPPGEQGLPGL.A SEQ ID NO733 |
| MMP9，α1 | G.LLGPKGPPGPPGPPG.V SEQ ID NO734 |
| MMP9，α1 | G.IPGRPGPQGPPGPAG.E SEQ ID NO711 |
| MMP9，α1 | G.QPGPSGADGEPGPRG.Q SEQ ID NO713 |
| MMP9，α1 | G.QQGNPGAQGLPGPQG.A SEQ ID NO735 |
| MMP9，α1 | G.KEGPPGEKGGQGPPG.P SEQ ID NO736 |
| MMP9，α1 | G.ETGFQGKTGPPGPPG.V SEQ ID NO737 |
| MMP9，α1 | G.EKGHPGLIGLIGPPG.E SEQ ID NO738 |
| MMP9，α1 | G.LRGFPGDRGLPGPVG.A SEQ ID NO716 |
| MMP9，α1 | G.KTGPIGPQGAPGKPGPDG.L SEQ ID NO739 |
| MMP9，α1 | P.GPDGPPGPMGPPGLPGLK.G SEQ ID NO740 |
| MMP9，α1 | G.ERGHPGPPGPPGEQGLPG.L SEQ ID NO721 |
| MMP9，α1 | G.ERGPNGPQGPTGFPGPKGPPGPPG.K SEQ ID NO741 |
| MMP9，α1 | L.IGLIGPPGEQGEKGDRGLPGPQGS.S SEQ ID NO742 |
| MMP9，α1 | E.GPPGEKGGQGPPGPQGPIGYPGPRG.V SEQ ID NO726 |
| MMP9，α1 | I.GPPGPPGLPGPPGPKGAKGSSGPTGPKGE.A SEQ ID NO743 |
| MMP9，α1 | P.LGPPGEKGKLGVPGLPGYPGRQGPKGSI.G SEQ ID NO744 |
| MMP9，α1 | Q.GPKGSIGFPGFPGANGEKGGRGTPGKPGPRG.Q SEQ ID NO745 |
| MMP9，α3 | P.GPKGDPGPPGPIG.S SEQ ID NO746 |
| MMP9，α3 | K.GDPGPPGPIGSLG.H SEQ ID NO683 |
| MMP9，α3 | A.PGIPGEKGLPGL.Q SEQ ID NO747 |
| MMP9，α3 | Q.GPPGPKGDPGPPGP.I SEQ ID NO748 |
| MMP9，α3 | G.SLGHPGPPGVAGPLG.Q SEQ ID NO749 |
| MMP9，α3 | G.KDGIPGPLGPLGPPG.A SEQ ID NO686 |
| MMP9，α3 | G.VLGPQGKTGEVGPLG.E SEQ ID NO688 |
| MMP9，α3 | G.ELGFQGQTGPPGPAG.V SEQ ID NO750 |
| MMP9，α3 | G.EDGERGAEGPPGPTG.Q SEQ ID NO690 |
| MMP9，α3 | G.LQGPPGFPGPKGPPG.H SEQ ID NO691 |
| MMP9，α3 | G.EKGHIGLIGLIGPPG.E SEQ ID NO751 |
| MMP9，α3 | G.QMGPPGPLGPSGLPGLK.G)SEQ ID NO694 |
| MMP9，α3 | G.PVGEPGLLGAPGQMGPPG.P SEQ ID NO752 |
| MMP9，α3 | G.LRGIPGPVGEPGLLGAPG.Q SEQ ID NO696 |
| MMP9，α3 | G.LLGPRGSPGPTGRPGVTG.I SEQ ID NO 697 |
| MMP9，α3 | G.KDGIPGPLGPLGPPGAAGPSG.E SEQ ID NO700 |
| MMP9，α3 | Q.GLPGLEGREGAKGELGPPGPLG.K SEQ ID NO701 |
| MMP9，α3 | G.SRGERGPPGPTGKDGIPGPLGPLG.P SEQ ID NO753 |
| MMP9，α3 | G.EKGKSGKTGQPGLEGERGPPGSRG.E SEQ ID NO754 |
| MMP9，α3 | L.GPIGEKGKSGKTGQPGLEGERGPPGSRG.E SEQ ID NO702 |
| MMP9，α3 | G.ANGSPGERGPLGPAGGIGLPGQSGSEGPVGPAG.K SEQ ID NO 704 |
| MMP9，α3 | G.LIGTPGEKGPPGNPGIPGLPGSDGPLGHPGHEGPTG.E SEQ ID NO705 |
| MMP13，α1 | L.PGEPGPRG.L SEQ ID NO755 |
| MMP13，α1 | A.LRGPAGPMG.L SEQ ID NO756 |
| MMP13，α1 | G.LPGEPGPRG.L SEQ ID NO706 |
| MMP13，α1 | L.ALRGPAGPMG.L SEQ ID NO707 |
| MMP13，α1 | R.LALRGPAGPMG.L SEQ ID NO708 |
| MMP13，α1 | G.LRGFPGDRGLPGPVG.A SEQ ID NO716 |
| MMP13，α1 | Q.ESQAQAILQQARLA.L SEQ ID NO730 |
| MMP13，α1 | P.GPDGPPGPMGPPGLPGLK.G SEQ ID NO740 |
| MMP13，α1 | G.PQGAIGPPGEKGPLGKPGLPGMPGADGPPGHPG.K SEQ ID NO 757 |
| MMP13，α1 | A.GPMGLTGRPGPVGPPGSGGLKGEPGDVGPQGPRG.V SEQ ID NO758 |
| MMP13，α3 | G.VLGPQGKTGEVGPLG.E SEQ ID NO688 |
| MMP13，α3 | G.LRGIPGPVGEPGLLGAPG.Q SEQ ID NO696 |
| MMP13，α3 | G.LRGIPGPVGEPGLLGAPGQMGPPGPLGPSG.L SEQ ID NO703 |
| MMP13，α3 | G.LRGIPGPVGEPGLLGAPGQMGPPGPLGPSGLPG.L SEQ ID NO 759 |
P是羟脯氨酸、K表示羟赖氨酸、糖基化、脂氧化或交联。
所述免疫结合伴侣可以是与切割v型胶原所形成的C-末端或N-末端新表位特异性反应的免疫结合伴侣。
因此，合适的免疫结合伴侣可与肽N末端的下述任意序列特异性地反应：
表15a.蛋白酶产生的V型胶原肽片段的N-末端序列。
| V型胶原 | ||
| GDPGPP SEQ ID NO373 | LRGIPG SEQ ID NO760 | IGPPGI SEQ ID NO761 |
| LQGPPG SEQ ID NO62 | IGSLGH SEQ ID NO762 | IRGPPG SEQ ID NO763 |
| ANGSPG SEQ ID NO764 | LIGTPG SEQ ID NO765 | LPGEPG SEQ ID NO766 |
| IPGRPG SEQ ID NO767 | GPDGPP SEQ ID NO768 | QPGPSG SEQ ID NO769 |
| LKGNEG SEQ ID NO770 | ERGHPG SEQ ID NO771 | GPPGEQ SEQ ID NO772 |
| FPGPKG SEQ ID NO491 | PFRFGG SEQ ID NO773 | ESQAQA SEQ ID NO774 |
| LLGPKG SEQ ID NO775 | QQGNPG SEQ ID NO776 | KEGPPG SEQ ID NO777 |
| IGLIGP SEQ ID NO778 | GPPGPP SEQ ID NO100 | LGPPGE SEQ ID NO779 |
| GPPGPK SEQ ID NO780 | SLGHPG SEQ ID NO781 | KDGIPG SEQ ID NO782 |
| PVGEPG SEQ ID NO783 | LRGIPG SEQ ID NO760 | KDGIPG SEQ ID NO782 |
| ANGSPG SEQ ID NO764 | LIGTPG SEQ ID NO765 | PGEPGP SEQ ID NO784 |
| LLGAPG SEQ ID NO785 | GLPGLE SEQ ID NO786 | GIPGEK SEQ ID NO787 |
| LALRGP SEQ ID NO788 | LTGRPG SEQ ID NO789 | LLGPKG SEQ ID NO775 |
| LRGFPG SEQ ID NO790 | KTGPIG SEQ ID NO791 | PPGRPG SEQ ID NO792 |
| PGPKGN SEQ ID NO527 | EQGLPG SEQ ID NO793 | GPPGEK SEQ ID NO640 |
| AIGGPP SEQ ID NO794 | GPNGDP SEQ ID NO795 | PGPPGE SEQ ID NO796 |
| LLGPRG SEQ ID NO797 | GPDGPP SEQ ID NO768 | ERGPNG SEQ ID NO798 |
| GPKGDP SEQ ID NO799 | GDPGPP SEQ ID NO373 | PGIPGE SEQ ID NO800 |
| LQGPPG SEQ ID NO62 | EKGHIG SEQ ID NO801 | QMGPPG SEQ ID NO802 |
| SRGERG SEQ ID NO803 | EKGKSG SEQ ID NO804 | GPIGEK SEQ ID NO805 |
| LPGEPG SEQ ID NO766 | PQGAIG SEQ ID NO806 | GPMGLT SEQ ID NO807 |
| QMGPPG SEQ ID NO 802 | ETGFQG SEQ ID NO808 | GSKGPM SEQ ID NO809 |
| ALRGPA SEQ ID NO810 | EAGHPG SEQ ID NO811 | EKGHPG SEQ ID NO812 |
| KDGIP SEQ ID NO813 | VLGPQG SEQ ID NO814 | EDGERG SEQ ID NO815 |
| GPKGSI SEQ ID NO816 | ELGFQG SEQ ID NO817 | LRGPAG SEQ ID NO818 |
P是羟脯氨酸、K表示羟赖氨酸、糖基化、脂氧化或交联。
或者与肽C末端的下述任意序列特异性地反应：
表16a.蛋白酶产生的V型胶原肽片段的C-末端序列。
| V型胶原 | ||
| PIGSLG SEQ ID NO 819 | PVGEPG SEQ ID NO783 | PGPPGE SEQ ID NO796 |
| PPGPTG SEQ ID NO820 | PKGPPG SEQ ID NO821 | VAGPLG SEQ ID NO 822 |
| RPGVTG SEQ ID NO823 | MMPFQF SEQ ID NO824 | PGAAGP SEQ ID NO825 |
| PVGPAG SEQ ID NO826 | HEGPTG SEQ ID NO827 | EPGPRG SEQ ID NO516 |
| GPPGLP SEQ ID NO828 | GQGPPG SEQ ID NO664 | PPGPPG SEQ ID NO119 |
| AGSPGE SEQ ID NO829 | PVGALG SEQ ID NO830 | EQGLPG SEQ ID NO793 |
| YPGPRG SEQ ID NO831 | HPGQRG SEQ ID NO832 | GGGGDA SEQ ID NO833 |
| LIGPPG SEQ ID NO834 | GLPGLK SEQ ID NO835 | PPGPPG SEQ ID NO 119 |
| PPGPIG SEQ ID NO 174 | KGLPGL SEQ ID NO836 | PGPPGP SEQ ID NO 458 |
| QMGPPG SEQ ID NO802 | LLGAPG SEQ ID NO 785 | RPGVTG SEQ ID NO 823 |
| QQARLA SEQ ID NO837 | PPGHPG SEQ ID NO838 | PQGPRG SEQ ID NO 150 |
| PLGPPG SEQ ID NO839 | GEPGLL SEQ ID NO840 | EVGPLG SEQ ID NO841 |
| IMMPFQ SEQ ID NO842 | GLPGLK SEQ ID NO835 | PLGPSG SEQ ID NO843 |
| AAGPSG SEQ ID NO844 | PPGPLG SEQ ID NO845 | PPGSRG SEQ ID NO846 |
| PAGPMG SEQ ID NO847 | PPGSGG SEQ ID NO848 | PPGPPG SEQ ID NO119 |
| GLPGPV SEQ ID NO849 | LPGPVG SEQ ID NO850 | KPGPDG SEQ ID NO851 |
| LPGPQG SEQ ID NO852 | VIQPLP SEQ ID NO853 | RGPNGP SEQ ID NO854 |
| PGPQGS SEQ ID NO855 | EKGPLG SEQ ID NO856 | PLGPPG SEQ ID NO839 |
| GPPGAA SEQ ID NO857 | TGPKGE SEQ ID NO858 | GPKGSI SEQ ID NO816 |
| PPGPAG SEQ ID NO52 | PPGPAG SEQ ID NO52 | PPGPTG SEQ ID NO820 |
| QGLPGL SEQ ID NO859 | PSGLPG SEQ ID NO860 | LLGAPG SEQ ID NO785 |
| PPGSRG SEQ ID NO 846 | LPGPPG SEQ ID NO72 | PPGLPG SEQ ID NO861 |
| PPGPLG SEQ ID NO 845 | KPGPRG SEQ ID NO862 | PKGPPG SEQ ID NO 821 |
| PLGPLG SEQ ID NO863 | PPGSRG SEQ ID NO846 |
P是羟脯氨酸、K表示羟赖氨酸、糖基化、脂氧化或交联。
VI型胶原
我们已经确定了下表中列出的酶在至少如下的切割位点(标记为“.”或者当没有‘.’时在所述序列的末端)切割vi型胶原：
表14B.VI型胶原的切割片段
| 蛋白酶 | 新表位 |
| MMP2 | G.YRGPEGPQGPPG.H SEQ ID NO864 |
| MMP2 | G.PIGPKGYRGDEGPP.G SEQ ID NO865 |
| MMP2，(a3) | I.GIGIGNADIT.E SEQ ID NO866 |
| MMP2，(a3) | G.AQGPAGPAGPPG.L SEQ ID NO867 |
| MMP9 | G.LIGEQGISGPRG.S SEQ ID NO868 |
| MMP9 | P.PGLIGEQGISGPR.G SEQ ID NO869 |
| MMP9 | E.PGEPGPKGGIGNRG.P SEQ ID NO870 |
| MMP9 | G.ISGPRGSGGAAGAPGERGRTGPLG.R SEQ ID NO871 |
| MMP13 | PGPAGPPGDPGLMG SEQ ID NO872 |
| FAP-1 | VAAKPAAVRPPAAAAAKPVATKPEVPRP SEQ ID NO873 |
| FAP-1 | GEPGLNGTTGPKGI SEQ ID NO874 |
| FAP-1 | IGPKGIPGEDGYRGYPG SEQ ID NO875 |
| FAP-1 | VAVVQHAPSESVDNASMPPVKVEFSL SEQ ID NO876 |
| FAP-2 | LGPMGVPGRD SEQ ID NO877 |
| FAP-2 | GEPGPPGEKGEAGDEGNPGPDGAPGERG SEQ ID NO878 |
| FAP-2 | RGPIGSIGPKGIPGEDGYRGYPGDEGGP SEQ ID NO879 |
| FAP-2 | PPPPQPARSAS SEQ ID NO880 |
| FAP-2 | FGPSAATPAPPG SEQ ID NO881 |
| FAP-2 | GPKGETGDLGPMGVPGRDGVPGGPGETGK SEQ ID NO882 |
所述免疫结合伴侣可以是与切割v型胶原所形成的C-末端或N-末端新表位特异性反应的免疫结合伴侣。
因此，合适的免疫结合伴侣可以与肽N末端的下述任意序列特异性地反应：
表15b.蛋白酶产生的VI型胶原肽片段的N-末端序列。
| VI型胶原 | ||
| YRGPEG SEQ ID NO883 | PIGPKG SEQ ID NO865 | GIGIGN SEQ ID NO885 |
| ISGPRG SEQ ID NO886 | PGPAGP SEQ ID NO887 | VAAKPA SEQ ID NO888 |
| GEPGPP SEQ ID NO675 | RGPIGS SEQ ID NO889 | PPPPQP SEQ ID NO890 |
| AQGPAG SEQ ID NO891 | LIGEQG SEQ ID NO892 | PGLIGE SEQ ID NO893 |
| GEPGLN SEQ ID NO894 | IGPKGI SEQ ID NO895 | VAVVQH SEQ ID NO896 |
| FGPSAA SEQ ID NO897 | GPKGET SEQ ID NO898 | PGEPGP SEQ ID NO784 |
| LGPMGV SEQ ID NO899 |
或者与肽C末端的下述任意序列特异性地反应：
表16b.蛋白酶产生的VI型胶原肽片段的C-末端序列。
| VI型胶原 | ||
| GDEGPP SEQ ID NO900 | GNADIT SEQ ID NO901 | PAGPPG SEQ ID NO133 |
| DPGLMG SEQ ID NO902 | PEVPRP SEQ ID NO903 | TGPKGI SEQ ID NO904 |
| GDEGGP SEQ ID NO905 | PARSAS SEQ ID NO906 | TPAPPG SEQ ID NO915 |
| ISGPRG SEQ ID NO886 | GISGPR SEQ ID NO907 | GIGNRG SEQ ID NO908 |
| YRGYPG SEQ ID NO909 | KVEFSL SEQ ID NO910 | GVPGRD SEQ ID NO911 |
| PGETGK SEQ ID NO912 | RTGPLG SEQ ID NO913 | APGERG SEQ ID NO914 |
蛋白聚糖
在本发明的另一方面，所述肽片段是下述蛋白聚糖的片段：多功能蛋白聚糖、光亮蛋白聚糖、基底膜蛋白聚糖、双糖链蛋白聚糖和饰胶蛋白聚糖，其均在纤维化组织中鉴定到。
数种候选蛋白酶可负责纤维化病变中蛋白聚糖的消化。我们已经确定表17中列出的酶产生光亮蛋白聚糖、多功能蛋白聚糖、双糖链蛋白聚糖、基底膜蛋白聚糖和饰胶蛋白聚糖，得到至少如下的切割产物：
表17.双糖链蛋白聚糖、饰胶蛋白聚糖、多功能蛋白聚糖、光亮蛋白聚糖和基底膜蛋白聚糖的切割片段。
| 蛋白酶 | 双糖链蛋白聚糖 |
| MMP-3 | SVPKEISPDTTLLDLQNNDISE SEQ ID NO916 |
| MMP-3 | KSVPKEISPDTTLLDLQNNDISE SEQ ID NO917 |
| MMP-9 | NSGFEPGAFDGLKLNYLRISEAK SEQ ID NO918 |
| MMP-9 | LKSVPKEISPDTTLLDLQNNDISE SEQ ID NO919 |
| MMP-12 | LRISEAKLTGIPKDLPET SEQ ID NO920 |
| MMP-13 | LKSVPKEISPDTTLLDLQNNDISE SEQ ID NO919 |
| MMP-13 | LTGIPKDLPETLNELHLDHNKIQAIE SEQ ID NO921 |
| ADAMTS4 | RISEAKLTGIPKDLPETLNE SEQ ID NO922 |
| ADAMTS4 | AIELEDLLRYSK SEQ ID NO923 |
| ADAMTS4 | AIELEDLLRY SEQ ID NO924 |
| ADAMTS4 | EAKLTGIPKDLPETLNE SEQ ID NO925 |
| ADAMTS4 | LKAVPKEISPDTTLLDLQNNDISE SEQ ID NO926 |
| MMP-8 | LLDLQNNDISELRKDD SEQ ID NO 927 |
| MMP-8 | IELEDLLRYS SEQ ID NO928 |
| CathepsinS | NSGFEPGAFDGLK SEQ ID NO929 |
| 蛋白酶 | 饰胶蛋白聚糖 |
| MMP-12 | IVIELGTNPLK SEQ ID NO930 |
| MMP-3 | DEASGIGPEVPDDR SEQ ID NO931 |
| MMP-3 | LHLDGNKISRVDAAS SEQ ID NO932 |
| MMP-3 | VNNKISKVSPGAFTPL SEQ ID NO933 |
| MMP-3 | LILVNNKISKVSPGAFTPLVKLER SEQ ID NO934 |
| MMP-9 | SNPVQYWEIQPSTFR SEQ ID NO935 |
| 组织蛋白酶K | SSGIENGAFQGMK SEQ ID NO884 |
| 组织蛋白酶K | SSGIENGAFQGMKKLS SEQ ID NO946 |
| ADAMTS1 | KITEIKDGDFK SEQ ID NO936 |
| ADAMTS1 | GLPPSLTELHLDGNK SEQ ID NO937 |
| 多功能蛋白聚糖 | |
| 未知 | LLASDAGLYR SEQ ID NO938 |
| 未知 | LATVGELQAAWR SEQ ID NO 939 |
| 未知 | ETTVLVAQNGNIK SEQ ID NO940 |
| 光亮蛋白聚糖 | |
| 未知 | SLEDLQLTHNK SEQ ID NO941 |
| 未知 | LKEDAVSAAFK SEQ ID NO942 |
| 基底膜蛋白聚糖 | |
| 未知 | SIEYSPQLEDAGSR SEQ ID NO943 |
| 未知 | LEGDTLIIPR SEQ ID NO944 |
| ADAMTS4 | VSEAVVEKLEPEYR SEQ ID NO945 |
| ADAMTS4 | EVSEAVVEKLEPEYR SEQ ID NO947 |
| ADAMTS4 | SIEYSPQLEDASAKEFR SEQ ID NO948 |
所述免疫结合伴侣可以是与切割多功能蛋白聚糖、光亮蛋白聚糖、饰胶蛋白聚糖、基底膜蛋白聚糖和双糖链蛋白聚糖所形成的C-末端或N-末端新表位特异性反应的免疫结合伴侣。
因此，合适的免疫结合伴侣可与肽N末端的下述任意序列特异性地反应：
表18.蛋白酶产生的双糖链蛋白聚糖、饰胶蛋白聚糖、光亮蛋白聚糖、多功能蛋白聚糖和基底膜蛋白聚糖之肽片段的N-末端序列。
| 双糖链蛋白聚糖 | ||
| SVPKEISEQ ID NO949 | GLKLNY SEQ ID NO950 | RISEAK SEQ ID NO951 |
| NSGFEP SEQ ID NO952 | LKSVPK SEQ ID NO953 | AIELED SEQ ID NO954 |
| IELEDL SEQ ID NO957 | QCSDLG SEQ ID NO955 | EAKLTG SEQ ID NO956 |
| LRISEA SEQ ID NO958 | LTGIPK SEQ ID NO959 | LKAVPK SEQ ID NO960 |
| LLDLQN SEQ ID NO961 | ||
| 饰胶蛋白聚糖 |
| IVIELG SEQ ID NO962 | DEASGI SEQ ID NO 963 | VNNKIS SEQ ID NO964 |
| NGLNQM SEQ ID NO965 | LHLDGN SEQ ID NO966 | LILVNN SEQ ID NO967 |
| SSGIEN SEQ ID NO968 | KITEIK SEQ ID NO969 | GLPPSL SEQ ID NO970 |
| SNPVQY SEQ ID NO971 | ||
| 多功能蛋白聚糖 | ||
| LLASDA SEQ ID NO972 | LATVGE SEQ ID NO973 | ETTVLV SEQ ID NO974 |
| ENQDAR SEQ ID NO975 | NGFDQC SEQ ID NO976 | SLTVVK SEQ ID NO977 |
| 光亮蛋白聚糖 | ||
| SLEDLQ SEQ ID NO978 | LKEDAV SEQ ID NO979 | HLQHNR SEQ ID NO980 |
| LQHNRL SEQ ID NO985 | ||
| 基底膜蛋白聚糖 | ||
| SIEYSP SEQ ID NO981 | LVNFTR SEQ ID NO982 | VSEAVV SEQ ID NO983 |
| EVSEAV SEQ ID NO984 |
或者与肽C末端的表19中下述任意序列特异性地反应：
表19.蛋白酶产生的双糖链蛋白聚糖、饰胶蛋白聚糖、光亮蛋白聚糖、多功能蛋白聚糖和基底膜蛋白聚糖之肽片段的C-末端序列。
| 双糖链蛋白聚糖 | ||
| NNDISE SEQ ID NO986 | YWEVQP SEQ ID NO987 | EDLLRY SEQ ID NO988 |
| RISEAK SEQ ID NO951 | KIQAIE SEQ ID NO989 | PETLNE SEQ ID NO990 |
| LRKDDF SEQ ID NO991 | LLRYSK SEQ ID NO992 | ELRKDD SEQ ID NO993 |
| KDLPET SEQ ID NO994 | DLLRYS SEQ ID NO995 | AFDGLK SEQ ID NO996 |
| LNELHL SEQ ID NO997 | ||
| 饰胶蛋白聚糖 | ||
| GTNPLK SEQ ID NO998 | EVPDDR SEQ ID NO999 | GAFTPL SEQ ID NO1000 |
| SSGIEN SEQ ID NO968 | RVDAAS SEQ ID NO1001 | LVKLER SEQ ID NO1002 |
| GMKKLS SEQ ID NO1003 | KDGDFK SEQ ID NO1004 | HLDGNK SEQ ID NO1005 |
| QPSTFR SEQ ID NO1006 | AFQGMK SEQ ID NO1007 | |
| 多功能蛋白聚糖 |
| CDVMYG SEQ ID NO1008 | NGFDQC SEQ ID NO976 | QNGINK SEQ ID NO1009 |
| IGQDYK SEQ ID NO1010 | ||
| 光亮蛋白聚糖 | ||
| QLTHNK SEQ ID NO1011 | VSAAFK SEQ ID NO1012 | GLKSLE SEQ ID NO1013 |
| 基底膜蛋白聚糖 | ||
| EDAGSR SEQ ID NO1014 | EFREVS SEQ ID NO1015 | VAQQDS SEQ ID NO 1016 |
| SAKEFR SEQ ID NO1017 | LEPEYR SEQ ID NO1018 |
CRP
数种候选蛋白酶可负责纤维化组织中CRP的消化，文献报道了纤维化组织中很多不同的蛋白酶。最有可能的，这是最终导致纤维化的大范围的复杂过程的结果。然而，在我们的评价中，早期阶段可由一系列MMP构成，而晚期阶段可更依赖于基质的组织蛋白酶K降解，导致不同的依赖于疾病水平的新表位特征谱。我们通过一系列的体外切割纯的天然蛋白质，已经确定了下表中列出的酶至少在如下的切割位点(在表20中标记为*，但在表21中在每个序列的末端)切割CRP：
表20.特异性蛋白酶产生的CRP片段。
| 蛋白酶/蛋白 | 新表位 |
| CRP+CatK | K*ESDTSYVSLKAPLT*K SEQ ID NO1019 |
| CRP+CatK | G*GNFEGSQSLVGDIG*N SEQ ID NO1020 |
| CRP+MMP9 | A*LKYEVQGEVFTKPQ*L SEQ ID NO1021 |
| CRP+MMP9 | G*IVEFWVDGKPRV*R SEQ ID NO1022 |
| CRP+MMP1/MMP3 | R*KAFVFPKE*S SEQ ID NO1023 |
| CRP+MMP3 | K*YEVQGEVFTKPQLWP*-SEQ ID NO1024 |
| CRP+MMP3 | D*SFGGNFEGSQS*L SEQ ID NO1025 |
| CRP+MMP3 | D*FVLSPDEINT*I SEQ ID NO1026 |
| CRP+MMP3 | S*LKKGYTVGAEA*S SEQ ID NO1027 |
| CRP+MMP3 | A*FGQTDMSRKA*F SEQ ID NO1028 |
| CRP+MMP3 | S*LKKGYTVGAEAS*I SEQ ID NO1029 |
| CRP+MMP3 | G*EVFTKPQLWP*-SEQ ID NO1030 |
| CRP+MMP3 | S*IILGQEQDSFGGN.F SEQ ID NO1031 |
| CRP+MMP3 | K*YEVQGEVFTKPQ.L SEQ ID NO1032 |
表21.特异性蛋白酶产生的CRP片段。
| 蛋白酶 | 新表位 | 氨基酸No* |
| MMP9 | AFVFPK SEQ ID NO1033 | 026-031 |
| MMP9 | FGQTDMSR SEQ ID NO1034 | 017-024 |
| MMP9 | FGQTDMSRK SEQ ID NO1035 | 017-025 |
| MMP9 | FGQTDMSRKA SEQ ID NO1036 | 017-026 |
| MMP9 | FGQTDMSRKAF SEQ ID NO1037 | 017-027 |
| MMP9 | FGQTDMSRKAFVFPKE SEQ ID NO1038 | 017-032 |
| MMP9 | FGQTDMSRKAFVFPKESDTS SEQ ID NO1039 | 017-036 |
| MMP9 | FGQTDMSRKAFVFPKESDTSYV SEQ ID NO1040 | 017-038 |
| MMP9 | FGQTDMSRKAFVFPKESDTSYVS SEQ ID NO1041 | 017-039 |
| MMP9 | TDMSRKAFVFPKESDTSYV SEQ ID NO1042 | 020-038 |
| MMP9 | MSRKAFVFPKESDTS SEQ ID NO1043 | 022-036 |
| MMP9 | SRKAFVFPKESDTSYV SEQ ID NO1044 | 023-038 |
| MMP9 | RKAFVFPKE SEQ ID NO1045 | 024-032 |
| MMP9 | RKAFVFPKESDTSYV SEQ ID NO1046 | 024-038 |
| MMP9 | RKAFVFPKESDTSYVS SEQ ID NO1047 | 024-039 |
| MMP9 | KAFVFPKE SEQ ID NO1048 | 025-032 |
| MMP9 | KAFVFPKESD SEQ ID NO1049 | 025-034 |
| MMP9 | KAFVFPKESDT SEQ ID NO1050 | 025-035 |
| MMP9 | KAFVFPKESDTS SEQ ID NO1051 | 025-036 |
| MMP9 | KAFVFPKESDTSYV SEQ ID NO1052 | 025-038 |
| MMP9 | KAFVFPKESDTSYVS SEQ ID NO1053 | 025-039 |
| MMP9 | AFVFPKE SEQ ID NO1054 | 026-032 |
| MMP9 | AFVFPKESDT SEQ ID NO1055 | 026-035 |
| MMP9 | AFVFPKESDTSYV SEQ ID NO1056 | 026-038 |
| MMP9 | AFVFPKESDTSYVS SEQ ID NO1057 | 026-039 |
| MMP 9 | AFVFPKESDTSYVSL SEQ ID NO1058 | 026-040 |
| MMP 9 | FVFPK SEQ ID NO1059 | 027-031 |
| MMP9 | FVFPKE SEQ ID NO1060 | 027-032 |
| MMP9 | FVFPKESD SEQ ID NO1061 | 027-034 |
| MMP9 | FVFPKESDTS SEQ ID NO1062 | 027-036 |
| MMP 9 | FVFPKESDTSY SEQ ID NO1063 | 027-037 |
| MMP 9 | FVFPKESDTSYV SEQ ID NO1064 | 027-038 |
| MMP9 | FVFPKESDTSYVS SEQ ID NO1065 | 027-039 |
| MMP9 | FVFPKESDTSYVSL SEQ ID NO1066 | 027-040 |
| MMP 9 | VFPKESDTS SEQ ID NO1067 | 028-036 |
| MMP9 | VFPKESDTSYV SEQ ID NO1068 | 028-038 |
| MMP9 | VFPKESDTSYVS SEQ ID NO1069 | 028-039 |
| MMP 9 | VFPKESDTSYVSL SEQ ID NO1070 | 028-040 |
| MMP9 | FPKESDTSYVS SEQ ID NO1071 | 029-039 |
| MMP9 | KESDTSYVSLKAPLTKP SEQ ID NO1072 | 031-047 |
| MMP 9 | SDTSYVSLKAPLTKP SEQ ID NO1073 | 033-047 |
| MMP9 | SLKAPLTKP SEQ ID NO1074 | 039-047 |
| MMP9 | SLKAPLTKPLK SEQ ID NO1075 | 039-049 |
| MMP9 | LKAPLTKPLK SEQ ID NO1076 | 040-049 |
| MMP9 | FYTELSSTRGYS SEQ ID NO1077 | 057-068 |
| MMP9 | LSSTRGYS SEQ ID NO1078 | 061-068 |
| MMP9 | SSTRGYS SEQ ID NO1079 | 062-068 |
| MMP9 | STRGYS SEQ ID NO1080 | 063-068 |
| MMP9 | IFSYATKRQ SEQ ID NO1081 | 069-077 |
| MMP9 | IFSYATKRQDNEILI SEQ ID NO1082 | 069-083 |
| MMP9 | SYATKRQDNEILI SEQ ID NO1083 | 071-083 |
| MMP9 | YATKRQDNEIL SEQ ID NO1084 | 072-082 |
| MMP9 | YATKRQDNEILI SEQ ID NO1085 | 072-083 |
| MMP9 | YATKRQDNEILIF SEQ ID NO1086 | 072-084 |
| MMP9 | TKRQDNEILI SEQ ID NO1087 | 074-083 |
| MMP9 | TKRQDNEILIF SEQ ID NO1088 | 074-084 |
| MMP9 | TKRQDNEILIFWSKDI SEQ ID NO1089 | 074-089 |
| MMP9 | KRQDNEILI SEQ ID NO1090 | 075-083 |
| MMP9 | KRQDNEILIF SEQ ID NO1091 | 075-084 |
| MMP9 | WSKDIGYS SEQ ID NO1092 | 085-092 |
| MMP9 | SKDIGYS SEQ ID NO1093 | 086-092 |
| MMP9 | IVEFWVDGKPRV SEQ ID NO1094 | 124-135 |
| MMP9 | EFWVDGKPR SEQ ID NO1095 | 126-134 |
| MMP9 | WVDGKPRV SEQ ID NO1096 | 128-135 |
| MMP9 | VDGKPRV SEQ ID NO1097 | 129-135 |
| MMP9 | SLKKGYTVGAE SEQ ID NO1098 | 138-148 |
| MMP9 | SLKKGYTVGAEA SEQ ID NO1099 | 138-149 |
| MMP9 | SLKKGYTVGAEAS SEQ ID NO1100 | 138-150 |
| MMP9 | LKKGYTV SEQ ID NO1101 | 139-145 |
| MMP9 | LKKGYTVG SEQ ID NO1102 | 139-146 |
| MMP9 | LKKGYTVGA SEQ ID NO1103 | 139-147 |
| MMP9 | LKKGYTVGAE SEQ ID NO1104 | 139-148 |
| MMP9 | LKKGYTVGAEA SEQ ID NO1105 | 139-149 |
| MMP9 | LKKGYTVGAEAS SEQ ID NO1106 | 139-150 |
| MMP9 | LKKGYTVGAEASI SEQ ID NO1107 | 139-151 |
| MMP9 | SIILGQEQDSFGGN SEQ ID NO1108 | 150-163 |
| MMP9 | SIILGQEQDSFGGNFEGSQ SEQ ID NO1109 | 150-168 |
| MMP9 | SIILGQEQDSFGGNFEGSQS SEQ ID NO1110 | 150-169 |
| MMP9 | IILGQEQDSFGGNFEGS SEQ ID NO1111 | 151-067 |
| MMP9 | IILGQEQDSFGGNFEGSQS SEQ ID NO1112 | 151-169 |
| MMP9 | ILGQEQDSFGGN SEQ ID NO1113 | 152-163 |
| MMP9 | ILGQEQDSFGGNFEGSQ SEQ ID NO1114 | 152-168 |
| MMP9 | ILGQEQDSFGGNFEGSQS SEQ ID NO1115 | 152-169 |
| MMP9 | LGQEQDSFGGNFEGSQ SEQ ID NO1116 | 153-168 |
| MMP9 | LGQEQDSFGGNFEGSQS SEQ ID NO1117 | 153-169 |
| MMP9 | GQEQDSFGGNFEGSQS SEQ ID NO1118 | 154-169 |
| MMP9 | SFGGNFEGSQS SEQ ID NO1119 | 159-169 |
| MMP9 | QSLVGDIGNVN SEQ ID NO1120 | 168-178 |
| MMP9 | INTIYLGGPFSPNV SEQ ID NO1121 | 189-202 |
| MMP9 | INTIYLGGPFSPNVLN SEQ ID NO1122 | 189-204 |
| MMP9 | IYLGGPFSPNVLN SEQ ID NO1123 | 192-204 |
| MMP9 | YLGGPFSPNVLN SEQ ID NO1124 | 193-204 |
| MMP9 | LGGPFSPN SEQ ID NO1125 | 194-201 |
| MMP9 | SPNVLNWRALKYEVQGEVFTKPQLWP SEQ ID NO1126 | 199-224 |
| MMP9 | LNWRA SEQ ID NO1127 | 203-207 |
| MMP9 | LNWRAL SEQ ID NO1128 | 203-208 |
| MMP9 | LNWRALK SEQ ID NO1129 | 203-209 |
| MMP9 | WRALKYE SEQ ID NO1130 | 205-211 |
| MMP9 | WRALKYEV SEQ ID NO1131 | 205-212 |
| MMP9 | WRALKYEVQGE SEQ ID NO1132 | 205-215 |
| MMP9 | ALKYEV SEQ ID NO1133 | 207-212 |
| MMP9 | LKYEVQ SEQ ID NO1134 | 208-213 |
| MMP9 | LKYEVQG SEQ ID NO1135 | 208-214 |
| MMP9 | LKYEVQGE SEQ ID NO1136 | 208-215 |
| MMP9 | LKYEVQGEVFTKP SEQ ID NO1137 | 208-220 |
| MMP9 | LKYEVQGEVFTKPQ SEQ ID NO1138 | 208-221 |
| MMP9 | LKYEVQGEVFTKPQLWP SEQ ID NO1139 | 208-224 |
| MMP9 | KYEVQGE SEQ ID NO1140 | 209-215 |
| MMP9 | KYEVQGEVFTKPQ SEQ ID NO1141 | 209-221 |
| MMP9 | KYEVQGEVFTKPQLWP SEQ ID NO1142 | 209-224 |
| MMP9 | YEVQGEVFTKP SEQ ID NO1143 | 210-220 |
| MMP9 | YEVQGEVFTKPQ SEQ ID NO1144 | 210-221 |
| MMP9 | YEVQGEVFTKPQLWP SEQ ID NO1145 | 210-224 |
| MMP9 | VQGEVFTKPQ SEQ ID NO1146 | 212-221 |
| MMP9 | VQGEVFTKPQLWP SEQ ID NO1147 | 212-224 |
| MMP9 | QGEVFTKPQ SEQ ID NO1148 | 213-221 |
| MMP9 | GEVFTKP SEQ ID NO1149 | 214-220 |
| MMP9 | GEVFTKPQ SEQ ID NO1150 | 214-221 |
| MMP9 | EVFTKPQ SEQ ID NO1151 | 215-221 |
| MMP9 | EVFTKPQLWP SEQ ID NO1152 | 215-224 |
| MMP9 | VFTKPQ SEQ ID NO1153 | 216-221 |
| MMP9 | FTKPQ SEQ ID NO1154 | 217-221 |
| MMP9 | FTKPQLWP SEQ ID NO1155 | 217-224 |
| MMP9 | TKPQLWP SEQ ID NO1156 | 218-224 |
| MMP9 | KPQLWP SEQ ID NO1157 | 219-224 |
| MMP12 | FGQTDMSRKA SEQ ID NO1036 | 017-026 |
| MMP12 | MSRKAFVFP SEQ ID NO1158 | 022-030 |
| MMP12 | MSRKAFVFPKE SEQ ID NO1159 | 022-032 |
| MMP12 | MSRKAFVFPKESD SEQ ID NO1160 | 022-034 |
| MMP12 | MSRKAFVFPKESDTS SEQ ID NO1043 | 022-036 |
| MMP12 | MSRKAFVFPKESDTSYVS SEQ ID NO1161 | 022-039 |
| MMP12 | SRKAFVFP SEQ ID NO1162 | 023-030 |
| MMP12 | SRKAFVFPKESD SEQ ID NO1163 | 023-034 |
| MMP12 | SRKAFVFPKESDTS SEQ ID NO1164 | 023-036 |
| MMP12 | RKAFVFP SEQ ID NO1165 | 024-030 |
| MMP12 | RKAFVFPKESD SEQ ID NO1166 | 024-034 |
| MMP12 | KAFVFP SEQ ID NO1167 | 025-030 |
| MMP12 | KAFVFPKE SEQ ID NO1048 | 025-032 |
| MMP12 | KAFVFPKESD SEQ ID NO1049 | 025-034 |
| MMP12 | AFVFPKE SEQ ID NO1054 | 026-032 |
| MMP12 | AFVFPKESDTS SEQ ID NO1168 | 026-036 |
| MMP12 | AFVFPKESDTSYVS SEQ ID NO1057 | 026-039 |
| MMP12 | FVFPKE SEQ ID NO1060 | 027-032 |
| MMP12 | FVFPKESD SEQ ID NO1061 | 027-034 |
| MMP12 | FVFPKESDTS SEQ ID NO1062 | 027-036 |
| MMP12 | FVFPKESDTSY SEQ ID NO1063 | 027-037 |
| MMP12 | FVFPKESDTSYVS SEQ ID NO1065 | 027-039 |
| MMP12 | VFPKESD SEQ ID NO1169 | 028-034 |
| MMP12 | KESDTSY SEQ ID NO1170 | 031-037 |
| MMP12 | KESDTSYVS SEQ ID NO1171 | 031-039 |
| MMP12 | VSLKAP SEQ ID NO1172 | 038-043 |
| MMP12 | LKAPLT SEQ ID NO1173 | 040-045 |
| MMP12 | LKAPLTKP SEQ ID NO1174 | 040-047 |
| MMP12 | YTELSSTRGYS SEQ ID NO1175 | 058-068 |
| MMP12 | LSSTRGYS SEQ ID NO1078 | 061-068 |
| MMP12 | STRGYS SEQ ID NO1080 | 063-068 |
| MMP12 | YATKRQDNE SEQ ID NO1176 | 072-080 |
| MMP12 | YATKRQDNEI SEQ ID NO1177 | 072-081 |
| MMP12 | YATKRQDNEIL SEQ ID NO1084 | 072-082 |
| MMP12 | TKRQDNEIL SEQ ID NO1178 | 074-082 |
| MMP12 | KRQDNEIL SEQ ID NO1179 | 075-082 |
| MMP12 | ILIFWSKD SEQ ID NO1180 | 081-088 |
| MMP12 | IFWSKD SEQ ID NO1181 | 083-088 |
| MMP12 | SKDIGYS SEQ ID NO1093 | 086-092 |
| MMP12 | WVDGKPRV SEQ ID NO1096 | 128-135 |
| MMP12 | WVDGKPRVR SEQ ID NO1182 | 128-136 |
| MMP12 | VRKSLKKGYTVGAEAS SEQ ID NO1183 | 135-150 |
| MMP12 | SLKKGYT SEQ ID NO1184 | 138-144 |
| MMP12 | SLKKGYTVG SEQ ID NO1185 | 138-146 |
| MMP12 | SLKKGYTVGA SEQ ID NO1186 | 138-147 |
| MMP12 | SLKKGYTVGAE SEQ ID NO1098 | 138-148 |
| MMP12 | SLKKGYTVGAEA SEQ ID NO1099 | 138-149 |
| MMP12 | SLKKGYTVGAEAS SEQ ID NO1100 | 138-150 |
| MMP12 | SLKKGYTVGAEASI SEQ ID NO1187 | 138-151 |
| MMP12 | LKKGYTV SEQ ID NO1101 | 139-145 |
| MMP12 | LKKGYTVG SEQ ID NO1102 | 139-146 |
| MMP12 | LKKGYTVGA SEQ ID NO1103 | 139-147 |
| MMP12 | LKKGYTVGAE SEQ ID NO1104 | 139-148 |
| MMP12 | LKKGYTVGAEA SEQ ID NO1105 | 139-149 |
| MMP12 | LKKGYTVGAEAS SEQ ID NO 1106 | 139-150 |
| MMP12 | LKKGYTVGAEASI SEQ ID NO 1107 | 139-151 |
| MMP12 | KKGYTVGAEAS SEQ ID NO1188 | 140-150 |
| MMP12 | KGYTVGAEAS SEQ ID NO1189 | 141-150 |
| MMP12 | KGYTVGAEASI SEQ ID NO1190 | 141-151 |
| MMP12 | SIILGQEQDSFGGN SEQ ID NO1108 | 150-163 |
| MMP12 | IILGQEQD SEQ ID NO1191 | 151-158 |
| MMP12 | IILGQEQDSFGGN SEQ ID NO1192 | 151-163 |
| MMP12 | IILGQEQDSFGGNFEGSQS SEQ ID NO1112 | 151-169 |
| MMP12 | ILGQEQDSFGGN SEQ ID NO1113 | 152-163 |
| MMP12 | LVGDIGNVNMWD SEQ ID NO1193 | 170-181 |
| MMP12 | INTIYLGGPFSPNVLN SEQ ID NO1122 | 189-204 |
| MMP12 | IYLGGPFSPN SEQ ID NO1194 | 192-201 |
| MMP12 | IYLGGPFSPNV SEQ ID NO1195 | 192-202 |
| MMP12 | IYLGGPFSPNVLN SEQ ID NO1123 | 192-204 |
| MMP12 | LGGPFSPNVLN SEQ ID NO1196 | 194-204 |
| MMP12 | WRALKYE SEQ ID NO1130 | 205-210 |
| MMP12 | YEVQGEVFTKP SEQ ID NO1143 | 210-220 |
| MMP12 | YEVQGEVFTKPQ SEQ ID NO1144 | 210-221 |
| MMP12 | YEVQGEVFTKPQLWP SEQ ID NO1145 | 210-224 |
| MMP12 | EVQGEVFTKP SEQ ID NO1197 | 211-220 |
| MMP12 | EVQGEVFTKPQLWP SEQ ID NO1198 | 211-224 |
| MMP12 | VQGEVFTKP SEQ ID NO1199 | 212-220 |
| MMP12 | VQGEVFTKPQ SEQ ID NO1146 | 212-221 |
| MMP12 | VQGEVFTKPQLWP SEQ ID NO1147 | 212-224 |
| MMP12 | GEVFTKPQLWP SEQ ID NO1200 | 214-224 |
| MMP12 | EVFTKP SEQ ID NO1201 | 215-220 |
| MMP12 | EVFTKPQLWP SEQ ID NO1152 | 215-224 |
| MMP12 | VFTKPQ SEQ ID NO1153 | 216-221 |
| MMP12 | VFTKPQL SEQ ID NO1202 | 216-222 |
| MMP12 | VFTKPQLWP SEQ ID NO1203 | 216-224 |
| MMP12 | FTKPQLWP SEQ ID NO1155 | 217-224 |
| MMP12 | TKPQLWP SEQ ID NO1156 | 218-224 |
| MMP1 | AFVFPK SEQ ID NO1033 | 006-031 |
| MMP1 | KAFVFPK SEQ ID NO1204 | 025-031 |
| MMP1 | VRKSLK SEQ ID NO1205 | 135-140 |
| MMP1 | YEVQGEVFTKPQLWP SEQ ID NO1145 | 210-224 |
| MMP3 | FGQTDMSRKA SEQ ID NO 1036 | 017-026 |
| MMP3 | FGQTDMSRKAF SEQ ID NO 1037 | 017-027 |
| MMP3 | MSRKAFVFPKESDTSYV SEQ ID NO1206 | 022-038 |
| MMP3 | MSRKAFVFPKESDTSYVS SEQ ID NO1161 | 022-039 |
| MMP3 | SRKAFVFPKESDTSYV SEQ ID NO1044 | 023-038 |
| MMP3 | SRKAFVFPKESDTSYVS SEQ ID NO1207 | 023-039 |
| MMP3 | RKAFVFPKESDTSYV SEQ ID NO1046 | 024-038 |
| MMP3 | RKAFVFPKESDTSYVS SEQ ID NO1047 | 024-039 |
| MMP3 | KAFVFPKE SEQ ID NO1048 | 025-032 |
| MMP3 | KAFVFPKESDTS SEQ ID NO1051 | 025-036 |
| MMP3 | KAFVFPKESDTSYVS SEQ ID NO1053 | 025-039 |
| MMP3 | KAFVFPKESDTSYVSL SEQ ID NO1208 | 025-040 |
| MMP3 | KAFVFPKESDTSYVSLK SEQ ID NO1209 | 025-041 |
| MMP3 | AFVFPKESDTSYVS SEQ ID NO1057 | 026-039 |
| MMP3 | AFVFPKESDTSYVSL SEQ ID NO1058 | 026-040 |
| MMP3 | AFVFPKESDTSYVSLKAP SEQ ID NO1210 | 026-043 |
| MMP3 | FVFPKESDTSYV SEQ ID NO1064 | 027-038 |
| MMP3 | FVFPKESDTSYVSLK SEQ ID NO1211 | 027-041 |
| MMP3 | VFPKESDTSYVSLK SEQ ID NO1212 | 028-041 |
| MMP3 | KESDTSYVSLKAP SEQ ID NO1213 | 031-043 |
| MMP3 | TKRQDNEILIFW SEQ ID NO1214 | 074-085 |
| MMP3 | IVEFWVDGKPRVRKS SEQ ID NO1215 | 124-138 |
| MMP3 | SLKKGYTVGAEA SEQ ID NO1099 | 138-149 |
| MMP3 | SLKKGYTVGAEAS SEQ ID NO1100 | 138-150 |
| MMP3 | LKKGYTVGAEA SEQ ID NO1105 | 139-149 |
| MMP3 | LKKGYTVGAEAS SEQ ID NO1106 | 139-150 |
| MMP3 | LKKGYTVGAEASI SEQ ID NO1107 | 139-151 |
| MMP3 | LKKGYTVGAEASII SEQ ID NO1216 | 139-152 |
| MMP3 | SIILGQEQDSFGGNFEGSQS SEQ ID NO1110 | 150-169 |
| MMP3 | I ILGQEQDSFGGN SEQ ID NO1192 | 151-163 |
| MMP3 | IILGQEQDSFGGNFEGSQS SEQ ID NO1112 | 151-169 |
| MMP3 | ILGQEQDSFGGNFEGSQS SEQ ID NO1115 | 152-169 |
| MMP3 | LGQEQDSFGGNFEGSQS SEQ ID NO1117 | 153-169 |
| MMP3 | QEQDSFGGNFEGSQS SEQ ID NO1217 | 155-169 |
| MMP3 | SFGGNFEGSQS SEQ ID NO1119 | 159-169 |
| MMP3 | LVGDIGNVNMWD SEQ ID NO1193 | 170-181 |
| MMP3 | FVLSPDEINT SEQ ID NO1218 | 182-191 |
| MMP3 | YLGGPFSPNVLN SEQ ID NO1124 | 193-204 |
| MMP3 | LKYEVQGEVFTKPQ SEQ ID NO1138 | 208-221 |
| MMP3 | KYEVQGEVFTKPQ SEQ ID NO1141 | 209-221 |
| MMP3 | KYEVQGEVFTKPQLWP SEQ ID NO1142 | 209-224 |
| MMP3 | YEVQGEVFTKPQ SEQ ID NO1144 | 210-221 |
| MMP3 | YEVQGEVFTKPQLWP SEQ ID NO1145 | 210-224 |
| MMP3 | EVQGEVFTKPQLWP SEQ ID NO1198 | 211-224 |
| MMP3 | VQGEVFTKPQLWP SEQ ID NO1147 | 212-224 |
| MMP3 | GEVFTKPQLWP SEQ ID NO1200 | 214-224 |
| MMP3 | EVFTKPQLWP SEQ ID NO1152 | 215-224 |
| MMP3 | SKDIGYSFTVGGSEI SEQ ID NO1219 | 86-100 |
| MMP8 | FGQTDMSR SEQ ID NO1034 | 017-024 |
| MMP8 | FGQTDMSRK SEQ ID NO1035 | 017-025 |
| MMP8 | FGQTDMSRKA SEQ ID NO1036 | 017-026 |
| MMP8 | FGQTDMSRKAF SEQ ID NO1037 | 017-027 |
| MMP8 | FGQTDMSRKAFV SEQ ID NO1220 | 017-028 |
| MMP8 | FGQTDMSRKAFVFPKESDTSYV SEQ ID NO1040 | 017-038 |
| MMP8 | MSRKAFVFPKESDTSYV SEQ ID NO1206 | 022-038 |
| MMP8 | SRKAFVFPKESDTSYV SEQ ID NO1044 | 023-038 |
| MMP8 | RKAFVFPKESDTSYV SEQ ID NO1046 | 024-038 |
| MMP8 | KAFVFPKESDT SEQ ID NO1050 | 025-035 |
| MMP8 | KAFVFPKESDTS SEQ ID NO1051 | 025-036 |
| MMP8 | KAFVFPKESDTSYV SEQ ID NO1052 | 025-038 |
| MMP8 | KAFVFPKESDTSYVS SEQ ID NO1053 | 025-039 |
| MMP8 | AFVFPKESDTSYV SEQ ID NO1056 | 026-038 |
| MMP8 | FVFPKESDTSYV SEQ ID NO1064 | 027-038 |
| MMP8 | VFPKESDTSYV SEQ ID NO1068 | 028-038 |
| MMP8 | FPKESDTSYV SEQ ID NO1221 | 029-038 |
| MMP8 | SLKAPL SEQ ID NO1222 | 039-044 |
| MMP8 | SLKAPLTKP SEQ ID NO1074 | 039-047 |
| MMP8 | SLKAPLTKPLKA SEQ ID NO1223 | 039-050 |
| MMP8 | RGYSIFSYA SEQ ID NO1224 | 065-073 |
| MMP8 | FSYATKRQDNEILI SEQ ID NO1225 | 070-083 |
| MMP8 | SYATKRQDNEILI SEQ ID NO1083 | 071-083 |
| MMP8 | YATKRQDNEILI SEQ ID NO1085 | 072-083 |
| MMP8 | ATKRQDNEILI SEQ ID NO1226 | 073-083 |
| MMP8 | TKRQDNEILI SEQ ID NO1087 | 074-083 |
| MMP8 | TKRQDNEILIF SEQ ID NO1088 | 074-084 |
| MMP8 | FWSKDIGYS SEQ ID NO1227 | 084-092 |
| MMP8 | FWSKDIGYSFT SEQ ID NO1228 | 084-094 |
| MMP8 | FWSKDIGYSFTV SEQ ID NO1229 | 084-095 |
| MMP8 | WSKDIGYSFTV SEQ ID NO1230 | 085-095 |
| MMP8 | KSLKKGYTVGAEA SEQ ID NO1231 | 137-149 |
| MMP8 | SLKKGYTVGAEA SEQ ID NO1099 | 138-149 |
| MMP8 | LKKGYTV SEQ ID NO1101 | 139-145 |
| MMP8 | LKKGYTVGAEA SEQ ID NO1105 | 139-149 |
| MMP8 | LKKGYTVGAEAS SEQ ID NO1106 | 139-150 |
| MMP8 | KKGYTVGAEA SEQ ID NO1232 | 140-149 |
| MMP8 | GAEASIILGQE SEQ ID NO1233 | 146-156 |
| MMP8 | GAEASIILGQEQD SEQ ID NO1234 | 146-158 |
| MMP8 | SIILGQEQD SEQ ID NO1235 | 150-158 |
| MMP8 | SIILGQEQDSFGGNFEGSQ SEQ ID NO1109 | 150-168 |
| MMP8 | SIILGQEQDSFGGNFEGSQS SEQ ID NO1110 | 150-169 |
| MMP8 | IILGQEQDSFGGN SEQ ID NO1192 | 151-163 |
| MMP8 | IILGQEQDSFGGNFEGSQ SEQ ID NO1236 | 151-168 |
| MMP8 | IILGQEQDSFGGNFEGSQS SEQ ID NO1112 | 151-169 |
| MMP8 | ILGQEQDSFGGN SEQ ID NO1113 | 152-163 |
| MMP8 | ILGQEQDSFGGNFEGS SEQ ID NO1237 | 152-167 |
| MMP8 | ILGQEQDSFGGNFEGSQ SEQ ID NO1114 | 152-168 |
| MMP8 | ILGQEQDSFGGNFEGSQS SEQ ID NO1115 | 152-169 |
| MMP8 | LGQEQDSFGGN SEQ ID NO1238 | 153-163 |
| MMP8 | LGQEQDSFGGNFEGS SEQ ID NO1239 | 153-167 |
| MMP8 | LGQEQDSFGGNFEGSQ SEQ ID NO1116 | 153-168 |
| MMP8 | LGQEQDSFGGNFEGSQS SEQ ID NO1117 | 153-169 |
| MMP8 | LGQEQDSFGGNFEGSQSL SEQ ID NO1240 | 153-170 |
| MMP8 | LGQEQDSFGGNFEGSQSLV SEQ ID NO1241 | 153-171 |
| MMP8 | QDSFGGNFEGSQS SEQ ID NO1242 | 157-169 |
| MMP8 | SFGGNFEGSQ SEQ ID NO1243 | 159-168 |
| MMP8 | SFGGNFEGSQS SEQ ID NO1119 | 159-169 |
| MMP8 | SFGGNFEGSQSLV SEQ ID NO1244 | 159-171 |
| MMP8 | LVGDIGNVNMW SEQ ID NO1245 | 170-180 |
| MMP8 | INTIYLGGPFSPN SEQ ID NO1246 | 189-201 |
| MMP8 | TIYLGGPFSPN SEQ ID NO1247 | 191-201 |
| MMP8 | IYLGGPFSPN SEQ ID NO1194 | 192-201 |
| MMP8 | YLGGPFSPNV SEQ ID NO1248 | 193-202 |
| MMP8 | YLGGPFSPNVLN SEQ ID NO1124 | 193-204 |
| MMP8 | LGGPFSPNVLN SEQ ID NO1196 | 194-204 |
| MMP8 | VLNWRA.SEQ ID NO1249 | 202-207 |
| MMP8 | VLNWRAL SEQ ID NO1250 | 202-208 |
| MMP8 | VLNWRALK SEQ ID NO1251 | 202-209 |
| MMP8 | LNWRAL SEQ ID NO1128 | 203-208 |
| MMP8 | LNWRALK SEQ ID NO1129 | 203-209 |
| MMP8 | LNWRALKYEV SEQ ID NO1252 | 203-212 |
| MMP8 | NWRAL SEQ ID NO1253 | 204-208 |
| MMP8 | NWRALKY SEQ ID NO1254 | 204-210 |
| MMP8 | NWRALKYEV SEQ ID NO1255 | 204-212 |
| MMP8 | NWRALKYEVQ SEQ ID NO1256 | 204-213 |
| MMP8 | WRALKYE SEQ ID NO1130 | 205-211 |
| MMP8 | WRALKYEVQ SEQ ID NO1257 | 205-213 |
| MMP8 | WRALKYEVQGE SEQ ID NO1132 | 205-215 |
| MMP8 | RALKYEV SEQ ID NO1258 | 206-212 |
| MMP8 | RALKYEVQ SEQ ID NO1259 | 206-213 |
| MMP8 | RALKYEVQGE SEQ ID NO1260 | 206-215 |
| MMP8 | ALKYEV SEQ ID NO1133 | 207-212 |
| MMP8 | ALKYEVQGEVFTKPQ SEQ ID NO1261 | 207-221 |
| MMP8 | LKYEVQGE SEQ ID NO1136 | 208-215 |
| MMP8 | LKYEVQGEVFTKPQ SEQ ID NO1138 | 208-221 |
| MMP8 | KYEVQGEVFTKPQ SEQ ID NO1141 | 209-221 |
| MMP8 | KYEVQGEVFTKPQLWP SEQ ID NO1142 | 209-224 |
| MMP8 | YEVQGEVFTKPQ SEQ ID NO1144 | 210-221 |
| MMP8 | YEVQGEVFTKPQLWP SEQ ID NO1145 | 210-224 |
| MMP8 | EVQGEVFTKPQ SEQ ID NO1262 | 211-221 |
| MMP8 | EVQGEVFTKPQLWP SEQ ID NO1198 | 211-224 |
| MMP8 | VQGEVFTKPQ SEQ ID NO1146 | 212-221 |
| MMP8 | VQGEVFTKPQLWP SEQ ID NO1147 | 212-224 |
| MMP8 | QGEVFTKPQ SEQ ID NO1148 | 213-221 |
| MMP8 | QGEVFTKPQL SEQ ID NO1263 | 213-222 |
| MMP8 | QGEVFTKPQLWP SEQ ID NO1264 | 213-224 |
| MMP8 | GEVFTKPQ SEQ ID NO1150 | 214-221 |
| MMP8 | GEVFTKPQLWP SEQ ID NO1200 | 214-224 |
| MMP8 | VFTKPQ SEQ ID NO1153 | 216-221 |
| MMP8 | VFTKPQLWP SEQ ID NO1203 | 216-224 |
| MMP8 | FTKPQLWP SEQ ID NO1155 | 217-224 |
| MMP8 | TKPQLWP SEQ ID NO1156 | 218-224 |
| ADAMTS-1 | ESDTSYVSLK SEQ ID NO1265 | 032-041 |
| ADAMTS-1 | QEQDSFGGNFEGSQ SEQ ID NO1266 | 155-168 |
| ADAMTS-1 | QEQDSFGGNFEGSQSLVG SEQ ID NO1267 | 155-172 |
| ADAMTS-1 | GNFEGSQSLVG SEQ ID NO1268 | 162-172 |
| ADAMTS-1 | YEVQGEVFT SEQ ID NO1269 | 210-218 |
| ADAMTS-1 | YEVQGEVFTKPQ SEQ ID NO1144 | 210-221 |
| ADAMTS-1 | GEVFTKPQ SEQ ID NO1150 | 214-221 |
| ADAMTS-8 | VFPKESDTSYVS SEQ ID NO1069 | 028-039 |
| ADAMTS-8 | QEQDSFGGNFEGSQSLVG SEQ ID NO1267 | 155-172 |
| ADAMTS-8 | EINTIYL SEQ ID NO1270 | 188-194 |
| ADAMTS-8 | KYEVQ SEQ ID NO1271 | 209-213 |
| ADAMTS-8 | KYEVQGE SEQ ID NO1140 | 209-215 |
| Cat K | FGQTDMSR SEQ ID NO1034 | 017-024 |
| Cat K | AFVFPK SEQ ID NO1033 | 026-031 |
| Cat K | FVFPK SEQ ID NO1059 | 027-031 |
| Cat K | ESDTSYVSLK SEQ ID NO1265 | 032-041 |
| Cat K | ESDTSYVSLKAPLT SEQ ID NO1272 | 032-045 |
| Cat K | SDTSYVSLK SEQ ID NO1273 | 033-041 |
| Cat K | DTSYVSLK SEQ ID NO1274 | 034-041 |
| Cat K | STRGYS SEQ ID NO1080 | 063-068 |
| Cat K | IFWSKDIG SEQ ID NO1275 | 083-090 |
| Cat K | KGYTVGAE SEQ ID NO1276 | 141-148 |
| Cat K | AEASIILGQEQDSFG SEQ ID NO1277 | 147-161 |
| Cat K | LGQEQDSFG SEQ ID NO1278 | 153-161 |
| Cat K | LGQEQDSFGGNFE SEQ ID NO1279 | 153-165 |
| Cat K | GQEQDSFG SEQ ID NO1280 | 154-161 |
| Cat K | GQEQDSFGGNFE SEQ ID NO1281 | 154-165 |
| Cat K | GQEQDSFGGNFEGSQ SEQ ID NO1282 | 154-168 |
| Cat K | GQEQDSFGGNFEGSQS SEQ ID NO1118 | 154-169 |
| Cat K | QEQDSFGGN SEQ ID NO1283 | 155-163 |
| Cat K | QEQDSFGGNFE SEQ ID NO1284 | 155-165 |
| Cat K | QEQDSFGGNFEG SEQ ID NO1285 | 155-166 |
| Cat K | QEQDSFGGNFEGS SEQ ID NO1286 | 155-167 |
| Cat K | QEQDSFGGNFEGSQ SEQ ID NO1266 | 155-168 |
| Cat K | QEQDSFGGNFEGSQS SEQ ID NO1217 | 155-169 |
| Cat K | GNFEGSQSLV SEQ ID NO1287 | 162-171 |
| Cat K | GNFEGSQSLVG SEQ ID NO1268 | 162-172 |
| Cat K | GNFEGSQSLVGDIG SEQ ID NO1288 | 162-175 |
| Cat K | GSQSLVGDIG SEQ ID NO1289 | 166-175 |
| Cat K | GSQSLVGDIGNVN SEQ ID NO1290 | 166-178 |
| Cat K | DFVLSPDEIN SEQ ID NO1291 | 181-190 |
| Cat K | FVLSPDEINT SEQ ID NO1218 | 182-191 |
| Cat K | VLSPDEINT SEQ ID NO1291 | 183-191 |
| Cat K | GPFSPNVLN SEQ ID NO1292 | 196-204 |
| Cat K | SPNVLNWR SEQ ID NO1293 | 199-206 |
| Cat K | KYEVQG SEQ ID NO1294 | 209-214 |
| Cat K | YEVQGEVFT SEQ ID NO1269 | 210-218 |
| Cat K | YEVQGEVFTKPQ SEQ ID NO1144 | 210-221 |
| Cat K | VQGEVFTKPQ SEQ ID NO1146 | 212-221 |
| Cat K | GEVFTKPQ SEQ ID NO1150 | 214-221 |
| Cat K | EVFTKPQ SEQ ID NO1151 | 215-221 |
| Cat S | FGQTDMSR SEQ ID NO1034 | 017-024 |
| Cat S | AFVFPKESDTSYVS SEQ ID NO1057 | 026-039 |
| Cat S | FVFPKESDTSYVS SEQ ID NO1065 | 027-039 |
| Cat S | VFPKESDTSYVS SEQ ID NO1069 | 028-039 |
| Cat S | FPKESDTSYVS SEQ ID NO1071 | 029-039 |
| Cat S | ESDTSYVSLK SEQ ID NO1265 | 032-041 |
| Cat S | TSWESASGIVE SEQ ID NO1295 | 116-126 |
| Cat S | KGYTVG SEQ ID NO1296 | 141-146 |
| Cat S | QEQDSFGGNFE SEQ ID NO1284 | 155-165 |
| Cat S | QEQDSFGGNFEG SEQ ID NO1285 | 155-166 |
| Cat S | QEQDSFGGNFEGSQ SEQ ID NO1266 | 155-168 |
| Cat S | QEQDSFGGNFEGSQS SEQ ID NO1217 | 155-169 |
| Cat S | QEQDSFGGNFEGSQSLV SEQ ID NO1297 | 155-171 |
| Cat S | QEQDSFGGNFEGSQSLVG SEQ ID NO1267 | 155-172 |
| Cat S | SFGGNFEGSQSLVG SEQ ID NO1298 | 159-172 |
| Cat S | GNFEGSQSLVG SEQ ID NO1268 | 162-172 |
| Cat S | GNFEGSQSLVGDIG SEQ ID NO1288 | 162-175 |
| Cat S | SPDEINTIYL SEQ ID NO1299 | 185-194 |
| Cat S | SPDEINTIYLG SEQ ID NO1300 | 185-195 |
| Cat S | LGGPFSPNVLN SEQ ID NO1196 | 194-204 |
| Cat S | GGPFSPNVLN SEQ ID NO1301 | 195-204 |
| Cat S | GPFSPNVLN SEQ ID NO1292 | 196-204 |
| Cat S | ALKYE SEQ ID NO1302 | 207-211 |
| Cat S | ALKYEVQ SEQ ID NO1303 | 207-213 |
| Cat S | YEVQGEVF SEQ ID NO1304 | 210-217 |
| Cat S | YEVQGEVFT SEQ ID NO1269 | 210-218 |
| Cat S | YEVQGEVFTKPQ SEQ ID NO1144 | 210-221 |
| Cat S | YEVQGEVFTKPQLWP SEQ ID NO1145 | 210-224 |
| Cat S | VQGEVFTKPQLWP SEQ ID NO1147 | 212-224 |
| Cat S | GEVFTKPQ SEQ ID NO1150 | 214-221 |
| Cat S | GEVFTKPQLWP SEQ ID NO1200 | 214-224 |
| Cat S | EVFTKPQLWP SEQ ID NO1152 | 215-224 |
| Cat S | TKPQLWP SEQ ID NO1156 | 218-224 |
| Cat S | KPQLWP SEQ ID NO1157 | 219-224 |
*CRP序列中的编号
因此，在本发明的方法中，所述肽片段优选包含蛋白酶在上述表20中CRP的任意部分序列中的符号*标记的位点处切割或在表21中CRP的任意部分序列的任一端切割所形成的新表位。
所述免疫结合伴侣可以是与切割CRP所形成的C-末端或N-末端新表位特异性反应的免疫结合伴侣。
因此，合适的免疫结合伴侣可与肽N末端的下述任何序列特异性地反应：
表22.蛋白酶产生的CRP之肽片段的N-末端序列。
| CRP | ||
| AFVFPK SEQ ID NO1033 | SFGGNF SEQ ID NO1305 | FGQTDM SEQ ID NO1306 |
| VSLKAP SEQ ID NO1172 | KAFVFP SEQ ID NO1167 | EVFTKP SEQ ID NO1201 |
| TDMSRK SEQ ID NO1307 | MSRKAF SEQ ID NO1308 | SRKAFV SEQ ID NO1309 |
| VFPKES SEQ ID NO1310 | FPKESD SEQ ID NO1311 | KESDTS SEQ ID NO1312 |
| LSSTRG SEQ ID NO1313 | SSTRGY SEQ ID NO1314 | STRGYS SEQ ID NO1080 |
| KRQDNE SEQ ID NO1315 | WSKDIG SEQ ID NO1316 | SKDIGY SEQ ID NO1317 |
| SIILGQ SEQ ID NO1318 | IILGQE SEQ ID NO1319 | ILGQEQ SEQ ID NO1320 |
| IYLGGP SEQ ID NO1321 | YLGGPF SEQ ID NO1322 | LGGPFS SEQ ID NO1323 |
| ALKYEV SEQ ID NO1133 | KYEVQG SEQ ID NO1294 | VQGEVF SEQ ID NO1324 |
| KPQLWP SEQ ID NO1157 | YTELSS SEQ ID NO1325 | ILIFWS SEQ ID NO1326 |
| LVGDIG SEQ ID NO1327 | QEQDSF SEQ ID NO1328 | RGYSIF SEQ ID NO1329 |
| GAEASI SEQ ID NO1330 | QDSFGG SEQ ID NO1331 | TIYLGG SEQ ID NO1332 |
| EINTIY SEQ ID NO1333 | DTSYVS SEQ ID NO1334 | AEASII SEQ ID NO1335 |
| TSWESA SEQ ID NO1336 | SPDEIN SEQ ID NO1337 | GGPFSP SEQ ID NO1338 |
| YEVQGE SEQ ID NO1339 | FVLSPD SEQ ID NO1340 | LKKGYT SEQ ID NO1341 |
| RKAFVF SEQ ID NO1342 | IVEFWV SEQ ID NO1343 | ESDTSY SEQ ID NO1344 |
| TKPQLW SEQ ID NO1345 | EVQGEV SEQ ID NO1346 | FVFPK SEQ ID NO1059 |
| SDTSYV SEQ ID NO1347 | SLKAPL SEQ ID NO1222 | LKAPLT SEQ ID NO1173 |
| IFSYAT SEQ ID NO1348 | SYATKR SEQ ID NO1349 | YATKRQ SEQ ID NO1350 |
| EFWVDG SEQ ID NO1351 | WVDGKP SEQ ID NO1352 | VDGKPR SEQ ID NO1353 |
| LGQEQD SEQ ID NO1354 | GQEQDS SEQ ID NO1355 | QSLVGD SEQ ID NO1356 |
| SPNVLN SEQ ID NO1357 | LNWRA SEQ ID NO1127 | LNWRAL SEQ ID NO1128 |
| QGEVFT SEQ ID NO1358 | GEVFTK SEQ ID NO1359 | VFTKPQ SEQ ID NO1153 |
| IFWSKD SEQ ID NO1181 | VRKSLK SEQ ID NO1205 | KKGYTV SEQ ID NO1360 |
| FSYATK SEQ ID NO1361 | ATKRQD SEQ ID NO1362 | FWSKDI SEQ ID NO1363 |
| VLNWRA SEQ ID NO1249 | NWRAL SEQ ID NO1253 | NWRALK SEQ ID NO1364 |
| GSQSLV SEQ ID NO1365 | DFVLSP SEQ ID NO1366 | VLSPDE SEQ ID NO1367 |
| LKYEVQ SEQ ID NO1134 | TKRQDN SEQ ID NO1368 | KGYTVG SEQ ID NO1296 |
| GNFEGS SEQ ID NO1369 | SLKKGY SEQ ID NO1370 | KSLKKG SEQ ID NO1371 |
| FVFPKE SEQ ID NO1060 | INTIYL SEQ ID NO1372 | RALKYE SEQ ID NO1373 |
| FYTELS SEQ ID NO1374 | WRALKY SEQ ID NO1375 | GPFSPN SEQ ID NO1376 |
或者与肽C末端的下述任何序列特异性地反应：
表23.蛋白酶产生的CRP的肽片段的C-末端序列。
| CRP | ||
| AFVFPK SEQ ID NO1033 | KPQLWP SEQ ID NO1157 | PDEINT SEQ ID NO1377 |
| SPDEIN SEQ ID NO1337 | DSFGGN SEQ ID NO1378 | VFTKPQ SEQ ID NO1153 |
| KESDTS SEQ ID NO1312 | SDTSYV SEQ ID NO1347 | DTSYVS SEQ ID NO1334 |
| LTKPLK SEQ ID NO1379 | STRGYS SEQ ID NO1080 | YATKRQ SEQ ID NO1350 |
| KDIGYS SEQ ID NO1380 | DGKPRV SEQ ID NO1381 | VDGKPR SEQ ID NO1353 |
| GAEASI SEQ ID NO1330 | QGEVFT SEQ ID NO1358 | NFEGSQ SEQ ID NO1382 |
| SPNVLN SEQ ID NO1357 | GPFSPN SEQ ID NO1376 | RALKYE SEQ ID NO1373 |
| ALKYEV SEQ ID NO1133 | YEVQGE SEQ ID NO1339 | LKYEVQ SEQ ID NO1134 |
| KAFVFP SEQ ID NO1167 | VSLKAP SEQ ID NO1172 | LKAPLT SEQ IDNO 1173 |
| LKKGYT SEQ ID NO1341 | LGQEQD SEQ ID NO1354 | NVNMWD SEQ ID NO1383 |
| PRVRKS SEQ ID NO1384 | TVGSEI SEQ ID NO1385 | SRKAFV SEQ ID NO1309 |
| GYSFTV SEQ ID NO1386 | IILGQE SEQ ID NO1319 | EGSQSL SEQ ID NO1387 |
| INTIYL SEQ ID NO1372 | WSKDIG SEQ ID NO1316 | EQDSFG SEQ ID NO1388 |
| NVLNWR SEQ ID NO1389 | ASGIVE SEQ ID NO1390 | NTIYLG SEQ ID NO1391 |
| VGAEAS SEQ ID NO1392 | APLTKP SEQ ID NO1393 | FVFPKE SEQ ID NO1060 |
| QTDMSR SEQ ID NO1394 | TDMSRK SEQ ID NO1307 | MSRKAF SEQ ID NO1308 |
| PKESDT SEQ ID NO1395 | TSYVSL SEQ ID NO1396 | ESDTSY SEQ ID NO1344 |
| DNEILI SEQ ID NO1397 | QDNEIL SEQ ID NO1398 | NEILIF SEQ ID NO1399 |
| YTVGAE SEQ ID NO1400 | TVGAEA SEQ ID NO1401 | PFSPNV SEQ ID NO1402 |
| FEGSQS SEQ ID NO1403 | GNFEGS SEQ ID NO1369 | DIGNVN SEQ ID NO1404 |
| LNWRA SEQ ID NO1127 | LNWRAL SEQ ID NO1128 | NWRALK SEQ ID NO1364 |
| KYEVQG SEQ ID NO1294 | EVFTKP SEQ ID NO1201 | VFTKPQ SEQ ID NO1153 |
| KRQDNE SEQ ID NO1315 | RQDNEI SEQ ID NO1405 | IFWSKD SEQ ID NO1181 |
| FTKPQL SEQ ID NO1406 | VRKSLK SEQ ID NO1205 | SYVSLK SEQ ID NO1407 |
| SLKAPL SEQ ID NO1222 | TKPLKA SEQ ID NO14O8 | SIFSYA SEQ ID NO1409 |
| GSQSLV SEQ ID NO1365 | GNVNMW SEQ ID NO1410 | SQSLVG SEQ ID NO1411 |
| FGGNFE SEQ ID NO1412 | GGNFEG SEQ ID NO1413 | LVGDIG SEQ ID NO1327 |
| VQGEVF SEQ ID NO1324 | GKPRVR SEQ ID NO1414 | FWSKDI 1363SEQ ID NO |
| DMSRKA SEQ ID NO1415 | EILIFW SEQ ID NO1416 | KKGYTV SEQ ID NO1360 |
| FPKESD SEQ ID NO1311 | IGYSFT SEQ ID NO1417 |
弹性蛋白
数种候选蛋白酶可负责纤维化组织中弹性蛋白的消化。通过一系列的体外切割纯的天然蛋白，我们已经确定了下表中列出的酶至少在如下的切割位点(在如下序列的每个末端或在标记‘.’的切割位点，或者不显示‘.’时在序列的末端)切割弹性蛋白：
表24：特异性蛋白酶产生的弹性蛋白片段。
| 蛋白酶 | 切割位点间的序列 | No* |
| MMP9+12 | GVPGAIPGGVPG SEQ ID NO1418 | 028-039 |
| MMP9+12 | AIPGGVPGGVFYPGAGLG SEQ ID NO1419 | 032-049 |
| MMP9+12 | AIPGGVPGGVFYPGAGLGA SEQ ID NO1420 | 032-050 |
| MMP9+12 | GVPGGVFYPGAGLGA SEQ ID NO1421 | 036-050 |
| MMP9+12 | GVPGGVFYPGAGLGALG SEQ ID NO1422 | 036-052 |
| MMP9+12 | VPGGVFYPGAGLGALGG SEQ ID NO1423 | 037-053 |
| MMP9+12 | GVFYPGAGLGALGGGALGPGG SEQ ID NO1424 | 040-060 |
| MMP9+12 | VFYPGAGLG SEQ ID NO1425 | 041-049 |
| MMP9+12 | VFYPGAGLGA SEQ ID NO1426 | 041-050 |
| MMP9+12 | VFYPGAGLGAL SEQ ID NO1427 | 041-051 |
| MMP9+12 | VFYPGAGLGALG SEQ ID NO1428 | 041-052 |
| MMP9+12 | VFYPGAGLGALGG SEQ ID NO1429 | 041-053 |
| MMP9+12 | VFYPGAGLGALGGG SEQ ID NO1430 | 041-054 |
| MMP9+12 | VFYPGAGLGALGGGAL SEQ ID NO1431 | 041-056 |
| MMP9+12 | VFYPGAGLGALGGGALG SEQ ID NO1432 | 041-057 |
| MMP9+12 | VFYPGAGLGALGGGALGPG SEQ ID NO1433 | 041-059 |
| MMP9+12 | VFYPGAGLGALGGGALGPGG SEQ ID NO1434 | 041-060 |
| MMP9+12 | VFYPGAGLGALGGGALGPGGKPLKPVPGG SEQ ID NO 1435 | 041-069 |
| MMP9+12 | LGALGGGALGPGGKPLKPVPGG SEQ ID NO1436 | 048-069 |
| MMP9+12 | ALGGGALGPGGKPLKPVPGG SEQ ID NO1437 | 050-069 |
| MMP9+12 | LGGGALGPGGKPLKPVPG SEQ ID NO 1438 | 051-068 |
| MMP9+12 | LGGGALGPGGKPLKPVPGG SEQ ID NO 1439 | 051-069 |
| MMP9+12 | GGALGPGGKPLKPVPGG SEQ ID NO 1440 | 053-069 |
| MMP9+12 | LGPGGKPLKPVPGG SEQ ID NO1441 | 056-069 |
| MMP9+12 | GPGGKPLKPVPGG SEQ ID NO1442 | 057-069 |
| MMP9+12 | PGGKPLKPVPGG SEQ ID NO1443 | 058-069 |
| MMP9+12 | GKPLKPVPGG SEQ ID NO1444 | 060-069 |
| MMP9+12 | PLKPVPGG SEQ ID NO1445 | 062-069 |
| MMP9+12 | LKPVPGG SEQ ID NO SEQ ID NO1446 | 063-069 |
| MMP9+12 | GLAGAGLGAGLGAFP SEQ ID NO1447 | 069-083 |
| MMP9+12 | GLAGAGLGAGLGAFPA SEQ ID NO1448 | 069-084 |
| MMP9+12 | LAGAGLGAGLG SEQ ID NO1449 | 070-080 |
| MMP9+12 | LAGAGLGAGLGAFP SEQ ID NO1450 | 070-083 |
| MMP9+12 | LAGAGLGAGLGAFPA SEQ ID NO1451 | 070-084 |
| MMP9+12 | LAGAGLGAGLGAFPAVT SEQ ID NO1452 | 070-086 |
| MMP9+12 | LAGAGLGAGLGAFPAVTFPG SEQ ID NO1453 | 070-089 |
| MMP9+12 | LAGAGLGAGLGAFPAVTFPGA SEQ ID NO1454 | 070-090 |
| MMP9+12 | LAGAGLGAGLGAFPAVTFPGALVPGG SEQ ID NO1455 | 070-095 |
| MMP9+12 | LAGAGLGAGLGAFPAVTFPGALVPGGVA SEQ ID NO 1456 | 070-097 |
| MMP9+12 | LAGAGLGAGLGAFPAVTFPGALVPGGVADAAAA SEQ ID NO1457 | 070-102 |
| MMP9+12 | AGAGLGAGLGAFPAVTFPGALVPGG SEQ ID NO1458 | 071-095 |
| MMP9+12 | GAGLGAGLGAFPA SEQ ID NO1459 | 072-084 |
| MMP9+12 | GAGLGAGLGAFPAVTFPGA SEQ ID NO1460 | 072-090 |
| MMP9+12 | AGLGAGLGAFPA SEQ ID NO1461 | 073-084 |
| MMP9+12 | GLGAGLGAFPA SEQ ID NO1462 | 074-084 |
| MMP9+12 | LGAGLGAFPA SEQ ID NO1463 | 075-084 |
| MMP9+12 | LGAGLGAFPAVTFPGA SEQ ID NO1464 | 075-090 |
| MMP9+12 | LGAGLGAFPAVT FPGALVPGG SEQ ID NO 1465 | 075-095 |
| MMP9+12 | LGAGLGAFPAVT FPGALVPGGVADAAAA SEQ ID NO 1466 | 075-102 |
| MMP9+12 | AGLGAFPAVTFPG SEQ ID NO1467 | 077-089 |
| MMP9+12 | LGAFPAVTFPGA SEQ ID NO1468 | 079-090 |
| MMP9+12 | LGAFPAVTFPGALVPGGVA SEQ ID NO 1469 | 079-097 |
| MMP9+12 | LGAFPAVTFPGALVPGGVADAAAA SEQ ID NO1470 | 079-102 |
| MMP9+12 | AFPAVTFPGALVPGG SEQ ID NO1471 | 081-095 |
| MMP9+12 | AVTFPGALVPGG SEQ ID NO1472 | 084-095 |
| MMP9+12 | AVTFPGALVPGGVADAAAA SEQ ID NO1473 | 084-102 |
| MMP9+12 | VTFPGALVPGG SEQ ID NO1474 | 085-095 |
| MMP9+12 | VTFPGALVPGGVADAAAA SEQ ID NO1475 | 085-102 |
| MMP9+12 | LVPGGVADAAAA SEQ ID NO1476 | 091-102 |
| MMP9+12 | LVPGGVADAAAAYK SEQ ID NO1477 | 091-104 |
| MMP9+12 | VADAAAAYK SEQ ID NO1478 | 096-104 |
| MMP9+12 | KAAKAGA SEQ ID NO1479 | 104-110 |
| MMP9+12 | LGVSAGAVVPQPGA SEQ ID NO1480 | 121-134 |
| MMP9+12 | VPGVGLPGVYPGGVLPGAR SEQ ID NO1481 | 141-159 |
| MMP9+12 | PGVGLPGVYPGGVLPGAR SEQ ID NO1482 | 142-159 |
| MMP9+12 | GLPGVYPGGVLPGAR SEQ ID NO1483 | 145-159 |
| MMP9+12 | PGVYPGGVLPGAR SEQ ID NO1484 | 147-159 |
| MMP9+12 | ARFPGVG SEQ ID NO1485 | 158-164 |
| MMP9+12 | ARFPGVGVLPG SEQ ID NO1486 | 158-168 |
| MMP9+12 | RFPGVGVLPGVPTGAG SEQ ID NO1487 | 159-174 |
| MMP9+12 | FPGVGVLPGVPTG SEQ ID NO1488 | 160-172 |
| MMP9+12 | FPGVGVLPGVPTGA SEQ ID NO1489 | 160-173 |
| MMP9+12 | FPGVGVLPGVPTGAGV SEQ ID NO1490 | 160-175 |
| MMP9+12 | FPGVGVLPGVPTGAGVKPK SEQ ID NO1491 | 160-178 |
| MMP9+12 | KPKAPGV SEQ ID NO1492 | 176-182 |
| MMP9+12 | PKAPGV SEQ ID NO1493 | 177-182 |
| MMP9+12 | GAFAGIPGVGPFG SEQ ID NO1494 | 184-196 |
| MMP9+12 | VGPFGGPQPGVPLGYP SEQ ID NO1495 | 192-207 |
| MMP9+12 | GPQPGVPLGYP SEQ ID NO1496 | 197-207 |
| MMP9+12 | PQPGVPLGYP SEQ ID NO1497 | 198-207 |
| MMP9+12 | PGVPLGYP SEQ ID NO1498 | 200-207 |
| MMP9+12 | GYPIKAPK SEQ ID NO1499 | 205-212 |
| MMP9+12 | PKLPGGY SEQ ID NO1500 | 211-217 |
| MMP9+12 | YTTGKLPYGYGPG SEQ ID NO1501 | 221-233 |
| MMP9+12 | YTTGKLPYGYGPGGVAGAAGK SEQ ID NO1502 | 221-241 |
| MMP9+12 | TTGKLPYGYG SEQ ID NO1503 | 222-231 |
| MMP9+12 | TTGKLPYGYGPGGVAGAAGK SEQ ID NO1504 | 222-241 |
| MMP9+12 | LPYGYGPGGVAGAAGK SEQ ID NO1505 | 226-241 |
| MMP9+12 | GYGPGGVAGAAGK SEQ ID NO1506 | 229-241 |
| MMP9+12 | YGPGGVAGAAGK SEQ ID NO1507 | 230-241 |
| MMP9+12 | AGYPTGTGVGPQAAAAAAAK SEQ ID NO 1508 | 242-261 |
| MMP9+12 | TGVGPQAAAAAAAK SEQ ID NO1509 | 248-261 |
| MMP9+12 | PQAAAAAAAK SEQ ID NO1510 | 252-261 |
| MMP9+12 | FGAGAAGVLPGVGGAGVPGVPGAIPGIGG SEQ ID NO1511 | 266-294 |
| MMP9+12 | FGAGAAGVLPGVGGAGVPGVPGAIPGIGGIAGVGTPAA SEQ ID NO1512 | 266-3O3 |
| MMP9+12 | GVLPGVGGAGVPGVPG SEQ ID NO1513 | 272-287 |
| MMP9+12 | VLPGVGGAGVPGVPGAIPGIGG SEQ ID NO1514 | 273-294 |
| MMP9+12 | VLPGVGGAGVPGVPGAIPGIGGIAGVGTPA SEQ ID NO1515 | 273-302 |
| MMP9+12 | VLPGVGGAGVPGVPGAIPGIGGIAGVGTPAA SEQ ID NO1516 | 273-303 |
| MMP9+12 | GAGVPGVPGAIPG SEQ ID NO1517 | 279-291 |
| MMP9+12 | GAGVPGVPGAIPGIGGIAGVG SEQ ID NO1518 | 279-299 |
| MMP9+12 | AGVPGVPGAIPGIG SEQ ID NO1519 | 280-293 |
| MMP9+12 | AGVPGVPGAIPGIGG SEQ ID NO1520 | 280-294 |
| MMP9+12 | AGVPGVPGAIPGIGGIAG SEQ ID NO1521 | 280-297 |
| MMP9+12 | AGVPGVPGAIPGIGGIAGVGTPA SEQ ID NO1522 | 280-302 |
| MMP9+12 | GVPGVPGAI PGIGG SEQ ID NO1523 | 281-294 |
| MMP9+12 | GVPGVPGAIPGIGGIA SEQ ID NO1524 | 281-296 |
| MMP9+12 | GVPGVPGAIPGIGGIAGVG SEQ ID NO1525 | 281-299 |
| MMP9+12 | VPGVPGAIPGIGG SEQ ID NO1526 | 282-294 |
| MMP9+12 | GVPGAIPGIGGIAGVGTPA SEQ ID NO1527 | 284-302 |
| MMP9+12 | VPGAIPGIGGIAGVG SEQ ID NO1528 | 285-299 |
| MMP9+12 | VPGAIPGIGGIAGVGTPA SEQ ID NO1529 | 285-302 |
| MMP9+12 | VPGAIPGIGGIAGVGTPAAA SEQ ID NO1530 | 285-304 |
| MMP9+12 | VPGAIPGIGGIAGVGTPAAAAAAAAAAK SEQ ID NO1531 | 285-312 |
| MMP9+12 | AIPGIGGIAGVG SEQ ID NO1532 | 288-299 |
| MMP9+12 | AIPGIGGIAGVGTPA SEQ ID NO1533 | 288-302 |
| MMP9+12 | AIPGIGGIAGVGTPAA SEQ ID NO1534 | 288-303 |
| MMP9+12 | AIPGIGGIAGVGTPAAA SEQ ID NO1535 | 288-304 |
| MMP9+12 | AIPGIGGIAGVGTPAAAAAA SEQ ID NO1536 | 288-307 |
| MMP9+12 | AIPGIGGIAGVGTPAAAAAAAAAAK SEQ ID NO1537 | 288-312 |
| MMP9+12 | IPGIGGIAGVGTPAAA SEQ ID NO1538 | 289-304 |
| MMP9+12 | IGGIAGVGTPAAAA SEQ ID NO1539 | 292-305 |
| MMP9+12 | GIAGVGTPAAAA SEQ ID NO1540 | 294-305 |
| MMP9+12 | GIAGVGTPAAAAAAAA SEQ ID NO1541 | 294-309 |
| MMP9+12 | GIAGVGTPAAAAAAAAAAK SEQ ID NO1542 | 294-312 |
| MMP9+12 | IAGVGTPAAAAAAAA SEQ ID NO1543 | 295-309 |
| MMP9+12 | IAGVGTPAAAAAAAAA SEQ ID NO1544 | 295-310 |
| MMP9+12 | IAGVGTPAAAAAAAAAAK SEQ ID NO1545 | 295-312 |
| MMP9+12 | TPAAAAAAAAAAK SEQ ID NO1546 | 300-312 |
| MMP9+12 | PAAAAAAAAAAK SEQ ID NO1547 | 301-312 |
| MMP9+12 | AAAAAAAAAAK SEQ ID NO1548 | 302-312 |
| MMP9+12 | AAAAAAAAAK SEQ ID NO1549 | 303-312 |
| MMP9+12 | AAAAAAAAK SEQ ID NO1550 | 304-312 |
| MMP9+12 | AAAAAAAAKA SEQ ID NO1551 | 304-313 |
| MMP9+12 | AAAAAAAK SEQ ID NO1552 | 305-312 |
| MMP9+12 | LVPGGPGFGPGVVGVPGA SEQ ID NO1553 | 322-339 |
| MMP9+12 | GPGFGPGVVGVPG SEQ ID NO1554 | 326-338 |
| MMP9+12 | GPGFGPGVVGVPGAGVPGVG SEQ ID NO 1555 | 326-345 |
| MMP9+12 | GPGFGPGVVGVPGAGVPGVGVPGAGIPVVPG SEQ ID NO1556 | 326-356 |
| MMP9+12 | PGFGPGVVGVPG SEQ ID NO1557 | 327-338 |
| MMP9+12 | PGFGPGVVGVPGA SEQ ID NO1558 | 327-339 |
| MMP9+12 | PGFGPGVVGVPGAG SEQ ID NO1559 | 327-340 |
| MMP9+12 | PGVVGVPGAGVPG SEQ ID NO1560 | 331-343 |
| MMP9+12 | PGVVGVPGAGVPGVGVPG SEQ ID NO 1561 | 331-348 |
| MMP9+12 | PGVVGVPGAGVPGVGVPGAGIPVVPGA SEQ ID NO1562 | 331-357 |
| MMP9+12 | VVGVPGAGVPGVGVPGA SEQ ID NO1563 | 333-349 |
| MMP9+12 | VGVPGAGVPGVGVPGAGIPVVPGAGIPGAAVPGVVSPEA SEQ ID NO1564 | 334-372 |
| MMP9+12 | AGVPGVGVPGAGIPVVPG SEQ ID NO1565 | 339-356 |
| MMP9+12 | GVPGVGVPGAGIPVVPG SEQ ID NO1566 | 340-356 |
| MMP9+12 | GVPGVGVPGAGIPVVPGA SEQ ID NO1567 | 340-357 |
| MMP9+12 | VPGVGVPGAGIPVVPG SEQ ID NO1568 | 341-356 |
| MMP9+12 | VGVPGAGIPVVPG SEQ ID NO1569 | 344-356 |
| MMP9+12 | VGVPGAGIPVVPGAGIPG SEQ ID NO1570 | 344-361 |
| MMP9+12 | VPGAGIPVVPG SEQ ID NO1571 | 346-356 |
| MMP9+12 | AGIPVVPGAGIPG SEQ ID NO1572 | 349-361 |
| MMP9+12 | AGI PVVPGAGIPGAAVPGVVSPEAAAK SEQ ID NO 1573 | 349-375 |
| MMP9+12 | GIPVVPGAGIPG SEQ ID NO1574 | 350-361 |
| MMP9+12 | I PGAAVPGVVSPEAAAK SEQ ID NO1575 | 359-375 |
| MMP9+12 | GAAVPGVVSPEAAAK SEQ ID NO1576 | 361-375 |
| MMP9+12 | AVPGVVSPEAAAK SEQ ID NO1577 | 363-375 |
| MMP9+12 | VPGVVSPEAAAK SEQ ID NO1578 | 364-375 |
| MMP9+12 | YGARPGVG SEQ ID NO1579 | 383-390 |
| MMP9+12 | YGARPGVGVG SEQ ID NO1580 | 383-392 |
| MMP9+12 | YGARPGVGVGGIPT SEQ ID NO1581 | 383-396 |
| MMP9+12 | YGARPGVGVGGIPTY SEQ ID NO1582 | 383-397 |
| MMP9+12 | YGARPGVGVGGIPTYG SEQ ID NO1583 | 383-398 |
| MMP9+12 | YGARPGVGVGGIPTYGVG SEQ ID NO1584 | 383-400 |
| MMP9+12 | YGARPGVGVGGIPTYGVGA SEQ ID NO1585 | 383-401 |
| MMP9+12 | YGARPGVGVGGIPTYGVGAG SEQ ID NO1586 | 383-402 |
| MMP9+12 | GARPGVGV SEQ ID NO1587 | 384-391 |
| MMP9+12 | GARPGVGVGG SEQ ID NO1588 | 384-393 |
| MMP9+12 | GARPGVGVGGIP SEQ ID NO1589 | 384-395 |
| MMP9+12 | GARPGVGVGGIPTY SEQ ID NO1590 | 384-397 |
| MMP9+12 | GARPGVGVGGIPTYGV SEQ ID NO1591 | 384-399 |
| MMP9+12 | GARPGVGVGGIPTYGVG SEQ ID NO1592 | 384-400 |
| MMP9+12 | GARPGVGVGGIPTYGVGAGGF SEQ ID NO1593 | 384-404 |
| MMP9+12 | GARPGVGVGGIPTYGVGAGGFPGF SEQ ID NO1594 | 384-407 |
| MMP9+12 | GARPGVGVGGIPTYGVGAGGFPGFG SEQ ID NO1595 | 384-408 |
| MMP9+12 | GARPGVGVGGIPTYGVGAGGFPGFGVGVG SEQ ID NO 1596 | 384-412 |
| MMP9+12 | ARPGVGVGG SEQ ID NO1597 | 385-393 |
| MMP9+12 | ARPGVGVGGIP SEQ ID NO1598 | 385-395 |
| MMP9+12 | ARPGVGVGGIPTY SEQ ID NO1599 | 385-397 |
| MMP9+12 | ARPGVGVGGIPTYGVGA SEQ ID NO1600 | 385-401 |
| MMP9+12 | ARPGVGVGGIPTYGVGAGG SEQ ID NO1601 | 385-403 |
| MMP9+12 | ARPGVGVGGIPTYGVGAGGFPG SEQ ID NO1602 | 385-406 |
| MMP9+12 | ARPGVGVGGIPTYGVGAGGFPGF SEQ ID NO1603 | 385-407 |
| MMP9+12 | RPGVGVG SEQ ID NO1604 | 386-392 |
| MMP9+12 | RPGVGVGG SEQ ID NO1605 | 386-393 |
| MMP9+12 | PGVGVGGIPTY SEQ ID NO1606 | 387-397 |
| MMP9+12 | PGVGVGGIPTYG SEQ ID NO1607 | 387-398 |
| MMP9+12 | PGVGVGGIPTYGVGAG SEQ ID NO1608 | 387-412 |
| MMP9+12 | VGGIPTYGVGAG SEQ ID NO1609 | 391-402 |
| MMP9+12 | GVGAGGFPGFGVGVGGIPGVA SEQ ID NO1610 | 398-418 |
| MMP9+12 | VGAGGFPGFGVGVG SEQ ID NO1611 | 399-412 |
| MMP9+12 | VGVGGIPGVAGVPSVGGVPGVGGVPGVGISPEA SEQ ID NO1612 | 409-441 |
| MMP9+12 | VAGVPSVGGVPGVGGVPG SEQ ID NO1613 | 417-434 |
| MMP9+12 | VAGVPSVGGVPGVGGVPGVGISPEA SEQ ID NO1614 | 417-441 |
| MMP9+12 | SVGGVPGVGGVPGVGISPEA SEQ ID NO1615 | 422-441 |
| MMP9+12 | VGGVPGVGGVPGVGISPEA SEQ ID NO1616 | 423-441 |
| MMP9+12 | GVPGVGGVPGVGIS SEQ ID NO1617 | 425-438 |
| MMP9+12 | GVPGVGGVPGVGISPEA SEQ ID NO1618 | 425-441 |
| MMP9+12 | GVPGVGGVPGVGISPEAQA SEQ ID NO1619 | 425-443 |
| MMP9+12 | GVPGVGISPEAQAAAAAK SEQ ID NO1620 | 431-448 |
| MMP9+12 | GVGTPAAAAAK SEQ ID NO1621 | 482-492 |
| MMP9+12 | TPAAAAAK SEQ ID NO1622 | 485-492 |
| MMP9+12 | FGLVPGVGVAPGVG SEQ ID NO 1623 | 500-513 |
| MMP9+12 | FGLVPGVGVAPGVGVAPG SEQ ID NO 1624 | 500-517 |
| MMP9+12 | FGLVPGVGVAPGVGVAPGVGVAPG SEQ ID NO1625 | 500-523 |
| MMP9+12 | FGLVPGVGVAPGVGVAPGVGVAPGVG SEQ ID NO1626 | 500-525 |
| MMP9+12 | FGLVPGVGVAPGVGVAPGVGVAPGVGLAPG SEQ ID NO1627 | 500-529 |
| MMP9+12 | FGLVPGVGVAPGVGVAPGVGVAPGVGLAPGVGVAPG SEQ ID NO1628 | 500-535 |
| MMP9+12 | FGLVPGVGVAPGVGVAPGVGVAPGVGLAPGVGVAPGV SEQ ID NO1629 | 500-536 |
| MMP9+12 | FGLVPGVGVAPGVGVAPGVGVAPGVGLAPGVGVAPGVGVAPG SEQ ID NO1630 | 500-541 |
| MMP9+12 | GLVPGVGVAPG SEQ ID NO1631 | 501-511 |
| MMP9+12 | GLVPGVGVAPGV SEQ ID NO1632 | 501-512 |
| MMP9+12 | GLVPGVGVAPGVGVA SEQ ID NO1633 | 501-515 |
| MMP9+12 | GLVPGVGVAPGVGVAP SEQ ID NO1634 | 501-516 |
| MMP9+12 | GLVPGVGVAPGVGVAPG SEQ ID NO1635 | 501-517 |
| MMP9+12 | GLVPGVGVAPGVGVAPGVG SEQ ID NO1636 | 501-519 |
| MMP9+12 | GLVPGVGVAPGVGVAPGVGVAPG SEQ ID NO1637 | 501-523 |
| MMP9+12 | GLVPGVGVAPGVGVAPGVGVAPGVGL SEQ ID NO1638 | 501-524 |
| MMP9+12 | GLVPGVGVAPGVGVAPGVGVAPGVGLA SEQ ID NO1639 | 501-525 |
| MMP9+12 | GLVPGVGVAPGVGVAPGVGVAPGVGLAPG SEQ ID NO1640 | 501-527 |
| MMP9+12 | GLVPGVGVAPGVGVAPGVGVAPGVGLAPGVG SEQ ID NO1641 | 501-529 |
| MMP9+12 | GLVPGVGVAPGVGVAPGVGVAPGVGLAPGVGVA SEQ ID NO1642 | 501-531 |
| MMP9+12 | GLVPGVGVAPGVGVAPGVGVAPGVGLAPGVGVAPG SEQ ID NO1643 | 501-533 |
| MMP9+12 | LVPGVGVAPGVG SEQ ID NO1644 | 502-513 |
| MMP9+12 | LVPGVGVAPGVGVAPG SEQ ID NO1645 | 502-517 |
| MMP9+12 | LVPGVGVAPGVGVAPGVG SEQ ID NO1646 | 502-519 |
| MMP9+12 | LVPGVGVAPGVGVAPGVGVAPGVG SEQ ID NO1647 | 502-525 |
| MMP9+12 | LVPGVGVAPGVGVAPGVGVAPGVGLAPGVGVAPGVG SEQ ID NO1648 | 502-537 |
| MMP9+12 | PGVGVAPGVGVAPG SEQ ID NO1649 | 504-517 |
| MMP9+12 | VGVAPGVGVAPGVGV SEQ ID NO1650 | 506-520 |
| MMP9+12 | VGVAPGVGVAPGVGVAPGVG SEQ ID NO1651 | 506-525 |
| MMP9+12 | VGVAPGVGVAPGVGVAPGVGLAPGVGVAPG SEQ ID NO1652 | 506-535 |
| MMP9+12 | VAPGVGVAPGVGVAPG SEQ ID NO1653 | 508-523 |
| MMP9+12 | VAPGVGVAPGVGVAPGVG SEQ ID NO1654 | 508-525 |
| MMP9+12 | VAPGVGVAPGVGVAPGVGLAPGVG SEQ ID NO1655 | 508-531 |
| MMP9+12 | VAPGVGVAPGVGVAPGVGLAPGVGVAPG SEQ ID NO1656 | 508-535 |
| MMP9+12 | VGVAPGVGVAPGVGLA SEQ ID NO1657 | 512-527 |
| MMP9+12 | VGVAPGVGVAPGVGLAPGVGVAPG SEQ ID NO1658 | 512-535 |
| MMP9+12 | VGVAPGVGVAPGVGLAPGVGVAPGVGVAPGVGVAPGIGPGG SEQ ID NO1659 | 512-552 |
| MMP9+12 | VAPGVGVAPGVGLAPGVGVAPGVG SEQ ID NO1660 | 514-537 |
| MMP9+12 | VAPGVGVAPGVGLAPGVGVAPGVGVA SEQ ID NO 1661 | 514-539 |
| MMP9+12 | VAPGVGVAPGVGLAPGVGVAPGVGVAPG SEQ ID NO 1662 | 514-541 |
| MMP9+12 | VAPGVGVAPGVGLAPGVGVAPGVGVAPGVGVAPGIGP SEQ ID NO1663 | 514-550 |
| MMP9+12 | VAPGVGVAPGVGLAPGVGVAPGVGVAPGVGVAPGIGPGG SEQ ID NO1664 | 514-552 |
| MMP9+12 | PGVGVAPGVGLAPG SEQ ID NO1665 | 516-529 |
| MMP9+12 | PGVGVAPGVGLAPGVGVAP SEQ ID NO1666 | 516-534 |
| MMP9+12 | PGVGVAPGVGLAPGVGVAPGVG SEQ ID NO1667 | 516-537 |
| MMP9+12 | VGVAPGVGLAPGVGVA SEQ ID NO1668 | 518-533 |
| MMP9+12 | VGVAPGVGLAPGVGVAP SEQ ID NO1669 | 518-534 |
| MMP9+12 | VGVAPGVGLAPGVGVAPGVGVAPG SEQ ID NO1670 | 518-541 |
| MMP9+12 | VGVAPGVGLAPGVGVAPGVGVAPGVG SEQ ID NO1671 | 518-543 |
| MMP9+12 | VGVAPGVGLAPGVGVAPGVGVAPGVGVAPG SEQ ID NO 1672 | 518-547 |
| MMP9+12 | VGVAPGVGLAPGVGVAPGVGVAPGVGVAPGIGPGG SEQ ID NO1673 | 518-552 |
| MMP9+12 | GVAPGVGLAPGVGVAPGVGVAPGVGVAPGIGPGG SEQ ID NO1674 | 519-552 |
| MMP9+12 | VAPGVGLAPGVGVA SEQ ID NO1675 | 520-533 |
| MMP9+12 | VAPGVGLAPGVGVAPG SEQ ID NO1676 | 520-535 |
| MMP9+12 | VAPGVGLAPGVGVAPGVG SEQ ID NO1677 | 520-537 |
| MMP9+12 | VAPGVGLAPGVGVAPGVGVA SEQ ID NO1678 | 520-539 |
| MMP9+12 | VAPGVGLAPGVGVAPGVGVAPG SEQ ID NO1679 | 520-541 |
| MMP9+12 | VAPGVGLAPGVGVAPGVGVAPGVGVA SEQ ID NO1680 | 520-545 |
| MMP9+12 | VAPGVGLAPGVGVAPGVGVAPGVGVAPGIGPGG SEQ ID NO1681 | 520-552 |
| MMP9+12 | PGVGLAPGVGVAPG SEQ ID NO1682 | 522-535 |
| MMP9+12 | GVGLAPGVGVAPGVGVAPG SEQ ID NO1683 | 523-541 |
| MMP9+12 | VGLAPGVGVAPGVG SEQ ID NO1684 | 524-537 |
| MMP9+12 | VGLAPGVGVAPGVGVAPG SEQ ID NO1685 | 524-541 |
| MMP9+12 | VGLAPGVGVAPGVGVAPGVGVAPGIG SEQ ID NO1686 | 524-549 |
| MMP9+12 | VGLAPGVGVAPGVGVAPGVGVAPGIGPGG SEQ ID NO1687 | 524-552 |
| MMP9+12 | VGLAPGVGVAPGVGVAPGVGVAPGIGPG SEQ ID NO1688 | 524-553 |
| MMP9+12 | VGLAPGVGVAPGVGVAPGVGVAPGIGPGGVAAA SEQ ID NO1689 | 524-556 |
| MMP9+12 | LAPGVGVAPGVGVAPGVG SEQ ID NO1690 | 526-543 |
| MMP9+12 | LAPGVGVAPGVGVAPGVGVA SEQ ID NO1691 | 526-545 |
| MMP9+12 | LAPGVGVAPGVGVAPGVGVAPGIGP SEQ ID NO1692 | 526-550 |
| MMP9+12 | LAPGVGVAPGVGVAPGVGVAPGIGPGG SEQ ID NO1693 | 526-552 |
| MMP9+12 | GVGVAPGVGVAPGVGVAPGIGPGG SEQ ID NO1694 | 529-552 |
| MMP9+12 | VGVAPGVGVAPGVGVA SEQ ID NO1695 | 530-545 |
| MMP9+12 | VGVAPGVGVAPGVGVAPG SEQ ID NO 1696 | 530-547 |
| MMP9+12 | VGVAPGVGVAPGVGVAPGIGPG SEQ ID NO1697 | 530-551 |
| MMP9+12 | VGVAPGVGVAPGVGVAPGIGPGG SEQ ID NO1698 | 530-552 |
| MMP9+12 | VGVAPGVGVAPGVGVAPGIGPGGVAAA SEQ ID NO1699 | 530-556 |
| MMP9+12 | VAPGVGVAPGVGVAP SEQ ID NO1700 | 532-546 |
| MMP9+12 | VAPGVGVAPGVGVAPGIG SEQ ID NO1701 | 532-549 |
| MMP9+12 | VAPGVGVAPGVGVAPGIGPGG SEQ ID NO1702 | 532-552 |
| MMP9+12 | PGVGVAPGVGVAPGIGPG SEQ ID NO1703 | 534-551 |
| MMP9+12 | PGVGVAPGVGVAPGIGPGG SEQ ID NO1704 | 534-552 |
| MMP9+12 | VGVAPGVGVAPGIGPGG SEQ ID NO1705 | 536-552 |
| MMP9+12 | VGVAPGVGVAPGIGPGGVAA SEQ ID NO1706 | 536-555 |
| MMP9+12 | VAPGVGVAPGIGPG SEQ ID NO1707 | 538-551 |
| MMP9+12 | PGVGVAPGIGPG SEQ ID NO1708 | 540-551 |
| MMP9+12 | VGVAPGIGPGGVAA SEQ ID NO1709 | 542-555 |
| MMP9+12 | PGGVAAAAK SEQ ID NO1710 | 550-558 |
| MMP9+12 | LRAAAGL SEQ ID NO1711 | 569-575 |
| MMP9+12 | LRAAAGLG SEQ ID NO1712 | 569-576 |
| MMP9+12 | LRAAAGLGA SEQ ID NO1713 | 569-577 |
| MMP9+12 | AAAGLGAGIPGLGVG SEQ ID NO1714 | 571-585 |
| MMP9+12 | AAAGLGAGIPGLGVGVG SEQ ID NO1715 | 571-587 |
| MMP9+12 | LGAGIPGLGVG SEQ ID NO1716 | 575-585 |
| MMP9+12 | LGAGIPGLGVGVG SEQ ID NO1717 | 575-587 |
| MMP9+12 | LGAGI PGLGVGVGVPGLGVG SEQ ID NO1718 | 575-594 |
| MMP9+12 | LGAGIPGLGVGVGVPG SEQ ID NO1719 | 575-590 |
| MMP9+12 | LGAGI PGLGVGVGVPGLGVGA SEQ ID NO1720 | 575-595 |
| MMP9+12 | LGAGIPGLGVGVGVPGL SEQ ID NO1721 | 575-591 |
| MMP9+12 | LGAGIPGLGVGVGVPGLG SEQ ID NO1722 | 575-592 |
| MMP9+12 | LGAGI PGLGVGVGVPGLGVGAGVPG SEQ ID NO1723 | 575-599 |
| MMP9+12 | LGAGIPGLGVGVGVPGLGVGAGVPGLG SEQ ID NO1724 | 575-601 |
| MMP9+12 | LGAGIPGLGVGVGVPGLGVGAGVPGLGVG SEQ ID NO1725 | 575-603 |
| MMP9+12 | LGAGIPGLGVGVGVPGLGVGAGVPGLGVGAGVPGFG SEQ ID NO1726 | 575-610 |
| MMP9+12 | GAGIPGLGVGVGVPGLG SEQ ID NO1727 | 576-592 |
| MMP9+12 | AGIPGLGVGVGVPG SEQ ID NO1728 | 577-590 |
| MMP9+12 | GIPGLGVGVGVPGLGVGA SEQ ID NO1729 | 578-595 |
| MMP9+12 | LGVGVGVPGLGVGA SEQ ID NO1730 | 582-595 |
| MMP9+12 | VGVPGLGVGAGVPG SEQ ID NO1731 | 586-599 |
| MMP9+12 | VGVPGLGVGAGVPGL SEQ ID NO1732 | 586-600 |
| MMP9+12 | VGVPGLGVGAGVPGLG SEQ ID NO1733 | 586-601 |
| MMP9+12 | VGVPGLGVGAGVPGLGVG SEQ ID NO1734 | 586-603 |
| MMP9+12 | VGVPGLGVGAGVPGLGVGA SEQ ID NO1735 | 586-604 |
| MMP9+12 | VGAGVPGLGVGAGVPGFG SEQ ID NO1736 | 593-610 |
| MMP9+12 | PGALAAAK SEQ ID NO1737 | 646-653 |
| MMP9+12 | AKYGAAVPGVLGGLGA SEQ ID NO1738 | 655-670 |
| MMP9+12 | YGAAVPGVLGG SEQ ID NO1739 | 657-667 |
| MMP9+12 | YGAAVPGVLGGLG SEQ ID NO1740 | 657-669 |
| MMP9+12 | YGAAVPGVLGGLGA SEQ ID NO1741 | 657-670 |
| MMP9+12 | YGAAVPGVLGGLGALG SEQ ID NO1742 | 657-672 |
| MMP9+12 | YGAAVPGVLGGLGALGGVGIPGG SEQ ID NO1743 | 657-679 |
| MMP9+12 | YGAAVPGVLGGLGALGGVGIPGGVVGAGPAA SEQ ID NO1744 | 657-687 |
| MMP9+12 | GAAVPGVLGGLG SEQ ID NO1745 | 658-669 |
| MMP9+12 | GAAVPGVLGGLGALGGVGIPGG SEQ ID NO1746 | 658-679 |
| MMP9+12 | AVPGVLGGLGA SEQ ID NO1747 | 660-670 |
| MMP9+12 | AVPGVLGGLGALGGVGIPGG SEQ ID NO1748 | 660-679 |
| MMP9+12 | VLGGLGALGGVGIPGG SEQ ID NO1749 | 664-679 |
| MMP9+12 | GGLGALGGVGIPGGVVGAGPA SEQ ID NO1750 | 666-686 |
| MMP9+12 | GGLGALGGVGI PGGVVGAGPAAA SEQ ID NO1751 | 666-688 |
| MMP9+12 | LGALGGVGIPGG SEQ ID NO1752 | 668-379 |
| MMP9+12 | LGALGGVGIPGGVVGAGPA SEQ ID NO1753 | 668-686 |
| MMP9+12 | LGALGGVGIPGGVVGAGPAA SEQ ID NO1754 | 668-687 |
| MMP9+12 | LGALGGVGIPGGVVGAGPAAA SEQ ID NO1755 | 668-688 |
| MMP9+12 | LGALGGVGIPGGVVGAGPAAAA SEQ ID NO1756 | 668-689 |
| MMP9+12 | ALGGVGIPGGVVGAGPAA SEQ ID NO1757 | 670-687 |
| MMP9+12 | ALGGVGIPGGVVGAGPAAA SEQ ID NO1758 | 670-688 |
| MMP9+12 | LGGVGIPGGV SEQ ID NO1759 | 671-680 |
| MMP9+12 | LGGVGIPGGVVGAGPA SEQ ID NO1760 | 671-686 |
| MMP9+12 | LGGVGIPGGVVGAGPAAA SEQ ID NO1761 | 671-688 |
| MMP9+12 | LGGVGIPGGVVGAGPAAAAA SEQ ID NO1762 | 671-690 |
| MMP9+12 | LGGVGIPGGVVGAGPAAAAAAAK SEQ ID NO1763 | 671-693 |
| MMP9+12 | GVGI PGGVVGAGPAAAA SEQ ID NO1764 | 673-689 |
| MMP9+12 | GVGIPGGVVGAGPAAAAAAAK SEQ ID NO1765 | 673-693 |
| MMP9+12 | VGIPGGVVGAGPAAA SEQ ID NO1766 | 674-688 |
| MMP9+12 | VGIPGGVVGAGPAAAAAAAK SEQ ID NO1767 | 674-693 |
| MMP9+12 | IPGGVVGAGPAAAA SEQ ID NO1768 | 676-689 |
| MMP9+12 | VVGAGPAAAAAAAK SEQ ID NO1769 | 680-693 |
| MMP9+12 | VGAGPAAAAAAAK SEQ ID NO1770 | 681-693 |
| MMP9+12 | AGPAAAAAAAK SEQ ID NO1771 | 683-693 |
| MMP9+12 | GPAAAAAAAK SEQ ID NO1772 | 684-693 |
| MMP9+12 | PAAAAAAAK SEQ ID NO1773 | 685-693 |
| MMP9+12 | FGLVGAAGLGGLGVGGLGVPGVGG SEQ ID NO1774 | 701-724 |
| MMP9+12 | GLVGAAGLGGLG SEQ ID NO1775 | 702-713 |
| MMP9+12 | GLVGAAGLGGLGVGG SEQ ID NO1776 | 702-716 |
| MMP9+12 | GLVGAAGLGGLGVGGLGVPGVG SEQ ID NO1777 | 702-723 |
| MMP9+12 | GLVGAAGLGGLGVGGLGVPGVGG SEQ ID NO1778 | 702-724 |
| MMP9+12 | LVGAAGLGGLGVG SEQ ID NO1779 | 703-715 |
| MMP9+12 | LVGAAGLGGLGVGG SEQ ID NO1780 | 703-716 |
| MMP9+12 | LVGAAGLGGLGVGGL SEQ ID NO1781 | 703-717 |
| MMP9+12 | LVGAAGLGGLGVGGLGVPGVGGLG SEQ ID NO1782 | 703-726 |
| MMP9+12 | LVGAAGLGGLGVGGLGVPGVGGLGGIPPAAA SEQ ID NO1783 | 703-733 |
| MMP9+12 | VGAAGLGGLGVGG SEQ ID NO1784 | 704-716 |
| MMP9+12 | LGGLGVGGLGVPG SEQ ID NO1785 | 709-721 |
| MMP9+12 | LGGLGVGGLGVPGVG SEQ ID NO1786 | 709-723 |
| MMP9+12 | LGGLGVGGLGVPGVGGL SEQ ID NO1787 | 709-725 |
| MMP9+12 | LGGLGVGGLGVPGVGGLG SEQ ID NO1788 | 709-726 |
| MMP9+12 | LGVGGLGVPGVGGLG SEQ ID NO1789 | 712-726 |
| MMP9+12 | GLGVPGVGGLGGIPPAAAAK SEQ ID NO1790 | 716-735 |
| MMP9+12 | LGGIPPAAAAK SEQ ID NO1791 | 725-735 |
| MMP9+12 | LGGVLGGAGQFPL SEQ ID NO1792 | 744-756 |
| MMP9+12 | LGGVLGGAGQFPLGGVAAR SEQ ID NO1793 | 744-762 |
| MMP9+12 | LGGVLGGAGQFPLGGVAARPG SEQ ID NO1794 | 744-764 |
| MMP9+12 | LGGVLGGAGQFPLGGVAARPGFG SEQ ID NO 1795 | 744-766 |
| MMP9+12 | GGVLGGAGQFPLGGVAARPG SEQ ID NO1796 | 745-764 |
| MMP9+12 | GAGQFPLGGVAAR SEQ ID NO1797 | 750-762 |
| MMP9+12 | GAGQFPLGGVAARPGFG SEQ ID NO1798 | 750-766 |
| MMP9+12 | AGQFPLGGVAARPGFG SEQ ID NO1799 | 751-766 |
| MMP9+12 | FPLGGVAARPG SEQ ID NO1800 | 754-764 |
| MMP9+12 | PLGGVAAR SEQ ID NO1801 | 755-762 |
| MMP9+12 | PLGGVAARPG SEQ ID NO1802 | 755-764 |
| MMP9+12 | PLGGVAARPGFG SEQ ID NO1803 | 755-766 |
| MMP9+12 | PLGGVAARPGFGL SEQ ID NO1804 | 755-767 |
| MMP9+12 | PLGGVAARPGFGLSPIFPG SEQ ID NO1805 | 755-773 |
| MMP9+12 | LGGVAAR SEQ ID NO1806 | 756-762 |
| MMP9+12 | LGGVAARP SEQ ID NO1807 | 756-763 |
| MMP9+12 | LGGVAARPG SEQ ID NO1808 | 756-764 |
| MMP9+12 | LGGVAARPGF SEQ ID NO1809 | 756-765 |
| MMP9+12 | LGGVAARPGFG SEQ ID NO1810 | 756-766 |
| MMP9+12 | LGGVAARPGFGL SEQ ID NO1811 | 756-767 |
| MMP9+12 | LGGVAARPGFGLSP SEQ ID NO1812 | 756-769 |
| MMP9+12 | LGGVAARPGFGLSPIFPG SEQ ID NO1813 | 756-773 |
| MMP9+12 | LGGVAARPGFGLSPIFPGG SEQ ID NO1814 | 756-774 |
| MMP9+12 | LGGVAARPGFGLSPIFPGGA SEQ ID NO1815 | 756-775 |
| MMP9+12 | GGVAARPGFG SEQ ID NO1816 | 757-766 |
| MMP9+12 | GGVAARPGFGL SEQ ID NO1817 | 757-767 |
| MMP9+12 | GGVAARPGFGLSPIFPGGA SEQ ID NO1818 | 757-775 |
| MMP9+12 | GVAARPGFGLSPIF SEQ ID NO1819 | 758-771 |
| MMP9+12 | GVAARPGFGLSPIFP SEQ ID NO1820 | 758-772 |
| MMP9+12 | VAARPGFG SEQ ID NO1821 | 759-766 |
| MMP9+12 | VAARPGFGLSPIFP SEQ ID NO1822 | 759-772 |
| MMP9+12 | VAARPGFGLSPIFPG SEQ ID NO1823 | 759-773 |
| MMP9+12 | RPGFGLSPIFPG SEQ ID NO1824 | 762-773 |
| MMP9+12 | PGFGLSPIFPGG SEQ ID NO1825 | 763-774 |
| MMP9+12 | PGFGLSPIFPGGA SEQ ID NO1826 | 763-775 |
| ADAMTS-1 | P.GVGLPGVYPGGVLPGAR.F SEQ ID NO1827 | 143-159 |
| ADAMTS-1 | G.VGLPGVYPGGVLPGAR.F SEQ ID NO1828 | 144-159 |
| ADAMTS-1 | G.LPGVYPGGVLPGAR.F SEQ ID NO1829 | 146-159 |
| ADAMTS-1 | P.GVYPGGVLPGAR.F SEQ ID NO1830 | 148-159 |
| ADAMTS-1 | K.AGYPTGTGVGPQAAAAAAAK.A SEQ ID NO1831 | 242-261 |
| ADAMTS-1 | G.GPGFGPGVVGVPGAGVPGVGVPGA.G SEQ ID NO1832 | 326-349 |
| ADAMTS-1 | G.FGPGVVGVPGAGVPGVGVPG.A SEQ ID NO1833 | 329-348 |
| ADAMTS-1 | F.GPGVVGVPGAGVPGVGVPG.A SEQ ID NO1834 | 330-348 |
| ADAMTS-1 | G.VPGVGVPGAGIPVVPG.A SEQ ID NO1835 | 341-356 |
| ADAMTS-1 | G.ARPGVGVGGIPTYGVG.A SEQ ID NO1836 | 385-400 |
| ADAMTS-1 | G.ARPGVGVGGIPTYGVGAGG.F SEQ ID NO1837 | 385-403 |
| ADAMTS-1 | A.RPGVGVGGIPTYGVGAG.G SEQ ID NO1838 | 386-402 |
| ADAMTS-1 | G.GVPGVGGVPGVGISPEAQAAAA.A SEQ ID NO1839 | 425-446 |
| ADAMTS-1 | G.VPGVGISPEAQAAAAAK.A SEQ ID NO1840 | 432-448 |
| ADAMTS-1 | G.VGISPEAQAAAAAK.A SEQ ID NO1841 | 435-448 |
| ADAMTS-1 | V.PGVGVAPGVGVAPGVGVAPGVGL.A SEQ ID NO1842 | 504-526 |
| ADAMTS-1 | G.VAPGVGVAPGVGVAPGVGLAPGVGVAPG.V SEQ ID NO1843 | 508-535 |
| ADAMTS-1 | G.VGVAPGVGVAPGVGLAPGVG.V SEQ ID NO1844 | 512-531 |
| ADAMTS-1 | G.VGVAPGVGVAPGVGLAPGVGVAPGVG.V SEQ ID NO1845 | 512-537 |
| ADAMTS-1 | A.PGVGVAPGVGVAPGVGVAPGIGPG.G SEQ ID NO1846 | 528-551 |
| ADAMTS-1 | G.VAPGVGVAPGVGVAPGIGPG.G SEQ ID NO1847 | 532-551 |
| ADAMTS-1 | G.AAVPGVLGGLGALGGVGIPG.G SEQ ID NO1848 | 659-678 |
| ADAMTS-1 | G.AAGLGGLGVGGLGVPGVGGLG.G SEQ ID NO1849 | 706-726 |
| ADAMTS-4 | P.GVGLPGVYPGGVLPGAR.F SEQ ID NO1827 | 143-159 |
| ADAMTS-4 | G.LPGVYPGGVLPGAR.F SEQ ID NO1829 | 146-159 |
| ADAMTS-4 | K.AGYPTGTGVGPQAAAAAAAK.A SEQ ID NO1831 | 242-261 |
| ADAMTS-4 | G.GAGVPGVPGAIPGIGGIAGVG.T SEQ ID NO1850 | 279-299 |
| ADAMTS-4 | G.AGVPGVPGAIPGIGGIAGVG.T SEQ ID NO1851 | 280-299 |
| ADAMTS-4 | A.GVGTPAAAAAAAAAAK.A SEQ ID NO1852 | 297-312 |
| ADAMTS-4 | G.VGTPAAAAAAAAAAK.A SEQ ID NO1853 | 298-312 |
| ADAMTS-4 | G.GPGFGPGVVGVPGAGVPGVGVPG.A SEQ ID NO1854 | 326-348 |
| ADAMTS-4 | G.ARPGVGVGGIPTYGVGA.G SEQ ID NO1855 | 385-401 |
| ADAMTS-4 | A.RPGVGVGGIPTYGVGAG.G SEQ ID NO1838 | 386-402 |
| ADAMTS-4 | A.RPGVGVGGIPTYGVGAGG.F SEQ ID NO1856 | 386-403 |
| ADAMTS-4 | G.VGISPEAQAAAAAK.A SEQ ID NO1841 | 435-448 |
| ADAMTS-4 | G.VGVAPGVGVAPGVGVAPGVGLAPGVG.V SEQ ID NO1857 | 506-531 |
| ADAMTS-4 | A.PGVGVAPGVGLAPGVGVAPGVGVA.P SEQ ID NO1858 | 516-539 |
| ADAMTS-4 | G.VGVAPGVGLAPGVGVAPGVG.V SEQ ID NO1859 | 518-537 |
| ADAMTS-4 | L.APGVGVAPGVGVAPGVGVAPGIGPG.G SEQ ID NO1860 | 527-551 |
| ADAMTS-4 | Y.GAAVPGVLGGLGALGGVGIPG.G SEQ ID NO1861 | 658-678 |
| ADAMTS-4 | G.AAVPGVLGGLGALGGVGIPG.G SEQ ID NO1848 | 659-678 |
| ADAMTS-4 | G.GAGQFPLGGVAARPGFGL.S SEQ ID NO1862 | 750-767 |
| ADAMTS-8 | L.VPGGVADAAAAYK.A SEQ ID NO1863 | 092-104 |
| ADAMTS-8 | G.VGLPGVYPGGVLPGAR.F SEQ ID NO1828 | 144-159 |
| ADAMTS-8 | G.LPGVYPGGVLPGAR.F SEQ ID NO1829 | 146-159 |
| ADAMTS-8 | P.GVYPGGVLPGAR.F SEQ ID NO1830 | 148-159 |
| ADAMTS-8 | V.YPGGVLPGAR.F SEQ ID NO1864 | 150-159 |
| ADAMTS-8 | F.GPGVVGVPGAGVPGVGVPG.A SEQ ID NO1834 | 330-348 |
| ADAMTS-8 | G.ARPGVGVGGIPTYGVGA.G SEQ ID NO1855 | 385-401 |
| ADAMTS-8 | V.APGVGVAPGVGVAPGVGLAPGVGV.A SEQ ID NO1865 | 509-532 |
| ADAMTS-8 | L.APGVGVAPGVGVAPGVGV.A SEQ ID NO1866 | 527-544 |
| ADAMTS-8 | L.APGVGVAPGVGVAPGVGVAPG.I SEQ ID NO1867 | 527-547 |
| ADAMTS-8 | L.APGVGVAPGVGVAPGVGVAPGIG.P SEQ ID NO1868 | 527-549 |
| ADAMTS-8 | L.APGVGVAPGVGVAPGVGVAPGIGP.G SEQ ID NO1869 | 527-550 |
| ADAMTS-8 | L.APGVGVAPGVGVAPGVGVAPGIGPG.G SEQ ID NO1860 | 527-551 |
| ADAMTS-8 | L.APGVGVAPGVGVAPGVGVAPGI GPGGVAA.A SEQ ID NO 1870 | 527-555 |
| ADAMTS-8 | G.VGVAPGVGVAPGVGVAPGIGPG.G SEQ ID NO1871 | 530-551 |
| ADAMTS-8 | G.VAPGVGVAPGVGVAPGIGPG.G SEQ ID NO1847 | 532-551 |
| ADAMTS-8 | G.AAVPGVLGGLGALGGVGIPG.G SEQ ID NO1848 | 659-678 |
| ADAMTS-8 | G.AAVPGVLGGLGALGGVGIPGG.V SEQ ID NO1872 | 659-679 |
| ADAMTS-8 | A.AVPGVLGGLGALGGVGIPG.G SEQ ID NO1873 | 660-678 |
| ADAMTS-8 | A.VPGVLGGLGALGGVGIPGG.V SEQ ID NO1874 | 661-679 |
| ADAMTS-8 | A.GQFPLGGVAARPGFGL.S SEQ ID NO1875 | 752-767 |
| Cat K | G.ALVPGGVADAAAAYK.A SEQ ID NO1876 | 090-104 |
| Cat K | G.LPYTTGKLPYGYGPG.G SEQ ID NO1877 | 219-233 |
| Cat K | A.AAAAAAKAAAKFGA.G SEQ ID NO1878 | 255-268 |
| Cat K | A.GVGTPAAAAAAAAAAK.A SEQ ID NO1852 | 297-312 |
| Cat K | A.AAAAAAAAAKAAKYGA.A SEQ ID NO1879 | 303-318 |
| Cat K | G.FGPGVVGVPGAGVPGVGVPG.A SEQ ID NO1833 | 329-348 |
| Cat K | G.VGISPEAQAAAAAK.A SEQ ID NO1841 | 435-448 |
| Cat K | G.VAPGVGVAPGVGVAPGVGLAPGVG.V SEQ ID NO1880 | 508-531 |
| Cat K | G.VGVAPGVGVAPGVGVAPGIGPG.G SEQ ID NO1871 | 530-551 |
| Cat K | G.VAPGVGVAPGVGVAPGIGPG.G SEQ ID NO1847 | 532-551 |
| Cat S | T.FPGALVPGGVADAAAAYK.A SEQ ID NO1881 | 087-104 |
| Cat S | G.VGLPGVYPGGVLPGAR.F SEQ ID NO1828 | 144-159 |
| Cat S | G.LPGVYPGGVLPGARFPGVG.V SEQ ID NO1882 | 146-164 |
| Cat S | G.YPTGTGVGPQAAAAAAAK.A SEQ ID NO1883 | 244-261 |
| Cat S | G.GAGVPGVPGAIPGIGGIAGVG.T SEQ ID NO1850 | 279-299 |
| Cat S | G.TPAAAAAAAAAAKAAK.Y SEQ ID NO1884 | 300-315 |
| Cat S | G.VPGAGVPGVGVPGAGIPVVP.G SEQ ID NO1885 | 336-355 |
| Cat S | G.VPGAGVPGVGVPGAGIPVVPGAGIPG.A SEQ ID NO1886 | 336-361 |
| Cat S | G.ISPEAQAAAAAKAAK.Y SEQ ID NO1887 | 437-451 |
| Cat S | V.PGVGVAPGVGVAPGVGVA.P SEQ ID NO1888 | 504-521 |
| Cat S | G.VAPGVGVAPGVGVAPGIGPGGVA.A SEQ ID NO1889 | 532-554 |
| Cat S | G.IPGGVVGAGPAAAAAAAK.A SEQ ID NO1890 | 676-693 |
| MMP1 | G.GVLPGARFPGVGVLPGVPTGA.G SEQ ID NO1891 | 153-173 |
| MMP1 | G.GVPGVGGVPGVGISPEA.Q SEQ ID NO1892 | 425-441 |
| MMP1 | V.PGVGVAPGVGVAPGVGVA.P SEQ ID NO1888 | 504-521 |
| MMP1 | G.VGVAPGVGVAPGVGVAPGVG.L SEQ ID NO1893 | 506-525 |
| MMP1 | G.VAPGVGVAPGVGVAPGIGPG.G SEQ ID NO1847 | 532-551 |
| MMP1 | A.AVPGVLGGLGALGGVGI PG.G SEQ ID NO1873 | 660-678 |
| MMP1 | ||
| MMP3 | G.ALVPGGVADAAAAYK.A SEQ ID NO1876 | 090-104 |
| MMP3 | G.YPTGTGVGPQAAAAAAAK.A SEQ ID NO1883 | 244-261 |
| MMP3 | G.VPGVPGAIPGIGGIAGVG.T SEQ ID NO1894 | 282-299 |
| MMP3 | F.GPGVVGVPGAGVPGVGVPGA.G SEQ ID NO1895 | 330-349 |
| MMP3 | G.VGISPEAQAAAAAK.A SEQ ID NO1841 | 435-448 |
| MMP3 | G.VGVAPGVGVAPGVGLAPGVG.V SEQ ID NO1844 | 512-531 |
| MMP3 | G.VAPGVGVAPGVGVAPGIGPG.G SEQ ID NO1847 | 532-551 |
| MMP8 | P.GVYPGGVLPGAR.F SEQ ID NO1830 | 148-159 |
| MMP8 | K.AGYPTGTGVGPQAAAAAAAK.A SEQ ID NO1831 | 242-261 |
| MMP8 | G.VPGVPGAIPGIGGIAGVG.T SEQ ID NO1894 | 282-299 |
| MMP8 | F.GPGVVGVPGAGVPGVGVPG.A SEQ ID NO1834 | 330-348 |
| MMP8 | G.VPGVGVPGAGIPVVPGA.G SEQ ID NO1896 | 341-357 |
| MMP8 | G.ARPGVGVGGIPTYGVG.A SEQ ID NO1836 | 385-400 |
| MMP8 | A.RPGVGVGGIPTYGVGAG.G SEQ ID NO1838 | 386-402 |
| MMP8 | G.VGVAPGVGVAPGVGVAP.G SEQ ID NO1897 | 506-522 |
| MMP8 | G.VGVAPGVGVAPGVGLAPGVG.V SEQ ID NO 1844 | 512-531 |
| MMP8 | G.VGVAPGVGVAPGVGVAP.G SEQ ID NO1897 | 530-546 |
| MMP8 | G.IPGGVVGAGPAAAAAAAK.A SEQ ID NO1890 | 676-693 |
*在人弹性蛋白序列中的氨基酸残基编号
因此，在本发明的方法中，所述肽片段优选包含蛋白酶在N-或C-末端位点或者在表24中弹性蛋白的部分序列中任何一个中以符号·标记的位点处切割弹性蛋白所形成的新表位。
所述免疫结合伴侣可以是与切割弹性蛋白所形成的C-末端或N-末端新表位特异性反应的免疫结合伴侣。
因此，合适的免疫结合伴侣可与肽N末端的下述任何序列特异性地反应：
表25.蛋白酶产生的弹性蛋白肽片段的N-末端序列。
弹性蛋白
| GVPGAI SEQ ID NO1898 | AIPGGV SEQ ID NO1899 | GVPGGV SEQ ID NO1900 |
| ALGGGA SEQ ID NO1901 | LGGGAL SEQ ID NO1902 | GGALGP SEQ ID NO1903 |
| PLKPVP SEQ ID NO1904 | LKPVPG SEQ ID NO1905 | GLAGAG SEQ ID NO1906 |
| GLGAGL SEQ ID NO1907 | LGAGLG SEQ ID NO1908 | AGLGAF SEQ ID NO1909 |
| LVPGGV SEQ ID NO1910 | VADAAA SEQ ID NO1911 | KAAKAG SEQ ID NO1912 |
| PVGYPG SEQ ID NO1913 | ARFPGV SEQ ID NO1914 | RFPGVG SEQ ID NO1915 |
| VGPFGG SEQ ID NO1916 | GPQPGV SEQ ID NO1917 | PQPGVP SEQ ID NO1918 |
| TTGKLP SEQ ID NO1919 | LPYGYG SEQ ID NO1920 | GYGPGG SEQ ID NO1921 |
| FGAGAA SEQ ID NO1922 | GVLPGV SEQ ID NO1923 | VLPGVG SEQ ID NO1924 |
| AGIPGL SEQ ID NO1925 | VPGAIP SEQ ID NO1926 | AIPGIG SEQ ID NO1927 |
| TPAAAA SEQ ID NO1928 | PAAAAA SEQ ID NO1929 | AAAAAA SEQ ID NO1930 |
| VGVPGA SEQ ID NO1931 | AVGPGV SEQ ID NO1932 | GVPGVG SEQ ID NO1933 |
| GIPVVP SEQ ID NO1934 | IPGAAV SEQ ID NO1935 | GAAVPG SEQ ID NO1936 |
| ARPGVG SEQ ID NO1937 | RPGVGV SEQ ID NO1938 | VGGIPT SEQ ID NO1939 |
| SVGGVP SEQ ID NO1940 | VGGVPG SEQ ID NO1941 | GVGTPA SEQ ID NO1942 |
| VGVAPG SEQ ID NO1943 | VAPGVG SEQ ID NO1944 | GVAPGV SEQ ID NO1945 |
| GVPVAP SEQ ID NO1946 | GAGIPG SEQ ID NO1947 | PGGVAA SEQ ID NO1948 |
| LGAGIP SEQ ID NO1949 | PGFGPG SEQ ID NO1950 | PGVVGV SEQ ID NO1951 |
| PGALAA SEQ ID NO1952 | AKYGAA SEQ ID NO1953 | YGAAVP SEQ ID NO1954 |
| ALGGVG SEQ ID NO1955 | LGGVGI SEQ ID NO1956 | GVGIPG SEQ ID NO1957 |
| AGPAAA SEQ ID NO1958 | GPAAAA SEQ ID NO1959 | FGLVGA SEQ ID NO1960 |
| GLGVPG SEQ ID NO1961 | LGGIPP SEQ ID NO1962 | LGGVLG SEQ ID NO1963 |
| PLGGVA SEQ ID NO1964 | LGGVAA SEQ ID NO1965 | GGVAAR SEQ ID NO1966 |
| GVGLPG SEQ ID NO1967 | VGLPGV SEQ ID NO1968 | LPGVYP SEQ ID NO1969 |
| VPGVPV SEQ ID NO1970 | VPGVGISEQ ID NO1971 | VGISPE SEQ ID NO1972 |
| APGVGV SEQ ID NO1973 | VPGGVA SEQ ID NO1974 | YPGGVL SEQ ID NO1975 |
| GPGFGP SEQ ID NO1976 | YPTGTG SEQ ID NO1977 | VPGAGV SEQ ID NO1978 |
| VPGGVF SEQ ID NO1979 | GVFYPG SEQ ID NO1980 | VFYPGA SEQ ID NO1981 |
| LGPGGK SEQ ID NO1982 | GPGGKP SEQ ID NO1983 | PGGKPL SEQ ID NO1984 |
| LAGAGL SEQ ID NO1985 | AGAGLG SEQ ID NO1986 | GAGLGA SEQ ID NO1987 |
| LGAFPA SEQ ID NO1988 | AFPAVT SEQ ID NO1989 | AVTFPG SEQ ID NO1990 |
| LGVSAG SEQ ID NO1991 | VPGVGL SEQ ID NO1992 | PGVGLP SEQ ID NO1993 |
| FPGVGV SEQ ID NO1994 | KPGAPG SEQ ID NO1995 | PKAPGV SEQ ID NO1493 |
| PGVPLG SEQ ID NO1996 | GYPIKA SEQ ID NO1997 | PKLPGG SEQ ID NO1998 |
| YGPGGV SEQ ID NO1999 | AGYPTG SEQ ID NO2000 | TGVGPQ SEQ ID NO2001 |
| GAGVPG SEQ ID NO2002 | AGVPGV SEQ ID NO2003 | GVPGVP SEQ ID NO2004 |
| IPGIGG SEQ ID NO2005 | IGGIAG SEQ ID NO2006 | GIAGVG SEQ ID NO2007 |
| VPGVGV SEQ ID NO2008 | VPVGVA SEQ ID NO2009 | VPGAGI SEQ ID NO2010 |
| AVPGVV SEQ ID NO2011 | VPGVVS SEQ ID NO2012 | YGARPG SEQ ID NO2013 |
| GVGAGG SEQ ID NO2014 | VGAGGF SEQ ID NO2015 | VGVGGI SEQ ID NO2016 |
| FGLVPG SEQ ID NO2017 | GLVPGV SEQ ID NO2018 | LVPGVG SEQ ID NO2019 |
| PGVGLA SEQ ID NO2020 | GVGLAP SEQ ID NO2021 | VGLAPG SEQ ID NO2022 |
| LRAAAG SEQ ID NO2023 | LVGAAG SEQ ID NO2024 | LVPGGP SEQ ID NO2025 |
| GIPGLG SEQ ID NO2026 | LGVGVG SEQ ID NO2027 | VGVPGL SEQ ID NO2028 |
| AAAGLG SEQ ID NO2029 | AVPGVL SEQ ID NO2030 | VLGGLG SEQ ID NO2031 |
| VGIPGG SEQ ID NO2032 | IPGGVV SEQ ID NO2033 | VVGAGP SEQ ID NO2034 |
| GLVGAA SEQ ID NO 2035 | VGAAGL SEQ ID NO2036 | LGGLGV SEQ ID NO2037 |
| GGVLGG SEQ ID NO2038 | GAGQFP SEQ ID NO2039 | AFQFPL SEQ ID NO2040 |
| GVAARP SEQ ID NO2041 | VAARPG SEQ ID NO2042 | RPGFGL SEQ ID NO2043 |
| GVYPGG SEQ ID NO2044 | LPYTTG SEQ ID NO2045 | FGPGVV SEQ ID NO2046 |
| AAVPGV SEQ ID NO2047 | AAGLGG SEQ ID NO2048 | FPGALV SEQ ID NO2049 |
| VPGVLG SEQ ID NO2050 | GQFPLG SEQ ID NO2051 | ALVPGG SEQ ID NO2052 |
| ISPEAQ SEQ ID NO2053 | GVLPGA SEQ ID NO2054 | VGAGVP SEQ ID NO2055 |
| LGALGG SEQ ID NO2056 | VPGVPG SEQ ID NO2057 | GGLGAL SEQ ID NO2058 |
| GKPLKP SEQ ID NO2059 | IAGVGT SEQ ID NO2060 | VGAGPA SEQ ID NO2061 |
| AGLGAG SEQ ID NO2062 | VVGVPG SEQ ID NO2063 | LGVGGL SEQ ID NO2064 |
| VTFPGA SEQ ID NO2065 | AGIPVV SEQ ID NO2066 | FPLGGV SEQ ID NO2067 |
| GLPGVY SEQ ID NO2068 | GARPGV SEQ ID NO2069 | PGFGLS SEQ ID NO2070 |
| GAFAGI SEQ ID NO2071 | VAGVPS SEQ ID NO2072 | GPGVVG SE QID NO2073 |
| YTTGKL SEQ ID NO2074 | PGVGVA SEQ ID NO2075 | VGTPAA SEQ ID NO2076 |
| PQAAAA SEQ ID NO2077 | LAPGVG SEQ ID NO2078 |
或者与肽C末端的下述任意序列特异性地反应：
表26.蛋白酶产生的弹性蛋白肽片段的C-末端序列。
| 弹性蛋白 | ||
| PGGVPG SEQ ID NO2079 | PGAGLG SEQ ID NO2080 | GAGLGA SEQ ID NO1987 |
| GALGGG SEQ ID NO2081 | LGGGAL SEQ ID NO1902 | GGGALG SEQ ID NO2082 |
| GLGAFP SEQ ID NO2083 | LGAFPA SEQ ID NO1988 | LGAGLG SEQ ID NO1908 |
| VPGGVA SEQ ID NO1974 | ADAAAA SEQ ID NO2084 | PGVLGG SEQ ID NO2085 |
| RFPGVG SEQ ID NO1915 | VGVLPG SEQ ID NO2086 | VPTGAG SEQ ID NO2087 |
| PKAPGV SEQ ID NO1493 | GVGPFG SEQ ID NO2088 | VPLGYP SEQ ID NO2089 |
| LPYGYG SEQ ID NO1920 | AAAAAK SEQ ID NO2090 | IPGIGG SEQ ID NO2005 |
| GIAGVG SEQ ID NO2007 | AIPGIG SEQ ID NO1927 | IGGIAG SEQ ID NO2006 |
| AAAAKA SEQ ID NO2091 | VVGVPG SEQ ID NO2063 | GVPGVG SEQ ID NO1933 |
| GVGVPG SEQ ID NO2092 | PVVPGA SEQ ID NO2093 | VVSPEA SEQ ID NO2094 |
| VGGIPT SEQ ID NO1939 | GGIPTY SEQ ID NO2095 | GIPTYG SEQ ID NO2096 |
| GVGVGG SEQ ID NO2097 | GVGGIP SEQ ID NO2098 | VGVPGL SEQ ID NO2028 |
| GFPGFG SEQ ID NO2099 | FGVGVG SEQ ID NO2100 | GVGAGG SEQ ID NO2014 |
| PGVGIS SEQ ID NO2101 | SPEAQA SEQ ID NO2102 | VAPGVG SEQ ID NO1944 |
| PGVGVA SEQ ID NO2075 | GVGVAP SEQ ID NO2103 | APGVGL SEQ ID NO2104 |
| GIGPGG SEQ ID NO2105 | APGIGP SEQ ID NO2106 | VAPGIG SEQ ID NO2107 |
| RAAAGL SEQ ID NO2108 | AAAGLG SEQ ID NO2029 | AAGLGA SEQ ID NO2109 |
| GVPGLG SEQ ID NO2110 | GVPGFG SEQ ID NO2111 | AGVPGL SEQ ID NO2112 |
| VLGGLG SEQ ID NO2031 | VGIPGG SEQ ID NO2032 | GAGPAA SEQ ID NO2113 |
| PAAAAA SEQ ID NO1929 | VPGVGG SEQ ID NO2114 | GLGGLG SEQ ID NO2115 |
| GLGVPG SEQ ID NO1961 | PGVGGL SEQ ID NO2116 | PAAAAK SEQ ID NO2117 |
| RPGFGL SEQ ID NO2043 | GVAARP SEQ ID NO2041 | AARPGF SEQ ID NO2118 |
| LSPIFP SEQ ID NO2119 | AQAAAA SEQ ID NO2120 | GPGIPG SEQ ID NO2121 |
| GPGGVA SEQ ID NO2122 | TPAAAA SEQ ID NO1928 | PGGVAA SEQ ID NO1948 |
| GLGALG SEQ ID NO2123 | LGALGG SEQ ID NO2056 | ALGPGG SEQ ID NO2124 |
| GALGPG SEQ ID NO2125 | VAPVGV SEQ ID NO2126 | KPVPGG SEQ ID NO2127 |
| AFPAVT SEQ ID NO1989 | AVTFPG SEQ ID NO1990 | VTFPGA SEQ ID NO2065 |
| AAAAYK SEQ ID NO2128 | AAKAGA SEQ ID NO2129 | VPQPGA SEQ ID NO2130 |
| PGVPTG SEQ ID NO2131 | GVPTGA SEQ ID NO2132 | AGVKPK SEQ ID NO2133 |
| PIKAPK SEQ ID NO2134 | KLPGGY SE QID NO2135 | YGYGPG SEQ ID NO2136 |
| VGTPAA SEQ ID NO2076 | VPGVPG SEQ ID NO2057 | GVGTPA SEQ ID NO1942 |
| GIGGIA SEQ ID NO2137 | GTPAAA SEQ ID NO2138 | AAAAAA SEQ ID NO1930 |
| IPVVPG SEQ ID NO2139 | VGVPGA SEQ ID NO1931 | GVPGAG SEQ ID NO2140 |
| GAGIPG SEQ ID NO1947 | PEAAAK SEQ ID NO2141 | ARPGVG SEQ ID NO1937 |
| PTYGVG SEQ ID NO2142 | TYGVGA SEQ ID NO2143 | YGVGAG SEQ ID NO2144 |
| IPTYGV SEQ ID NO2145 | PGAIPG SEQ ID NO2146 | VGAGGF SEQ ID NO2015 |
| AGGFPG SEQ ID NO2147 | GIPGVA SEQ ID NO2148 | GISPEA SEQ ID NO2149 |
| VGVAPG SEQ ID NO1943 | VGLAPG SEQ ID NO2022 | VPGAPG SEQ ID NO2150 |
| PGVGLA SEQ ID NO2020 | LAPGVG SEQ ID NO2078 | APGVGV SEQ ID NO1973 |
| GVAPGV SEQ ID NO1945 | GGVAAA SEQ ID NO2151 | PGIGPG SEQ ID NO2152 |
| GLGVGG SEQ ID NO2153 | PGLGVG SEQ ID NO2154 | LGVGVG SEQ ID NO2027 |
| GLGVGA SEQ ID NO2155 | ALAAAK SEQ ID NO2156 | LGGLGA SEQ ID NO2157 |
| VGAGPA SEQ ID NO2061 | AGPAAA SEQ ID NO1958 | GPAAAA SEQ ID NO1959 |
| GGLGVG SEQ ID NO2158 | LGVGGL SEQ ID NO2064 | GVGGLG SEQ ID NO2159 |
| AGQFPL SEQ ID NO2160 | GGVAAR SEQ ID NO1966 | VAARPG SEQ ID NO2042 |
| GFGLSP SEQ ID NO2161 | PIFPGG SEQ ID NO2162 | IFPGGA SEQ ID NO2163 |
| AAKFGA SEQ ID NO2164 | AAKYGA SEQ ID NO2165 | AAKAAK SEQ ID NO2166 |
| AGLGAL SEQ ID NO2167 | GAGVPG SEQ ID NO2002 | GIPGGV SEQ ID NO2168 |
| LKPVPG SEQ ID NO1905 | PGVGVG SEQ ID NO2169 | IPPAAA SEQ ID NO2170 |
| ALVPGG SEQ ID NO2052 | RPGVGV SEQ ID NO1938 | ARPGFG SEQ ID NO2171 |
| VLPGAR SEQ ID NO2172 | GGFPGF SEQ ID NO2173 | GLSPIF SEQ ID NO2174 |
| PTGAGV SEQ ID NO2175 | VGGVPG SEQ ID NO1941 | GIPVVP SEQ ID NO1934 |
| AGAAGK SEQ ID NO2176 |
波形蛋白
数种候选蛋白酶可负责纤维化组织中波形蛋白的消化。通过一系列的体外切割纯的天然蛋白，我们已经确定了下表中列出的酶至少在如下的切割位点(在如下序列的每个末端或在标记‘.’的切割位点或当不显示‘.’时在序列的末端)切割波形蛋白：
表27：特异性蛋白酶产生的波形蛋白片段。
| 蛋白酶 | 切割位点间的序列 | 氨基酸残基编号* |
| MMP2，MMP8，胰蛋白酶 | RLRSSVPGVR.SEQ ID NO2177 | 69-78 |
| MMP2，MMP8，胰蛋白酶 | RLRSSVPGVL.SEQ ID NO2178 | 69-78 |
| MMP2，MMP8，胰蛋白酶 | .LLQDSVDFSL SEQ ID NO2179 | 79-89 |
| MMP2，MMP8，胰蛋白酶 | .FADLSEAANR SEQ ID NO2180 | 295-304 |
| MMP2 | .ISLPLPTFSS SEQ ID NO2181 | 410-420 |
*在人类波形蛋白序列中
因此，在本发明的方法中，所述肽片段优选包含蛋白酶在N-或C-末端位点或者在表24中的波形蛋白部分序列的任何一个中以符号·标记的位点处切割波形蛋白所形成的新表位。
所述免疫结合伴侣可以是与切割波形蛋白所形成的C-末端或N-末端新表位特异性反应的免疫结合伴侣。
因此，合适的免疫结合伴侣可与肽N末端的下述任意序列特异性地反应：
表28.蛋白酶产生的波形蛋白肽片段的N-末端序列。
| 波形蛋白 | ||
| LLQDSV SEQ ID NO2182 | FADLSE SEQ ID NO2183 | ISLPLP SEQ ID NO2184 |
或者与肽C末端的下述任意序列特异性地反应：
表29.蛋白酶产生的波形蛋白肽片段的C-末端序列。
| 波形蛋白 |
| SVPGVR SEQ ID NO2185 | SVPGVL SEQ ID NO2186 |
可通过下述步骤来鉴定定义新表位的其他切割位点，所述新表位可以以类似方式进行测定，所述步骤为：将胶原、弹性蛋白、CRP和蛋白聚糖或其他纤维化组织蛋白暴露于本文所述的任何酶，以及对由此产生的肽进行分离和测序。另外，测定可基于邻近所示切割位点产生的新表位，即与上文给出的N-末端表位相连的C-末端序列中，以及在与所述C-末端表位相连的N-末端序列中。
针对超过一个上文所述肽的测定可分开进行并将其结果联合，或者超过一个上文所述肽可一起检测。
根据本发明之测定的结果可与一个或多个所测的其他生物标志物相联合，以形成诊断或预后值的复合指数。
一般来说，所有以前已知的免疫测定形式可用于本发明，包括异源和同源形式的，夹心法测定、竞争性测定、酶联测定、放射-免疫测定等。因此，任选地，所述方法作为竞争性免疫测定进行，其中，所述免疫结合伴侣和竞争剂在所述样品存在下孵育，所述竞争剂与样品中的肽片段竞争结合免疫结合伴侣。
所述竞争剂可为(1)来源于I、III、IV、V或VI型胶原序列或者来自CRP或者来自任何下述蛋白聚糖肽的合成肽：多功能蛋白聚糖、光亮蛋白聚糖、基底膜蛋白聚糖、饰胶蛋白聚糖和双糖链蛋白聚糖，或者竞争剂来源于(2)被蛋白酶所切割从而露出所述新表位的纯化的天然I、III、IV、V或VI型胶原，或CRP，或下述任何蛋白聚糖：神经蛋白聚糖、短小蛋白聚糖、纤调蛋白聚糖、丝甘蛋白聚糖、黏结蛋白聚糖、β蛋白聚糖、多功能蛋白聚糖、光亮蛋白聚糖、基底膜蛋白聚糖、饰胶蛋白聚糖和双糖链蛋白聚糖。
一种合适的方法可以是使用单克隆抗体或抗体结合片段的的竞争性免疫测定，所述单克隆抗体或抗体结合片段结合I、III、IV、V、VI型胶原、CRP、波形蛋白或任何下述蛋白聚糖的新表位：神经蛋白聚糖、短小蛋白聚糖、纤调蛋白聚糖、丝甘蛋白聚糖、黏结蛋白聚糖、β蛋白聚糖、多功能蛋白聚糖、光亮蛋白聚糖、饰胶蛋白聚糖、基底膜蛋白聚糖和双糖链蛋白聚糖片段，或者来自纤维化组织其他蛋白质之肽片段上的新表位。包被到微量滴定板的固体表面上的适当选择的合成肽可与样品竞争结合单克隆抗体或结合片段。作为替代地，在固体表面上可使用带有单克隆抗体或结合片段所识别之新表位的纯化的天然I、III、IV、V、VI型胶原、CRP、神经蛋白聚糖、短小蛋白聚糖、纤调蛋白聚糖、丝甘蛋白聚糖、黏结蛋白聚糖、β蛋白聚糖、多功能蛋白聚糖、光亮蛋白聚糖、饰胶蛋白聚糖、基底膜蛋白聚糖和双糖链蛋白聚糖片段。而另一种替代方案是将单克隆抗体或结合片段固定到固体表面上，随后将样品与适当地连接有信号分子(例如辣根过氧化物酶或生物素)的合成肽共孵育。
所述样品可为血清、血液、血浆或其他样品，例如纤维化组织活检样品。
测定可以以夹心法测定的形式进行，其使用与所述新表位特异性反应的第一免疫结合伴侣以及与新表位所属的相关蛋白质反应的第二免疫结合伴侣。任选地，所述第二免疫结合伴侣针对同一蛋白的第二新表位。
在某些优选的方法中，该方法还包括将所测定的所述肽片段之结合水平与(a)可比的健康个体和/或(b)病理性纤维化疾病的特征值相比较，以及任选地将测得的肽的较高水平(通常表现为较高水平的结合)与所述疾病的更严重的程度相关联。
本发明的一个方面涉及开发识别上述新表位的单克隆抗体，尤其是针对I和IV型胶原的单克隆抗体。可以通过下述步骤来实现：用合成肽免疫小鼠，所述合成肽源自I、III、IV、V、VI型胶原、CRP、波形蛋白、神经蛋白聚糖、短小蛋白聚糖、纤调蛋白聚糖、丝甘蛋白聚糖、黏结蛋白聚糖、β蛋白聚糖、多功能蛋白聚糖、光亮蛋白聚糖、饰胶蛋白聚糖、基底膜蛋白聚糖和双糖链蛋白聚糖分子的氨基酸序列(包括上边列出的序列或在其中终止的序列)，将来自选定小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞融合，以及检测所述单克隆抗体对相关合成肽上新表位的结合。可通过要求与合成肽的反应性以及缺乏与免疫肽的C-延长形式(对于C-末端新表位)或免疫肽的N-末端延长形式(对于N-末端新表位)的反应性来确保对新表位的特异性。也可评价新表位的抗体，以确定缺乏对下述项的结合能力：天然I、III、IV、V、VI型胶原、CRP、波形蛋白、神经蛋白聚糖、短小蛋白聚糖、纤调蛋白聚糖、丝甘蛋白聚糖、黏结蛋白聚糖、β蛋白聚糖、多功能蛋白聚糖、光亮蛋白聚糖、饰胶蛋白聚糖、基底膜蛋白聚糖和双糖链蛋白聚糖。或者，可通过要求抗体的反应性负依赖于(negatively dependenton)与末端氨基酸之一共价相连的生物素或其他官能团的存在来确保对新表位的特异性。
本发明包括可与新表位发生特异性免疫反应的免疫结合伴侣，所述新表位是如下所述形成的：蛋白酶在上文所述I、III、IV、V、VI型胶原、CRP、波形蛋白、神经蛋白聚糖、短小蛋白聚糖、纤调蛋白聚糖、丝甘蛋白聚糖、黏结蛋白聚糖、β蛋白聚糖、多功能蛋白聚糖、光亮蛋白聚糖、饰胶蛋白聚糖、基底膜蛋白聚糖和双糖链蛋白聚糖的部分序列之任一个中的末端位点处切割I、III、IV、V、VI型胶原、CRP、波形蛋白、神经蛋白聚糖、短小蛋白聚糖、纤调蛋白聚糖、丝甘蛋白聚糖、黏结蛋白聚糖、β蛋白聚糖、多功能蛋白聚糖、光亮蛋白聚糖、饰胶蛋白聚糖、基底膜蛋白聚糖和双糖链蛋白聚糖，以及所述免疫结合伴侣可以是例如单克隆抗体或其结合片段。
本发明包括产生针对C-末端或N-末端新表位之单克隆抗体的细胞系，所述新表位是如下所述形成的：在上文所述I、III、IV、V、VI型胶原、CRP、神经蛋白聚糖、短小蛋白聚糖、纤调蛋白聚糖、丝甘蛋白聚糖、黏结蛋白聚糖、β蛋白聚糖、多功能蛋白聚糖、光亮蛋白聚糖、饰胶蛋白聚糖、基底膜蛋白聚糖和双糖链蛋白聚糖的部分序列之任一个中的序列末端位点处切割I、III、IV、V、VI型胶原、CRP、波形蛋白、神经蛋白聚糖、短小蛋白聚糖、纤调蛋白聚糖、丝甘蛋白聚糖、黏结蛋白聚糖、β蛋白聚糖、多功能蛋白聚糖、光亮蛋白聚糖、饰胶蛋白聚糖、基底膜蛋白聚糖和双糖链蛋白聚糖。
本发明还提供了包含C-末端或N-末端新表位的肽，所述新表位是通过在I、III、IV、V、VI型胶原、CRP、波形蛋白、神经蛋白聚糖、短小蛋白聚糖、纤调蛋白聚糖、丝甘蛋白聚糖、黏结蛋白聚糖、β蛋白聚糖、多功能蛋白聚糖、光亮蛋白聚糖、饰胶蛋白聚糖、基底膜蛋白聚糖和双糖链蛋白聚糖的部分序列之任一个中切割这些蛋白质形成的。所述肽可作为半抗原与产生对所述肽的免疫应答的载体相缀合，或者固定到固体表面或与免疫测定中使用的可检测标记相缀合。
本发明还包括编码包含C-末端或N-末端新表位的肽的分离的核酸分子，所述新表位是如下所述形成的：在上文所述I、III、IV、V、VI型胶原、CRP、波形蛋白、神经蛋白聚糖、短小蛋白聚糖、纤调蛋白聚糖、丝甘蛋白聚糖、黏结蛋白聚糖、β蛋白聚糖、多功能蛋白聚糖、光亮蛋白聚糖、饰胶蛋白聚糖、基底膜蛋白聚糖和双糖链蛋白聚糖的部分序列之任一个中切割I、III、IV、V、VI型胶原、CRP、波形蛋白、神经蛋白聚糖、短小蛋白聚糖、纤调蛋白聚糖、丝甘蛋白聚糖、黏结蛋白聚糖、β蛋白聚糖、多功能蛋白聚糖、光亮蛋白聚糖、饰胶蛋白聚糖、基底膜蛋白聚糖和双糖链蛋白聚糖。
本发明还包括包含核酸序列的载体，所述核酸序列包含表达信号和编码序列，所述编码序列编码是用于表达包含C-末端或N-末端新表位的肽，所述新表位是如下所述形成的：在上文所述I、III、IV、V、VI型胶原、CRP、波形蛋白、神经蛋白聚糖、短小蛋白聚糖、纤调蛋白聚糖、丝甘蛋白聚糖、黏结蛋白聚糖、β蛋白聚糖、多功能蛋白聚糖、光亮蛋白聚糖、饰胶蛋白聚糖、基底膜蛋白聚糖和双糖链蛋白聚糖的部分序列之任一个中切割I、III、IV、V、VI型胶原、CRP、波形蛋白、神经蛋白聚糖、短小蛋白聚糖、纤调蛋白聚糖、丝甘蛋白聚糖、黏结蛋白聚糖、β蛋白聚糖、多功能蛋白聚糖、光亮蛋白聚糖、饰胶蛋白聚糖、基底膜蛋白聚糖和双糖链蛋白聚糖，本发明还包括用此载体转染并表达所述肽的宿主细胞。
本发明的另一方面涉及可方便地用于实施上述方法的试剂盒。所述试剂盒可包含(1)用合成肽包被的微量滴定板；(2)与所述合成肽反应的本发明单克隆抗体或抗体结合片段；和(3)带标记的抗小鼠IgG免疫球蛋白。或者，此试剂盒可包含(1)用纯化的天然I、III、IV、V、VI型胶原、CRP、波形蛋白、多功能蛋白聚糖、光亮蛋白聚糖、饰胶蛋白聚糖、基底膜蛋白聚糖和双糖链蛋白聚糖片段包被的微量滴定板；(2)识别I、III、IV、V、VI型胶原、CRP、波形蛋白、神经蛋白聚糖、短小蛋白聚糖、纤调蛋白聚糖、丝甘蛋白聚糖、黏结蛋白聚糖、β蛋白聚糖、多功能蛋白聚糖、光亮蛋白聚糖、饰胶蛋白聚糖、基底膜蛋白聚糖和双糖链蛋白聚糖片段上的新表位，并且与所述纯化的I、III、IV、V、VI型胶原、CRP、波形蛋白、神经蛋白聚糖、短小蛋白聚糖、纤调蛋白聚糖、丝甘蛋白聚糖、黏结蛋白聚糖、β蛋白聚糖、多功能蛋白聚糖、光亮蛋白聚糖、饰胶蛋白聚糖、基底膜蛋白聚糖和双糖链蛋白聚糖片段反应的单克隆抗体；和(3)带标记的抗小鼠IgG免疫球蛋白。或者，所述试剂盒可包含(1)用链霉亲和素包被的微量滴定板；(2)与生物素相连的合成肽；(3)识别I、III、IV、V、VI型胶原、CRP、波形蛋白、神经蛋白聚糖、短小蛋白聚糖、纤调蛋白聚糖、丝甘蛋白聚糖、黏结蛋白聚糖、β蛋白聚糖、多功能蛋白聚糖、光亮蛋白聚糖、饰胶蛋白聚糖、基底膜蛋白聚糖和双糖链蛋白聚糖片段上的新表位，并且与所述合成肽反应的单克隆抗体；和(4)带标记的抗小鼠IgG免疫球蛋白。另一种可选方案可以是包含下列的试剂盒：(1)用链霉亲和素包被的微量滴定板；(2)与生物素相连的合成肽；(3)识别I、III、IV、V、VI型胶原、CRP、波形蛋白、神经蛋白聚糖、短小蛋白聚糖、纤调蛋白聚糖、丝甘蛋白聚糖、黏结蛋白聚糖、β蛋白聚糖、多功能蛋白聚糖、光亮蛋白聚糖、饰胶蛋白聚糖、基底膜蛋白聚糖和双糖链蛋白聚糖片段上新表位(并与所述合成肽反应)并且缀合有辣根过氧化物酶的单克隆抗体。
因此，本发明包括免疫测定试剂盒，其包含本文所述免疫结合伴侣，尤其是涉及I和IV型胶原的，和结合所述免疫结合伴侣的竞争剂，以及任选地包含一种或多种清洗试剂、缓冲液、终止试剂、酶标记、酶标记底物、校准用标准品、抗小鼠抗体和说明书。
本文中描述的测定可用于诊断患者中的纤维化。此外，所述测试可用于评价疾病的进展，以及监测对治疗的响应。本发明的免疫结合伴侣还可用于免疫染色，以显示I、III、IV、V、VI型胶原、CRP、波形蛋白、神经蛋白聚糖、短小蛋白聚糖、纤调蛋白聚糖、丝甘蛋白聚糖、黏结蛋白聚糖、β蛋白聚糖、多功能蛋白聚糖、光亮蛋白聚糖、饰胶蛋白聚糖、基底膜蛋白聚糖和双糖链蛋白聚糖切割产物的存在或位置。
下面参照如下实施例和附图进一步描述和说明本发明，其中：
图1显示了不同生物样品的CO3 ELISA结果图：合并的人血清样品(血清)；人羊水(amniotic fluid，AF)；人成纤维细胞培养基(Fibr.Cltr.)；
图2a显示假手术(s)以及在基线时(b)与在终止时(t)的胆管结扎大鼠中的CO3血清水平；
图2b显示大鼠血清中CO3相应的Δ-值：终止水平-基线水平；
图3显示不同人血清样品中CO3的水平。正常血清：来自健康个体。COPD(Chronic Obstructed Pulmonary Disease)：慢性阻塞性肺病(导致肺纤维化)。
硬皮病(导致皮肤和肺纤维化)。HCV(Hepatitis virus C)：丙型肝炎病毒(导致肝纤维化)；
图4显示实施例5中测定的肝重量和肝评分。
图5显示实施例5中根据本发明测量的III型胶原的MMP-9切割片段的水平；
图6显示实施例5中，在BDL或假手术大鼠中测定的III型胶原的基因表达水平；
图7显示通过蛋白印迹测定的与实施例5中所用抗体有反应的III型胶原之MMP-9切割片段表达水平的变化；
图8显示实施例5中获得的肝切片的组织学染色结果；
图9显示根据本发明的III型胶原片段的测量值与实施例5中测定的其他肝生物标志物的相关性；
图10显示实施例6中针对人血清样品获得的结果；和
图11显示在测试识别来自CRP的N-末端新表位的单克隆抗体的反应性中获得的结果。
图12显示实施例8中在大鼠肝中测量的胶原积聚。
图13显示实施例8中获得的免疫测定结果。
图14显示图13中的免疫测定结果与肝胶原含量的相关性。
图15显示根据本发明的免疫测定结果与实施例8中透明质酸和天狼星红(Sirius red)染色的测量值的比较。
图16在第一幅图中显示来自根据本发明的免疫测定的结果与天狼星红染色的相关性，和在第二幅图中显示透明质酸水平与天狼星红染色之间的相关性。
图17显示本发明的免疫测定的结果与透明质酸水平之间缺乏相关性。
图18显示实施例9中描述的皮肤切片和皮肤厚度的测量值。
图19显示实施例9中根据本发明的免疫测定的结果。
图20在A图中显示实施例9中获得的蛋白质印迹(Western Blot)图像，和在B图中显示根据本发明对应的免疫测定结果。
图21显示免疫测定结果与皮肤厚度测量值之间的相关性。
图22显示实施例9中描述的尿免疫测定结果与蛋白质印迹测量值之间的相关性。
实施例1：用MMP-9降解的III型胶原
方法
切割：将从人胎盘中分离的III型胶原溶于10mM醋酸(1mg/ml)中。随后让该蛋白溶液通过滤器(Microcon Ultracel YM-10)以除去片段杂质。在37℃下，用4-氨基苯汞乙酸盐(APMA，Sigma)预活化MMP-93小时。活化后，以100∶1混合III型胶原和MMP-9，并在37℃下振摇孵育3天。
用液相色谱/质谱(LC/MS，liquid chromatography/massspectrometry)分析该溶液，通过进行Mascot检索来鉴定片段。通过同源性检索选择肽序列，确保与其他的或相关的蛋白没有交叉反应性，并且没有物种间的交叉反应性。
抗体设计：合成肽序列并将其与卵清蛋白(OVA，ovalbumin)相缀合。每2-3周免疫小鼠，共免疫5次。用筛选肽(选择(selection)和去选择(de-selection))检查抗体效价。当达到足够的抗体效价时，选择阳性小鼠用于融合，实施安乐死，分离脾脏，取出B-细胞用于与骨髓瘤细胞融合。通过培养并再接种单细胞克隆中存活的嵌合细胞来选择抗体生成细胞。通过选择和去选择肽选择克隆，然后进行天然反应性检测(图1)，这是由于新表位是由合成的小肽序列产生的，其可能不反映天然蛋白的性质。选择IgG亚型克隆用于抗体的生产。通过蛋白-G柱完成抗体的纯化。
测定的开发：在竞争性ELISA中，通过棋盘式分析，通过对包被抗体和筛选肽的稀释来确定最优抗体浓度。表24中显示以MMP-9降解胶原(CO3)检测的不同测定。
| 检出限 | 0.5ng/ml |
| 平均测定间变异 | 3.71％ |
| 平均测定内变异 | 5.48％ |
表24.CO3测定的检出限、平均测定间和测定内变异。
实施例2：生物相关样品的CO3：
与假手术大鼠相比，胆管结扎大鼠的CO3水平。
方法：在Nordic Bioscience的动物研究设施中安置40只雌性Sprague-Dawley大鼠(6月龄)。该实验经丹麦司法部实验动物委员会批准，并按照欧洲标准的临床试验规范(2008/561-1450)进行。在18-22℃下，将所述大鼠安置在标准的III-H笼中，有寝具和巢材(Altromin 1324；Altromin，Lage，Germany)并自由摄取纯水(Milli-Q system；Millipore，Glostrup，Denmark)。将大鼠安置于12小时明/暗周期的环境中。
用常规BDL诱导肝纤维化。简而言之：麻醉大鼠，找到胆管，在胆管附近进行两处结扎，然后在两处结扎之间切开，关腹。在假手术大鼠中，不结扎胆管就关腹。
将大鼠分成2组：第1组在2周后被处死(10只BDL和10只假手术大鼠)，而第2组(9只BDL和10只假手术大鼠)在4周后被处死。研究阶段完成之后(2或4周)，至少14小时禁食后，用CO2窒息和放血处死所有存活的动物。
在轻度CO2/O2麻醉下，在基线时和在终止时从至少禁食14小时大鼠的后眶窦取血样。收集所述血液并在室温下放置30分钟使其凝集，然后1500g离心10分钟。将所有无凝块的液体转移到洁净的管中并在-80℃下储存。在5倍稀释的来自大鼠的血清样品中测量CO3。假定正态分布，以Mann-Whitneys双尾非参检验(α＝0.05)比较假手术组和BDL的水平间的统计学显著性。
与假手术的动物相比，CO3水平在BDL组中显著增加。图2a和b中显示该结果。
实施例3：
不同纤维化疾病中的CO3(人血清)
在患有三种不同纤维化疾病的人血清中测量CO3的水平：慢性阻塞性肺病(COPD，Chronic obstructed pulmonary disease)、硬皮病和丙型肝炎(HCV，Hepatitis virus C)。所述血清样品取自Sera LaboratoriesInternational Ltd(SLI Ltd)，UK。在三个不同的纤维化疾病中，CO3水平升高(图3)。
实施例4：
抗体开发-标志物CO3-610C的检测
用活化的MMP-9(Merck KGaA，Darmstadt，Germany)体外降解III型胶原(Abcam，Cambridge，UK)2天。用LS-MS/MS对降解片段进行测序，并通过MASCOT检索进行鉴定。选择特异性的肽序列610KNGETGPQ用于抗体生产。该序列的N-末端是人III型胶原的610位残基。在用大约200μL乳化的抗原和50μg CO3-610C(KNGETGPQGPGGC-OVA)皮下免疫4-6周龄的Balb/C小鼠之前，将合成肽缀合到卵清蛋白上。在弗氏不完全佐剂(Freund’s incompleteadjuvant)中，以两周的间隔进行连续免疫，直到达到稳定的血清效价水平。从第二次免疫开始，对小鼠放血。每次放血时，测量血清效价，并选择有最高抗血清效价的小鼠用于融合。第四次免疫之后，让该小鼠休息一个月，并随后在分离脾细胞用于细胞融合之前的三天，用100μL 0.9％氯化钠溶液中的50μg CO3-610C进行静脉加强。
使用如下肽选择产生单克隆抗体的克隆，a)免疫原性肽：KNGETGPQGP-GGC-卵清蛋白(OVA)(807678)，b)筛选肽KNGETGPQGP-PG-K-生物素(807971)，和c)代表II型胶原α1链的去选择肽KDGETGAAGPPGK-生物素(118318)、代表I型胶原α1链降解产物的KDGEAGAQGPPGK-生物素，购自Chinese Peptide Company，北京，中国。ELISA包被板获自NUNC(Thermofisher，Copenhagen，Denmark)。肽缀合试剂和缓冲液由Pierce(Thermofisher，Copenhagen，Denmark)生产。
用于溶解包被肽的缓冲液由如下组分构成：40mM Na2HPO4，12H2O、7mM KH2PO4、137mM NaCl、2.7mM KCl、25mM EDTA、0.1％吐温20、1％BSA、10％山梨醇，pH 7。对于血清测定，使用含有如下化学品的缓冲液：8mM Na2HPO4，12H2O、1.5mM KH2PO4、13.7mMNaCl、2.7mM KCl、0.1％吐温20、1％BSA、0.003％酚红，pH 7,4。用于尿测定时，使用不同的缓冲液，包含400mM TRIZMA、0.05％吐温20、0.1％BSA、0.36％ Bronidox L5，pH 8,0。对于血清和尿测定，我们使用由如下成分构成的清洗缓冲液：25mM TRIZMA、50mM NaCl、0.036％Bronidox L5、0.1％Tween 20，而反应终止缓冲液是由0.1％H2SO4构成的。用于测定开发的ELISA板来自Roche(Hvidovre，Denmark)货号：11940279，是链霉亲和素包被的。用来自MolecularDevices，SpectraMax M，(CA.USA)的ELISA检测仪分析所有ELISA板。
在预实验中，我们通过进行多个棋盘式分析优化了试剂、其浓度和孵育时间。在20℃，300rpm的持续振摇下，将用链霉亲和素包被的96孔ELISA板进一步地用溶于PBS-TBE缓冲液中的5ng/ml合成肽KNGETGPQGP-生物素化包被30分钟。用清洗缓冲液清洗后，加入20μl样品，继之加入100μl缀合了过氧化物酶的抗人mAb-NB51-32 CO3-610C溶液(在孵育缓冲液中为23pg/ml)。在20℃下孵育该板1小时，期间以300rpm振摇。继之清洗，最后提供100μl四甲基联苯胺(TMB，tetramethylbenzinidine)(Kem-En-Tec货号438OH)，并在黑暗中和在300rpm振摇下孵育该板15分钟。为了终止该反应，加入100μl终止溶液，并用450nm波长在ELISA检测仪分析该板，以650nm为参比波长。
通过连续稀释下列物质来绘制标准曲线，对于血清测定来说，稀释生物素化-NB51-32 CO3-610C，对于尿测定来说，稀释生物素化-NB51-134CO3-610C。标准浓度为0、0.33、1、3、9、27、81和162ng/ml。
我们将由此获得的使用免疫测定法检测的片段定名为CO3-610C，因为其序列KNGETGPQGP的N-末端氨基酸K是人III型胶原序列的610位氨基酸。
实施例5
在大鼠中诱导的肝纤维化中比较CO3-610C和其他生物标志物
动物
在Nordic Bioscience，Copenhagen，Denmark的动物研究设施中安置40只6月龄的雌性Sprague-Dawley大鼠。该实验经丹麦司法部实验动物委员会批准，并按照欧洲标准的临床试验规范(2008/561-1450)进行。18-22℃下，将所述大鼠安置在标准的III-H笼中，有寝具和巢材(Altromin1324；Altromin，Lage，Germany)并自由摄取水。将大鼠安置于12小时明/暗周期的环境中。
研究设计
在20只大鼠中，用常规BDL诱导肝纤维化。手术过程在无菌条件下进行。麻醉大鼠，定位胆管并在两个位置结扎，然后在两处结扎之间切开，并关腹。对其他20只大鼠进行假手术，其中不结扎胆管而关腹。随后将大鼠分成两组：两周后处死第1组(10只BDL大鼠和10只假手术大鼠)，而在4周后处死第2组(10只BDL大鼠和10只假手术大鼠)。研究阶段完成之后(2或4周)，至少14小时禁食后，用CO2窒息和放血处死所有存活的动物。
取血样
在轻度CO2/O2麻醉下，在基线时和在终止时从至少禁食14小时大鼠的后眶窦取血样。收集所述血液并在室温下放置30分钟使其凝集，然后以1500g离心10分钟。将所有无凝块的液体转移到新管中，再次1500g离心10分钟。然后将血清转移到干净的管中并在-80℃下储存。
组织处理
杀死大鼠后，小心地分离其肝脏，称重，在4％甲醛中固定最少24小时，切成合适的切片并包埋在石蜡中。切成5μm厚的切片，在玻璃载玻片上封片并用天狼星红染色。通过评价结构、炎症的存在、胆管的增殖和纤维化，从而对肝切片进行组织学评价。使用如下评分系统对实质中的重新胆管形成(de novo bile duct formation)进行半定量评价：正常＝0、轻度改变(1/3或更少的叶受到影响)＝1，中度改变(1/3至2/3的叶受到影响)＝2，和严重改变(2/3或更多的叶受到影响)＝3。使用40倍和100倍放大的Olympus BX60显微镜和Olympus 5050-变焦数码照相机(Olympus，Tokyo，Japan)拍摄数码照片。
测定总胶原和血清CTX-II
使用商品化的QuickZyme Collagen Assay(QuickZyme Bioscience，Leiden，The Netherlands)测定总胶原浓度。使用商业化的大鼠CTX-II试剂盒(IDS Nordic，Herlev，Denmark)测定CTX-II的浓度。所有样品以一式两份测定。
III型胶原的mRNA定量
使用荧光报告探针，以定量实时聚合酶链式反应(RT-PCR)在肝组织样品中测定III型胶原(Col3a1)的转录本数目。从使用Col3a1质粒cDNA Image Clone 7097081(Geneservice，Cambridge，UK)作为稀释标准品而获得的标准曲线中外推出样品中Col3a1的拷贝数。用看家基因次黄嘌呤磷酸核糖转移酶(Hprt1)的量来对Col3a1的量进行归一化。分别使用NCBI参考序列NM_032085.1和NM_012583.2为模板来设计Col3a1和Hprt1mRNA的引物和探针(TIB Molbiol GmbH，Berlin，Gemany)。按照制造商的说明使用Absolutely RNA Miniprep试剂盒(Stratagene，LaJolla，CA，USA)从冷冻的肝样品中提取总RNA，并使用2100 Bioanalyzer仪器(Agilent Technologies，Santa Clara，CA，USA)在RNA纳米芯片上对其品质进行评估。分离RNA之后，立即用Transcriptor First StrandcDNA Synthesis试剂盒(Roche，Basel，Switzerland)，使用1μg RNA为模板合成互补DNA(cDNA)。对于测试的每个样品，包括cDNA合成的阴性对照，其在反应混合物中略去逆转录酶。根据制造商的说明，使用Lightcycler Faststart DNA Master Plus Hybprobe试剂盒(Roche)，以20μL的形式分别进行Col3a1和Hprt1的PCR反应。用Lightcycler 2.0设备(Roche)收集实时荧光数据。
提取
在钢研钵中以过量的液氮研磨组织。随后，将样品转移到1.5mleppendorf管中，并在4℃下，在含有蛋白酶抑制剂混合物(proteaseinhibitor cocktail)(Roche)的0.5M醋酸溶液中过夜振摇。随后，用超声破碎样品，在60％幅度下使用5个脉冲(U50对照，IKA Labortechnik)，并在4℃下再放置2小时，之后，将其在13,000rpm下离心5分钟。小心取出上清，转入新的eppendorf管，并在-80℃下储存。
密度测定法
使用来自Silk Scientific(给出城市、国家)的UN-SCAN-IT 6.1版本进行密度的测量。
组织学图像分析
使用Visiopharm软件3.2.8.0版本(给出城市、国家)对用天狼星红染色的组织切片进行分析。使用Pixelink PL-A623C显微镜数码相机获取图像。
SDS PAGE和蛋白质印迹(Western blot)
将20μg的组织提取物与含有还原剂(NuPAGE，NP0004来自Invitrogen)的加样缓冲液(Invitrogen LDS 4x，NP0007)混合。随后，将样品加至4-12％Bis-Tris梯度凝胶(NP0332BOX，来自Invitrogen)，并在200V下运行52分钟。随后，使用i-Blot转移系统(Invitrogen)将蛋白质转移到硝酸纤维素膜上，4度下，用TTBS中5％的牛奶封闭(？需要解释？)过夜。使用β肌动蛋白抗体(AbCam ab8229，给出公司、城市、国家？)作为加样对照。
统计学分析
使用GraphPad Prism(GraphPad Software，Inc.，San Diego，CA，USA)计算平均值和平均值的标准误(SEM，standard error of the mean)，假定正态分布，用Student双尾成对t检验(α＝0.05)，或用Mann-Whitney双尾非参检验(α＝0.05)来比较统计学的显著性。用线性回归确定相关系数(R2)和相应的p值。
结果
肝脏外观：处死时，对照动物的肝脏表现出正常的大体形态，而BDL动物的肝脏体积增大。与假手术对照组相比，BDL大鼠的肝重显著增加(处死时的平均重量：手术后2周，假手术组8.1g；BDL组14.1g；手术后4周，假手术组9.0g；BDL组19.4g)(图4A)。用0-3级对肝切片进行半定量评分，与2周相比，4周时肝显示出显著更多的结构改变(图4B)。图4，A图显示胆管结扎(BDL，bile duct ligation)或假手术大鼠的肝重。数据以平均值+SEM表示。***，P＜0.0001。B图显示各组肝结构改变的评分。数据以平均值+SEM表示。**，P＝0.0094。C图显示天狼星红显微照片，显示假手术大鼠和手术后2和4周的BDL大鼠中的肝结构。与假手术大鼠相比，在BDL大鼠中，肝门束周围的肝结构明显被破坏。胶原以红色突出显示。原始放大倍数是×40。
在组织学检查中，假手术动物的肝未显示出纤维化的症状，显微镜下是正常的(图4C)。在BDL肝中，观察到了显著的导管增殖。在手术后2周组，所述增殖位于肝门束附近，而在4周组，所述增殖已蔓延(图4C)。在胆管结构附近发现胶原沉积。炎症极小并局限于肝门束。未见胆汁郁积的迹象，无论是细胞内胆汁郁积、胆栓、胆汁性梗死或肝细胞玫瑰花结形成。
CO3-610C水平的改变：图5在A图中显示胆管结扎(BDL)或假手术大鼠中MMP-9介导的CO3降解血清水平。数据以平均值+平均值的标准误表示。手术后2周组***P＜0.0001和手术后4周组**P＝0.0014。B图中显示CO3-610C的Δ值(终止-基线，成对的)手术后2周P＜0.0001和手术后4周P＝0.0016。C图中显示BDL或假手术大鼠中CTX-II的水平。数据以平均值+平均值的标准误表示。
在BDL组中，与假手术组相比，CO3-610C水平显著增加(平均值：手术后2周，假手术组39.7ng/ml，BDL组100.3ng/ml；组间平均增加153％；手术后4周，假手术组39.7，BDL组92.6ng/ml，组间平均增加133％)(图5A和B)。假手术组中没有改变。在假手术或BDL组中，表征II型胶原降解的CTX-II水平没有改变(图5C)。
III型胶原基因表达：图6显示BDL或假手术大鼠中III型胶原的基因表达。数据以平均值+平均值的标准误表示；手术后2周P＜0.0001和手术后4周P＝0.0006。
与假手术大鼠相比，在两个BDL组中，III型胶原a1链mRNA显著增加。
蛋白质印迹(Western Blot)和密度测定：图7显示BDL和假手术组大鼠的肝中CO3-610C表达的变化，以如下方式进行评价：A)手术后2和4周的蛋白质印迹法，和B)以密度测定法对蛋白质印迹条带进行定量。
蛋白质印迹分析显示假手术大鼠中非常低水平的CO3-610C(图7A)。手术后2周时或之后，CO3-610C水平显著增加(图7A)。以密度检测分析法对结果进行定量(图7B)。
组织学图像分析：图8A在上面一行显示来自BDL或假手术大鼠的以天狼星红染色的组织学切片。下面一行显示用于在肝中定量总胶原含量(红色)的掩蔽的组织学切片。B图显示以Visiopharm软件定量的总胶原—手术后两周P＝0.0081；手术后4周P＝0.0047。
以天狼星红染色和使用Visiopharm软件增强的组织学切片显示在BDL-手术大鼠中随时间增加的胶原含量。(图8A)。使用相同的软件对掩蔽中的代表胶原的红色进行定量(图8B)，并确证了与假手术大鼠相比，在BDL手术的大鼠中，总胶原含量显著增加(手术后2周P＝0.0081；手术后4周P＝0.0047)。
相关性：图9A显示，发现Col3a1与CO3-610C的相关性，R2＝0.6993，P＜0.0001。B图中，发现CO3-610C与胶原％的相关性，R2＝0.2278和P＝0.0050。C图中，发现Col3a1与胶原％的相关性，R2＝0.5409，P＜0.0001。
发现如下的相关性：Col3a1mRNA与CO3-610C的相关性，R2＝0.6993和P＜0.0001(图9A)，和CO3-610C与以visiopharm定量的胶原％的相关性，R2＝0.2278和P＝0.0050(图9B)，以及Col3a1mRNA与以visiopharm定量的胶原％的相关性，R2＝0.5409和P＜0.0001(图9C)。
ECM重塑是组织发育、维持和病变中的综合过程。在细胞迁移、清除损坏的组织和隔离新蛋白的过程中，蛋白水解活性非常重要，以使组织的定位和品质正确和最佳(108:109)。特异性的基质降解产物--新表位--对于鉴定新的肝纤维化基质周转的生物化学标志物和理解纤维化的发病机理来说十分重要。当前没有可用的允许在纤维化发病过程中评价ECM重塑的测量技术和生物化学标志物。
在本实施例中，为了在体内条件下研究CO3-610C标志物，选择6月龄的BDL大鼠，以前已经证明，与较年轻的大鼠相比，其具有较低的胶原重塑。所述大鼠骨骼成熟，生长板近乎休眠，因此，对整体胶原周转的贡献程度较低。其影响生物标志物的灵敏度和特异性。如通过定量组织学分析和伴有重量增加的扩张所评价地，这些大鼠清楚地表现出肝纤维化，因此，所述模型是寻找ECM重塑迹象的适宜模型，尤其是在血清中寻找III型胶原的迹象。
本数据清楚地证明，来自MMP-9介导的III型胶原降解的新表位CO3-610C是用于肝纤维化的诊断性生物化学标志物，从假手术至BDL手术的大鼠，血清中平均增加高达153％。
为进一步研究CO3-610C标志物增加的生物学原理，我们从健康的和患病的肝中提取蛋白质。通过蛋白质印迹，我们鉴定到显著的条带，表明其在疾病的而非健康的肝中是丰富的蛋白片段。这为这个新标志物的病理精确性提供了证据。
为了进一步地研究肝病理周转的表现，我们测量了III型胶原的mRNA。我们发现，与进行假手术的大鼠相比，在BDL大鼠中mRNA增加，这与以前的调查结果相关。这些数据强烈提示，肝纤维化不仅是ECM蛋白的积聚，也是加速的周转状况，其中组织形成和组织降解都高度上调。组织形成超过组织降解，导致疤痕组织随时间积聚。以前的研究已使用其他基质周转蛋白来评价肝纤维化，其中之一是III型胶原形成的标志物N-末端III型前胶原。该标志物代表III型胶原的形成，并在以前的研究中已被证明在肝纤维化中增加。
为了进一步理解所述生物化学标志物CO3-610C的动力学，我们进行了一系列的相关性分析。最重要的是，CO3-610C与以定量组织学在肝中测量的纤维化程度之间具有显著的相关性。肝纤维化的水平与III型胶原的mRNA的表达水平相关。最后，在肝中，CO3-610C与III型胶原的mRNA相关。综上所述，肝中的病理过程与系统的生活标志物CO3-610C的水平之间具有显著的相关性。此外，组织提取物提供的证据表明，循环水平是由局部产生的。
实施例6：人血清样品的ELISA
人血清样品获自患有慢性阻塞性肺病(COPD)(n＝5)、硬皮病(n＝5)、慢性丙型肝炎病毒感染(n＝5)的患者和健康对照(n＝5)。以CO3-610ELISA(见上述实施例4)在血清样品中进行检测，以确定CO3-610片段的浓度。在图10中显示结果。健康受试者的血清样品中CO3-610片段的浓度低于30ng/ml，而在患病的受试者中发现循环中的水平升高，提示在受影响的纤维化组织中大量的组织重塑。
实施例7：克隆nb94的反应性
用与卵清蛋白相缀合的合成肽KAFVFP(SEQ ID NO1167)(KAFVFPKESD-GGC-OVA(SEQ ID NO1049))免疫小鼠，使用脾细胞进行融合，并检测单克隆抗体与生物素化KAFVFP(SEQ ID NO 1167)的反应性，即KAFVFPKESD-生物素(SEQ ID NO1049)，其固定于用链霉亲和素预包被的微量滴定板的孔中。选择与生物素化KAFVFPKESD(SEQ ID NO1049)结合的抗体，用以进一步的鉴定，所述结合可被KAFVFPKESD(SEQ ID NO1049)共孵育所抑制，而不被延长的肽RKAFVFPKESD(EQ ID NO1166)的共孵育所抑制。优选的单克隆抗体被定名为NB94-37-1A7。
使用竞争性ELISA，基本上如上所述，其使用固定在链霉亲和素包被的微量滴定板孔中的生物素化KAFVFPKESD(SEQ ID NO1049)(以0.15ng/ml使用)，使用样品和单克隆抗体NB94-37-1A7进行孵育的步骤(20℃，90分钟)之后，然后是清洗步骤，随后加入过氧化物酶缀合的抗小鼠免疫球蛋白。在2倍稀释液中使用如下物质用于竞争；(1)合成的KAFVFP(SEQ ID NO1167)肽；(2)与CRP无关的无意义肽(KNEGTG)；(3)合并的人血清样品；(4)CRP，其用MMP3蛋白水解切割7天，随后通过加入EDTA终止以阻断蛋白酶活性，并在检测前于-80℃下储存；(5)与(4)相同，但是用MMP8替代MMP3；(6)与(4)相同，但是使用组织蛋白酶K(2天)替代MMP3(并以E64为阻断组织蛋白酶K活性的抑制剂)。
该数据证明，单克隆抗体NB94-37-1A7强烈结合合成肽KAFVFPKESD(SEQ ID NO1049)，并用MMP3和MMP8切割CPR。用组织蛋白酶K切割CRP释放较少的单克隆抗体NB94-37-1A7所识别的分析物。最后，该数据显示所述抗体在人血清中结合肽片段，证明了该序列在循环肽片段中的存在。
实施例8：生物相关样品中的CO3：四氯化碳(CCl
4
)诱导的大鼠肝硬化
中CO3的水平。
动物和肝硬化的诱导：
本研究包括52只患有纤维化或肝硬化的雄性Wistar大鼠和35只对照雄性Wistar大鼠。为使其发生纤维化或肝硬化，在使用四氯化碳(CCl4)和苯巴比妥的诱导方案中包括三月龄动物。每周两次吸入施用CCl4，并在饮水中添加苯巴比妥(0.3g/l)。整个研究过程中，允许动物自由摄取水和摄食。
纤维化的定量：
用饱和苦味酸(Sigma-Aldrich)中的天狼星红F3B(Sigma-Aldrich，St.Louis，MO)对肝切片(4μm)进行染色。通过分析每只动物的天狼星红染色的肝切片的36个视野来评价相对纤维化区域(以总肝面积的百分比表示)。在10倍放大[E600显微镜(Nikon)和RT-Slider SPOT数码相机(Diagnostic Instruments，Inc.，Sterling Heights，MI)]下获取每个视野。用计算机化的Bioquant Life Science形态测量系统分析结果。为评价相对纤维化面积，用所测得的胶原面积除以净视野面积，然后乘以100。从总视野面积中减去血管管腔面积得到最终的净纤维化面积的计算结果。从被分析的每只动物中测量出以百分比表示的纤维化的量，并以平均值表示。
根据其纤维化/肝硬化阶段的分组
按照天狼星红阳性的肝面积(A组：＜5％，B组：5至10％，C组：10至15％和D组：＞15％)所确定的百分比，动物被分为4个不同的纤维化和肝硬化阶段(A组：中度纤维化，B组：高度纤维化，C组：中度肝硬化，和D组：高度肝硬化)。为此，在CCl4处理的过程中考虑四个不同的时间点来研究对照和纤维化/肝硬化大鼠：肝硬化诱导计划开始后8、12、16和20周。
透明质酸的测量：
使用夹心法ELISA试剂盒(R&D Systems Inc.，Minneapolis，MN，USA)测量血清透明质酸。
统计学
在适当的时候，用成对Student t检验对结果进行统计学分析。以平均值±S.E.M.表示数据，当p水平为0.05或以下时，其被认为是显著的。
研究设计：
本研究方案中包括的动物被随机分配到如下各组中的一个：A/8周的CCl4处理，B/12周的CCl4处理，C/16周的CCl4处理和D/20周的CCl4处理。在相同的时间点平行研究四个对照组。每组中包括13只纤维化大鼠和7只对照大鼠。该研究结束后，在继续进行24小时的尿收集之前，将大鼠置于标准的代谢笼(Tecniplast Deutschland，Hohenpeissenberg，Germany)中适应3天。重量法测定尿量。在适应期中，允许大鼠自由摄取自来水和食物。随后，将24小时的尿样在2,500rpm下离心5分钟，并分装进入10个聚丙烯管中(每管400μL)。-80℃下存储尿样以用于后续分析。
在预定的尸检中，称重大鼠，用戊巴比妥(50mg/kl)麻醉并断头。收集血液并在室温下放置20分钟使其凝固，并随后以2500rpm离心10分钟。在聚丙烯分装管中收集血清(每管400μL)并通过干冰转移到-80℃冰箱。不考虑在CCl4处理开始时收集的基线血样，以避免可能增加感染风险和/或在实验模型中引入改动的额外干扰，所述实验模型可包括诱导的病理生理性过程的发展。对于组织学和天狼星红染色，将肝左叶的一半置于10％中性缓冲福尔马林中16小时，包埋入石蜡并切成4μm厚的薄片。肝纤维化定量之后，保存尚未使用的石蜡块以用于生物标记物的定量。左肝叶的另一半在液氮中闪冻(flash-frozen)，并储存以用于蛋白质印迹、RT-PCR或免疫组织化学分析。按照材料和方法部分对肝纤维化面积、血清和尿渗透压、Na+和K+、白蛋白、肌酐、丙氨酸氨基转移酶和乳糖脱氢酶进行测量。
结果
模型的组织学验证：
用肝切片的天狼星红染色在所有研究的动物中对肝胶原进行定量。在36个连续的显微镜视野中观察，每只动物的最终数据采用红染的平均值(图12)。
图12显示来自两组36幅图片的代表性图片，其用于在以四氯化碳分别处理8和12周的大鼠#1(左)和大鼠#43(右)定量肝中胶原积累。
与对照大鼠相比，在纤维化和肝硬化的大鼠中，血清CO3标志物显示出统计学上显著的增加。根据完全自动化的用于定量纤维化的肝的天狼星红染色操作，对动物进行分类(图13和14)。
图13显示在医院门诊(Barcelona)中进行的吸入CCl4的大鼠和对照大鼠中血清CO3的水平。每个点代表一只动物。根据对用于定量纤维化的肝天狼星红染色进行的计算机化的图像分析方法对大鼠进行分类。
当在每个个体动物中对血清CO3和肝的天狼星红染色的定量值进行研究时，我们发现这两个变量之间存在统计学上显著的相关性(R2＝0.4087；n＝21)(图14)。
我们已经将CO3-610C的水平与肝纤维化的透明质酸(HA，hyaluronic acid)血清学基准进行了比较。用商品化的ELISA试剂盒定量HA水平，结果显示，在肝硬化大鼠与纤维化动物中ECM组分显著升高(图15和16)。
CO3与天狼星红的相关性超过与HA的相关性。可通过CO3的血清学测量来解释肝纤维化组织学定量中超过70％的变异。剩余30％归因于未知变量或固有的变异性。相对地，通过测量透明质酸仅可解释肝纤维化的25％(图15)。
如根据以前的结果所预期的，在CO3和透明质酸之间可能不存在相关性，提示它们在肝纤维化发生的过程中是两个独立的病理生理过程(图17)。
实施例9：博来霉素在小鼠中诱导的皮肤纤维化。
通过在皮肤上应用PBS或博来霉素来处理小鼠。在小鼠中，尿中MMP-9介导的III型胶原(CO3)降解片段CO3-610水平的增加与皮肤纤维化的进展相关。
图18显示PBS处理的小鼠在处理的第8周时的皮肤切片(A图)和博来霉素处理的小鼠在处理的第8周时的皮肤切片(B图)。C和D图中绘制了用PBS(n＝7/时间点)和博来霉素(n＝13/时间点)处理2周(P＝0.0029)、4周(P＝0.0004)、6周(P＜0.0001)和8周(P＜0.0001)的小鼠之间皮肤厚度的增加。本研究期间，PBS(n＝28)和博来霉素(n＝52)处理的小鼠之间的总体皮肤厚度增加(P＜0.0001)。通过Visiopharm软件计算皮肤厚度以作为每个皮肤切片的总体数目而非取样图片的。
图19显示CO3-610的尿测定结果，其证明本研究的全部时间点中显著增加。该图显示每个时间点的结果(n＝7PBS、n＝13博来霉素处理的每个终止点)和用于全部时间点的总体CO3-610水平(n＝28PBS和n＝52博来霉素处理的小鼠)。2周P＝0.0008，4周P＜0.0001、6周P＜0.0001、8周P＜0.0001和总体P＜0.0001。
图20显示了对照C和博来霉素B处理2和8周后CO3-610的蛋白质印迹图像(A图)。B图中显示所有时间点CO3-610的密度测量(n＝7PBS和n＝13博来霉素处理的每个终止点)和总体CO3-610水平(n＝28PBS和n＝52博来霉素处理的小鼠)，证明CO3-610水平统计学上显著的增加(P＜0.0001)。
如图21所示，在尿测定中，发现CO3-610水平与皮肤厚度的进展相关联，因此，总胶原沉积r＝0.4883，R2＝0.2384。
如图22所示，在CO3-610ELISA尿测定和蛋白质印迹密度测量的结果之间发现统计学上显著的相关性(r＝0.6528，P＜0.0001)。
在本说明书中，除非另外明确指明，词语“或”的意义是当满足所陈述条件之一或二者时，返回一个真值的运算符(operator)，与要求仅要求满足一个条件的运算符“异或”相反。所用的词语“包含”意为“包括”，而不意为“由其构成”。上文确认的所有在先教导通过参考并入本文。本文中对任何在先公开文献的确认不应被视为认可或表示，其教导在其日期时在澳大利亚或其他地方是公知常识。
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Claims (23)
1.纤维化的诊断或定量方法，其包括获取患者生物流体样品，进行免疫测定以测量所述样品中天然存在的含新表位的蛋白质片段，以及将在所述患者中所述测量相比于正常水平的升高与纤维化的存在情况或程度相关联，其中所述免疫测定通过包括以下步骤的方法进行：
将所述样品中天然存在的蛋白质片段与免疫结合伴侣相接触，所述免疫结合伴侣与由蛋白酶切割蛋白质形成的新表位反应，以及测量肽片段与所述免疫结合伴侣的结合程度从而测量其中的包含所述新表位的蛋白质片段，并且其中所述蛋白质是III型胶原、I型胶原、IV型胶原、V型胶原或VI型胶原、弹性蛋白、双糖链蛋白聚糖、饰胶蛋白聚糖、光亮蛋白聚糖、多功能蛋白聚糖、基底膜蛋白聚糖、神经蛋白聚糖、短小蛋白聚糖、纤调蛋白聚糖、丝甘蛋白聚糖、黏结蛋白聚糖、β蛋白聚糖、波形蛋白或C-反应蛋白，前提是当切割I型胶原形成所述新表位时，所述切割不是在I型胶原被组织蛋白酶K切割的位点处。
2.权利要求1的方法，其中所述免疫结合伴侣特异性地结合具有N-末端序列KNGETG...的III型胶原片段。
3.权利要求1的方法，其中所述免疫结合伴侣特异性地结合具有N-末端序列KAFVFP...(SEQ ID NO1167)的CRP片段。
4.权利要求1的方法，其中所述免疫结合伴侣特异性地结合新表位，所述新表位由切割III型胶原所产生的肽中存在的N-末端氨基酸序列构成，所述肽包含选自下列的N-末端序列：
5.权利要求1的方法，其中所述免疫结合伴侣特异性地结合新表位，所述新表位由切割III型胶原所产生的肽中存在的C-末端氨基酸序列构成，所述肽包含选自下列的C-末端序列：
6.权利要求1的方法，其中所述免疫结合伴侣特异性地结合新表位，所述新表位由切割I型胶原所产生的肽中存在的N-末端氨基酸序列构成，所述肽包含选自下列的N-末端序列：
7.权利要求1的方法，其中所述免疫结合伴侣特异性地结合新表位，所述新表位由切割I型胶原所产生的肽中存在的C-末端氨基酸序列构成，所述肽包含选自下列的C-末端序列：
8.权利要求1的方法，其中所述免疫结合伴侣特异性地结合新表位，所述新表位由切割IV型胶原所产生的肽中存在的N-末端氨基酸序列构成，所述肽包含选自下列的N-末端序列：
9.权利要求1的方法，其中所述免疫结合伴侣特异性地结合新表位，所述新表位由切割IV型胶原所产生的肽中存在的C-末端氨基酸序列构成，所述肽包含选自下列的C-末端序列：
10.权利要求1的方法，其中所述免疫结合伴侣特异性地结合新表位，所述新表位由切割双糖链蛋白聚糖、饰胶蛋白聚糖、光亮蛋白聚糖、多功能蛋白聚糖或基底膜蛋白聚糖所产生的肽中存在的N-末端氨基酸序列构成，所述肽包含选自下列的N-末端序列：
11.权利要求1中要求的方法，其中所述免疫结合伴侣特异性地结合新表位，所述新表位由切割双糖链蛋白聚糖、饰胶蛋白聚糖、光亮蛋白聚糖、多功能蛋白聚糖或基底膜蛋白聚糖所产生的肽中存在的C-末端氨基酸序列构成，所述肽包含选自下列的C-末端序列：
12.权利要求1的方法，其中所述免疫结合伴侣特异性地结合新表位，所述新表位由切割C-反应蛋白所产生的肽中存在的N-末端氨基酸序列构成，所述肽包含选自下列的N-末端序列：
13.权利要求1的方法，其中所述免疫结合伴侣特异性地结合新表位，所述新表位由切割C-反应蛋白所产生的肽中存在的C-末端氨基酸序列构成，所述肽包含选自下列的C-末端序列：
14.权利要求1的方法，其中所述免疫结合伴侣特异性地结合新表位，所述新表位由切割弹性蛋白所产生的肽中存在的N-末端氨基酸序列构成，所述肽包含选自下列的N-末端序列：
15.权利要求1的方法，其中所述免疫结合伴侣特异性地结合新表位，所述新表位由切割弹性蛋白所产生的肽中存在的C-末端氨基酸序列构成，所述肽包含选自下列的C-末端序列：
16.权利要求1的方法，其中所述免疫结合伴侣特异性地结合新表位，所述新表位由切割V型胶原所产生的肽中存在的N-末端氨基酸序列构成，所述肽包含选自下列的N-末端序列：
17.权利要求1的方法，其中所述免疫结合伴侣特异性地结合新表位，所述新表位由切割V型胶原所产生的肽中存在的C-末端氨基酸序列构成，所述肽包含选自下列的C-末端序列：
18.权利要求1的方法，其中所述免疫结合伴侣特异性地结合新表位，所述新表位由切割VI型胶原所产生的肽中存在的N-末端氨基酸序列构成，所述肽包含选自下列的N-末端序列：
19.权利要求1的方法，其中所述免疫结合伴侣特异性地结合新表位，所述新表位由切割VI型胶原所产生的肽中存在的C-末端氨基酸序列构成，所述肽包含选自下列的C-末端序列：
20.权利要求1的方法，其中所述免疫结合伴侣特异性地结合新表位，所述新表位由切割波形蛋白所产生的肽中存在的N-末端氨基酸序列构成，所述肽包含选自下列的N-末端序列：
21.权利要求1的方法，其中所述免疫结合伴侣特异性地结合新表位，所述新表位由切割波形蛋白所产生的肽中存在的C-末端氨基酸序列构成，所述肽包含选自下列的C-末端序列：
22.权利要求1的方法，前提是当通过切割I型胶原形成所述新表位时，所述切割不在I型胶原被胰蛋白酶切割的位置。
23.测量包含新表位的蛋白质片段的免疫测定方法，所述蛋白质片段在体液样品中天然存在，其中所述免疫测定通过包括如下步骤的方法进行：
将所述样品中天然存在的蛋白质片段与免疫结合伴侣相接触，所述免疫结合伴侣与蛋白酶切割蛋白质形成的新表位反应，以及测量肽片段与所述免疫结合伴侣的结合程度从而测量其中的包含所述新表位的蛋白质片段，并且其中所述蛋白质是神经蛋白聚糖、短小蛋白聚糖、纤调蛋白聚糖、丝甘蛋白聚糖、黏结蛋白聚糖、β蛋白聚糖、弹性蛋白、I型胶原、IV型胶原、V型胶原或VI型胶原、CRP或波形蛋白，前提是当通过切割I型胶原形成所述新表位时，所述切割不在I型胶原被组织蛋白酶K切割的位点处。
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