CN103235079B - 一种畜禽表皮中松香酸含量的分析方法 - Google Patents
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Abstract
一种畜禽表皮中松香酸含量的分析方法，涉及畜禽表皮中松香酸的分析方法，属于分析测试领域。在屠宰加工后的生畜禽的表皮样品中加入稀碱溶液，经提取、固相萃取净化后，取得滤过液，再将滤过液采用高效液相色谱-紫外法（HPLC-UV）进行分析。本发明所指的畜禽为屠宰加工后的生猪、生鸭、生鹅或生鸡。本发明操作简便、易于推广，可用于鉴别畜禽加工中是否使用松香脱毛、并对其中松香酸残留量进行分析，以保护消费者身体健康。
Description
技术领域
本发明涉及畜禽表皮中松香酸的分析方法，属于分析测试领域。
背景技术
脱毛是畜禽加工中的重要环节，一般由机械完成。但机械加工后鸭、鹅仍残存大量纤细绒毛，而猪的某些部位（如猪头、猪蹄）也难以达到完全脱毛的效果，因此必需增加“二次脱毛”工序。人工二次脱毛，耗时繁琐、劳动力成本高、生产效率低，绝大多数加工企业只有依赖脱毛剂。松香价格低廉、脱绒毛效果好，曾经是普遍使用的脱毛剂。随着社会食品安全意识提高，以及新型安全食品级粘合剂——松香甘油酯的问世，2009年，我国颁布《食品安全法》，禁止在畜禽加工生产中使用松香。松香甘油酯是松香和甘油酯化的产物，但价格相对较高，而且脱毛效果略差。事实上，中小企业受利益驱动，违禁使用松香加工畜禽的现象十分严重。
松香是松树含油树脂蒸去松节油后得到的透明固体物质，主要成分为松香酸和脱氢松香酸，是用于肥皂、造纸、油漆涂料等领域的重要化工原料。松香酸可导致哮喘、皮肤过敏，毒理学研究表明，松香酸可引起人体肺泡上皮细胞细胞溶解，并具有损伤DNA的活性。
虽然《食品安全法》明令禁止松香用于畜禽脱毛加工，但尚未建立畜禽加工中是否使用松香的鉴别方法，也未见畜禽中松香残留的检测方法研究报道。研究表明，松香加工畜禽后，在畜禽表皮中残留其主要成分松香酸。通过色谱方法检测畜禽表皮中的松香酸，鉴别畜禽加工中是否使用违禁脱毛剂，对于规范畜禽加工生产、保障畜禽产品质量安全、促进畜禽业健康发展、保护消费者身体健康具有重要意义。
发明内容
本发明的目的在于：针对一些在畜禽加工中使用违禁脱毛剂——松香的现象，提供一种畜禽表皮中松香主要残留物——松香酸的定性、定量分析方法。
本发明技术方案是：在屠宰加工后的生畜禽的表皮样品中加入稀碱溶液，经提取、固相萃取净化后，取得滤过液，再将滤过液采用高效液相色谱-紫外法（HPLC-UV）进行分析。
本发明所指的畜禽为屠宰加工后的生猪、生鸭、生鹅或生鸡。本发明操作简便、易于推广，可用于鉴别畜禽加工中是否使用松香脱毛、并对其中松香酸残留量进行分析，以保护消费者身体健康。
本发明所述的稀碱溶液为0.025～0.05 mol/L的 KOH水溶液；所述稀碱溶液与畜禽表皮样品比的体积与质量比为4～10∶1。
本发明所述提取是：在室温条件下，以超声波水浴振荡提取，时间为15～30 min，然后置于5000～10000 rpm的转速条件下离心10～20 min，取得提取液。
本发明所述的固相萃取条件为：在3～6 mL/500 mg强阴离子交换固相萃取小柱中，先采用甲醇和KOH水溶液活化后，再将所述提取液完全流过小柱，待空气抽干小柱后，用甲醇和甲酸的混合溶液洗脱，收集洗脱液，过0.22 μm微孔滤膜，取得滤过液。
本发明所述高效液相色谱-紫外法的色谱条件是：色谱柱为反相C18，流动相：甲醇和质量百分比浓度为0.02%磷酸水溶液的混合液，流速：0.8～1.2 mL/min，柱温：25～30℃，进样量：5～20 μL，多波长紫外检测器，检测波长：230 nm、240 nm和250 nm；定性方法为：根据标准样品的保留时间结合在230 nm、240 nm、250 nm三个波长之间的峰面积关系进行定性，三波长之间的面积关系1∶1.10～1.20∶0.70～0.80；定量方法为：以240 nm的峰面积按标准曲线外标法定量。
附图说明
图1为样品中松香酸残留量与峰面积的标准曲线图。
图2为松香酸标准溶液和不同肉鸭表皮样品中松香酸的HPLC色谱图。
具体实施方式
一、鸭表皮中松香酸的分析步骤：
1、松香酸的提取、净化：
分析样品：自农贸市场采购的光鸭，取其表皮，剁碎。
提取：称取剁碎的光鸭表皮样品2.0 g于50 mL的具塞离心管中，加入0.05 mol/L KOH水溶液15 mL，室温下超声波水浴提取20 min。然后5000 rpm离心15 min，取4 mL上清液。
固相萃取净化：LC-SAX固相萃取小柱（3mL/500mg，Supelco公司，美国）分别用3 mL甲醇和3 mL 0.05mol/L的KOH活化后，将上述4 mL上清液通过小柱，空气抽干30s，用4 mL甲醇和甲酸的混合液（甲醇和甲酸的体积比为19:1）洗脱洗脱，收集洗脱液，过0.22 μm微孔滤膜，取得滤过液。
2、高效液相色谱-紫外法（HPLC-UV）分析：
色谱条件：色谱柱，Zorbax SB-C18（250×4.6 mm, Agilent公司，美国）；流动相，甲醇和质量百分比为0.02%的磷酸水溶液的混合液（其中甲醇占混合液的体积比为90 %）；流速，1.0 ml/min；柱温，25℃；进样量，20 μL；波长：230 nm、240 nm、250nm。
定性分析：与松香酸标准溶液（1.0 μg/mL）比较，保留时间结合230 nm、240 nm、250nm三波长峰面积关系。
定量分析：用松香酸标准品（含量≥99 %，Sigma公司，美国）配置系列工作溶液、并进样分析，获得240 nm波长下浓度与峰面积的线性标准曲线，如图1所示，外标法定量样品中松香酸含量。
结果：
| 保留时间（min） | S230∶S240∶S250* | S240 | 含量（μg/g）** | |
| 标样（1.0 μg/mL） | 10.65 | 1:1.15:0.72 | 1.994 | / |
| 鸭子表皮 | 10.62 | 1:1.18:0.78 | 0.790 | 2.87 |
* “S”为峰面积，下标表示检测波长（nm）。
** 按回归方程计算样液中的松香酸浓度（μg/mL），再计算样品中松香酸含量（μg/g）。
取屠宰加工后的生猪、生鹅或生鸡表皮，以同样的方法，也可对样品中松香酸的残留量作定性和定量分析。
二、松香酸添加回收试验：
1、在阴性样品中添加松香酸：
从农贸市场购买人工脱毛的光鸭，取表皮剁碎后称取5g，加入一定量的松香酸标准溶液，混合均匀4℃放置过夜（使松香酸渗透至鸭皮中）。
2、按实施例1中步骤1、2分析上述样品中的松香酸，并同时分析未添加标样的样品中的松香酸。
结果：
| 添加量（μg/g） | 检测量（μg/g） | 保留时间（min） | S230∶S240∶S250 | 回收率（%） | |
| 鸭子表皮 | / | / | / | / | / |
| 添加水平1 | 0.5 | 0.41 | 10.53 | 1:1.18:0.78 | 82.0 |
| 添加水平2 | 5.0 | 4.86 | 10.55 | 1:1.16:0.78 | 97.1 |
| 添加水平3 | 10.0 | 9.86 | 10.59 | 1:1.16:0.75 | 98.6 |
通过该方法可以进一步验证本发明的可行性。
分别将松香酸标准溶液、添加了松香酸的鸭表皮和未添加松香酸的鸭表皮经过以上分析方法处理后，于240nm处进行高效液相色谱检测分析，取得色谱图，如图2所示。
由图2可见，在保留时间为10.55min处有峰值出现，其中松香酸标准溶液（A曲线）的峰值最大，添加松香酸的鸭表皮（B曲线）的峰值其次，未添加松香酸的鸭表皮（C曲线）则没有出现峰值。
Claims (2)
1.一种畜禽表皮中松香酸的分析方法，其特征在于：在屠宰加工后的生畜禽的表皮样品中加入稀碱溶液，经提取、固相萃取净化后，取得滤过液，再将滤过液采用高效液相色谱-紫外法进行分析；所述的稀碱溶液为0.025～0.05 mol/L的KOH水溶液；所述稀碱溶液与畜禽表皮样品比的体积与质量比为4～10∶1；所述提取是：在室温条件下，以超声波水浴振荡提取，时间为15～30 min，然后置于5000～10000 rpm的转速条件下离心10～20 min，取得提取液；所述的固相萃取条件为：在3～6 mL/500 mg强阴离子交换固相萃取小柱中，先采用甲醇和KOH水溶液活化后，再将所述提取液完全流过小柱，待空气抽干小柱后，用甲醇和甲酸的混合溶液洗脱，收集洗脱液，过0.22 μm微孔滤膜，取得滤过液。
2.根据权利要求1所述的畜禽表皮中松香酸的分析方法，其特征在于：所述高效液相色谱-紫外法的色谱条件是：色谱柱为反相C18，流动相：甲醇和质量百分比浓度为0.02%磷酸水溶液的混合液，流速：0.8～1.2 mL/min，柱温：25～30℃，进样量：5～20 μL，多波长紫外检测器，检测波长：230 nm、240 nm和250 nm；定性方法为：根据标准样品的保留时间结合在230 nm、240 nm、250 nm三个波长之间的峰面积关系进行定性，三波长之间的面积关系1∶1.10～1.20∶0.70～0.80；定量方法为：以240 nm的峰面积按标准曲线外标法定量。
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