CN103201268A

CN103201268A - 作为广谱流感抗病毒药物的新型哌嗪类似物

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Publication number: CN103201268A
Application number: CN2011800536494A
Authority: CN
Inventors: C.W.恰恩奇; S.格里茨; 李果; B.C.皮尔斯; A.彭德里; 施树浩; 翟纬绪; 朱士荣
Original assignee: Bristol Myers Squibb Co
Current assignee: Bristol Myers Squibb Co
Priority date: 2010-09-08
Filing date: 2011-09-06
Publication date: 2013-07-10
Anticipated expiration: 2031-09-06
Also published as: MX2013002557A; PL2614052T3; PT2614052E; SMT201500068B; RS53844B1; WO2012033736A1; EA023258B1; EA201390362A1; CN103201268B; HRP20150228T1; EP2614052A1; DK2614052T3; BR112013005552A2; CA2809624A1; US8362004B2; US20120238539A1; EP2614052B1; JP2013537193A; JP5902172B2; SI2614052T1

Abstract

本文阐述一种式I化合物，包括其药学上可接受的盐，其中Het为具有邻近-Ar取代基或邻近-Ar取代基的连接点的-N、-O或-S的5或6-元杂环；Ar为芳基或杂芳基；R为-CH₃、-CH₂F或-CH=CH₂；W为-NO₂、-Cl、-Br、-CHO、-CH=CH₂或-CN；X为-Cl、-CH₃或-CN；Y为-CH或-N；和Z为C₁-C₆烷基、C₃-C₆环烷基、取代的芳基、取代的杂芳基、OR¹或NHR¹，其中R¹选自H、芳基、杂芳基、C₁-C₆烷基和C₃-C₆环烷基。该化合物用于预防和治疗流感病毒的组合物。

Description

作为广谱流感抗病毒药物的新型哌嗪类似物

发明领域

本发明涉及用于预防和治疗流感病毒的新化合物、和涉及含有这些化合物的组合物和制剂。本发明也涉及采用本文阐述的化合物预防和治疗流感感染的方法。

发明背景

流感病毒为人类急性下呼吸道感染的重要病原体。其易于传播，导致每年的流行，这可在危重疾病和高危人群的死亡得到证实。其为正粘病毒科的RNA病毒之一，其影响鸟类和哺乳动物，并且是造成通常称为“流感”的疾病的原因。流感的最常见症状为发冷、发热、喉咙痛、肌肉痛、严重头痛、咳嗽、虚弱/疲劳和浑身不舒服。喉咙痛、发热和咳嗽为最常见的症状。在更严重的情况下，流感引起肺炎，后者可为致命性的，特别是对于年幼的人和老年人。尽管其通常与其它的流感样疾病，尤其是与感冒相混淆，流感为比感冒更严重的疾病，并且由不同类型的病毒所引起。流感可产生恶心和呕吐，特别是在儿童中，但是这些症状在不相关的肠胃炎更加常见，其有时称为“胃型流感(stomach flu)”或“24小时流感”。

通常，流感病毒经咳嗽或打喷嚏产生含有病毒的气悬体(aerosols)，通过空气传播。流感也可经与鸟粪或鼻分泌物直接接触，或者通过与污染的表面接触而传播。空气传播的气悬体被认为引起大多数感染，尽管其传播途径是最重要的并且不是完全清楚的。

流感仍然是一种持续的威胁，因为季节性地出现新的变体。每年的流行通过失去劳动生产率，同时造成卫生服务资源紧张而付出经济代价。另外，流感病毒是每10-50年造成重大流行病的原因。在2009年，在北美洲出现猪流感的新型H1N1三重病毒混种(triple re-assortment)，并且达到流行病的比例(Zimmer and Burke, 2009)。流感病毒产生突变(抗原性转变)以及与来自不同哺乳动物种类的其它流感病毒混种(re-assort) (抗原性转变)的能力分别为引起季节性流行变化和流行病毒暴发的机制(Chen and Deng, 2009)。另外，对可获得的抗流感药物的耐药性日益增加。隔离了大多数H3N2并且2009 H1N1对金刚烷M2离子通道抑制剂有耐药性(Deyde等, 2009)。此外，2008 H1N1已经显示耐神经氨酸酶抑制剂达菲(奥司他韦)，标准护理(Moscona, 2009)。没有一种类别已经显示有效抗高致病性H5N1禽流感病毒(Soepandi, 2010)。

因此本领域目前需要多种新的抗流感病毒的治疗和预防药物。也需要新的含有这些药物的组合物和制剂，以及用于采用这些药物预防和治疗流感的方法。

发明概述

本发明在第一个实施方案中提供式I化合物，包括其药学上可接受的盐：

Figure 2011800536494100002DEST_PATH_IMAGE002

其中Het为具有邻近-Ar取代基或邻近-Ar取代基的连接点的-N、-O或-S的5或6-元杂环；

Ar为芳基或杂芳基；

R为-CH₃、-CH₂F或-CH=CH₂；

W为-NO₂、-Cl、-Br、-CHO、-CH=CH₂或-CN；

X为-Cl、-CH₃或-CN；

Y为-CH或-N；和

Z为C₁-C₆烷基、C₃-C₆环烷基、取代的芳基、取代的杂芳基、OR¹或NHR¹，其中R¹选自H、芳基、杂芳基、C₁-C₆烷基和C₃-C₆环烷基。

作为本发明的部分也提供药用组合物，所述组合物包含与一种或多种药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂一起的抗病毒有效量的一种或多种式I化合物，包括其药学上可接受的盐。

另外，本文提供用于治疗感染流感病毒的哺乳动物的方法，所述方法包括给予所述哺乳动物抗病毒有效量的，式I化合物包括其药学上可接受的盐和一种或多种药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂。

本文也提供制备式I化合物的方法。

本发明涉及下文描述的这些和其它重要的目的。

实施方案的详述

因为本发明的化合物可具有不对称中心并且因此作为非对映体和对映体的混合物存在，本发明除其混合物以外，还包括式I化合物的单个非对映异构体和对映体形式。

定义

除非在本申请的别处另外具体阐明，本文可使用一个或多个以下术语，并应具有以下含义：

本文使用的术语“C_1-6烷基”意指直形或支链烷基，例如甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、戊基、己基等。

“卤素”指的是氯、溴、碘或氟。

“H”或“氢”指的是氢，包括其同位素例如氘。

“芳基”基团指的是具有完全共轭的π (pi)-电子系统的全部碳单环或稠环多环(其共享相邻的碳原子对)基团。芳基的实例非限制性地为苯基、萘基和蒽基。芳基可被取代或未取代。当取代时，取代基优选地为选自以下的一个或多个基团：烷基、环烷基、芳基、杂芳基、杂脂环基、羟基、烷氧基、芳氧基、杂芳氧基、杂脂环氧基、巯基、硫代芳氧基、硫代杂芳氧基、硫代杂脂环氧基、氰基、卤素、硝基、羰基、O-氨基甲酰基、N-氨基甲酰基、C-酰氨基、N-酰氨基、C-羧基、O-羧基、亚硫酰基、磺酰基、亚磺酰氨基、三卤甲基、脲基、氨基和-NR^xR^y，其中R^x和R^y独立地选自氢、烷基、环烷基、芳基、羰基、C-羧基、磺酰基、三卤甲基，和结合的5-或6-元杂脂环。

本文使用的“杂芳基”基团指的是在环中具有一个或多个选自氮、氧和硫的原子并且另外具有完全共轭的π电子系统的单环或稠环(即共享相邻的原子对的环)基团。除非另外指明，杂芳基可连接于杂芳基内的碳或氮原子。应该指出的是，术语杂芳基打算包括母体杂芳基的N-氧化物，如果这种N-氧化物如本领域已知的那样为化学上可行的。杂芳基的实例非限制性地为呋喃基、噻吩基、苯并噻吩基、噻唑基、咪唑基、噁唑基、噁二唑基、噻二唑基、苯并噻唑基、三唑基、四唑基、异噁唑基、异噻唑基、吡咯基、吡喃基、四氢吡喃基、吡唑基、吡啶基、嘧啶基、喹啉基、异喹啉基、嘌呤基、咔唑基、苯并噁唑基、苯并咪唑基、吲哚基、异吲哚基、吡嗪基、二嗪基、吡嗪、三嗪基、四嗪基和四唑基。当取代时，取代基优选地为选自以下的一个或多个基团：烷基、环烷基、芳基、杂芳基、杂脂环基、羟基、烷氧基、芳氧基、杂芳氧基、杂脂环氧基、硫代烷氧基、巯基、硫代芳氧基、硫代杂芳氧基、硫代杂脂环氧基、氰基、卤素、硝基、羰基、O-氨基甲酰基、N-氨基甲酰基、C-酰氨基、N-酰氨基、C-羧基、O-羧基、亚硫酰基、磺酰基、亚磺酰氨基、三卤甲基、脲基、氨基和-NR^xR^y，其中R^x和R^y如以上那样定义。

本文使用的“杂脂环基”基团指的是在环中具有一个或多个选自氮、氧和硫的原子的单环或稠环基团。环选自提供稳定的键合排列的那些环，并且不打算包括将不存在的系统。这种环也可具有一个或多个双键。然而，所述环不具有完全共轭的π电子系统。杂脂环基团的实例非限制性地为氮杂环丁烷基、哌啶基、哌嗪基、咪唑啉基、噻唑烷基、3-吡咯烷-1-基、吗啉基、硫代吗啉基和四氢吡喃基。当取代时，取代基优选地为选自以下的一个或多个基团：烷基、环烷基、芳基、杂芳基、杂脂环基、羟基、烷氧基、芳氧基、杂芳氧基、杂脂环氧基、巯基、硫代烷氧基、硫代芳氧基、硫代杂芳氧基、硫代杂脂环氧基、氰基、卤素、硝基、羰基、硫代羰基、O-氨基甲酰基、N-氨基甲酰基、O-硫代氨基甲酰基、N-硫代氨基甲酰基、C-酰氨基、C-硫代酰氨基、N-酰氨基、C-羧基、O-羧基、亚硫酰基、磺酰基、亚磺酰氨基、三卤甲基亚磺酰氨基、三卤甲磺酰基、甲硅烷基、脒基、胍基、脲基、膦酰基(phosphonyl)、氨基和-NR^xR^y，其中R^x和R^y如以上那样定义。

“烷基”基团指的是包括直链和支链基团的饱和脂族烃。优选地，烷基具有1-20个碳原子(每当本文陈述一个数值范围例如“1-20”时，其意指基团在这种情况下烷基可含有1个碳原子、2个碳原子、3个碳原子等，至多20个碳原子且包括20个碳原子)。更优选地，其为具有1-10个碳原子的中等大小的烷基。最优选地，其为具有1-4个碳原子的低级烷基。烷基可被取代或未取代。当取代时，取代基优选地为各自选自以下的一个或多个基团：三卤烷基、环烷基、芳基、杂芳基、杂脂环基、羟基、烷氧基、芳氧基、杂芳氧基、杂脂环氧基、巯基、硫代烷氧基、硫代芳氧基、硫代杂芳氧基、硫代杂脂环氧基、氰基、卤代、硝基、羰基、硫代羰基、O-氨基甲酰基、N-氨基甲酰基、O-硫代氨基甲酰基、N-硫代氨基甲酰基、C-酰氨基、C-硫代酰氨基、N-酰氨基、C-羧基、O-羧基、亚硫酰基、磺酰基、亚磺酰氨基、三卤甲基亚磺酰氨基、三卤甲磺酰基，和结合的5-或6-元杂脂环。

“环烷基”基团指的是全碳单环或稠环(即共享相邻的碳原子对的环)基团，其中一个或多个环不具有完全共轭的π电子系统。环烷基的实例非限制性地为环丙烷、环丁烷、环戊烷、环戊烯、环己烷、环己二烯、环庚烷、环庚三烯和金刚烷。环烷基可被取代或未取代。当取代时，取代基优选地为各自选自以下的一个或多个基团：烷基、芳基、杂芳基、杂脂环基、羟基、烷氧基、芳氧基、杂芳氧基、杂脂环氧基、巯基、硫代烷氧基、硫代芳氧基、硫代杂芳氧基、硫代杂脂环氧基、氰基、卤素、硝基、羰基、硫代羰基、O-氨基甲酰基、N-氨基甲酰基、O-硫代氨基甲酰基、N-硫代氨基甲酰基、C-酰氨基、C-硫代酰氨基、N-酰氨基、C-羧基、O-羧基、亚硫酰基、磺酰基、亚磺酰氨基、三卤-甲磺酰氨基、三卤甲磺酰基，甲硅烷基、脒基、胍基、脲基、膦酰基、氨基和-NR^xR^y，其中R^x和R^y如以上那样定义。

“链烯基”基团指的是具有至少两个碳原子和至少一个碳-碳双键的如本文定义的烷基。

“链炔基”基团指的是具有至少两个碳原子和至少一个碳-碳叁键的如本文定义的烷基。

“羟基”基团指的是-OH基团。

“烷氧基”基团指的是如本文定义的-O-烷基和-O-环烷基两者。

“芳氧基”基团指的是如本文定义的-O-芳基和-O-杂芳基两者。

“杂芳氧基”基团指的是具有如本文定义的杂芳基的杂芳基-O-基团。

“杂脂环氧基”基团指的是具有如本文定义的杂脂环基的杂脂环基-O-基团。

“巯基”基团指的是-SH基团。

“硫代烷氧基”基团指的是如本文定义的S-烷基和-S-环烷基两者。

“硫代芳氧基”基团指的是如本文定义的-S-芳基和-S-杂芳基两者。

“硫代杂芳氧基”基团指的是具有如本文定义的杂芳基的杂芳基-S-基团。

“硫代杂脂环氧基”基团指的是具有如本文定义的杂脂环基的杂脂环基-S-基团。

“羰基”基团指的是–C(=O)-R”基团，其中R”选自氢、烷基、链烯基、链炔基、环烷基、芳基、杂芳基(通过环碳键合)和杂脂环基(通过环碳键合)，每一个如本文定义。

“醛”基团指的是其中R”为氢的羰基。

“硫代羰基”基团指的是-C(=S)-R”基团，其中R”如本文定义。

“酮基”基团指的是-CC(=O)C-基团，其中在C=O的任何一侧或两侧的碳可为烷基、环烷基、芳基或者杂芳基或杂脂环基基团的碳。

“三卤甲羰基”基团指的是Z₃CC(=O)-基团，其中所述Z为卤素。

“C-羧基”基团指的是-C(=O)O-R”基团，其中R”如本文定义。

“O-羧基”基团指的是R”C(-O)O-基团，其中R”如本文定义。

“羧酸”基团指的是C-羧基，其中R”为氢。

“三卤甲基”基团指的是-CZ₃基团，其中Z为如本文定义的卤素基团。

“三卤甲磺酰基”基团指的是Z₃CS(=O)₂-基团，其中Z如以上那样定义。

“三卤甲基亚磺酰氨基”基团指的是Z₃CS(=O)₂NR^x-基团，其中Z如以上那样定义和R^x为H或(C_1-6)烷基。

“亚硫酰基”基团指的是-S(=O)-R”基团，其中R”为(C_1-6)烷基。

“磺酰基”基团指的是-S(=O)₂R”基团，其中R”为(C_1-6)烷基。

“S-亚磺酰氨基”基团指的是-S(=O)₂NR^XR^Y，其中R^X和R^Y独立地为H或(C_1-6)烷基。

“N-亚磺酰氨基”基团指的是R”S(=O)₂NR_X-基团，其中R^X为H或(C_1-6)烷基。

“O-氨基甲酰基”基团指的是-OC(=O)NR^xR^y基团，其中R^X和R^Y独立地为H或(C_1-6)烷基。

“N-氨基甲酰基”基团指的是R^xOC(=O)NR^y基团，其中R^X和R^Y独立地为H或(C_1-6)烷基。

“O-硫代氨基甲酰基”基团指的是-OC(=S)NR^xR^y基团，其中R^X和R^Y独立地为H或(C_1-6)烷基。

“N-硫代氨基甲酰基”基团指的是R^xOC(=S)NR^y-基团，其中R^X和R^Y独立地为H或(C_1-6)烷基。

“氨基”基团指的是-NH₂基团。

“酰氨基”基团指的是通过羧基附着时的一价基团-NH₂。

“C-酰氨基”基团指的是-C(=O)NR^xR^y基团，其中R^X和R^Y独立地为H或(C_1-6)烷基。

“C-硫代酰氨基”基团指的是-C(=S)NR^xR^y基团，其中R^X和R^Y独立地为H或(C_1-6)烷基。

“N-酰氨基”基团指的是R^xC(=O)NR^y-基团，其中R^X和R^Y独立地为H或(C_1-6)烷基。

“脲基”基团指的是-NR^xC(=O)NR^yR^y2基团，其中R^X、R^Y和R^y2独立地为H或(C_1-6)烷基。

“胍基”基团指的是-R^xNC(=N)NR^yR^y2基团，其中R^X、R^Y和R^y2独立地为H或(C_1-6)烷基。

“脒基”基团指的是R^xR^yNC(=N)-基团，其中R^X和R^Y独立地为H或(C_1-6)烷基。

“氰基”基团指的是-CN基团。

“甲硅烷基”基团指的是-Si(R”)₃，其中R”为(C_1-6)烷基或苯基。

“膦酰基”基团指的是P(=O)(OR^x)₂，其中R^x为(C_1-6)烷基。

“肼基”基团指的是-NR^xNR^yR^y2基团，其中R^X、R^Y和R^y2独立地为H或(C_1-6)烷基。

任何两个邻近的R基团可结合形成稠合于初始具有那些R基团的环的另外的芳基、环烷基、杂芳基或杂环基环。

本领域已知杂芳基系统中的氮原子可“参与杂芳基环双键”，并且这指的是形成以包含5-元环杂芳基的两种互变异构的结构存在的双键。这决定了氮是否可如本领域化学家所熟知的那样被取代。本公开和本公开的权利要求书基于已知的化学键合的一般原则。据悉权利要求书不包括已知不稳定或者基于文献不能存在的结构。

本文公开的化合物的生理学上可接受的盐和前药处于本公开的范围内。本文和权利要求书中使用的术语“药学上可接受的盐”打算包括非毒性的碱加成盐。合适的盐包括源于以下有机和无机酸的那些盐：例如(非限制性地)盐酸、氢溴酸、磷酸、硫酸、甲磺酸、乙酸、酒石酸、乳酸、亚磺酸、枸橼酸、马来酸、富马酸、山梨酸、乌头酸、水杨酸、邻苯二甲酸等。本文使用的术语“药学上可接受的盐”也打算包括酸性基团与平衡离子例如铵所成的盐，例如羧酸盐，碱金属盐特别是钠或钾盐，碱土金属盐特别是钙或镁盐，和与合适的有机碱例如低级烷基胺(甲胺、乙胺、环己基胺等)或与取代的低级烷基胺(例如羟基取代的烷基胺，例如二乙醇胺、三乙醇胺或三(羟甲基)-氨基甲烷)，或者与碱例如哌啶或吗啉所成的盐。

如以上阐述的那样，本发明涉及式I化合物，包括其药学上可接受的盐：

Figure 2011800536494100002DEST_PATH_IMAGE004

Ar为芳基或杂芳基；

R为-CH₃、-CH₂F或-CH=CH₂；

W为-NO₂、-Cl、-Br、-CHO、-CH=CH₂或-CN；

X为-Cl、-CH₃或-CN；

Y为-CH或-N；和

在本发明的一个优选实施方案中，取代基Het选自：

Figure 2011800536494100002DEST_PATH_IMAGE006

。

特别地，优选的是Het为具有邻近-Ar部分的连接点的-N的5或6-元杂环。甚至更优选地，Het选自：

Figure 2011800536494100002DEST_PATH_IMAGE008

Figure 2011800536494100002DEST_PATH_IMAGE010

。在上述基团中，Het取代基

Figure 2011800536494100002DEST_PATH_IMAGE012

和

Figure 2011800536494100002DEST_PATH_IMAGE014

为特别优选的。

在式I化合物的进一步实施方案中，优选的是Ar选自：

Figure 2011800536494100002DEST_PATH_IMAGE016

Figure 2011800536494100002DEST_PATH_IMAGE018

其中

L为H、卤素、氰基、羟基、氨基、烷基、烷氧基、烷基氨基或酰氨基；

M为H、卤素、氰基、羟基、氨基、烷基、烷氧基、烷基氨基或酰氨基；

Q为H、卤素、氰基、羟基、氨基、烷基、烷氧基、烷基氨基或酰氨基；

U为H、卤素、氰基、羟基、氨基、烷基、烷氧基、烷基氨基或酰氨基；

X₁为O、NH、N-烷基、N-芳基、S或CH₂；和

Y₁为O、NH、N-烷基、N-芳基、S或CH₂。

甚至更优选地，Ar取代基选自：

Figure 2011800536494100002DEST_PATH_IMAGE020

。

甚至更优选的是Ar选自：

Figure 2011800536494100002DEST_PATH_IMAGE022

。

尤其优选的是Ar为苯基或者用甲氧基或羟基取代的苯基。

如以上阐述的那样，取代基R为-CH₃、-CH₂F或-CH=CH₂。优选地，R为-CH₃或-CH₂F。甚至更优选地，R为-CH₃。

取代基W被定义为选自-NO₂、-Cl、-Br、-CHO、-CH=CH₂和-CN。更优选地，W为-NO₂、-Cl、-Br或-CN。尤其优选的是W为-NO₂、-Cl或-Br，其中-NO₂和-Br甚至是更为优选的。

取代基X为-Cl、-CH₃或-CN。甚至更优选地，X为-Cl或-CN，其中-Cl甚至的更为优选的。

取代基Y可为-CH或-N。在某些实施方案中，优选的是Y为-CH。在某些其它的实施方案中，优选的是Y为-CH和Ar取代基为用或者甲氧基或者羟基取代的苯基。

如以上定义的那样，取代基Z为C₁-C₆烷基、C₃-C₆环烷基、取代的芳基、取代的杂芳基、OR¹或NHR¹，其中R¹选自H、芳基、杂芳基、C₁-C₆烷基和C₃-C₆环烷基。优选的是Z为选自以下的取代的芳基或取代的杂芳基：

Figure 2011800536494100002DEST_PATH_IMAGE024

其中

X₁为O、NH、N-烷基、N-芳基、S或CH₂；

X₂为N或CH；和

Y₁为O、NH、N-烷基、N-芳基、S或CH₂。

甚至更优选地，Z为取代的苯基。尤其优选的是Z为用含氮的部分取代的苯基。这种含氮部分可为例如胺基、含有至少一个氮的杂芳基环或含有至少一个氮的杂环。

优选的式I化合物，包括其药学上可接受的盐，包括以下：

Figure 2011800536494100002DEST_PATH_IMAGE026

。

本发明的化合物可口服、非肠道(包括皮下注射、静脉内、肌内、胸骨内注入或输注技术)、经吸入喷雾、或直肠或经本领域可利用的其它途径，以含有常规非毒性的药学上可接受的载体、辅助剂和稀释剂的剂量单位制剂给予。

因此，本发明进一步提供治疗方法和用于治疗病毒感染例如流感感染的药用组合物。治疗包括给予需要这样治疗的患者包含药用载体和治疗有效量的本公开化合物的药用组合物。

药用组合物可以为可口服给予的混悬剂或片剂、鼻喷雾剂、注射用无菌制剂，例如作为无菌注射用水或油悬浮剂或栓剂的形式。

当作为混悬剂口服给予时，这些组合物按照药用制剂领域可利用的技术进行制备，并可含有赋予体积的微晶纤维素、作为悬浮剂的海藻酸或海藻酸钠、作为粘度增强剂的甲基纤维素和本领域已知的甜味剂/矫味剂。作为速释片剂，这些组合物可含有微晶纤维素、磷酸二钙、淀粉、硬脂酸镁和乳糖和/或本领域已知的其它赋形剂、粘合剂、增量剂、崩解剂、稀释剂和润滑剂。

注射用溶液剂或混悬剂可按照已知技术，使用以下成分进行配制：合适的非毒性、非肠道可接受的稀释剂或溶剂，例如甘露醇、1,3-丁二醇、水、林格氏溶液或等渗氯化钠溶液，或者合适的分散剂或润湿剂和悬浮剂，例如无菌非刺激性的固定油，包括合成的甘油单酯或甘油二酯，以及包括油酸的脂肪酸。

本文阐述的化合物可以1-100 mg/kg体重的剂量范围，也许以分开的剂量口服给予人。一种优选的剂量范围为以分开的剂量口服的1-10 mg/kg体重。另一种优选的剂量范围为以分开的剂量给予的1-20 mg/kg体重。然而应该理解，用于任何具体患者的具体剂量水平和给药次数可以变化，并且将依多种因素而定，这些因素包括所采用的具体化合物的活性、所述化合物的代谢稳定性和作用时间长度、年龄、体重、一般健康状况、性别、饮食、给药方式和时间、排泄速率、药物组合、具体病症的严重性和经历疗法的宿主。

在本文描述的本发明的组合物和方法中，术语“抗病毒有效量”意指组合物或方法的每一种活性化合物或组分的总量，该量足以显示有意义的患者益处，例如预防流感的感染或者治愈特征为流感感染的急性病症或症状。本文和权利要求中使用的术语“治疗、医治、处理”意指预防或减轻与流感感染有关的疾病和症状。当用于单个活性成分、单独给予时，该术语指的是单独的成分。当用于组合时，无论组合、连续还是同时给予，该术语指的是导致治疗作用的活性成分的合并量。

本发明也涉及本文描述的化合物与一种或多种用于治疗流感的其它药物的的组合。例如，本发明的化合物可与有效量的本领域可得到的其它流感抗病毒药物、免疫调节剂、抗感染药物或疫苗组合，无论在暴露前和/或接触后的时期被有效给予。

以下流程概括本领域技术人员用于制备本发明化合物的程序。

流程1

如在流程1中图解说明的那样，通过两个互补的路径，自式II的中间体制备式I化合物。在第一个路径中，用三氟乙酸处理式II的中间体，得到式III的中间体。式II的中间体可市售得到，可通过文献中已知的方法制备，或者可由本领域的技术人员易于制备。式III的中间体用式IV的羧酸和酰胺键形成试剂(即EDC)处理，提供式V的中间体。式IV的羧酸可市售得到，可通过文献中已知的方法制备，或者可由本领域的技术人员容易地制备。式V的中间体用式VI的酰氯和强碱处理，得到式I的化合物。式VI的酰氯可市售得到，可通过文献中已知的方法制备，或者可由本领域的技术人员容易地制备。在第二个路径中，颠倒在第一个路径中描述的合成步骤。式II的中间体用式VI的酰氯和强碱处理，得到式VII的中间体。如先前描述的那样，式II的中间体可市售得到，可通过文献中已知的方法制备，可由本领域的技术人员制备。另外，式II的中间体可通过对式III中间体的哌嗪氮引入Boc-保护基获得。式VI的酰氯可市售得到，可通过文献中已知的方法制备，或者可由本领域的技术人员容易地制备。式VII的中间体用三氟乙酸处理，得到式VIII的中间体。式VIII的中间体用式IV的羧酸和酰胺键形成试剂(即EDC)处理，提供式I的化合物。式IV的羧酸可市售得到，可通过文献中已知的方法制备，或者可由本领域的技术人员容易地制备。

流程2

如在流程2中概述的那样和如在文献中描述的那样，制备式IVa的化合物。[参见: Gerald W. Zamponi, Stephanie C. Stotz, Richard J. Staples, Tina M. Andro, Jared K. Nelson, Victoria Hulubei, Alex Blumenfeld, and Nicholas R. Natale, J. Med. Chem., 2003, 46, 87-96]。先后用盐酸羟胺和n-氯代琥珀酰亚胺依序处理式IX的芳醛衍生物，提供式X的中间体。式IX的醛衍生物可市售得到，可通过文献中已知的方法制备，或者可由本领域的技术人员容易地制备。通过用(E)-3-(吡咯烷-1-基)丁-2-烯酸乙酯处理式XII的氯肟，得到式XI的异噁唑，制备式XI的中间体。水解式XI的异噁唑的甲酯，得到式IVa的化合物。

流程3

如在流程3中概述的那样制备式IVb的化合物。在氧化铜(I)存在下，式XII的芳基碘化物与丙炔酸甲酯偶合[参见: Liliebris, C.; Larsen, S.D; Ogg, D.; Palazuk, B.J; and Pleasdale, J.E. J.Med.Chem., 2002, 45, 1785.]，提供式XIII的中间体。式XII的芳基碘化物衍生物可市售得到，可通过文献中已知的方法制备，或者可由本领域的技术人员容易地制备。式XIII的中间体用叠氮化钠和碘甲烷处理，在与不需要的区域异构体层析分离之后得到式XIV的三唑。用氢氧化钠处理式XIV的三唑，提供式IVb的化合物。

流程4

如在流程4中概述的那样和如在文献中描述的那样，制备式IVc的化合物。[参见: Martins, M.A.P. et al.. J. Molecular Catalysis A: Chemical, 2007, 266, 100]。式XV的芳基肼用(E)-1,1,1-三氯-4-乙氧基-3-甲基丁-3-烯-2-酮处理，在与不需要的区域异构体层析分离之后得到式XVI的吡唑。式XV的芳基肼可市售得到，可通过文献中已知的方法制备，或者可由本领域的技术人员容易地制备。用氢氧化钠处理式XVI的吡唑，提供式IVc的化合物。

流程5

如在流程5中概述的那样和如在文献中描述的那样，制备式IVd的化合物。[参见: Grigg, R.; Savic, V. Chem. Commun. 2000, (10), 873-874]。式XVII的β-酮酯用氨处理，得到式XVIII的烯胺。式XVII的β-酮酯可市售得到，可通过文献中已知的方法制备，或者可由本领域的技术人员容易地制备。用2,3-二溴丙-1-烯处理式XVIII的烯胺，提供式XIX的中间体，后者在用乙酸钯(II)处理时，得到式XX的吡咯。用氢氧化锂处理式XX的吡咯，提供式IVd的化合物。

流程6

如在流程6中概述的那样和如在文献中描述的那样，制备式IVe的化合物。[参见: Luke, R.W.A.; Jones, C.D.; McCoull, W; Hayter, B.R. WO Patent 2004013141, 2004]。式XXI的异氰酸酯用1,4-二噁烷-2,5-二醇和甲胺处理，得到式XXII的咪唑。式XXI的异氰酸酯可市售得到，可通过文献中已知的方法制备，或者可由本领域的技术人员容易地制备。式XXII的咪唑用氧化锰(IV)和高锰酸钾依序处理，得到式IVe的化合物。

流程7

如在流程7中概述的那样制备式IVf的化合物。式XXIII的异噁唑在自由基条件下溴化，提供式XXIV的中间体。式XXIV的异噁唑可市售得到，可通过文献中已知的方法制备，可通过类似于流程2进行制备，或者可由本领域的技术人员容易地制备。式XXIV的中间体用四丁基氟化铵处理，得到式XXV的中间体。[参见: Sun, H.; DiMagno, S.G., J.Am. Chem. Soc. 2005, 127, 2050-2051]。式XXV的中间体用三氟乙酸处理，提供式IVf的化合物。

流程8

如在流程8中概述的那样和如在文献中描述的那样，制备式IVg的化合物。[参见: El Kaim, L.; Lacroix, S. Synlett, 2000, 3, 353-354]。式XXVI的醛与三氯乙酰肼缩合，得到式XXVII的腙。式XXVI的醛可市售得到，可通过文献中已知的方法制备，或者可由本领域的技术人员容易地制备。在碱性条件下用乙酰乙酸乙酯处理式XXVII的腙，得到式XXVIII的吡唑，其在随后的步骤中水解，得到式IVg的化合物。

流程9

如在流程9中概述的那样制备式IIa (Y=CH)和IIb (Y=N)的化合物。用BOC-保护的哌嗪处理式XXIXa或XXIXb的中间体，分别得到式IIa和IIb的化合物。式XXIXa的中间体可市售得到，可通过文献中已知的方法制备，或者可由本领域的技术人员容易地制备。式XXIXa的中间体可市售得到，可通过文献中已知的方法制备[参见: Micheli, F.; Cugola, A.; Donati, D.; Missio, A.; Pecunioso, A.; Reggiani, A.; Tarzia, G. Bioorg. Med. Chem., 1997, 5(12), 2129]，或者可由本领域的技术人员容易地制备。

流程10

如在流程10中概述的那样制备式IIIa-d的化合物。用Boc酸酐处理3-溴-4-氯苯胺(XXX)，提供式XXXI的BOC-苯胺。用BOC-哌嗪和Pd(II)催化剂处理式XXXI的BOC-苯胺，得到式XXXII的中间体，后者在用N-氯代琥珀酰亚胺和三氟乙酸依序处理时，提供式IIIa的化合物。或者，式XXXII的中间体用N-溴代琥珀酰亚胺处理，得到式XXXIII的中间体。式XXXIII的中间体用三氟乙酸处理，提供式IIIb的化合物。或者，式XXXIII的中间体用乙烯基频哪醇硼酸酯和Pd(0)催化剂处理，随后用三氟乙酸处理，提供式IIIc的化合物。或者，式XXXIII的中间体用Zn(II)氰化物和Pd(0)催化剂处理，随后用三氟乙酸处理，提供式IIId的化合物。

流程11

如在流程11中概述的那样制备式IIIe-f的化合物。式XXXIV的Boc-保护的苯胺用BOC-哌嗪和Pd(II)催化剂处理，得到式XXXV的中间体。式XXXV的中间体用N-氯代琥珀酰亚胺和三氟乙酸依序处理，提供式IIIe的化合物。或者，式XXXV的中间体用N-溴代琥珀酰亚胺和三氟乙酸依序处理，提供式IIIf的化合物。

流程12

如在流程12中概述的那样制备式IIIg的化合物。将Boc-哌嗪与1,3-二氰基-2-丙醇一起加热，提供式XXVI的中间体。式XXXVI的中间体用N-氯代琥珀酰亚胺和三氟乙酸依序处理，提供式IIIg的化合物。

流程13

如在流程13中概述的那样制备式IIc的化合物。2,4-二氟-5-硝基苄腈用乙醇氨处理，提供式XXVII的中间体。[参见: Ohmori, J.; Sakamoto, S.; Kubota, H.; Shimizu-Sasamata, M. et. al. J.Med.Chem., 1994, 37(4), 467-475]。式XXXVII的中间体用Boc-哌嗪处理，提供式IIc的化合物。

流程14

如在流程14中概述的那样制备式IIIh的化合物。用Boc酸酐处理3-溴-2-氯苯胺，提供式XXXVIII的BOC-苯胺。式XXXVIII的BOC-苯胺用BOC-哌嗪和Pd(II)催化剂处理，得到式XXXIX的中间体，后者在用N-溴代琥珀酰亚胺处理时，提供式XXXX的中间体。式XXXX的中间体用Zn(II)氰化物和Pd(0)催化剂处理，得到式XXXXI的中间体，后者在用三氟乙酸处理时，提供式IIIh的化合物。

实施例

本文描述和阐述的化合物及其制备可通过以下操作实施例进一步理解。这些实施例意欲说明本发明，并且不当作是对其范围的限制。

实施例中使用的化学缩写定义如下：

“Ac”代表乙酸根，

“APCI”代表大气压化学电离，

“BEMP”代表2-叔丁基亚氨基-2-二乙基氨基-1,3-二甲基-全氢-1,3,2-二氮杂-膦杂环戊烷(phosphorine)，

“Boc”或“BOC”代表叔丁氧基羰基，

“BOP”代表苯并三唑-1-基氧基三-(二甲基氨基)磷鎓六氟磷酸盐

“Cbz”代表苄氧基羰基，

“CDI”代表1,1’-羰基二咪唑，

“CD3OD”代表氘代甲醇，

“CDCl3”代表氘代氯仿，

“DCC”代表1,3-二环己基碳二亚胺，

“DEC”代表1,2-二氯乙烷，

“DCM”代表二氯甲烷，

“DEAD”代表偶氮二甲酸二乙酯，

“DIEA”、“ Hunig’s base”或“DIPEA”代表N,N-二异丙基乙胺，

“DMF”代表N,N-二甲基甲酰胺，

“DMAP”代表4-二甲基氨基吡啶，

“DMPU”代表1,3-二甲基-3,4,5,6-四氢-2(1H)-嘧啶酮，

“DMSO”代表二甲基亚砜，

“DPPA”代表叠氮磷酸二苯酯(diphenylphosphorylazide)，

“EDC”或“EDCI”代表1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐，

“Et”代表乙基，

“EtOAC”代表乙酸乙酯，

“HOAC”代表乙酸，

“HOBt”代表1-羟基苯并三唑水合物，

“HATU”代表O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N, N, N’, N’-四甲基脲鎓六氟磷酸盐，

“HMPA”代表六甲基磷酰胺，

“LDA”代表二异丙基氨基锂，

“LiHMDS”代表双(三甲基甲硅烷基)氨基锂，

“NaHMDS”代表双(三甲基甲硅烷基)氨化钠，

“NBS”代表N-溴代琥珀酰亚胺，

“NCS”代表N-氯代琥珀酰亚胺，

“NMM”代表4-甲基吗啉，

“PyBOP”代表苯并三唑-1-基-氧基-三-吡咯烷子基-磷鎓六氟磷酸盐，

“TMSCH2N2”代表(三甲基甲硅烷基)重氮甲烷，

“TMSN3”代表叠氮基三甲基硅烷，

“TBTU”代表O-(1H-苯并三唑-1-基)-N,N,N’,N’-四甲基脲鎓四氟硼酸盐，

“TEA”代表三乙胺，

“TFA”代表三氟乙酸，和

“THF”代表四氢呋喃。

实施例中使用的缩写定义如下：“℃”代表摄氏度，“MS”代表质谱，“ESI”代表电喷雾电离质谱，“HR”代表高分辨率，“LC-MS”代表液相色谱-质谱法，“eq”代表当量，“g”代表克，“h”代表小时，“mg”代表毫克，“mL”代表毫升，“mmol”代表毫摩尔，“M”代表摩尔，“min”代表分钟，“rt”代表室温，“NMR”代表核磁共振光谱法，“tlc”代表薄层色谱法，“atm”代表大气，和“α”、“β”、“R”、“S”、“E”和“Z”为本领域技术人员熟悉的立体化学名称。

“HPLC”为本文用于高效液相色谱法的缩写。反相HPLC可使用Vydac C-18柱，用在缓冲液A中的10%-100%缓冲液B的梯度洗脱实施(缓冲液A：含有0.1%三氟乙酸的水，缓冲液B：10%水，含有0.1%三氟乙酸的90%乙腈)。如果必要，有机层可经硫酸钠干燥，除非另外指明。然而，除非另外指明，通常可应用以下条件。“LC-MS”指的是按照对于具有质谱检测器的HPLC的定义实施的高效液相色谱法。

熔点在Mel-Temp II仪器上测定，并且未校正。IR光谱在单光束Nicolet Nexus FT-IR光谱仪上得到，所述光谱仪在4.00 cm-1的分辨率下，对以KBr压片或作为在KBr板上的膜制备的样品使用16累积。质子NMR光谱(300 MHz，参照四甲基硅烷)在Varian INOUA 300、Bruker Avance 300、Avance 400或Avance 500光谱仪上获得。数据参照锁定溶剂。电喷雾电离(ESI)实验在Micromass II Platform单四极质谱仪上或在Finnigan SSQ7000质谱仪上实施。

制备型HPLC：当被描述为在“标准条件”下实施时，把样品(约20 mg)溶解于甲醇中(10 mg/mL)中，并在25 mm X 50 mm Vydac C18柱上纯化，以10 mL/分钟用在缓冲液A中的10%-100%缓冲液B的梯度洗脱5分钟(缓冲液A：含有0.1%三氟乙酸的水，缓冲液B：10%水，含有0.1%三氟乙酸的90%乙腈)。

中间体的合成

制备A：3-(2-甲氧基苯基)-5-甲基异噁唑-4-羧酸

步骤A1. 如在[Zamponi, G.W.; Stotz, S.C.; Staples, R.J.; Andro, T.M.; Nelson, J.K.; Hulubei, V.; Blumenfeld, A.; Natale, N.R. J. Med. Chem. 2003, 46, 87-96]中描述的那样，自2-甲氧基苯甲醛合成3-(2-甲氧基苯基)-5-甲基异噁唑-4-羧酸乙酯。

步骤A2. 将3-(2-甲氧基苯基)-5-甲基异噁唑-4-羧酸乙酯(12.85 g, 49.2 mmol)和氢氧化钠(9.84 g, 246 mmol)在MeOH (100 mL)和水(10 mL)中的反应混合物，于500-mL圆底烧瓶中，在65℃下搅拌20小时。真空除去MeOH，然后把浓缩的反应混合物转移至含有150 mL水和100 mL乙醚的500-mL分液漏斗中。弃去有机层。通过加入浓HCl (26 mL)酸化水层。产物沉淀并经过滤分离，且在高真空下干燥，得到10.63 g (93%, 理论产量11.47 g)。¹H NMR (400 MHz, CD₃OD) δ 2.69 (s, 3H, CH₃), 3.77 (s, 3H, OCH₃), 7.00-7.07 (m, 2H, 芳基), 7.32-7.34 (m, ¹H, 芳基), 7.43-7.48 (m, ¹H, 芳基)。

制备B：5-甲基-3-(萘-1-基)异噁唑-4-羧酸

用1-萘甲醛替代2-甲氧基苯甲醛，通过类似于制备A制备标题化合物。¹H-NMR (DMSO, 400 MHz): δ 7.83-8.22 (m, 3H), 7.4-7.7 (m, 4H), 3.5 (2H, bs), 2.74 (3H, s)。m/e 254 (M+H)⁺。

制备C：3-(2-氯-6-甲氧基苯基)-5-甲基异噁唑-4-羧酸

用2-氯-6-甲氧基苯甲醛替代2-甲氧基苯甲醛，通过类似于制备A制备标题化合物。¹H NMR (CD₃OD, 500 MHz,) δ 7.41 (1H, t, J=8.4 Hz), 7.09 (1H, d, J=7.6 Hz), 7.03 (1H, d, J=8.2 Hz), 3.76 (3H, s), 2.74 (3H, s)。

制备D：5-(2-甲氧基苯基)-3-甲基-1H-吡唑-4-羧酸

按照文献程序：El Kaim,L.; Lacroix, S. Synlett, 2000, 3, 353-354制备标题化合物。¹H-NMR (CDCl₃, 400 MHz): δ 7.28-7.40 (1H, m), 7.17-7.25 (1H, m), 6.90-7.08 (2H, m), 2.38 (3H, s)。m/e 233 (M+H)⁺。

制备E：3-(2-氯苯基)-5-甲基-1H-吡唑-4-羧酸

通过类似于制备D制备标题化合物。¹H-NMR (CDCl₃, 400 MHz): δ 7.45-7.55 (1H, m), 7.28-7.40 (2H, m), 7.25-7.27 (1H,m), 2.44 (3H, s)。

制备F：2-(2-氯苯基)-4-甲基-1H-吡咯-3-羧酸

按照文献程序：Grigg, R.; Savic, V. Chem. Commun. 2000, (10), 873-874制备标题化合物。¹H-NMR (CDCl_3, 400 MHz): δ 7.52-7.63 (1H, m), 7.41-7.48 (2H, m), 7.28-7.32 (1H,m), 6.8-6.85 (1H, m), 2.17 (3H, s)。

制备G：1-(2-甲氧基苯基)-4-甲基-1H-吡唑-5-羧酸

参考文献：Martins, M.A.P. et al.. J. Molecular Catalysis A: Chemical, 2007, 266, 100。

步骤G1. 在-10℃下，把(E)-1-乙氧基丙-1-烯(6.41 mL, 57.9 mmol)和吡啶(4.68 mL, 57.9 mmol)的混合物以6-10滴/分钟的速度加入到2,2,2-三氯乙酰氯(10.53 g, 57.9 mmol)在DCM (15 mL)中的溶液中。在加入完成后，把混合物在室温下搅拌24小时。过滤，并把滤液减压浓缩(首先水浴温度为室温，在蒸除大部分的DCM之后，把水浴温热至50℃，得到(E)-1,1,1-三氯-4-乙氧基-3-甲基丁-3-烯-2-酮(2.55 g, 10.79 mmol, 18.64%产率)。1H-NMR(500 MHz, CDCl₃): δ: 7.96 (s, 1H), 4.21 (q, J=7.1Hz, 2H), 1.94 (s, 3H), 1.41 (t, J=7.2Hz, 3H)。该物料无需进一步纯化即可进入步骤G2。

步骤G2. 将(E)-1,1,1-三氯-4-乙氧基-3-甲基丁-3-烯-2-酮(279 mg, 1.205 mmol)和(2-甲氧基苯基)肼、HCl (253 mg, 1.446 mmol)在EtOH (5 mL)中的混合物加热至回流反应3小时。冷却至室温，然后经Pre-HPLC分离，得到1-(2-甲氧基苯基)-4-甲基-1H-吡唑-5-羧酸乙酯(部分A, 30 mg, 0.113 mmol, 9.37%产率)和1-(2-甲氧基苯基)-4-甲基-1H-吡唑-3-羧酸乙酯(部分B, 41 mg, 0.154 mmol, 12.81%产率)。

。

步骤G3. 部分A的水解：向1-(2-甲氧基苯基)-4-甲基-1H-吡唑-5-羧酸乙酯(30 mg, 0.115 mmol)在MeOH (2 mL)中的溶液中加入3 N氢氧化钠(2 ml, 6.00 mmol)。将生成的混合物在室温下搅拌2小时，然后蒸发以去除溶剂。残余物用EtOAc和水处理，用6N HCl酸化至pH=2，用EtOAc分配并提取。干燥(Na₂SO₄)有机层并蒸发，得到1-(2-甲氧基苯基)-4-甲基-1H-吡唑-5-羧酸(23 mg, 0.094 mmol, 82%产率)，其无需进一步纯化即可进入下一步反应。

制备H：4-(2-甲氧基苯基)-1-甲基-1H-咪唑-5-羧酸

参考文献：Luke, R.W.A.; Jones, C.D.; McCoull, W; Hayter, B.R. WO Patent 2004013141, 2004。

步骤H1. 在室温下，向1,4-二噁烷-2,5-二醇(120 mg, 0.995 mmol)在THF (8 ml)中的溶液中加入甲胺(2.8 ml, 0.664 mmol)。将生成的混合物在室温下搅拌75分钟。然后加入1-(异氰基(甲苯磺酰基)甲基)-2-甲氧基苯(200 mg, 0.664 mmol)，同时用水浴把反应混合物保持在<30℃。把反应混合物在室温下搅拌过夜。蒸发剩下白色固体，溶于DMF中，并经Pre-HPLC纯化，得到为无色油的(4-(2-甲氧基苯基)-1-甲基-1H-咪唑-5-基)甲醇(84 mg, 0.377 mmol, 38.6%产率)。¹H-NMR (MeOD), δ:

。

步骤H2. 向(4-(2-甲氧基苯基)-1-甲基-1H-咪唑-5-基)甲醇(84 mg, 0.385 mmol)在1,4-二噁烷(5 ml)中的溶液中加入MnO₂ (147 mg, 1.693 mmol)。把混合物加热至90℃反应4小时，或者直到LC/MS显示反应完成。通过C盐过滤反应混合物并蒸发，得到4-(2-甲氧基苯基)-1-甲基-1H-咪唑-5-甲醛(78 mg, 0.325 mmol, 84%产率)，其w/o纯化用于下一步反应。

步骤H3. 向4-(2-甲氧基苯基)-1-甲基-1H-咪唑-5-甲醛(78 mg, 0.361 mmol)在丙酮(5 ml)和水(1 ml)中的溶液中加入碳酸钾(100 mg, 0.721 mmol)。在钾溶解之后，在室温下加入KMnO₄ (123 mg, 0.776 mmol)。把混合物搅拌24小时。LC/MS显示完成。通过C盐过滤混合物，w/水洗涤。自滤液蒸发丙酮，用EtOAc (2x)提取。水层w/HOAc酸化至PH=5，把体积减少至一半体积，冷冻并冻干，剩下固体，将其经Pre-HPLC纯化，得到标题化合物(41 mg, 0.173 mmol, 48%产率)。¹H-NMR (MeOD), δ: 8.06 (s, 1H), 7.41-7.36 (m, 2H), 7.05-6.99 (m, 2H), 3.98 (s, 3H), 3.80 (s, 3H)。

制备I：4-(2-氟苯基)-1-甲基-1H-咪唑-5-羧酸

通过类似于制备H，以61%的总得率制备标题化合物。¹H-NMR (DMSO), δ: 7.93 (s, 1H), 7.45-7.38 (m, 2H), 7.23-7.17 (m, 2H), 3.85 (s, 3H)。

制备J：4-(2-甲氧基苯基)-1-甲基-1H-1,2,3-三唑-5-羧酸

步骤J1：参考文献：Liliebris, C.; Larsen, S.D; Ogg, D.; Palazuk, B.J; and Pleasdale, J.E. J.Med.Chem., 2002, 45, 1785。

向丙炔酸甲酯(2, 1.314 ml, 15.41 mmol)和氧化铜(I) (1.086 g, 7.59 mmol)在DMF (20 ml)中的混悬液中加入1-碘-2-甲氧基苯(1, 1.262 ml, 9.48 mmol)。将生成的混合物在微波反应器中加热至110℃反应2小时。通过短硅胶短柱过滤反应混合物并w/EtOAc洗涤。有机层用w/1M HCl、盐水和饱和NaHCO₃洗涤，干燥(Na₂SO₄)并浓缩，剩下为粗产物的油，将其经快速层析法(SiO₂, EtOAc/己烷, 1:2)纯化，得到3-(2-甲氧基苯基)丙炔酸甲酯3 (932 mg, 4.66 mmol, 49.1%产率)。¹H-NMR ( 500 MHz, CDCl₃）， δ: 7.54 (1H, dd), 7.44 (1H, td), 6.98-6.92 (m, 2H), 3.92 (s, 3H), 3.86 ( s, 3H)。

步骤J2：将3-(2-甲氧基苯基)丙炔酸甲酯(3,932 mg, 4.90 mmol)、叠氮化钠(478 mg, 7.35 mmol)和碘甲烷(0.458 ml, 7.35 mmol)在水(7 ml)和DMF (3 ml)中的混合物在微波反应器中加热至100℃反应6小时。经Prep-HPLC (Varian, 以分钟表示的15-90B, B=90% MeOH/10% H₂O)，得到5-(2-甲氧基苯基)-1-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-羧酸甲酯(701 mg, 2.69 mmol, 55.0%产率), ¹H-NMR( 500 MHz, CD₃OD), δ: 7.52-7.56 ( m, 1H), 7.30 ( dd, 1H), 7.12, (td, 1H), 7.06, (d,1H), 3.90 (s, 3H), 3.86 (s, 3H), 3.82 (s, 3H)。和4-(2-甲氧基苯基)-1-甲基-1H-1,2,3-三唑-5-羧酸甲酯(185 mg, 0.711 mmol, 14.51%产率), ¹H-NMR( 500 MHz, CD₃OD), δ: 7.49-7.46 (m, 2H), 7.10-7.07 (m, 2H), 4.32 (s, 3H), 3.79 (s, 3H), 3.78 (s, 3H)。

步骤J3：向4-(2-甲氧基苯基)-1-甲基-1H-1,2,3-三唑-5-羧酸甲酯(183 mg, 0.74 mmol)在MeOH (5 ml)中的溶液中加入氢氧化钠(1.3 ml, 3M水溶液)。把混合物在室温下搅拌2小时，然后真空浓缩。残余物用水处理，w/乙醚(3x)洗涤以去除可能的杂质。水相用w/6M HCl酸化至pH 3，用w/EtOAc (4x)提取。干燥合并的有机层并蒸发，得到标题化合物(164 mg, 0.703 mmol, 95%产率)。¹H-NMR( 500 MHz, CD₃OD), δ: 7.46-7.42 (m, 2H), 7.09-7.05 (m, 2H), 4.32 (s, 3H), 3.73 (s, 3H)。

制备K：5-(氟甲基)-3-(2-甲氧基苯基)异噁唑-4-羧酸

步骤K1：将3-(2-甲氧基苯基)-5-甲基异噁唑-4-羧酸叔丁基酯(0.795 g, 2.75 mmol)、NBS (0.978 g, 5.50 mmol)和过氧化苯甲酰(0.033 g, 0.137 mmol)在CCl₄ (10 mL)中的溶液在90℃下搅拌16小时。把反应混合物冷却至室温并滤除固体。真空除去溶剂。产物经快速层析法(DCM, Rf 0.56)纯化，得到0.44 g (44%产率)。¹H-NMR (CDCl₃, 400 MHz): δ 7.49-7.37 (2H, m), 7.04 (1H, t, J=7.5 Hz), 6.96 (1H, d, J=8.3 Hz), 4.79 (2H, s), 3.79 (3H, s), 1.38 (9H, s)。

步骤K2：通过在Sun, H.; DiMagno, S.G., J.Am. Chem. Soc. 2005, 127, 2050-2051中描述的方法，自5-(溴甲基)-3-(2-甲氧基苯基)异噁唑-4-羧酸叔丁基酯制备5-(氟甲基)-3-(2-甲氧基苯基)异噁唑-4-羧酸叔丁基酯。

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步骤K3：5-(氟甲基)-3-(2-甲氧基苯基)异噁唑-4-羧酸叔丁基酯在室温下用TFA/DCM (1:1)处理1小时，随后真空蒸发DCM/TFA，得到标题化合物。¹H-NMR (CD₃OD, 400 MHz): δ 7.53-7.44 (1H, m), 7.42-7.35 (1H, m), 7.13-6.98 (2H, m), 5.74 (2H, d, J = 47.2 Hz), 3.78 (3H, s)。

制备L. (4-(5-氨基-2-氯-4-硝基苯基)哌嗪-1-基)(3-(2-甲氧基苯基)-5-甲基异噁唑-4-基)甲酮

将3-(2-甲氧基苯基)-5-甲基异噁唑-4-羧酸(363 mg, 1.558 mmol, 制备A)、4-氯-2-硝基-5-(哌嗪-1-基)苯胺(400 mg, 1.558 mmol, 如在[El-Abadelah, M.M.; Nazer, M.Z.; El-Abadla, N.S.; Awadallah, A.M. Asian Journal of Chemistry 1999, 11(4), 1463-1468]中描述的那样制备)、EDC (448 mg, 2.337 mmol)和N,N-二甲基吡啶-4-胺(571 mg, 4.67 mmol)在DCM (5 mL)/DMF (3 mL)中的混合物搅拌过夜。溶液用DCM稀释，然后用水洗涤3次。经快速层析法纯化，用在DCM中的20% EtOAc洗脱，提供标题化合物(286 mg, 0.606 mmol, 38.9%产率)。

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制备M. (4-(5-氨基-2,4-二氯苯基)哌嗪-1-基)(3-(2-甲氧基苯基)-5-甲基异噁唑-4-基)甲酮

步骤M1：向3-溴-4-氯苯胺(2.26 g, 10.95 mmol)在DCM (20 mL)的溶液中加入三乙胺(3.32 g, 32.8 mmol)。把溶液冷却至0℃，随后加入二碳酸二叔丁基酯(2.87 g, 13.14 mmol)。去除冰水浴并加入N,N-二甲基吡啶-4-胺(1.337 g, 10.95 mmol)。将生成的反应混合物在室温下搅拌过夜。产物经快速层析法(己烷/DCM, 1:1, Rf 0.45)纯化，得到2.96 g (88%产率)。¹H- 。

步骤M2：将3-溴-4-氯苯基氨基甲酸叔丁基酯(1.39 g, 4.53 mmol)、哌嗪-1-羧酸叔丁基酯(1.689 g, 9.07 mmol)、二乙酰氧基钯(0.127 g, 0.567 mmol)、2,2’-双(二苯基膦基)-1,1’-联萘(0.282 g, 0.453 mmol)和碳酸铯(1.847 g, 5.67 mmol)在甲苯(10 mL)中的反应混合物在110℃下搅拌过夜。在反应混合物冷却至室温后加入水(150 mL)，并用DCM (3 X 120 mL)提取产物。产物经快速层析法(5% EtOAc/DCM, Rf 0.45)纯化，得到1.11 g (59%产率)。

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步骤M3：向4-(3-(叔丁氧基羰基氨基)-4-氯苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁基酯(570 mg, 1.384 mmol)在DCM (3 mL)和甲醇(6 mL)中的于-40℃下的溶液中加入三氟乙酸(0.107 mL, 1.384 mmol)在1.5 mL的DCM中的溶液。加入NCS (222 mg, 1.661 mmol)，并使温度缓慢升至室温。把反应混合物在室温下搅拌过夜。加入饱和NaHCO₃水溶液(50 mL)，并用DCM (3 X 50 mL)提取产物。产物经快速层析法(5% EtOAc/DCM, Rf 0.73)纯化，得到0.452 g (73%产率)。

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步骤M4：将4-(5-(叔丁氧基羰基氨基)-2,4-二氯苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁基酯(94.8 mg, 0.212 mmol)在三氟乙酸(0.5 mL, 6.49 mmol)和DCM (0.5 mL)中的溶液在室温下搅拌1小时。蒸发溶剂，得到97 mg产物(96%产率)。¹H-NMR (CD₃OD, 400 MHz): δ 7.23 (1H, s), 6.64 (1H, s), 3.37 (4H, t, J=5.0Hz), 3.22 (4H, t, J=5.0Hz)。

步骤M5：将3-(2-甲氧基苯基)-5-甲基异噁唑-4-羧酸(0.131 g, 0.561 mmol)、2,4-二氯-5-(哌嗪-1-基)苯胺、2 TFA (0.253 g, 0.534 mmol)、EDC (0.123 g, 0.641 mmol)和DMAP (0.130 g, 1.07 mmol)在DCM (4 mL)中的反应混合物在室温下搅拌过夜。粗产物经快速层析法(MeOH/DCM, 梯度2%-4%, Rf 0.31含有3% MeOH)纯化，得到0.221 g的标题化合物(90%产率)。

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制备N. (4-(5-氨基-4-溴-2-氯苯基)哌嗪-1-基l)(3-(2-甲氧基苯基)-5-甲基异噁唑-4-基)甲酮

步骤N1：向4-(5-(叔丁氧基羰基氨基)-2-氯苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁基酯(363 mg, 0.881 mmol, 经制备M的步骤M2得到)在DCM (10 mL)和甲醇(5 mL)中的溶液中加入NBS (157 mg, 0.881 mmol)。将生成的反应混合物在室温下搅拌1小时。LCMS显示反应完成。真空蒸发溶剂，并经快速层析法(5% EtOAc/DCM)纯化产物，得到435 mg (82%产率)。

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步骤N2：通过类似于制备M的步骤M4实施该反应。

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步骤N3：通过类似于制备M的步骤M5实施该反应，提供标题化合物。

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制备O. N-(4-氯-2-硝基-5-(哌嗪-1-基)苯基)-4-(二甲基氨基)苯甲酰胺

步骤O1：将4-氯-2-硝基-5-(哌嗪-1-基)苯胺(1.4 g, 5.45 mmol, 如在 [El-Abadelah, M.M.; Nazer, M.Z.; El-Abadla, N.S.; Awadallah, A.M. Asian Journal of Chemistry 1999, 11(4), 1463-1468.]中描述的那样制备)、二碳酸二叔丁基酯(1.190 g, 5.45 mmol)和三乙胺(0.552 g, 5.45 mmol)在DCM (50 mL)中的混合物搅拌2小时。在去除溶剂后，经硅胶柱纯化混合物，用在DCM 中的2% EtOAc洗脱，得到4-(5-氨基-2-氯-4-硝基苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁基酯(1.8 g, 91%)。¹H-NMR (CDCl_3, 500 MHz): δ 8.16 (1H, s), 6.22 (1H, s), 3.61 (4H, m), 3.09 (4H, m), 1.49 (9H, s)。

步骤O2：将4-(5-氨基-2-氯-4-硝基苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁基酯(1.2 g, 3.36 mmol)、4-(N,N-二甲基氨基)苯甲酰氯(803 mg, 4.37 mmol)、BEMP (1846 mg, 6.73 mmol)和DMAP (411 mg, 3.36 mmol)在DCE (体积: 15 ml)中的混合物在85℃下加热4小时。冷却下来并用几滴哌啶处理1小时。在去除溶剂并用MeOH稀释混合物后，形成橙色的沉淀。过滤并用MeOH洗涤，得到4-(2-氯-5-(4-(二甲基氨基)苯甲酰氨基)-4-硝基苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁基酯(1.2 g, 2.381 mmol, 70.8%产率)。

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步骤O3：将4-(2-氯-5-(4-(二甲基氨基)苯甲酰氨基)-4-硝基苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁基酯(1.2 g, 2.381 mmol)在TFA/DCM (50%, 10 ml)中搅拌1小时。在去除溶剂并真空干燥残余物后，得到为其TFA盐的标题化合物(1.5 g, 2.374 mmol, 100%)。

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制备P. 2-氨基-5-氯-4-(4-(3-(2-甲氧基苯基)-5-甲基异噁唑-4-羰基)哌嗪-1-基)苄腈

步骤P1：向4-(4-溴-5-(叔丁氧基羰基氨基)-2-氯苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁基酯(1.11 g, 2.26 mmol, 经制备N的步骤N1得到)和二氰基锌(159 mg, 1.36 mmol)的混合物中加入DMF (22 mL)和水(0.30 mL)。向混合物中鼓泡通入氮气5分钟，随后加入Pd₂(dba)₃ (2.69 mg, 2.94 μmol)和DPPF (2.0 mg, 3.61 μmol)。将生成的混合物在120℃下加热4小时。产物经快速层析法(EtOAc/DCM, 梯度5%-10%)纯化，得到0.35 g的标题化合物

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步骤P2：将4-(5-氨基-2-氯-4-氰基苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁基酯(14 mg, 0.042 mmol)和TFA (0.2 mL, 2.60 mmol)在DCM (0.2 mL)中的溶液在室温下搅拌1小时。真空蒸发溶剂，得到产物。

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步骤P3：将3-(2-甲氧基苯基)-5-甲基异噁唑-4-羧酸(10.00 mg, 0.043 mmol)、2-氨基-5-氯-4-(哌嗪-1-基)苄腈、2 TFA (16.6 mg, 0.036 mmol)、EDC (9.59 mg, 0.050 mmol)和DMAP (8.73 mg, 0.071 mmol)在DCM (1 mL)中的反应混合物在室温下搅拌过夜。产物经制备型HPLC (0.1% TFA MeOH/H₂O)纯化，得到11 mg (52%产率)的标题化合物。

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制备Q. (4-(5-氨基-2,4-二氯苯基)哌嗪-1-基)(5-(氟甲基)-3-(2-甲氧基苯基)异噁唑-4-基)甲酮

用制备K替代3-(2-甲氧基苯基)-5-甲基异噁唑-4-羧酸，通过类似于制备M的步骤M5合成制备Q。

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制备R. 4-氨基-5-氯-2-(4-(3-(2-甲氧基苯基)-5-甲基异噁唑-4-羰基)哌嗪-1-基)苄腈

步骤R1：向在DCM (15 mL)中的5-溴-2-氯苯胺(2.917 g, 14.13 mmol)中加入三乙胺(5.91 mL, 42.4 mmol)。使反应物冷却至0℃，并加入二碳酸二叔丁基酯(3.94 mL, 16.95 mmol)。将反应物温热至环境温度，并加入DMAP (1.726 g, 14.13 mmol)。在1分钟内观察到剧烈鼓泡和沉淀。把反应混合物在室温下搅拌16小时。产物经快速层析法(DCM/己烷1:1, Rf0.61)纯化，得到4.21 g (97%产率)。

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步骤R2：把5-溴-2-氯苯基氨基甲酸叔丁基酯(0.598 g, 1.951 mmol)、哌嗪-1-羧酸叔丁基酯(0.727 g, 3.90 mmol)、二乙酰氧基钯(0.055 g, 0.244 mmol)、2,2’-双(二苯基膦基)-1,1’-联萘(0.121 g, 0.195 mmol)和碳酸铯(0.794 g, 2.438 mmol)在甲苯(15 mL)中的反应混合物在110℃下搅拌过夜。在反应混合物冷却至室温后加入水(150 mL)，并用DCM (3 X 120 mL)提取产物。产物经快速层析法(5% EtOAc/DCM, Rf 0.45)纯化，得到0.56 g (69%产率)。

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步骤R3：将4-(3-(叔丁氧基羰基氨基)-4-氯苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁基酯(190 mg, 0.461 mmol)和NBS (82 mg, 0.461 mmol)在DCM (4 mL)和MeOH (2 mL)中的反应混合物在室温下搅拌1小时。蒸发溶剂并经快速层析法(5% EtOAc/DCM)纯化产物，得到216 mg (95%产率)。

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步骤R4：按照如在[Maligres, P.E. Tetrahedron Lett. 1999, 40, 8193-8195]中描述的程序。产物经制备型HPLC (0.1% TFA MeOH/H₂O)纯化，得到60 mg (42%产率)。

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步骤R5：将4-(5-氨基-4-氯-2-氰基苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁基酯(144 mg, 0.428 mmol)和TFA (2 mL, 26.0 mmol)在DCM (2 ml)中的溶液在室温下搅拌1小时。真空蒸发溶剂，得到产物。

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步骤R6：向3-(2-甲氧基苯基)-5-甲基异噁唑-4-羧酸(25.09 mg, 0.108 mmol)、4-氨基-5-氯-2-(哌嗪-1-基)苄腈、2 TFA (50 mg, 0.108 mmol)和HATU (49.1 mg, 0.129 mmol)在NMP (1.5 mL)中的混合物中加入DIEA (0.045 mL, 0.258 mmol)。把反应混合物在室温下搅拌过夜。

粗产物经制备型HPLC (0.1% TFA MeOH/H₂O)纯化，得到20 mg (41%产率)的标题化合物。

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制备S. (4-(5-氨基-2-氯-4-乙烯基苯基)哌嗪-1-基)(3-(2-甲氧基苯基)-5-甲基异噁唑-4-基)甲酮

步骤S1：在100-mL圆底烧瓶中，将4-(4-溴-5-(叔丁氧基羰基氨基)-2-氯苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁基酯(162 mg, 0.330 mmol, 经制备N的步骤N1得到)溶解于DMF (4 mL)中，随后加入4,4,5,5-四甲基-2-乙烯基-1,3,2-二氧杂戊硼烷(50.8 mg, 0.330 mmol)和磷酸三钾(0.495 mL, 0.990 mmol)。使氮气鼓泡通过溶液10分钟。加入Pd(Ph₃P)₄(19.07 mg, 0.017 mmol)，并把反应混合物在85℃下搅拌16小时。使反应混合物冷却至室温，随后加入30 mL水。用乙酸乙酯(3 X 30 mL)提取产物。合并的提取液经无水硫酸钠干燥，后者经过滤去除。

产物经快速层析法(硅胶, 5% EtOAc/DCM, Rf 0.67)纯化，得到75 mg (52%产率)。

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步骤S2：将4-(5-(叔丁氧基羰基氨基)-2-氯-4-乙烯基苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁基酯在室温下用三氟乙酸与DCM的1:1混合物处理1小时，得到脱保护的产物。

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步骤S3：向3-(2-甲氧基苯基)-5-甲基异噁唑-4-羧酸(0.182 g, 0.779 mmol)、4-氯-5-(哌嗪-1-基)-2-乙烯基苯胺、2 TFA (0.279 g, 0.599 mmol)和HATU (0.296 g, 0.779 mmol)在100-mL圆底烧瓶中的混合物中加入NMP (5.5 mL)和三乙胺(0.145 g, 1.438 mmol)。将生成的溶液在室温下搅拌13小时。向反应混合物中加入水(50 mL)和DCM (50 mL)，并以分液漏斗分离这两相。用DCM (2 X 40 mL)提取水相。经旋转蒸发仪蒸发溶剂。产物经制备型HPLC (乙腈/水-10 nM乙酸铵)纯化，得到0.146 g (54%产率)的标题化合物。

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制备T. 4-(1H-1,2,4-三唑-1-基)苯甲酰氯

将在氯化亚砜(2 ml)中的4-(1H-1,2,4-三唑-1-基)苯甲酸(100 mg, 0.529 mmol)在110℃下回流2小时。在去除过量的SOCl₂后，真空干燥残余物，得到为白色固体的4-(1H-1,2,4-三唑-1-基)苯甲酰氯(110 mg, 0.529 mmol, 100%产率)，其无需进一步纯化即可用于随后的反应。

制备U. 4-(1H-四唑-1-基)苯甲酰氯

通过类似于制备T制备标题化合物。

制备V. 4-(N-甲基甲磺酰氨基)苯甲酰氯

通过类似于制备T制备标题化合物。

制备W. 4-(1,1-二氧化异噻唑烷-2-基)苯甲酰氯

通过类似于制备T制备标题化合物。

制备X. 4-(1H-1,2,3-三唑-1-基)苯甲酰氯

步骤X1：将在硫酸(3 mL, 0.00 μmol) (50%, 3 ml)中的4-(1H-1,2,3-三唑-1-基)苄腈(200 mg, 1.175 mmol, 如在WO 2006/067462 PCT/GB2005/005007第57页中描述的那样制备)在120℃下回流4小时。冷却下来，用水稀释并用NaOH和Na₂CO₃将pH调节至4，然后用乙酸乙酯提取。在去除溶剂后，得到白色固体4-(1H-1,2,3-三唑-1-基)苯甲酸(180 mg, 0.952 mmol, 81%产率)。

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步骤X2：通过类似于制备T制备标题化合物。

制备Y. 4-(1H-1,2,4-三唑-1-基)苯甲酰氯

通过类似于制备T制备标题化合物。

制备Z. 4-(2,4-二氧代咪唑烷-1-基)苯甲酰氯

通过类似于制备T制备标题化合物。

制备AA. 4-(2H-1,2,3-三唑-2-基)苯甲酰氯

步骤AA1：将在硫酸(1 g, 5.10 mmol) (50%, 5 ml)中的4-(2H-1,2,3-三唑-2-基)苄腈(170 mg, 0.999 mmol , 如在WO 2006/067462 PCT/GB2005/005007第57页中描述的那样制备)在120℃油浴中回流4小时。冷却下来并把混合物倾入到水中，且用NaOH和Na₂CO₃将pH调节至3-4。形成白色沉淀。用乙酸乙酯提取并排掉，得到标题化合物(170 mg, 0.899 mmol, 90%产率)。¹H-NMR (CD₃OD-d_4, 500 MHz): δ 8.18 (4H, d, J=1.22Hz), 7.89 (2H, s)。

步骤AA2：通过类似于制备T制备标题化合物。

制备AB. 4-(2-氧代吡咯烷-1-基)苯甲酰氯

向4-(2-氧代吡咯烷-1-基)苯甲酸(19.94 mg, 0.097 mmol)在DCM (5 ml)中的混悬液中加入草酰氯(在DCM中的2M 溶液, 0.058 ml, 0.117 mmol)和2滴DMF。将生成的混合物在室温下搅拌1小时，然后真空浓缩。残余物(灰白色固体)无需进一步纯化即可用于随后的反应。

制备AC. 4-(6-氨基-3,5-二氯吡啶-2-基)哌嗪-1-基)(3-(2-甲氧基苯基)-5-甲基异噁唑-4-基)甲酮

步骤AC1：将3-羟基戊二腈(2555 mg, 23.20 mmol)、哌嗪-1-羧酸叔丁基酯(4322 mg, 23.20 mmol)和氯化铜(I) (150 mg, 1.515 mmol)在MeOH (9.5 ml)中的混合物在160℃下，于密封管中加热1.5小时。用MeOH稀释并通过C盐过滤，以去除CuCl。浓缩滤液，并经硅胶柱纯化残余物，先后用DCM和3% EtOAC/DCM洗脱，得到白色固体4,4’-(吡啶-2,6-二基)二哌嗪-1-羧酸叔丁基酯(2.5g, 5.59 mmol, 24.07%产率)。用10% EtOAc/DCM快速层析化，得到为油的4-(6-氨基吡啶-2-基)哌嗪-1-羧酸叔丁基酯(1.8 g, 6.47 mmol, 27.9%产率)。

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步骤AC2：将4-(6-氨基吡啶-2-基)哌嗪-1-羧酸叔丁基酯(320 mg, 1.150 mmol)和NCS (307 mg, 2.299 mmol)在四氯化碳(10 mL)/CH₂Cl₂ (5.00 mL)中的混合物在40℃下回流2小时。在硅胶柱上纯化，先后用DCM和在DCM中的2% EtOAc洗脱，得到4-(6-氨基-3,5-二氯吡啶-2-基)哌嗪-1-羧酸叔丁基酯(110 mg, 0.305 mmol, 26.5%产率)。¹H-NMR (CDCl_3, 500 MHz): δ 7.39 (1H, s), 4.71 (2H, s), 3.53 (4H, m), 3.21 (4H, m), 1.47 (9H, s)。

步骤AC3：将4-(6-氨基-3,5-二氯吡啶-2-基)哌嗪-1-羧酸叔丁基酯(110 mg, 0.305 mmol)用50% TFA/DCM处理1小时，然后排掉并真空干燥，得到3,5-二氯-6-(哌嗪-1-基)吡啶-2-胺(110 mg, 0.305 mmol)。

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步骤AC4：将3-(2-甲氧基苯基)-5-甲基异噁唑-4-羧酸(71.0 mg, 0.305 mmol, 制备A)、3,5-二氯-6-(哌嗪-1-基)吡啶-2-胺(110 mg, 0.305 mmol)、EDC (76 mg, 0.396 mmol)和DMAP (112 mg, 0.914 mmol)在DCM (2 mL)中的混合物在室温下搅拌3小时。HPLC纯化，得到标题化合物(91 mg, 0.193 mmol, 白色固体, 63.3%产率)。

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制备AD：(4-(5-氨基-2-氯-4-甲基苯基)哌嗪-1-基)(3-(2-甲氧基苯基)-5-甲基异噁唑-4-基)甲酮

步骤AD1：把哌嗪-1-羧酸叔丁基酯(5.47 g, 29.4 mmol)、5-溴-2-甲基苯基氨基甲酸叔丁基酯(2.8 g, 9.78 mmol)、二环己基(2’,4’,6’-三异丙基联苯-2-基)膦(0.233 g, 0.489 mmol)、二乙酰氧基钯(0.066 g, 0.294 mmol)和反应物5 (9.56 g, 29.4 mmol) (Cs₂CO₃)在甲苯(45 mL)中的混合物在100-110℃下加热2天。在去除溶剂后，使残余物溶于乙酸乙酯中并用水洗涤。在去除EtOAc后，将残余物经柱纯化，先后用DCM和EtOAc/DCM (2%)洗脱，得到4-(3-(叔丁氧基羰基氨基)-4-甲基苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁基酯(2.5 g, 6.39 mmol, 65.3%产率, 白色固体)。

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步骤AD2：将4-(3-(叔丁氧基羰基氨基)-4-甲基苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁基酯(100 mg, 0.255 mmol)和NCS (37.5 mg, 0.281 mmol)在DCM (2 mL)中的混合物搅拌过夜。HPLC纯化，得到4-(5-(叔丁氧基羰基氨基)-2-氯-4-甲基苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁基酯, TFA (100 mg, 0.185 mmol, 72.5%产率)。

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步骤AD3：将4-(5-(叔丁氧基羰基氨基)-2-氯-4-甲基苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁基酯, TFA (100 mg, 0.185 mmol )用50% TFA/DCM处理1小时。在去除溶剂后，真空干燥残余物。

步骤AD4：用来自步骤AD3的产物替代4-氯-2-硝基-5-(哌嗪-1-基)苯胺，通过类似于制备L制备标题化合物。¹H-NMR

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制备AE. (4-(5-氨基-2-溴-4-甲基苯基)哌嗪-1-基)(3-(2-甲氧基苯基)-5-甲基异噁唑-4-基)甲酮.

用NBS替代步骤AD2中的NCS，通过类似于制备AD进行制备。

。

制备AF. (4-(6-氨基-3-氯-5-硝基吡啶-2-基)哌嗪-1-基)(3-(2-甲氧基苯基)-5-甲基异噁唑-4-基)甲酮

步骤AF1：向5,6-二氯-3-硝基吡啶-2-胺(40 mg, 0.192 mmol, 如在[Micheli, F.; Cugola, A.; Donati, D.; Missio, A.; Pecunioso, A.; Reggiani, A.; Tarzia, G. Bioorg. Med. Chem., 1997, 5(12), 2129]中描述的那样制备)和哌嗪-1-羧酸叔丁基酯(43.0 mg, 0.231 mmol)的混合物中先后加入CH₂Cl₂ (5 ml)和DIEA (0.050 ml, 0.288 mmol)。把反应混合物在室温下搅拌3小时。减压蒸发溶剂，并把产物无需进一步纯化即可直接用于下一步骤。¹H NMR (500 MHz, MeOD) δ ppm 8.30 (1H, s), 3.64-3.71 (4H, m), 3.57 (4H, br.s.), 1.50 (9H, s)。

步骤AF2：将4-(6-氨基-3-氯-5-硝基吡啶-2-基)哌嗪-1-羧酸叔丁基酯(0.192 mmol)用在二氯甲烷(2 ml)中的50% TFA处理。把反应混合物在室温下搅拌?小时。蒸发溶剂并将残余物在真空泵下干燥，得到5-氯-3-硝基-6-(哌嗪-1-基)吡啶-2-胺, TFA盐。LCMS-Phenomenex Luna C18 3.0 x 50 mm S10, 0-100% B梯度经2.0分钟，保持1分钟时间, A=10%乙腈/90%水/0.1% TFA, B=90%乙腈/10%水/0.1% TFA。流速: 4 ml/分钟。保留时间: 0.630分钟, m/e 258.02 (M+1)⁺。

步骤AF3：向5-氯-3-硝基-6-(哌嗪-1-基)吡啶-2-胺, TFA (0.192 mmol)在DMF (2 ml)中的溶液中加入DIEA (0.134 ml, 0.768 mmol)、3-(2-甲氧基苯基)-5-甲基异噁唑-4-羧酸(44.8 mg, 0.192 mmol)和HATU (73.0 mg, 0.192 mmol)。将反应物在室温下搅拌1小时。反应混合物经制备型HPLC纯化，得到69 mg (3步73.7%)的标题化合物。

。

制备AG. 4-氨基-2-(4-(3-(2-甲氧基苯基)-5-甲基异噁唑-4-羰基)哌嗪-1-基)-5-硝基苄腈

步骤AG1：在室温下，向2,4-二氟-5-硝基苄腈(2 g, 10.86 mmol, 如在 [Ohmori, J.; Sakamoto, S. et. al. J. Med.Chem., 1994, 37(4),467-475]中描述的那样制备)在乙醇(1.25 ml)中的混合物中加入氨(6.25 mL, 10.86 mmol)。把混合物搅拌过夜。过滤以收集沉淀，用w/H₂O (3x)洗涤。把固体真空干燥24小时，得到1.9 g的4-氨基-2-氟-5-硝基苄腈(1.8 g, 9.44 mmol, 87%产率)，其无需进一步纯化即可用于下一步反应。

。

步骤AG2：向4-氨基-2-氟-5-硝基苄腈(132 mg, 0.730 mmol)和哌嗪-1-羧酸叔丁基酯(136 mg, 0.730 mmol)在DMF (3 ml)中的溶液中加入三乙胺(0.102 ml, 0.730 mmol)。把混合物在微波反应器中加热至80℃反应50分钟，冷却至室温，经制备型HPLC纯化，得到4-(5-氨基-2-氰基-4-硝基苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁基酯(120 mg, 0.328 mmol, 44.9%产率)。¹H-

。

步骤AG3：用4-(5-氨基-2-氰基-4-硝基苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁基酯替代4-(6-氨基-3-氯-5-硝基吡啶-2-基)哌嗪-1-羧酸叔丁基酯，通过类似于制备AF的步骤AF2，制备4-氨基-5-硝基-2-(哌嗪-1-基)苄腈。

步骤AG4：用4-氨基-5-硝基-2-(哌嗪-1-基)苄腈替代5-氯-3-硝基-6-(哌嗪-1-基)吡啶-2-胺，通过类似于制备AF的步骤AF3，制备标题化合物。

。

制备AH. N-(4-氯-2-硝基-5-(哌嗪-1-基)苯基)-4-(甲基亚磺酰氨基)苯甲酰胺

步骤AH1：如在实施例50中描述的那样制备N-(4-氯-5-(4-(3-(2-甲氧基苯基)-5-甲基异噁唑-4-羰基)哌嗪-1-基)-2-硝基苯基)-4-(甲基亚磺酰氨基)苯甲酰胺。

。

步骤AH2：N-(4-氯-5-(4-(3-(2-甲氧基苯基)-5-甲基异噁唑-4-羰基)哌嗪-1-基)-2-硝基苯基)-4-(甲基亚磺酰氨基)苯甲酰胺如在实施例117中描述的那样用三溴化硼进行处理。把粗产物(140 mg)在室温下，用在DCM (4.0 mL)中的0.8 M三氟乙酸处理过夜。真空蒸发溶剂，并经制备型HPLC (0.1% TFA MeOH/ H₂O)纯化产物，得到53 mg (55%产率)的标题化合物。

。

制备AI. 4-(5-氨基-4-溴-2-氯苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁基酯

向2-溴-4-氯-5-(哌嗪-1-基)苯胺, 3 TFA (128 mg, 0.202 mmol, 如在制备N的步骤N2中描述的那样制备)和DIEA (0.106 mL, 0.607 mmol)在DCM (4.5 mL)中的溶液中加入二碳酸二叔丁基酯(0.047 mL, 0.202 mmol)。把溶液在室温下搅拌1小时。蒸发溶剂并经快速层析法(10%乙醚/DCM, Rf 0.6)纯化残余物，得到55 mg (70%产率)。

。

制备AJ. 4-(氯羰基)苯基氨基甲酸叔丁基酯

通过类似于制备AB制备标题化合物。

制备AK. 4-(2-氧代-1,3-噁嗪-3-基)苯甲酰氯

通过类似于制备AB制备标题化合物。

制备AL. 4-(2-氧代噁唑烷-3-基)苯甲酰氯

通过类似于制备AB制备标题化合物。

制备AM. 4-(二甲基氨基甲酰基)苯甲酰氯

步骤AM1：在室温下，向4-(甲氧基羰基)苯甲酸(100 mg, 0.555 mmol)在THF (5 ml)中的溶液中加入HATU (211 mg, 0.555 mmol)、二甲胺(0.278 ml, 0.555 mmol)和三乙胺(0.077 ml, 0.555 mmol)。把混合物在室温下搅拌4小时。蒸发以去除溶剂。将残余物溶于EtOAc (10 ml)中，用w/水(3x)、盐水洗涤。干燥(Na₂SO₄)并蒸发，得到为固体的4-(二甲基氨基甲酰基)苯甲酸甲酯(100 mg, 0.458 mmol, 83%产率)。¹H-NMR

。

步骤AM2：向4-(二甲基氨基甲酰基)苯甲酸甲酯(100 mg, 0.483 mmol, 来自以上制备的粗品)在MeOH (4 ml)中的溶液中加入LiOH (1 ml, 3.00 mmol)。把混合物在室温下搅拌1.5小时。蒸发以去除溶剂。将残余物溶于水(3 ml)中，用w/6M HCl中和至PH=3，用w/EtOAc (3x)提取。干燥(Na₂SO₄)合并的有机层并蒸发，得到为固体的4-(二甲基氨基甲酰基)苯甲酸(64 mg, 0.315 mmol, 65.2%产率)，其直接用于下一步反应。

步骤AM3：通过类似于制备AB，自步骤AM2的产物制备标题化合物。

制备AN. 4-(2-氧代咪唑烷-1-基)苯甲酰氯

通过类似于制备AB制备标题化合物。

制备AO. 4-(5-甲基-1,3,4-噁二唑-2-基)苯甲酰氯

通过类似于制备T制备标题化合物。

制备AP. 4-(2-氧代哌啶-1-基)苯甲酰氯

通过类似于制备AB制备标题化合物。

实施例1

N-(4-氯-5-(4-(3-(2-甲氧基苯基)-5-甲基异噁唑-4-羰基)哌嗪-1-基)-2-硝基苯基)-4-甲氧基苯甲酰胺

将(4-(5-氨基-2-氯-4-硝基苯基)哌嗪-1-基)(3-(2-甲氧基苯基)-5-甲基异噁唑-4-基)甲酮(16 mg, 0.034 mmol, 制备L)、4-甲氧基苯甲酰氯(12 mg, 0.068 mmol)、DMAP (6 mg, 0.034 mmol)和BEMP (19 mg, 0.068 mmol)在DCE (1 mL)中的混合物在80℃下加热3小时。冷却至室温，把混合物用哌啶(0.3 ml)处理1小时并真空浓缩。HPLC纯化，得到标题化合物(15.7 mg, 0.025 mmol, 74.9%产率)。

。

实施例2-40

用合适的酰氯制备替代4-甲氧基苯甲酰氯，通过类似于实施例1合成实施例2-40。

实施例43-46

用制备AF替代制备L和用合适的酰氯制备替代4-甲氧基苯甲酰氯，通过类似于实施例1合成实施例43-46。

实施例47

N-(4-氯-5-(4-(3-(2-甲氧基苯基)-5-甲基异噁唑-4-羰基)哌嗪-1-基)-2-硝基苯基)-4-(2-氧代吡咯烷-1-基)苯甲酰胺

向(4-(5-氨基-2-氯-4-硝基苯基)哌嗪-1-基)(3-(2-甲氧基苯基)-5-甲基异噁唑-4-基)甲酮(制备L, 27 mg, 0.046 mmol)和4-(2-氧代吡咯烷-1-基)苯甲酸(18.91 mg, 0.092 mmol)在乙腈(3 ml)中的溶液中加入三氯化膦(12.66 mg, 0.092 mmol)。将生成的混合物在微波反应器中加热至150℃反应50分钟。冷却至室温，并用水猝灭，蒸发以去除溶剂。残余物用EtOAc处理，用w/EtOAc (3x)提取。干燥合并的有机层并蒸发。经制备型HPLC纯化，得到N-(4-氯-5-(4-(3-(2-甲氧基苯基)-5-甲基异噁唑-4-羰基)哌嗪-1-基)-2-硝基苯基)-4-(2-氧代吡咯烷-1-基)苯甲酰胺, TFA (7.8 mg, 9.58 μmol, 20.80%产率)。

。

实施例48

N-(4-氯-5-(4-(3-(2-甲氧基苯基)-5-甲基异噁唑-4-羰基)哌嗪-1-基)-2-硝基苯基)-4-(吡咯烷-1-基)苯甲酰胺

用4-(吡咯烷-1-基)苯甲酸替代4-(2-氧代吡咯烷-1-基)苯甲酸，通过类似于实施例47合成实施例48。HPLC/MS (方法D): (ES⁺) m/z (M+H)⁺=645; R_t=2.12分钟。

实施例49

N-(4-氯-5-(4-(3-(2-甲氧基苯基)-5-甲基异噁唑-4-羰基)哌嗪-1-基)-2-硝基苯基)-4-(2,5-二氧代吡咯烷-1-基)苯甲酰胺

用4-(2,5-二氧代吡咯烷-1-基)苯甲酸替代4-(2-氧代吡咯烷-1-基)苯甲酸，通过类似于实施例47合成实施例49。HPLC/MS (方法D): (ES⁺) m/z (M+H)⁺=673; R_t=1.71分钟。

实施例50

N-(4-氯-5-(4-(3-(2-甲氧基苯基)-5-甲基异噁唑-4-羰基)哌嗪-1-基)-2-硝基苯基)-4-(甲基亚磺酰氨基)苯甲酰胺

用4-(甲基亚磺酰氨基)苯甲酸替代4-(2-氧代吡咯烷-1-基)苯甲酸，通过类似于实施例47合成实施例50。HPLC/MS (方法H): (ES⁺) m/z (M+H)⁺=669; R_t=1.87分钟。

实施例51-68

用合适的胺制备替代制备L和用合适的酰氯制备替代4-甲氧基苯甲酰氯，通过类似于实施例1合成实施例51-68。

实施例69

N-(2,4-二氯-5-(4-(5-(氟甲基)-3-(2-甲氧基苯基)异噁唑-4-羰基)哌嗪-1-基)苯基)-4-(二甲基氨基)苯甲酰胺

用制备Q替代制备L和用4-(N,N-二甲基氨基)苯甲酰氯替代4-甲氧基苯甲酰氯，通过类似于实施例1合成实施例69。HPLC/MS (方法H): (ES⁺) m/z (M+H)⁺=626; R_t=2.02分钟。

实施例70

N-(4-氯-5-(4-(3-(2-甲氧基苯基)-5-甲基-1H-吡唑-4-羰基)哌嗪-1-基)-2-硝基苯基)-4-(二甲基氨基)苯甲酰胺

向N-(4-氯-2-硝基-5-(哌嗪-1-基)苯基)-4-(二甲基氨基)苯甲酰胺, 2 TFA (制备D, 35 mg, 0.055 mmol)在DMF (2 ml)中的溶液中先后加入3-(2-甲氧基苯基)-5-甲基-1H-吡唑-4-羧酸(制备O, 15.44 mg, 0.066 mmol)、HATU (25.3 mg, 0.066 mmol)和DIEA (0.048 ml, 0.277 mmol)。将反应物在室温下搅拌10分钟。经制备型HPLC纯化，得到14 mg (33%)的标题化合物。HPLC/MS (方法SZ6): (ES⁺) m/z (M+H)⁺=618; R_t=2.98分钟。

实施例71-76

用合适的杂环制备替代制备D，通过类似于实施例70制备实施例71-76。

实施例77

N-(4-氯-5-(4-(5-甲基-3-(萘-1-基)异噁唑-4-羰基)哌嗪-1-基)-2-硝基苯基)-4-甲氧基苯甲酰胺

步骤77A.

(4-(5-氨基-2-氯-4-硝基苯基)哌嗪-1-基)(5-甲基-3-(萘-1-基)异噁唑-4-基)甲酮

将3-(1-萘基)-5-甲基异噁唑-4-羧酸(394 mg, 1.558 mmol)、4-氯-2-硝基-5-(哌嗪-1-基)苯胺(400 mg, 1.558 mmol, 如在[El-Abadelah, M.M.; Nazer, M.Z.; El-Abadla, N.S.; Awadallah, A.M. Asian Journal of Chemistry 1999, 11(4), 1463-1468]中描述的那样制备)、EDC (448 mg, 2.337 mmol)和DMAP (571 mg, 4.67 mmol)在DCM (5 mL)/DMF (3 mL)中的混合物搅拌过夜。

步骤77B.

用来自步骤77A的产物替代制备L，通过类似于实施例1合成实施例77。HPLC/MS (方法J): (ES⁺) m/z (M+H)⁺=626; R_t=2.22分钟。

实施例78

N-(4-氯-5-(4-(5-甲基-3-(萘-1-基)异噁唑-4-羰基)哌嗪-1-基)-2-硝基苯基)噻唑-2-甲酰胺

用噻唑-2-甲酰氯替代步骤77B中的对-甲氧基苯甲酰氯，通过类似于实施例77合成实施例78。HPLC/MS (方法J): (ES⁺) m/z (M+H)⁺=603; Rt=2.16分钟。

实施例79

N-(4-氯-5-(4-(3-(4-氟苯基)-5-甲基异噁唑-4-羰基)哌嗪-1-基)-2-硝基苯基)-4-(二甲基氨基)苯甲酰胺

步骤79A.

(4-(5-氨基-2-氯-4-硝基苯基)哌嗪-1-基)(3-(4-氟苯基)-5-甲基异噁唑-4-基)甲酮

用3-(4-氟苯基)-5-甲基异噁唑-4-羧酸替代3-(1-萘基)-5-甲基异噁唑-4-羧酸，通过类似于步骤77A实施步骤79A。

步骤79B.

用来自步骤79A的产物替代制备L和用4-(N,N-二甲基氨基)苯甲酰氯替代对-甲氧基苯甲酰氯，通过类似于实施例1合成实施例79。HPLC/MS (方法I): (ES⁺) m/z (M+Na)⁺=629; Rt=1.82分钟。

实施例80-83

用合适的杂环制备替代3-(4-氟苯基)-5-甲基异噁唑-4-羧酸和用合适的市售可得到的酰氯替代4-(N,N-二甲基氨基)苯甲酰氯，通过类似于实施例79合成实施例80-83。

实施例84

N-(4-氯-5-(4-(4-(2-甲氧基苯基)-1-甲基-1H-1,2,3-三唑-5-羰基)哌嗪-1-基)-2-硝基苯基)-4-(2-氧代吡咯烷-1-基)苯甲酰胺

步骤84A.

N-(4-氯-2-硝基-5-(哌嗪-1-基)苯基)-4-(2-氧代吡咯烷-1-基)苯甲酰胺

用制备AB替代4-(N,N-二甲基氨基)苯甲酰氯，通过类似于制备O制备N-(4-氯-2-硝基-5-(哌嗪-1-基)苯基)-4-(2-氧代吡咯烷-1-基)苯甲酰胺。

步骤84B.

用制备J替代制备D，通过类似于实施例70制备标题化合物。HPLC/MS (方法F): (ES⁺) m/z (M+H)⁺=660; Rt=3.24分钟。

实施例85-99

用合适的酰氯制备替代步骤84A中的制备AB，通过类似于实施例84制备实施例85-99。

实施例98

N-(4-氯-5-(4-(4-(2-甲氧基苯基)-1-甲基-1H-1,2,3-三唑-5-羰基)哌嗪-1-基)-2-硝基苯基)-4-((二甲基氨基)甲基)苯甲酰胺

步骤98A

4-(2-氯-5-(4-((二甲基氨基)甲基)苯甲酰氨基)-4-硝基苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁基酯

将4-(5-氨基-2-氯-4-硝基苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁基酯(100 mg, 0.280 mmol)、4-(氯甲基)苯甲酰氯(106 mg, 0.561 mmol)、BEMP (154 mg, 0.561 mmol)和DMAP (34 mg, 0.28 mmol)在乙腈(2 mL)中的混合物在80℃下加热过夜。冷却下来，用在水中的二甲胺0.5 ml (40%)处理2小时。HPLC纯化，得到4-(2-氯-5-(4-((二甲基氨基)甲基)苯甲酰氨基)-4-硝基苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁基酯(94 mg, 0.165 mmol)。

步骤98B.

N-(4-氯-2-硝基-5-(哌嗪-1-基)苯基)-4-((二甲基氨基)甲基)苯甲酰胺

将4-(2-氯-5-(4-((二甲基氨基)甲基)苯甲酰氨基)-4-硝基苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁基酯在TFA/DCM (50%)中搅拌1小时。在去除溶剂后，将残余物真空干燥过夜。

步骤98C.

将4-(2-甲氧基苯基)-1-甲基-1H-1,2,3-三唑-5-羧酸(44.7 mg, 0.192 mmol)、N-(4-氯-2-硝基-5-(哌嗪-1-基)苯基)-4-((二甲基氨基)甲基)苯甲酰胺(85 mg, 0.160 mmol)、HATU (79 mg, 0.208 mmol)和DMAP (78 mg, 0.639 mmol)在NMP (2 mL)中的混合物搅拌3小时。HPLC纯化，然后硅胶柱纯化，得到标题化合物(28 mg, 0.041 mmol)。

。

实施例99

4-(氮杂环丁烷-1-基甲基)-N-(4-氯-5-(4-(4-(2-甲氧基苯基)-1-甲基-1H-1,2,3-三唑-5-羰基)哌嗪-1-基)-2-硝基苯基)苯甲酰胺

用氮杂环丁烷替代步骤98A中的二甲胺，通过类似于实施例98合成标题化合物。HPLC/MS (方法M): (ES⁺) m/z (M+H)⁺=645; Rt=1.36分钟。

实施例100-106

用合适的酰氯制备替代制备AB和合适的杂环制备替代制备J，通过类似于实施例84制备实施例100-106。

实施例107

N-(2,4-二氯-5-(4-(3-(2-氯苯基)-5-甲基异噁唑-4-羰基)哌嗪-1-基)苯基)-4-(二甲基氨基)苯甲酰胺

步骤107A

用3-(2-氯苯基)-5-甲基异噁唑-4-羧酸替代步骤M5中的3-(2-甲氧基苯基)-5-甲基异噁唑-4-羧酸，通过类似于制备M制备(4-(5-氨基-2,4-二氯苯基)哌嗪-1-基)(3-(2-氯苯基)-5-甲基异噁唑-4-基)甲酮。

步骤107B

用N,N-二甲基氨基苯甲酰氯替代对-甲氧基苯甲酰氯，通过类似于实施例1制备标题化合物。

。

实施例108

N-(4-氯-5-(4-(3-(2-甲氧基苯基)-5-甲基异噁唑-4-羰基)哌嗪-1-基)-2-硝基苯基)-4-((二甲基氨基)甲基)苯甲酰胺

把制备L (20 mg, 0.042 mmol)、4-(氯甲基)苯甲酰氯(16 mg, 0.084 mmol)、BEMP (23 mg, 0.084 mmol)和DMAP (5.2 mg, 0.042 mmol)在DCE (1 mL)中的混合物加热4小时。把混合物冷却至室温，用二甲胺(0.3 mL, 50%在水中)处理并搅拌3小时。HPLC纯化，得到为其TFA盐的标题化合物(20.6 mg, 0.027 mmol, 64.4%产率)。¹H-NMR

。

实施例109

N-(4-氯-5-(4-(3-(2-甲氧基苯基)-5-甲基异噁唑-4-羰基)哌嗪-1-基)-2-硝基苯基)-4-((甲基氨基)甲基)苯甲酰胺

用甲胺替代二甲胺，通过类似于实施例108制备标题化合物。HPLC/MS (方法M): (ES⁺) m/z (M+H)⁺=619; Rt=1.33分钟。

实施例110

4-(氮杂环丁烷-1-基)-N-(4-氯-5-(4-(3-(2-甲氧基苯基)-5-甲基异噁唑-4-羰基)哌嗪-1-基)-2-硝基苯基)-3-氟苯甲酰胺

把制备L (12 mg, 0.025 mmol)、3,4-二氟苯甲酰氯(22.45 mg, 0.127 mmol)、BEMP (34.9 mg, 0.127 mmol)和DMAP (3.11 mg, 0.025 mmol)在DCE (1 mL)中的混合物加热3小时。使反应混合物冷却下来并用氮杂环丁烷(72.6 mg, 1.271 mmol)处理过夜。HPLC纯化，得到为其TFA盐的标题化合物(4.5 mg, 5.78 μmol, 22.73%产率)。

。

实施例111

N-(4-氯-5-(4-(3-(2-甲氧基苯基)-5-甲基异噁唑-4-羰基)哌嗪-1-基)-2-硝基苯基)-4-(二甲基氨基)-3-氟苯甲酰胺

用二甲胺替代氮杂环丁烷，通过类似于实施例110制备标题化合物。HPLC/MS (方法M): (ES⁺) m/z (M+H)⁺=637; Rt=2.18分钟。

实施例112

N-(4-氯-5-(4-(3-(2-甲氧基苯基)-5-甲基异噁唑-4-羰基)哌嗪-1-基)-2-硝基苯基)-4-(二甲基氨基)-2,5-二氟苯甲酰胺

用3,4,6-三氟苯甲酰氯替代3,4-二氟苯甲酰氯和用二甲胺替代氮杂环丁烷，通过类似于实施例110制备标题化合物。HPLC/MS (方法J): (ES⁺) m/z (M+H)⁺=655; Rt=2.25分钟。

实施例113

N-(4-氯-5-(4-(3-(2-甲氧基苯基)-5-甲基异噁唑-4-羰基)哌嗪-1-基)-2-硝基苯基)-2,5-二氟-4-(甲基氨基)苯甲酰胺

用甲胺替代二甲胺，通过类似于实施例112制备标题化合物。HPLC/MS (方法J): (ES⁺) m/z (M+H)⁺=641; Rt=2.17分钟。

实施例114

N-(4-氯-5-(4-(3-(2-甲氧基苯基)-5-甲基异噁唑-4-羰基)哌嗪-1-基)-2-硝基苯基)-2,5-二氟-4-(吡咯烷-1-基)苯甲酰胺

用吡咯烷替代二甲胺，通过类似于实施例112制备标题化合物。HPLC/MS (方法J): (ES⁺) m/z (M+H)⁺=681; Rt=2.37分钟。

实施例115

N-(4-氯-2-甲酰基-5-(4-(3-(2-甲氧基苯基)-5-甲基异噁唑-4-羰基)哌嗪-1-基)苯基)-4-(二甲基氨基)苯甲酰胺

步骤115A

将2-氨基-4-溴苯甲酸甲酯(1.26 g)如在制备M的步骤M1中描述的那样进行Boc-保护，得到0.86 g的4-溴-2-(叔丁氧基羰基氨基)苯甲酸甲酯。

。

步骤115B

使氮气鼓泡通入4-溴-2-(叔丁氧基羰基氨基)苯甲酸甲酯(0.62 g, 1.878 mmol)、哌嗪-1-羧酸叔丁基酯(0.350 g, 1.878 mmol)、二环己基(2’,4’,6’-三异丙基联苯-2-基)膦(0.045 g, 0.094 mmol)和碳酸铯(1.835 g, 5.63 mmol)在甲苯(4 mL)中的混合物中，随后加入二乙酰氧基钯(0.013 g, 0.056 mmol)。把反应混合物在110℃下搅拌2小时。使反应混合物冷却至室温。加入水和乙酸乙酯(30 mL/30 mL)。在分液漏斗中分离这两层。水层用30 mL乙酸乙酯再提取一次。产物经快速层析法(1% EtOAc/DCM, Rf 0.44)纯化，得到0.56 g (69%产率)的4-(3-(叔丁氧基羰基氨基)-4-(甲氧基羰基)苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁基酯。¹H-NMR (CDCl₃, 400 MHz): δ

。

步骤115C

向4-(3-(叔丁氧基羰基氨基)-4-(甲氧基羰基)苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁基酯(360 mg, 0.827 mmol)在DCM (4 mL)中，于-78℃下的溶液中加入TFA (0.064 mL, 0.827 mmol)。把反应混合物温热至0℃，随后加入NCS (110 mg, 0.827 mmol)和MeOH (2.000 mL)。将生成的反应混合物在室温下搅拌16小时。产物经快速层析法(2% EtOAc/DCM, Rf 0.50)纯化，得到150 mg (77%产率)的4-(5-(叔丁氧基羰基氨基)-2-氯-4-(甲氧基羰基)苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁基酯。¹H-NMR (CDCl₃, 400 MHz): δ

。

步骤115D

将4-(5-(叔丁氧基羰基氨基)-2-氯-4-(甲氧基羰基)苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁基酯(130 mg, 0.277 mmol)和TFA (0.4 mL, 5.19 mmol)在DCM (0.4 mL)中的溶液在室温下搅拌1小时。真空蒸发溶剂，得到89 mg的2-氨基-5-氯-4-(哌嗪-1-基)苯甲酸甲酯。HPLC/MS显示MS (ESI⁺) (m/z) 270 ([M+H]⁺)。

步骤115E

使3-(2-甲氧基苯基)-5-甲基异噁唑-4-羧酸和2-氨基-5-氯-4-(哌嗪-1-基)苯甲酸甲酯(TFA盐)在于制备M中描述的条件下进行偶联，得到2-氨基-5-氯-4-(4-(3-(2-甲氧基苯基)-5-甲基异噁唑-4-羰基)哌嗪-1-基)苯甲酸甲酯。¹H-NMR

。

步骤115F

将2-氨基-5-氯-4-(4-(3-(2-甲氧基苯基)-5-甲基异噁唑-4-羰基)哌嗪-1-基)苯甲酸甲酯(27.5 mg, 0.057 mmol)、4-(二甲基氨基)苯甲酰氯(52.1 mg, 0.284 mmol)、N,N-二甲基吡啶-4-胺(0.693 mg, 5.67 μmol)和2-叔丁基亚氨基-2-二乙基氨基-1,3-二甲基-全氢-1,3,2-二氮杂膦杂环戊烷(diazaphosphorine) (78 mg, 0.284 mmol)在DCE (1.5 mL)中的反应混合物在80℃下搅拌6小时。产物经制备型HPLC (0.1% TFA MeOH/H₂O)纯化，得到25 mg (49%产率)的5-氯-2-(4-(二甲基氨基)苯甲酰氨基)-4-(4-(3-(2-甲氧基苯基)-5-甲基异噁唑-4-羰基)哌嗪-1-基)苯甲酸甲酯。¹H-NMR

。

步骤115G

于室温下，向5-氯-2-(4-(二甲基氨基)苯甲酰氨基)-4-(4-(3-(2-甲氧基苯基)-5-甲基异噁唑-4-羰基)哌嗪-1-基)苯甲酸甲酯(108 mg, 0.171 mmol)在MeOH (1 mL)和THF (3 mL)中的溶液中加入硼氢化钠(32.3 mg, 0.854 mmol)。将生成的反应混合物在40℃下搅拌2小时。产物经制备型HPLC (CH₃CN/H₂O-10 nM乙酸铵)纯化，得到90 mg (81%产率)的N-(4-氯-2-(羟基甲基)-5-(4-(3-(2-甲氧基苯基)-5-甲基异噁唑-4-羰基)哌嗪-1-基)苯基)-4-(二甲基氨基)苯甲酰胺。

。

步骤115H

将N-(4-氯-2-(羟基甲基)-5-(4-(3-(2-甲氧基苯基)-5-甲基异噁唑-4-羰基)哌嗪-1-基)苯基)-4-(二甲基氨基)苯甲酰胺(60 mg, 0.099 mmol)在DCM (1.2 mL)中的溶液加入到在8-mL小瓶中的PCC (300 mg, 0.278 mmol)中。把反应混合物在室温下搅拌40分钟。经过滤去除在碱性氧化铝上的PCC。粗产物经快速层析法(EtOAc/DCM, 20%梯度至40%, Rf 0.66)纯化，得到11.0 mg的标题化合物。¹H-NMR

。

实施例116

(E)-N-(4-氯-2-((羟基亚氨基)甲基)-5-(4-(3-(2-甲氧基苯基)-5-甲基异噁唑-4-羰基)哌嗪-1-基)苯基)-4-(二甲基氨基)苯甲酰胺

把N-(4-氯-2-甲酰基-5-(4-(3-(2-甲氧基苯基)-5-甲基异噁唑-4-羰基)哌嗪-1-基)苯基)-4-(二甲基氨基)苯甲酰胺(实施例115, 7.7 mg, 0.013 mmol)、盐酸羟胺(1.8 mg, 0.026 mmol)和三乙胺(3.6 μL, 0.026 mmol)在DMF (1.2 mL)、MeOH (0.240 mL)和DCM (0.240 mL)中的反应混合物在室温下搅拌过夜。产物经制备型HPLC (10 mM NH₄OAc AcCN/H₂O)纯化，得到2.7 mg的标题化合物。¹H-NMR

。

实施例117

N-(4-氯-5-(4-(3-(2-羟基苯基)-5-甲基异噁唑-4-羰基)哌嗪-1-基)-2-硝基苯基)-4-(二甲基氨基)苯甲酰胺

于-78℃下，向在7 mL的DCM中的N-(4-氯-5-(4-(3-(2-甲氧基苯基)-5-甲基异噁唑-4-羰基)哌嗪-1-基)-2-硝基苯基)-4-(二甲基氨基)苯甲酰胺(实施例14, 50 mg, 0.081 mmol)中加入0.24 mL在DCM中的1.0 M三溴化硼。把溶液在室温下搅拌16小时。真空蒸发溶剂，并把产物经制备型HPLC (乙腈/水, 10 mM NH₄OAc)纯化，得到42 mg的标题化合物。¹H-NMR (CDCl₃, 400

。

实施例118

N-(4-氯-5-(4-(3-(2-乙氧基苯基)-5-甲基异噁唑-4-羰基)哌嗪-1-基)-2-硝基苯基)-4-(二甲基氨基)苯甲酰胺

于0℃下，向N-(4-氯-5-(4-(3-(2-羟基苯基)-5-甲基异噁唑-4-羰基)哌嗪-1-基)-2-硝基苯基)-4-(二甲基氨基)苯甲酰胺(实施例117, 17 mg, 0.028 mmol)、乙醇(2.461 μL, 0.042 mmol)和三正丁基膦(10.40 μL, 0.042 mmol)在THF (2 mL)中的溶液中加入DIAD (8.19 μL, 0.042 mmol)。把反应混合物在0℃下搅拌3分钟，并在室温下搅拌过夜。真空蒸发溶剂。产物经制备型HPLC (0.1% TFA, MeOH/H₂O)纯化，得到6 mg的标题化合物。¹H-NMR (CDCl₃, 400

。

实施例119

N-(5-(4-(3-(2-丁氧基苯基)-5-甲基异噁唑-4-羰基)哌嗪-1-基)-4-氯-2-硝基苯基)-4-(二甲基氨基)苯甲酰胺

用正丁醇替代乙醇，通过类似于实施例118合成标题化合物。HPLC/MS (方法B): (ES⁺) m/z (M+H)⁺=647; Rt=3.14分钟。

实施例120

N-(4-氯-5-(4-(4-(2-甲氧基苯基)-1-甲基-1H-1,2,3-三唑-5-羰基)哌嗪-1-基)-2-溴苯基)- 4-(1,1-二氧化异噻唑烷-2-基)苯甲酰胺

步骤120A

N-(4-氯-2-溴-5-(哌嗪-1-基)苯基)-4-(1,1-二氧化异噻唑烷-2-基)苯甲酰胺

用制备AI替代来自步骤O1的产物和用制备W替代4-(N,N-二甲基氨基)苯甲酰氯，通过类似于制备O，制备N-(4-氯-2-溴-5-(哌嗪-1-基)苯基)-4-(1,1-二氧化异噻唑烷-2-基)苯甲酰胺。

步骤120B

用制备J替代制备D，通过类似于实施例70制备标题化合物。HPLC/MS (方法J): (ES⁺) m/z (M+Na)⁺=730; Rt=1.75分钟。

实施例121

N-(2-溴-4-氯-5-(4-(4-(2-甲氧基苯基)-1-甲基-1H-1,2,3-三唑-5-羰基)哌嗪-1-基)苯基)-4-(1H-1,2,4-三唑-1-基)苯甲酰胺

用制备Y替代步骤120A中的制备W，通过类似于实施例120制备标题化合物。HPLC/MS (方法J): (ES⁺) m/z (M+H)⁺=678; Rt=1.77分钟。

实施例122

N-(4-氰基-5-(4-(4-(2-甲氧基苯基)-1-甲基-1H-1,2,3-三唑-5-羰基)哌嗪-1-基)-2-硝基苯基)-4-(2-氧代吡咯烷-1-基)苯甲酰胺

步骤122A

N-(4-氰基-2-硝基-5-(哌嗪-1-基)苯基)-4-(2-氧代吡咯烷-1-基)苯甲酰胺

用来自制备AG的步骤AG2的产物替代来自步骤O1的产物和用制备AB替代N,N-二甲基苯甲酰氯，通过类似于制备O，制备N-(4-氰基-2-硝基-5-(哌嗪-1-基)苯基)-4-(2-氧代吡咯烷-1-基)苯甲酰胺。

步骤122B

用制备J替代制备D，通过类似于实施例70制备标题化合物。HPLC/MS (方法F): (ES⁺) m/z (M+H)⁺=651; Rt=2.93分钟。

实施例123-124

用4-(N,N-二甲基氨基)苯甲酰氯替代制备AB和用合适的杂环制备替代制备J，通过类似于实施例122制备实施例123-124。

实施例125

N-(4-氯-5-(4-(3-(2-甲氧基苯基)-5-甲基异噁唑-4-羰基)哌嗪-1-基)-2-乙烯基苯基)-4-(二甲基氨基)苯甲酰胺

用制备S替代制备O和用4-(N,N-二甲基氨基)苯甲酰氯替代4-甲氧基苯甲酰氯，通过类似于实施例1合成标题化合物。HPLC/MS (方法H): (ES⁺) m/z (M+H)⁺=600; Rt=1.88分钟。

实施例126

N-(4-氯-5-(4-(3-(2-氯苯基)-5-甲基-1H-吡唑-4-羰基)哌嗪-1-基)-2-硝基苯基)-4-(甲基亚磺酰氨基)苯甲酰胺

用制备AH替代制备O和用制备E替代制备D，通过类似于实施例70合成标题化合物。HPLC/MS (方法H): (ES⁺) m/z (M+H)⁺=670; Rt=1.76分钟。

实施例127

N-(4-氯-5-(4-(4-(2-甲氧基苯基)-1-甲基-1H-1,2,3-三唑-5-羰基)哌嗪-1-基)-2-硝基苯基)-4-(甲基亚磺酰氨基)苯甲酰胺

用制备J替代制备E，通过类似于实施例126制备标题化合物。HPLC/MS (方法H): (ES⁺) m/z (M+H)⁺=669; Rt=1.82分钟。

实施例128

N-(4-氯-5-(4-(4-(2-甲氧基苯基)-1-甲基-1H-1,2,3-三唑-5-羰基)哌嗪-1-基)-2-硝基苯基)噻唑-2-甲酰胺

用噻唑-2-甲酰氯替代步骤84A中的制备AB，通过类似于实施例84制备标题化合物。HPLC/MS (方法J): (ES⁺) m/z (M+H)⁺=583; Rt=1.91分钟。

材料和方法

细胞和病毒

Madin-Darby犬肾(MDCK)细胞和流感A/WSN/33得自ATCC。流感A/Solomon Islands/3/06和流感A/Brisbane/10/2007得自CDC。

化合物

受试化合物以100x的最终测试浓度用DMSO以3倍步骤进行连续稀释。把1 ul的被稀释化合物加入到96孔板的每孔中。

抗病毒试验

对于抗病毒试验，把MDCK细胞以每ml 4.5 x 10⁵细胞重新悬浮于试验培养基(含有pen/strep的MEM加上0.125% BA (牛白蛋白)和1 ug/ml TPCK-处理的胰蛋白酶)中。对于0.001噬斑形成单位每孔的最终感染复数(MOI)加入病毒，并向96孔板的每孔中加入100 ul (1 ul化合物/孔)。对于细胞毒性测定，仅向酶联板加入细胞。在感染后48小时，通过经猝灭的底物2’-(4-甲基伞形酮基(Methylunbelliferyl))-α-D-N-乙酰基神经氨酸(MUNANA)的激活测量病毒神经氨酸酶(NA)活性，测定在抑制剂存在下的病毒复制。加入5x底物溶液以得到100 uM MUNANA、50 mM MES、2 mM CaCl₂和0.25% NP-40的最终浓度。在37℃下温育30分钟后，在设定于360 nm激发和460 nm发射的萤光板读数器上读取板。细胞毒性通过被处理细胞的结晶紫染色法确定。细胞用PBS冲洗一次，用在20%甲醇中的0.5%结晶紫染色20分钟，用水冲洗并空气干燥。向每孔中加入50 ul甲醇以溶解结晶紫，并加入50 ul PBS，之后在540 nM下读取吸光度。

参考文献

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Deyde VM, Sheu TG, Trujillo AA, Okomo-Adhiambo M, Garten R, Klimov AI, Gubareva LV. 2010. 2009大流行性流感A (H1N1)病毒的抗药性的分子标志物通过焦磷酸测序技术的检测(Detection of molecular markers of drug resistance in 2009 pandemic influenza A (H1N1) viruses by pyrosequencing). Antimicrob Agents Chemother. 3月; 54(3):1102-10.

Moscona A. 2009. 耐奥司他韦的流感的全球传播(Global transmission of oseltamivir-resistant influenza). N Engl J Med. Mar 5;360(10):953-6.

Soepandi PZ, Burhan E, Mangunnegoro H, Nawas A, Aditama TY, Partakusuma L, Isbaniah F, Malik S, Benamore R, Baird JK, Taylor WR. 2010. 印度尼西亚雅加达的Persahabatan医院的患者的H5N1禽流感的临床病程(Clinical course of H5N1 avian influenza in patients at the Persahabatan Hospital, Jakarta, Indonesia), 2005-2008. Chest 09-2644.

Zimmer SM, Burke DS. 2009. 流感A (H1N1)病毒的历史视角的出现(Historical perspective--Emergence of influenza A (H1N1) viruses). N Engl J Med. Jul 16;361(3):279-85.

活性表1

表说明：+=EC₅₀<10 uM；++=EC₅₀<1 uM；+++=EC₅₀<0.1 uM。

活性表2

表说明：+=EC₅₀<10 uM；++=EC₅₀<1 uM；+++=EC₅₀<0.1 uM。

上述描述仅为说明性的，并且不应理解为以任何方式限制本发明的范围或基本原则。事实上，除了本文显示和描述的那些以外，本发明的各种修饰自以下实施例和上述描述对本领域技术人员而言将变得显而易见。这样的修饰也打算落入所附的权利要求书的范围内。