发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的不足,提供一种麦角硫因的生物合成制备方法。
本发明的技术方案概述如下:
一种麦角硫因的生物合成制备方法,包括如下步骤:
(1)将大型真菌的菌丝体斜面菌种接种至装有培养基的三角瓶后,在16~35℃,100~300rpm摇床振荡条件下,培养6~11天,大型真菌的菌丝体内大量合成积累麦角硫因;
(2)将步骤(1)获得的发酵液于80~110℃,转数为1~500rpm的条件下,搅拌6~200min,使菌丝体内的麦角硫因从细胞内转移到发酵液中;
所述培养基按重量份数由下述组分组成:10~60份的碳源、5~30份的有机氮源、0.5~10份的无机盐,加水至1000份,调节pH=5.0~6.5。
所述大型真菌为野生紫孢侧耳(Pleurotus sapidus)、肺形侧耳(Pleurotus pulmonarius)或花脸香蘑(Lepista sordida)。
所述碳源是以下物质的一种或多种的组合:蔗糖、果糖、山梨糖、甘露糖、乳糖、半乳糖、甘露醇、麦芽糖醇、山梨醇、甘油、脂肪、糊精、麦芽糊精、甜菜糖蜜、甘蔗糖蜜、马铃薯、玉米粉、木薯粉、芭蕉芋、红薯粉、大米粉、小麦粉、高粱粉、大麦粉和燕麦粉。
所述有机氮源是以下物质的一种或多种的组合:酵母粉、玉米浆、麸皮、大豆蛋白、豆粕粉、豆饼粉、棉籽粉、花生饼粉、玉米蛋白粉、牛肉膏、蛋白胨、酪蛋白胨和胰蛋白胨。
所述无机盐为K2SO4、MgCl2和(NH4)H2PO4至少一种。
本发明的优点:
与目前的化学合成方法相比,这种发酵生产方式可以保证产品的安全性;原料来源广泛,价廉易得,可以满足食品安全的要求,没有民族禁忌;没有原料养殖或栽培的季节性和不易储藏的限制,可实现常年规模化生产,生产周期短,生产效率高;通过优化菌丝体的发酵条件,提高和稳定麦角硫因的产率,工艺可以控制,生产规范,技术经济性好,生产成本低,为医药、食品饮料、功能食品、动物饲料、化妆品及生物技术等领域提供安全便宜的麦角硫因。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步的说明:
实施例1
一种麦角硫因的生物合成制备方法,包括如下步骤:
(1)培养基制备:按重量份数称取30份的糊精、15份的酪蛋白胨、3份的K2SO4、2份的(NH4)H2PO4和1.5份的MgCl2,加水至1000份,调pH=5.5。
(2)摇瓶培养:在500mL三角瓶装入150mL培养基,121℃灭菌20min;每个三角瓶接种花脸香蘑(Lepista sordida)的菌丝体斜面菌种1cm2,于25℃,150rpm的条件下,摇床振荡培养9天,花脸香蘑的菌丝体内大量合成积累麦角硫因;
(3)培养结束后,将发酵液升温至90℃,300rpm搅拌30min,菌丝体内的麦角硫因从细胞内转移到细胞外的发酵液中,发酵液中麦角硫因含量为48mg/L。
实施例2
(1)培养基制备:按重量份数称取40份的甘油、15份的豆粕粉、3份的K2SO4、3份的(NH4)H2PO4和1.5份的MgCl2,加水至1000份,调pH=5.8;
(2)摇瓶培养:在500mL三角瓶装入150mL培养基,121℃灭菌30min;每个三角瓶接种野生紫孢侧耳(Pleurotus sapidus)的菌丝体斜面菌种2cm2,于26℃,140rpm的条件下,摇床振荡培养10天,野生紫孢侧耳的菌丝体内大量合成积累麦角硫因。
(3)培养结束后,过滤收集菌丝体,每克干燥菌丝体中麦角硫因含量为2.7mg。将1份体积的菌丝体和5份体积的水混合,升温至100℃,80rpm搅拌抽提20min,菌丝体内的麦角硫因被萃取到细胞外。
实施例3:
麦角硫因的检测方法:
麦角硫因萃取液的前处理:麦角硫因萃取液于10000×g离心15min,进行固液分离,收集上清液,将上清液经孔径为3000Da分子量的超滤膜超滤,超滤的透过液用HPLC检测。
麦角硫因的检测:检测仪器为高压液相色谱;Eclipse XDB-C18色谱柱(250mm×4.6mm,粒径5μm),采用两根柱串联进行检测;流动相为乙腈-水,乙腈∶水为1∶99;流速1.0mL/min,柱温30℃,检测波长254nm;进样量10μL。麦角硫因对照品溶液的浓度33mg/L。通过比较对照品和萃取液麦角硫因的峰面积,计算萃取液中的麦角硫因含量。
菌丝体中麦角硫因含量的计算方法:每克干燥菌丝体中的麦角硫因含量(mg)=1L萃取液中麦角硫因的含量(mg)÷1L萃取液中干燥菌丝体的含量(g)。
实施例4~28,培养基按重量份数的组成
实施例29
一种麦角硫因的生物合成制备方法,包括如下步骤:
(1)将花脸香蘑(Lepista sordida)的菌丝体斜面菌种接种至装有培养基的三角瓶后,在16℃,200rpm振荡条件下,培养10天;
(2)将发酵液于50℃,转数为500rpm的条件下,搅拌200min,菌丝体内的麦角硫因从细胞内转移到发酵液中,经检测,发酵液中麦角硫因含量为17mg/L。
本实施例的培养基是实施例8的配方制备的培养基。
实施例30
一种麦角硫因的生物合成制备方法,包括如下步骤:
(1)将花脸香蘑(Lepista sordida)的菌丝体斜面菌种接种至装有培养基的三角瓶后,在35℃,100rpm振荡条件下,培养9天,使大型真菌的菌丝体内大量合成积累麦角硫因;
(2)将发酵液于110℃,转数为1rpm的条件下,搅拌6min,菌丝体内的麦角硫因从细胞内转移到发酵液中,经检测,发酵液中麦角硫因含量为14mg/L。
本实施例的培养基是实施例5的配方制备的培养基。
实施例31
一种麦角硫因的生物合成制备方法,包括如下步骤:
(1)将花脸香蘑(Lepista sordida)的菌丝体斜面菌种接种至装有培养基的三角瓶后,在25℃,300rpm振荡条件下,培养6天;
(2)将发酵液于80℃,转数为300rpm的条件下,搅拌60min,菌丝体内的麦角硫因从细胞内转移到发酵液中,经检测,发酵液中麦角硫因含量为15mg/L。
本实施例的培养基是实施例12的配方制备的培养基。
实施例32
一种麦角硫因的生物合成制备方法,包括如下步骤:
(1)将花脸香蘑(Lepista sordida)的菌丝体斜面菌种接种至装有培养基的三角瓶后,在23℃,250rpm振荡条件下,培养11天,使大型真菌的菌丝体内大量合成积累麦角硫因;
(2)将发酵液于100℃,转数为100rpm的条件下,搅拌10min,菌丝体内的麦角硫因从细胞内转移到发酵液中,经检测,发酵液中麦角硫因含量为15mg/L。
本实施例的培养基是实施例14的配方制备的培养基。
实施例33
一种麦角硫因的生物合成制备方法,包括如下步骤:
(1)将花脸香蘑(Lepista sordida)的菌丝体斜面菌种接种至装有培养基的三角瓶后,在25℃,150rpm振荡条件下,培养9天,使大型真菌的菌丝体内大量合成积累麦角硫因;
(2)将发酵液于90℃,转数为500rpm的条件下,搅拌30min,使菌丝体内的麦角硫因从细胞内转移到发酵液中,经检测,发酵液中麦角硫因含量为51mg/L。
本实施例的培养基是实施例27的配方制备的培养基。
实施例34
一种麦角硫因的生物合成制备方法,包括如下步骤:
(1)将花脸香蘑(Lepista sordida)的菌丝体斜面菌种接种至装有培养基的三角瓶后,在23℃,130rpm振荡条件下,培养10天,使大型真菌的菌丝体内大量合成积累麦角硫因;
(2)将发酵液于80℃,转数为450rpm的条件下,搅拌50min,菌丝体内的麦角硫因从细胞内转移到发酵液中,经检测,发酵液中麦角硫因含量为42mg/L。
本实施例的培养基是实施例26的配方制备的培养基。
实施例35
一种麦角硫因的生物合成制备方法,包括如下步骤:
(1)将花脸香蘑(Lepista sordida)的菌丝体斜面菌种接种至装有培养基的三角瓶后,在27℃,170rpm振荡条件下,培养8天,使大型真菌的菌丝体内大量合成积累麦角硫因;
(2)将发酵液于85℃,转数为400rpm的条件下,搅拌70min,菌丝体内的麦角硫因从细胞内转移到发酵液中,经检测,发酵液中麦角硫因含量为35mg/L。
本实施例的培养基是实施例11的配方制备的培养基。
实施例36
一种麦角硫因的生物合成制备方法,包括如下步骤:
(1)将花脸香蘑(Lepista sordida)的菌丝体斜面菌种接种至装有培养基的三角瓶后,在28℃,120rpm振荡条件下,培养10天,使大型真菌的菌丝体内大量合成积累麦角硫因;
(2)将发酵液于95℃,转数为400rpm的条件下,搅拌40min,菌丝体内的麦角硫因从细胞内转移到发酵液中,经检测,发酵液中麦角硫因含量为19mg/L。
本实施例的培养基是实施例23的配方制备的培养基。
实施例37
用肺形侧耳(Pleurotus pulmonarius)替换实施例33的花脸香蘑(Lepista sordida),培养条件同实施例33,培养基采用的是实施例28配制的,经检测,发酵液中麦角硫因含量为22mg/L。
实施例38
用肺形侧耳(Pleurotus pulmonarius)替换实施例34的花脸香蘑(Lepista sordida),培养条件同实施例34,培养基采用的是实施例24配制的,经检测,发酵液中麦角硫因含量为14mg/L。
实施例39
用肺形侧耳(Pleurotus pulmonarius)替换实施例35的花脸香蘑(Lepista sordida),培养条件同实施例35,培养基采用的是实施例21配制的,经检测,发酵液中麦角硫因含量为48mg/L。
实施例40
用肺形侧耳(Pleurotus pulmonarius)替换实施例36的花脸香蘑(Lepista sordida),培养条件同实施例36,培养基采用的是实施例19配制的,经检测,发酵液中麦角硫因含量为17mg/L。
实施例41
用肺形侧耳(Pleurotus pulmonarius)替换实施例33的花脸香蘑(Lepista sordida),培养条件同实施例33,培养基采用的是实施例7配制的,经检测,发酵液中麦角硫因含量为15mg/L。
实施例42
用肺形侧耳(Pleurotus pulmonarius)替换实施例34的花脸香蘑(Lepista sordida),培养条件同实施例34,培养基采用的是实施例18配制的,经检测,发酵液中麦角硫因含量为20mg/L。
实施例43
用肺形侧耳(Pleurotus pulmonarius)替换实施例35的花脸香蘑(Lepista sordida),培养条件同实施例35,培养基采用的是实施例13配制的,经检测,发酵液中麦角硫因含量为12mg/L。
实施例44
用肺形侧耳(Pleurotus pulmonarius)替换实施例36的花脸香蘑(Lepista sordida),培养条件同实施例36,培养基采用的是实施例16配制的,经检测,发酵液中麦角硫因含量为14mg/L。
实施例45
用肺形侧耳(Pleurotus pulmonarius)替换实施例33的花脸香蘑(Lepista sordida),培养条件同实施例33,培养基采用的是实施例20配制的,发酵液中麦角硫因含量为16mg/L。
实施例46
用野生紫孢侧耳(Pleurotus sapidus)替换实施例34的花脸香蘑(Lepista sordida),培养条件同实施例34,培养基采用的是实施例4配制的,经检测,发酵液中麦角硫因含量为36mg/L。
实施例47
用野生紫孢侧耳(Pleurotus sapidus)替换实施例35的花脸香蘑(Lepista sordida),培养条件同实施例35,培养基采用的是实施例6配制的,经检测,发酵液中麦角硫因含量为20mg/L。
实施例48
用野生紫孢侧耳(Pleurotus sapidus)替换实施例36的花脸香蘑(Lepista sordida),培养条件同实施例36,培养基采用的是实施例10配制的,经检测,发酵液中麦角硫因含量为23mg/L。
实施例49
用野生紫孢侧耳(Pleurotus sapidus)替换实施例33的花脸香蘑(Lepista sordida),培养条件同实施例33,培养基采用的是实施例9配制的,经检测,发酵液中麦角硫因含量为13mg/L。
实施例50
用野生紫孢侧耳(Pleurotus sapidus)替换实施例34的花脸香蘑(Lepista sordida),培养条件同实施例34,培养基采用的是实施例15配制的,经检测,发酵液中麦角硫因含量为14mg/L。
实施例51
用野生紫孢侧耳(Pleurotus sapidus)替换实施例35的花脸香蘑(Lepista sordida),培养条件同实施例35,培养基采用的是实施例17配制的,经检测,发酵液中麦角硫因含量为15mg/L。
实施例52
用野生紫孢侧耳(Pleurotus sapidus)替换实施例36的花脸香蘑(Lepista sordida),培养条件同实施例36,培养基采用的是实施例22配制的,经检测,发酵液中麦角硫因含量为15mg/L。
实施例53
用野生紫孢侧耳(Pleurotus sapidus)替换实施例33的花脸香蘑(Lepista sordida),培养条件同实施例33,培养基采用的是实施例25配制的,经检测,发酵液中麦角硫因含量为37mg/L。