CN103167802B - 抗微生物组合物 - Google Patents

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Abstract

来自黑附球菌(Epicoccum？purpurascens)(同义词黑附球菌(Epicoccum？nigrum))用于对抗植物和真菌病原体的抗微生物化合物。分离了橙黄色代谢物，阐明结构为化合物表吡喃酮A-C，证实了对抗植物病原体例如葡萄孢属(Botrytis)或Lecanicillium？muscarium的杀真菌活性。提供了农业和药物组合物，还提供了在动物和植物中治疗微生物感染的用途。

Description

抗微生物组合物
相应申请的声明
本申请基于涉及新西兰专利申请号587490提交的临时说明书，将该文献的全部内容引入本文作为参考。
技术领域
本发明一般涉及抗微生物组合物。特别地，尽管并非排他，但是本发明涉及从丝状真菌黑附球菌(Epicoccumpurpurascens)(同义词黑附球菌(Epicoccumnigrum))菌株中分离的用作天然杀真菌剂的真菌分泌液。
背景技术
真菌可以对生长或收获的农作物造成严重损害，特别是水果或蔬菜农作物。杀真菌剂也用于治疗动物中的真菌感染。
传统上，控制真菌生长的主要方法使用合成生产的杀真菌剂化学物质。这些合成的杀真菌剂通常对人和其他生物体具有高毒性。由于这一原因，所以合成杀真菌剂的应用因公众关注的其毒性而变得更受限制。
天然存在的杀真菌剂作为合成化学物质的可替代选择的应用因改善的生物降解性而变得更富有吸引力，且由此对环境和收获的农作物消费者而言具有更低毒性的可能性。
黑附球菌(Epicoccumpurpurascens)(同义词黑附球菌(E.nigrum))是通常与开始衰老的植物组织和土壤相关的腐生丝状真菌。它产生高浓度的二次产物，包括给予它所生长的介质黄色/橙色(pH依赖性)颜色的色素。橙色色素即orevactaene分离自黑附球菌并且描述了其结构(Shu，Y.Z.，等人，Bioorganic&MedicinalChemistryLetters，19977(17)：p.2295-2298；参见图1)。发现Orevactaene抑制HIV-1调节蛋白结合及其病毒RNA结合位点。发现它对白色假丝酵母(Candidiaalbacans)具有适度的抗真菌活性(MIC250μg/mL)。经测定orevactaene的结构如图1中所示。
几种真菌代谢物也分离自黑附球菌，由KemamiWangun如2006论文中所述[KemamiWangun，H.，V，2006，Friedrich-Schiller：UniversityofJena]。分离了黄色油状物并且将其鉴定为orevactaene。
其他黑附球菌菌株分泌的其他生物活性化合物已经得到表征，包括显示对细菌和真菌的抗微生物活性的黄柄曲菌素(BrownAE.等人，SoilBoil.1987Biochem.19：657-664和BurgeWR.等人，1976J.Agric.FoodChem.24：555-559)和epicoccamides(WangunHVK.等人，2007J.Nat.Prod.70：1800-1803；WrightAD.等人，2003Org.Biomol.Chem.1：507-510)和已经显示为抗癌活性的thiornicin(FrederickCB.等人，1981Biochem.20：2436-2438)。
已经报道了黑附球菌菌株作为农作物上真菌生长的生物学控制的潜在应用(BhuiyanSA.等人，2003PlantPath.52：60-67；MariM.等人，2007J.Sci.FoodAgric.87：1271-1277；SzandalaES和BackhouseD2001Aust.PlantPath.30：165-170)，然而，尚未证实有效的控制剂，主要是因为黑附球菌菌株在环境条件下的生长和活性不令人满意。
本发明的一个目的在于解决上述问题或至少为公众提供有用的选择。
将所有的参考文献包括本说明书中引述的任何专利或专利申请引入本文作为参考。不允许任何参考文献构成现有技术。参考文献的讨论描述了其作者的主张且申请人保留对引述的对比文件的正确性和适当性进行挑战的权力。显然可以理解，尽管大量现有技术的公开文献涉及本文，但是该参考文献并不构成允许任何这些参考文献构成新西兰或任意其他国家中本领域常用的一般知识的组成部分。
在本说明书的上下文中，措词″包含″或其变化形式例如″含有″或″包括″应理解为暗示包含所述的要素、整体或步骤或要素、整体或步骤组，但不排除任意其他要素、整体或步骤或要素、整体或步骤组。
本发明的其他方面和优点从仅作为实施例给出的如下描述中显而易见。
本发明的公开内容
本发明的另一个方面提供了农业用组合物，其包含：
●农业可接受的载体；和
●式(I)的抗微生物化合物：
其中
R选自：
●C-β-D-吡喃半乳糖；C-α-D-呋喃半乳糖；C-β-D-呋喃半乳糖；C-β-L-吡喃半乳糖；C-α-L-呋喃半乳糖；C-β-L-呋喃半乳糖；或相关吡喃糖；
及其盐、衍生物、互变体、立体异构体、水合物、溶剂合物或糖类似物。
本发明的另一个方面提供了药物组合物，其包含：
●药学可接受的载体或稀释剂；和
●式(I)的抗微生物化合物：
其中
R选自：
●C-β-D-吡喃半乳糖；C-α-D-呋喃半乳糖；C-β-D-呋喃半乳糖；C-β-L-吡喃半乳糖；C-α-L-呋喃半乳糖；C-β-L-呋喃半乳糖；或相关吡喃糖
及其盐、衍生物、互变体、立体异构体、水合物、溶剂合物、糖类似物、前体药物。
优选所述的组合物是粉末形式。
本发明的另一个方面提供了式(I)的化合物：
其中
R选自：
●C-β-D-吡喃半乳糖；C-α-D-呋喃半乳糖；C-β-D-呋喃半乳糖；C-β-L-吡喃半乳糖；C-α-L-呋喃半乳糖；C-β-L-呋喃半乳糖；或相关吡喃糖
及其盐、衍生物、互变体、立体异构体、水合物、溶剂合物或糖类似物在制备用于治疗植物或其植物部分中的微生物感染的组合物中的用途。
优选所述的微生物感染是真菌感染。
优选所述的植物部分是水果农作物植物或蔬菜农作物植物。
本发明的另一个方面提供了式(I)的化合物：
其中
R选自：
●C-β-D-吡喃半乳糖；C-α-D-呋喃半乳糖；C-β-D-呋喃半乳糖；C-β-L-吡喃半乳糖；C-α-L-呋喃半乳糖；C-β-L-呋喃半乳糖；或相关吡喃糖
及其盐、衍生物、互变体、立体异构体、水合物、溶剂合物、糖类似物或前体药物在制备用于治疗动物或其动物部位中的微生物感染的药物中的用途。
优选所述的动物是人。
本发明的另一个方面提供了预防、除去或抑制植物或其植物部分中的微生物感染的方法，包括下列步骤：
●给所述植物或其植物部分应用治疗有效量的组合物，该组合物包含：○式(I)的化合物：
其中
R选自：
●C-β-D-吡喃半乳糖；C-α-D-呋喃半乳糖；C-β-D-呋喃半乳糖；C-β-L-吡喃半乳糖；C-α-L-呋喃半乳糖；C-β-L-呋喃半乳糖；或相关吡喃糖
及其农业可接受的盐、衍生物、互变体、立体异构体、水合物、溶剂合物或糖类似物。
优选该方法还包括下列步骤：
●给所述植物或其植物部分应用治疗有效量的用于预防或抑制葡萄孢属(Botrytis)或Lecanicillium生长的组合物。
优选所述植物部分是水果或蔬菜。
对有这种预防、治疗或改善需要的受试者给予预防、治疗或改善微生物感染的方法。
优选所述的受试者是非人的动物受试者。
优选所述的施用包含局部施用所述组合物。
附图简述
本发明的其他方面从仅作为实施例给出的如下描述和参照附图时显而易见，其中：
图1显示已知化合物orevactaene的化学结构；
图2A显示表吡喃酮A形式的本发明活性成分的化学结构；
图2B显示与图1中所示相关的表吡喃酮B和表吡喃酮C形式的化合物的化学结构；
图3A显示用于阐明如图1中所示化合物的化学结构的负离子的质谱；
图3B显示用于阐明如图1中所示化合物的化学结构的正离子的质谱；
图4A显示用于阐明如图1中所示化合物的化学结构的负离子的碰撞诱导分解(CID)；
图4B显示用于阐明如图1中所示化合物的化学结构的正离子的碰撞诱导分解(CID)；
图5A显示用于阐明如图1中所示化合物的化学结构的正离子的碎片化途径；
图5B显示用于阐明如图1中所示化合物的化学结构的负离子的碎片化途径；
图6显示用于阐明如图1中所示化合物的化学结构的羟基乙酰化的反应方案；且
图7显示用于阐明如图1中所示化合物的羟基乙酰化的反应方案；
图8显示使用HPLC方法1的黑附球菌(Epicoccumpurpurascens)(同义词黑附球菌(E.nigrum)菌株SF7489)培养物的乙醇提取物的色谱图和UV光谱扫描；
图9显示使用HPLC方法2的图8的乙醇提取物和培养物的色谱图和UV光谱扫描；
图10显示使用HPLC方法1的图8的培养物的碱性提取物的色谱图和UV光谱扫描；
图11显示使用HPLC方法2的图8的培养物的碱性提取物的色谱图和UV光谱扫描；
图12显示使用HPLC方法1的图8的培养物的酸性提取物的色谱图和UV光谱扫描；且
图13显示使用HPLC方法2的图8的培养物的酸性提取物的色谱图和UV光谱扫描。
本发明的最佳实施方式
活性成分的提取和鉴定：实验1
设定使用二极管阵列检测的高效液相色谱(HPLC)方法以监测纯化过程中的色素。相同的HPLC方法用于液相色谱法质谱法(LCMS)分析。
制备4升的黑附球菌培养物。离心培养物以从水性上清液中分离菌丝体。HPLC分析显示90％的表吡喃酮A(如图2A中所示)存在于菌丝体中，且由此弃去水性上清液。冷冻干燥600g菌丝体，得到59g棕色粉末。用甲醇将棕色粉末提取几次，得到11.6g红色油状物。将该红色油状物溶于200mL0.1％硼酸钠(pH9)，用200mL乙酸乙酯萃取，以除去中性和碱性化合物。通过HPLC检测全部级分，无表吡喃酮A萃取入乙酸乙酯层。
用85％磷酸将水层酸化至pH3，用200mL乙酸乙酯萃取表吡喃酮A。加入少量乙醇以促进两层分离。通过旋转蒸发除去乙酸乙酯，干燥残余物重量为1.6g。将残余物溶于40mL包含100μL25％NH4OH的水中。
用甲醇、然后用60％乙腈(用稀H3PO4调整至pH2.5)和30％乙腈(pH2.5)给填充StrataX聚合物树脂110mmx38mm的柱加载条件。用18mL30％乙腈(pH2.5)稀释包含表吡喃酮A的2mL的40mL萃取物，上柱。使用下列步骤梯度真空洗脱柱：
200mL30％乙腈(pH2.5)
200mL40％乙腈(pH2.5)
500mL50％乙腈(pH2.5)
700mL55％乙腈(pH2.5)
一旦开始洗脱橙色带，则收集级分，从55％乙腈(pH2.5)开始。总计收集5种级分。向5种级分中各自加入乙酸乙酯，橙色色素转移至乙酸乙酯层中。HPLC揭示出75％的表吡喃酮A(约9.6mg)在前2个级分中，合并它们，干燥。
用10mL氯仿给1gStrataSi-1SPE柱加载条件。将干燥残余物(包含约9.6mg表吡喃酮)溶于5mL的5∶95甲醇/氯仿，上硅胶柱。用5∶95甲醇/氯仿、然后用10∶90甲醇/氯仿洗脱柱。收集总计9个级分，通过HPLC分析。合并级分6和7，通过吹N2干燥。将残余物溶于50％甲醇，上1gStrataXSPE柱。用20mL3∶7甲醇/水洗涤柱以除去硅胶细粉，用15mL甲醇洗脱表吡喃酮A。通过吹N2除去甲醇，用单独的干燥器将残余物置于高度真空中48hrs以除去残留溶剂，残余物重5.4mg。
纯度评估
纯化表吡喃酮A过程中的HPLC分析揭示出存在至少两种极为相关的化合物表吡喃酮B和表吡喃酮C(如图2B中所示)。进一步分析显示这些化合物共有相同的分子量、UV吸光度和类似的MS/MS碎片。在最终纯化步骤过程中，从表吡喃酮A中分离表吡喃酮B和表吡喃酮C，然而，迅速发现这些化合物是可互变的。混合物的最终组成终止于70％表吡喃酮A和30％表吡喃酮B+表吡喃酮C，与起始组成无关(表吡喃酮A：表吡喃酮B+表吡喃酮C)。这种互变显然是酸催化的。表吡喃酮B和表吡喃酮C也存在于黑附球菌培养物中且由此不是纯化过程中的加工品。
表吡喃酮A、表吡喃酮B和表吡喃酮C的混合物具有约100∶25∶7之比且经使用二极管阵列的高效液相色谱法(HPLCDAD)、液相色谱法与质谱法(LC-MS)和核磁共振(NMR)测定为＞95％纯度。
化合物表吡喃酮B和表吡喃酮C是α-和β-呋喃糖苷异构体。
活性成分的提取和鉴定：实验2
乙醇提取
以3000g将黑附球菌菌株SF7489培养物离心10min以从液体肉汤中分离菌丝体。用总计1.2L乙醇、通过用手控搅拌机匀化将菌丝体(1200g)提取2次。通过离心除去固体，保留乙醇上清液。通过使用两种不同的HPLC方法1和2的HPLC分析最初从菌丝体中分离的液体肉汤和菌丝体乙醇提取物，以鉴定和测定黄色色素的浓度，作为如下的比较(结果分别如图8和图9中所示)。
约15％的黄色色素在液体培养物肉汤中。将液体肉汤与乙醇提取物合并，得到3.6L提取物。制备10倍稀释的该样品用于HPLC分析。将乙醇提取物分成2个等分部分。萃取1个部分，使用方法1定量，使用方法2鉴定1个部分。
HPLC方法1：
流动相A-0.1％乙酸；流动相B-乙腈；柱-AscentisC8Express2.7μm50x2.1mm；流速-0.5mL/min；注射体积-1μl；柱加热炉-15℃；梯度-30％B-70％B，5min内，然后在1min内返回30％，再平衡2mins；检测器-在437nm的光敏二极管阵列扫描250-500nm提取物色谱图。
在使用方法1时使用从纯表吡喃酮建立的消光系数，以便对不同样品中的化合物浓度定量。
HPLC方法2：
流动相A-NH4OH的水溶液，pH10；流动相B-1∶4异丙醇/甲醇；柱-PhenomenexGeminiC185μm150x2mm；流速-0.2mL/min；注射体积-1μL；柱加热炉-15℃；梯度-25％B-100％B，12min内，保持1min，然后在2mins内返回起始条件；再平衡5mins；检测器-在428nm的光敏二极管阵列扫描190-500nm提取物色谱图。
因为我们没有用于方法2的消光系数，所以我们只是观察了相关的峰面农。
酸提取
通过旋转蒸发使提取物的体积减少至0.8L。然后用磷酸将其酸化至pH2.5。添加酸沉淀的色素，因为质子化的化合物不溶于水。然后以3000g将酸化的溶液离心10min。通过HPLC方法1(如图10中所示的结果)和HPLC方法2(如图10中所示的结果)测试上清液，发现包含约10mg色素。将固体再溶于80mLpH7.450mM磷酸盐缓冲液。制备200倍稀释的该样品用于HPLC分析。将样品的其余部分贮存在-20℃。
碱提取
用NH4OH将另一部分提取物的pH调整至pH10，通过旋转蒸发蒸发至干。将该样品溶于80mLpH7.450mM磷酸盐缓冲液。制备200倍稀释的该样品用于HPLC分析(HPLC方法1，结果如图12中所示，HPLC方法2，结果如图13中所示)。将样品的其余部分贮存在-20℃。
培养物固体干重
在室温将乙醇提取的菌丝体干燥过夜，然后在烘箱内在100℃进一步干燥3小时，以除去残留的溶剂。干燥菌丝体的重量为16g。旋转蒸发后称重来自碱提取的乙醇提取物，提取物重13g。该提取物仅是总提取物的一半，因此，肉汤+乙醇提取物中固体的总重为26g。来自2.5L培养物的固体总重为42g，后处理为16.8g固体/升培养物。称作表吡喃酮或epicoccane或提取自2.5L培养物的orevactaene的纯黄色色素的总重为250mg，它相当于100mg/L，这一结果与来自上述提取的收率一致。
这意味着在液体培养物中表吡喃酮的浓度约为0.01％或0.6％干重。
结论
通过HPLC方法进行分析发现最初乙醇提取物和酸和碱样品提取物中的黄色色素共有相同的色谱和光谱特性。两种提取得到相同量的该色素(120mg和130mg)。因此，我们得出结论，提取方法并不关键，因为两种方法都得到相同的化合物和相同量的化合物。
这一结果与胡萝卜中的类似色素β胡萝卜素的浓度类似。β胡萝卜素在新鲜胡萝卜中的浓度约为0.0008％和0.1％干重。_-胡萝卜素的浓度来源于Wikipediahttp://en.wikipedia.org/wiki/Carrots，胡萝卜中的含水量来源于UniversityofKentuckyhttp://www.ca.uky.edu/enri/pubs/enri129.pdf。
活性成分的结构阐明
NMR光谱法
为了进行NMR分析，将如上所述的纯化样品溶于CD3OD。
使用1H、13C、无畸变极化转移增益法(135DEPT)、异核单量子相关法(HSQC)、异核重键相关法(HMBC)、相关光谱法(COSY)、全相关光谱法(TOCSY)、旋转坐标系欧沃豪斯效应分光光度法(ROESY)、核欧豪斯效应分光光度法(NOESY)、选择性全相关光谱法(SELTOCSY)和选择性旋转坐标系欧沃豪斯效应分光光度法(SELROESY)实验阐明3，5，7，9，11，13-十四碳己烯酸、2-(2，4-二甲基亚己基)-14-(3-β-D-吡喃半乳糖基-4-羟基-2-氧代-2H-吡喃-6-基)-4-甲基(表吡喃酮A)、3，5，7，9，11，13-十四碳己烯酸、2-(2，4-二甲基亚己基)-14-(3-α-D-吡喃半乳糖基-4-羟基-2-氧代-2H-吡喃-6-基)-4-甲基(表吡喃酮B)和3，5，7，9，11，13-十四碳己烯酸、2-(2，4-二甲基亚己基)-14-(3-β-D-吡喃半乳糖基-4-羟基-2-氧代-2H-吡喃-6-基)-4-甲基(表吡喃酮C)的结构。NMR数据如下表1中所示。
表1.CD3OD中3的1H和13CNMR数据
13C 1H 多重峰 J(Hz) 注释
1 171.1
2 101.5 与C4重叠
3 166.2
4 102.4 6.07 s 与C2重叠
5 160.0
6 122.5 6.19 d 15.1
7 137.5 7.13 dd 15.1，11.4
8 132.0 6.45
9 140.5 6.63 dd 14.6，11.0 与C15重叠
10 130.2 6.40
11 138.2 6.5
12 134.0 6.4
13 137.0 6.42
14 132.4 6.42
15 140.5 6.4 与C9重叠
16 137.5
17 131.5 6.12 s
18 132.0
19 149.0 5.58 d 10.3
20 33.3 3.01
21 46.1 1.11.1.36
22 34.0 1.32
23 31.4 1.17.1.32
24 11.8 0.87
25 19.5 0.86
26 22.0 1.02
27 172.3
28 14.0 1.88
1’ 76.7 4.54 d 9.7
2’ 70.5 4.21 dd 9.5 作为三重峰出现
3’ 76.8 3.52 dd 9.4，3.2
4’ 71.3 3.92 d 3.2 宽双峰
5’ 81.0 3.61 m
6’ 62.9 3.72 m
表吡喃酮A的CD3OD中的化学位移与Shu等人对orevactaene在DMSO-d6中所述的类似。一些1H化学位移明显不同，这一结果得到用于分析的溶剂解释(CD3OD与DMSO-d6)。
HMBC光谱显示H1′与C1、C2、C3、C2′、C3′和C5′之间的连续性。H1′与C5′之间的相关性显示2个原子在2-3键长内。C1′-C6′的化学位移与每个原子的单氧键一致且由此C1′和C5′主要可能通过醚键连接。这些观察结果显示吡喃糖苷残基通过C-而非O-吡喃糖苷键与吡喃酮环上的C2连接。
9-10Hz等级的大H1′-H2′和H2′-H3′偶合常数与提出的吡喃糖苷结构一致。1D-选择性ROESY实验显示H1′与H3′、H1′和H5′和H3′与H5′之间的相关性。使用不同混合次数的1D-SELTOCSY实验用于证实H1′-H6′的化学位移和相关途径。这些实验一起显示吡喃糖环为优选的椅式构象且4′-OH是轴取向的，而H1′-H-2′偶合(J＝9.7Hz)显示C-吡喃糖单元β连接于吡喃酮。这些发现导致鉴定了作为β-C-D-吡喃半乳糖苷的表吡喃酮A的结构。
还可以将结构归属于存在于同一样品中的两种少量的异构体表吡喃酮B和表吡喃酮C。基于HMBC和ROESY相关法，发现它们是C-D-呋喃半乳糖苷的α-和β-反构体而非吡喃糖苷化合物表吡喃酮A(参见表2)。
表2.CD3OD中3、4和5的C-糖苷部分的1H和13CNMR数据
＊掩蔽的
质谱法
在负离子模式中，测定了强[M-H]-m/z611.3分子离子，其中少量缺失了CO2(44amu)m/z567.3峰(图3A)。在正离子模式中，[M+H]+m/z613.3和[M+Na]+m/z635.3是经测定的主要分子离子(图3B)。
负离子模式中的碰撞诱导解离(CID)实验揭示出主要碎片m/z403、447、491和521(图4A)，在正离子模式中，一系列水缺失和m/z569、545、539、515和485(图4B)。提出的正离子和负离子模式中表吡喃酮A的碎片化途径如图5中所示。提出的碎片化途径显示吡喃酮环是完整的且于提出的表吡喃酮A结构一致。
微量-级反应化学
乙酰化实验
将化合物表吡喃酮A的次级样品溶于干燥900μL二氯甲烷、50μL乙酐和50μL吡啶的混合物。通过LC-MS正离子扫描监测反应。分析样品显示添加2-5个乙酸酯的乙酰化化合物的混合物，表明存在至少5个羟基。这一结果与提出的表吡喃酮A结构一致(图5)。
甲基化实验
将化合物表吡喃酮A的次级样品溶于200μLMeOH+5μLH2SO4。通过LC-MS正离子扫描监测反应。酯化在室温下缓慢，由此将样品加热至50℃持续2小时，导致60％转化成单一甲酯。这一结果表明存在1个羧酸且与提出的表吡喃酮A结构一致(图6)。
就本说明书的目的而言，化合物表吡喃酮A4-羟基-6-(11′，15′，17′-三甲基-13′-羧基-十九-1′，3′，5′，7′，9′，11′，13′-庚烯)-2-吡喃酮-1-C-吡喃半乳糖苷的结构的优选实施方案称作表吡喃酮A。
生物活性的证实：黑附球菌提取物攻击试验
材料
通过用1L乙醇提取1L培养物制备黑附球菌(Epicoccumpurpurascens)(同义词黑附球菌(Epicoccumnigrum)菌株SF7489)样品，然后通过过滤除去固体，通过旋转蒸发除去液体。将残余物再混悬于25mL水。稀释次级样品，通过HPLC分析以测定表吡喃酮浓度。经测定表吡喃酮浓度为3.4mg/mL。
将25mL溶液等分入5个小瓶，冷冻。
方法
使灰色葡萄孢(Botrytiscinerea)菌株ICMP16221生长在PDA(马玲薯葡萄糖琼脂)上，得到孢子。使LecanicilliummuscariumK4V1生长在SA(SabourardAgar)上，得到孢子。将表吡喃酮以在无菌试管中的如下浓度导入2mL灰色葡萄孢(B.cinerea)和L.muscarium孢子溶液，然后在26℃温育48hrs。然后在显微镜下有孢子萌发的迹象下检验溶液。
1.对照品：无表吡喃酮的孢子溶液；
2.净：混合了未稀释表吡喃酮提取物浓度的孢子溶液(3.4mg/mL＝3400mg/L)；
3.孢子溶液稀释至表吡喃酮浓度1000mg/L；
4.孢子溶液稀释至表吡喃酮浓度500mg/L；
5.孢子溶液稀释至表吡喃酮浓度250mg/L；和
6.孢子溶液稀释至表吡喃酮浓度125mg/L。
结果
6支试管各自中的孢子生长程度如下表中所示：
结论
使用大于250mg/L的表吡喃酮浓度证实抑制了孢子生长。
仅通过实施例描述了本发明的方面且应理解，可以在不脱离如待批权利要求所定义的范围的情况下进行变型和添加。

Claims (11)

1.农业用组合物，包含：
农业可接受的载体；和
式(I)的抗微生物化合物：
其中
R选自：
C-β-D-吡喃半乳糖；C-α-D-呋喃半乳糖；C-β-D-呋喃半乳糖；C-β-L-吡喃半乳糖；C-α-L-呋喃半乳糖或C-β-L-呋喃半乳糖；
及其盐、互变体。
2.如权利要求1所述的组合物，其中该组合物是粉末形式。
3.抗微生物溶液，其包含根据权利要求1的组合物。
4.式(I)的化合物：
其中
R选自：
C-α-D-呋喃半乳糖；C-β-D-呋喃半乳糖；C-α-L-呋喃半乳糖或C-β-L-呋喃半乳糖；
及其盐、互变体在治疗植物或其植物部分中的微生物感染中的用途。
5.如权利要求4中所述的用途，其中所述微生物感染是真菌感染。
6.如权利要求4或权利要求5中所述的用途，其中所述植物部分是水果农作物植物或蔬菜农作物植物。
7.式(I)的化合物：
其中
R选自：
C-β-D-吡喃半乳糖；C-α-D-呋喃半乳糖；C-β-D-呋喃半乳糖；C-β-L-吡喃半乳糖；C-α-L-呋喃半乳糖或C-β-L-呋喃半乳糖；
及其盐、互变体在制备用于农业微生物感染的药物中的用途。
8.预防、除去或抑制植物或其植物部分中的微生物感染的方法，包含下列步骤：
给所述植物或其植物部分应用治疗有效量的组合物，该组合物包含：
式(I)的化合物：
其中
R选自：
C-β-D-吡喃半乳糖；C-α-D-呋喃半乳糖；C-β-D-呋喃半乳糖；C-β-L-吡喃半乳糖；C-α-L-呋喃半乳糖或C-β-L-呋喃半乳糖；
及其农业可接受的盐、互变体。
9.如权利要求8中所述的方法，其中该方法还包含下列步骤：
对植物或其植物部分应用治疗有效量的所述组合物以预防或抑制葡萄孢属(Botrytis)或Lecanicillium生长。
10.如权利要求9中所述的方法，其中所述植物部分是水果或蔬菜。
11.如权利要求1中所述的组合物或权利要求3的抗微生物溶液用于制备预防、治疗或改善农业微生物感染的药物的用途。
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Families Citing this family (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
NZ587490A (en) * 2010-08-20 2013-03-28 Greentide Ltd Anti-Microbial Compounds containing compounds with a sugar substituent
CN107779403B (zh) * 2016-08-29 2019-11-12 江苏省农业科学院 一种生防真菌黑附球菌h5及其应用
EP3360549A1 (en) 2017-02-14 2018-08-15 Rheinische Friedrich-Wilhelms-Universität Bonn Small molecule therapeutics for treating metachromatic leukodystrophy
CN108165589B (zh) * 2017-12-23 2021-02-05 安徽工程大学 一种真菌花色苷类红素及其发酵制备方法
CN112358974B (zh) * 2020-12-09 2022-06-10 昆明理工大学 一株植物内生真菌黑附球菌fzt214及其应用
US11751684B2 (en) 2021-07-22 2023-09-12 Jean Francois Bedard Rod holder

Family Cites Families (27)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2002047281A (ja) * 2000-07-28 2002-02-12 Mitsubishi-Tokyo Pharmaceuticals Inc テロメレース阻害剤
EP2749554B1 (en) * 2009-04-22 2017-12-20 SMA Therapeutics, Inc. 2,5-disubstituted arylsulfonamide CCR3 antagonists
JO3416B1 (ar) * 2009-04-27 2019-10-20 Jeneil Biosurfactant Co Llc تركيبات مضادة للبكتيريا وطرق استخدامها
US20110136729A1 (en) * 2009-05-26 2011-06-09 Shien Lu Occidiofungin, a unique antifungal glycopeptide produced by a strain of burkholderia contaminans
EP2269454A1 (en) * 2009-06-24 2011-01-05 Bayer CropScience AG Combinations of fungicidally active yeast and fungicides
DK2473034T3 (da) * 2009-09-03 2021-02-08 Fbsciences Holdings Inc Frøbehandlingssammensætninger og fremgangsmåde
GB2473460B (en) * 2009-09-10 2016-02-10 Univ Surrey Antimicrobial Composition
GB2474251A (en) * 2009-10-08 2011-04-13 Uws Ventures Ltd Antimicrobial composition and method of controlling contamination or infections using said composition
NL1037411C2 (nl) * 2009-10-23 2011-04-27 Pk Peters Krizman Sa Samenstelling omvattende anijszuur, een derivaat daarvan en/of een farmaceutisch acceptabel zout hiervan en een zure buffer, evenals een doseringsvorm en toepassingen hiervan.
GB2475359A (en) * 2009-11-11 2011-05-18 Biocopea Ltd A compound for use in treating a fulminant respiratory disorder
AT509501B1 (de) * 2010-02-24 2012-06-15 Univ Wien Tech Pflanzenschutzmittel
AR080234A1 (es) * 2010-02-25 2012-03-21 Marrone Bio Innovations Inc Cepa bacteriana aislada del genero burkholderia y metabolitos pesticidas del mismo
WO2011114280A2 (en) * 2010-03-18 2011-09-22 Basf Se Fungicidal compositions comprising comprising a phosphate solubilizing microorganism and a fungicidally active compound
SI23311A (sl) * 2010-03-19 2011-09-30 Kemijski inštitut Farmacevtska kombinacija acetilsalicilne kisline in protiglivne substance za uničevanje ali inhibicijo rasti in replikacije gliv
UA107963C2 (en) * 2010-06-07 2015-03-10 Janssen Pharmaceutica Nv Antifungal derivatives of 5,6-dihydro-4 - [(difluoro ethyl) phenyl] -4h-pyrrolo [1,2-a] [1,4] benzodiazepine and 4- (diftoretil) phenyl-6h-pyrolyl [1,2- a] [1,4] benzodiazepine
PL2597951T3 (pl) * 2010-07-26 2017-06-30 Bayer Intellectual Property Gmbh Wykorzystanie inhibitora dehydrogenazy bursztynianowej i inhibitora kompleksu III łańcucha oddechowego do poprawy stosunku mikroorganizmów szkodliwych do mikroorganizmów pożytecznych
NZ587490A (en) 2010-08-20 2013-03-28 Greentide Ltd Anti-Microbial Compounds containing compounds with a sugar substituent
WO2012038935A2 (en) * 2010-09-23 2012-03-29 Globachem Use of a composition for the increase of crop yield
AR083112A1 (es) * 2010-10-01 2013-01-30 Syngenta Participations Ag Metodo para controlar enfermedades fitopatogenas y composiciones fungicidas utiles para dicho control
PT105331A (pt) * 2010-10-12 2012-04-12 Cev Biotecnologia Das Plantas S A Conservante alimentar
TW201225844A (en) * 2010-10-25 2012-07-01 Marrone Bio Innovations Inc Chromobacterium bioactive compositions and metabolites
RU2448960C1 (ru) * 2010-12-06 2012-04-27 Виктор Вениаминович Тец Фунгицидное средство
RO126736B1 (ro) * 2010-12-08 2012-11-29 Institutul Naţional De Cercetare-Dezvoltare Pentru Pedologie, Agrochimie Şi Protecţia Mediului Tulpini de botrytis cinerea producătoare de elicitori fungici, produs pentru imunizarea plantelor de căpşun contra agenţilor putregaiului cenuşiu şi metodă de aplicare
RU2601550C2 (ru) * 2010-12-09 2016-11-10 Вокхардт Лимитед Кетолидные соединения
ES2690550T3 (es) * 2011-01-13 2018-11-21 Austin Research Labs Corp. Dispersiones de alta carga para el tratamiento de infecciones
WO2012126938A2 (en) * 2011-03-23 2012-09-27 Bayer Cropscience Ag Active compound combinations
EP2532232A1 (en) * 2011-06-10 2012-12-12 InterMed Discovery GmbH Long chain glycolipids useful to avoid perishing or microbial contamination of materials

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Synthetic Studies Directed toward the Assembly of the C-Glycoside Fragment of the Telomerase Inhibitor D8646-2-6;Akira Kanai et al;《org.lett.》;20031231;第5卷(第16期);2839-2839 *
Synthetic Study on telomerase inhibitor，D8646-2-6：Synthesis of the key intermediate using Sn(OTf)2 or Sc(OTf)3 dediated aldol-type reaction and stille coupling;Akira Kanai et al;《Chem.Pharm.Bull》;20071231;第55卷(第3期);495-499 *

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