CN103142528B - 一种鸡胚多糖的片剂 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种鸡胚多糖的片剂，所述的片剂主要由下列重量份的原料配制而成，活性成分：鸡胚多糖1-2份；辅料：微晶纤维素或低取代羟丙基纤维素15-30份，硬质酸钠10-30份，碳酸钠50-70份。本发明还公开了上述多糖片剂的制备方法，通过本发明所述的方法制备的鸡胚多糖片剂，具有剂量准确、质量稳定、纯度高，服用方便等优点。

Description

一种鸡胚多糖的片剂

技术领域

本发明涉及药物制剂领域，具体涉及一种从鸡胚中提取出的多糖的片剂。

发明背景

世界卫生组织报告显示，2008年全世界约有1270万癌症新增患者，760万死于癌症，尤其在发展中国家，癌症新增例数达56％，据推测到2020年前，全球癌症发病率将增加50％，即每年将新增1500万癌症患者。不仅如此，癌症的死亡人数也在全球迅猛上升，2030年这个数字可能会增至1320万。因此，癌症治疗药物的研究关系到肝癌患者和全社会切身利益，一直是医药行业的研究热点，具有重要的社会意义。

从治疗手段上来说，癌症的治疗主要是外科治疗、放射、化疗、生物与综合治疗等。癌症外科主要是癌切除、局部栓塞治疗等。切除和栓塞的治疗方法适用于界限清楚、远离大血管的肿瘤，而且手术切除的预后差、五年存活率低。移植需要解决的主要问题在于免疫排斥反应，后者往往成为患者和社会重大的经济负担，成功率也只有50％左右，5年存活率也很低。放疗和化疗对正常细胞也有杀伤作用，其特点是专一性差、副作用巨大，在杀伤肿瘤细胞的同时也极大地干扰机体的正常功能，不利于长期用药。正由于癌症缺乏有效控制方法，患者的预后极差。平均5年存活率低。因此，寻找肿瘤细胞特异性的药物是科学界始终关注的焦点。

肿瘤免疫治疗的方法有非特异性免疫治疗和特异性免疫治疗。过去，人们在肿瘤免疫研究中过于强调特异性抗原和特异性免疫系统，免疫学的进展加深了人们对免疫系统抗肿瘤功能及免疫治疗作用重要性的认识。近年的研究表明，非特异性免疫系统的重要性开始得到了认同。现在，人们认识到，与不能对自身组织产生良好免疫应答的特异性免疫系统形成鲜明对照的是，非特异性免疫系统具有很强的能力来消除单个畸变的自身细胞。这意味着非特异性免疫系统具有在单个细胞水平消除可能发展成为肿瘤细胞的早期遗传变异的潜能。迪威立克抗肿瘤作用主要是通过对单核巨噬细胞系统强大而持久的刺激，引起巨噬细胞增生、活化、吞噬功能增强、诱导分泌肿瘤坏死因子(TNF-α)、干扰素(IFN-γ)、白细胞介素(IL-2)、活性氧(H2O2、NO)等癌细胞杀伤因子及增强NK细胞杀伤活性，达到抑制和杀伤肿瘤细胞及病原微生物的目的，且可通过促进造血多能干细胞分化为单核巨噬细胞，进一步调动机体免疫系统蕴藏抗癌、杀菌潜力。由于免疫调节的全身作用强，副作用少且轻特异性强的特点，适用范围逐渐增加，安全性较其他类别的药物具备明显的提高。

本发明研制的鸡胚尿囊液和鸡胚提取的多糖属于免疫调节类产品。免疫调节是指在免疫反应中，各种免疫细胞及其亚群间，细胞与各种细胞因子间存在着的刺激与抑制，或正相与负相两方面作用构成的互相制约的调节网络，完成对抗原的识别和反应。这种调节作用对维护机体免疫功能的稳定和动态平衡十分重要。

本发明的申请人申请了一种抗肿瘤生物多糖(申请号201310093593.6)，公开了鸡胚多糖的制备方法，为了使鸡胚多糖更好的应用于临床，并最大限度保持多糖的生物活性，本发明公开了一种鸡胚多糖的片剂及其片剂的制备方法。

发明内容

本发明为使鸡胚多糖满足临床应用和大规模生产的需要，公开了一种鸡胚多糖的片剂，及其制备方法，通过所述方法可以得到方便服用、剂量准确、质量稳定的片剂。

本发明是通过以下技术方案实现的，鸡胚多糖片剂，主要由下列重量份的原料配制而成，

活性成分：鸡胚多糖1-2份，

辅料：微晶纤维素或低取代羟丙基纤维素15-30份，硬质酸钠10-30份，碳酸钠50-70份。

本发明所述的鸡胚多糖片剂，主要由下列重量份的原料配制而成，

活性成分：鸡胚多糖1.5份，

辅料：微晶纤维素或低取代羟丙基纤维素15份，硬质酸钠23.5份，碳酸钠60份。

本发明所述的鸡胚多糖片剂，由下述重量份的原料制成咀嚼片，

活性成分：鸡胚多糖1-2份，

辅料：微晶纤维素或低取代羟丙基纤维素15-30份，硬质酸钠10-30份，碳酸钠50-70份，乳糖或蔗糖或糖粉5-10份，山梨醇或甘露醇10-15份。

本发明鸡胚多糖片剂的制备方法，包括以下步骤：

步骤一鸡胚多糖的提取：

1)将SPF鸡胚在温度为36-38℃的恒温条件下培养9-13天。

2)收获后的鸡胚灯检，标记尿囊腔的位置，在温度为4℃-18℃的环境下，放置8-48小时，然后提取活鸡胚的(死鸡胚颜色变黑，活鸡胚颜色发红)尿囊液或鸡胚培养物。

3)将上一步得到的尿囊液或鸡胚培养物使用如下的纯化工艺提取：

A)尿囊液或鸡胚培养物的澄清处理：使用20mM～100mM磷酸盐缓冲液稀释尿囊液或鸡胚培养物混合均匀，其中磷酸盐缓冲液与尿囊液或鸡胚培养物的体积比为2-10∶1，8000g-12000g，18℃以下，离心10-60分钟，收集上清液，弃去沉淀；

B)上清液的进一步澄清处理：用0.22μm的微孔滤膜过滤上清液；

C)向滤膜滤过的上清液中添加固体硫酸氨，上清∶固体硫酸氨的质量比为5-20∶1，混匀后放置于4℃-18℃储存，时间不低于6小时；

D)8000g-12000g，18℃以下，离心10-60分钟，取上清液；

E)用10-30KD的超滤膜以0.1-0.5mol的NaCl对上清液进行超滤，取滤过液；

F)用1KD的超滤膜进行过滤，取截流液；

G)取F)步得到的截流液，于36-38℃干燥。

步骤二各组分原料粉碎、混匀、压片：

取各组分原料，分别粉碎，过筛60目，得到的均匀粉末分别置洁净容器中，按重量比取各组分混分，取混匀的样品检测鸡胚多糖含量的测定，干法压片即得鸡胚多糖的片剂。

上述鸡胚多糖含量的测定是通过葸酮法测定，其原理是糖类遇浓硫酸脱水生成糖醛或其衍生物，糠醛或羟甲基糠醛进一步与蒽酮试剂缩合产生蓝绿色物质，其在可见光区6200nm波长处有最大吸收，且其光吸收值在一定范围内与糖的含量成正比关系。此法可用于单糖、寡糖和多糖的含量测定，操作方法如下：

1)样品准备：精确量取1ml的供试品于试管中，平行测定2份，立即加入蒽酮试剂4.0m1，迅速浸于冰水浴中冷却，混匀，80℃水浴30分钟，管口加盖，防止蒸发。水浴结束后取出试管置于冰水中冷却至室温，波长620nm处测定吸光度。

标准曲线

2)标准曲线制备：精确量取标准葡萄糖溶液(100μg/ml)，0(空白对照)、0.1、0.2、0.3、0.4、0.6、0.8ml分别置于试管中，补纯化水至1.0ml，其余操作同供试品。以标准葡萄糖浓度为横坐标(X)，以相应浓度的吸收度为纵坐标(Y)作图，建立标准曲线。

3)结果计算：

(1)将供试品OD值代入回归方程中，计算出稀释后供试品的多糖含量；

(2)根据供试品的稀释倍数计算出供试品的多糖含量；

多糖含量(ug/m1)＝供试品稀释倍数×稀释供试品多糖浓度。

上述鸡胚多糖的含量测定还可以通过高效液相法测定。

本发明制备的片剂，一天服用1-2片，即可达到治疗剂量含鸡胚多糖2mg的要求。

本发明具有以下优点及有益效果：

1、鸡胚多糖的临床用药提供了方便的片剂剂型。

2、本发明鸡胚多糖的提取使用盐析和膜技术相结合的方法来提取生物多糖，大幅度提高鸡胚尿囊液和鸡胚多糖中具备生物活性的多糖分离纯化后的纯度和回收率。

3、本发明鸡胚多糖的提取过程中，没有使用有机溶剂，不存在生物危害性，更有利于环保。

4、本发明公开的鸡胚多糖片剂的制备方法获得的片剂，具有剂量准确、质量稳定、纯度高，服用方便等优点。

具体实施方式

通过参阅下述实施例可以更容易地了解本发明的内容，这些实施例只是为进一步说明本发明，并不意味着限定本发明的范围。

实施例1鸡胚多糖内服片的制备

片剂规格：0.1g/片，配制数量10000片；

称取鸡胚多糖10g，微晶纤维素300g，硬质酸钠190g，碳酸钠500g。

制备方法如下：

步骤一鸡胚多糖的提取：

1)将SPF鸡胚在温度为36-38℃的恒温条件下培养9-13天。

2)收获后的鸡胚灯检，标记尿囊腔的位置，在温度为4℃的环境下，放置16小时，然后提取活鸡胚的(死鸡胚颜色变黑，活鸡胚颜色发红)尿囊液或鸡胚培养物。

3)将第2)步得到的尿囊液或鸡胚培养物使用如下的纯化工艺提取：

A)尿囊液或鸡胚培养物的澄清处理：使用40mM磷酸盐缓冲液稀释尿囊液或鸡胚培养物混合均匀，其中磷酸盐缓冲液与尿囊液或鸡胚培养物的体积比为5∶1，12000g，18℃以下，离心10分钟，收集上清液，弃去沉淀；

B)上清液的进一步澄清处理：用0.22μm的微孔滤膜过滤上清液；

C)向滤膜滤过的上清液中添加固体硫酸氨，比例为10∶1(上清∶固体硫酸氨)，混匀后放置于4℃储存，时间不低于6小时；

D)12000g，18℃以下，离心10分钟，取上清液；

E)用10-30KD的超滤膜以0.2mol的NaCl对上清液进行超滤，取滤过液；

F)用1KD的超滤膜进行过滤，取截流液；

G)取F)步得到的截流液，于36-38℃干燥。

步骤二鸡胚多糖内服片的制备：

1)取各鸡胚多糖，微晶纤维素，硬质酸钠，碳酸钠，分别粉碎，过筛60目；

2)将上一步得到的均匀粉末置于混合机中混匀20min分钟；

3)用葸酮法抽样测定样品检测鸡胚多糖的含量：

A、样品准备：精确量取1ml的供试品于试管中，平行测定2份，立即加入蒽酮试剂4.0ml，迅速浸于冰水浴中冷却，混匀，80℃水浴30分钟，管口加盖，防止蒸发。水浴结束后取出试管置于冰水中冷却至室温，波长620nm处测定吸光度。

标准曲线

B、标准曲线制备：精确量取标准葡萄糖溶液(100μg/ml)，0(空白对照)、0.1、0.2、0.3、0.4、0.6、0.8ml分别置于试管中，补纯化水至1.0ml，其余操作同供试品。以标准葡萄糖浓度为横坐标(X)，以相应浓度的吸收度为纵坐标(Y)作图，建立标准曲线。

C、结果计算：将供试品OD值代入回归方程中，计算出稀释后供试品的多糖含量；根据供试品的稀释倍数计算出供试品的多糖含量；多糖含量(ug/ml)＝供试品稀释倍数×稀释供试品多糖浓度。

4)计算应压片质量，干法压片即得鸡胚多糖片剂。

实施例2鸡胚多糖内服片的制备：

片剂规格：0.1g/片，配制数量10000片；

称取鸡胚多糖15g，微晶纤维素150g，硬质酸钠235g，碳酸钠600g。

制备方法如下：

步骤一鸡胚多糖的提取：

1)将SPF鸡胚在温度为36-38℃的恒温条件下培养12天。

2)收获后的鸡胚灯检，标记尿囊腔的位置，在温度为4℃的环境下，放置18小时，然后提取活鸡胚的(死鸡胚颜色变黑，活鸡胚颜色发红)尿囊液或鸡胚培养物。

3)将第2)步得到的尿囊液或鸡胚培养物使用如下的纯化工艺提取：

A)尿囊液或鸡胚培养物的澄清处理：使用30mM磷酸盐缓冲液稀释尿囊液或鸡胚培养物混合均匀，其中磷酸盐缓冲液与尿囊液或鸡胚培养物的体积比为5∶1，12000g，4℃，离心10分钟，收集上清液，弃去沉淀；

B)上清液的进一步澄清处理：用0.22μm的微孔滤膜过滤上清液；

C)向滤膜滤过的上清液中添加固体硫酸氨，比例为8∶1(上清∶固体硫酸氨)，混匀后放置于4℃储存，时间不低于6小时；

D)12000g，18℃以下，离心10分钟，取上清液；

E)用10-30KD的超滤膜以0.2mol的NaCl对上清液进行超滤，取滤过液；

F)用1KD的超滤膜进行过滤，取截流液；

G)取F)步得到的截流液，于36-38℃干燥。

步骤二鸡胚多糖内服片的制备：

1)取各鸡胚多糖，微晶纤维素，硬质酸钠，碳酸钠，分别粉碎，过筛60目；

2)将上一步得到的均匀粉末置于混合机中混匀15min分钟；

3)用葸酮法抽样测定样品检测鸡胚多糖的含量：

A、样品准备：精确量取1ml的供试品于试管中，平行测定2份，立即加入蒽酮试剂4.0ml，迅速浸于冰水浴中冷却，混匀，80℃水浴30分钟，管口加盖，防止蒸发。水浴结束后取出试管置于冰水中冷却至室温，波长620nm处测定吸光度。

标准曲线

B、标准曲线制备：精确量取标准葡萄糖溶液(100μg/ml)，0(空白对照)、0.1、0.2、0.3、0.4、0.6、0.8ml分别置于试管中，补纯化水至1.0ml，其余操作同供试品。以标准葡萄糖浓度为横坐标(X)，以相应浓度的吸收度为纵坐标(Y)作图，建立标准曲线。

C、结果计算：将供试品OD值代入回归方程中，计算出稀释后供试品的多糖含量；根据供试品的稀释倍数计算出供试品的多糖含量；多糖含量(ug/ml)＝供试品稀释倍数×稀释供试品多糖浓度。

4)计算应压片质量，干法压片即得鸡胚多糖片剂。

实施例3鸡胚多糖咀嚼片的制备

片剂规格：0.1g/片，配制数量10000片；

称取鸡胚多糖20g，低取代羟丙基纤维素150g，硬质酸钠130g，碳酸钠500g，蔗糖100g，山梨醇100g。

步骤一鸡胚多糖的提取：

1)将SPF鸡胚在温度为36-38℃的恒温条件下培养12天。

2)收获后的鸡胚灯检，标记尿囊腔的位置，在温度为4℃的环境下，放置18小时，然后提取活鸡胚的(死鸡胚颜色变黑，活鸡胚颜色发红)尿囊液或鸡胚培养物。

3)将第2)步得到的尿囊液或鸡胚培养物使用如下的纯化工艺提取：

A)尿囊液或鸡胚培养物的澄清处理：使用20mM磷酸盐缓冲液稀释尿囊液或鸡胚培养物混合均匀，其中磷酸盐缓冲液与尿囊液或鸡胚培养物的体积比为5∶1，12000g，4℃，离心10分钟，收集上清液，弃去沉淀；

B)上清液的进一步澄清处理：用0.22μm的微孔滤膜过滤上清液；

C)向滤膜滤过的上清液中添加固体硫酸氨，比例为10∶1(上清∶固体硫酸氨)，混匀后放置于4℃储存，时间不低于6小时；

D)12000g，18℃以下，离心10分钟，取上清液；

E)用10-30KD的超滤膜以0.2mol的NaCl对上清液进行超滤，取滤过液；

F)用1KD的超滤膜进行过滤，取截流液；

G)取F)步得到的截流液，于36-38℃干燥。

步骤二鸡胚多糖内服片的制备：

1)鸡胚多糖、低取代羟丙基纤维素、硬质酸钠、碳酸钠、蔗糖、山梨醇，分别粉碎，过筛60目；

2)将上一步得到的均匀粉末置于混合机中混匀25min分钟；

3)用葸酮法抽样测定样品检测鸡胚多糖的含量，方法同实施例3。

Claims (4)

1.一种鸡胚多糖的片剂，主要由下列重量份的原料制成，

活性成分：鸡胚多糖1-2份，辅料：微晶纤维素或低取代羟丙基纤维素15-30份，硬脂酸钠10-30份，碳酸钠50-70份；其特征在于所述的鸡胚多糖片剂的制备方法包括以下步骤：

步骤一鸡胚多糖的提取：

1)将SPF鸡胚在温度为36-38℃的恒温条件下培养9-13天；

2)收获后的鸡胚灯检，标记尿囊腔的位置，在温度为4℃-18℃的环境下，放置8-48小时，然后提取活鸡胚的尿囊液或鸡胚培养物；

3)将上一步得到的尿囊液或鸡胚培养物使用如下的纯化工艺提取：

A)尿囊液或鸡胚培养物的澄清处理：使用20mM～100mM磷酸盐缓冲液稀释尿囊液或鸡胚培养物混合均匀，其中磷酸盐缓冲液与尿囊液或鸡胚培养物的体积比为2-10∶1，18℃以下，8000g-12000g离心10-60分钟，收集上清液，弃去沉淀；

B)上清液的进一步澄清处理：用0.22μm的微孔滤膜过滤上清液；

C)向滤膜滤过的上清液中添加固体硫酸氨，上清∶固体硫酸氨质量比为5-20∶1，混匀后放置于4℃-18℃储存，时间不低于6小时；

D)8000g-12000g，18℃以下，离心10-60分钟，取上清液；

E)用10-30KD的超滤膜以0.1-0.5mol的NaCl对上清液进行超滤，取滤过液；

F)用1KD的超滤膜进行过滤，取截流液；

G)取F)步得到的截流液，于36-38℃干燥；

步骤二各组分原料粉碎、混匀、压片：

取各组分原料，分别粉碎，过筛60目，得到的均匀粉末分别置洁净容器中，按重量比取各组分混匀，取混匀的样品检测鸡胚多糖含量的测定，干法压片即得鸡胚多糖的片剂。

2.根据权利要求1所述的多糖片剂，主要由下列重量份的原料制成，

活性成分：鸡胚多糖1.5份，辅料：微晶纤维素或低取代羟丙基纤维素15份，硬脂酸钠23.5份，碳酸钠60份。

3.根据权利要求1所述的鸡胚多糖片剂，还包括下述重量份的原料制成咀嚼片，辅料：乳糖或蔗糖或糖粉5-10份，山梨醇或甘露醇10-15份。

4.根据权利要求1所述的鸡胚多糖片剂，其特征在于，所述的鸡胚多糖含量的测定具体方法为：

1)样品准备：精确量取1ml的供试品于试管中，平行测定2份，立即加入蒽酮试剂4.0ml，迅速浸于冰水浴中冷却，混匀，80℃水浴30分钟，管口加盖，防止蒸发；水浴结束后取出试管置于冰水中冷却至室温，波长620nm处测定吸光度；

标准曲线

2)标准曲线制备：精确量取标准葡萄糖溶液100μg/ml，0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.6、0.8ml分别置于试管中，补纯化水至1.0ml，其余操作同供试品；以标准葡萄糖浓度为横坐标X，以相应浓度的吸收度为纵坐标Y作图，建立标准曲线；

3)结果计算：

(1)将供试品OD值代入回归方程中，计算出稀释后供试品的多糖含量；

(2)根据供试品的稀释倍数计算出供试品的多糖含量；

多糖含量ug/ml＝供试品稀释倍数×稀释供试品多糖浓度。