CN102078529B

CN102078529B - 一种用于治疗小儿感冒的中药制剂

Info

Publication number: CN102078529B
Application number: CN2011100001157A
Authority: CN
Inventors: 赵旭东; 罗川
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2011-01-04
Filing date: 2011-01-04
Publication date: 2013-02-13
Anticipated expiration: 2031-01-04
Also published as: CN102078529A

Abstract

本发明涉及一种用于治疗小儿感冒的中药制剂，该中药制剂是由紫草皮、大青叶、连翘、柴胡、丹参、胆南星、蝉蜕、紫苏叶、平贝母、天竺黄、薄荷为原料药经加工制成；全方以清热解毒、宣肺解表、化痰止咳为宗旨，在对小儿外感风热，内郁化火所致的发热、咳嗽、鼻塞、咽红、痰多，或咳嗽而喘，舌红、苔黄或腻，脉数等症及小儿急性上呼吸道感染、急性支气管炎的治疗方面有很好的效果，服用安全，无任何毒副作用。

Description

一种用于治疗小儿感冒的中药制剂

技术领域

本发明涉及一种用于治疗小儿感冒的中药制剂，属于中药制药技术领域。

技术背景

小儿是一个具有特殊生理特点的群体，处在生长发育的阶段。机体各系统和各器官的功能尚未成熟，特别是婴幼儿，肝、肾功能，中枢神经系统和内分泌系统的发育尚不健全，对许多药物的代谢、排泄和耐受性较差。小儿感冒属临床中比较常见和多发的一种疾病，由于小儿体质虚弱，易患感冒，临床主要表现为发热、咳嗽、鼻塞等症。目前药物治疗主要为西医治疗和中医治疗；西医治疗主要以抗生素、非甾体抗炎药、抗组胺药为主，这些药品副作用较常见，有的还有严重的不良反应，机体易产生耐受性，对小儿的健康很不利。中医在治疗小儿感冒方面，主要以中成药为主，目前市场上大多数治疗效果不能令人满意，不能满足临床需要。

发明内容

本发明的目的在于针对本领域现有技术所存在的上述缺陷，通过发掘祖国丰富的中医药资源，发明人为临床治疗小儿感冒提供了一种疗效很好，治疗面广，且无任何毒副作用的纯中药制剂。

发明人是专门针对小儿的特殊生理特点，以清热解毒、宣肺解表、化痰止咳为治疗原则，对小儿外感风热，内郁化火所致的发热、咳嗽、鼻塞、咽红、痰多，或咳嗽而喘，舌红、苔黄或腻，脉数等症及小儿急性上呼吸道感染、急性支气管炎有很好的治疗效果，且无任何毒副作用。

基于上述原则，本发明所提供的治疗小儿感冒的中药制剂原料药配比为：

紫草皮50-150份、大青叶40-120份、连翘40-120份、柴胡100-200份、丹参40-120份、胆南星25-75份、蝉蜕20-60份、紫苏叶50-90份、平贝母5-15份、天竺黄50-150份、薄荷25-75份。

上述原料药优选配方为：

紫草皮90-110份、大青叶70-90份、连翘70-90份、柴胡140-160份、丹参70-90份、胆南星40-60份、蝉蜕30-50份、紫苏叶60-80份、平贝母7-13份、天竺黄90-110份、薄荷40-60份。

上述原料药最优选配方为：

紫草皮100份、大青叶80份、连翘80份、柴胡150份、丹参80份、胆南星50份、蝉蜕40份、紫苏叶70份、平贝母10份、天竺黄100份、薄荷50份。

颗粒剂制备工艺为：

以上十一味药材，平贝母粉碎成细粉，过100目筛，备用；紫草皮、大青叶、连翘、柴胡、丹参、胆南星、蝉蜕、紫苏叶、天竺黄、薄荷共十味药材，加水煎煮两次，第一次加10倍量水，煎煮2小时，第二次加8倍量水，煎煮1小时，滤过，合并滤液，滤液减压浓缩至80℃时测得的相对密度为1.30～1.35的清膏，取清膏加入平贝母细粉，混匀，加入蔗糖480g及糊精适量，混匀，制粒，干燥，整粒，制成1000g，装袋，即得颗粒剂。

片剂制备工艺为：

以上十一味药材，平贝母粉碎成细粉，过100目筛，备用；紫草皮、大青叶、连翘、柴胡、丹参、胆南星、蝉蜕、紫苏叶、天竺黄、薄荷共十味药材，加水煎煮两次，第一次加10倍量水，煎煮2小时，第二次加8倍量水，煎煮1小时，滤过，合并滤液，滤液减压浓缩至80℃时测得的相对密度为1.30～1.35的清膏，取清膏加入平贝母细粉，混匀，加入适量淀粉，混匀，制粒，干燥，整粒，加入适量硬脂酸镁，混匀，压制成1000片，即得片剂。

胶囊剂制备工艺为：

以上十一味药材，平贝母粉碎成细粉，过100目筛，备用；紫草皮、大青叶、连翘、柴胡、丹参、胆南星、蝉蜕、紫苏叶、天竺黄、薄荷共十味药材，加水煎煮两次，第一次加10倍量水，煎煮2小时，第二次加8倍量水，煎煮1小时，滤过，合并滤液，滤液减压浓缩至80℃时测得的相对密度为1.30～1.35的清膏，取清膏加入平贝母细粉，混匀，加入适量淀粉，混匀，制粒，干燥，整粒，装成胶囊1000粒，即得胶囊剂。

上述组方中，紫草皮为君药，具有凉血、活血、清热、解毒之功效；为凉血之要药，性寒，小儿脾气实者犹可用。大青叶：性寒，具有清热解毒、凉血止血之功效；用于外感热病热盛烦渴、咽喉肿痛、口疮等症。连翘：性微寒。具有清热解毒，散结消肿之功效，用于风热感冒，发热，心烦，咽喉肿痛。柴胡：性平，具有疏散退热、疏肝解郁、升举阳气之功效；用于感冒发热，寒热往来，胸胁胀痛。配大青叶、连翘、柴胡为臣药助其清热、凉血、解毒之力。丹参：性微寒，具有活血祛瘀，养血安神，凉血消肿的功效；主治瘀血头、胸、胁、腹疼痛，积聚，温病心烦，血虚心悸等症。胆南星：性凉，具有清热化痰，熄风定惊之功效。蝉蜕：性寒，具有疏散风热，利咽开音，透疹，明目退翳，息风止痉之功效；用于风热感冒，温病初起，咽痛音哑。紫苏叶：性温，具有解表散寒，行气和胃的功效；用于风寒感冒、咳嗽呕恶。平贝母：性微寒，具有清热润肺；化痰止咳的功效。用于肺热燥咳，干咳少痰，阴虚劳嗽，咯痰带血。天竺黄：性寒，具有清热豁痰、凉心定惊的功效，用于小儿百日咳，小儿惊风抽搐等。薄荷：性凉，具有疏风、散热、辟秽、解毒之功效。用于外感风热，头痛，目赤，咽喉肿痛，食滞气胀。诸药合用，以上十一味药合为一体，力专效宏，共奏清热解毒、宣肺解表、化痰止咳之功。可有效的治疗因小儿外感风热，内郁化火所致的发热、咳嗽、鼻塞、咽红、痰多，或咳嗽而喘，舌红、苔黄或腻，脉数等症；小儿急性上呼吸道感染、急性支气管炎见上述证候者。

本发明的有益效果：本发明制剂主要是由紫草皮、大青叶、连翘、柴胡、丹参、胆南星、蝉蜕、紫苏叶、平贝母、天竺黄、薄荷为原料药经加工制成的中药制剂，具有清热解毒、宣肺解表、化痰止咳的功效，对小儿急性上呼吸道感染、急性支气管炎及小儿外感风热，内郁化火所致的发热、咳嗽、鼻塞、咽红、痰多，或咳嗽而喘，舌红、苔黄或腻，脉数等症具有很好的治疗效果，且无任何毒副作用。

发明人在研究中还作了下表中的配比试验，分别制成颗粒剂、胶囊剂、片剂；其制备方法：颗粒剂同实施例1，胶囊剂同实施例2，片剂同实施例3；经发明人多年的临床实践证明，同样具有实施例1的作用。

需要说明的是，经过实践证明在本发明的配方范围内调整各原料，所得到的“小儿天丹颗粒、小儿天丹胶囊、小儿天丹片”均可达到本发明的目的，相比之下，实施例1的组方和剂型更为合理。

以下是按实施例1进行的药效学试验和动物急性毒性试验。

药效学试验：

以本发明实施例1所制备的颗粒剂为以下试验用药，命名为“小儿天丹颗粒”，根据其功能主治我们进行了抗病毒、抗菌、抗炎、止咳、化痰、解热方面的药效学研究。具体如下：

一、实验材料

1.器材：

电子天平：型号：BS210S 精确度：0.1mg 北京赛多利斯天平厂

721型分光光度计：上海第三光学仪器厂

电脑数字式体温计型号：MC-3，由欧姆龙(大连)有限公司生产，量制辽字02000216，辽药监准字97第221036号，企业标准编号Q/QMD03-1997。

恒温热板仪：YLS-6B型，山东省医学科学院设备站。

生物安全柜：FOSUN，产品级别Ⅱ级，产品标准号：Q/YXMW101-2005，上海瑞仰净化装备有限公司制造，上海复星医学科技发展有限公司监制。

CO₂培养箱：CO₂incuBATORSL SHELL/TB，温度范围18-28℃，相对湿度20-80％设定温度35℃。

普通培养箱。

2.试剂：

干酵母：超市购得安琪酵母15g，生产日期：09年12月3日

二甲苯：批号：840103 西安化学试剂厂

乙醚：批号：080904天津市富宇精细化工有限公司

伊文斯兰

3.培养基

9日龄鸡胚，由西安华秦雁肉鸡公司提供，放孵箱35℃孵育。

胎牛血清，由北京天竺空港生物化学制品(北京)技术有限公司生产

MH培养基，由北京陆桥技术有限责任公司生产，批号090409

琼脂粉：北京奥博星生物技术有限责任公司生产，批号20091102

改良马丁实液体培养基：北京路桥技术有限责任公司，批号090904

血平板培养基，按《实用医学检验学》制备。

4.动物

ICR小鼠，体重18-22g，合格证号：0034651、0034178、0034165、0034181、0034182，由第四军医大学实验动物中心提供。

Balb/c小鼠，体重18-22g，合格证号：0034681、0034687、0034151、0034165、0034171由第四军医大学实验动物中心提供。

SD大鼠，体重180-220g，合格证号：0001551，由西安交通大学医学院实验动物中心提供。

5.阳性药

利巴韦林片：四川美大康药业股份有限公司生产，批号090909，国药准字H20003197，有效期至2011.08，功效：适用于呼吸道合胞病毒引起的病毒性肺炎与支气管炎，皮肤疱疹病毒感染。

头孢拉定胶囊：广州白云山制药股份有限公司生产，批号2090044，国药准字H44021525，有效期至2011.11。

阿斯匹林肠溶片：亚宝药业太原制药有限公司生产，批号090901，国药准字H14024002，有效期至2011.08。

川贝枇杷糖浆：江西南大博士制药有限公司生产，批号1004014，国药准字Z20027516，有效日期2011.09

醋酸泼尼松片：上海信宜药厂有限公司生产，批号091101，国药准字H31020675，有效期至2012.11。

6.受试药：小儿天丹颗粒

来源：按照实施例1的组方和工艺制得。

临床用量：开水冲服，一日三次，二岁以下一次2g，三至五岁一次4g，六至九岁一次6g，九岁以上一次8g。1g颗粒相当于0.81g生药材。

7.病毒：PR8流感病毒鼠肺适应株

来源：中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所流感室。

试验前扩增PR8流感病毒滴度至1∶1024，冰箱保存待用。

8.试验菌株

金黄色葡萄球菌 ATCC 25925株铜绿假单孢菌 ATCC 57853株

表皮葡萄球菌 26069株乙型溶血性链球菌 32210株

肺炎链球菌 31001株白色念珠菌 85021株

以上标准菌株冻干菌株购自中国医学科学院北京药品生物制品鉴定所中国细菌保藏中心，2010年3月复苏，试验前传代备用。

二、实验方法与结果

剂量设置及配制：小儿体重按30kg计，则人用量为每日3次/日×8g/次÷30kg＝0.8g/kg。

1g＝1.03g生药

1.小儿天丹颗粒对小鼠体内感染流感病毒亚洲甲型鼠肺适应株PR8(H1N1)的死亡保护作用

1.1材料

病毒：流感病毒亚洲甲型鼠肺适应株PR8(H1N1)中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所流感室提供.按常规接种9～11d胚龄鸡胚的尿囊腔，收集尿囊液，测定红细胞凝集活性，血凝滴度≥1024，细菌培养阴性，分装，置-80℃保存待用。

1.2方法及结果

1.2.1流感病毒PR8株致小鼠半数死亡(LD50)测定

将病毒进行10倍连续稀释至第六管(10^-1～10^-6)，每个浓度滴鼻接种4只balb/c小鼠，观察2周，记载小鼠发病、死亡情况，观察得出最小致死量值、计算得出LD50值。小鼠感染病毒后，经过短暂潜伏期(7d左右)，便进入发病状态。体征一般从厌食、呆滞和嗜睡等精神症状开始，继而出现畏寒(隆身、群聚)、发热(耸毛、耳部末稍血管充血)和呼吸道分泌物增多(不时捞鼻)等体征，最后发展成肺炎直至死亡等递进变化。死亡统计情况见表1。

表1 流感病毒PR8株致小鼠半数死亡(LD50)测定统计

6d

7d

8d

9d

10d

11d

12d

13d

14d

死亡数

10^-1

2♀2♂

4

10^-2

2♀

1♂

4

10^-3

无

1♀1♂

1♀

1♂

4

10^-4

无

1♀

无

2

10^-5

无

1♀

无

1

10^-6

无

0

从表1得知PR8致小鼠半数致死量LD50为1∶1024滴度的10^-4。

最小100％致死浓度为1∶1024滴度的10^-3。

1.2.2小儿天丹颗粒对小鼠感染流感病毒PR8病毒的死亡保护作用

取合格balb/c小鼠50只，体重18-22g，随机分为五组，每组10只，♂♀各半。第一组模型对照组，灌胃蒸馏水10ml/kg，第二组阳性对照组，灌胃利巴韦林片(配置成为4mg/ml药液后按体积20ml/kg灌胃给药，动物剂量为80mg/kg，为人用量的10倍)，第三～五组灌胃小儿天丹颗粒16、8、4g/kg。用最小致死剂量病毒液滴鼻感染小鼠，感染4h后，按20ml/kg灌胃给予蒸馏水或对应药物药，每天给药一次，连续给药3d。观察14天，2天内死亡者不计，超过14天以14天计算。观察小儿天丹颗粒对病毒感染小鼠死亡的保护和延长病鼠生命作用。组间比较T检验。结果见表2。

表2小儿天丹颗粒对流感病毒PR8感染的死亡保护作用

注：与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01

由表2可见，对照组的死亡率为100％，小儿天丹颗粒16、8g/kg剂量组、利巴韦林片可明显延长感染小鼠的生存时间(P＜0.01或P＜0.05)，降低小鼠死亡率。本品对小鼠感染流感病毒PR8有死亡保护作用。

1.2.3对小鼠感染流感病毒PR8的肺脏保护作用

取合格balb/c小鼠60只，体重18-22g，随机分为六组，每组10只，♂♀各半。第一组空白对照组，灌胃蒸馏水20ml/kg，第二组模型对照组，灌胃蒸馏水20ml/kg，第三组阳性对照组，灌胃利巴韦林片(配置成为4mg/ml药液后按体积20ml/kg灌胃给药，动物剂量为80mg/kg，为人用量的10倍)，第四～六组灌胃小儿天丹颗粒16、8、4g/kg。除空白对照组外其余五组均用最小致死剂量病毒液滴鼻感染小鼠，感染4h后，按20ml/kg灌胃给予蒸馏水或对应药物，每天给药一次，连续给药3d，第6d检杀。称小鼠肺脏重量，计算肺指数，肺指数＝肺脏重量(g)/体重(g)×100，组间比较，t检验。结果见表3。将各组动物肺脏浸入10％甲醛溶液中24h，石蜡包埋后连续切片，HE染色，显微镜下观察，按下列肺脏病理改变评分标准对各组小鼠肺脏进行评分。

0分：肺组织正常；

1分：细支气管周围及肺组织出现炎细胞浸润，间质毛细血管张充血，小部分细胞内有少量渗出；

2分：细支气管内有大量炎性细胞浸及轻度鳞状上表皮生，肺泡渗出物增多，部分已经实变，间质纤维组织明显增生；

3分：肺组织大部分或者全部实变，支气管明显鳞状上皮化生，支气管被炎性渗出阻塞。

各组动物肺脏病理切片评分后采用Excel数据库和SPSS 16.0软件进行秩和检验，并组间比较。结果见表4。

表3小儿天丹颗粒对流感病毒PR8感染小鼠肺指数的影响

注：模型组与空白对照组比较，△△P＜0.01，与模型对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01

表4小儿天丹颗粒对流感病毒PR8感染小鼠肺病变评分的影响

注：模型组与空白对照组比较△P＜0.05，△△P＜0.01；

给药组与模型对照组比较，*P＜0.05。

由表3可见，模型对照组与空白对照相比，明显升高感染小鼠的肺指数(P＜0.01或P＜0.05)，明显减少小鼠体重(P＜0.01或P＜0.05)，提示模型成立。给药组与模型对照相比，小儿天丹颗粒16、8、4g/kg剂量组及阳性对照组可明显降低感染小鼠的肺指数(P＜0.01或P＜0.05)，16、8g/kg剂量组明显增加体重(P＜0.01或P＜0.05)。

由表4可见，模型对照组与空白对照组相比，明显升高感染小鼠肺部病变指数，提示模型成立。与模型组比较，利巴韦林组及小儿天丹16、8g/kg剂量组可显著降低小鼠肺部病变指数(P＜0.01或P＜0.05)。

由以上结果可知：小儿天丹颗粒对小鼠感染流感病毒PR8有肺脏保护作用。

2、小儿天丹颗粒对6种上呼吸道常见细菌的抑制和杀灭作用

2.1药液准备取小儿天丹颗粒50g，加水至100ml浸泡12h，纱布过滤2次，滤纸过滤一次，浓缩至50ml(1g/ml)，棉塞封口后121℃高压灭菌30min。4℃冰箱储存备用。

2.2试验菌株

金黄色葡萄球菌、铜绿假单孢菌、表皮葡萄球菌、乙型溶血性链球菌、肺炎链球菌、白色念珠菌。

2.3试验菌液配制

将复苏传代在3-5代间4℃保存的金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、铜绿假单孢菌接种于营养琼脂培养基上，置普通培养箱37℃、18小时培养，选3-5个典型菌落接种于1ml液体培养基上，经37℃4-6h培养调整菌液浓度为10⁶cFu/ml，4℃保存待用；

将复苏传代在3-5代间4℃保存的乙型链球菌、肺炎链球菌接种于血平板，置5％C02培养箱37℃、18小时培养，选3-5个典型菌落接种于1ml含10％绵羊血的MH肉汤中，经37℃4-6h培养调整菌液浓度为10⁶cFu/ml，4℃保存待用；

将复苏传代在3-5代间4℃保存的白色念珠菌接种于改良马丁固体培养基上，置普通培养箱37℃、18小时培养，选3-5个典型菌落接种于1ml改良马丁液体培养基上，经37℃4-6h培养调整菌液浓度为10⁶cFu/ml，4℃保存待用。

2.4实验方法

采用试管二倍稀释法测定MIC、MBC

2.4.1对金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、铜绿假单孢菌的MIC、MBC测定：

将小儿天丹颗粒提取液用MH肉汤由50％(W/V)为起点进行2ml/2ml连续2倍梯度稀释，依次加入浓度为10⁶cFu/ml的试验菌液0.05ml。同时设立细菌以及培养基对照。置普通培养箱37℃、18小时培养，观察最低抑菌浓度(MIC)。挑选所有清晰无细菌生长的试管，用无菌接种环挑取少许试管内培养液接种于营养琼脂平板，置普通培养箱37℃、24小时培养，以菌落数不超过5个的最低药物浓度为该药物的最小杀菌浓度(MBC)。结果见表5。

2.4.2对乙型溶血性链球菌、肺炎链球菌的MIC、MBC测定：

将小儿天丹颗粒提取液用5％小牛血清的MH肉汤，流感杆菌用含5％羊血清的MH肉汤，由50％(W/V)为起点进行2ml/2ml连续2倍梯度稀释，依次加入浓度为10⁶cFu/ml的试验菌液0.05ml。同时设立细菌以及培养基对照。置5％CO₂培养箱37℃、24小时培养，观察最低抑菌浓度(MIC)。挑选所有清晰无细菌生长的试管，用无菌接种环挑取少许试管内培养液接种于血平板，置普通培养箱37℃、24小时培养，以菌落数不超过5个的最低药物浓度为该药物的最小杀菌浓度(MBC)。结果见表5。

2.4.3对白色念珠菌的MIC、MBC测定：

将小儿天丹颗粒提取液用沙保弱氏(Sabourraud，SD)肉汤由50％(W/V)为起点进行2ml/2ml连续2倍梯度稀释，依次加入浓度为10⁶cFu/ml的试验菌液0.05ml。同时设立细菌以及培养基对照。置普通培养箱37℃、24小时培养，观察最低抑菌浓度(MIC)。挑选所有清晰无细菌生长的试管，用无菌接种环挑取少许试管内培养液接种于沙保弱氏培养基，置普通培养箱37℃、24小时培养，以菌落数不超过5个的最低药物浓度为该药物的最小杀菌浓度(MBC)。结果见表5。

表5 小儿天丹颗粒对7株标准菌株的MIC

由以上体外试验结果可知：小儿天丹颗粒能够有效地抑制和灭活呼吸道常见致病菌，其中对金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、乙型溶血性链球菌的体外抑菌作用较强，分别为1∶8、1∶8、1∶8。

3.小儿天丹颗粒体内抗菌试验

3.1测定金黄色葡萄球菌小鼠最小致死量

取金黄色葡萄球菌原菌液约100ml，离心3000rmp×10min，取沉淀，用灭菌生理盐水稀释至5.0麦氏比浊管浓度(1.5×10⁹cFu/ml)。取无菌试管若干，按10倍稀释，连续稀释4管，1-4管浓度分别为：1号管(1.5×10⁹cFu/ml)；2号管(1.5×10⁸cFu/ml)；3号管(1.5×10⁷cFu/ml)；4号管(1.5×10⁶cFu/ml)。

取昆明种小鼠40只，按体重随机分为4组，每组10只，按0.5ml/只分别腹腔注射1-4管细菌混悬液。每日观察记录小鼠死亡情况，连续观察7d，100％完全死亡的最低细菌浓度为该菌对小鼠的最小致死浓度。结果见表6。

表6金黄色葡萄球菌对小鼠最小致死量死亡统计

由表6得，金黄色葡萄球菌2号管最小致死浓度为1.5×10⁸cfu/ml，最小致死量为7.5×10⁷(1.5×10⁸cfu/ml×0.5ml)个金黄色葡萄球菌。

3.2小儿天丹颗粒对腹腔注射金葡菌小鼠的保护作用：

取昆明种小鼠50只，随机分为5组，每组10只，雌雄各半，即模型对照组(灌胃等体积蒸馏水)；头孢拉定胶囊组(配置成为165mg/ml药液后按体积20ml/kg灌胃给药，动物剂量为0.33g/kg，相当于人临床拟用量的10倍)；小儿天丹颗粒高、中、低三个剂量组，分别为16g/kg，8g/kg，4g/kg。腹腔注射最小致死量的金葡菌，造模后4小时，各组灌胃给药或水，每日1次，连续3天。连续观察一周，第一天每3小时观察一次，之后每天观察2次。组间比较，T检验。结果见表7。

死亡率＝(实验动物数-存活动物数)÷实验动物数×100％

表7小儿天丹颗粒体内对金黄色葡萄球菌感染的保护作用

注：与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01

由表7可见金黄色葡萄球菌模型组死亡率为100％；头孢拉定胶囊组死亡率为60％，小儿天丹颗粒16、8、4g/kg的死亡率70-90％。各给药组与模型组比较与模型组比较生存期明显延长(P＜0.01或P＜0.05)，且小儿天丹颗粒各剂量组的保护作用呈一定的量效关系。小儿天丹颗粒对金黄色葡萄球菌体内感染引起的的小鼠死亡有较好的保护作用。

4.小儿天丹颗粒对二甲苯致小鼠耳肿胀的抑制作用

取昆明种小鼠50只，随机分为5组，每组10只，雌雄各半，即空白对照组(灌胃等体积蒸馏水)；阳性对照组给予醋酸泼尼松片(配置成为0.5mg/ml药液后按20ml/kg灌胃给药，动物剂量为10mg/kg，相当于人临床拟用量的10倍)，小儿天丹颗粒高、中、低三个剂量组，分别为16g/kg，8g/kg，4g/kg。除阳性对照组致炎当日灌胃1次外，其他组给药3d，1次/d。末次给药1h后，在每只小鼠右耳廓涂抹0.05ml二甲苯，左耳留作空白对照。4h后，将小鼠脱颈椎处死，沿耳廓线剪下左、右耳，用6mm直径打孔器分别在同一位置打下圆耳片，天平称重，按下列公式计算耳肿胀率。T检验，组间比较。结果见表8。

肿胀率＝(右耳重量-左耳重量)/左耳重量×100％

表8小儿天丹颗粒对二甲苯致小鼠耳肿胀的抑制作用

注：与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01

由表8可见阳性对照组耳肿胀率为35.9±10.4，与模型组59.8±23.5比较有显著降低(P＜0.01)，小儿天丹颗粒16、8g/kg剂量组与模型组比较耳肿胀率也有显著降低(P＜0.05)。小儿天丹颗粒对二甲苯致小鼠耳肿胀有一定的抑制作用。

5.小儿天丹颗粒对小鼠腹腔毛细血管通透性的影响

取小鼠50只，体重18-22g，随机分为五组，每组10只，雌雄各半。第一组为空白对照组灌胃蒸馏水40ml/kg；第二组为阳性对照组醋酸泼尼松片(配置成为0.5mg/ml药液后按20ml/kg灌胃给药，动物剂量为10mg/kg，相当于人临床拟用量的10倍)，第三～五组为小儿天丹颗粒16g/kg，8g/kg，4g/kg。除阳性对照组致炎当日灌胃1次外，其余各组均在致炎前连续灌胃给药或蒸馏水3d。末次给药后1h，尾静脉注射0.5％伊文斯兰0.1ml/10g，然后立刻给小鼠腹腔注射0.8％冰醋酸0.2ml/只，20min后脱颈椎处死小鼠，剖腹用生理盐水洗涤腹腔的伊文斯蓝，收集洗液6ml。721分光光度计比色，波长590nm，以蒸馏水调零(如遇收集液混浊，则需离心10分钟3000转/分)，比色测定OD值。组间比较，t检验。结果见表9。

表9小儿天丹颗粒对小鼠腹腔毛细血管通透性的影响

与空白对照组比较*P＜0.05 **P＜0.01

由表9可见，小儿天丹颗粒16、8g/kg剂量、阳性对照组OD值明显小于空白对照组，即小鼠腹腔伊文斯兰的渗出量明显减少(P＜0.01或P＜0.05)；小儿天丹颗粒对小鼠腹腔毛细血管通透性有一定的抑制作用。

6.小儿天丹颗粒对小鼠的止咳作用(小鼠氨水引咳法)

取小鼠50只，体重18-22g，随机分为五组，每组10只，雌雄各半。第一组为空白对照组灌胃蒸馏水40ml/kg；第二组为阳性对照组灌胃川贝枇杷糖浆(原液4倍稀释后按20ml/kg灌胃给药，相当5ml原液/kg，为人用量的10倍)，第三～五组灌胃小儿天丹颗粒16g/kg，8g/kg，4g/kg。连续灌胃3d，第3d给药30min后，将小鼠置于500ml玻璃钟罩内通过空气压缩机连接玻璃喷雾头，以40mmHg恒压将氨水均匀地喷入钟罩内，喷雾5s，记录小鼠咳嗽的潜伏期，以计时开始到第一次咳嗽的时间为潜伏期。同时记录小鼠在2min内的咳嗽次数。给药组与对照组比较，进行统计学处理(t检验)。结果见表10。

表10 小儿天丹颗粒对小鼠的止咳作用

与空白对照组比较*P＜0.05 *P＜0.01

由表10可见，小儿天丹颗粒16、8g/kg及川贝枇杷糖浆与空白对照相比能明显延长小鼠引咳潜伏期(P＜0.01)及2min内的咳嗽次数(P＜0.01)。小儿天丹颗粒对氨水所致小鼠咳嗽有一定的止咳作用。

7.小儿天丹颗粒对小鼠的祛痰作用

取小鼠50只，体重18-22g，随机分为五组，每组10只，雌雄各半。第一组为空白对照组灌胃蒸馏水；第二组川贝枇杷糖浆(原液4倍稀释后按20ml/kg灌胃给药，相当5ml原液/kg，为人用量的10倍)，第三～五组小儿天丹颗粒16g/kg，8g/kg，4g/kg，给药体积为20ml/kg。连续灌胃3d，末次给药30min后，按10ml/kg腹腔注射2.5％的酚红生理盐水溶液，30min后脱颈椎处死小鼠，剥离气管周围组织，剪下自甲状软骨至气管分支处的一段气管，放入盛有2ml生理盐水的试管中，再加1％NaOH溶液0.1ml。用721型分光光度计，波长546nm测OD值。用酚红做一标准曲线，根据曲线计算酚红含量(μg/ml)，与对照组比较，进行统计学处理(t检验)。结果见表11。

表11 小儿天丹颗粒对小鼠的祛痰作用

注：与空白对照组比较*P＜0.05 **P＜0.01

由表11可见，小儿天丹颗粒16、8g/kg剂量组及阳性药川贝枇杷糖浆与空白对照组比较，均能明显升高小鼠酚红排泌量(P＜0.01)；小儿天丹颗粒有一定的祛痰作用。

8.小儿天丹颗粒对大鼠的解热作用

8.1大鼠准备

大鼠于实验室环境适应3-4日，每日用体温计从肛内测体温1-2次，使其适应测体温操作。试验当日测体温2次，选取体温变化不超过0.3℃的动物供试验用。

8.2实验过程及实验结果

筛选合格大鼠50只，体重180～220g，每组10只，雌雄各半。第一组空白对照组，第二组阳性对照组，第三～五组为小儿天丹颗粒大、中、小剂量组。分别测各组的基础体温即致热前体温并按各组剂量给药。第一组空白对照组灌胃蒸馏水；第二组阳性对照组阿司匹林肠溶片(配置成为12mg/ml药液后按体积15ml/kg灌胃给药，动物剂量为180mg/kg，相当于人临床用量的8倍)；第三～五组为小儿天丹颗粒大、中、小剂量组12.8g/kg、6.4g/kg、3.2g/kg，给药体积均为15ml/kg。给药后各鼠立即于无菌条件下，在背部中线处注射20％干酵母悬液10ml/kg造模，然后分别测致热后1h、、2h、4h、6h、8h体温，均与致热前体温比较，求变化值，T检验，组间比较。结果见表12。

表12 小儿天丹颗粒对酵母诱导大鼠发热的解热作用

与空白对照组比较*P＜0.05 **P＜0.01

由表12可知，阿斯匹林组、小儿天丹颗粒12.8g/kg剂量组在致热后4-8h体温升高值明显低于空白对照组(P＜0.01)，小儿天丹颗粒6.4g/kg剂量组在致热后6h体温升高值明显低于空白对照组(P＜0.05)。小儿天丹颗对干酵母诱发的大鼠发热模型具有一定的解热作用。

三、实验结论

本发明小儿天丹颗粒对小鼠感染流感病毒PR8有一定的死亡保护作用；对小鼠感染流感病毒PR8有一定的肺脏保护作用；对金黄色葡萄球菌体内感染引起的的小鼠死亡有较好的保护作用；对金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、乙型溶血性链球菌的体外抑菌作用较强，分别为1∶8、1∶8、1∶8；对二甲苯致小鼠耳肿胀有一定的抑制作用；对小鼠腹腔毛细血管通透性有一定的抑制作用；对氨水所致小鼠咳嗽有一定的止咳作用；有一定的祛痰作用；对干酵母诱发的大鼠发热模型具有一定的解热作用。

本发明具有体内抗病毒作用、体外体内抗菌作用、抗炎作用、止咳作用、祛痰作用、解热作用。

小儿天丹颗粒急性毒性试验

目的：观察小鼠接受过量的小儿天丹颗粒所产生的急性中毒反应，为多次反复给药的毒性试验设计剂量、分析毒性作用的靶器官、分析人体过量时可能出现的毒性反应。

方法：24小时内给药本品3次，浓度为100％，给药体积每次按40ml/kg，观察14天。

结果：本品最大受试药物量为120g/kg，相当生药117.6g/kg，约为临床人拟用量的150倍。在此剂量下未观察到小儿天丹颗粒的急性毒性反应。

一、实验材料：

1.仪器

天平：型号：1012-PT，精密度为0.1g，北京赛多利斯仪器系统有限公司。

2.动物

昆明种小鼠，SPF级，动物合格证：SCXK(陕)2007-001，由第四军医大学实验动物中心。合格证号：0034651。

3.受试药物

名称：小儿天丹颗粒。

来源：按照实施例1的组方和工艺制得。

用法用量：开水冲服，一日三次，二岁以下一次2g，三至五岁一次4g，六至九岁一次6g，九岁以上一次8g。

规格：每袋2g

临床人用量：儿童体重按30公斤计，一次服用8g，一日3次，则每日每公斤体重用药量为0.8g/kg。

1g颗粒相当于0.81g生药材。

二、试验方法与结果

1.预试：取ICR小鼠4只，雌雄各2只，体重18-22g，给药前禁食12小时，浓度为100％的小儿天丹颗粒药液，24小时内按40ml/kg灌胃给药3次，给药后观察小鼠一般情况。见小鼠活动自如，进食、饮水正常，小鼠72小时内二便正常，无死亡，也无明显中毒反应，提示本品难以测出LD₅₀，故选择最大受试药物量试验。

2最大受试药物量试验：取小鼠40只，♀♂各半，体重18-22g，按体重随机分为2组，空白对照组20只(♀♂各半)，给药组20只(♀♂各半)。

给药前禁食12小时，并称重，记录体重。空白对照组按体重以40ml/kg灌胃蒸馏水，给药组按预试剂量给药(即100％浓度的药液以40ml/kg 24小时内3次给药)。给药后，连续观察二周，每7天称量一次体重，并且详细记录小鼠行为活动、状态、饮食、大小便及毛色、分泌物等。

3.试验结果

40只小鼠外观体征未见异常，活动自如，进食、饮水均正常，皮毛光洁，口、鼻及眼无异常分泌物，连续观察二周，体重有增加，给药前体重、第7日、第14日体重见表13，给药组20只小鼠全部存活，无明显中毒反应，解剖所见：胸腔，腹腔未见异常液体，肠管未见胀气，心、肝、脾、肺、肾等重要脏器未见颜色、形态异常，没有出血点或其它病理改变，胃粘膜颜色红润，无出血点或溃疡，尸检无异常。

表13 小儿天丹颗粒急毒小鼠体重

三、试验结论

小儿天丹颗粒给昆明种小鼠灌胃未测出LD₅₀，24小时内给药3次，观察14天，小鼠无死亡，其最大受试药物量为120g/kg(相当于生药量123.6g/kg)，约为临床人拟用量的150倍。在此剂量下未观察到小儿天丹颗粒的毒性反应。

具体实施方式：

实施例1：

处方：

紫草皮100份大青叶80份连翘80份柴胡150份丹参80份

胆南星50份蝉蜕40份紫苏叶70份平贝母10份天竺黄100份

薄荷50份。

颗粒剂制备工艺为：

实施例2：

处方：

紫草皮100份大青叶80份连翘80份柴胡150份丹参80份

胆南星50份蝉蜕40份紫苏叶70份平贝母10份天竺黄100份

薄荷50份。

胶囊剂制备工艺为：

实施例3：

处方：

紫草皮100份大青叶80份连翘80份柴胡150份丹参80份

胆南星50份蝉蜕40份紫苏叶70份平贝母10份天竺黄100份

薄荷50份。

片剂制备工艺为：

实施例4：

处方：

紫草皮50份大青叶120份连翘60份柴胡130份丹参120份

胆南星60份蝉蜕50份紫苏叶90份平贝母15份天竺黄150份

薄荷25份。

制备工艺为：

实施例5：

处方：

紫草皮150份大青叶50份连翘110份柴胡110份丹参40份

胆南星75份蝉蜕60份紫苏叶50份平贝母5份天竺黄50份

薄荷75份。

制备工艺为：

实施例6：

处方：

紫草皮100份大青叶100份连翘90份柴胡180份丹参70份

胆南星60份蝉蜕50份紫苏叶50份平贝母5份天竺黄120份

薄荷30份。

制备工艺为：

实施例7：

处方：

紫草皮90份大青叶65份连翘100份柴胡140份丹参45份

胆南星70份蝉蜕30份紫苏叶90份平贝母15份天竺黄150份

薄荷60份。

制备工艺为：

Claims

1.一种用于治疗小儿感冒的中药制剂，其特征在于它是由以下重量配比的原料药制成：

紫草皮50-150份大青叶40-120份连翘40-120份柴胡100-200份

丹参40-120份胆南星25-75份蝉蜕20-60份紫苏叶50-90份

平贝母5-15份天竺黄50-150份薄荷25-75份。

2.根据权利要求1所述的中药制剂，其特征在于它是由以下重量配比的原料药制成：

紫草皮90-110份大青叶70-90份连翘70-90份柴胡140-160份

丹参70-90份胆南星40-60份蝉蜕30-50份紫苏叶60-80份

平贝母7-13份天竺黄90-110份薄荷40-60份。

3.根据权利要求1或2所述的中药制剂，其特征在于它是由以下重量配比的原料药制成：

紫草皮100份大青叶80份连翘80份柴胡150份

丹参80份胆南星50份蝉蜕40份紫苏叶70份

平贝母10份天竺黄100份薄荷50份。

4.根据权利要求1或2或3所述的中药制剂，其特征在于：所述中药制剂剂型为药剂学上可接受的剂型，选自片剂、颗粒剂或胶囊剂。

5.根据权利要求4所述中药制剂的制备方法，其特征在于：

6.根据权利要求4所述中药制剂的制备方法，其特征在于：

7.根据权利要求4所述中药制剂的制备方法，其特征在于：