CN103191264A - 一种防治家禽大肠杆菌病的中兽药口服液 - Google Patents

Abstract

本发明属于中兽药领域，特别公开了一种防治家禽大肠杆菌病的中兽药口服液。该中药以水牛角、金银花、黄连、紫花地丁、干地黄、玄参、薄荷、荆芥、淡豆豉、丹参为活性成分，按一定的重量份数组成。本发明的中兽药口服液主要用于家禽大肠杆菌病的防治，将多种药物适当配合，利用其相互间的协同或抵抗作用，提高疗效，以适应复杂病情的治疗要求，减少不良反应，无毒副作用，使用安全，避免了西药残留，细菌不易产生耐药性，保障了肉蛋食品的安全，疗效显著持久，吸收快，奏效迅速，作用强，服用简单，药源充足，价格适宜，辛凉解表，清热解毒，透热养阴，对家禽大肠杆菌病具有显著疗效。

Description

一种防治家禽大肠杆菌病的中兽药口服液

(一)技术领域

本发明属于中兽药领域，特别涉及一种防治家禽大肠杆菌病的中兽药口服液。

(二)背景技术

鸡大肠杆菌病是由大肠埃希氏菌引起的局部或全身性感染的传染病，其特征是引起鸡的心包炎、气囊炎、肝周炎、腹膜炎、滑膜炎、肉芽肿、肠炎、脑炎、皮下水肿、败血症等多种临诊病型，并且还常常与病毒和其它细菌性疾病并发，造成鸡群的高死亡率，给养禽业造成了严重的经济损失。由于大肠杆菌的抗原结构复杂，血清型多，传播途径多，加之我国饲养环境普遍较差，病原污染严重，使得近年来该病发病率越来越高，已成为危害养鸡业健康发展的最严重的疾病之一。

由于目前临床上滥用抗菌药物的现象非常普遍，导致大肠杆菌耐药菌株不断出现，耐药谱不断扩大，为该病的临床药物选择带来了极大困难；另一方面在畜禽大肠杆菌的防治上，抗菌西药的大量使用，还造成了肉蛋食品中严重的药物残留，给人类的健康造成了威胁。

随着生活水平的不断提高，人们对健康安全日益关注，中草药由于具有功能作用广泛、双向调节、副作用少、残留低、不易产生耐药性以及资源广泛、成本低廉、效果持久等特点，日益成为人们关注的焦点。因此，开发高效、低毒、无残留的抗大肠杆菌现代中药制剂，对克服大肠杆菌的耐药性、消除药物残留、提高我国畜产品在国际上的竞争力具有十分重要的意义。

(三)发明内容

本发明为了弥补现有技术的不足，提供了一种制备简单、使用安全、疗效显著持久的防治家禽大肠杆菌病的中兽药口服液。

本发明是通过如下技术方案实现的：

一种防治家禽大肠杆菌病的中兽药口服液，其活性成分由以下重量份数的原料组成：水牛角4-8份、金银花4-8份、黄连2-4份、紫花地丁2-4份、干地黄4-8份、玄参4-8份、薄荷2-4份、荆芥2-4份、淡豆豉3-4份、丹参3-6份。

其优选的各活性成分的重量配比为：水牛角6份、金银花6份、黄连3份、紫花地丁3份、干地黄6份、玄参6份、薄荷3份、荆芥3份、淡豆豉3.5份、丹参4.5份。

制备方法：将上述重量的各原料一起置于中药提取罐中，加7倍量水，浸泡1小时，煎煮，煮沸后保持1小时，放液，滤过；药渣再加3倍量水，继续煮沸0.5小时，放液，滤过；合并两次煎液，减压浓缩，至药液相对密度约1.10左右，滤过，滤液中加入苯甲酸钠防腐，灌装，即得该防治家禽大肠杆菌病的中兽药口服液。

用法用量：采用饮水用药，每千克体重0.5ml/次，每天2次，连用4-5天。

本发明的中兽药口服液主要用于家禽大肠杆菌病的防治，将多种药物适当配合，利用其相互间的协同或抵抗作用，提高疗效，以适应复杂病情的治疗要求，减少不良反应，无毒副作用，使用安全，避免了西药残留，细菌不易产生耐药性，保障了肉蛋食品的安全，疗效显著持久，吸收快，奏效迅速，作用强，服用简单，药源充足，价格适宜，辛凉解表，清热解毒，透热养阴，对家禽大肠杆菌病具有显著疗效。

(四)具体实施方式

实施例1：

称取水牛角6千克、金银花6千克、黄连3千克、紫花地丁3千克、干地黄6千克、玄参6千克、薄荷3千克、荆芥3千克、淡豆豉3.5千克、丹参4.5千克，一起置于中药提取罐中，加7倍量水，浸泡1小时，煎煮，煮沸后保持1小时，放液，滤过；药渣再加3倍量水，继续煮沸0.5小时，放液，滤过；合并两次煎液，置浓缩罐中，减压浓缩，至药液相对密度约1.10左右，滤过，滤液中加入质量分数为0.3％的苯甲酸钠水溶液防腐，用500ml液体药用瓶灌装，即得该防治家禽大肠杆菌病的中兽药口服液。

用法用量：采用饮水用药，每千克体重0.5ml/次，每天2次，连用4-5天。

实施例2：

该防治家禽大肠杆菌病的中兽药口服液，其活性成分由以下重量的原料组成：

水牛角4千克、金银花4千克、黄连2千克、紫花地丁2千克、干地黄4千克、玄参4千克、薄荷2千克、荆芥2千克、淡豆豉3千克、丹参3千克。

制备方法与用法用量同实施例1。

实施例3：

该防治家禽大肠杆菌病的中兽药口服液，其活性成分由以下重量的原料组成：

水牛角8千克、金银花8千克、黄连4千克、紫花地丁4千克、干地黄8千克、玄参8千克、薄荷4千克、荆芥4千克、淡豆豉4千克、丹参6千克。

制备方法与用法用量同实施例1。

下面就本发明的药物效果及安全性进一步做如下说明：

(I)作用机理：

按照“瘟疫论”之疠气学说，家禽大肠杆菌病属“瘟疫”范畴，总属外感热病，主要病因为外感风热毒邪，内袭于脏腑所致，治以辛凉解表、清热解毒为主。本发明中，水牛角、金银花、黄连、紫花地丁清热解毒、辛凉透表；薄荷、荆芥、淡豆豉发散表邪，助主药透热外出；干地黄、玄参清热养阴；丹参可协助主药清热凉血，还能活血散瘀，防止血与热结，且又能引导诸药入心而清热，为使药。诸药相合，共奏辛凉解表、清营解毒、透热养阴之功。

(II)本发明对大肠杆菌的体外抑制作用：

(1)试验材料：

试验药品：为本发明口服液，未经苯甲酸钠防腐，高压灭菌后使用；

营养琼脂：北京奥博星生物技术有限公司生产；

营养肉汤培养基：北京奥博星生物技术有限公司生产；

大肠杆菌菌株：E.coli09-29株，由山东省农科院家禽研究所保存。

(2)试验方法：参照抗生素效价测定管蝶法进行。

①将大肠杆菌菌株接种于营养肉汤中，摇床培养18小时；

②取融化的普通营养琼脂20ml注入双碟内，凝固铺底；

③将融化的普通营养琼脂冷却至45-50℃左右时，加入0.5％的大肠杆菌新鲜肉汤培养物，从中吸取5ml，注入已铺底的双碟中，使均匀摊布在底层培养基上，盖上陶瓦盖，放置20-30分钟，使凝固；

④在每一培养基平板中，均匀放入灭菌钢管5个，每一钢管中分别加入不同稀释浓度的药液300μl，置37℃温箱中培养18h后观察结果。测量抑菌圈直径，根据抑菌圈直径大小判断细菌对药物的敏感性。

(3)试验结果：不同浓度的药液对大肠杆菌的抑菌圈直径结果详见表1：

表1本发明口服液对大肠杆菌体外抑菌试验结果

(4)结论：

不同浓度的本发明口服液均具有抑菌圈，随着药物浓度的增加，抑菌圈直径逐渐增大，这充分表明本发明口服液对大肠杆菌具有较强的抑制作用。当浓度为1g/ml时，对大肠杆菌抑制作用最强，抑菌圈直径高达15.20mm。

(III)大肠杆菌人工感染疗效试验：

A)试验材料：

a.药物：

试验药物：本发明口服液；

对照药物：双黄连口服液。

b.实验动物：25日龄海兰白健康公雏鸡。

c.菌株：E.coli09-29株，由山东省农科院家禽研究所保存。

B)试验方法：

a.大肠杆菌的培养：取大肠杆菌菌种0.2ml接种于50ml营养肉汤培养基中，37℃摇床培养24h，进行细菌计数。

b.预试验：选择25日龄海兰白健康雏公鸡，分别按0.4mL/只、0.5mL/只、0.6mL/只、0.7mL/只、0.8mL/只五个剂量组，胸肌注射大肠杆菌新鲜培养物，15只/组，测定不同攻菌剂量鸡的死亡率，选择死亡率为50％左右的攻菌量为正式试验的接种量，本次预试验选择的攻菌剂量为0.5mL/只。

c.试验分组：挑取体重、大小均匀一致的试验雏鸡，随机分为以下7组，每组20只，做3个重复。

第1组为高剂量组，每只鸡每天灌服本发明口服液2ml，分2次灌服；

第2组为中剂量组，每只鸡每天灌服本发明口服液1ml，分2次灌服；

第3组为低剂量组，每只鸡每天灌服本发明口服液0.5ml，分2次灌服；

第4组为兽药对照组，每只鸡每天灌服双黄连口服液1ml，分2次灌服；

第5组为阳性对照组，只攻毒，不使用任何药物，每只鸡每天灌服生理盐水1ml，分2次灌服；

第6组为阴性对照组，不攻毒，不使用任何药物，每只鸡每天灌服生理盐水1ml，分2次灌服；

第7组为安全试验组，不攻毒，每只鸡每天灌服本发明口服液5ml，分2次灌服。

d.攻菌：第1-5组，按照预试验选择的攻菌剂量0.5mL/只，使用连续注射器对每只鸡胸部肌肉注射大肠杆菌肉汤培养物；第6-7组不攻菌。

e.用药：攻菌前3天，各组鸡群分别按照用药要求开始使用药物，连用7天。

f.临床观察：

细菌接种后每天观察各组鸡的临床症状，记录死亡情况，在观察期内对病死鸡进行剖检，并取肝脏病料进行细菌分离、鉴定。

C)疗效评价及指标：

a.死亡率：凡在试验期间，鸡出现大肠杆菌感染的典型症状并死亡，剖检有典型的病变特征，并从肝脏分离出大肠杆菌者，判定为感染死亡。根据死亡鸡数计算各组的死亡率；

b.存活率：凡在试验期间经用药治疗，大肠杆菌症状已消失，饮食欲及精神恢复正常，即判为治愈。根据鸡只存活数计算各组存活率。

D)试验结果与分析：

a.临床症状：

人工感染大肠杆菌1h后，各感染组开始出现发病症状，6h后鸡只开始出现死亡。雏鸡精神沉郁，怕冷挤堆，闭目缩头，羽毛逆立，饮食欲下降或废绝，重者翅下垂，呆立或瘫痪。第1组、第2组、第3组本发明口服液用药组及第4组双黄连口服液用药组鸡群症状较轻，死亡数少。第5组阳性对照组雏鸡症状明显严重，死亡多。攻毒后3天，本发明口服液用药组鸡只死亡基本停止，症状开始好转；而第5组阳性对照组病情进一步发展，鸡只继续出现死亡。

第6组阴性对照组及第7组安全试验组鸡群精神正常，无任何异常症状，无鸡只死亡发生。

病死鸡剖检：早期死亡病例主要呈败血症病变，腺胃出血，尤其是腺胃与食道交界处、腺胃与肌胃交界处最严重，腺胃、肌胃浆膜出血，个别严重的鸡腺胃粘膜与浆膜糜烂，呈青色；肺脏出血严重，呈黑褐色；胸肌注射部位肌肉坏死严重，呈开水烫过样变化。24h后死亡鸡出现典型的心包炎、肝周炎、气囊炎病变。

b.存活率：

在攻毒后的第7天，统计各组鸡只的死亡数，计算存活率，详见表2：

表2本发明口服液对鸡群人工感染大肠杆菌的临床疗效结果

c.统计分析：

经X²统计分析表明第1、2、3、4组雏鸡存活率与第5组相比均有显著差异(P＜0.05)；而第1组、第2组、第3组与第4组之间差异不显著(P＞0.05)。

E)结论：

a.本发明口服液高、中、低剂量组对鸡大肠杆菌病具有较好的治疗效果，与阳性对照组间差异显著；

b.从试验结果和药物成本综合考虑，推荐本发明口服液的临床剂量为0.5-1ml/kg.d.w；

c.由表2可以看出，第2组本发明口服液中剂量组和第4组双黄连口服液兽药对照组每只鸡每天灌服均为1ml，分2次灌服，第2组平均存活率高于第4组，说明本发明口服液对鸡大肠杆菌病具有较好的治疗效果；

d.试验表明，安全试验组鸡群无任何不良反应，表明本发明口服液在正常推荐剂量下是安全有效的。

(IV)本发明中药的安全性：

(i)急性毒性试验：

在经口急性毒性预试验中，本发明口服液以最大使用浓度和最大灌胃量给药后，小鼠均未出现死亡，因此按最大耐受剂量法进行试验。试验选用清洁级ICR小鼠60只，分为三组，每组20只，雌雄各半，测定本发明口服液经口给药对小鼠的最大耐受剂量(MTD)。试验结果表明，小鼠以最大使用浓度和最大灌胃量给予本发明口服液后14天，均未出现死亡，观察期内均未发现异常临床症状。以上结果表明，本发明口服液对小鼠的经口MTD大于40000mg/kg b.w.。

(ii)亚急性毒性试验：

选用刚离乳大鼠(雌雄各半)，以饮水途径给药进行实验。给药剂量分为60mL/kg、30mL/kg、10mL/kg、2mL/kg4个剂量组与一个阴性对照组，连续给药3个月，观察指标包括临床观察、血液学检查、血液生化检查、脏器系数和病理组织学检查。试验结果表明4个剂量组中大鼠各项观察指标均未出现异常，各组动物均无死亡，未出现任何毒性效应，60mL/kg的剂量被认为是安全的。

急性毒性试验和亚急性毒性试验表明，本发明口服液使用安全，无任何毒副作用。

典型病例：

病例1：潍坊某养殖场，饲养肉仔鸡20000余只，23日龄，鸡群每天死亡几十只，病鸡精神沉郁，缩头呆立，羽毛逆立，剖检具有肝周炎、心包炎、腹膜炎等大肠杆菌病典型病变，先使用盐酸环丙沙星饮水治疗3天，无明显效果。后使用本发明口服液治疗，每只鸡每次0.5ml，2次/天，连用4天。用药3天后，鸡只不再出现死亡，鸡群精神、食欲恢复正常。

病例2：莱芜某养殖户，饲养肉仔鸡3000余只，28日龄时开始发病，鸡群精神沉郁，采食量下降，拉绿色稀粪，剖检病死鸡表现为心包炎、肝周炎、气囊炎等病变，随使用本发明口服液进行治疗，每只鸡每千克体重0.5ml/次，2次/天，用药2天后，鸡群症状明显好转，用药4天后鸡群死亡完全停止，仔鸡精神、食欲完全恢复正常。

Claims (2)

1.一种防治家禽大肠杆菌病的中兽药口服液，其特征是：其活性成分由以下重量份数的原料组成：水牛角4-8份、金银花4-8份、黄连2-4份、紫花地丁2-4份、干地黄4-8份、玄参4-8份、薄荷2-4份、荆芥2-4份、淡豆豉3-4份、丹参3-6份。

2.根据权利要求1所述的防治家禽大肠杆菌病的中兽药口服液，其特征是：其活性成分由以下重量份数的原料组成：水牛角6份、金银花6份、黄连3份、紫花地丁3份、干地黄6份、玄参6份、薄荷3份、荆芥3份、淡豆豉3.5份、丹参4.5份。