CN103131721B - 瘤胃菌d-塔格糖3-差向异构酶的核苷酸序列及其应用 - Google Patents

瘤胃菌d-塔格糖3-差向异构酶的核苷酸序列及其应用 Download PDF

Info

Publication number
CN103131721B
CN103131721B CN201110378798.XA CN201110378798A CN103131721B CN 103131721 B CN103131721 B CN 103131721B CN 201110378798 A CN201110378798 A CN 201110378798A CN 103131721 B CN103131721 B CN 103131721B
Authority
CN
China
Prior art keywords
nucleotide sequence
dte
expression vector
cell
tagatose
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201110378798.XA
Other languages
English (en)
Other versions
CN103131721A (zh
Inventor
孙媛霞
朱玥明
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Tianjin Yihe Biotechnology Co ltd
Original Assignee
Tianjin Institute of Industrial Biotechnology of CAS
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Tianjin Institute of Industrial Biotechnology of CAS filed Critical Tianjin Institute of Industrial Biotechnology of CAS
Priority to CN201110378798.XA priority Critical patent/CN103131721B/zh
Publication of CN103131721A publication Critical patent/CN103131721A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN103131721B publication Critical patent/CN103131721B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
    • Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
    • Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
    • Y02P20/52—Improvements relating to the production of bulk chemicals using catalysts, e.g. selective catalysts

Abstract

本发明涉及一种从瘤胃菌(Ruminococcus sp.)中分离的编码D-塔格糖3-差向异构酶(DTE)的核苷酸序列及其应用。该酶的核苷酸序列如SEQ ID No：1所示，所编码的氨基酸序列如SEQ ID No：2所示。本发明包括编码DTE酶的核苷酸序列与表达载体连接而成的进行功能性表达的重组表达载体，以及含有本发明重组表达载体的大肠杆菌细胞、真菌细胞、植物细胞或动物细胞及其后代细胞。用上述的核苷酸序列或多肽序列或含有本发明重组表达载体的工程菌及其后代细胞生产D-阿洛酮糖的方法。

Description

瘤胃菌D-塔格糖3-差向异构酶的核苷酸序列及其应用
【技术领域】：本发明属于生物技术领域和遗传工程领域，涉及从一种瘤胃菌(Clostridiumcellulolyticum)中克隆D-塔格糖3-差向异构酶(DTE)基因的核苷酸序列及其应用。将该基因与不同表达载体连接，转入到细菌、酵母、植物或动物中，利用其编码的DTE生产D-阿洛酮糖的方法和应用。
【背景技术】：近年来发现了一类低热量、具有多生物学功能的单糖及其衍生物，由于在自然界中存在量极少，学术界把它们称为稀少糖(Rare Sugar)。随着人们对这类糖的逐步了解，以阿洛酮糖与塔格糖为核心的功能性稀少糖研究得到迅速的发展。研究表明，阿洛酮糖的甜味类似于蔗糖，易溶于水，不参加体内代谢，无热量；同时还具有许多独特的生理学功能。例如，使用D-阿洛酮糖代替蔗糖等传统甜味剂开发生产的牛乳布丁，具有更高的自由基清除和还原能力(Y.Sun，etal，2006，Biosci.Biotech.Biochem.，70：2859-2867)。因此，阿洛酮糖等稀少糖可以作为特殊人群理想的蔗糖替代品，在食品、保健品及医药品领域有着十分重要的应用价值。
目前，生产稀少糖的技术主要包括化学合成法、提取法和生物转化法。但稀少糖在自然界中的含量极低，提取法明显不适宜稀少糖的大规模生产；化学合成法不仅成本高、产量低，而且会产生比较严重的环境污染。生物转化法可以利用自然界中广泛存在的单糖或富含某些单糖的加工副产物为原料，不仅成本较低，而且转化效率要远远高于前两种方法，是规模化制备功能性稀少糖的重要技术手段。
日本的研究学者Izumori于2002年建立了稀少糖的生物转化生产策略，即Izumoring方法，该方法中利用酮糖差相异构酶(ketose epimerase)、醛糖异构酶(aldose isomerases)和多元醇脱氢酶(poly dehydrogenase)进行所有单糖及糖醇之间的相互转化，从而利用廉价的原料制备各种稀少糖(K.Izomuri，2006，J.Biotechnol.，124：717-722)。Izumoring策略提示给我们D-阿洛酮糖的生物转化方法，即利用食品工业中加工副产物淀粉为原料经过现有成熟工艺获得D-果糖，再通过D-塔格糖-3-差相异构酶(D-tagatose 3-epimerase，DTE)的作用获得D-阿洛酮糖。该方法利用自然界中广泛存在的廉价原料生产阿洛酮糖，大幅降低了成本，为D-阿洛酮糖的工业化大规模生产奠定了理论基础。
日本香川大学稀有糖研究中心首次发现了DTE酶。该小组在研究假单胞菌Pseudomonascichorii ST-24的D-山梨糖酵解过程中，发现了一种新型的酶，该酶的最适底物为D-塔格糖，遂将其命名为D-塔格糖-3-差相异构酶。该酶能够催化己酮糖之间的差相异构反应，如D-塔格糖和D-山梨糖，D-果糖和D-阿洛酮糖之间的相互转化(K.Izomuri，et al，1993，Biosci.Biotech.Biochem.，57：1037-1039)。研究人员分离纯化了该酶，对其N-末端氨基酸序列进行了质谱测序，进而获得了该酶的基因序列。随后，来源于根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens ATCC 33970)(H.J.Kim，etal，2006，Appl.Environ.Microbiol.，72：981-985)、类球红细菌(Rhodobacter sphaeroides SK001)(L.Zhang，et al，2009，Biotechnol.Lett.，31：857-862)以及梭菌(Clostridium cellulolyticum H10)(W.Mu，etal，2011，J.Agric.Food Chem.，59：7785-7792)的DTE基因也被克隆和表达，其酶学性质也被详细的研究。
但到目前为止，有专利或文献报道的DTE基因只有以上四种，而且这些DTE的热稳定性普遍较差，在其最适反应温度下半衰期较短，很快失活。因此，发现新型的热稳定性更好的DTE基因将是D-阿洛酮糖生物转化法生产的关键。
【发明内容】：本发明的目的之一是提供从瘤胃菌(Ruminococcus sp.)中分离的编码D-塔格糖3-差向异构酶的核苷酸序列。
本发明的目的之二是提供该核苷酸序列所编码的D-塔格糖3-差向异构酶多肽。
本发明的目的之三是提供含有该基因核苷酸序列与异源调节序列连接，进行功能性表达的重组表达载体。
本发明的目的之四是提供含有该基因核苷酸序列或该基因核苷酸序列与异源调节序列连接的重组表达载体转化或转导的宿主细胞及其后代。
本发明的目的之五是提供一种用含有该基因核苷酸序列或该基因核苷酸序列与异源调节序列连接的重组表达载体转化或转导的宿主细胞及其后代细胞或该核苷酸序列所编码的D-塔格糖3-差向异构酶多肽制备D-阿洛酮糖的方法。
本发明第一方面提供的是如SEQ ID No：1所示的核苷酸序列。
本发明提供了一种新的分离的核苷酸序列——即编码瘤胃菌Ruminococcus sp.D-塔格糖3-差向异构酶的核苷酸序列，它是由SEQ ID No：1所示的核苷酸序列组成的，其特征是：该序列长为876bp(碱基)。
分离的D-塔格糖3-差向异构酶基因的核苷酸序列，它选自下组的一种核苷酸序列：(1)编码SEQ ID No：2氨基酸序列的活性多肽的核苷酸序列；(2)与核苷酸序列(1)互补的核苷酸序列。准确地，该核苷酸序列是SEQ ID No：1所示的核苷酸序列。
本发明还提供了编码SEQ ID No：2所示的氨基酸序列的活性多肽的核苷酸序列，具体地，本发明的核苷酸序列是SEQ ID No：1的核苷酸序列。
本发明的核苷酸序列可以是DNA形式或是RNA形式。DNA形式包括cDNA、基因组DNA或人工合成的DNA。DNA可以是单链的或是双链的。DNA可以是编码链或非编码链。编码成熟多肽的编码区序列可以与SEQ ID No：2所示的编码区序列相同或是简并的变异体。
本发明的第二方面，提供分离的上述核苷酸序列所编码的多肽，该多肽是SEQ ID No：2氨基酸序列的多肽。
本发明提供了一种新的多肽序列——瘤胃菌(Ruminococcus sp.)D-塔格糖3-差向异构酶的氨基酸序列，它是由SEQ ID No：2所示的氨基酸序列组成。本发明的多肽可以是重组多肽、天然多肽、合成多肽，优选重组多肽。本发明的多肽可以是天然纯化的产物，或是化学合成的产物，或使用重组技术从原核或真核宿主(例如，细菌、酵母、高等植物、昆虫和哺乳动物)细胞中产生。
编码SEQ ID No：2活性多肽的核苷酸序列包括：只有成熟多肽的编码序列；成熟多肽的编码序列和各种附加编码序列；成熟多肽的编码序列(和任选的附加编码序列)以及非编码序列。
本发明的第三、第四方面，提供了含有上述基因核苷酸序列的重组表达载体，以及被上述核苷酸序列或重组表达载体转化或转导的宿主细胞及其后代细胞。这些宿主细胞包括细菌、酵母、高等植物、昆虫或哺乳动物细胞。
本发明也涉及含有编码瘤胃菌(Ruminococcus sp.)D-塔格糖3-差向异构酶的核苷酸序列和外源性调节序列元件结合进行功能性表达的重组表达载体。能够影响基因表达产物的序列元件包括有复制起始点、启动子、标记基因和翻译调控元件。
可用本领域的技术人员熟知的方法来构建含编码瘤胃菌D-塔格糖3-差向异构酶的核苷酸序列和合适的转录/翻译调控元件的表达载体。这些方法包括体外重组DNA技术、DNA合成技术、体内重组技术等(Sambroook，et al.，Molecular Cloning，a Laboratory Manual，Cold Spring HarborLaboratory，New York，1989)。所述的编码该DTE酶的核苷酸序列可有效连接到表达载体的恰当启动子上，以指导mRNA合成。这些启动子的代表性例子有：大肠杆菌的lac或trp启动子；λ噬菌体的PL启动子：真核启动子包括CMV早期启动子、HSV胸苷激酶启动子、早期和晚期SV40启动子、反转录病毒的LTRs和其它一些已知的可控制基因在原核细胞或真核细胞或其病毒中表达的启动子。表达载体还包括翻译起始用的核糖体结合位点和转录终止子等。在载体中插入增强子序列将会使其在高等真核细胞中的转录得到增强。增强子是DNA表达的顺式作用因子，通常大约有10-300bp，作用于启动子以增强基因的转录。如腺病毒增强子。
本发明还涉及用含有本发明编码瘤胃菌D-塔格糖3-差向异构酶的核苷酸序列的重组表达载体或直接用编码瘤胃菌D-塔格糖3-差向异构酶的核苷酸序列经基因工程产生的宿主细胞。本发明中，编码瘤胃菌D-塔格糖3-差向异构酶的核苷酸序列或含有该核苷酸序列的重组表达载体可转化或转导入宿主细胞，以构成含有该核苷酸序列或重组表达载体的基因工程化宿主细胞。宿主细胞的代表性例子有：大肠杆菌；真菌细胞如酵母；植物细胞如油菜、烟草、大豆；昆虫细胞如果蝇S2或Sf9；动物细胞如CHO、COS或Bowes黑素瘤细胞等。
用本发明所述的核苷酸序列或含有核苷酸序列的重组表达载体转化宿主细胞可用本领域的技术人员熟知的方法进行。当宿主为原核生物如大肠杆菌时，能吸收DNA的感受态细胞可在指数生长期收集菌体，用CaCl2法处理，所用的步骤在本领域是众所周知的。也可用MgCl2，电穿孔等方法进行。当宿主是真核生物，可选用DNA转染法、显微注射、电穿孔、脂质体包装等方法。
本发明的第五方面，提供了一种用含有该基因的核苷酸序列、或该基因核苷酸序列与异源调节序列连接的重组表达载体转化或转导的宿主细胞及其后代细胞、或用该核苷酸序列所编码的DTE多肽制备D-阿洛酮糖的方法。
该方法是这样实现的，根据宿主细胞，用本领域技术人员所共知的方法生长或培养。比如微生物细胞通常是在0-100℃，优选10-60℃，同时还要氧气。培养基中含有碳源，如葡萄糖；氮源，通常是有机氮的形式，如酵母提取物、氨基酸；盐，如硫酸铵，微量元素，如铁、镁盐；如果需要的话还有维生素。在此期间培养基的pH可以保持固定的值，就是说，在培养期间进行控制或不控制。培养可以分批培养、半不连续培养或连续培养形式进行。在培养之后，收集细胞，破碎或直接使用。将D-果糖与SEQ ID No：2或含有SEQ ID No：2的细胞一起培养，即可将D-果糖转化为D-阿洛酮糖。
本发明还涉及用上述方法制备D-阿洛酮糖，以及将其应用于生产人类食品、动物饲料、化妆品或药品用途。
本发明的其他方面由于本文技术的公开，对本领域的技术人员而言是显而易见的。
本发明所涉及的技术术语的含义：
“分离的”是指物质从其原始环境中分离出来(如果是天然的物质，原始环境即是天然环境)。例如，活体细胞内的天然状态下的核苷酸序列和多肽是没有分离纯化的，但同样的核苷酸序列或多肽如从天然状态中与同存在的其它物质中分开，则为分离纯化的。
“分离的核苷酸序列”是指基本上不含天然与其相关的其它蛋白、脂类、糖类或其它物质。本领域的技术人员能用标准的DNA纯化技术纯化的。
“编码瘤胃菌D-塔格糖3-差向异构酶的核苷酸序列”是指包括编码瘤胃菌(Ruminococcus sp.)D-塔格糖3-差向异构酶多肽的核苷酸序列和包括附加编码和/或非编码的核苷酸序列。
“载体”指本领域熟知的细菌质粒、噬菌体、酵母质粒、植物细胞病毒、哺乳动物细胞病毒如腺病毒、逆转录病毒或其它载体。
“宿主细胞”指原核细胞，如细菌细胞；或是低等真核细胞，如酵母细胞；或是高等真核细胞，如哺乳动物细胞。
【本发明的优点和积极效果】：
本发明获得了瘤胃菌(Ruminococcus sp.)D-塔格糖3-差向异构酶基因，并将其克隆表达于大肠杆菌细胞中。该酶可以将廉价的D-果糖转化为D-阿洛酮糖，且热稳定性高于其他DTE酶，这对通过基因重组和表达技术的大规模工业化生产D-阿洛酮糖十分有利，有很强的竞争力。
【附图说明】：
图1显示所构建的大肠杆菌重组表达载体pET-RDTE。
图2SDS-PAGE显示瘤胃菌DTE基因在大肠杆菌中表达以及NTA-Ni柱纯化结果。
图3A显示D-果糖、D-阿洛酮糖标准物的高效液相色谱图(Psi＝D-阿洛酮糖，Fru＝D-果糖)。
图3B是含重组质粒pET-RDTE的转基因大肠杆菌的细胞破碎上清液与D-果糖60℃反应1h后的高效液相色谱图。
图3C是含重组质粒pET-RDTE的转基因大肠杆菌的细胞破碎上清液与D-阿洛酮糖60℃反应1h后的高效液相色谱图。
图4A显示瘤胃菌重组DTE的最适温度；
图4B显示瘤胃菌重组DTE的最适pH；
图4C显示金属离子对瘤胃菌重组DTE活性的影响；
图4D显示温度对瘤胃菌重组DTE稳定性的影响(40℃，50℃，60℃)。
【具体实施方式】：
下面结合具体的实施例进一步阐述本发明。应理解这些实施例仅用于说明本发明而不是限制本发明的范围。
实施例1.从瘤胃菌中分离DTE的核苷酸序列
将目前已经发现的DTE酶的氨基酸序列利用NCBI网站的BLAST程序进行同源性搜索，发现来源于瘤胃菌(Ruminococcus sp.5_1_39B_FAA)中某一未知蛋白的氨基酸序列与其他几种DTE基因的相似性最大。我们推测该基因具有将D-果糖转化为D-阿洛酮糖的能力，是潜在的DTE基因。按照该基因在Genbank中的核苷酸序列进行全基因合成，并在该基因的上下游分别加入Nde I和Xho I酶切位点，以方便后续的表达载体构建。全基因合成工作由金唯智科技有限公司完成，合成好的基金连接到pUC57载体上，命名为pUC57-RDTE。
实施例2.瘤胃菌DTE大肠杆菌重组表达系统的构建
将pUC57-RDTE和pET-21a(Novagen公司)分别用Nde I和Xho I进行双酶切，回收酶切后相应片段，并用T4连接酶在4℃冰箱中过夜连接。连接产物转化大肠杆菌DH5α，通过质粒提取和PCR筛选阳性克隆，并进行测序鉴定。质粒构建结果见附图1，所构建的含有该瘤胃菌DTE基因的大肠杆菌质粒命名为pET-RDTE。
取1μg上例中的重组质粒pET-RDTE转化到用CaCl2法处理的大肠杆菌E.coli BL21(DE3)细胞中，在含100μg/ml氨苄青霉素的LB固体培养基上培养过夜。
实施例3：瘤胃菌重组DTE酶的诱导表达与纯化
挑取上例中在含氨苄青霉素的LB培养基平板上出现的阳性转化子，接种于3ml含100μg/ml氨苄青霉素的LB液体培养基，37℃，200rpm过夜培养；以1％的接种量接入1L以上LB培养基中，37℃，200rpm继续培养4-5h，待培养物O.D.达到0.6-0.8左右时，加入终浓度为0.5mmol/L的IPTG，于20℃，100rpm过夜诱导培养。6000rpm离心收集菌体，用去离子水洗涤三次，用100ml无菌水重悬菌体，高压破碎，15000rpm离心收集上清液，即为粗酶液。
将粗酶液经过0.45μm的微孔滤膜过滤，然后通过以Binding buffer(25mM Tris-HCL，300mMNaCI，40mM咪唑，pH 8.0)平衡的NTA-Ni柱；用该缓冲液冲洗10个柱体积后，以Elution buffer(25mM Tris-HCL，300mM NaCl，250mM咪唑，pH 8.0)洗脱目的蛋白。洗脱液用超滤管(AmiconUltra 15，Millipore)进行脱盐和浓缩，最终得到纯度90％以上的重组DTE酶，SDS-PAGE如附图2所示(目的蛋白显示两条带推测为N-端降解所致)。
实施例4：瘤胃菌重组DTE的酶活测定
标准反应条件如下：取0.25μl的纯化好的DTE酶与0.5ml 1％的D-果糖溶液或D-阿洛酮糖溶液(20mM HEPES，pH 8.0)于60℃反应10min或1h(充分反应)，然后100℃处理5min灭活酶的活性。用0.45μm的微孔滤膜过滤，滤液做高效液相分析。
高效液相色谱按如下条件进行：安捷伦高效液相色谱仪1200；分析柱：Waters Sugar-Pak 1分析柱；流动相：水；流速：0.4ml/min；柱温：80℃；检测器：示差折光检测器。以Sigma公司生产的D-果糖和D-阿洛酮糖纯品为标准品，将上述样品进行分析，上样量为20μl。
色谱分析结果见附图3，显示D-果糖和D-阿洛酮糖标准物(图3A)、DTE与D-果糖(图3B)和D-阿洛酮糖(图3C)60℃反应1h后的高效液相色谱图。通过与D-果糖和D-阿洛酮糖标准品的保留时间进行比较鉴别出各个峰。图4B中保留时间为21.364min对应的峰为DTE催化D-果糖产生的D-阿洛酮糖，图4C中保留时间为15.203min对应的峰为DTE催化D-阿洛酮糖产生的D-果糖。由此可见，本发明中分离得到的来源于瘤胃菌的DTE酶可以催化D-果糖和D-阿洛酮糖之间的差向异构反应，反应达到平衡时D-果糖和D-阿洛酮糖的浓度比例约为7∶3。
实施例5：瘤胃菌重组DTE酶学性质的鉴定
最适温度的测定：按照上例中的标准反应，以1％果糖为底物，分别于20、30、40、50、55、60、65、70、80℃下反应10min，然后100℃处理5min灭活。以60℃下酶活为100％，计算各温度下的相对酶活。
最适pH的测定：按照上例中的标准反应，以1％果糖为底物，分别于pH 5.0、6.0、7.0、7.5、8.0、8.5、9.0、10.0下反应10min，然后100℃处理5min灭活。以pH 8.0下酶活为100％，计算各pH下的相对酶活。
金属离子对酶活的影响：按照上例中的标准反应，以1％果糖为底物，分别于含有1mM Mg2+、Ba2+、Mn2+、Ca2+、Co2+、Ni2+、Zn2+、Cu2+、Fe3+的缓冲液中反应10min，然后100℃处理5min灭活。以不含任何金属离子时的酶活为100％，计算不同离子下的相对酶活。
温度对酶稳定性的影响：按照上例中的标准反应，首先将DTE分别于40、50、60℃下保温30、60、120、180、240min，然后以1％果糖为底物，60℃下反应10min，100℃处理5min灭活。以不经热处理的酶活为100％，计算各温度下保温不同时间时的相对酶活。
结果见附图4，可见瘤胃菌DTE的最适反应温度为60℃(图4A)，最适pH 7.5-8.0(图4B)，Mn2+对该酶具有明显的激活作用，可将酶活提高到160％左右(图4C)。此外，该酶于40℃下基本稳定，保温240min以后相对酶活仍然在90％以上(图4D)，40、50、60℃下该酶的半衰期分别为16.2、5.8和1.6h。
与目前已经发现的其他DTE相比，该酶的最适反应温度较高，且热稳定性明显高于其他DTE(如来源根癌脓杆菌的DTE在50℃下的半衰期只有63.5min)。本发明中发现的新型DTE的稳定性更强，这大大提高了该酶的重复利用率和使用周期；另外该酶促反应利用较廉价的D-果糖作为底物，成本较低，可以实现D-阿洛酮糖的生物转化法生产，具有较大优势。

Claims (8)

1.编码瘤胃菌(Ruminococcus sp.)的D-塔格糖3-差向异构酶(DTE)的核苷酸序列，如SEQID No：1所示。
2.一种多肽，其特征是SEQ ID No：2所示的氨基酸序列的多肽。
3.一种重组表达载体，其特征在于它是由权利要求1所述的核苷酸序列与质粒或病毒所构建的重组表达载体。
4.按照权利要求3所述的重组表达载体，其特征在于它是pET21DTE。
5.一种基因工程化的宿主细胞，其特征在于它是选自于下列一种宿主细胞：
(a)它是用权利要求1所述的核苷酸序列转化或转导的宿主细胞及其后代细胞；
(b)它是用权利要求4所述的重组表达载体转化或转导的宿主细胞及其后代细胞。
6.按照权利要求5所述的宿主细胞，其特征在于所述的宿主细胞是细菌细胞或真菌细胞，或这些宿主细胞的后代。
7.按照权利要求5所述的宿主细胞，其特征在于所述的宿主细胞是大肠杆菌细胞。
8.权利要求1所述的核苷酸序列、权利要求2所述的多肽或权利要求3所述的重组表达载体应用于D-阿洛酮糖的生产。
CN201110378798.XA 2011-11-25 2011-11-25 瘤胃菌d-塔格糖3-差向异构酶的核苷酸序列及其应用 Active CN103131721B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201110378798.XA CN103131721B (zh) 2011-11-25 2011-11-25 瘤胃菌d-塔格糖3-差向异构酶的核苷酸序列及其应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201110378798.XA CN103131721B (zh) 2011-11-25 2011-11-25 瘤胃菌d-塔格糖3-差向异构酶的核苷酸序列及其应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN103131721A CN103131721A (zh) 2013-06-05
CN103131721B true CN103131721B (zh) 2014-10-29

Family

ID=48492173

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201110378798.XA Active CN103131721B (zh) 2011-11-25 2011-11-25 瘤胃菌d-塔格糖3-差向异构酶的核苷酸序列及其应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN103131721B (zh)

Families Citing this family (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB2583417B (en) 2012-09-27 2021-03-31 Tate & Lyle Ingredients Americas Llc A protein
CN103710329A (zh) * 2013-12-24 2014-04-09 山西天骄食业有限公司 一种基因工程技术制备共表达重组酶的方法
US10138506B2 (en) 2015-10-02 2018-11-27 Bonumose Llc Enzymatic production of D-tagatose
KR101944103B1 (ko) * 2015-12-07 2019-01-30 주식회사 삼양사 마이크로박테리움 속 균주 및 이를 이용한 사이코스 생산방법
CN105602925B (zh) * 2016-01-26 2019-01-08 中国科学院天津工业生物技术研究所 一种非经典分泌蛋白及其在蛋白分泌表达中的应用
CN105602879B (zh) * 2016-01-26 2019-09-03 中国科学院天津工业生物技术研究所 一株高效分泌d-阿洛酮糖 3-差向异构酶的基因工程菌株、构建方法及其应用
CN105821027B (zh) * 2016-04-01 2023-11-21 南京朗奈生物技术有限公司 一种3-差向异构酶的用途
JP7348457B2 (ja) * 2020-06-03 2023-09-21 ティアンゴン バイオテクノロジー（ティアンジン）カンパニー，リミテッド プシコース３－エピメラーゼミュータント、それを発現するための遺伝子工学菌、その固定化酵素及び固定化方法
CN116875626A (zh) * 2023-06-07 2023-10-13 山东福洋生物科技股份有限公司 一种一步法生产d-阿洛酮糖的基因工程菌的构建方法

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Clostridium cellulolyticum D-塔格糖3-差向异构酶基因的克隆、表达及酶活性;储菲菲;《食品与生物技术学报》;20110331;第30卷(第2期);第283-286页 *
储菲菲.Clostridium cellulolyticum D-塔格糖3-差向异构酶基因的克隆、表达及酶活性.《食品与生物技术学报》.2011,第30卷(第2期),第283-286页.

Also Published As

Publication number Publication date
CN103131721A (zh) 2013-06-05

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN103131721B (zh) 瘤胃菌d-塔格糖3-差向异构酶的核苷酸序列及其应用
US9988618B2 (en) Psicose epimerase and psicose production method using same
KR102132381B1 (ko) 아스로박터 글로비포미스에 의해 생산되는 케토오스 3-에피머라제
CN107723307A (zh) 一种高效制备d‑阿洛酮糖3‑差向异构酶的方法及其应用
CN102373230A (zh) 某种梭菌d-塔格糖3-差向异构酶的核苷酸序列及其应用
CN110791493B (zh) 一种天冬氨酸氨裂合酶突变体及其应用
CN108949852B (zh) 一种利用全细胞催化制备木糖醇的方法
CN102787130A (zh) 一种耐酸性高温α-淀粉酶及其基因、工程菌和制备方法
CN105296456A (zh) 一种pH稳定性提高的谷氨酸脱羧酶突变体及其应用
CN112063666A (zh) 一种重组蔗糖异构酶在转化蔗糖制备异麦芽酮糖中的应用
CN112391372A (zh) 一种谷氨酸脱羧酶突变体、基因工程菌及其应用
CN101691560B (zh) 大肠杆菌及其可溶性表达转谷氨酰胺酶酶原的方法
CN101768581B (zh) 具有高产d-塔格糖能力的l-阿拉伯糖异构酶的突变体酶l20a及其突变方法
CN113215121B (zh) 一种高效异源合成罗汉果甜苷v前体的方法
CN111394410B (zh) 一种高催化活性神经氨酸合酶及应用
CN112746061A (zh) 内消旋-二氨基庚二酸脱氢酶突变体及其应用
CN111411066B (zh) 一种双途径复合产神经氨酸枯草芽孢杆菌及构建方法
CN111455003A (zh) 一种微藻制备d-阿洛酮糖的方法
CN112646760B (zh) 生产肌醇的工程菌及其构建方法和应用
CN114591939B (zh) 一种高耐热d-阿洛酮糖-3-差向异构酶突变体及其应用
CN106119235B (zh) 一种来源于伯克霍尔德氏菌的dpe及其应用
CN107460152A (zh) 产红景天苷及其类似物的重组菌、构建方法及用途
CN114164161B (zh) 一种生产新橙皮苷的双酶共表达菌株及其构建方法和应用
CN113736762A (zh) 一种α-L-鼠李糖苷酶突变体及其在制备普鲁宁中的应用
CN108251406B (zh) L-鼠李树胶糖-1-磷酸醛缩酶及其在催化合成稀有糖d-阿洛酮糖中的应用

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
ASS Succession or assignment of patent right

Owner name: TIANJIN INSTITUTE OF INDUSTRIAL BIOTECHNOLOGY, CHI

Free format text: FORMER OWNER: TIANJIN INSTITUTE OF INDUSTRIAL BIOTECHNOLOGY

Effective date: 20140320

C41 Transfer of patent application or patent right or utility model
TA01 Transfer of patent application right

Effective date of registration: 20140320

Address after: 300308 Tianjin Airport Economic Zone seven West Road No. 32

Applicant after: TIANJIN INSTITUTE OF INDUSTRIAL BIOTECHNOLOGY, CHINESE ACADEMY OF SCIENCES

Address before: 300308 Tianjin Airport Economic Zone seven West Road No. 32

Applicant before: TIANJIN INSTITUTE OF INDUSTRIAL BIOTECHNOLOGY, CHINESE ACADEMY OF SCIENCES

C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant
TR01 Transfer of patent right

Effective date of registration: 20230808

Address after: Building 1-201-A218, Building 8, Huiying Industrial Park, No. 86 Zhonghuan West Road, Tianjin Binhai New Area Pilot Free Trade Zone (Airport Economic Zone), 300000

Patentee after: Tiangong Biotechnology (Tianjin) Co.,Ltd.

Address before: No.32, Xiqi Road, Tianjin Airport Economic Zone, 300308

Patentee before: TIANJIN INSTITUTE OF INDUSTRIAL BIOTECHNOLOGY, CHINESE ACADEMY OF SCIENCES

TR01 Transfer of patent right
TR01 Transfer of patent right
TR01 Transfer of patent right

Effective date of registration: 20230906

Address after: Building 1-201-4, Building 8, Huiying Industrial Park, No. 86 Zhonghuan West Road, Tianjin Binhai New Area Pilot Free Trade Zone (Airport Economic Zone), 300000

Patentee after: Tianjin Yihe Biotechnology Co.,Ltd.

Address before: Building 1-201-A218, Building 8, Huiying Industrial Park, No. 86 Zhonghuan West Road, Tianjin Binhai New Area Pilot Free Trade Zone (Airport Economic Zone), 300000

Patentee before: Tiangong Biotechnology (Tianjin) Co.,Ltd.