CN1031242C - 化妆品组合物 - Google Patents

Abstract

本发明公开了AC-NLe⁴-Glu⁵-His⁶-D-Phe⁷-Arg⁸-Trg⁹-Gly¹⁰-NH₂的线状和环状的α-MSH片段的类似物。公开了通过局部施用这些有生物活性的类似物刺激黑素细胞的方法，以及在该方法中使用的含有这些类似物的组合物。

Description

化妆品组合物

本发明涉及一类新的、先前未报道过的α—MSH线状和环状片段类似物；通过适当的使用这些类似物在脊椎动物中剌激黑素细胞的方法，以及在该方法中有用的组合物。

脊椎动物的皮肤、毛发以及羽毛的颜色是由某些例如黑素细胞这样的带颜色的细胞的数目和分布情况决定的，这些细胞的数目和分布是受遗传控制的。在哺乳动物中，黑素细胞分布在表皮的基层、皮肤—表皮的接合处以及毛囊里。这些黑素细胞中的色素(黑色素)的合成是由一种分布在细胞器中的酶，即酪氨酸酶和黑素前体的活性控制的。在酪氨酸酶的活化下，正常黑色素(棕黑色)或祸黑色素(黄红色)的颜色就沉积在该细胞器内；在完成黑色素化后，黑素前体就成为黑素体，更具体地说，取决于颜色，成为正常黑色素或褐黑色素。〔参见Fitzpatrick，T.B.，Y.Hori，K.Toda，M.Seiji，Jap.J.Derm.79：278(1969)〕。黑素体被送到皮肤的周围角质化细胞，或者通过被称为细胞毛发分泌的过程送到正在生长的毛发毛干内的细胞中。

虽然黑色素的合成以及毛发的型式是按遗传学的方式表达的，但在某些哺乳动物中小囊黑素生成和毛发颜色的变化会受α—向黑素(也称为α—促黑素细胞激素，即α—MSH)的激素控制，这种α—向黑素是一种具有如下化学式的线状十三肽：Ac—Ser—Tyr—Ser—Met—Glu—His—Phe—Arg—Trp—Gly—Lys—Pro—Val—NH₂.这种激素是由垂体的部分媒介物分泌并衍生自一种大分子量的蛋白质前体(Proopiomelanocortin)，它刺激黑素细胞腺苷酸环化酶的活性、酪氨酸酶的活性和剌激随后的黑色素的生成〔参见Hadley，M.E.，C.B.Howard，V.J.Hruby，T.K.Sawyer，and Y.O.S.Young，Pigment Cell 6：323(1980)〕。

人类仅在胎儿的垂体中才明显发现有α—MSH，而在成人的垂体中并未发现。成人的黑色素生成水平是按遗传方式决定的，并且结构上被呈现出来。超过这一基本水平的各种不同的黑色素的合成直接依赖于紫外光如日光的刺激，强烈的太阳照射能增加黑色素的形成，伴随着使皮肤变暗。这种反应可能是一种演变适应的过程以保护人体免受紫外线的老化和诱变性质的影响。较低水平紫外线照射的结果引起表皮产生低水平的黑色素合成，使皮肤颜色变浅，引起较少的阻断效应使皮肤能吸收更大量的辐射。虽然成人不在垂体中合成α—MSH，但人的黑素细胞会对这种激素以及它的一种消旋制剂作出响应。

人类皮肤色素沉着不是起因于黑素细中的黑色素生成的局部缺陷，但是对许多这样的色素沉着不足障碍的病因尚不清楚。

据估计，世界人口约有1％遭受某种形式的色素沉着不足这种机能障碍的团扰，虽然知道在皮下施用α—MSH及α—MSH的某种类似物时能使两栖动物交黑，以及在肌肉注射α—MSH时，α—MSH同切除肾上腺的人的皮肤变暗有关联〔Lerner，A.B.，andJ.S.McGuire，N.E.J.Med.270：539—546(1964)〕，但是这些用药途径并不适合于为达到并维持这种期望达到的效果所必须的反复使用。在本发明前尚没有治疗这些色素沉着不足病症的足够好的措施。

现已发现能够经过皮下注射方式有效地施用：α—MSH的某种类似物，这些化合物能影响处于活性状态的黑素细胞剌激黑色素的形成。因此按照本发明，现在有可能和方便地使用包含α—MSH类似物的有关组合物来实现诸如后天性色素着色不足机能障碍的康复，其中包括糠疹、白糠疹、花斑癣、白斑、自发的滴状黑色素过少症，以及脱色痣。再者，现在有可能通过局部使用α—MSH类似物实现使因衰老产生的灰发变黑。还可以通过局部使用这些类似物产生变黑作用来提高市场上动物毛皮的价值。此外，还有可能在完全没有太阳或紫外光照射情况下实现使皮肤变黑。

所有以前的对于从垂体分离出来的α—MSH有关的肽的研究都表明，Met⁴—Glu⁵—His⁶—Phe⁷—Arg⁸—Trp⁹—Gly¹⁰序残暴作为共同的有效核心的不变关系。（上述序残暴为：蛋氨酸—谷氨酸—组氨酸—苯丙氨酸—精氨酸—色氨酸—甘氨酸)。已经提出建议，这种七肽序列是Proopiomelanocortin引起的激素的活性部位。

根据α—MSH(以及它的类似物和片段)与其生物效能在结构上的关系，通过使用离体青蛙皮肤生物测定系统可知，α—MSH的活性部位似乎是适当修饰的Ac-Met-Glu-His-Phc-Arg-Trp-Gly-NH₂-的共同有效核心序列。已经合成了这种片段(α—MSH_4—10)并且在青蛙皮肤中对它的促黑素细胞活性进行了检验，结果表明，这种片段与天然激素相比是一种弱促效药。在作出本发明之前，尚未研究过在位置5(Glu)和10(Gly)上的氨基酸的交换。由以前的构成本发明基础的研究工作可知，(见美国专利No4,457,864和4,485,039以及美国专利申请No.825,262)。在活性线状核心七肽中，用正亮氨酸置换蛋氨酸能得到一种有效的α—MSH类似物。此外，在位置7用它的对映体D—苯丙氨酸置换苯丙氨酸产生了具有更大生物效应的类似物，该类似物在两个公认的生物测定中(青蛙和蜥蜴的皮肤)具有持久的活性。下面的表总结了这样的一些研究结果。

α—MSH的选择性片段以它们对青蛙

(Rana Pipiens)皮肤和蜥蜴

(Anolis Carolinensis)皮肤的生物活性相对效力肽青蛙     蜥蜴alpha-MSH                                 1.0     1.0Ac-[Nle⁴，D-Phe⁷]-alpha-MSH_1-13NH₂    60.0    5.0Ac-alpha-MSH_4-10NH₂                     0.0003  0.004Ac-[Nle⁴]-alpha-MSH_4-10NH₂             0.002   0.06Ac-[Nle⁴]-alpha-MSH_4-11NH₂             0.002   1.0Ac-[Nle⁴，D-Phe⁷]-alpha-MSH_4-10NH₂    0.02    10.0Ac-[Nle⁴，D-Phe⁷]-alpha-MSH_4-11NH₂    0.16    8.0

对这些结构活性关系进行的研究揭示出两个重要因素；(1)用氧化稳定的氨基酸Nle置换具有可氧化的侧链的Met氨基酸使该肽片段的生物活性提高了大约10倍，以及(2)用D—Phe置换在位置7的L—Phe，并将Lys保持在位置11进一步提高了这种α—MSH的生物活性。

除了对线性α—MSH类似物进行的研究之外，还合成了一些结构形态上被限定的α—MSH化合物，并对它们的生物效力进行了测试。其中一个类似物研究是 NH₂，在青蛙皮肤生物测定中它的活性大约是天然α—MSH激素的活性的10倍。在蜥蜴皮肤生物测定中，它的效能大约是α—MSH效能的两倍。设计和合成这些以前的环状α—MSH类似物是基于对在α—MSH的活性核心(His⁶—Phe⁷—Arg⁸—Trp⁹)的中心处β回转结构(β—Turn Structure)的考虑，以及基于这种结构型式对生物活性的重要性。

根据这种环状α—MSH类似物的结构活性的研究可得到如下几点结论：1)在位置4(Met)和位置10(Gly)之间通过用半胱氨酸的等配物置换进行环合在青蛙皮肤生物测定中使黑素细胞的分散活性提高了不少于10倍，并且在蜥蜴皮肤中活性提高了不少于2倍。2)在这些环状类似物中用D—Phe⁷代替Phe⁷使青蛙皮肤中的活性加强，并且使蜥蜴皮肤生物测定的活性为4倍。3)在11位上存在Lys得到比没有Lys的类似物具有更大活性的类似物。4)从23节的环开始，减少或增大二硫化物桥的环的大小使得到的类似物的生物活性严重的下降。

下表中给出了对环状α—MSH类似物的研究结果：

               在青蛙和蜥蜴皮肤生物鉴定中

              环状α—MSH类似物体外相对效能

   *生物效能是相对于α—MSH在剂量应答曲线的直线部分测

    得的

    Maa＝2—巯基乙酸

    Mpa＝3—β巯基乙酸

    Hcy＝高半胱氨酸

为了进一步研究α—MSH_4—10片段的结构与效能的关系，我们系统地研究了一系列以前未报导过的线状α—MSH_4—10和_4-13类似物的向黑素活性的结构要求，重点放在5位和10位上置换的影响。

根据对线状α—MSH类似物研究所获得的结果，我们接着研究了不同种类的结构上限定的α—MSH。简而言之，我们制作了4-10和4-13个具有如下一般结构式的α-MSH片段：

Ac—〔Nle⁴—Xxx⁵，D—Phe⁷，Yyy¹⁰〕—α—MSH_4—10NH₂，其中Xxx氨基酸是谷氨酸(Glu)或者是天门冬氨酸(Asp)(即为单氨基二羧酸的一种)；

Yyy氨基酸是一种碱性氨基酸，赖氨酸，甘氨酸，2，4—二氨基丁酸(Dab)或2，3二氨基丙酸(Dpr)。在下面表格中列出的Ac—α—MSH_4—10线性类似物是利用P—甲基二苯甲基胺树脂作为载体，用固相肽合成法合成的。并且用以前对于α—向黑素及其类似物所采用的相关方法进行纯化。

                 α向黑素类似物的结构

编号                             主要序列

                   1   2   3   4   5   6   7   8   9   10  11  12  13

 1 alpha-MSH   Ac-Ser-Tyr-Ser-Met-Glu-His-Phe-Arg-Trp-Gly-Lys-Pro-Val-NH₂

 2             Ac-Ser-Tyr-Ser-Nle-Glu-His-D-Phe-Arg-Trp-Lys-Gly-Pro-Val-NH₂

 3             Ac-Ser-Tyr-Ser-Nle-Asp-His-D-Phe-Arg-Trp-Lys-Gly-Pro-Val-NH₂

 4                         Ac-Nle-Glu-His-D-Phe-Arg-Trp-Lys-Gly-Pro-Val-NH₂

 5                         Ac-Nle-Asp-His-D-Phe-Arg-Trp-Lys-Gly-Pro-Val-NH₂

 6                         Ac-Nle-Asp-His-D-Phe-Arg-Trp-Gly-NH₂

 7                         Ac-Nle-Glu-His-D-Phe-Arg-Trp-Lys-NH₂

 8                         Ac-Nle-Asp-His-D-Phe-Arg-Trp-Lys-NH₂

 9                         Ac-Nle-Glu-His-D-Phe-Arg-Trp-Orn-NH₂

10                         Ac-Nle-Asp-His-D-Phe-Arg-Trp-Orn-NH₂

11                         Ac-Nle-Glu-His-D-Phe-Arg-Trp-Dab-NH₂

12                         Ac-Nle-Asp-His-D-Phe-Arg-Trp-Dab-NH₂

13                         Ac-Nle-Asp-His-D-Phe-Arg-Trp-Dpr-NH₂

14                         Ac-Nle-Glu-His-Phe-Arg-Trp-Lys-NH₂

15                         Ac-Nle-Asp-His-Phe-Arg-Trp-Lys-NH₂

                                 类似物1.    alpha-MSH2.    Ac-[Nle⁴，D-Phe⁷，Lys¹⁰，Gly¹¹]-alpha-MSH_1-13NH₂3.    Ac-[Nle⁴，Asp⁵，D-Phe⁷，Lys¹⁰，Gly¹¹]-alpha-MSH_1-13NH₂4.    Ac-[Nle⁴，D-Phe⁷，Lys¹⁰，Gly¹¹]-alpha-MSH_4-13NH₂5.    Ac-[Nle⁴，Asp⁵，D-Phe⁷，Lys¹⁰，Gly¹¹]-alpha-MSH_4-13NH₂6.    Ac-[Nle⁴，Asp⁵，D-Phe⁷]-alpha-MSH_4-10NH₂7.    Ac-[Nle⁴，D-Phe⁷，Lys¹⁰，]-alpha-MSH_4-10NH₂8.    Ac-[Nle⁴，Asp⁵，D-Phe⁷，Lys¹⁰]-alpha-MSH_4-10NH₂9.    Ac-[Nle⁴，D-Phe⁷，Orn¹⁰]-alpha-MSH_4-10NH₂10.   Ac-[Nle⁴，Asp⁵，D-Phe⁷，Orn¹⁰]-alpha-MSH_4-10NH₂11.   Ac-[Nle⁴，D-Phe⁷，Dab¹⁰]-alpha-MSH_4-10NH₂12.   Ac-[Nle⁴，Asp⁵，D-Phe⁷，Dab¹⁰]-alpha-MSH_4-10NH₂13.   Ac-[Nle⁴，Asp⁵，D-Phe⁷，Dpr¹⁰]-alpha-MSH_4-10NH₂14.   Ac-[Nle⁴，Lys¹⁰]-alpha-MSH_4-10NH₂15.   Ac-[Nle⁴，Asp⁵，Lys¹⁰]-alpha-MSH_4-10NH₂

按照下述实例来生产α—MSH片段的线状类似物：

                    例1

Ac—〔Nle⁴，D-Phe⁷，Lys¹⁰，Cly¹¹〕—α—MSH_1—13NH₂

该化合物的制备是通过肽合成的固相方去，使用过量三倍的氨基酸，将N^α—Boc—Val(术语“Boc”指叔丁氧羰基)偶联到P—甲基二苯甲基胺树脂(2.0克PMBHA树脂，0.7毫摩尔NH₂/克树脂)上。90分钟后，用二氯甲烷洗涤该树脂、中和，并用醋酸酐—吡啶混合物使其氨基乙酰化。30分钟后用水合茚三酮试验检测不到树脂上有可起反应的氨基。将每一个氨基酸残基偶联到正在生长的肽链上的一套方法包括如下步骤：1)用4份30毫升CH₂Cl₂洗涤，每次洗涤2分钟；2)用30毫升48％的三氟醋酸(在含2％苯甲醚的二氯甲烷中)裂解Boc基团，一次处理5分钟，第二次20分钟；3)用4份30毫升二氯甲烷洗涤，每次2分钟；4)加两份30毫升在二氯甲烷中的10％的二异丙乙胺进行中和，并且每次摇动2分钟；5)用4份30毫升二氯甲烷洗涤，每次2分钟；6)加入在5毫升二氯甲烷中过量3倍的Boc氨基衍生物(在该情况下是2.1毫摩尔)、在DMF(除了N—Boc—N^imTosHis情况外)中的每毫升含1摩尔N—羟基苯并三唑的HOBt溶液2.4毫升，(“N^imTos”指n—咪唑甲苯磺酰基)，再加入2.4毫升的(在DMF中含1mmol/ml Dcc)DDC，然后将该混合物摇晃2—3小时(在Trp，Arg和His的情况下，用DMF作偶联溶剂)；7)在完成偶联后(水合茚三酮阴性)用3份30毫升二氯甲烷洗涤，每次2分钟；8)用3毫升100％乙醇洗涤，每次2分钟；9)用4份30毫升二氯甲烷洗涤，每次1分钟。在进行了下述的N^u—Boc氨基酸(或衍生物)的分段偶联后(按加入次序)，即获得与其标题化合物相对应的被保护的肽树脂：N^α—Boc—Pro；N^α—Boc—Gly；N^α—Boc—Lys—(N₂ ^ε Clz)₇，N^α—Boc—Nⁱ—For—Trp；N^α—Boc—N^g—Tos—Arg；N^α—Boc—D—Phe；N^α—Boc—N^im—Tos—His(项N^g意指N—胍基；Nⁱ意指N—吲哚基；2—Clz指2—氯代苄氧羰基)。将得到的Boc—His(N^im—Tos)—D—Phe—Arg(N^g—Tos)—Trp(Nⁱ—For)—Lys(N^ε—2Clz)—Gly—Pro—ValP—MBHA树脂分成四份。把该被保护的肽树脂的四分之一(1.0克—0.5毫摩尔)与N^α—Boc；r—Bzl—Glu；N^α—Boc—Nle；N^α—Boc—Ser(O—Bzl)；N^α—Boc—Tyr(O—2BrZ)；N^α—Boc—Ser(O—Bzl)(项“2BrZ”意指2溴代苄氧羰基)偶联之后转化为被保护的标题肽树脂。在偶联了最后的氨基酸后，除去N^α—Boc保护基团，中和氨基、在20毫升二氯甲烷中用过量10倍的N—乙酰—咪唑使被保护的肽N^α—乙酰化，得到的被保护的肽树脂，Ac—Ser—(O—Bzl)—Tyr(O—2—Brz)—Ser(O—Bzl)—Nle—Glu(γ—Bzl)—His(N^im—Tos)—D—Phe—Arg(N^g—Tos)—Trp(Nⁱ—For)—Lys(N^ε—2—Clz)—Cly—Pro—Val—P—MBKA树脂在真空中干燥。用液态HF将被保护的肽树脂(1.0克)从上述树脂中裂解出来。在真空中0℃下将易挥发的物质蒸发后，该干燥的产品用乙醚(3×30毫升)洗涤，并用30％的HOAc水溶液(3×30毫升)进行提取，并冻干。将该肽粉(530毫克)分成两份(每份26.0毫克)，一份溶解在1.5毫升的醋酸铵缓冲剂(pH4.5)中，通过一个柱体过滤器过滤到一个CMC柱(2.0×30.0厘米)的顶部，并用250毫升的各为0.01M(pH4.5)；0.1M(pH6.8)和0.2M(pH6.8)的NH₄OAc洗提。在280nm处检出的主峰是在0.1M的末端和0.2M NH₄OAc的前一半之间被提洗出来的，将其冻干，得到142.3毫克的白色粉末。在制备HPLC上纯化80毫克这种肽粉末，收集和冻干该主峰部份得到63毫克的该标题肽。

                        例2

Ac—〔Nle⁴，Asp⁵，D—Phe⁷，Lys¹⁰，Gly¹¹〕—α—MSH_1—13NH₂

该化合物是从1.0克(～0.5mmol)的N^αBoc-His(N^im—Tos)—D—Phe—Arg—(N^g—Tos)—Trp—Nⁱ—For)—Lys—(N^ε—2—ClZ)—Gly—Pro—Val—P—MBHA树脂，通过分段偶联N^α—Boc—Asp(β—Bzl)；N^α—Boc—Nle，N^α—Boc—Ser(O—Bzl)；N^α—Boc—Tyr(O—2—Brz)；N^α—Boc—Ser(O—Bzl)而制备得来的。每一次偶联的处理方法都与前所述相同。在N末端Boc基团去保护和中和后，通过在二氯甲烷中过量10倍的N—乙酰咪唑来实现被保护的十三肽树脂的乙酰化作用(5小时)。在真空中干燥Ac—Ser(O—Bzl)—Tyr(O—2—Brz)—Ser(O—Bzl)—Nle—Asp(β—Bzl)—His(N^im—Tos)—D—Phe—Arg—(N^g—Tos)—Trp(Nⁱ—For)—Lys(N^ε—2—Clz)—Gly—Pro—Val—P—MBHA树脂，得到1.8克被保护的肽树脂。用液态HF裂解1.0克被保护的肽树脂，并在蒸发易挥发性物质后用乙醚(3×30毫升)洗涤，用30％HOAc水溶液(3×30毫升)提取此肽，将其冻干。把一份十三肽粗制品(200毫克)溶解在1.5毫升的NH₄OAc缓冲剂(pH4.5)中，使其通过一个柱体过滤器过滤到CMC柱(2.0×30.0厘米)的顶部，使用与实例1所提及的相同的NH₄OAc不连续梯度的顺序来进行洗脱。在冻干处理后被分离出来的肽是152毫克。用HPLC进一步纯化100毫克的这种肽粗制品得到67毫克本标题肽。

                    例3

Ac—〔Nle⁴，D—Phe⁷，Lys¹⁰，Gly¹¹〕—α—MSH_4—13NH₂

本标题肽是从1.0克(0.5mmol)的Boc—His(N^im—Tos)—D—Phe—Arg(N^g—Tos)—Trp(Nⁱ—For)Lys(N^ε—2—Clz)—Gly—Pro—Val—P—MBHA树脂，通过固相技术在分段偶联了N^α—Boc—Glu(r—Bzl)和N^α—Boc—Nle之后合成得来的。每一个偶联反应的实现方式都与上述各实例相同，不同在于：N末端的乙酰化过程是通过在二氯甲烷中过量2倍的1∶1的乙酸酐—吡啶进行1个小时实现的。按实例2中所说的纯化方法获得肽4，得到一种白色粉末。产率为22％。

                    例4Ac—〔Nle⁴，Asp⁵，D—Phe⁷，Lys¹⁰，Gly¹⁴〕—α—MSH_4—13NH₂

从如实例1那样制备的1.0克(～0.5毫摩尔)的Boc—His(N^im—Tos)—D—Phe—Arg(N^g—Tos)—Trp(Nⁱ—For)—Lys(N^ε—2—ClZ)—Gly—Pro—Val—P—MBHA树脂通过分段偶联N^α—Boc—Asp(β—Bzl)和N^α—Boc—Nle制备出标题肽。在处理所得到的保护的肽树脂时使用的技术与实例1描述的相同。按照实例1所描述的CMC色谱法从130毫克粗制肽得到53毫克所需要的HPLC纯肽。

                    例5

Ac—〔Nle⁴，D)—Phe⁷，Lys¹⁰〕—α—MSH_4—10NH₂

将2.7克P—甲基二苯甲基胺树脂(0.7毫摩尔NH₂/克树脂)悬浮在二氯甲烷中，并且用30毫升二份的二氯甲烷洗涤3次，然后把被洗涤的树脂在二氯甲烷中摇动2小时，滤出溶剂，将膨胀了的MBHA树脂中和并按实例1所述把它与氨基酸偶联起来。下述这些氨基酸衍生物被偶联到该树脂上(按偶联的次序)：N^α—Boc—D—Lys(N^ε—2—Clz)，N^α—Boc—Trp—(Nⁱ—For)，N^α—Boc—Arg(N^g—Tos)，N^α—Boc—D—Phe，N^α—Boc—His—(N^im—Tos)。将所得到的Boc—His(N^im—Tos)—D—Phe—Arg(N^g—Tos)—Trp(Nⁱ—For)—Lys(N^α—2—Clz)—P—MBHA树脂分成两份。其中的一份进行分段偶联：N^α—Boc—Glu(r—Bzl)和N^α—Boc—Nle。把得到的肽树脂debocylated并用在二氯甲烷中的过量2倍的1∶1乙酸酐—吡啶混合物将N末端乙酰化1小时。用二氯甲烷洗涤并将其在真空中干燥，得到被保护的肽树脂2.1克。用无水液态HF—苯甲酰—二硫化乙烷(17毫升HF，2毫升苯甲醚，1毫升二硫化乙烷)来裂解1.7克这种被保护的肽树脂，在蒸发出易挥发物质后，将该已干燥并裂解的肽用3×30毫升无水乙醚洗涤，并用3×30毫升的30％HOAC水溶液提取，将这种肽的含水提取物冻干，得到700毫克肽粗制品。将300毫克肽粗制品溶解在2毫升NH₄OAc缓冲剂(PH4.5)内，使其通过一个柱体过滤器被过滤到CMC柱的顶部。收集其主峰并冻干，得到172毫克白色粉末状肽。用HPLC提纯110毫克粗制肽，得到50毫克纯净的本标题肽。

                    例6

Ac—〔Nle⁴ Asp⁵，D—Phe，Lys¹⁰〕—α—MSH_4—10NH₂

本标题化合物的被保护的肽树脂是从1.8克Boc—His(N^im—Tos)—D—phe—Arg—(N^g—Tos)—Trp(Nⁱ—For)—Lys(N^ε—2—Clz)—P—MBHA通过分段偶联N^α—Boc—Asp(β—Bzl)和N^α—Boc—Nle制得的，每一个偶联反应都是用过量3倍N^α—Boc氨基酸(或衍生物)、过量2.4倍的DCC和过量2.4倍的HOBt按照与前面所述相同的措施完成的。在偶联了最后的氨基酸后，除去N^α—Boc保护基团，中和氨基，并用过量2倍的1∶1乙酸酐吡啶混合物在二氯甲烷中乙酰化1小时。用二氯甲烷洗涤该Ac—Nle—Asp(β—Bzl)—His(N^im—Tos)—D—Phe—Arg(N^g—Tos)—Trp—(Nⁱ—For)—Lys(N^ε—2—ClZ)—P—MBHA树脂，在真空中干燥得到2.1克。1.5克被保护的肽树脂样品通过液态HF裂解并按实例5所述方法处理，在HPLC纯化112毫克的CMC色谱纯的肽以后得到64毫克标题肽。

                            例7

Ac—〔Nle⁴，Asp⁵，D—Phe⁷，Dab¹⁰〕—α—MSH_4—10NH₂

如实例5那样合成标题化合物的被保护的肽树脂，其差别在于在偶联方案中分别用N^α—Boc—Dab(Nr—Z)和N^α—Boc—Asp(β-Bzl)来分别代替N^α—Boc—Lys(N^ε—2Clz)和N^α—Boc—Glu(r—Bzl)，从而得到Ac—Nle—Asp(β—Bzl)—His(N^im—Tos)—D—Phe—Arg(N^g—Tos)—Trp(Nⁱ—For)—Dab(Nγ—z)—P—MBHA树脂。如实例5所述进行裂解和处理该肽树脂后得到一种白色粉末的肽12，产率为36％。

                        例8

Ac—〔Nle⁴，Asp⁵，D—Phe⁷，Dpr¹⁰〕—α—MSH_4—10NH₂

如实例5相同的方法合成本标题化合物的被保护肽树脂。区别在于在偶联方案中，用N^α—Boc—Dpr(N^β—z)代替N^α—Boc—Lys(N^ε—2—Clz)，以及用N^α—Boc—Asp(β—Bzl)代替N^α—Boc—Glu(r—Bzl)，得到Ac—Nle—Asp(β—Bzl)—His—(N^im—Tos)—D—Phe—Arg(N^g—Tos)—Trp(Nⁱ—For)—Dpr(N^β—Z)—P—MBHA树脂。从该树脂裂解出肽，按实例5所述方法处理，得到呈白色粉末的所需肽，产率36％。

                    例9

Ac—〔Nle⁴，Lys¹⁰〕—α—MSH_4—10NH₂

按例5所述的方法合成标题化合物的被保护的肽树脂，区别在于在偶联方案中，用N^α—Boc—Phe代替N^α—Boc—D—Phe，得到Ac—Nle—Glu(r—Bzl)—His(N^im—Tos)Phe—Arg(N^g—Tos)—Trp(Nⁱ—For)—Lys—(N^ε—2—Clz)—P—NBHA树脂。裂解出和处理肽，得到标题化合物，产率为40％。

                        例10

Ac—〔Nle⁴，Asp⁵，Lys¹⁰〕—α—NSH_4—10NH₂

按实例5所述的方法合成本标题化合物的被保护的肽树脂，差别在于在偶联方案中用N^α—Boc—Phe代替N^α—Boc—D—Phe，以及用N^α—Boc—Asp(β—Bzl)代替N^α—Boc—Glu(—r—Bzl)，得到Ac—Nle—Asp(β—Bzl)—Phe—Arg(N^g—Tos)Trp(Nⁱ—For)—Lys(N^ε—2—Clz)—P—MBHA树脂。从该树脂中裂解出肽，除去保护基团，并如前所述之方法纯化该标题化合物，得到一种呈白色粉末状的产品，产率37％。

在下面的表格串给出了前面所述各个实例的线状类似物的生物效能，其中“P”表示长期活性(“+”＝有，“-”＝无)“ND”表示该样品末进行该特定的试验。

           生物效能             剩余活性类似物         青蛙      蜥蜴     青蛙    蜥蜴1            1.0       1.0      P(-)    P(-)2            6.0       8.0      P(+)    P(-)3            9.0       8.0      P(+)    P(-)4            0.8       8.0      P(+)    P(+)5            1.0       10.0     P(+)    P(+)6            0.1       8.0      P(-)    P(-)7            0.2       8.0      P(-)    P(-)8            0.7       8.0      P(-)    P(-)9            0.6       8.0      P(-)    P(-)10            0.9       10.0     ND      P(-)11            0.9       10.0     P(±)   P(±)12            0.9       50.0     P(-)    P(-)13            0.2       8.0      P(-)    P(-)14            0.001     0.08     P(+)    P(-)15            0.004     0.08     P(+)    P(-)

对线性的结构上受约束的α—MSH类似物所获得的这些结果导致了对一种不同种类的受约束的类似物，即结构上被约束为环状α—MSH类似物的研究。

用普通的固相合成技术来进行环状向黑素肽类似物的固相肽合成。概括地说，用过量3倍的Boc保护的氨基酸衍生物、过量2.4倍的1毫摩尔/毫升的N—羟基苯并三唑(HOBt)的DMF溶液(除His情况以外)以及过量2.4倍的1毫摩尔/毫升的二环己基碳二亚胺(DCC)的DMF溶液将N^α叔丁氧羰基(Boc)保护的氨基酸和它们的衍生物偶联到P—甲基二苯甲胺树脂上。该偶联反应在二氯甲烷中进行1—3小时，用水合茚三酮和/或氯醌试验来监测上述反应，需要时上述反应可重复进行。氨基酸反应的侧链被保护如下：Lys，2，4—二氯苄氧羰基；Orn、Dab和Dpr苄氧羰基；Trp，甲酰；Arg，甲苯磺酰基；His，甲苯磺酰基；Glu和Asp，苯甲基酯。在二氯代甲烷中含2％苯甲醚的48％的三氟乙酸每次处理5和20分钟来进行N—Boc保护基团的裂解。

将每一个氨基酸残端结合到正在增长的肽链中的一套操作由以下步骤组成：1)用CH₂Cl₂(4×30毫升，1分钟/洗涤)洗涤；2)在每一步中通过二次用在含有2％苯甲醚的CH₂Cl₂中48％的TFA溶液处理(时间为5分钟和20分钟)以除去Boc保护；3)用CH₂Cl₂洗涤(2×30毫升)；4)用在CH₂Cl₂中的10％的二异丙基乙胺中和(2×30毫升)每次3分钟；5)用CH₂Cl₂洗涤(3×30毫升，每次洗涤2分钟)，6)加入在20毫升CH₂Cl₂中的Boc保护的氨基酸衍生物(除了在Trp、Arg、和His的情况下，由于溶解度的问题而用DMF代替了CH₂Cl₂外)，然后加HOBt，再是DCC，接着摇晃1—3小时；7)用CH₂Cl₂洗涤(3×30毫升，每次洗涤2分钟)；8)用100％乙醇洗涤(3×30毫升，每次洗涤2分钟)，监测偶联的完成情况，在偶联了最后的氨基酸后，除去N—Boc保护基团，中和氨基，并用在CH₂Cl₂中的过量10倍的N—乙酰咪唑或用在CH₂Cl₂中乙酸酐∶吡啶为1∶1的混合物(过量2倍，1小时)使该氨基乙酰化。

用含10％苯甲醚和8％1，2—二硫化乙烷的无水液态HF(1克树脂用10毫升)将肽从该树脂中去保护和分离出来，在0℃下进行45分钟。在真空中蒸发了易挥发物质后，用乙醚或乙酸乙酯(3×30毫升)洗涤这些游离肽，用30％的乙酸水溶液(3×30毫升)和蒸馏水(3×30毫升)提取，将该合并了的含水提取物冻干，从而得到呈白色粉末的肽粗制品。在阳离子交换羧甲基纤维素(CMC)树脂上通过柱色谱方法，使用如下的不连续梯度的铵乙酸酯缓冲剂来纯化每一种肽：250毫升0.01M NH₄OAc(pH4.5)；250毫升的0.01M NH₄OAc(PH6.8)；250毫升的0.1M NH₄OAc(PH6.8)和250毫升的0.2M NH₄OAc(PH6.8)。在0.01M NH₄OAc(pH6.8)的最后部份到0.1M NH₄OAc(PH6.8)缓冲剂的前一半期间提洗出来的主峰(280nm检测)经冻干得到一种呈白色粉末的精制肽。

构成本发明的一部份的环状α—向黑素类似物的结构被列出在下表中：

α—向黑素类似物的结构

按照下述各实例制备本发明的肽类似物。

              例11

从1.0克N^α—Boc—Val—P—MBHA树脂(0.7毫摩尔的N^α—Boc—Val)起始在分段偶联了下述的N^α—Boc—保护的氨基酸(按加入顺序)后制备出标题化合物的被保护的肽树脂：N^α—Boc—Pro；N^α—Boc—Gly；N^α—Boc—Lys(N^ε—2，4—Clz)；N^α—Boc—Trp(Nⁱ—For)；N^α—Boc—Arg—(N^g—Tos)；N^α—Boc—D—Phe；N^α—Boc—His(N^im—Tos)；N^α—Boc—Glu(r—Bzl)；N^α—Boc—Nle。在偶联了最后的氨基酸后，除去N^α—Boc保护基团，中和氨基，并用在二氯甲烷中过量10倍的N—乙酰咪唑对其乙酰化(6—8小时)，或者用在二氯甲烷中2倍过量的乙酸酐∶吡啶(1∶1)的混合物乙酰化1—2小时。得到被保护的肽树脂：Ac—Nle—Glu(γ—Bzl)—His(N^im—Tos)—D—Phe—Arg(N^g—Tos)—Trp—(Nⁱ—For)Lys(N^ε—2，4—Cl₂z)—Gly—Pro—Val—P—NBHA。将1.0克(0.6毫摩尔)的被保护的这种肽树脂(在有1毫升苯甲醚和0.8毫升1，2—二硫代乙烷存在的情况下用10毫升无水HF在0℃处理45分钟。在真空中蒸发HF、苯甲醚和1，2—二硫代乙烷后，用3份30毫升乙醚洗涤该干燥的产品混合物，并且用3份30毫升30％乙酸来提取这种肽。冻干该肽的含水提取物，获得325毫克呈白色粉末的Ac—Nle—Glu—His—D—Phe—Arg—Trp—Lys—Gly—Pro—Val—NH₂肽粗制品。将150毫克的Ac—〔Nle⁴，D—Phe⁷，Lys¹⁰，Gly¹¹〕—α—MSH_4—13NH₂粗品进行纯化处理。这种纯化方法包括将这种肽粗品溶解在2—4毫升0.01M的NH₄OAc(pH4.5)中，在羧甲基纤维素柱(2.0×25.0厘米)上用(0.01M(PH4.5)，0.1和0.2M NH₄OAc(pH6.8)(每种250毫升)的不连续梯度进行色谱分离。在280nm处检测到的主峰是在0.1M NH₄OAc(pH6.8)缓冲剂的前一半被提洗出来的，冻干，得到104毫克的白色粉末。把CMC纯的Ac〔Nle⁴，D—Phe⁷，Lys¹⁰，Gly¹¹〕—α—MSH_4-13NH₂用0.1％三氟乙酸缓冲剂和乙腈作为有机改性剂，在Vydac218 TP15-16 C₁₈RP(25厘米×25厘米)半制备柱上进行HPLC进一步纯化。100毫克该肽经HPLC纯化后得到74毫克纯的Ac—〔Nle⁴，D—Phe⁷，Lys¹⁰，Gly¹¹〕—α—MSH_4-13NH₂肽。40毫克纯Ac—〔Nle⁴，D—Phe⁷，Lys¹⁰，Gly¹¹〕—α—MSH_4—13样品溶解在1毫升5％的Hcl水溶液中，在二乙胺乙基纤维素(盐酸形式)柱(1.0×15.0厘米)上用100毫升5％的Hcl水溶液进行色谱分离，在280nm处监测被洗提的峰。冻干收集到的肽峰，获得35就的Ac—〔Nle，D—Phe⁷，Lys¹⁰，Gly¹¹〕—α—MSH_4—13NH₂×HCl盐。将该肽盐溶解在3毫升的无水DMF中并且没有DMF的仲胺(在减压下从水合茚三酮中蒸馏出来的)。将脱水的K₂HPO₄加到这种在DMF中的肽溶液中，在—个冰盐浴中将这种反应混合物冷却到0℃，并且加进17微升二苯磷酰基叠氮化物，在0℃时搅拌该反应混合物，然后将整个反应烧瓶送到12℃的冷藏室内。在12℃温度下搅拌反应混合物过夜。用HPLC(用0.1％的三氟乙酸/CH₃CN的Vydac柱，25.0厘米×4.6厘米)监测反应的完成情况。而且，用水合茚三酮试验来检测成环的完成情况。在用10％HOAC水溶液骤停该反应后，通过使用30％的HOAC在P₄聚丙烯酰胺柱(80.0厘米×1.0厘米)上进行脱盐处理使

纯化，并且用半制备HPLC进行纯化，得到16毫克环状肽 例12

该标题化合物是从2.0克的N^α—Boc—Lys(N^ε—2，4—Cl₂z)—P—MBHA树脂(1.0毫摩尔/克N^α—Boc—Lys(N²—2，4Cl₂z)出发制备出来的，对所说化合物的被保护肽树脂是在分段偶联了下述N^α—Boc—保护的氨基酸(按加入的次序)后被制备的：N^α—Boc—Trp(Nⁱ—For)；N^α—Boc—Arg(N^g—Tos)；N^α-Boc-D-Phe；N^α—Boc—His(N^im—Tos)。所得到的被保护的肽树脂N^α—Boc—His(N^im—Tos)—D—Phe—Arg(N^g—Tos)—Trp(Nⁱ—For)—Lys(N^ε—2，4—Cl₂z)—P—MBHA树脂被分成两半，一份1.4克(0.5毫摩尔)被保护的五肽树脂部分在偶联了N^α—Boc—Glu(γ—Bzl)和N^α—Boc—Nle后就转化成被保护的标题肽的树脂。在偶联了最后的氨基酸后除去N^α—Boc保护基团，中和该氨基，并按范例11所述乙酰化，从而得到这种被保护的肽树脂Ac—Nle—Glu(r—Bzl)—His(N^im—Tos)—D—Phe—Arg(N^g—Tos)—Trp(Nⁱ—For)—Lys(N^ε—2，4，Cl₂z)—P—MBHA树脂。将1.0克这种被保护的树脂进行液态HF的裂解，并按范例11所述处理这种肽，最后得到356毫克呈白色粉末的Ac—〔Nle⁴，D—Phe⁷，Lys¹⁰〕—α—MSH_4-10NH₂粗制肽。通过和范例11相同的处理方法使40毫克这种纯肽成环，得到13毫克HPLC纯的Ac—〔Nle⁴，

                        例13

从1.4毫克(0.5毫摩尔)的Boc—His(N^im—Tos)—D—Phe—Arg(N^g—Tos)—Trp(Nⁱ—For)—Lys(N^ε—2，4—Cl₂z)—P—NBHA树脂，通过分段偶联N^α—Boc—Asp(3—Bzl)和N^α—Boc—Nle来制备该标题化合物的被保护的肽树脂。每一个偶联反应都是通过下述的按通用固相肽工艺所规定的同样偶联方案进行的。在偶联了最后一个氨基酸后，除去N^α—Boc保护基团，中和该氨基，并按范例11所述乙酰化，得到这种被保护的肽树脂Ac—Nle—Asp(β—Bzl)—His(N^im—Tos)—D—Phe—Arg(N^g—Tos)—Trp(Nⁱ—For)—Lys(N^ε—2，4—Cl₂z)—P—MBHA树脂。按范例11所述将1.0克真空干燥的肽树脂样品裂解和处理，得到370毫克的Ac—〔Nle⁴，Asp⁵，D—Phe⁷，Lys¹⁰〕—α—MSH_4-10NH₂粗品。用与范例11相同的步骤纯化一份这种七肽粗品(110毫克)，得到82毫克呈白色粉末状的线状标题肽前体。将40.0毫克纯的Ac—〔Nle⁴，Asp⁵，D—Phe⁷，Lys¹⁰〕—α—NSH_4-10NH₂样品进行成环处理，在进行HPLC纯化后，得到12毫克纯的Ac—〔Nle⁴，

                   例14

使用通用固相技术中所述的偶联方案使1.0克P—MBHA树脂(0.7毫摩尔/克)装载N^α—Boc—Orn(Nδ—z)。在经1小时偶联后，停止该反应，树脂被洗涤、中和，并且树脂上游离的氨基用在二氯甲烷中2倍过量的乙酸酐∶吡定为1∶1的混合物乙酰化1小时。然后，以下的这些氨基酸分段偶联到该树脂上：N^α—Boc—Trp(Nⁱ—For)；N^α—Boc—Arg(Ng—Tos)；N^α—Boc—D—Phe；N^α—Boc—His(N^im—Tos)；N^α—Boc—Asp(β—Bzl)；N^α—Boc—Nle。每一个偶联反应都是遵照按通用固相肽工艺所规定的同一偶联方案实现的。在偶联了最后的氨基酸后，除去N^α—Boc保护基团，中和和乙酰化该N端氨基酸，从而得到这种被保护的肽树脂Ac—Nle—Asp(β—Bzl)—His(N^im—Tos)—D—Phe—Arg(N^g—Tos)—Trp(Nⁱ—For)—Orn(Nr—z)—P—NBHA树脂。按例11所述的裂解和处理1.0克真空干燥的肽树脂，得到332毫克的粗品Ac—〔Nle⁴，Asp⁵，D—Phe⁷，Orn¹⁰〕—α—NSH_4-10NH₂。通过使用例11中的方法纯化105毫克这种七肽粗品，得到78毫克呈白色粉末状的线状肽。对40.0毫克纯的Ac—〔Nle⁴，Asp⁵，D—Phe⁷，Orn¹⁰〕—α—MSH_4-10NH₂样品进行成环处理，其步骤与范例11相同，适当处理后得到15毫克纯的

                    例15

使用通用固相技术中报导的偶联方案，将1.0克P—MBHA树脂(D.7毫摩尔/克)和N^α—Boc—Dab(Nr—z)偶联。在一个小时偶联后，停止反应，洗涤和中和该树脂，树脂上未起反应的氨基用在二氯甲烷中1倍过量的乙酸酐∶吡啶(1∶1)的混合物乙酰化1小时。然后，通过分段偶联将下面的这些氨基酸偶联到该树脂上：N^α—Boc—Trp(Nⁱ—For)；N^α—Boc—Arg(N^g—Tos)；N^α—Boc—D—Phe；N^α—Boc—His(N^im—Tos)；N^α—Boc—Asp(β—Bzl)；和N^α—Boc—Nle。在偶联了最后的氨基酸后，除去N^α—Boc保护基团，中和该N端氨基，并按范例11所述乙酰化，从而得到这种被保护的肽树脂Ac—Nle—Asp(β—Bzl)—His(N^im—Tos.)—D—Phe—Arg(N^g—Tos)—Trp(Nⁱ—For)—Dab(Nr—z)—P—MBHA树脂。 1.0克真空干燥的这种肽树脂被裂解和处理。从而得到318.2毫克的Ac—〔Nle⁴，Asp⁵，D—Phe⁷，Dab¹⁰〕—α—MSH_4—10NH₂粗品。将100.0毫克的这种七肽粗品纯化，得到78.2毫克呈白色粉末的线状肽。将45.0毫克的纯Ac—〔Nle⁴，Asp⁵，D—Phe⁷，Dab¹⁰〕—α—MSH_4—10NH₂按以前讨论的那样成环并进行处理，得到13.2毫克纯的

MSH_4—10NH₂。

                          例16

使用通用固相技术中报导的偶联方案，将1.0克P—MBHA树脂(0.7毫摩尔/克)与N^α—Boc—Dpr(N^β—Z)偶联。在1小时偶联后停止反应，洗涤并中和该树脂，在树脂上未起反应的氨基用在二氯甲烷中2倍过量的乙酸酐∶吡啶为1∶1的混合物乙酰化1小时。然后，通过分段偶联将下面这些氨基酸偶联到该树脂上：N^α—Boc—Trp(Nⁱ—For)；N^α—Boc—Arg(N^g—Tos)；

      N^α—Boc—^D—Phe；N^α—Boc—His(N^im—Tos)；N^α—Boc—Asp(β—Bzl)；N^α—Boc—Nle。在偶联了最后—个氨基酸后，除去N^α—Boc保护基团，中和该N端氨基，并如范例11所述进行乙酰化，得到被保护的肽树脂Ae—Nle—Asp(β—Bzl)—His(N^im—Tos)—^D—Phe—Arg(N^g—Tos)—Trp(Nⁱ—For)—Dpr.(β—z)—P—NBHA树脂。按范例11所述裂解和处理1.0克真空干燥的这种肽树脂，得到310.8毫克Ac—〔Nle⁴，Asp⁵，D—Phe⁷，Dpr¹⁰〕—α—MSH_4—10NH₂粗品。按范例11所述的方法纯化115.0毫克这种七肽粗品，从而得到82.5毫克呈白色粉末状的线状肽。如前所述，将38.3毫克纯的Ac—〔Nle⁴，Asp⁵，D—Phe⁷，Dpr¹⁰〕—α—MSH_4—10NH₂结成环状并如前述的方法进行纯化，得到11.3毫克纯的 —α—MSH_4—10NH₂。

α—MSH，其线状或环状类似物的生物效能是由它们在体外青蛙和蜥蜴生物测定中剌激黑素体弥散的能力确定的。这一体外测定能给出清晰的截止剂量响应曲线(在2.5×10^-11和4×10^-10M之间)，这种测定能检测出10^-11M的最小α—MSH浓度。这种测定是以导致皮肤变黑的外皮皮肤黑素细胞树枝状过程中黑素体(黑色素颗粒)的离心弥散为基础。所有的原溶液都是从一种储备溶液(10⁴M)经一系列稀释得到的。在这些测定中所用的青蛙(Rans pipiens)是从Kohs Scientific，Germantown，WI得到的，而使用的蜥蜴(Anolis Carolinensis)是来源于Snake Farm，La Place，LA。下表中报导了环状α—向黑素类似物的生物活性：

            生物活性              剩余活性类似物      青蛙      蜥蜴        青蛙        蜥蜴

16        1.0       1.0         P(-)        P(-)

17        1.0       6.0         P(+)        P(+)

18        0.5       9.0         P(+)        P(+)

19        0.5       90.0        P(+)        P(+)

20        1.0       20.0        P(-)        P(-)

21        1.0       5.0         P(-)        P(-)

22        0.01      5.0         P(-)        P(-)

我们以前的专利(4,457,864和4,485,039，它们公开的内容通过引用被全部结合进来)表明了α—MSH活性部位的结构限制的重要性。通过使用Cys氨基酸对Met—4和Gly—10的假等排代换完成的在位置4和10的α—MSH的预先成环约束使得合成类似物的黑素细胞弥散活性增大了许多倍。与它们的线状祖系体相比，环状类似物生物效能的增强明显依赖于所用的生物测定系统。我们主要的兴趣是要得到对蜥蜴皮肤上具有高效能的类似物，这是因为蜥蜴测定的活性和哺乳动物体系的这种活性是线性相关的。

环状类似物的主要特征是它们在蜥蜴皮肤生物测定中表现出低活性，而在青蛙皮肤中表现出高活性；和最佳的环的大小〔23节的环〕相比，在环的大小减小(22节的环)或增加(24节的环)时其活性都减少500倍。由位置5和位置10的氨基酸之间的内酰胺键合的α—MSH的结构约束产生一组环状化合物，它们构成了本发明的一部分。环的大小集中在23节环。化合物19在蜥蜴皮肤中给出了最高的生物效能，而在青蛙皮肤生物测定中生物效能的变化不大。环状类似物和它的线状祖系体之间生物效能增加的数量级是10倍。环状类似物18的生物效能和它的线状类似物相比没有受到多大的影响，但是该环状类似物具有长期活性的现象却是一个重大的变化。C端三肽，Gly—Pro—Val，如在化合物17中所显示的那样，对这些类似物的效能无任何影响。在这些环状的内酰胺肽中存在一个重要的因素，即和线状肽相比，环状肽的活性延长。本发明化合物在下述一个或多个特征上优于α—MSH：由体内或体外青蛙和/或蜥蜴测定测得的生物效能；在这些测定中体内效应的持久性；和/或抗血浆酶引起的降解作用。

本发明有用的化合物可以经透皮方式给药，并且可按本专业领域的技术人员熟知的方法和步骤，按由所希望的给药方式决定的适当组合物进行配制。例如，适于本发明使用的化合物可与各种常用的基质配制或混合成各种制剂，例如膏，油膏，凝胶，洗剂或喷剂，取决于个体皮肤的组成部分所希望的敷用方式。在制造这些制剂的过程中，还可以与常用的增厚剂、润滑剂、表面活性剂、颜料、香料、防腐剂、填充剂和乳化剂等混合起来，所有这些都是众所周知的，并在配制皮肤制剂配方中习惯使用的。典型的情况下，这些非活性组分将会构成最终制剂的较大部分。制造这些组合物最好使它们能缓慢释放或随时间释放来传递。

本发明化合物值得注意的性能还使它们可以用作现行诊断、治疗和基础研究方案中α—MSH和〔Nle⁴〕—α—MSH的替代品。显然，在诊断领域，本发明的化合物，尤其是那些已经用了放射性碘标记的或者已与r辐射发射体相偶联的化合物，特别适用于依据在黑素瘤细胞中与向黑素受体的联系来定位或分出这种黑素瘤细胞。本发明化合物的血浆稳定性使这些化合物在提议的靶组织已知有高浓度向黑素受体的选择性药物传输系统中成为首要的候选药品。预期在颜色改交相关联的现象中，本发明的化合物所展现的较高的生物效应和持久活性在先前对天然存在的黑素细胞剌激激素和它的合成类似物所提到的其它生物效应方面也被一样再现出来。

Claims (6)

1.一利用于化妆的使皮肤变黑的组合物，其特征在于该组合物含有使皮肤变黑有效量的选自下列一组线状α-向黑素类似物中的一种线状α-向黑素类似物作为其活性成分：Ac-Ser-Tyr-Ser-Nle-Glu-His-D-Phe-Arg-Trp-Lys-Gly-Pro-Val-NH₂Ac-Ser-Tyr-Ser-Nle-Asp-His-D-Phe-Arg-Trp-Lys-Gly-Pro-Val-NH₂

        Ac-Nle-Glu-His-D-Phe-Arg-Trp-Lys-Gly-P ro-Val-NH₂

        Ac-Nle-Asp-His-D-Phe-Arg-Trp-Lys-Gly-Pro-Val-NH₂

        Ac-Nle-Asp-His-D-Phe-Arg-Trp-Gly-NH₂

        Ac-Nle-Glu-His-D-Phe-Arg-Trp-Lys-NH₂

        Ac-Nle-Asp-His-D-Phe-Arg-Trp-Lys-NH₂

        Ac-Nle-Glu-His-D-Phe-Arg-Trp-Orn-NH₂

        Ac-Nle-Asp-His-D-Phe-Arg-Trp-Orn-NH₂

        Ac-Nle-Glu-His-D-Phe-Arg-Trp-Dab-NH₂

        Ac-Nle-Asp-His-D-Phe-Arg-Trp-Dab-NH₂

        Ac-Nle-Asp-His-D-Phe-Arg-Trp-Dpr-NH₂

        Ac-Nle-Glu-His-Phe-Arg-Trp-Lys-NH₂

        Ac-Nle-Asp-His-Phe-Arg-Trp-Lys-NH₂

2.一种制备权利要求1的组合物的方法，该方法包括将使皮肤变黑有效量的一种在权利要求1中所述的线状α-向黑素类似物作为活性成分与适用于化妆品的基质相混合。

3.根据权利要求2的方法，其中在该组合物中还可混入适用于化妆品的增厚剂、润滑剂、表面活性剂、颜料、香料、防腐剂、填充剂和/或乳化剂等非活性组分。

4.根据权利要求2或3的方法，其中在权利要求1中所述的组合物的活性成分-从包括下述线状α-向黑素类似物组中选择出来的一种线状α-向黑素类似物：Ac-Ser-Tyr-Ser-Nle-Glu-His-D-Phe-Arg-Trp-Lys-Gly-Pro-Val-NH₂Ac-Ser-Tyr-Ser-Nle-Asp-His-D-Phe-Arg-Trp-Lys-Gly-Pro-Val-NH₂

        Ac-Nle-Glu-His-D-Phe-Arg-Trp-Lys-Gly-Pro-Val-NH₂

        Ac-Nle-Asp-His-D-Phe-Arg-Trp-Lys-Gly-Pro-Val-NH₂

        Ac-Nle-Asp-His-D-Phe-Arg-Trp-Gly-NH₂

        Ac-Nle-Glu-His-D-Phe-Arg-Trp-Lys-NH₂

        Ac-Nle-Asp-His-D-Phe-Arg-Trp-Lys-NH₂

        Ac-Nle-Glu-His-D-Phe-Arg-Trp-Orn-NH₂

        Ac-Nle-Asp-His-D-Phe-Arg-Trp-Orn-NH₂

        Ac-Nle-Glu-His-D-Phe-Arg-Trp-Dab-NH₂

        Ac-Nle-Asp-His-D-Phe-Arg-Trp-Dab-NH₂

        Ac-Nle-Asp-His-D-Phe-Arg-Trp-Dpr-NH₂

        Ac-Nle-Glu-His-Phe-Arg-Trp-Lys-NH₂

        Ac-Nle-Asp-His-Phe-Arg-Trp-Lys-NH₂的制备方法包括如下步骤：将其中氨基酸是选自Val、Lys、Dab、Dpr和Orn的被N^a-叔丁氧羰基保护的氨基酸部分偶联到对甲基二苯甲基胺树脂上，乙酰化其氨基，分段偶联适当的由N-叔-丁氧羰基基团保护的氨基酸，并在完成每一偶联步骤后除去这样的保护基团，中和氨基，乙酰化并从该树脂上裂解出最终的类似物。

5.权利要求1的组合物的用途，该用途包括将该组合物用于的皮肤，以使皮肤变黑或使灰色毛发变黑。

6.根据权利要求5的用途，其中将权利要求1的组合物用于经济动物的皮肤，使该动物的毛皮变黑，以提高市场上动物毛皮的价值。