CN103087020A

CN103087020A - 紫草酚类化合物及其在制备抗补体药物中的用途

Info

Publication number: CN103087020A
Application number: CN2011103389465A
Authority: CN
Inventors: 陈道峰; 金家宏
Original assignee: Fudan University
Current assignee: Fudan University
Priority date: 2011-10-31
Filing date: 2011-10-31
Publication date: 2013-05-08
Anticipated expiration: 2031-10-31
Also published as: CN103087020B

Abstract

本发明属制药领域，涉及紫草酚类化合物及其在制备抗补体药物中的用途。本发明从紫草科植物新疆紫草(Arnebia euchroma(Royle)Johnst)乙醇提取物的乙酸乙酯部位提取紫草酚类化合物并通过体外抗补体活性评价试验证实其对补体系统的经典途径和旁路途径具有较强的抑制作用。所述化合物的CH₅₀为0.53±0.10mM，AP₅₀为0.36±0.02mM。所述化合物可用于制备抗补体药物。

Description

紫草酚类化合物及其在制备抗补体药物中的用途

技术领域

本发明属中药制药领域，涉及紫草酚类化合物及其在制备抗补体药物中的用途。

背景技术

现有技术公开了补体系统的过度激活会引发系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎、急性呼吸窘迫综合征等多种疾病。多年来抗补体药物的研究一直是世界药学研究的热点和重点。目前，临床实践中对此类疾病尚无理想的治疗药物，因此，本领域临床上急需高效、低毒、专一的新型补体抑制剂。研究表明，直接从天然产物中研究开发补体抑制剂的成本低，并且大多数活性成分作为天然产物的一部分可以直接被机体消化吸收，因此，近年来从天然来源中寻找新的具有抗补体活性的药物受到研究者越来越多的关注。国内外的学者从包括海洋生物在内的天然产物中分离得到大量的具有补体系统抑制作用的单体化合物，为抗补体药物的研究与开发提供了广阔的前景。

资料显示，新疆紫草(Arnebia euchroma(Royle)Johnst)为紫草科(Boraginaceae)紫草属(Arnebiae)植物的根，多年生草本，分布于新疆的天山南北坡和西藏的西部以及西伯利亚等地，多生长于海拔2500～4200米的山地砾石质阳坡、草地及草甸等处。新疆紫草的根味苦，性寒，有凉血活血、清热解毒、滑肠通便的功能，可用于预防麻疹、热病斑疹、黄疸、紫癜、吐衄尿血、血淋、血痢、痈肿疮毒、丹毒、湿疹、烧伤、热结便秘。现代药理研究证实其具有抗炎、解热、镇痛、镇静、抗病原微生物、抗肿瘤、抗生育等作用。近年来对紫草的研究集中在化学成分的分离及结构鉴定上，从中分离得到了一些苯醌类、紫草酚类等化合物，但是迄今为止尚未见有关紫草酚类化合物对补体系统的抑制作用的报道。

发明内容

本发明的目的是提供新的紫草酚类化合物紫草酚丁素(arnebiol D)。

本发明的进一步目的是提供紫草酚类化合物紫草酚丁素的新的药用用途，具体涉及所述的紫草酚类化合物在制备抗补体药物中的用途。

本发明应用现代药理筛选方法，对植物药中的抗补体活性物质进行研究，从紫草科(Boraginaceae)紫草属(Arnebiae)植物新疆紫草(Arnebiaeuchroma(Royle)Johnst)植物干燥根的乙醇提取物的乙酸乙酯部位分离得到紫草酚类化合物并证实其对补体系统的经典途径和旁路途径均有较强的抑制作用。

本发明所述的紫草酚类化合物具有如下式所示的化学结构：

本发明涉及的紫草酚类化合物为紫草酚丁素(arnebiol D)。

本发明所述的紫草酚类化合物通过下述方法制备：

新疆紫草根粗粉20kg，室温下以95％乙醇反复冷浸、渗漉提取数次后，减压回收溶剂，得到浸膏820g，浸膏悬浮于蒸馏水中，以石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取，得到乙酸乙酯萃取物420g。取乙酸乙酯萃取物180g经硅胶柱色谱，以石油醚(60～90℃)、石油醚(60～90℃)-丙酮梯度洗脱，所得流分以不同洗脱剂进行反复硅胶柱层析和重结晶得到化合物紫草酚丁素(arnebiol D)。

紫草酚丁素(arnebiol D)：无色针晶(石油醚∶丙酮4∶1).mp.157-158℃，

(c 0.01mg/ml，acetone)，UV(acetone)：λmax(logε)：223，255.IR(KBr)ν_max：3565-3081(br)，2972，2917，1620，1484，1395，1384，1324cm^-1.HR-ESIMS m/z281.1148[M+Na]⁺(calcd.for C₁₆H₁₈O₃Na，281.1147).¹H NMR(400MHz，CDCl₃，ppm)：δ7.76(1H，s)，6.82(1H，s)，6.72(1H，d，J＝8.5Hz)，6.56(1H，d，J＝8.5Hz)，5.14(1H，m)，5.12(1H，m)，5.09(1H，m)，5.07(1H，m)，4.39(1H，m)，2.84(1H，m)，2.44(1H，dd J＝16.5，0.6Hz)，2.79(1H，dd，J＝16.5，0.6Hz)，0.88(3H，s)。¹³C NMR(400MHz，CDCl₃，ppm)：δ150.1(C-1)，113.9(C-2)，115.8(C-3)，148.5(C-4)，123.3(C-5)，123.9(C-6)，36.3(C-7)，38.5(C-8)，148.2(C-9)，112.8(C-10)，76.5(C-11)，50.7(C-12)，149.5(C-13)，107.2(C-14)，71.9(C-15)，17.9(C-16)。

本发明经体外实验证实所述化合物紫草酚丁素(arnebiol D)对补体系统的经典途径和旁路途径均有显著抑制作用。经典途径中50％溶血所需最小供试品浓度(CH₅₀)为0.53±0.10mM；旁路途径中50％溶血所需供试品浓度(AP₅₀)为0.36±0.02mM。

本发明的化合物紫草酚丁素(arnebiol D)可作为药物活性成分，进一步制备抗补体药物。

具体实施方式

实施例1 制备紫草酚丁素(arnebiol D)

新疆紫草干燥根20kg，粗粉于室温下以95％乙醇反复冷浸、渗漉提取数次后，减压回收溶剂，得到浸膏820g，浸膏悬浮于蒸馏水中，以石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取，得到乙酸乙酯萃取物420g。取乙酸乙酯萃取物180g，经硅胶柱色谱，以石油醚(60～90℃)-丙酮梯度洗脱得到7个流份Fr.1～Fr.7，Fr.2经硅胶柱色谱，以石油醚-氯仿(5∶1)为洗脱剂，得到10个流份Fr.2-1～Fr.2-10，所得流份Fr.2-6经石油醚-丙酮(4∶1)重结晶得到化合物JAE-4(15mg)，经波谱学鉴定为一具有新结构的紫草酚类化合物，命名为紫草酚丁素(arnebiol D)。

实施例2 体外抗补体经典途径试验

取补体(豚鼠血清)0.1ml，加入BBS配制成1∶5溶液，用BBS对倍稀释成1∶10、1∶20、1∶40、1∶80、1∶160、1∶320和1∶640溶液。取1∶1000溶血素、各浓度补体及2％SRBC各0.1ml溶于0.3ml BBS中，混匀，37℃水浴30min后放入低温高速离心机，在5000rpm、4℃条件下离心10min。分别取每管上清0.2ml于96孔板，在405nm测定吸光度。实验同时设置全溶血组(0.1ml 2％SRBC溶于0.5ml三蒸水中)。以三蒸水溶血管的吸光度作为全溶血标准，计算溶血率。以补体稀释度为X轴，各稀释浓度补体造成的溶血百分率为Y轴作图。选择达到相似高溶血率的最低补体浓度作为确保体系能正常溶血所需的临界补体浓度。取临界浓度的补体与本发明的紫草酚类化合物混匀，于37℃预水浴10min后，加入适量BBS、溶血素和2％SRBC。将每管37℃水浴30min后放入低温高速离心机，5000rpm、4℃条件下离心10min后分别取每管上清0.2ml于96孔板，405nm下测定吸光度。实验同时设置供试品对照组、补体组和全溶血组。将供试品吸光度值扣除相应供试品对照组吸光度值后计算溶血率。以供试品浓度作为X轴，溶血抑制率作为Y轴作图。计算CH₅₀值。结果显示，所述化合物紫草酚丁素(arnebiol D)对补体系统的经典途径有显著抑制作用。其中，50％溶血所需最小化合物浓度(CH₅₀)为0.53±0.10mM。

实施例3 体外抗补体旁路途径试验

取补体(人血清)0.2ml，加入AP稀释液配制成1∶5稀释溶液，并对倍稀释成1∶10、1∶20、1∶40、1∶80、1∶160、1∶320和1∶640溶液。取各浓度补体0.15ml、AP稀释液0.15ml及0.5％RE 0.20ml，混匀，37℃水浴30min后放置入低温高速离心机，在5000rpm、4℃条件下离心10min。分别取每管上清0.2ml于96孔板，在405nm测定吸光度。实验同时设置全溶血组(0.20ml 0.5％RE溶于0.3ml三蒸水中)。以三蒸水溶血管的吸光度作为全溶血标准，计算溶血率。以补体稀释度为X轴，各稀释浓度补体造成的溶血百分率为Y轴作图。选择达到相似高溶血率的最低补体浓度作为确保体系能正常溶血所需的临界补体浓度。取确定的临界浓度的补体与本发明的紫草酚类化合物混匀，于37℃预水浴10min后，加入0.2ml 0.5％RE。将每管37℃水浴30min后放置入低温高速离心机，5000rpm、4℃，离心10min后分别取每管上清0.2ml于96孔板，405nm下测定其吸光度。实验同时设置供试品对照组、补体组和全溶血组。将供试品吸光度值扣除相应供试品对照组吸光度值后计算溶血率。以供试品浓度作为X轴，溶血抑制率作为Y轴作图，计算AP₅₀值。结果显示，所述化合物紫草酚丁素(arnebiol D)对补体系统的旁路途径有显著抑制作用。其中，50％溶血所需化合物浓度(AP₅₀)为0.36±0.02mM。

Claims

1.如下式所示的紫草酚类化合物，命名为紫草酚丁素(arnebiol D)，

2.按权利要求1所述的紫草酚类化合物，其特征在于，所述化合物通过紫草科(Boraginaceae)紫草属(Arnebiae)植物新疆紫草(Arnebia euchroma(Royle)Johnst)植物干燥根的乙醇提取物的乙酸乙酯部位分离获得。

3.权利要求1的紫草酚丁素在制备抗补体药物中的用途。

4.按权利要求3的用途，其特征在于，所述紫草酚丁素对补体系统的经典途径和旁路途径有抑制作用。