CN101817746A - 酚酸类化合物及其在制备抗补体药物中的用途 - Google Patents

Abstract

一种酚酸类化合物及其在制备抗补体药物中的用途，其特征是酚酸类化合物的化学结构为：

当R₁＝COOH，R₂＝OCH₃时，化合物为香草酸；当R₁＝-CH＝CH-COOH，R₂＝H时，化合物为对羟基桂皮酸。本发明的优点是：酚酸类化合物直接从天然产物中提取，化合物香草酸和对羟基桂皮酸对补体系统的经典途径具有较好的抑制作用。

Description

酚酸类化合物及其在制备抗补体药物中的用途

技术领域

本发明涉及一种酚酸类化合物，尤其涉及一种酚酸类化合物及其在制备抗补体药物中的用途。

背景技术

补体系统的过度激活会引发系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎、急性呼吸窘迫综合征等多种疾病。抗补体药物研究多年来一直是世界药学研究的热点和重点。目前对此类疾病尚无理想的治疗药物，因此临床上急需高效、低毒、专一的新型补体抑制剂。直接从天然产物中研究开发补体抑制剂的成本低，并且大多数活性成分作为天然产物的一部分可以直接被机体消化吸收，因此近年来从天然来源中寻找新的具有抗补体活性的药物受到人们越来越多的关注。国内外的学者从包括海洋生物在内的天然产物中分离得到大量的具有补体系统抑制作用的单体化合物，为抗补体药物的研究与开发提供了广阔的前景。白茅根为禾本科(Gramineae)白茅属(Imperata)植物白茅(Imperata cylindrica Beauv.var.major(Nees)C.E.Hubb.)的根茎，广泛分布于全国各地，为中医传统常用中药，具有凉血止血、清热利尿的功能。主治血热吐衄、热淋尿血、热病烦渴、黄疸、水肿、胃热呕吐、肺热咳嗽、湿热黄疸等。

近年来国内外学者对白茅根进行了化学成分和药理作用的研究，从中分离得到三萜类、黄酮及色原酮类、木脂素类、内酯、有机酸以及甾体类等化学成分。这些化学成分存在着广泛的药理作用，如细胞毒、抗谷氨酸盐诱导新生鼠皮层细胞的神经毒、抑制兔主动脉收缩、抑制5-脂肪氧化酶、降低血清谷丙转氨酶、血管收缩抑制和抗血小板聚集、免疫调控作用等。临床可单独或与其他中药合用用于治疗急慢性肾炎、急性甲型肝炎、急性支气管炎、肺结核咳血等疾病，但是迄今为止尚未见对补体系统具有抑制作用的化合物的报道。

发明内容

本发明的目的在于提供两种酚酸类化合物及其在制备抗补体药物中的用途，该酚酸类化合物具有抗补体活性，对补体系统的经典途径有抑制作用。

本发明的进一步目的是提供上述白茅根中的酚酸类化合物在制备抗补体药物中的用途。

本发明应用现代药理筛选方法，对植物药中抗补体活性物质进行研究，从白茅属(Imperata)植物白茅根(Imperata cylindrica Beauv.var.major(Nees)C.E.Hubb.)的乙酸乙酯部位分离得到酚酸类活性物质并证实其有对补体系统的经典途径有抑制作用。

本发明是这样来实现的，其特征是酚酸类化合物的化学结构为：

当R₁＝COOH，R₂＝OCH₃时，化合物为香草酸；当R₁＝-CH＝CH-COOH，R₂＝H时，化合物为对羟基桂皮酸。

所述的香草酸、对羟基桂皮酸对补体系统的经典途径有抑制作用。

本发明所述的酚酸类化合物通过下述方法制备：

取干燥白茅根10kg，切碎后用95％的乙醇加热回流提取2次，第一次用10倍量乙醇提取2h，第二次用8倍量乙醇提取1.5h，合并提取液，减压回收得浸膏，将浸膏混悬在水中，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇进行萃取，合并乙酸乙酯萃取液浓缩至干即得乙酸乙酯萃取物56g。乙酸乙酯部位干法上样进行硅胶柱色谱，以石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯(100∶1～1∶1)梯度洗脱，所得流分经反复硅胶色谱、反相柱色谱以及凝胶柱纯化，分离得到化合物香草酸和对羟基桂皮酸；

其中，香草酸：淡黄色粉末状结晶(甲醇)。ESI-MS m/z 169[M+H]⁺，¹H-NMR(CDCl₃，400MHz)，7.55(1H，d，J＝2.5Hz，2-H)、7.56(1H，dd，J＝8.0/2.5Hz，6-H)、6.83(1H，d，J＝8.0Hz，5-H)3.89(3H，s，OCH₃)。¹³C-NMR(75MHz，CDCl₃)，δ：152.5(C-4)、148(C-3)、125.2(C-6)、115.8(C-2)、113.8(C-5)、56.3(OCH₃)。

其中，对羟基桂皮酸：淡黄色块状结晶(甲醇)。mp 224～226℃，ESI-MS m/z163[M+H]⁺。¹H-NMR(CD₃OD，400MHz)。δ：7.60(1H，d，J＝16.0Hz，α-H)和6.28(1H，d，J＝16.0Hz，β-H)、7.45(1H，dd，J＝8.6Hz，J＝2.7Hz 2，6-H)和6.80(1H，dd，J＝8.6Hz，J＝2.7Hz 3，5-H)。¹³C-NMR(75MHz，CD₃OD)δ：171.0(C＝O)、161.2(C-4)、146.7(C-β)、131.1(2C-2，6)、127.2(C-1)、116.8(2C-3，5)、115.6(C-α)。

上述酚酸类化合物经体外经典途径抗补体活性筛选试验，结果证实香草酸、对羟基桂皮酸对补体系统的经典途径有抑制作用，50％溶血所需供试品浓度(CH₅₀)各为454±39μg/m和267±20μg/ml，见表1；

表1香草酸和对羟基桂皮酸对补体系统经典途径的抑制作用(

n＝3)

本发明的优点是：酚酸类化合物直接从天然产物中提取，化合物香草酸和对羟基桂皮酸对补体系统的经典途径具有较好的抑制作用。

具体实施方式

实施例1制备白茅根乙酸乙酯萃取物并分离得到化合物

取干燥白茅根10kg，切碎后用95％的乙醇加热回流提取2次，第一次用10倍量乙醇提取2h，第二次用8倍量乙醇提取1.5h，合并提取液，减压回收得浸膏，将浸膏混悬在水中，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇进行萃取，合并乙酸乙酯萃取液浓缩至干即得乙酸乙酯萃取物56g。乙酸乙酯部位干法上样进行硅胶柱色谱，以石油醚(60℃)-乙酸乙酯(100∶1)梯度洗脱，得到Fr1～Fr9九个流分。流分Fr4干法上样进行硅胶柱色谱，以氯仿-乙酸乙酯(40∶1)梯度洗脱，所得40∶1流分经反相柱色谱，以甲醇-水(2∶1)洗脱，得到化合物1(5.6mg)；所得1∶1流分经反相柱色谱，以甲醇-水(1∶1)洗脱，再经凝胶柱纯化得化合物12mg，采用波谱学方法分析，确定其结构分别为香草酸和对羟基桂皮酸。

实施例2体外抗补体经典途径试验

取补体(豚鼠血清)0.1ml，加入BBS配制成1∶5溶液，用BBS对倍稀释成1∶10、1∶20、1∶40、1∶80、1∶160、1∶320和1∶640溶液。取1∶1000溶血素、各浓度补体及2％SRBC各0.1ml溶于0.3ml BBS中，混匀，37℃水浴30min后放入低温高速离心机，在5000rpm、4℃条件下离心10min。分别取每管上清0.2ml于96孔板，在405nm测定吸光度。实验同时设置全溶血组(0.1ml 2％SRBC溶于0.5ml三蒸水中)。以三蒸水溶血管的吸光度作为全溶血标准，计算溶血率。以补体稀释度为X轴，各稀释浓度补体造成的溶血百分率为Y轴作图。选择达到相似高溶血率的最低补体浓度作为确保体系能正常溶血所需的临界补体浓度。取临界浓度的补体与供试品混匀，于37℃预水浴10min后，加入适量BBS、溶血素和2％SRBC。将每管37℃水浴30min后放入低温高速离心机，5000rpm、4℃条件下离心10min后分别取每管上清0.2ml于96孔板，405nm下测定吸光度。实验同时设置化合物对照组、补体组和全溶血组。将化合物组吸光度值扣除相应化合物对照组吸光度值后计算溶血率。以化合物物浓度作为X轴，溶血抑制率作为Y轴作图。计算CH₅₀值。

Claims (2)

1.一种酚酸类化合物，其特征是酚酸类化合物的化学结构为：

当R₁＝COOH，R₂＝OCH₃时，化合物为香草酸；当R₁＝-CH＝CH-COOH，R₂＝H时，化合物为对羟基桂皮酸。

2.一种权利要求1所述的酚酸类化合物在制备抗补体药物中的用途，其特征是香草酸、对羟基桂皮酸对补体系统的经典途径有抑制作用。