CN103086996A - 一种苯并氮氧杂卓类抗生素及其制备方法 - Google Patents

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吴文君
张继文
魏少鹏
张文娟
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Inst Of Pesticides Xibei Univ Of Agricultural & Forestry Science & Technolo
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Abstract

本发明涉及一种苯并氮氧杂卓类抗生素，其化学分子式为C10H11NO3，其化学结构式如下式(I)所示：

Description

一种苯并氮氧杂卓类抗生素及其制备方法
技术领域
本发明属于抗生素领域，具体涉及一种苯并氮氧杂卓类抗生素及其制备方法。
技术背景
自1929年发现医用抗生素青霉素(penicillin)、1958年发现农用抗生素灭瘟素S(Blasticidin-S)以来，迄今全世界已发现4000多种抗生素，在人畜疾病防控及农业有害生物防治方面发挥了重要的作用，推动了人类文明和科学技术的进步。任何一种抗生素随着被推广使用，其靶标病原菌很快就会产生明显的抗药性，因此迫切需要不断研究开发出新的抗生素，特别是具有全新分子结构的抗生素。
发明内容
本发明的目的是提供一种苯并氮氧杂卓类抗生素，其化学分子式为C10H11NO3，其化学结构式如下式(I)所示：
Figure BSA00000847195700011
式(I)
上述化合物具有全新的分子结构而且对多种病原菌具有很高的抑制活性。
本发明的另一个目的是提供制备上述抗生素的生物合成方法和化学合成方法。
本发明所涉及的制备上述式(I)的苯并氮氧杂卓类抗生素的生物合成方法包括如下步骤：
步骤一：发酵
(1)发酵菌种：发酵菌株是在中国山东半岛农药污染地区采集土样，在实验室分离培养获得，鉴定为雅加达链霉菌(Sereptomyces djakartensis)；该菌株已在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏日期为2012年11月13日，保藏登记号为CGMCC No.6817；
(2)斜面培养：采用淀粉酪素培养基于1×105帕下灭菌30min，接菌后28-32℃培养4-5d；所述淀粉酪素培养基由如下组分组成：可溶性淀粉10.0g，磷酸氢二钾2.0g，硝酸钾2.0g，氯化钠2.0g，酪蛋白0.3g，7水硫酸镁0.05g，碳酸钙0.02g，7水硫酸亚铁0.01g，琼脂20.0g蒸馏水1000ml，PH值7.2-7.4；
(3)种子培养：将种子培养基分装于250ml三角瓶，每瓶20-100ml，于1×105帕下灭菌30min；用无菌水将斜面上孢子洗下制成孢子悬浮液，使其浓度为1×106-×107个/ml；每瓶加0.5-2.0ml孢子悬浮液，置于转速为150-180r/min的摇床上，28-32℃培养24-36h；所述种子培养基由如下组分组成：小米10-30g加蒸馏水1000ml煮沸15min后滤去米粒，加入葡萄糖15-30g，氯化钠2-5g，蛋白胨2-10g，碳酸钙0.2-0.8g，硫酸铵0.5-2.5g，PH值7.2-7.4；
(4)液体发酵：将发酵培养基分装于250ml三角瓶，每瓶20-100ml，于1×105帕下灭菌30min；接种量10％(V/V)，置于转速为150-240r/min的摇床上，28-32℃培养4-6d；所述发酵培养基为小米10-30g加蒸馏水1000ml煮沸15min后滤去米粒，加入葡萄糖15-30g，氯化钠2-5g，蛋白胨2-10g，碳酸钙0.5-2.5g，硫酸铵1-3g，PH值7.2-7.4；
步骤二：抗生素的分离
(1)将步骤一制得的发酵液经100-200目筛网过滤后，用HPD大孔吸附树脂吸附，甲醇-水梯度洗脱；
(2)将甲醇洗脱液浓缩后进行硅胶柱层析，以乙酸乙酯/甲醇(v/v)9∶1，8∶2，7∶3，6∶4和纯甲醇依次洗脱，收集以乙酸乙酯/甲醇(v/v)9∶1的流分，浓缩后放置过夜，析出抗生素粗结晶；
(3)将上述粗结晶用制备高效液相色谱纯化，得到式(I)所示的苯并氮氧杂卓抗生素纯品。
本发明所涉及的制备苯并氮氧杂卓类抗生素的化学合成方法有如下4种。
本发明的一种制备式(I)所示的苯并氮氧杂卓类抗生素的化学合成方法如下：
Figure BSA00000847195700031
先将邻氨基苯甲酸甲酯与缩水甘油进行氨开环氧反应，然后碱性水解，最后调成弱酸性环合得到目标产物。
本发明的另一种制备式(I)所示的苯并氮氧杂卓类抗生素的化学合成方法如下：
Figure BSA00000847195700032
先将Boc保护的邻氨基苯甲酸与缩水甘油进行酯化反应，然后酸性脱除Boc保护基，并在酸性条件下氨开环氧合得到目标产物。
本发明的另一种制备式(I)所示的苯并氮氧杂卓类抗生素的化学合成方法如下：
Figure BSA00000847195700033
先将Boc保护的邻氨基苯甲酸与烯丙基溴进行酯化反应，然后间氯过氧苯甲酸将双键环氧化，最后酸性脱除Boc保护基，并在酸性条件下氨开环氧得到目标产物。
本发明的另一种制备式(I)所示的苯并氮氧杂卓类抗生素的化学合成方法如下：
Figure BSA00000847195700034
先将邻氨基苯甲酸甲酯与二羟基丙酮进行反应，得到亚胺，将亚胺氢化还原后碱性水解，最后调成弱酸性环合得到目标产物。
进一步地，本发明还提供如上式(I)所述的苯并氮氧杂卓类抗生素抑制人畜病原细菌的用途。所述人畜病原细菌为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、粪肠球菌(E.faecalis)、肺炎链球菌(Streptococcuspneumoniae)、猪链球菌(Swine streptococcal)、结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)、乳酸乳杆菌(Bacteriumlactis)、牛分枝杆菌(Mycobacterium bovis)、蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)、大肠埃氏菌(Escherichiacoil)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(Methicillin-resistant Staphylococcus aureus，MRSA)。优选地，所述人畜病原细菌为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(Methicillin-resistant Staphylococcus aureus，MRSA)。
进一步地，本发明还提供如上式(I)所述的苯并氮氧杂卓类抗生素抑制农作物病原细菌的用途。所述农作物病原细菌为白菜软腐病菌(Erwina carotovora)、稻白叶枯黄单胞杆菌(Xanthomanas oryzaepv.oryzal(Ishiyama)Dye)、棉角斑病菌(Xanthomonascampestris pv.malvacearum(E.F.Smith)Dowson)、柑橘溃疡病菌(XanthomonasCampestris pv.citri)、柑橘黄梢病菌(Candidatus liberobacter asiaticus)、青枯假单胞杆菌(Pseudomonas solanacearum)、黄瓜角斑病病菌(Pseudomonas syringae pv.lachrymans)、马铃薯环腐病菌(Clavibactermichiganensissubsp.sepedonicus)、猕猴桃溃疡病菌(Pseudomonas syringaePv.actinidiae)。优选地，所述农作物病原细菌为白菜软腐病菌(Erwina carotovora)、水稻白叶枯病菌(Xanthomanas oryzae pv.oryzal(Ishiyama)Dye)、猕猴桃溃疡病菌(Pseudomonas syringae Pv.actinidiae)。
与现有技术相比，本发明具有下述优点：
1、本发明的抗生素是国内外未报道过的新化合物，而且具有全新的苯并氮氧杂卓分子结构。
2、本发明的抗生素对多种人畜病原细菌具有抗菌活性；特别是对枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(Methicillin-resistant Staphylococcus aureus，MRSA)具有强烈的抑制作用，其MIC(μg/ml)值分别为：7.82，15.63，15.63；对多种农作物病原细菌也具有抗菌活性，特别是对白菜软腐病菌(Erwina carotovora)、水稻白叶枯病菌(Xanthomanas oryzaepv.oryzal(Ishiyama)Dye)、猕猴桃溃疡病菌(Pseudomonas syringae Pv.actinidiae)具高活性，其MIC(μg/ml)值分别为：15.63，15.63，7.82。
3、本发明的抗生素，既可以通过微生物发酵制备，也可以通过人工化学合成制备。其微生物发酵制备原料大多为农副产品，易于实现清洁化生产；化学合成制工艺简单、原料廉价易得。
附图说明：
图1：本发明式(I)化合物的UV谱图；
图2：本发明式(I)化合物的ESI-MS谱图；
图3：本发明式(I)化合物的1H-NMR谱图；
图4：本发明式(I)化合物的13C-NMR谱图；
图5：本发明式(I)化合物的H-HCOSY谱图；
图6：本发明式(I)化合物的TOCSY谱图；
图7：本发明式(I)化合物的HMBC谱图；
图8：本发明式(I)化合物的HSQC谱图；
具体实施方式
通过下述实施例有助于理解本发明，但并不限制本发明的内容。
实施例一
发酵制备抗生素
步骤一：发酵
(1)发酵菌种：发酵菌株是在中国山东半岛农药污染地区采集土样，在实验室分离培养获得，鉴定为雅加达链霉菌(Sereptomyces djakartensis)；该菌株已在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏日期为2012年11月13日，保藏登记号为CGMCC No.6817；
(2)斜面培养：采用淀粉酪素培养基于1×105帕下灭菌30min，接菌后28℃培养5d；所述淀粉酪素培养基由如下组分组成：(可溶性淀粉10.0g，磷酸氢二钾2.0g，硝酸钾2.0g，氯化钠2.0g，酪蛋白0.3g，7水硫酸镁0.05g，碳酸钙0.02g，7水硫酸亚铁0.01g，琼脂20.0g蒸馏水1000ml，PH值7.2；
(3)种子培养：将种子培养基分装于250ml三角瓶，每瓶60ml，于1×105帕下灭菌30min；用无菌水将斜面上孢子洗下制成孢子悬浮液，使其浓度为1×106-×107个/ml；每瓶加1ml孢子悬浮液，置于转速为180r/min的摇床上；28℃培养18h；所述种子培养基由如下组分组成：小米10g加蒸馏水1000ml煮沸15min后滤去米粒，加入葡萄糖10g，氯化钠2.5g，蛋白胨5g，碳酸钙0.5g，硫酸铵1g PH值7.2；
(4)液体发酵：将发酵培养基分装于250ml三角瓶，每瓶60ml，于1×105帕下灭菌30min。接种量10％(V/V)，置于转速为180r/min的摇床上，28℃培养96h；所述发酵培养基为小米10g加蒸馏水1000ml煮沸15min后滤去米粒，加入葡萄糖10g，氯化钠2.5g，蛋白胨3g，碳酸钙1g，硫酸铵1PH值7.2；
步骤二：抗生素的分离
将步骤一制得的发酵液经200目筛网过滤后，用3Kg HPD大孔吸附树脂动态吸附，以40％，60％甲醇-水以及纯甲醇梯度洗脱；收集纯甲醇流分，减压浓缩，得50.2g褐色油状物。将所得褐色油状物进行硅胶柱层析(粒径200-300目)，以乙酸乙酯∶甲醇(v/v)9∶1，8∶2，7∶3，6∶4以及纯甲醇5种洗脱液依次洗脱，收集乙酸乙酯∶甲醇(v/v)9∶1洗脱部分，浓缩后放置过夜，析出褐色粗结晶186mg。
将该粗晶用甲醇溶解，进行反相HPLC纯化，得到120mg本发明的抗生素纯品。
HPLC纯化条件如下：
色谱柱为：ODS-BP，10μm，20mm×250mm；流动相为甲醇∶水＝60∶40(v/v)；流速为6.0ml/min；UV检测波长为230mm。
结构鉴定
物态：无色针状结晶；
熔点：78-80℃
分子量：193
分子式：C10H11NO3
化合物的UVmax为229nm说明分子中存在酯基；IR(KBr压片法)显示在3385cm-1处有强吸收，表示该化合物含有OH，164cm-1附近有强吸收，表示该化合物含有C＝O。
MS(possive)显示m/z为194[M+H]+表示该化合物分子量为193，含有奇数个N原子。
13C-NMR谱(DEPT)显示该化合物含有10个碳原子，其中一个酯基(δ167.0)，一个苯环(δ110.4-δ159.9)，并且该苯环为2取代苯环，2个连氧CH2(δ64.0，δ68.6)，1个连杂原子的CH(δ66.9)，结合质谱、红外的数据可以预测该化合物的分子式为C10H11NO3，HMBC谱显示酯羰基与苯环相连，COSY谱显示低场的3个碳上的氢组成一个自旋体系。因此该抗生素为邻氨基苯甲酸甘油酯的脱水产物，鉴定为2-羟甲基-3，4-二氢-1，4-苯并氮氧杂卓-5(1H)酮，具有如下式(I)的分子结构，命名为西农霉素(Xinongmycin)。
Figure BSA00000847195700071
具体核磁数据归属见下表。
NMR谱图归属：
1H-NMR和13C-NMR谱图在Bruker AM-500仪器上用CDCl3作溶剂TMS做内标测定。
实施例二
化学合成制备式(I)的苯并氮氧杂卓类抗生素
在50ml的干燥圆底烧瓶中加入151mg(1mmol)邻氨基苯甲酸甲酯，30ml无水二氯甲烷，电磁搅拌下溶解，氮气保护下滴加0.15ml(约2mmol)缩水甘油，室温下搅拌反应2h。反应液倾入200ml乙酸乙酯中，依次用20ml水，20ml饱和食盐水洗涤。无水硫酸钠干燥，脱溶后加入到50ml的圆底烧瓶中，加入甲醇30ml，甲醇钠54mg(1mmol)，室温下搅拌反应2h后加入浓盐酸调PH值到5，继续搅拌反应8h。然后将反应液倾入200ml乙酸乙酯中，依次用20ml水，20ml饱和食盐水洗涤。无水硫酸钠干燥，脱溶。柱层析分离，丙酮中重结晶，得到无色结晶86mg。该无色结晶的经1H-NMR和13C-NMR确认结构为式(I)所示的苯并氮氧杂卓类抗生素1H NMR(CDCl3，500MHz，δ，ppm)：1.26(t，J＝7.0Hz，3H，CH3)，2.17(s，3H，CH3)，2.22(s，3H，CH3)，3.58(q，J＝7.0Hz，2H，CH2)，5.21(s，1H，C＝CH2)，5.42(s，1H，C＝CH2)，5.41(s，1H，C＝CH2)，5.62(s，1H，C＝CH2)，6.03(s，1H，NH)，6.36(d，J＝8.0Hz，1H)，6.85(s，1H)，7.52(d，J＝8.0Hz，1H).13C NMR(CDCl3，125MHz，δ，ppm)∶15.9，19.3，20.3，38.4，108.5，109.4，110.7，113.0，123.4，125.6，126.6，141.0，146.8，148.2，154.9，170.5.与式(I)所示的苯并氮氧杂卓类抗生素的核磁数据基本一致。总收率44.6％，熔点78-80℃。
实施例三
化学合成制备式(I)的苯并氮氧杂卓类抗生素
(1)在50ml的干燥圆底烧瓶中加入237mg(1mmol)Boc邻氨基苯甲酸，412mg(2mmol)N，N-二环己基亚胺，12mg(约0.1mmol)N，N-二甲基氨基吡啶，30ml无水二氯甲烷，电磁搅拌下溶解，氮气保护下滴加0.15ml(约2mmol)缩水甘油，室温下搅拌反应12h。加入1ml甲醇淬灭反应，反应液倾入200ml乙酸乙酯中，依次用40ml10％硫酸铜，40ml水，20ml饱和食盐水洗涤。无水硫酸钠干燥，脱溶。柱层析分离，丙酮中重结晶，得到无色结晶226mg，为化合物Boc邻氨基苯甲酸缩水甘油酯。收率77.1％，熔点151-152℃。
(2)在250ml的干燥圆底烧瓶中加入100mg(约0.34mmol)Boc邻氨基苯甲酸缩水甘油酯，电磁搅拌下用50ml无水二氯甲烷溶解，氮气保护下，滴加1ml三氟乙酸到反应瓶中，室温下搅拌反应12h。加入5ml饱和碳酸氢钠淬灭反应，倾入200ml乙酸乙酯中，依次用40ml水，20ml饱和食盐水洗涤。无水硫酸钠干燥，过滤，脱溶。柱层析分离，得到无色结晶53mg，该无色结晶的经1H-NMR和13C-NMR确认结构为式(I)所示的苯并氮氧杂卓类抗生素1H NMR(CDCl3，500MHz，δ，ppm)：1.26(t，J＝7.0Hz，3H，CH3)，2.17(s，3H，CH3)，2.21(s，3H，CH3)，3.58(q，J＝7.0Hz，2H，CH2)，5.21(s，1H，C＝CH2)，5.42(s，1H，C＝CH2)，5.41(s，1H，C＝CH2)，5.62(s，1H，C＝CH2)，6.05(s，1H，NH)，6.38(d，J＝8.0Hz，1H)，6.85(s，1H)，7.52(d，J＝8.0Hz，1H).13C NMR(CDCl3，125MHz，δ，ppm)：15.9，19.1，20.3，38.4，108.5，109.4，110.8，113.0，123.4，125.6，126.4，141.0，146.8，148.2，154.9，170.5.与式(I)所示的苯并氮氧杂卓类抗生素的核磁数据基本一致。收率81.5％，熔点78-80℃。
实施例四
化学合成制备式(I)的苯并氮氧杂卓类抗生素
在50ml的干燥圆底烧瓶中加入237mg(1mmol)Boc邻氨基苯甲酸，30ml无水四氢呋喃，电磁搅拌下溶解，氮气保护下滴加0.15ml(约2mmol)烯丙基溴，室温下搅拌反应12h。反应液倾入200ml乙酸乙酯中，依次用40ml水，20ml饱和食盐水洗涤。无水硫酸钠干燥，脱溶后，转移到50ml的干燥圆底烧瓶中，用30ml二氯甲烷溶解，加入间氯过氧苯甲酸173mg(约1mmol)，室温下搅拌反应4h。滴加1ml三氟乙酸到反应瓶中，室温下搅拌继续反应4h。加入5ml饱和碳酸氢钠淬灭反应，然后将反应液倾入200ml乙酸乙酯中，依次用40ml水，20ml饱和食盐水洗涤。无水硫酸钠干燥，过滤，脱溶。柱层析分离，得到无色结晶62mg，该无色结晶的经1H-NMR和13C-NMR确认结构为式(I)所示的苯并氮氧杂卓类抗生素1H NMR(CDCl3，500MHz，δ，ppm)：1.27(t，J＝7.0Hz，3H，CH3)，2.15(s，3H，CH3)，2.20(s，3H，CH3)，3.59(q，J＝7.0Hz，2H，CH2)，5.21(s，1H，C＝CH2)，5.42(s，1H，C＝CH2)，5.41(s，1H，C＝CH2)，5.62(s，1H，C＝CH2)，6.05(s，1H，NH)，6.38(d，J＝8.0Hz，1H)，6.85(s，1H)，7.52(d，J＝8.0Hz，1H).13C NMR(CDCl3，125MHz，δ，ppm)：15.9，19.2，20.3，38.6，108.5，109.7，110.8，113.0，123.4，125.6，126.4，141.0，146.8，148.2，154.9，170.5.与式(I)所示的苯并氮氧杂卓类抗生素的核磁数据基本一致。总收率32.1％，熔点78-80℃。
实施例五
本发明式(I)的苯并氮氧杂卓类抗生素的抑菌活性
采用微量稀释法测定本发明式(I)的苯并氮氧杂卓类抗生素对蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)、枯草芽孢杆菌(B.subtilis)、金黄色葡萄球菌(Staphylociccusaureus)、大肠埃氏菌(Escherichia coil)、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(Methicillin-resistant Staphylococcus aureus，MRSA)、白菜软腐病菌(Erwinacarotovora)，猕猴桃溃疡病菌(Pseudomonas syringaePv.actinidiae)，水稻白叶枯病菌(Xanthomonas oryzae)8种供试细菌的抑菌活性。除耐甲氧西林金黄色葡萄球菌由南京医科大学提供外，其余菌种均购自中国普通微生物菌种保藏中心。
以接种环自培养平皿上挑取4-5个形态相同的共试菌落，接入Mueller-Hinton肉汤培养基中，35℃培养至轻度浑浊后转入0.9％生理盐水中，调整至麦氏浊度0.5(使其在650nm波长下吸光度为0.020，此时相当于1.5×108CFU/m1)，再以Mueller-Hinton肉汤培养基稀释200倍，其接菌量相当于7.5×105CFU/ml。将稀释好的接种液转入96孔板中，每孔加液量100μl，再分别加入无菌水配制的不同浓度的待测药液100μl，每板另设不加药液的空白对照和加药不接菌的对照，每处理重复3次，以氨苄青霉素为阳性对照药剂。将处理好的96孔板置35℃培养箱中培养20h，650nm波长下测定透光率，记录药剂对共试细菌的抑制生长最低浓度(MIC)，以透光度大于85％为抑制生长的标准，结果见表2
表2本发明式(I)的苯并氮氧杂卓类抗生素对8种供试细菌的抑菌活性
Figure BSA00000847195700101
表2的结果说明西农霉素对蜡状芽孢杆菌、枯草杆菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃氏菌、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌、大白菜软腐病菌、猕猴桃溃疡病菌、水稻白叶枯病菌均具有很强的抑制作用，其活性明显优于对照药剂氨苄青霉素。
本发明的苯并氮氧杂卓类抗生素及其制备方法已经通过具体的实例进行了描述，本领域技术人员可借鉴本发明内容，适当改变原料、工艺条件等环节来实现相应的其它目的，其相关改变都没有脱离本发明的内容，所有类似的替换和改动对于本领域技术人员来说是显而易见的，都被视为包括在本发明的范围之内。

Claims (10)

1.一种苯并氮氧杂卓类抗生素，其化学分子式为C10H11NO13，其化学结构式如下式(I)所示：
Figure FSA00000847195600011
式(I)。
2.一种制备上述权利要求1所述的式(I)的苯并氮氧杂卓类抗生素的生物合成方法，其特征在于包括如下步骤：
步骤一：发酵
(1)发酵菌种：发酵菌株是在中国山东半岛农药污染地区采集土样，在实验室分离培养获得，鉴定为雅加达链霉菌(Sereptomyces djakartensis)；该菌株已在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏日期为2012年11月13日，保藏登记号为CGMCC No.6817；
(2)斜面培养：采用淀粉酪素培养基于1×105帕下灭菌30min，接菌后28-32℃培养4-5d；所述淀粉酪素培养基由如下组分组成：可溶性淀粉10.0g，磷酸氢二钾2.0g，硝酸钾2.0g，氯化钠2.0g，酪蛋白0.3g，7水硫酸镁0.05g，碳酸钙0.02g，7水硫酸亚铁0.01g，琼脂20.0g蒸馏水1000ml，PH值7.2-7.4；
(3)种子培养：将种子培养基分装于250ml三角瓶，每瓶20-100ml，于1×105帕下灭菌30min；用无菌水将斜面上孢子洗下制成孢子悬浮液，使其浓度为1×106-×107个/ml；每瓶加0.5-2.0ml孢子悬浮液，置于转速为150-180r/min的摇床上，28-32℃培养24-36h；所述种子培养基由如下组分组成：小米10-30g加蒸馏水1000ml煮沸15min后滤去米粒，加入葡萄糖15-30g，氯化钠2-5g，蛋白胨2-10g，碳酸钙0.2-0.8g，硫酸铵0.5-2.5g，PH值7.2-7.4；
(4)液体发酵：将发酵培养基分装于250ml三角瓶，每瓶20-100ml，于1×105帕下灭菌30min；接种量10％(V/V)，置于转速为150-240r/min的摇床上，28-32℃培养4-6d；所述发酵培养基为小米10-30g加蒸馏水1000ml煮沸15min后滤去米粒，加入葡萄糖15-30g，氯化钠2-5g，蛋白胨2-10g，碳酸钙0.5-2.5g，硫酸铵1-3g，PH值7.2-7.4；
步骤二：抗生素的分离
(1)将步骤一制得的发酵液经100-200目筛网过滤后，用HPD大孔吸附树脂吸附，甲醇-水梯度洗脱；
(2)将甲醇洗脱液浓缩后进行硅胶柱层析，以乙酸乙酯/甲醇(v/v)
9∶1，8∶2，7∶3，6∶4和纯甲醇依次洗脱，收集以乙酸乙酯/甲醇(v/v)9∶1的流分，浓缩后放置过夜，析出抗生素粗结晶；
(3)将上述粗结晶用制备高效液相色谱纯化，得到式(I)所示的苯并氮氧杂卓抗生素纯品。
3.一种制备权利要求1所述的式(I)所示的苯并氮氧杂卓类抗生素的化学合成方法，其特征在于：
Figure FSA00000847195600021
先将邻氨基苯甲酸甲酯与缩水甘油进行氨开环氧反应，然后碱性水解，最后调成弱酸性环合得到目标产物。
4.一种制备权利要求1所述的式(I)所示的苯并氮氧杂卓类抗生素的化学合成方法，其特征在于：
Figure FSA00000847195600022
先将Boc保护的邻氨基苯甲酸与缩水甘油进行酯化反应，然后酸性脱除Boc保护基，并在酸性条件下氨开环氧合得到目标产物。
5.一种制备权利要求1所述的式(I)所示的苯并氮氧杂卓类抗生素的化学合成方法，其特征在于：
Figure FSA00000847195600031
先将Boc保护的邻氨基苯甲酸与烯丙基溴进行酯化反应，然后间氯过氧苯甲酸将双键环氧化，最后酸性脱除Boc保护基，并在酸性条件下氨开环氧得到目标产物。
6.一种制备权利要求1所述的式(I)所示的苯并氮氧杂卓类抗生素的化学合成方法，其特征在于：
Figure FSA00000847195600032
先将邻氨基苯甲酸甲酯与二羟基丙酮进行反应，得到亚胺，将亚胺氢化还原后碱性水解，最后调成弱酸性环合得到目标产物。
7.根据权利要求1所述的式(I)所示的苯并氮氧杂卓类抗生素抑制人畜病原细菌的用途，所述人畜病原细菌为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、粪肠球菌(E.faecalis)、肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae)、猪链球菌(Swine streptococcal)、结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)、乳酸乳杆菌(Bacteriumlactis)、牛分枝杆菌(Mycobacterium bovis)、蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)、大肠埃氏菌(Escherichiacoil)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)或耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(Methicillin-resistant Staphylococcus aureus，MRSA)。
8.根据权利要求7的用途，所述人畜病原细菌为枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)或耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(Methicillin-resistant Staphylococcus aureus，MRSA)。
9.根据权利要求1所述的式(I)所示的苯并氮氧杂卓类抗生素抑制农作物病原细菌的用途，所述农作物病原细菌为白菜软腐病菌(Erwina carotovora)、稻白叶枯黄单胞杆菌(Xanthomanas oryzae pv.oryzal(Ishiyama)Dye)、棉角斑病菌(Xanthomonascampestris pv.malvacearum(E.F.Smith)Dowson)、柑橘溃疡病菌(XanthomonasCampestris pv.citri)、柑橘黄梢病菌(Candidatus liberobacter asiaticus)、青枯假单胞杆菌(Pseudomonas solanacearum)、黄瓜角斑病病菌(Pseudomonas syringae pv.lachrymans)、马铃薯环腐病菌(Clavibactermichiganensissubsp.sepedonicus)或猕猴桃溃疡病菌(Pseudomonas syringae Pv.actinidiae)。
10.根据权利要求9的用途，所述农作物病原细菌为白菜软腐病菌(Erwinacarotovora)、水稻白叶枯病菌(Xanthomanas oryzaepv.oryzal(Ishiyama)Dye)或猕猴桃溃疡病菌(Pseudomonas syringae Pv.actinidiae)。
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