CN103079415B - 用于刺激肌肉蛋白质合成的营养组合物 - Google Patents

Abstract

本发明涉及结合维生素D起作用的合成代谢氨基酸衍生物刺激物在制备用于预防和/或治疗哺乳动物的肌肉质量、肌肉强度、肌肉功能和身体功能、或其任意组合中的任一种的损失的药物或营养组合物中的用途。

Description

用于刺激肌肉蛋白质合成的营养组合物

技术领域

本发明涉及结合（联合）维生素D起作用的合成代谢氨基酸衍生物刺激物用于预防和/或治疗哺乳动物，尤其是成年哺乳动物的肌肉质量、肌肉强度、肌肉功能和身体功能（physical function）、或其任意组合中的任一种的损失的用途，以及适用于刺激哺乳动物，尤其是成年哺乳动物的肌肉蛋白质合成的特定营养组合物。

发明背景

骨骼肌减少症（sarcopenia）定义在老化期间发生的肌肉质量、强度和功能损失[1]。肌肉质量损失从30岁年龄以3-8%/年的速度开始并从60岁加速。这种损失在超过70的老年人达到高达35-40%，并因此骨骼肌减少症在老年人中特别突出。

肌肉质量保持只能通过蛋白质合成的充分刺激和/或蛋白质分解的抑制实现。多种因素有助于肌肉蛋白质合成，其中最重要的是氨基酸可利用度(用于新合成蛋白质的构成单元)和通过合成代谢氨基酸或合成代谢氨基酸衍生物(例如瓜氨酸，亮氨酸，必需氨基酸（essential amino acids）(EAA)和肌酸)产生的活化信号。

然而，蛋白质摄取在老年人中降低，这导致氨基酸的不充分食后可利用度。此外，老化的特征在于对必需氨基酸，尤其是亮氨酸的合成代谢作用的降低的肌肉敏感性[2,3]。这种对亮氨酸的较低反应与控制肌肉蛋白质合成的细胞内途径的激活下降相关[4,5]。因此，为了补偿老化对肌肉蛋白质合成的恶化作用，必需同时靶向氨基酸，尤其是必需氨基酸的生物利用度，通过增加高质量蛋白质（富集必需氨基酸，尤其是亮氨酸）的摄取，以及通过改善对这些氨基酸的肌肉敏感度对合成代谢氨基酸的肌肉反应。

感兴趣的是，老化的特征还在于高流行率的维生素D缺乏(低于25-50nmol/L的血清维生素D水平)和不足(低于75nmol/L的血清维生素D水平[6,7]。低血清25-(OH)D浓度于老年人增加的骨骼肌减少症风险相关[8]。

在将来，维生素D缺乏会成为主要的健康问题：仅最近，提出了[9]在40和45%的德国人口可能是维生素D缺陷，另外的15至30%缺陷。由此使他们处于各种健康问题的风险。另外，总人口中的维生素D的日摄取的目前推荐对50岁以下的成人为5微克，并且对大于50岁的成人为10微克，并且不足以确保维生素D足够(等于或高于75nmol/L的血清维生素D)。因此，需要显著增大这些推荐(至少使它们翻倍)并且优选将它们升高至25微克以上的日摄取量，取决于性别、年龄、活动水平和其他因素。

据报道成人中的维生素D缺乏促成或恶化骨质减少、骨质疏松症、肌无力、骨骼肌减少症[11]、身体功能损失、骨折、常见癌症、自身免疫疾病、传染病和心血管病。还有某些证据，维生素D可以降低多种类型的癌症和1型糖尿病的发病率。

支持维生素D对肌肉强度的作用以及维生素在免疫健康中的作用的科学，足够有力有益于来自欧洲食品安全局(EFSA)委员会关于饮食、应用和过敏症（NDA）的正面观点[10]。

背景技术

EP1712140B1(Larena,18December2006)公开了一种用于预防和/或治疗老年对象的脆弱综合征和骨骼肌减少症的组合物，其包含许多组分，尤其是维生素D(最大量为20μg)和天然蛋白，如乳清，富集支链氨基酸(尤其是亮氨酸)。该组合物不含有游离亮氨酸、碳水化合物或脂肪。

WO2006/062273(Kim,15June2006)教导了一种健康补充食物，基本上由游离支化氨基酸（尤其是亮氨酸）和大量抗氧化剂，尤其是维生素D3组成，所述食物有助于支化氨基酸的吸收和代谢，以增强厌氧条件（对于运动员，在应激条件）下的瞬间冲击能。

WO2008/115563(University of Florida Research Foundation,25September2008)公开了一种液体食品组合物，在大量医学应用中，适用于治疗大量年龄相关障碍，如骨骼肌减少症，其包含至少一种B-维生素、维生素C、维生素E、肌酸、亮氨酸、牛磺酸、碳水化合物、GABA、核糖、(乙酰基)肉碱和脂肪源，并且可选地包含蛋白质源(0.01-20g)，和维生素D(0.01至1200mg)，没有公开其具体摩尔数。

EP2036552(Kao Corporation,18March2009)教导了用于治疗肌肉衰老、肌肉功能障碍、肌萎缩和相关病症的组合物，含有儿茶素，可选地结合支链氨基酸和/或牛磺酸，作为活性成分。公开了有用的配方的许多不同实例。这些实施例之一涉及标准多维生素制剂，包括牛磺酸和茶叶儿茶酸。该标准多维生素制剂包括根据Japanese Recommended DietaryAllowance的维生素。在EP2036552中没有讨论或提出所述混合物中的维生素中的任一种的特定功能。

WO2009/143097(Stokely-Van Camp Inc.,26November2009)教导了牛奶基饮料，包含共轭亚油酸、牛奶蛋白、碳水化合物，高达1,000IU的维生素D和用于久坐个体和经历强度训练的运动员增加肌肉质量且降低身体脂肪的钙。

EP1712140(Larena,18October2006)主张一种组合物，包含i)富含支链氨基酸(BCAA)的天然蛋白质，ii)选自精氨酸和谷氨酰胺的氨基酸，iii)人参皂苷，iv)锌，v)硒，vi)选自B1,B2,B3,B5,B6,B8,B9,B12,C,D和E的维生素，和vii)类胡萝卜素。公开的大多数组合物含有乳清和豌豆蛋白。

此外，大量现有技术文献，包括JP2008237070和US2010/0124587，解决了降低老年人的跌倒相关骨折的风险的问题。这样的组合物含有目的在于增加肌肉质量或强度，由此减少跌倒的风险的组分，以及目的在于增加骨强度和/或密度，由此减轻跌倒后果的组分。在这些组合物中，维生素D用于增加骨强度和/或密度。

所引述现有技术文献都没有公开使用合成代谢氨基酸衍生物刺激物和维生素D，作为一起使用的活性化合物，适用于预防和/或治疗成年哺乳动物的肌肉质量、肌肉强度、肌肉功能和身体功能、或其任意组合中的任一种的损失，以及适用于刺激成年哺乳动物的肌肉蛋白质合成的具体营养组合物。

自从2010年1月可商购获得的营养组合物SeniorActiv(Nestle)，设计用于营养不良老年人，在200ml份中包含大量的组分，尤其是牛奶蛋白质(10g/100ml,7.5g/100kcal)、维生素D(250IU/100ml)和150kcal/100ml的能量，并且具有2份/天的剂量推荐，以用于帮助最小化肌肉断裂和支持蛋白质合成。它不含有游离氨基酸衍生物，尤其是游离亮氨酸。

发明内容

令人惊讶地，关于一方面蛋白质缺乏（通过不足的蛋白质摄取）和通过合成代谢氨基酸或合成代谢氨基酸衍生物刺激物（anabolic amino acidderivative stimulus）的作用，以及另一方面维生素D缺乏，都与老年人的肌肉质量的年龄相关损失有关之间的关系。认为维生素D，尤其是高维生素D量，可以在对氨基酸衍生物刺激物的合成代谢作用的肌肉灵敏度中起关键作用。营养产物、富集维生素D、合成代谢氨基酸衍生物刺激物和高质量蛋白质，然后将导致肌肉蛋白质合成的充分刺激，并因此充分刺激肌肉质量增加，特别在肌少症人中，因为它将同时解决维生素D和蛋白质缺乏，以及对氨基酸对肌肉的合成代谢作用的抗性。

令人惊讶地，本发明的发明人发现，维生素D，尤其是如在下面的部分“维生素D”中定义的高维生素D量，增强合成代谢氨基酸衍生物刺激物刺激肌肉蛋白质合成，和随后的肌肉质量增加的刺激作用。不受理论限制，认为当高维生素D量和合成代谢氨基酸衍生物刺激物顺序地或同时地提供给人时，调节肌肉蛋白质合成的细胞内信号转导途径的活化水平更高。

作为维生素D增强合成代谢氨基酸对肌肉蛋白质合成的刺激作用的构思的证据，研究了在体外模型中在有或没有维生素D和亮氨酸存在下控制蛋白质合成的细胞内信号转导途径的活化。

该组合还可用于改善成年人的肌肉骨架健康，用于减少成年人的肌肉骨架健康下降，用于改善成年人的运动性，用于再获得和/或恢复成年人在疾病、手术或受伤之后的肌肉骨架功能性；用于减少日常生活的活动的功能限制，并因此改善日常生活的活动，以及用于减小跌倒和跌倒相关损伤的风险。

具体实施方式

本发明涉及结合（联合）维生素D起作用的合成代谢氨基酸衍生物刺激物（anabolic amino acid derivative stimulus）的用途，以及包含所述互助活性成分（mutually active component）的组合物，用于制备药物或营养组合物，其用于预防和/或治疗哺乳动物，尤其是成年哺乳动物的肌肉质量、肌肉强度、肌肉功能和身体功能、或其任意组合中的任一种的损失。

在本申请的上下文中，术语"至少"也包括开放范围的起点。例如，"至少95重量%"的量是指等于或大于95重量%的量。

在本申请的上下文中，术语"约"是指所给值5%以下的偏差，如4%,3%,2%,1%或低于1%。例如，"约12g"的量是指等于12g±0.6g的任何量，即在11.4至12.6g范围内的任何量。使用术语"约"的原因是考虑到与用于确定特定组分的分析方法相关的不确定度，或当涉及制备营养组合物时该制备方法的变异性。根据一种最优选的实施方式，约是指0%。因此，"约12g"的量是指"12g"。

在本申请的上下文中，1IU的维生素D是0.025μg的生物学当量（biological equivalent）。因此，1,000IU是25μg的生物学当量。

利用术语"蛋白质类物质"是指蛋白质或蛋白质的任何衍生部分，如但不限于非水解蛋白、天然蛋白、水解蛋白、肽，如寡肽和二肽，以及氨基酸。亮氨酸是蛋白质类物质的部分，瓜氨酸和肌酸不是。

合成代谢氨基酸衍生物

本发明涉及合成代谢氨基酸衍生物刺激物的用途，其被定义为通过增加净蛋白质合成而促进（因此，合成代谢）肌肉生长（因此，刺激物）的衍生自氨基酸或其前体（因此，氨基酸衍生物）的化合物。

优选地，所述合成代谢氨基酸衍生物刺激物是选自L-亮氨酸、瓜氨酸和肌酸的组中的一种或多种。最优选地，所述合成代谢氨基酸衍生物刺激物是选自L-亮氨酸和瓜氨酸的组中的氨基酸。

L-亮氨酸(下文也称为亮氨酸，因为亮氨酸的R形式在本发明的上下文中不是生物学相关的)是一种必需氨基酸，是大量蛋白质的部分，并且连同缬氨酸和异亮氨酸，属于支链氨基酸类。亮氨酸可以作为游离氨基酸使用，或者以结合形式使用，如二肽、寡肽、多肽或蛋白质。亮氨酸的常见蛋白质源是乳品蛋白质如乳清、酪蛋白、胶状酪蛋白、酪蛋白酸酯（盐）（caseinate）和糖巨蛋白（glycomacroprotein）(GMP)，以及植物蛋白如小麦、水稻、豌豆、白羽扇豆（lupine）和大豆蛋白质。所述蛋白质源可以提供完整蛋白质、水解产物或其混合物，下文进一步称为蛋白质类物质（proteinaceous matter）。亮氨酸称为肌肉蛋白质合成的有效活化剂。

瓜氨酸是一种α-氨基酸。其名称源自西瓜属（citrullus），用于西瓜的拉丁词，因为它天然存在于西瓜中。瓜氨酸，以瓜氨酸苹果酸盐的形式，作为增强性能运动膳食补充剂销售，其被提出促进好氧能量产生（人类研究）[12]以及增加运动性能并降低肌肉酸痛（人类演技）[13]。在人体中，瓜氨酸产生自在尿循环中的核心反应之一中的鸟氨酸和氨甲酰磷酸。它还作为通过NOS家族催化的反应的副产物产生自体内的精氨酸。瓜氨酸也能促进肌肉蛋白质合成并且已经描述于人类和动物研究[参见，例如Université René Descartes-Paris的WO2008/049984，2008年5月2日]。瓜氨酸可商购获得并且可以例如获自Ajinomoto,Kyowa和Biocodex。

肌酸(N-(氨基-亚氨基-甲基)-N-甲基-甘氨酸；甲基胍基乙酸)是含氮有机酸，其在脊椎动物，尤其是人体中产生自L-精氨酸、甘氨酸和L-蛋氨酸（L-methionine），并且有助于向肌肉供应能量。肌酸可商购获得并且可以例如获自Sigma Aldrich,Alfa Aesar和Aminolabs。

优选地，合成代谢氨基酸衍生物刺激物以日剂量为0.5至20g，优选1至10g提供。优选地，这样的日剂量作为单份（单次）（single serving）给予。

在一个实施方式中，亮氨酸以日剂量为1至10g提供。当亮氨酸作为蛋白质类物质提供时，它应包含至少约11重量%的亮氨酸。发现基于蛋白质类物质的总量的约11重量%的总亮氨酸是营养组合物中存在的最小量。优选地，所述蛋白质类物质包含至少约12重量%，优选至少约12.5重量%，更优选至少约13重量%的亮氨酸。

优选地，相对于亮氨酸的总量，总亮氨酸包含至少约20重量%，优选至少约22.5重量%，优选至少约25重量%的游离形式的亮氨酸。在本申请的上下文中，用"游离形式"是指包含1至5该氨基酸，优选1至3该氨基酸，更优选1个氨基酸的肽。优选地，亮氨酸是游离氨基酸，或者作为碱、盐或螯合物。

在一个实施方式中，瓜氨酸以日剂量为0.5至10g提供。

在一个实施方式中，肌酸以日剂量为0.5至20g提供。

在一个实施方式中，亮氨酸、瓜氨酸和肌酸的任意组合以日剂量为0.5至20g，优选1至10g提供。任意组合是选自以下的组中的组合：亮氨酸和瓜氨酸；亮氨酸和肌酸；瓜氨酸和肌酸；以及亮氨酸、瓜氨酸和肌酸。

维生素D

维生素D是一组脂肪可溶性第二类固醇类激素（secosteroid），其两种主要生理学相关形式是维生素D₂(麦角钙化醇)和维生素D₃(胆钙化醇)。这些统称为钙化固醇（calciferol）。没有下标的维生素D是指维生素D的所有形式，D₁、D₂、D₃或D₄，尤其是D₂和D₃，或者其任意混合物。

当消化时，维生素D在肝（内质网）中通过由肝细胞产生的酶25-羟化酶被羟化为25-羟胆钙化醇(25(OH)D)，也称为骨化二醇。一旦形成，产物储存在肝细胞中直至需要它并且可以释放到血浆中，在那里它将结合至α球蛋白。25-羟胆钙化醇然后转运到近端肾小管，在那里它可以通过两种酶之一羟化成维生素D的不同形式，其中之一是活性维生素D(1,25(OH)D)而另一种是无活性维生素D(24,25(OH)D)。通过甲状旁腺素（并且另外地通过低钙或磷酸盐）活化的酶1α-羟化酶形成主要生物学活性维生素D激素，其中C1羟化形成1,25-二羟胆钙化醇(1,25(OH)₂D，也称为骨化三醇)。当1α-羟化酶不是活性的时，单独的酶羟化C24原子，形成24R,25(OH)₂D₃，这使分子从任何生物学活性失活。

维生素D可以以活性(1,25(OH)₂D)或无活性(维生素D₃或D₂)形式提供。

根据一个实施方式，使用的维生素D的量为800IU或更高/日剂量，如例如1,000、2,000、3,000、4,000、5,000、6,000、7,000、8,000、9,000或10,000IU，或所述值中的任意两个之间的任何值或以上，但不是高至它在给予的对象中引起毒性。

根据一个实施方式，使用的维生素D的量为20μg或更高/日剂量，如例如25、50、75、100、125、150、175、200、225或250μg/日剂量，或所述值中的任意两个之间的任何值或以上。目前，欧洲和美国的耐受上限摄取水平(UL)设置在2,000国际单位(IU)，相当于50μg/天。然而，近期研究，特别是从临床试验表明，这应升高至10,000IU(250微克/天)，因为这个剂量与任何有害或毒性效果不相关。

具体地优选的是超过1,000IU(25μg)的维生素D的日剂量。

蛋白质类物质

根据一个实施方式，合成代谢氨基酸衍生物刺激物结合维生素D用于制备药物。在本申请的上下文中，药物是本发明的一个实施方式，其不含有或基本上不含有热量组分（caloric component），如碳水化合物、脂肪和蛋白质类物质，其不同于根据本发明的组分。药物可以顺序地或同时地与所述热量组分，尤其是蛋白质源一起给予。所述热量组分可以单独地提供，以膳食、食物补充剂、饮料的形式，或以任何其他形式。

根据一个可替换实施方式，合成代谢氨基酸衍生物刺激物结合维生素D用于制备营养组合物。在本申请的上下文中，营养组合物是本发明的一个实施方式，其含有或主要含有热量组分，如碳水化合物、脂肪和蛋白质类物质，其不同于根据本发明的组分。

根据一个实施方式，合成代谢氨基酸衍生物刺激物结合维生素D与蛋白质类物质源组合使用，从而提供必要的氨基酸以预防和/或治疗成年哺乳动物的肌肉质量损失、肌肉功能损失、或这二者。蛋白质类物质源可以单独地提供，以膳食、食物补充剂、饮料的形式，或以任何其他形式，或者可以组合到单个营养组合物中。

优选地，蛋白质类物质源于高质量蛋白质，如乳品蛋白，如乳清或酪蛋白。氨基酸主要是L-氨基酸，因为仅L-氨基酸在本发明的上下文中是代谢相关的。

优选地，根据本发明的营养组合物包含至少约12g的蛋白质类物质/100kcal。

优选地，组合物包含至少约12.5g、至少约13g、至少约13.5g并且最优选约14g的蛋白质类物质/100kcal。

根据另一种实施方式，根据本发明的营养组合物包含至少约45en%的蛋白质类物质/100kcal。优选地，所述组合物包含至少约48en%、至少约50en%、至少约52en%、至少约54en%并且最优选至少约56en%的蛋白质类物质/100kcal。

根据一种优选实施方式，根据本发明的蛋白质类物质包含至少约80重量%的乳清蛋白，优选至少约85重量%的乳清蛋白，优选至少约90重量%并且最优选约95重量%的乳清蛋白。

乳清蛋白被认为是"快速"蛋白，是指在乳清消化后该氨基酸的循环中出现的速率。乳清蛋白可以是完整乳清蛋白、水解乳清蛋白、微粒乳清蛋白、纳米粒子乳清蛋白、胶状乳清蛋白等。优选地，乳清蛋白是完整乳清蛋白，即以其完整形式的乳清蛋白，如新鲜牛奶中存在的乳清蛋白。

作为要用于本发明的乳清蛋白源，可以使用任何可商购得到的乳清蛋白源，即通过本领域已知的制备乳清的任何方法获得的乳清，以及其制备的乳清蛋白部分，或者构成作为β-乳球蛋白、α-乳白蛋白（α-lactalbumin）和血清白蛋白的乳清蛋白主体的蛋白质，如液体乳清，或粉末形式乳清，如乳清蛋白分离物(WPI)或乳清蛋白浓缩物(WPC)。乳清蛋白浓缩物富集乳清蛋白，但也含有其他组分如脂肪、乳糖和糖巨蛋白(GMP)，酪蛋白相关非球状蛋白。典型地，乳清蛋白浓缩物通过膜过滤产生。在另一方面，乳清蛋白分离物主要由具有最低量的脂肪和乳糖的乳清蛋白构成。乳清蛋白分离物通常需要更严格分离方法如微滤和超滤的组合或离子交换色谱法。通常理解的是，乳清蛋白分离物是指其中至少90重量%的固体是乳清蛋白的混合物。乳清蛋白浓缩物理解为乳清蛋白的百分比在副产物中初始量(约12重量%)和乳清蛋白分离物之间。尤其是，作为在制备奶酪中的副产物获得的甜乳清、作为制备酸性酪蛋白中的副产物获得的酸性乳清、通过牛奶微滤获得的天然乳清或作为制备皱胃酪蛋白（rennet casein）中的副产物获得的皱胃乳清（rennet whey），可以用作乳清蛋白源。

此外，乳清蛋白可以源于所有的哺乳动物物种，如例如奶牛、绵羊、山羊、马、水牛和骆驼。优选地，所述乳清蛋白是牛起源。

优选地，所述乳清蛋白源作为粉末获得，优选所述乳清蛋白源是WPC或WPI。

根据另一个实施方式，根据本发明的蛋白质类物质包含至少约45重量%的必需氨基酸(EAA)，优选至少约47重量%，并且更优选至少约50重量%的EAA。必需氨基酸是选自以下的组中的氨基酸：异亮氨酸(Ile)，亮氨酸(Leu)，赖氨酸(Lys)，蛋氨酸(Met)，苯丙氨酸(Phe)，苏氨酸(Thr)，色氨酸(Trp)和缬氨酸(Val)。由于天然乳清蛋白和酪蛋白蛋白质分别包含(取决于源)最大约45和41重量%的EAA，所以它可能需要向营养组合物中添加EAA，如氨基酸或肽形式，以达到至少45重量%的优选量。

根据另一种实施方式，根据本发明的蛋白质类物质包含总亮氨酸、总缬氨酸和总异亮氨酸，其中总亮氨酸:缬氨酸:异亮氨酸比率为约1.7-3:1:1。可替换地，亮氨酸:(缬氨酸+异亮氨酸)的重量比为约0.9或更高，优选为1.0或更高。合适的缬氨酸和异亮氨酸水平可以通过乳清蛋白提供，或者可以通过添加的氨基酸（以作为碱或盐的游离形式，或作为肽）提供。

令人惊讶地，本发明的发明人发现，当使用低热量（（被定义为不超过100kcal/100ml）营养物给予必需氨基酸时，必需氨基酸，尤其是亮氨酸，显示氨基酸刺激肌肉蛋白质合成和随后的肌肉质量的改进生物利用度。不受理论限制，认为当膳食蛋白质在低热量组合物中给予时，相比于高热量组合物，氨基酸更快到达循环并达到更高血液水平，优选使用乳清，尽管效果相同但对于酪蛋白更小。这种所谓的“低能量效果”可以有益地用于治疗患有任何疾病的人，该疾病的预防和治疗与肌肉蛋白的合成，尤其是骨骼肌减少症相关，涉及肌肉衰减（muscle decline）的疾病，具有不足（净）肌肉蛋白质合成和肌肉衰减，与老年化相关。

脂肪和碳水化合物

根据一个优选实施方式，根据本发明的营养组合物包含至少脂肪源和碳水化合物源中的一种。这些组分中的一种或两种的存在有效地抑制作为能量源的蛋白质的过量使用，代替用于刺激肌肉蛋白质合成。

由脂肪和/或碳水化合物(可消化和不可消化的)提供的能量总量应匹配由蛋白质类物质提供的总能量。因此，脂肪和/或碳水化合物的总量应为至多约55en%，优选至多约52en%，优选至多约48en%，优选至多约44en%。

分别由脂肪和/或碳水化合物提供的能量的量可以在宽范围内变化，只要存在两种组分。更具体地，脂肪的量可以在10至35en%之间，优选在15至30en%之间变化。更具体地，碳水化合物的量可以在10至35en%之间，优选在15至30en%之间变化。因此，脂肪和碳水化合物总和的相对量在30至60en%的范围。

在一个优选实施方式中，根据本发明的营养组合物包含脂肪源和碳水化合物源，优选以约2g脂肪和约6.4g可消化碳水化合物/100kcal的量。

关于脂肪类型，宽范围选择是可能的，只要该脂肪是食物质量。

脂肪可以是动物脂肪或植物脂肪或这二者。尽管动物脂肪如猪油或黄油具有基本相等热量和营养价值并且可以互换地使用，但是在本发明实践中高度优选植物油，由于它们的易得性、易于配制、缺少胆固醇和较低浓度的饱和脂肪酸。在一个实施方式中，本发明的组合物包含菜籽油、玉米油和/或葵花籽油。脂肪可以包括中链脂肪源，如中链甘油三酯(MCT，主要为8至10个碳原子长)、长链脂肪酸源如长链甘油三酯(LCT)和磷脂结合的脂肪酸如磷脂结合的EPA或DHA，或者两者类型的源的任意组合。MCT是有益的，因为它们在代谢应激患者中易于吸收和代谢。此外，使用MCT将降低营养吸收不良风险。LCT源，如芥花油、菜籽油、葵花籽油、大豆油、橄榄油、椰子油、棕榈油、亚麻籽油、海洋生物油（marine oil）或玉米油是有益的，因为已知LCT可以调节人体的免疫响应。

关于碳水化合物的类型，宽范围选择是可能的，只要该碳水化合物为食物质量。可消化碳水化合物正性地影响对象的能量水平，并增加本发明的营养组合物的有利效果。可消化碳水化合物可以包含单个或复合的碳水化合物，或其任意混合物。适合用于本发明的是葡萄糖、果糖、蔗糖、乳糖、海藻糖、帕拉金糖（palatinose）、玉米浆、麦芽、麦芽糖、异麦芽糖、部分水解的玉米淀粉、麦芽糊精、葡萄糖、寡糖和多糖。

膳食纤维

根据本发明的液体肠用营养组合物可以可选地用膳食纤维（或益生元纤维（prebiotics fibre））来提高营养含量，如非可消化碳水化合物，如低聚半乳糖、低聚果糖、菊糖（inulin）和果胶(水解的果胶，低粘度果胶（DP为2-250的果胶降解产物)，或者其他果胶降解产物）。在本发明的一个实施方式中，根据本发明的组合物包含0.5g/100kcal至6g/100kcal的非可消化碳水化合物。膳食纤维包括DP为2至20，优选2至10的非可消化寡糖。更优选地，这些寡糖不含有大量(低于5重量%)的在这些DP范围之外的糖，并且它们是可溶的。这些寡糖可以包含低聚果糖(FOS)、反式-低聚半乳糖(TOS)、低聚木糖(XOS)、大豆寡糖等。可选地，在根据本发明的组合物中还可以并入更高分子量化合物如菊糖、大豆多糖、金合欢多糖（acacia polysaccharide）（金合欢纤维或金合欢树胶）、纤维素、抗性淀粉等。不溶性纤维如纤维素的量优选低于20重量%的根据本发明的组合物的膳食纤维部分，和/或低于0.6g/100kcal。增稠多糖如角叉菜胶、黄原胶、果胶、半乳甘露聚糖和其他高分子量(DP>50)不可消化多糖的量优选低，即低于20%的纤维部分的重量，或低于1g/100kcal。相反，可以有利地包括水解多糖如水解果胶和半乳甘露聚糖。

一种优选的纤维组分是链长度(DP)为2至100的不可消化寡糖，例如(抗性低聚葡萄糖)，尤其是氢化，或DP为2至10的寡糖的混合物，如低聚果糖或低聚半乳糖(GOS)，其还可以含有少量的更高糖(例如，DP为11至20)。这样的寡糖优选包含50重量%至90重量%的纤维部分，或0.5g/100kcal至3g/100kcal的根据本发明的组合物。其他适合的纤维组分包括仅具有不消化性的糖。

在一个具体实施方式中，根据本发明的组合物包含以下中的一种或多种：低聚果糖（fructo‐oligosaccharides）、菊糖、金合欢多糖、大豆多糖、纤维素和抗性淀粉（resistant starch）。

在本发明的另一个实施方式中，根据本发明的组合物可以包含中性和酸性寡糖的混合物，如WO2005/039597(N.V.Nutricia)中公开的，将其整体通过引用并入本文中。

更特别地，酸性寡糖具有的聚合度(DP)为1至5000，优选为1至1,000，更优选为2至250，甚至更优选为2至50，最优选为2至10。如果使用具有不同聚合度的酸性寡糖的混合物，则该酸性寡糖混合物的平均DP优选为2至1,000，更优选为3至250，甚至更优选为3至50。酸性寡糖可以同源或异源碳水化合物。酸性寡糖可以制备自果胶、果胶酸盐、海藻酸盐、硫酸软骨素、透明质酸、肝素、皮肤素（heparane）、细菌碳水化合物、唾液聚糖（sialoglycans）、墨角藻聚糖（fucoidan）、低聚果糖（fucooligosaccharides）或角叉菜胶（carrageenan），并且优选制备自果胶和海藻酸盐。酸性寡糖可以通过WO01/60378中描述的方法制备，将其通过引用合并于本文。酸性寡糖优选制备自高甲氧基化果胶，其特征在于高于50%的甲氧基化度。如本文中使用的，"甲氧基化度”(也称为DE或“酯化度”)用来指聚半乳糖醛酸链中含有的游离羧酸基被酯化（例如通过甲基化）的程度。酸性寡糖优选特征在于高于20%，优选高于50%，甚至更优选高于70%的甲氧基化度。优选地，酸性寡糖具有高于20%，优选高于50%，甚至更优选高于70%的甲基化度。酸性寡糖优选以10mg至100g/天，优选100mg至50g/天的量给予。

如本发明中使用的，术语中性寡糖是指这样的糖类，其单糖单元的聚合度超过2，更优选超过3，甚至更优选超过4，最优选超过10，其在肠中不被或仅部分地通过在人上部消化道（小肠和胃）中存在的酸或消化酶的作用消化，但其通过人肠菌族发酵并且优选缺少酸性基团。中性寡糖在结构上（化学上）不同于酸性寡糖。如本发明中使用的术语中性寡糖优选是指这样的糖类，其具有的寡糖的聚合度低于60该单糖单元，优选低于40，甚至更优选低于20，最优选低于10。术语单糖单元是指具有封闭环结构的单元，优选己糖，例如吡喃糖或呋喃糖形式。基于其中含有的单糖单元的总数，中性寡糖优选包含至少90%，更优选至少95%的选自由以下组成的组中的单糖单元：甘露糖，阿拉伯糖，果糖，岩藻糖，鼠李糖，半乳糖，α-D-吡喃半乳糖，核糖，葡萄糖，木糖和其衍生物。合适的中性寡糖优选通过肠菌族（gut flora）发酵。优选地，寡糖选自由以下组成的组中：纤维二糖(4-O-β-D-吡喃葡萄糖基-D-葡萄糖)，纤维糊精((4-O-β-D-吡喃葡萄糖基)_n-D-葡萄糖)，B-环糊精(α-1-4-连接的D-葡萄糖的环状分子；α-环糊精-六聚物，β-环糊精-七聚物和γ-环糊精-八聚物)，不可消化糊精，低聚龙胆糖(β-1-6连接的葡萄糖残基的混合物，部分1-4连接)，寡葡萄糖(α-D-葡萄糖的混合物)，低聚异麦芽糖(支链α-1-6连接的葡萄糖残基，具有部分1-4连接)，异麦芽糖(6-O-α-D-吡喃葡萄糖基-D-葡萄糖)；异麦芽三糖(6-O-α-D-吡喃葡萄糖基-(1-6)-α-D-吡喃葡萄糖基-D-葡萄糖)，潘糖(6-O-α-D-吡喃葡萄糖基-(1-6)-α-D-吡喃葡萄糖基-(1-4)-D-葡萄糖)，明串珠菌二糖(5-O-α-D-吡喃葡萄糖基-D-吡喃果糖苷)，帕拉金糖或异麦芽酮糖(6-O-α-D-吡喃葡萄糖基-D-果糖)，异麦芽糖（theanderose）(O-α-D-吡喃葡萄糖基-(1-6)-O-α-D-吡喃葡萄糖基-(1-2)-B-D-呋喃果糖苷),D-琼脂糖（D-agatose），D-塔洛-己酮糖（D-lyxo-hexulose），乳果寡糖(O-β-D-吡喃半乳糖基-(1-4)-O-α-D-吡喃葡萄糖基-(1-2)-β-D-呋喃果糖苷)，α-低聚半乳糖（包括棉籽糖、水苏糖和其他大豆寡糖）(O-α-D-吡喃半乳糖基-(1-6)-α-D-吡喃葡萄糖基-β-D-呋喃果糖苷)，β-低聚半乳糖或反式半乳糖-寡糖(β-D-吡喃半乳糖基-(1-6)-[β-D-吡喃葡萄糖基]_n-(1-4)α-D葡萄糖)，乳果糖(4-O-β-D-吡喃半乳糖基-D-果糖)，4’-半乳糖苷乳糖(O-D-吡喃半乳糖基-(1-4)-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1-4)-D-吡喃葡萄糖)，合成的低聚半乳糖(新半乳二糖，异半乳二糖，半蔗糖（galsucrose），异乳糖I、II和III)，果聚糖-果聚糖型(β-D-(2→6)-呋喃果糖基)_nα-D-吡喃葡萄糖苷)，果聚糖-菊糖型(β-D-((2→1)-呋喃果糖基)_nα-D-吡喃葡萄糖苷)，1f-β-呋喃果糖基真菌四糖(β-D-((2→1)-呋喃果糖基)_n B-D-呋喃果糖苷)，低聚木糖(B-D-((1→4)-木糖)n，拉菲糖（lafinose），低聚乳果糖和低聚阿拉伯糖。

根据一个进一步优选的实施方式，中性寡糖选自由以下组成的组中：果聚糖，低聚果聚糖，不可消化糊精，低聚半乳糖(包括反式低聚半乳糖)，低聚木糖，低聚阿拉伯糖，低聚葡萄糖，低聚甘露糖，低聚果糖和其混合物。最优选地，中性寡糖选自由低聚果糖、低聚半乳糖和反式低聚半乳糖组成的组。

合适寡糖和它们的制备方法进一步描述于Laere K.J.M.(Laere,K.J.M.,Degradation of structurally different non-digestible oligosaccharides byintestinal bacteria:glycosylhydrolases of Bi.adolescentis.PhD-thesis(2000),Wageningen Agricultural University,Wageningen,The Netherlands)，将其全部内容通过引用在此并入。反式低聚半乳糖(TOS)是例如以商标Vivinal^TM(Borculo Domo Ingredients,Netherlands)销售。不可消化糊精，其可以通过玉米淀粉水解产生，包含α(1→4)和α(1→6)葡糖糖苷键，如在天然淀粉中存在的，并且含有1→2和1→3连接和左旋葡聚糖。由于这些结构特性，不可消化糊精含有良好形成的支化粒子，其通过人消化酶部分水解。不可消化寡糖的大量其他商业源易于获得并且对于技术人员是已知的。例如，反式低聚半乳糖可获自Yakult Honsha Co.,Tokyo,Japan。大豆寡糖可获自由Ajinomoto U.S.A.Inc.,Teaneck,N.J.分布的Calpis Corporation。

在一个进一步优选的实施方式中，根据本发明的组合物包含DP为2至250的酸性寡糖，其制备自果胶（如水解果胶(一种酸性寡糖(AOS))和低粘度果胶）、海藻酸盐和其混合物；和中性寡糖，其选自以下的组：果聚糖，低聚果糖，不可消化糊精，低聚半乳糖（包括反式低聚半乳糖，低聚木糖，低聚阿拉伯糖，低聚果糖，低聚甘露糖，低聚果糖和其混合物。

在一个进一步优选的实施方式中，根据本发明的组合物包含两种化学不同的中心寡糖。发现酸性寡糖组合两种化学不同中性寡糖的给予提供最佳的协同免疫刺激效果。优选地，根据本发明的组合物包含：

-如上定义的酸性寡糖(优选低粘度果胶)；

-半乳糖基中性寡糖（galactose-based neutral oligosaccharide）(其中超过50%的单糖单元是半乳糖单元)，优先选自由低聚半乳糖和反式低聚半乳糖组成的组；和

-果糖和/或葡萄糖基中性寡糖（fructose and/or glucose based neutraloligosaccharide）(其中超过50%的单糖单元是果糖和/或葡萄糖，优选果糖单元)，优选聚糖、果聚糖和/或低聚果糖，最优选长链低聚果糖(其平均DP为10至60)。

优选地，所述营养组合物进一步包含一种或多种选自短链GOS、长链FOS、菊糖和低粘度果胶的组中的膳食纤维。

营养组合物的具体实施方式

在一个特别优选的实施方式中，营养组合物每100kcal包含：

(i)约14g的蛋白质类物质，相对于总蛋白质类物质，其包含约95重量%的乳清蛋白，并且相对于总蛋白质类物质，其包含至少约14重量%的亮氨酸，其中相对于总亮氨酸，至少约26重量%为游离形式，

(ii)约2g的脂肪和约6.4g的可消化碳水化合物，和

(iii)约532IU(13.3μg)的维生素D，

用于制备预防或治疗疾病的药物，所述疾病涉及成年哺乳动物的肌肉衰减，其中所述营养组合物作为每日1至2份（次）（servings）给予，每份（次）包含约150kcal。

在另一个特别优选的实施方式中，所述营养组合物每100kcal包含：

(i)约12g的蛋白质类物质，相对于总蛋白质类物质，其包含约90重量%的乳清蛋白，并且相对于总蛋白质类物质，其包含至少约16重量%的亮氨酸，其中相对于总亮氨酸，至少约45重量%为游离形式，

(ii)约1.5g的脂肪，和约8.3g的可消化碳水化合物，和

(iii)约640IU(16μg)的维生素D，

用于制备预防或治疗疾病的药物，所述疾病涉及成年哺乳动物的肌肉衰减，其中所述营养组合物作为每日1至2份（次）给予，每份（次）包含约125kcal。

微量营养素

老年人处于微量营养素缺乏的风险，其部分地由于这样的事实，即它们的能量摄取经常减少同时许多微量营养素推荐增大[14]。作为结果，25-60%的老年人不满足对于微量营养素摄取的推荐，并且共同报道了缺乏维生素如A、C、D、E、B6、叶酸、B12、钙、镁和锌[15-17]。此外，微量营养素与脆弱相关[18]，并且低类胡萝卜素、维生素E、维生素D、硒和锌的血清水平相对于非脆弱老年人在脆弱老年人中观察到[19]。

这些微量营养素中，硒、锌、类胡萝卜素、维生素C和维生素E都具有抗氧化性。关于对降低的亮氨酸刺激老年大鼠的肌肉蛋白质合成能力的抗氧化剂补充的反转的公开意见[20]，在所述营养组合物中包括了抗氧化剂的混合物。

B-维生素类叶酸、维生素B6和维生素B12涉及高半胱氨酸的代谢途径，高半胱氨酸是老年人的共有疾病的一种已知风险因子[21]，并且通常在老年人中缺乏[17]。因为叶酸、维生素B6和维生素B12对降低血高半胱氨酸水平的有益效果，这些维生素在所述营养组合物中存在。

因此，根据本发明的营养组合物可以可选地进一步包含一种或多种微量营养素，定义为矿物质、痕量元素和维生素，选自以下的组中：钠，钾，氯化物，钙，磷，镁，类胡萝卜素，维生素A，维生素E，维生素K，维生素B1，维生素B2，维生素B3，维生素B5，维生素B6，叶酸，维生素B12，生物素，维生素C，锌，铁，铜，锰，钼，硒，铬，氟化物和碘化物。优选地，所述微量营养素选自以下的组：类胡萝卜素，维生素A，维生素B6，维生素B12，维生素C，维生素E，叶酸，钙，磷，镁，锌和硒。优选地，根据本发明的营养组合物可以进一步包含类胡萝卜素、维生素B6、维生素C、维生素E、叶酸、维生素B12、硒和锌。优选地，根据本发明的营养组合物可以每100kcal进一步包含10至500mg的类胡萝卜素、8至750μg的维生素B6、2.25至25mg的维生素C、0.5至10mg的维生素E、10至150μg的叶酸、0.07至5μg的维生素B12、2.5至20μg的硒和0.5至2.0mg的锌。

医学用途

根据本发明的营养组合物可以有利地用于制备药物，所述药物用于预防或治疗哺乳动物，特别是成年哺乳动物的涉及肌肉衰减的疾病或病症。可替换地，根据本发明的营养组合物可以有利地用于制备药物，所述药物用于预防或治疗选自以下的组中的疾病或病症：骨骼肌减少症（sarcopenia），肌肉损失（muscle loss），肌肉蛋白质合成不足（insufficientmuscle protein synthesis），肌肉退化（muscle degradation），肌肉蛋白分解（muscle proteolysis），肌肉萎缩（muscle atrophy），肌营养不良（muscledystrophy），肌肉分解代谢（muscle catabolism），肌肉消融（肌萎缩，musclewasting），肌肉强度损失，肌肉质量损失，肌肉功能损失，体力损失（lossof physical capacity），身体活动能力损失（身体活动能力受损，loss ofphysical performance），运动性受损（impaired mobility），脆弱（frailty），残废，跌倒风险和跌倒相关骨折风险。

优选地，所述成年哺乳动物是老年人。在这方面，认为在本申请的上下文中，老年人是50岁以上年龄，尤其是55岁以上年龄，更尤其是60岁以上年龄，更尤其是65岁以上年龄的人。这个相当宽的定义考虑了这样的事实，即平均年龄在不同人群、不同大陆上等变化。最发达时间国家已接受65岁实足年龄作为“老年”或老年人的定义（与可以开始接受退休金的年龄相关），但如同许多西化概念一样，这不是很好适应例如非洲的情况。目前，没有联合国（UN）标准数值标准，但UN同意截止值为60+岁以参照西方世界的老年人群。更传统的老年或‘老年’人的非洲定义与50至65岁的实足年龄相关，取决于环境、区域和国家。

根据本发明的营养组合物可以有利地用于预防或治疗在体重保持期间或之后、能量限制期间或之后、卧床休息期间或之后或身体创伤（physical trauma）之后的恢复期间的肌肉衰减（muscle decline），尤其是肌肉质量损失。在一个特别优选实施方式中，本发明的组合物用于对象的治疗，例如患有超重或肥胖症的对象，所述对象遵循重量减轻程序、能量限制程序和/或锻炼程序。所述对象可以是儿童、青少年、成年或老年对象。在一个实施方式中，所述对象是儿童、青少年或成年人。

剂量

所述营养组合物作为每天1至2份（次）（servings）给予，每份（次）包含80至200kcal，优选约125kcal，优选约150kcal。优选地，所述营养组合物作为每天一份（次）给予。使用液体或可匙舀（spoonable）形式的营养组合物，所述份（次）可以包含30至250ml的根据本发明的营养组合物，最优选200ml/份。使用固体形式的营养组合物，如粉末，所述份（次）可以包含20至100g的根据本发明的营养组合物，最优选30至70g/份，最优选约40g/份。

营养组合物

本发明还涉及一种组合物，至少包含合成代谢氨基酸衍生物刺激物结合维生素D，优选的量为800IU或更高/日剂量。

本发明还涉及适用于刺激肌肉蛋白质合成的特定低热量（被定义为不超过100kcal/100m）高蛋白营养组合物，为液体、可匙舀或固体形式。

根据一个实施方式，本发明涉及一种液体或可匙舀营养组合物，包含：

(i)不超过约100kcal能量/100ml的液体或可匙舀营养组合物，

(ii)至少约10g蛋白质类物质/100ml的液体或可匙舀营养组合物，相对于总蛋白质类物质，其包含至少约80重量%的乳清蛋白，

(iii)至少约1g亮氨酸/100ml的液体或可匙舀营养组合物，其中相对于亮氨酸的总量，至少约20重量%为游离形式，

(iv)至少约400IU的维生素D/100ml的液体或可匙舀营养组合物，和

(v)脂肪源和可消化碳水化合物源。

根据另一个实施方式，本发明涉及一种液体营养组合物，包含：

(i)约100kcal能量/100ml的液体营养组合物，

(ii)约12g蛋白质类物质/100ml的液体营养组合物，其包含约10.8g乳清蛋白/100ml的液体营养组合物，

(iii)约2g亮氨酸/100ml的液体营养组合物，其中约1g/100ml的液体营养组合物为游离形式，

(iv)至少约640IU维生素D/100ml的液体营养组合物，

(v)约2g脂肪/100ml的液体营养组合物，包含总计为400mg的DHA和EPA/100ml的液体营养组合物和约8.3g可消化碳水化合物/100ml的液体营养组合物，

(vi)可选地，膳食纤维源，和

(vii)可选地，额外的微量营养素。

根据另一个实施方式，本发明涉及一种液体营养组合物，包含：

(i)约100kcal能量/100ml的液体营养组合物，

(ii)约12g蛋白质类物质/100ml的液体营养组合物，其包含约10.8g乳清蛋白/100ml的液体营养组合物，

(iii)约2g亮氨酸/100ml的液体营养组合物，其中约1g/100ml的液体营养组合物为游离形式，和约1g瓜氨酸/100ml的液体营养组合物，

(iv)至少约640IU维生素D/100ml的液体营养组合物，

(v)约2g脂肪/100ml的液体营养组合物，包括总计为400mg的DHA和EPA/100ml的液体营养组合物以及约8.3g可消化碳水化合物/100ml的液体营养组合物，

(vi)可选地，膳食纤维源，和

(vii)可选地，额外的微量营养素。

优选地，根据本发明的液体或可匙舀营养组合物包含低于90kcal，优选低于80kcal能量/100ml的液体营养组合物。

根据另一个实施方式，本发明涉及一种液体营养组合物，包含：

(i)约75kcal能量/100ml的液体营养组合物，

(ii)约10.5g蛋白质类物质/100ml的液体营养组合物，其包含约10g乳清蛋白/100ml的液体营养组合物，

(iii)约1.5g亮氨酸/100ml的液体营养组合物，其中约0.4g/100ml的液体营养组合物为游离形式，

(iv)至少约400IU维生素D/100ml的液体营养组合物，

(v)约1.5g脂肪/100ml的液体营养组合物和约4.8g可消化碳水化合物/100ml的液体营养组合物，

(vi)可选地，膳食纤维源，和

(vii)可选地，额外的微量营养素。

根据另一个实施方式，本发明涉及一种液体营养组合物，包含：

(i)约75kcal能量/100ml的液体营养组合物，

(ii)约10.5g蛋白质类物质/100ml的液体营养组合物，其包含约10g乳清蛋白/100ml的液体营养组合物，

(iii)约1g亮氨酸/100ml的液体营养组合物、约0.5g瓜氨酸/100ml的液体营养组合物和约2.5g肌酸/100ml的液体营养组合物，

(iv)至少约400IU的维生素D/100ml的液体营养组合物，以及

(v)约1.5g脂肪/100ml的液体营养组合物和约4.8g可消化碳水化合物/100ml的液体营养组合物，

(vi)可选地，膳食纤维源，和

(vii)可选地，额外的微量营养素。

根据另一个实施方式，本发明涉及一种液体营养组合物，包含：

(i)约75kcal能量/100ml的液体营养组合物，

(ii)约10.5g蛋白质类物质/100ml的液体营养组合物，其包含约10g乳清蛋白/100ml的液体营养组合物，

(iii)约1g亮氨酸/100ml的液体营养组合物和约1g瓜氨酸/100ml的液体营养组合物，

(iv)至少约400IU维生素D/100ml的液体营养组合物，

(v)约1.5g脂肪/100ml的液体营养组合物和约4.8g可消化碳水化合物/100ml的液体营养组合物，

(vi)可选地，膳食纤维源，和

(vii)可选地，额外的微量营养素。

根据另一个实施方式，本发明涉及一种液体营养组合物，包含：

(i)约75kcal能量/100ml的液体营养组合物，

(ii)约10.5g蛋白质类物质/100ml的液体营养组合物，其包含约10g乳清蛋白/100ml的液体营养组合物，

(iii)约1g亮氨酸/100ml的液体营养组合物和约2.5g肌酸/100ml的液体营养组合物，

(iv)至少约400IU维生素D/100ml的液体营养组合物，

(v)约1.5g脂肪/100ml的液体营养组合物和约4.8g可消化碳水化合物/100ml的液体营养组合物，

(vi)可选地，膳食纤维源，和

(vii)可选地，额外的微量营养素。

根据另一个实施方式，本发明涉及一种可匙舀营养组合物，包含：

(i)约75kcal能量/100ml可匙舀营养组合物，

(ii)约10.5g蛋白质类物质/100ml可匙舀营养组合物，其包含约10g乳清蛋白/100ml的可匙舀营养组合物，

(iii)约1.5g亮氨酸/100ml的可匙舀营养组合物，其中约0.4g/100ml可匙舀营养组合物为游离形式，

(iv)至少约400IU维生素D/100ml的可匙舀营养组合物，

(v)约1.5g脂肪/100ml的可匙舀营养组合物和约4.8g可消化碳水化合物/100ml的可匙舀营养组合物，

(vi)可选地，膳食纤维源，和

(vii)可选地，额外的微量营养素。

当膳食纤维源加入到上述组合物中时，优选添加总量为约0.83g的膳食纤维，其包含0.63g的GOS、0.07g的FOS/菊糖和0.14g的低粘度果胶。

当额外的微量营养素加入到上述组合物中时，一种或多种微量营养素优选选自以下的组：钠，钾，氯化物，钙，磷，镁，类胡萝卜素，维生素A，维生素E，维生素K，维生素B1，维生素B2，维生素B3，维生素B5，维生素B6，叶酸，维生素B12，生物素（biotin），维生素C，锌，铁，铜，锰，钼，硒，铬，氟化物和碘化物。

所述高的乳清蛋白量可以利用发明方法，如在WO2009/113858中公开的方法实现，将其内容通过引用并入本文中。

根据一个实施方式，所述营养组合物包装为30至300ml份（serving），更优选为200ml份。

根据一个实施方式，本发明涉及一种固体营养组合物，包含：

(i)低于约500kcal能量/100g干重，

(ii)至少约49g蛋白质类物质/100g干重，其中相对于总蛋白质类物质，包含至少约80重量%的乳清蛋白，

(iii)至少约5g亮氨酸/100g干重，其中相对于总亮氨酸，至少约20重量%为游离形式。

(iv)至少约50μg的维生素D/100g干重，和

(v)脂肪源和可消化碳水化合物源。

根据本发明的固体营养组合物每100g包含低于445kcal，优选低于395kcal的能量。

根据一个实施方式，本发明涉及一种固体营养组合物，包含：

(i)约375kcal能量/100g干重，

(ii)约53g蛋白质类物质/100g干重，其包含约50g乳清蛋白/100g干重，

(iii)约7.5g亮氨酸/100g干重，其中约2g/100g为游离形式，

(iv)至少约50μg的维生素D/100g干重，

(v)约7.5g脂肪/100g干重和约24g可消化碳水化合物/100g干重，

(vi)可选地，膳食纤维源，和

(vii)可选地，额外的微量营养素。

根据一个实施方式，本发明涉及一种固体营养组合物，包含：

(i)约375kcal能量/100g干重，

(ii)约51g蛋白质类物质/100g干重，其包含约50g乳清蛋白/100g干重，

(iii)约5.5g亮氨酸/100g干重，约2.5g瓜氨酸/100g干重和约12.5g肌酸/100g干重，

(iv)至少约50μg的维生素D/100g干重，

(v)约7.5g脂肪/100g干重和约24g可消化碳水化合物/100g干重，

(vi)可选地，膳食纤维源，和

(vii)可选地，额外的微量营养素。

根据一个实施方式，本发明涉及一种固体营养组合物，包含：

(i)约375kcal能量/100g干重，

(ii)约51g蛋白质类物质/100g干重，其包含约50g乳清蛋白/100g干重，

(iii)约5.5g亮氨酸/100g干重和约2.5g瓜氨酸/100g干重，

(iv)至少约50μg的维生素D/100g干重，

(v)约7.5g脂肪/100g干重和约24g可消化碳水化合物/100g干重，

(vi)可选地，膳食纤维源，和

(vii)可选地，额外的微量营养素。

根据一个实施方式，本发明涉及一种固体营养组合物，包含：

(i)约375kcal能量/100g干重，

(ii)约51g蛋白质类物质/100g干重，其包含约50g乳清蛋白/100g干重，

(iii)约5.5g亮氨酸/100g干重和约5g瓜氨酸/100g干重，

(iv)至少约50μg的维生素D/100g干重，

(v)约7.5g脂肪/100g干重和约24g可消化碳水化合物/100g干重，

(vi)可选地，膳食纤维源，和

(vii)可选地，额外的微量营养素。

根据一个实施方式，本发明涉及一种固体营养组合物，包含：

(i)约375kcal能量/100g干重，

(ii)约51g蛋白质类物质/100g干重，其包含约50g乳清蛋白/100g干重，

(iii)约5.5g亮氨酸/100g干重和约12.5g肌酸/100g干重，

(iv)至少约50μg的维生素D/100g干重，

(v)约7.5g脂肪/100g干重和约24g可消化碳水化合物/100g干重，

(vi)可选地，膳食纤维源，和

(vii)可选地，额外的微量营养素。

当膳食纤维源加入到上述组合物中时，优选添加总量为4.13g的膳食纤维，其包含约3.1g的GOS、0.34g的FOS/菊糖和0.19g的低粘度果胶。

当额外的微量营养素加入到上述组合物中时，一种或多种微量营养素优选选自下组中：钠，钾，氯化物，钙，磷，镁，类胡萝卜素，维生素A，维生素E，维生素K，维生素B1，维生素B2，维生素B3，维生素B5，维生素B6，叶酸，维生素B12，生物素，维生素C，锌，铁，铜，锰，钼，硒，铬，氟化物和碘化物。

优选地，根据本发明的固体营养组合物形成为粉末，能够被溶解在水溶液中。

优选地，根据本发明的固体营养组合物作为一份（serving）约20至70g，更优选为约40g提供。

所述粉末可以作为小药囊、杯等提供，具有约一份尺寸的尺寸，或者它可以提供在容器中，包含若干份，如10至25份，可选地伴随计量装置如药匙。

关于根据本发明的液体、可匙舀和固体营养组合物，适用以下说明中的一个或多个：

-脂肪的量可以在10和35en%之间，优选在15和30en%之间变化；

-碳水化合物的量可以在10和35en%之间，优选在15和30en%之间变化；

-脂肪和碳水化合物之和的相对量在30和60en%之间的范围；

-蛋白质类物质包含至少约85重量%的乳清蛋白，优选至少约90重量%，并且更优选约95重量%的乳清蛋白。

-蛋白质类物质包含至少45重量%，优选至少47重量%，并且更优选至少约50重量%的必需氨基酸(EAA)。

-蛋白质类物质包含至少约12重量%，优选至少约12.5重量%，更优选至少约13重量%的亮氨酸。

-相对于亮氨酸的总量，蛋白质类物质包含至少约22.5重量%，优选至少约25重量%的游离形式的亮氨酸。

-蛋白质类物质以总亮氨酸:缬氨酸:异亮氨酸为约1.7-3:1:1的比率包含总亮氨酸、总缬氨酸和总异亮氨酸。

-营养组合物进一步包含一种或多种选自短链GOS、长链FOS、菊糖和低粘度果胶的组中的膳食纤维。

-营养组合物进一步包含一种或多种选自下组中的微量营养物：钠、钾、氯化物、钙、磷、镁、类胡萝卜素、维生素A、维生素E、维生素K、维生素B1、维生素B2、维生素B3、维生素B5、维生素B6、叶酸、维生素B12、生物素、维生素C、锌、铁、铜、锰、钼、硒、铬、氟化物和碘化物。

根据本发明的组合物可以通过如在WO2009/113858中公开的方法进行制备，该国际专利通过引用以其整体并入本文中。粉末可以通过本领域技术人员公知的方法如喷雾干燥液体组合物而制备。

实验概述

实施体外研究的实验以评价亮氨酸和维生素D对调节肌肉细胞中的蛋白质合成的细胞内途径的协同或额外作用。

C2C12小鼠肌细胞获自美国典型微生物保藏中心(no.CRL-1772)。肌细胞在生长培养基中在5%CO₂气氛下在37°C培养，该生长培养基由补充有10%胎牛血清和抗生素的达尔伯克改良伊格尔培养基（Dulbecco’smodified Eagle’s medium）(DMEM)构成。肌管C2C12分化通过从汇合细胞取出胎牛血清并添加10μg/ml菊糖、5μg/ml转铁蛋白和2%马血清进行诱导。

汇合的C2C12肌管单独用载体或用不同剂量的1,25(OH)₂D3处理。接着，通过在无血清培养基中孵育剩余两个小时使细胞损失马血清。在这个损失期间，在收获细胞之前向培养基中加入不同量的亮氨酸和菊糖。

使用具有或没有亮氨酸补充的培养基来评估亮氨酸和维生素D对调节蛋白质合成的细胞内途径(Akt,mTOR)和/或对蛋白质合成的直接测量的协同或额外作用。

在用0、1或10nm的1,25(OH)2维生素D₃的72h预处理之后，在C2C12肌管中的蛋白质合成速率(FSR)示于图1。蛋白质合成速率相对于没有用维生素D₃的预处理的变化(%)总结在表1中。

如图1所示，维生素D₃(剂量1或10nM)能够刺激肌肉蛋白质合成，独立于亮氨酸存在（无刺激）。更重要地，当肌管用亮氨酸和维生素D₃二者处理时，肌肉蛋白质合成速率的增加(+26.4%)高于当系统仅用维生素D₃(+14.3%)或单独用亮氨酸(+10.7%)处理时获得的响应的和。

总之，这些结果明显地支持亮氨酸和维生素D₃促进肌肉蛋白质合成的协同作用。

表1：

附图说明

图1：在用0、1或10nm的1,25(OH)2维生素D₃的72h预处理之后在C2C12肌管中的蛋白质合成速率(FSR)。对于每种条件N=5。*:p<0.05相对于没有相同维生素D浓度刺激。$:p<0.05相对于相同刺激的0nM的维生素D。

参考文献

1.Rolland,Y.,et al.,Sarcopenia:its assessment,etiology,pathogenesis,consequences and future perspectives.J Nutr Health Aging,2008.12(7):p.433-50.

2.Dardevet,D.,et al.,Stimulation of in vitro rat muscle protein synthesis byleucine decreases with age.J Nutr,2000.130(11):p.2630-5.

3.Katsanos,C.S.,et al.,Aging is associated with diminished accretion ofmuscle proteins after the ingestion of a small bolus of essential amino acids.Am J Clin Nutr,2005.82(5):p.1065-73.

4.Cuthbertson,D.,et al.,Anabolic signaling deficits underlie amino acidresistance of wasting,aging muscle.Faseb J,2005.19(3):p.422-4.

5.Guillet,C.,et al.,Impaired anabolic response of muscle protein synthesis isassociated with S6K1dysregulation in elderly humans.FASEB J,2004.18(13):p.1586-7.

6.Bouillon,R.,et al.,Vitamin D deficiency.N Engl J Med,2007.357(19):p.1980-1;author reply1981-2.

7.Lips,P.,Vitamin D status and nutrition in Europe and Asia.J SteroidBiochem Mol Biol,2007.103(3-5):p.620-5.

8.Wicherts,I.S.,et al.,Vitamin D status predicts physical performance and itsdecline in older persons.J Clin Endocrinol Metab,2007.92(6):p.2058-65.

9.Zittermann,A.,Molecular Nutrition&Food Research,“The estimatedbenefits of vitamin D for Germany”Published online ahead of print,doi:10.1002/mnfr.200900494.

10.Pfeifer,M.,et al.Review:Vitamin D and muscle function,Osteoporos Int.2002Mar;13(3):187-94.

11.Visser,M.,et al.Low Vitamin D and High Parathyroid Hormone Levels asDeterminants of Loss of Muscle Strength and Muscle Mass(Sarcopenia):TheLongitudinal Aging Study Amsterdam,The Journal of Clinical Endocrinology&Metabolism,2003,8(12):5766–5772.

12.Bendahan D,Mattei JP,Ghattas B,Confort-Gouny S,Le Guern ME,Cozzone PJ.Citrulline/malate promotes aerobic energy production in humanexercising muscle.Br J Sports Med.2002Aug;36(4):282-9.

13.Pérez-Guisado J,Jakeman PM.Citrulline malate enhances athletic anaerobicperformance and relieves muscle soreness.J Strength Cond Res.2010May;24(5):1215-22.

14.WHO,Keep fit for life:meeting the nutritional needs of older persons.2002.

15.Holick,M.F.,Vitamin D deficiency.N Engl J Med,2007.357(3):p.266-81.

16.Lesser,S.,et al.,Nutritional situation of the elderly in Eastern/Baltic and Central/Western Europe-the AgeingNutrition project.Ann Nutr Metab,2008.52Suppl1:p.62-71.

17.Raats,M.L.,L.de Groot,and W.van Staveren,Food for the ageing population.2009,Cambridge,England:Woodhead Publishing Limited.

18.Bartali,B.,et al.,Low nutrient intake is an essential component of frailty in olderpersons.J Gerontol A Biol Sci Med Sci,2006.61(6):p.589-93.

19.Semba,R.D.,et al.,Low serum micronutrient concentrations predict frailty amongolder women living in the community.J Gerontol A Biol Sci Med Sci,2006.61(6):p.594-9.

20.Marzani,B.,et al.,Antioxidant supplementation restores defective leucinestimulation of protein synthesis in skeletal muscle from old rats.J Nutr,2008.138(11):p.2205-11.

21.Seshadri,S.,et al.,Plasma homocysteine as a risk factor for dementia andAlzheimer's disease.N Engl J Med,2002.346(7):p.476-83.

Claims (32)

1.结合维生素D起作用的合成代谢氨基酸衍生物刺激物在制备用于刺激肌肉蛋白质合成的药物或营养组合物的用途，其中所述合成代谢氨基酸衍生物刺激物是L‐亮氨酸，其中L‐亮氨酸包括游离形式的L‐亮氨酸，并且其中维生素D以800IU至10000IU/日剂量的量存在，并且其中所述维生素D是维生素D₂、维生素D₃或者它们的混合物。

2.一种组合物在制备用于刺激肌肉蛋白质合成的药物或营养组合物的用途，所述组合物包含以下作为互助活性成分：

‐0.5至20g的日剂量的合成代谢氨基酸衍生物刺激物，其中所述合成代谢氨基酸衍生物刺激物是L‐亮氨酸，其中L‐亮氨酸包括游离形式的L‐亮氨酸；和

‐维生素D，其量为800IU至10000IU/日剂量，其中所述维生素D是维生素D₂、维生素D₃或者它们的混合物。

3.根据前述权利要求中任一项的用途，其中，所述合成代谢氨基酸衍生物刺激物是L‐亮氨酸，其中相对于亮氨酸的总量，总L‐亮氨酸包含至少20％的游离形式的L‐亮氨酸。

4.根据权利要求1或2所述的用途，其中，所述合成代谢氨基酸衍生物刺激物以0.5至10g的日剂量提供。

5.根据权利要3所述的用途，其中，所述合成代谢氨基酸衍生物刺激物以0.5至10g的日剂量提供。

6.根据权利要求1或2所述的用途，其中，L‐亮氨酸以1至10g的日剂量提供。

7.根据权利要求3所述的用途，其中，L‐亮氨酸以1至10g的日剂量提供。

8.根据权利要求4所述的用途，其中，L‐亮氨酸以1至10g的日剂量提供。

9.根据权利要求5所述的用途，其中，L‐亮氨酸以1至10g的日剂量提供。

10.根据权利要求1或2所述的用途，其中，维生素D的量为1,000IU或更高/日剂量，但不是高到以至于它在给予对象中引起毒性。

11.根据权利要求3所述的用途，其中，维生素D的量为1,000IU或更高/日剂量，但不是高到以至于它在给予对象中引起毒性。

12.根据权利要求1或2所述的用途，其中，所述组合物进一步包含蛋白质类物质源。

13.根据权利要求3所述的用途，其中，所述组合物进一步包含蛋白质类物质源。

14.根据权利要求12所述的用途，其中，所述组合物进一步包含乳清。

15.根据权利要求13所述的用途，其中，所述组合物进一步包含乳清。

16.根据权利要求1或2所述的用途，其中，所述组合物包含亮氨酸、缬氨酸和异亮氨酸，其中亮氨酸:缬氨酸:异亮氨酸的比率为1.7‐3:1:1。

17.根据权利要求3所述的用途，其中，所述组合物包含亮氨酸、缬氨酸和异亮氨酸，其中亮氨酸:缬氨酸:异亮氨酸的比率为1.7‐3:1:1。

18.根据权利要求1或2所述的用途，其中，所述组合物是营养组合物，进一步包含脂肪源、可消化碳水化合物源、膳食纤维源和微量营养素源中的至少一种。

19.根据权利要求3所述的用途，其中，所述组合物是营养组合物，进一步包含脂肪源、可消化碳水化合物源、膳食纤维源和微量营养素源中的至少一种。

20.根据权利要求1或2所述的用途，其中，所述组合物作为液体、粉末、可匙舀或固体组合物提供。

21.根据权利要求3所述的用途，其中，所述组合物作为液体、粉末、可匙舀或固体组合物提供。

22.根据权利要求1或2所述的用途，其中，所述组合物是低热量组合物，其能量不超过100kcal/ml。

23.根据权利要求3所述的用途，其中，所述组合物是低热量组合物，其能量不超过100kcal/ml。

24.根据权利要求1或2所述的用途，其中，所述成年哺乳动物是老年人。

25.根据权利要求3所述的用途，其中，所述成年哺乳动物是老年人。

26.根据权利要求1或2所述的用途，用于在体重保持期间或之后、在能量限制期间或之后、在卧床休息期间或之后、或者在身体创伤后的恢复期间刺激对象的肌肉蛋白质合成。

27.根据权利要求3所述的用途，用于在体重保持期间或之后、在能量限制期间或之后、在卧床休息期间或之后、或者在身体创伤后的恢复期间刺激对象的肌肉蛋白质合成。

28.根据权利要求26所述的用途，其中，所述对象患有超重或肥胖症，所述对象遵循体重减轻程序、能量限制程序和/或锻炼程序。

29.根据权利要求27所述的用途，其中，所述对象患有超重或肥胖症，所述对象遵循体重减轻程序、能量限制程序和/或锻炼程序。

30.800IU至10000IU/日剂量的量的维生素D在制备用于改善游离形式的L‐亮氨酸在预防和/或治疗成年哺乳动物的肌肉质量、肌肉强度和肌肉功能、或其任意组合中的任一种的损失中的影响的药物或营养组合物的用途，其中L‐亮氨酸包括游离形式的L‐亮氨酸。

31.根据权利要求30所述的用途，其中所述维生素D是维生素D₂、维生素D₃或者它们的混合物。

32.根据权利要求30或31所述的用途，其中所述预防和/或治疗肌肉质量、肌肉强度和肌肉功能、或其任意组合中的任一种的损失是刺激肌肉蛋白质合成。