CN103053626B - 一种天然柠檬消毒剂及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种天然柠檬消毒剂及其制备方法，把新鲜柠檬加入水－甘油中提取，并用热带假丝酵母-粪链球菌发酵，灭菌后，挤压过滤，滤液具有显著的杀菌灭病毒的消毒作用。以控制酸度和维生素C含量为提取液的质量控制指标。检验合格后，灌装，室温保存。
Description
技术领域
本发明涉及柠檬消毒剂及其制备方法，具体说，是一种从柠檬中提取出抗病毒杀菌的消毒剂及其制备方法。
背景技术
现已有关于柑桔类果物(皮)的提取物含有大量功能性物质，如黄酮类、类柠檬苦素、维生素类以及多糖、果胶、香精油等。有资料报道柑桔类果物(皮)具有杀菌、消毒、抗氧化等作用。但是，有关将鲜柠檬用水－甘油提取，并经进一步发酵制备成抗病毒杀菌的消毒剂，还未见文献报道。由柠檬提取物制备的消毒剂，不含有毒、有害物质。消毒剂可以广泛应用于医院废水废物处理，屠宰场的杀菌、消毒、清除病毒。也可以应用于养殖场的消毒以及养殖水以及畜牧业畜禽饮用水的消毒，还可以应用于水果、蔬菜、水产品的保鲜等。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是，提供一种制备高效无毒的应用广泛的天然柠檬消毒剂及其制备方法。
为了解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是：一种天然柠檬消毒剂的制备方法，新鲜柠檬加入水－甘油提取液，并用热带假丝酵母-粪链球菌发酵，挤压过滤，分离出的提取溶液经检验酸度和维生素C含量合格后，灌装，室温保存。
具体地说，包括以下步骤：
（1）将新鲜柠檬洗净、去残、绞碎，按质量比加入10-15倍的水－甘油溶液，按质量比接入1-1.5倍的热带假丝酵母-粪链球菌的混合菌液，28-32℃，100-150r/min,发酵20-24h；
（2）无菌条件下，抽样检查，取10mL柠檬发酵液稀释100倍在660nm波长下测定吸光值OD，OD值达到0.5-0.7后，结束发酵过程，加热至80-85℃保持10-15min杀菌；
（3）将柠檬发酵液挤压过滤，弃滤渣，收集滤出液，检验酸度和维生素C含量合格后，灌封分装，即制备成天然柠檬消毒剂。
所述热带假丝酵母-粪链球菌的混合菌液的制备方法包括以下步骤：
（1）按微生物发酵工程工艺，先将斜面保存热带假丝酵母菌种用马铃薯培养基（PDA）活化，经三级逐级扩大培养，制备成热带假丝酵母的一级种子菌液；同理，粪链球菌用牛肉膏蛋白胨培养基活化，经过三级逐级扩大培养，制备成粪链球菌的一级种子菌液；
（2）将步骤（1）得到的热带假丝酵母和粪链球菌的一级种子菌液用玉米粉-豆粕-马铃薯-蔗糖培养基进行二级、三级扩大培养；
所述二级扩大培养条件：将热带假丝酵母和粪链球菌的一级种子液等体积混合，按接种量质量比1:10两种菌的一级种子混合菌液，温度28-30℃，转速100-200r/min,压力0.05MPa，发酵20-24h,抽取10mL发酵液，稀释100倍，检查波长660nm吸光值，吸光值达到0.6-0.8后，再转入三级扩大培养阶段；
所述三级扩大培养条件：按接种量质量比1:10二级扩大培养液，温度28-30℃，转速200-300r/min,压力0.05MPa，发酵20-24h,抽取10mL发酵液，稀释100倍，检查波长660nm吸光值，达到0.6-0.8后，停止培养,有效菌菌落数2*109cfu.mL-1以上。
所述玉米粉-豆粕-马铃薯-蔗糖培养基组成按质量份数为：玉米粉20-30份,豆粕2份，马铃薯10-20份，蔗糖2份，氯化钠0.5份,磷酸氢二钾0.5份,硝酸钾10份，硫酸镁0.5份,硫酸亚铁0.002份,自来水1000份，用过饱和氢氧化钙调节pH值7.4-7.6。
所述经检验酸度和维生素C含量合格是指：酸度的pH值2.5-3.5；维生素C含量质量浓度为150～200mg.L-1。
所述水－甘油溶液为按质量比水：甘油=1：1。
上述方法制备的天然柠檬消毒剂。
本发明的有益效果是：高效无毒,能广泛应用的天然消毒剂,该产品富含柠檬酸、柠檬苦味素、维生素C、维生素P及其衍生物，以及多糖、维生素E和果胶等其它微量有机物。可以广泛应用于医院废水处理，屠宰场的消毒，养殖场的消毒，养殖水以及畜牧业畜禽饮用水的消毒，还可以应用于水果、蔬菜、水产品的保鲜等。
具体实施方式
本发明将新鲜柠檬（国产、进口皆可）洗净、去残、绞碎，加入10-15倍的质量比50%水－甘油溶液，接入1-1.5倍质量比热带假丝酵母-粪链球菌（1:1）混合菌液，28-32℃，100-150r/min,发酵20-24h；在无菌条件下抽取10mL发酵液，稀释100倍测定波长660nm的吸光值，吸光值达到0.5-0.7后，结束发酵过程，加热至80-85℃保持10-15min，杀菌。将柠檬发酵液用双层纱布挤压过滤，弃滤渣，收集滤出液，灌封分装，即制备成柠檬消毒剂成品。
热带假丝酵母-粪链球菌液的制备：按微生物发酵工程常规工艺，先将斜面保存热带假丝酵母菌种用马铃薯培养基活化，经试管（约10mL）-三角瓶（约100mL）-大三角瓶（约1000mL）逐级扩大培养，制备成热带假丝酵母的一级种子菌液；同理粪链球菌用牛肉膏蛋白胨培养基活化，经过试管-三角瓶-大三角瓶逐级扩大培养，制备成粪链球菌的一级种子菌液。
将热带假丝酵母和粪链球菌的一级种子菌液用玉米粉-豆粕-马铃薯-蔗糖培养液进行二级、三级扩大培养。
二级扩大培养条件（30L发酵罐）：将热带假丝酵母和粪链球菌的一级种子液等体积混合（1:1），接种量质量比1:10两种菌的一级种子混合菌液，温度28-30℃，转速100-200r/min,压力0.05Mpa，发酵20-24h,抽取10mL发酵液，稀释100倍，检查波长660nm吸光值，吸光值达到0.6-0.8后，再转入三级扩大培养阶段。
三级扩大培养条件（300L发酵罐）：接种量质量比1:10二级扩大培养液，温度28-30℃，转速200-300r/min,压力0.05Mpa，发酵20-24h,抽取10mL发酵液，稀释100倍，检查波长660nm吸光值，达到0.6-0.8后，停止培养。有效菌菌落数2*109cfu.mL-1以上。
所述牛肉膏蛋白胨培养基配方：牛肉膏5g,蛋白胨10g，氯化钠5g,蒸馏水1000mL，pH值7.2-7.4.
所述马铃薯培养基（PDA）：马铃薯200g,去皮、去残，切成碎片或丝，加水1000mL，小火煮20-30min,过滤，滤液补足1000mL，加入20g蔗糖，自然pH值。
所述玉米粉-豆粕-马铃薯-蔗糖培养基：玉米粉20-30g,豆粕2g，马铃薯10-20g（去皮、去残），蔗糖2g，氯化钠0.5g,磷酸氢二钾0.5g,硝酸钾10g，硫酸镁0.5g,硫酸亚铁0.002g,自来水1000mL,用过饱和氢氧化钙调节pH值7.4-7.6.
该柠檬提取液富含柠檬酸、柠檬苦味素、维生素C、维生素P及其衍生物，以及维生素E和果胶等其它微量有机物。
采用本发明的柠檬消毒剂，经试验确定，本发明的柠檬消毒剂抑制或杀灭细菌、真菌和病毒的剂量如表1～4所示：
表1抑制细菌
表2杀灭细菌
表3杀灭病毒
表4抑制真菌
下面结合具体实施方式对本发明作进一步详细说明：
所述粪链球菌(Streptococcus feaculis)购置于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,CGMCC NO：1.101；热带假丝酵母（Candida tropicalis）购置于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,CGMCC NO：2.1773。
所述热带假丝酵母-粪链球菌菌液的制备：
（1）按微生物发酵工程工艺，先将斜面保存热带假丝酵母菌种用马铃薯培养基（PDA）活化，经三级逐级扩大培养，制备成热带假丝酵母的一级种子菌液；同理，粪链球菌用牛肉膏蛋白胨培养基活化，经过三级逐级扩大培养，制备成粪链球菌的一级种子菌液；
（2）将热带假丝酵母和粪链球菌的一级种子菌液1:1混合，用玉米粉-豆粕-马铃薯-蔗糖培养基进行二级、三级扩大培养；
所述二级扩大培养条件：将热带假丝酵母和粪链球菌的一级种子液等体积混合，按接种量质量比1:10两种菌的一级种子混合菌液，温度30℃，转速100-200r/min,压力0.05MPa，发酵20-24h,检查吸光值，达到0.6-0.8后，再转入三级扩大培养阶段；
所述三级扩大培养条件：按接种量质量比1:10二级扩大培养液，温度30℃，转速200-300r/min,压力0.05MPa，发酵20-24h,检查吸光值，达到0.6-0.8后，停止培养,有效菌菌落数2*109cfu.mL-1以上。
所述玉米粉-豆粕-马铃薯-蔗糖培养基组成按质量份数为：玉米粉20-30份,豆粕2份，马铃薯10-20份，蔗糖2份，氯化钠0.5份,磷酸氢二钾0.5份,硝酸钾10份，硫酸镁0.5份,硫酸亚铁0.002份,自来水1000份，用过饱和氢氧化钙调节pH值7.4-7.6。
实施例1：
鲜柠檬1kg，洗净，去残、去蒂，充分捣碎后用10kg的质量比50％甘油－水浸泡，接入1kg的热带假丝酵母-粪链球菌菌液(有效活菌数2*109cfu.mL-1，上面制备的），30℃发酵24h；在无菌条件下取样检查，抽取10mL发酵液，稀释100倍，在波长660nm下测定吸光值（OD），OD值达到0.5-0.7后，结束发酵过程，加热至80℃保持10min杀菌。用双层纱布挤压过滤，滤液经检验，酸度pH值2.5-3.5，维生素C含量150-200mg.L-1，合格后，灌装，室温保存。
实施例2：
鲜柠檬10kg，洗净，去残、去蒂，充分捣碎或绞碎后用150kg的质量比50％甘油－水浸泡，接入15kg的热带假丝酵母-粪链球菌混合菌液(有效活菌数2*109cfu.mL-1)，330℃发酵20h；在无菌条件下取样检查，抽取10mL发酵液，稀释100倍在波长660nm下测定吸光值（OD），OD值达到0.5-0.7后，结束发酵过程，加热至85℃保持15min杀菌。用双层纱布挤压过滤，滤液经检验，酸度pH值2.5-3.5，维生素C含量达150-200mg.L-1后，灌装，室温保存。
上述酸度的pH值采用精密试纸法；维生素C含量采用GB/T6195-1986的2，6一二氯靛酚滴定法。
本发明制备的柠檬消毒剂的特性和特点：
(1)在细胞表面残留形成保护膜，对病毒、病菌的生长明显抑制。抑制真菌、细菌和病毒。消除自由基、抗氧化。
(2)在适当剂量下可以在动物消化道内抑制致病菌，促进益生菌生长，促进营养物的吸收，增加动物抗病、防病的能力。
(3)柠檬消毒剂呈酸性，pH值在2.5-3.5之间，但在酸性和碱性条件下都能发挥消毒效果。无腐蚀性。有苦涩味，溶液呈亮柠檬色。可以与阴离子和非离子药物同时混合使用，但最好不与抗生素药物一起使用。
(4)柠檬消毒剂对人、畜和植物无任何毒副作用。经Ames实验，沙门氏菌突变测试等，证明柠檬消毒剂对动、植物细胞核和DNA没有损伤作用，无致癌、致突变作用。
(5)柠檬消毒剂可以无限量的用于医院废水的消毒、除臭，可以无限量的用于禽畜养殖场、屠宰场的消毒、除臭。可以用于饮用水和养殖水的消毒。
(6)可以用于食物的保鲜、消毒，不会污染或改变食物的风味和气味，能延长保质期。可以用于空气的喷雾消毒，清新空气并散发愉快的柠檬香味。
以上所述的实施例仅用于说明本发明的技术思想及特点，其目的在于使本领域内的技术人员能够理解本发明的内容并据以实施，不能仅以实施例来限定本发明的专利范围。
Claims (5)
1.一种天然柠檬消毒剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）将新鲜柠檬洗净、去残、绞碎，按质量比加入10-15倍的水－甘油溶液，按质量比接入1-1.5倍的热带假丝酵母-粪链球菌的混合菌液，28-32℃，100-150r/min,发酵20-24h；
（2）无菌条件下，抽样检查，取10mL柠檬发酵液稀释100倍在660nm波长下测定吸光值OD，OD值达到0.5-0.7后，结束发酵过程，加热至80-85℃保持10-15min杀菌；
（3）将柠檬发酵液挤压过滤，弃滤渣，收集滤出液，检验酸度和维生素C含量合格后，灌封分装，即制备成天然柠檬消毒剂；
所述热带假丝酵母-粪链球菌的混合菌液的制备方法包括以下步骤：
（1）按微生物发酵工程工艺，先将斜面保存热带假丝酵母菌种用马铃薯培养基PDA活化，经三级逐级扩大培养，制备成热带假丝酵母的一级种子菌液；同理，粪链球菌用牛肉膏蛋白胨培养基活化，经过三级逐级扩大培养，制备成粪链球菌的一级种子菌液；
（2）将步骤（1）得到的热带假丝酵母和粪链球菌的一级种子菌液用玉米粉-豆粕-马铃薯-蔗糖培养基进行二级、三级扩大培养；
所述二级扩大培养条件：将热带假丝酵母和粪链球菌的一级种子液等体积混合，按接种量质量比1:10两种菌的一级种子混合菌液，温度28-30℃，转速100-200r/min,压力0.05MPa，发酵20-24h,抽取10mL发酵液，稀释100倍，检查波长660nm吸光值，吸光值达到0.6-0.8后，再转入三级扩大培养阶段；
所述三级扩大培养条件：按接种量质量比1:10二级扩大培养液，温度28-30℃，转速200-300r/min,压力0.05MPa，发酵20-24h,抽取10mL发酵液，稀释100倍，检查波长660nm吸光值，达到0.6-0.8后，停止培养,有效菌菌落数2*109cfu.mL-1以上。
2.根据权利要求1所述的天然柠檬消毒剂的制备方法，其特征在于，所述玉米粉-豆粕-马铃薯-蔗糖培养基组成按质量份数为：玉米粉20-30份,豆粕2份，马铃薯10-20份，蔗糖2份，氯化钠0.5份,磷酸氢二钾0.5份,硝酸钾10份，硫酸镁0.5份,硫酸亚铁0.002份,自来水1000份，用过饱和氢氧化钙调节pH值7.4-7.6。
3.根据权利要求1所述的天然柠檬消毒剂的制备方法，其特征在于，所述经检验酸度和维生素C含量合格是指：酸度的pH值2.5-3.5；维生素C含量质量浓度为150～200mg.L-1。
4.根据权利要求1所述的天然柠檬消毒剂的制备方法，其特征在于，所述水－甘油溶液为按质量比水：甘油=1：1。
5.一种权利要求1-4任一项方法制备的天然柠檬消毒剂。
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