CN103045764A - 一种鲤疱疹病毒2型lamp检测试剂盒及检测方法 - Google Patents
一种鲤疱疹病毒2型lamp检测试剂盒及检测方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN103045764A CN103045764A CN2013100194036A CN201310019403A CN103045764A CN 103045764 A CN103045764 A CN 103045764A CN 2013100194036 A CN2013100194036 A CN 2013100194036A CN 201310019403 A CN201310019403 A CN 201310019403A CN 103045764 A CN103045764 A CN 103045764A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- virus type
- herpes virus
- lamp
- reaction
- cyhv
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Images
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明公开了一种鲤疱疹病毒2型LAMP检测试剂盒及检测方法,一种鲤疱疹病毒2型LAMP检测试剂盒,包括以下成分:10×ThermoPolReaction缓冲液;BstDNA聚合酶;dNTPs;外引物F3和B3、内引物FIP和BIP、Betaine,MgCl2,1000×SYBRGreenI。本发明具有简便、快速、高特异性和灵敏性的特点,仅需一个水浴锅或金属浴即可在2小时内准确检测出样品中的CyHV-2,能检测CyHV-2感染的病鱼组织,能检测CyHV-2感染的细胞,非常适用于CyHV-2的现场快速检测。
Description
技术领域
本发明属于鱼类病毒检测技术领域,具体涉及一种鲤疱疹病毒2型LAMP检测试剂盒,还涉及一种利用鲤疱疹病毒2型LAMP检测试剂盒检测鲤疱疹病毒2型的方法。
背景技术
在我国的鲫鱼主养区,2009年零星发生鲫鱼病毒性出血病,发病情况出现逐年上升的趋势,死亡率高,目前尚未有有效的控制措施,初步研究表明其病原为鲤疱疹病毒Ⅱ型(Cyprinid herpesvirus II,CyHV-2),初步命名该病为鲫造血器官坏死症(Crucian CarpHematopoietic Necrosis)。2011年在匈牙利养殖的银鲫也发现了CyHV-2感染的病例。
CyHV-2在几种鱼类细胞系中的增殖均不能超过4代,需要尽快建立快速、敏感、特异、适宜现场诊断的方法,为疾病的诊断与防控提供技术手段,也为鲫鱼养殖业的健康发展提供技术保障。
环介导等温扩增(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术是Notomi等于2000年报道的一种新型等温核酸扩增方法(国际专利公开号WO00/28082),针对靶基因的6个位点设计4条LAMP引物,利用一种具有链置换活性的DNA聚合酶(Bst DNA聚合酶),在恒温条件下快速、高效、高特异、高灵敏地扩增靶序列,适合于现场和实验条件较简单的实验室进行快捷检测。引入一对环状引物的改进方法,进一步缩短了反应时间。
发明内容
本发明的一个目的是在于提供了一种鲤疱疹病毒2型LAMP检测试剂盒,根据GenBank公布的CyHV-2毒株的解旋酶基因编码区序列(KC245087),应用PrimerExplorer V4(http://primerexplorer.jp/elamp4.0.0/index.html)在线软件设计特异性引物,利用LAMP技术扩增靶基因的特定区域,从分子水平对鲤疱疹病毒2型进行快速检测,具有简便、快速、高特异性和灵敏性的特点。
本发明的另一个目的是在于提供了一种利用鲤疱疹病毒2型LAMP检测试剂盒检测鲤疱疹病毒2型的方法,本方法仅需一个水浴锅或金属浴即可在2小时内准确检测出样品中的CyHV-2,能检测CyHV-2感染的病鱼组织,能检测CyHV-2感染的细胞(例如Koi-Fin细胞),非常适用于CyHV-2的现场快速检测。
为了实现上述目的,本发明采用以下技术方案:
一种鲤疱疹病毒2型LAMP检测试剂盒,包括以下成分:
该试剂盒包括以下成分:10×ThermoPol Reaction Buffer;Bst DNA聚合酶(NEB);dNTPs;外引物F3和B3、内引物FIP和BIP、Betaine(Sigma),MgCl2,1000×SYBR Green I(Invitrogen)。
F3:5’-TTGGATCTGAACGCTTCGG-3’;
B3:5’-CGTTGGTCTGTATGGGAGC-3’;
FIP:5’-GCGATGTAAGCCCTGTGAGACTTTTTACGAGACGTGGTTCCTAGC-3’;
BIP:5’-AACGCACGAGTGCGAGTCTCTTTTGCTGTGGATCGTCCATCC-3’。
一种利用鲤疱疹病毒2型LAMP检测试剂盒检测鲤疱疹病毒2型的方法,其步骤是:
1、病毒DNA的获取:
2、LAMP扩增:
采用25μl反应体系,包括:内引物FIP和BIP各0.8μM,外引物F3和B3各0.1μM,dNTPs1mM,Betaine0.5M,MgCl22-10mM,Bst DNA聚合酶8U,模板DNA5μl,10×ThermoPol Reaction Buffer2.5μl,去离子水补足余量。选择55-65℃的温度范围和30-120分钟的时间范围进行LAMP反应之后,80℃灭活2分钟。
3、检测结果判定,可用下述三种方法之一进行结果的判定:
1)发生扩增反应时,从dNTPs析出的焦磷酸根离子和反应液中的镁离子形成白色焦磷酸镁沉淀,通过肉眼判断:检测管出现明显浑浊为阳性,未见浑浊为阴性。
2)每25μl体系的反应管加1000×SYBR Green I(Invitrogen)1-2μl,1-5min观察结果,反应液变绿为阳性,保持橙色为阴性。
3)取扩增产物,用2%(w/v)的琼脂糖凝胶电泳后,置于凝胶成像系统中成像,电泳图片显示LAMP特征性梯状条带,则结果为阳性;如无任何条带,则结果为阴性。
一种利用鲤疱疹病毒2型LAMP检测试剂盒检测鲤疱疹病毒2型的方法(最佳条件),其步骤是:
1、病毒DNA的获取:
2、LAMP扩增:
采用25μl反应体系,包括:内引物FIP和BIP各0.8μM,外引物F3和B3各0.1μM,dNTPs1mM,Betaine0.5M,MgCl28mM,Bst DNA聚合酶8U,模板DNA5μl,10×ThermoPolReaction Buffer2.5μl,去离子水补足余量。反应管于64℃温育60分钟进行LAMP反应之后,80℃灭活2分钟。
3、检测结果判定,可用下述三种方法之一进行结果的判定:
1)发生扩增反应时,从dNTPs析出的焦磷酸根离子和反应液中的镁离子形成白色焦磷酸镁沉淀,通过肉眼判断:检测管出现明显浑浊为阳性,未见浑浊为阴性。
2)每25μl体系的反应管加1000×SYBR Green I(Invitrogen)1-2μl,1-5min观察结果,反应液变绿为阳性,保持橙色为阴性。
3)取扩增产物,用2%(w/v,以下相同)的琼脂糖凝胶电泳后,置于凝胶成像系统中成像,电泳图片显示LAMP特征性梯状条带,则结果为阳性;如无任何条带,则结果为阴性。
与现有技术相比,本发明具有以下优点:
1、特异性好,能有效检测出鲤疱疹病毒2型;
2、快速高效,检测时间约1小时,非常适用于鲤疱疹病毒2型的现场快速检测;
3、不需要特殊试剂与设备,检测成本低;
4、鉴定简单,通过从dNTPs析出的焦磷酸根离子和反应液中的镁离子形成白色焦磷酸镁沉淀,经肉眼就可判断结果,通过加入1000×SYBR Green I,可提高结果的灵敏度。
附图说明
图1为一种鲤疱疹病毒2型LAMP试剂盒检测结果的特异性的示意图。
从左至右的泳道依次为空白对照(水)、鳗疱疹病毒、GSIV、KHV、鲤疱疹病毒2型、DL2,000Marker。
图2为一种鲤疱疹病毒2型LAMP试剂盒检测结果的灵敏度的示意图。
从左至右的泳道依次为100fg CyHV-2、1pg CyHV-2、10pg CyHV-2、100pg CyHV-2、1ngCyHV-2、DL2000DNA Marker。
具体实施方式
下列实例进一步说明本发明,但不应该当做对本发明的限制。若无特别说明,本发明所用试剂均为上海生工生物工程公司生产。
实施例1:
一种鲤疱疹病毒2型LAMP检测试剂盒,包括以下成分:
该试剂盒它包括以下成分:10×ThermoPol Reaction Buffer;Bst DNA聚合酶(NEB);dNTPs;外引物F3和B3、内引物FIP和BIP、Betaine(Sigma),MgCl2,1000×SYBR GreenI(Invitrogen)。
F3:5’-TTGGATCTGAACGCTTCGG-3’;
B3:5’-CGTTGGTCTGTATGGGAGC-3’;
FIP:5’-GCGATGTAAGCCCTGTGAGACTTTTTACGAGACGTGGTTCCTAGC-3’;
BIP:5’-AACGCACGAGTGCGAGTCTCTTTTGCTGTGGATCGTCCATCC-3’。
实施例2:
鲤疱疹病毒2型LAMP检测试剂盒不同浓度的Mg2+的优化
一、取待检样品提取病毒DNA:
培养锦鲤鳍条细胞系(Koi-Fin)至汇合单层,吸出培养液,以感染复数为0.1的剂量,接种1mL经4000r/min离心5min除去细胞碎片的鲤疱疹病毒2型组织毒材料(Doszpoly,A.,M.Benko,Gy.Csaba,A.Dan,M.Lang,B.Harrach.2011.Introduction of the family Alloherpesviridae:the first molecular detection of herpesviruses of cyprinid fish in Hungary.Magyar AllatorvosokLapja133(3):174-181.),添加10μL的Polybrene(终浓度10μg/ml),置于26℃培养箱中吸附1h,使病毒吸附细胞,吸附过程中每20min轻轻晃动培养瓶一次,使病毒液与细胞单层充分均匀接触,吸附1h后,吸弃病毒液,加入5mL2%胎牛血清(V/V)的培养液,置26℃培养,直至细胞出现明显的致细胞病变效应,收集细胞病变材料,于-80℃至室温(20-25℃)反复冻融3次,5000r/min离心30min,取上清250μl,用Viral DNA Kit试剂盒按照说明书提取DNA,最后溶于50μl灭菌水,-20℃保存备用。
二、LAMP扩增的反应体系:
采用25μl反应体系,包括:内引物FIP和BIP各0.8μM,外引物F3和B3各0.1μM,dNTPs1mM,Betaine0.5M,MgCl2,Bst DNA聚合酶8U,模板DNA5μl,10×ThermoPol ReactionBuffer2.5μl,去离子水补足余量。
其中Mg2+的浓度分别为2、4、6、8和10mM。
三、LAMP扩增的反应条件:
反应管于64℃温育60分钟后,80℃灭活2分钟。
四、检测结果判定:
取8μl扩增产物,用2%的琼脂糖凝胶电泳后,置于凝胶成像系统中成像,电泳图片显示Mg2+的浓度为8mM时结果最好。
实施例3:
鲤疱疹病毒2型LAMP检测方法反应温度的优化:
一、取待检样品提取病毒DNA:
待鲤疱疹病毒2型感染的Koi-Fin细胞出现90%病变后收获(制备方法同实施例2),于-80℃至室温反复冻融3次,5000r/min离心30min,取上清250μl,用Viral DNA Kit试剂盒按照说明书提取DNA,最后溶于50μl灭菌水,-20℃保存备用。
二、LAMP扩增的反应体系:
采用25μl反应体系,包括:内引物FIP和BIP各0.8μM,外引物F3和B3各0.1μM,dNTPs1mM,Betaine0.5M,MgCl28mM,Bst DNA聚合酶8U,模板DNA5μl,10×ThermoPolReaction Buffer2.5μl,去离子水补足余量。
三、LAMP扩增的反应条件:
反应管分别置于60、61、62、63、64、65℃温育60分钟后,80℃灭活2分钟。
四、检测结果判定:
取8μl扩增产物,用2%的琼脂糖凝胶电泳后,置于凝胶成像系统中成像,电泳图片显示64℃时结果最好。
实施例4:
鲤疱疹病毒2型LAMP检测方法的特异性
一、取待检样品提取病毒DNA:
GSIV(中国典型培养物保藏中心CCTCC NO:V201134)感染的EPC细胞、鳗疱疹病毒(F Rijsewijk,S Pritz-Verschuren,S Kerkhoff,A Botter,M Willemsen,T Nieuwstadt,O Haenen.2005.Development of a polymerase chain reaction for the detection of Anguillid herpesvirus DNAin eels based on the herpesvirus DNA polymerase gene.Journal of Virological Methods124:87–94.感染的EPC细胞)、KHV(朱霞,李新伟,王好,等.一株锦鲤疱疹病毒的分离与鉴定[J].中国预防兽医学报,2011,33(5):340-343.感染的Koi-Fin细胞)、鲤疱疹病毒2型(Doszpoly,A.,M.Benko,Gy.Csaba,A.Dan,M.Lang,B.Harrach.2011.Introduction of the family Alloherpesviridae:the first molecular detection of herpesviruses of cyprinid fish in Hungary.Magyar AllatorvosokLapja133(3):174-181.)感染的Koi-Fin细胞出现90%病变后收获(上述病毒的制备方法同鲤疱疹病毒2型),于-80℃至室温反复冻融3次,5000r/min离心30min,取上清250μl,用ViralDNA Kit试剂盒按照说明书提取DNA,最后溶于50μl灭菌水,-20℃保存备用。
二、LAMP扩增的反应体系:
采用25μl反应体系,包括:内引物FIP和BIP各0.8μM,外引物F3和B3各0.1μM,dNTPs1mM,Betaine0.5M,MgCl28mM,Bst DNA聚合酶8U,模板DNA5μl,10×ThermoPolReaction Buffer2.5μl。
三、LAMP扩增的反应条件:
反应管于64℃温育60分钟后,80℃灭活2分钟。
四、检测结果判定:
取8μl扩增产物,用2%的琼脂糖凝胶电泳后,置于凝胶成像系统中成像,电泳图片显示针对鲤疱疹病毒2型设计的特异LAMP引物组能保证对鲤疱疹病毒2型的特异性检测,只检测出鲤疱疹病毒2型,而鳗疱疹病毒、GSIV、KHV和空白对照均无法检出(图1)。
实施例5
鲤疱疹病毒2型LAMP检测方法的灵敏度:
一、取待检样品提取病毒DNA:
待鲤疱疹病毒2型感染的Koi-Fin细胞出现90%病变后收获(制备方法同实施例2),于-80℃至室温反复冻融3次,5000r/min离心30min,取上清250μl,用Viral DNA Kit试剂盒按照说明书提取DNA,最后溶于50μl灭菌水,-20℃保存备用。临用前测定样品浓度,用灭菌水调整并制备10倍稀释的系列模板:0.2ng/μl至20fg/μl。
二、LAMP扩增的反应体系:
采用25μl反应体系,包括:内引物FIP和BIP各0.8μM,外引物F3和B3各0.1μM,dNTPs1mM,Betaine0.5M,MgCl28mM,Bst DNA聚合酶8U,模板DNA5μl,10×ThermoPolReaction Buffer2.5μl,去离子水补足余量。
三、LAMP扩增的反应条件:
反应管置于64℃温育60分钟后,80℃灭活2分钟。
四、检测结果判定:
取8μl扩增产物,用2%的琼脂糖凝胶电泳后,置于凝胶成像系统中成像,电泳图片显示能够检测到10pg的CyHV-2(图2)。
SEQUENCE LISTING
<110> 中国水产科学研究院长江水产研究所
<120> 一种鲤疱疹病毒2型LAMP检测试剂盒及检测方法
<130> 一种鲤疱疹病毒2型LAMP检测试剂盒及检测方法
<160> 4
<170> PatentIn version 3.1
<210> 1
<211> 19
<212> DNA
<213> 鲤疱疹病毒2型
<400> 1
TTGGATCTGA ACGCTTCGG 19
<210> 2
<211> 19
<212> DNA
<213> 鲤疱疹病毒2型
<400> 2
CGTTGGTCTG TATGGGAGC 19
<210> 3
<211> 45
<212> DNA
<213> 鲤疱疹病毒2型
<400> 3
GCGATGTAAG CCCTGTGAGA CTTTTTACGA GACGTGGTTC CTAGC 45
<210> 4
<211> 42
<212> DNA
<213> 鲤疱疹病毒2型
<400> 4
AACGCACGAG TGCGAGTCTC TTTTGCTGTG GATCGTCCAT CC 42
Claims (5)
1.一种鲤疱疹病毒2型LAMP检测试剂盒,其特征在于,包括以下成分:
该试剂盒包括以下成分:10×ThermoPol Reaction 缓冲液;Bst DNA聚合酶;dNTPs;外引物F3和B3、内引物FIP和BIP、Betaine,MgCl2,1000×SYBR Green I;
F3:5,- TTGGATCTGAACGCTTCGG - 3,;
B3:5,- CGTTGGTCTGTATGGGAGC -3,;
FIP:5,-GCGATGTAAGCCCTGTGAGACTTTTTACGAGACGTGGTTCCTAGC - 3,;
BIP:5,-AACGCACGAGTGCGAGTCTCTTTTGCTGTGGATCGTCCATCC - 3,。
2.利用权利要求1所述的一种鲤疱疹病毒2型LAMP检测试剂盒检测鲤疱疹病毒2型的方法,其步骤是:
1)、病毒DNA的获取:
采用DNAzol?试剂或Viral DNA Kit试剂盒等提取样本总DNA;
2)、LAMP扩增:
采用25μl反应体系:内引物FIP和BIP各0.8μM,外引物F3和B3各0.1μM,dNTPs1mM,Betaine0.5M,MgCl2 2-10mM,Bst DNA聚合酶8U,模板DNA5μl,10×ThermoPol Reaction Buffer 2.5μl,选择55-65℃和30-120分钟进行LAMP反应之后,80℃灭活2分钟;
3)、检测结果判定,采用下述三种方式之一:
A、发生扩增反应时,从dNTPs析出的焦磷酸根离子和反应液中的镁离子形成白色焦磷酸镁沉淀,通过肉眼判断:检测管出现明显浑浊为阳性,未见浑浊为阴性;
B、每25μl体系的反应管加1000×SYBR Green I 1-2μl,1-5 min观察结果,反应液变绿为阳性,保持橙色为阴性;
C、取扩增产物,用2%( w/v)的琼脂糖凝胶电泳后,置于凝胶成像系统中成像,电泳图片显示LAMP特征性梯状条带,则结果为阳性;如无任何条带,则结果为阴性。
3.根据权利要求2所述的一种鲤疱疹病毒2型LAMP检测试剂盒检测鲤疱疹病毒2型的方法,其特征在于:MgCl2 的浓度为8mM。
4.根据权利要求2所述的一种鲤疱疹病毒2型LAMP检测试剂盒检测鲤疱疹病毒2型的方法,其特征在于:反应温度为64℃。
5.根据权利要求2所述的一种鲤疱疹病毒2型LAMP检测试剂盒检测鲤疱疹病毒2型的方法,其特征在于:模板DNA在95℃5分钟后置于冰浴中的预处理。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN2013100194036A CN103045764A (zh) | 2013-01-18 | 2013-01-18 | 一种鲤疱疹病毒2型lamp检测试剂盒及检测方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN2013100194036A CN103045764A (zh) | 2013-01-18 | 2013-01-18 | 一种鲤疱疹病毒2型lamp检测试剂盒及检测方法 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN103045764A true CN103045764A (zh) | 2013-04-17 |
Family
ID=48058623
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN2013100194036A Pending CN103045764A (zh) | 2013-01-18 | 2013-01-18 | 一种鲤疱疹病毒2型lamp检测试剂盒及检测方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN103045764A (zh) |
Cited By (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN103409561A (zh) * | 2013-08-22 | 2013-11-27 | 苏州大学 | 一种快速检测鱼ⅱ型疱疹病毒的方法 |
CN104561373A (zh) * | 2014-12-12 | 2015-04-29 | 中国检验检疫科学研究院 | 检测金鱼造血器官坏死病病毒的试剂盒及其应用 |
WO2015085886A1 (zh) * | 2013-12-09 | 2015-06-18 | 中国水产科学研究院长江水产研究所 | 鲤疱疹病毒ⅱ型敏感的异育银鲫脑组织细胞系及其建立方法和应用 |
CN107267668A (zh) * | 2017-08-01 | 2017-10-20 | 北京科弘生物技术有限公司 | 环介导等温扩增结合侧向流动试纸条法检测鲤春病毒血症病毒 |
CN110894554A (zh) * | 2019-11-18 | 2020-03-20 | 浙江省淡水水产研究所 | 一种检测鲤疱疹病毒ii型的引物探针组、试剂盒与应用 |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN102703608A (zh) * | 2012-06-07 | 2012-10-03 | 中国水产科学研究院长江水产研究所 | 一种草鱼呼肠孤病毒rt-lamp检测试剂盒及检测方法 |
CN102851403A (zh) * | 2012-09-29 | 2013-01-02 | 中国水产科学研究院长江水产研究所 | 一种鲤疱疹病毒2型的巢式pcr检测试剂盒 |
-
2013
- 2013-01-18 CN CN2013100194036A patent/CN103045764A/zh active Pending
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN102703608A (zh) * | 2012-06-07 | 2012-10-03 | 中国水产科学研究院长江水产研究所 | 一种草鱼呼肠孤病毒rt-lamp检测试剂盒及检测方法 |
CN102851403A (zh) * | 2012-09-29 | 2013-01-02 | 中国水产科学研究院长江水产研究所 | 一种鲤疱疹病毒2型的巢式pcr检测试剂盒 |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
张金凤: "草鱼呼肠孤病毒逆转录环介导等温扩增(RT-LAMP)检测方法的建立", 《华中农业大学硕士学位论文》, 30 November 2012 (2012-11-30) * |
Cited By (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN103409561A (zh) * | 2013-08-22 | 2013-11-27 | 苏州大学 | 一种快速检测鱼ⅱ型疱疹病毒的方法 |
WO2015085886A1 (zh) * | 2013-12-09 | 2015-06-18 | 中国水产科学研究院长江水产研究所 | 鲤疱疹病毒ⅱ型敏感的异育银鲫脑组织细胞系及其建立方法和应用 |
US9598671B2 (en) | 2013-12-09 | 2017-03-21 | Yangtze River Fisheries Research Institute, Chinese Academy Of Fishery Sciences | Cyprinid herpesvirus II-sensitive brain tissue cell line of Carassius auratus gibelio and establishing method and use thereof |
CN104561373A (zh) * | 2014-12-12 | 2015-04-29 | 中国检验检疫科学研究院 | 检测金鱼造血器官坏死病病毒的试剂盒及其应用 |
CN107267668A (zh) * | 2017-08-01 | 2017-10-20 | 北京科弘生物技术有限公司 | 环介导等温扩增结合侧向流动试纸条法检测鲤春病毒血症病毒 |
CN110894554A (zh) * | 2019-11-18 | 2020-03-20 | 浙江省淡水水产研究所 | 一种检测鲤疱疹病毒ii型的引物探针组、试剂盒与应用 |
CN110894554B (zh) * | 2019-11-18 | 2023-05-02 | 浙江省淡水水产研究所 | 一种检测鲤疱疹病毒ii型的引物探针组、试剂盒与应用 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN103060475A (zh) | 一种锦鲤疱疹病毒lamp检测试剂盒及检测方法 | |
CN103045764A (zh) | 一种鲤疱疹病毒2型lamp检测试剂盒及检测方法 | |
CN102703608A (zh) | 一种草鱼呼肠孤病毒rt-lamp检测试剂盒及检测方法 | |
CN111733283B (zh) | 传染性脾肾坏死病毒、大口黑鲈鱼病毒和鳜弹状病毒的三重荧光pcr检测试剂盒 | |
CN102851403B (zh) | 一种鲤疱疹病毒2型的巢式pcr检测试剂盒 | |
CN104372104B (zh) | 一种樟疫霉菌的lamp检测引物组合物及其lamp检测试剂盒和lamp检测方法 | |
CN101440411B (zh) | 一种检测三种鱼类弹状病毒的试剂盒和核苷酸序列 | |
CN103866046A (zh) | 人疱疹病毒ebv和vzv检测试剂盒 | |
CN102912040B (zh) | 检测对虾白斑综合征病毒的环介导等温扩增引物及其应用 | |
CN103773898A (zh) | 人疱疹病毒hsv-1、hsv-2和hcmv三联检测试剂盒 | |
CN102876810A (zh) | 一种鲤春病毒血症病毒rt-pcr检测试剂盒及检测方法 | |
CN104372099A (zh) | 一种恶疫霉菌的lamp检测引物组合物及其lamp检测试剂盒和lamp检测方法 | |
CN106148565A (zh) | 一种锦鲤疱疹病毒cpa检测引物及应用 | |
CN103014181B (zh) | 一种大鲵虹彩病毒lamp检测试剂盒及检测方法 | |
CN102146483B (zh) | 甲鱼虹彩病毒的环介导等温扩增检测方法和试剂盒 | |
CN102876811A (zh) | 一种鲤春病毒血症病毒rt-lamp检测试剂盒及检测方法 | |
CN103820574B (zh) | 人疱疹病毒6型实时荧光定量pcr分型检测试剂盒 | |
CN101831506A (zh) | 鉴别PRV gE缺失疫苗株和野毒株的试剂盒 | |
CN105296669A (zh) | 传染性造血器官坏死病毒(ihnv)的rt-lamp检测引物组、试剂盒及检测方法 | |
CN102876809B (zh) | 一种草鱼呼肠孤病毒rt-pcr检测试剂盒及检测方法 | |
CN104372092A (zh) | 一种木香疫霉的lamp检测引物组合物及其lamp检测试剂盒和lamp检测方法 | |
CN104232755A (zh) | 一种烟草疫霉菌lamp检测引物及其快速检测方法 | |
CN104152580A (zh) | 用于检测锦鲤疱疹病毒Sph基因的引物组及其应用 | |
CN104195270B (zh) | 对虾白斑综合症病毒可视快速检测试剂盒及检测方法 | |
CN116622909A (zh) | 一种猫疱疹病毒i型的恒温扩增检测试剂及检测方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
C02 | Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001) | ||
WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20130417 |