CN103040905B - 雪灵芝或其提取物在制备抗衰老的药物或保健食品中的用途 - Google Patents

Abstract

本发明提供了雪灵芝或其提取物在制备抗衰老的药物或保健食品中的用途。本发明还提供了一种抗衰老的药物或保健食品组合物。本发明药物雪灵芝或其提取物用于抗衰老，药效明确，为临床提供了一种新的选择。

Description

雪灵芝或其提取物在制备抗衰老的药物或保健食品中的用途

技术领域

本发明涉及雪灵芝或其提取物在制备抗衰老的药物或保健食品中的用途。属药物领域。

背景技术

衰老（aging）又称老化，指在正常情况下，当生物发育成熟后，随着年龄的增长，自身机能减退，内环境稳定能力与应激能力下降，结构、功能逐步退行性变，并且趋向死亡，同时不可逆转的现象。人口老龄化的问题向来是世界各国学者关注的一个共同焦点。目前，世界上在亚洲生活的老年人占到了全世界老年人数量一半以上（占54%），其次是欧洲（22%），根据联合国专题项目的研究估算，2050年每5个人中将会有一位老年人，到2150年，每3个人中就会有一位老年人。延缓衰老、健康长寿是全世界美好的愿望，人类对抗衰老的研究从未停止过。人口老龄化的问题向来是世界各国学者关注的一个共同焦点。延缓衰老、健康长寿是全世界美好的愿望。研究者通过对衰老、抗衰老的研究，志在能够延缓衰老的过程，避免、减少老年病的发生，使老年人能健康生活，并提高老年人生活质量。

衰老机制的研究是现代老年基础医学研究中的一个重要课题。迄今为止，关于衰老机制的学说和假设已有数百种，譬如自由基学说、免疫机能退化学说、神经内分泌学说、蛋白质合成差错积累学说等，以及近年来基于分子水平和基因水平提出的基因调控学说、DNA损伤修复学说、线粒体损伤学说、端粒酶学说等。学习和记忆是两个有联系的神经活动过程，是大脑高级神经生理活动之一。学习记忆主要是中枢神经系统各部分相互作用、共同完成的复杂神经活动过程。衰老的早期表现之一就是学习记忆能力的减退，并且随着机体衰老的加剧，学习记忆能力的减退会越发明显。目前报道的与衰老有关的抗氧化酶类有：过氧化物歧化酶（Superoxide dismutase，SOD）、过氧化氢酶(Catalase，CAT)、一氧化氮(Nitric oxide，NO)与一氧化氮合酶（Nitric oxide synthase，NOS）、谷胱甘肽过氧化物酶（Glutathineperoxidase，GSH-Px）、乙酰胆碱酯酶（Acetylcholinesterase，AChE）等。在抗衰老实验的研究中，通过测定抗氧化酶类的活性，来作为判断药物是否具有抗衰老作用的指标。

雪灵芝，学名卵瓣蚤缀（Areneria kansuensis Maxim.var.ovatipetataTsui），系石竹科（Caryophyllaceae）蚤缀属（Arenaria L.），为多年生草本植物，全草呈垫状半圆球形，藏药名为阿仲嘎博，是一种尤为珍贵的野生藏药资源，有着悠久的药用历史。性味甘寒，入肝、胆、脾经。主要功能为清热解毒、利胆退黄、通淋止痛，用于治疗流感、黄疸、肺炎、筋骨疼痛、淋病等。迄今为止的研究表明，雪灵芝含有多种化学成分：皂苷、黄酮类、生物碱、甾体类、三萜、香豆素、多糖、18种氨基酸、多种维生素、10余种微量元素，且具有较高钙、锌含量，其中皂苷含量较高。《中药大辞典》中记载：雪灵芝全草可用于治疗感冒、肺炎、黄疸、肾结石、淋巴结核、子宫病等。此外，按照《食品安全性毒理学评价程序和方法》分级，雪灵芝属于无毒级，可安全食用。现代药理学研究表明，雪灵芝具有抗缺氧、对心血管系统的作用，雪灵芝对缺血再灌注脑损伤有明显的保护作用，其可能机制是雪灵芝能有效拮抗自由基。雪灵芝具有免疫调节、抗炎、抗肿瘤作用；对消化系统有作用，有明显抗乙肝病毒的作用。

目前对雪灵芝的抗缺氧作用已有研究报道，但对抗衰老的功能未见报道。

发明内容

本发明的技术方案是提供了雪灵芝或其提取物的新用途。

本发明提供了雪灵芝或其提取物在制备抗衰老的药物或保健食品中的用途。

其中，所述的药物或保健食品是抗亚急性衰老的药物或保健食品。

其中，所述的药物或保健食品是具有改善学习记忆能力作用的药物或保健食品。

其中，所述的雪灵芝为石竹科蚤缀属Areneria kensuensis varovatipetala tsui的全草。

其中，所述的雪灵芝为雪灵芝原生药粉。

其中，所述的雪灵芝提取物为雪灵芝水或有机溶剂提取物。

本发明还提供了一种抗衰老的药物或保健食品组合物，它是由有效量的雪灵芝原生药粉或有机溶剂提取物为活性成分，加入药学上可接受的辅料或辅助性成分制备而成的药剂。

其中，所述的有机溶剂为50-95%乙醇。

其中，所述的药剂是片剂、胶囊剂、颗粒剂、丸剂或口服液。

本发明药物雪灵芝或其提取物用于抗衰老，药效明确，为临床提供了一种新的选择。

具体实施方式

实施例1本发明药物的制备

取雪灵芝直接打粉，装胶囊，得胶囊剂。

实施例2本发明药物的制备

取雪灵芝，加水煎煮，浓缩，浓缩液灌装得口服液。

实施例3本发明药物的制备

取雪灵芝，加入50%乙醇提取，挥干乙醇，浓缩，加入淀粉，制粒、整粒，得颗粒剂。

本发明雪灵芝可购于西藏金珠制药厂制备的全草干粉剂。

以下通过具体药效学试验证明本发明的有益效果。

试验例1藏药雪灵芝抗衰老作用研究

本实验选用西藏金珠制药厂的全草干粉制剂，采用配制培养基饲养果蝇和配制不同浓度溶液灌喂小鼠两种方法，以观察雪灵芝抗衰老的作用，为进一步开发雪灵芝资源提供实验依据。

1实验材料

1.1实验动物

黑腹果蝇，由四川大学生命科学院提供；健康昆明种的清洁级小鼠40只，体质量为（20±2）g，雌雄各半，由四川省医学科学院实验动物研究所提供。

1.2药品与试剂

雪灵芝为西藏金珠制药厂提供的全草干粉制剂，试剂盒购自南京建成生物制剂研究所，其余试剂均为国产分析纯。

1.3仪器

SW-CJ-2FD超净工作台（苏州安泰空气技术有限公司）；JY-92-2D超声波细胞破碎仪（宁波新芝科仪器研究所）；YX280B手提式不锈钢蒸汽锅（上海三申医疗仪器厂）；TDL-台式离心机（上海安亭科学仪器）；DKB-510A超级恒温水浴（上海精宏实验设备有限公司）；LRH-250S恒温培养箱（广州医疗器械厂）；DHG-070A电热恒温鼓风箱（上海精宏设备有限公司）；TU-800SPC紫外可见分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司）。

2实验方法

2.1果蝇生存试验

将果蝇放入含有0.02%、0.05%、0.5%三种不同剂量雪灵芝制剂的培养管中饲养，以不加雪灵芝的培养管为空白对照组，共分四组。每个剂量组果蝇200只，雌雄各半，每组设4个平行，每管放同性果蝇25只。每天早晚各观察一次，统计果蝇的死亡数目和生存数，直到全部死亡。比较各组寿命的长短,记录其半数死亡时间、最高寿命和平均寿命。

2.2小鼠分组及给药

选择40只健康昆明种小鼠，随机分为5组：即正常对照组、模型对照组、雪灵芝高、中、低剂量组（1000mg/kg、500mg/kg、250mg/kg）。造模方法采用小鼠衰老模型，以生理盐水配置10%的Ｄ－半乳糖溶液，除正常对照组外，其余4组每天在颈背部皮下分别注射0.14g/kg的Ｄ－半乳糖溶液造小鼠衰老模型，连续给予Ｄ－半乳糖50天。从第二周开始，对雪灵芝高、中、低剂量组的小鼠，每天分别灌胃不同剂量的雪灵芝；空白对照组、模型组对照组小鼠灌胃等量生理盐水。

2.3观察及检测指标

2.3.1日常体征行为学观察每日定时观察记录小鼠的体征行为及其活动情况，记录小鼠的体重变化、毛发光泽程度、采食状况、对刺激反应的灵敏度、激怒反应、嗜睡程度等。

2.3.2检测指标末次给药2h后，取出脑、脾、肾、肝，吸去血液，剪去脂肪、系膜。将小鼠脾脏，经生理盐水洗净后，用滤纸粘去脏器表面水分，称重并计算脾脏指数。将脑、脾、肾、肝制备成10%的组织匀浆，按试剂盒说明方法，分别测定小鼠的脑、脾、肾、肝中SOD、MAD含量。

2.4统计学处理

实验数据采用SPSS13.0统计软件进行方差分析，结果以表示，组间采用t检验进行统计。

3实验结果

3.1雪灵芝对果蝇寿命的影响

经过观察、记录，完成果蝇寿命计数后，对所得的实验数据进行统计学分析，结果表明，与培养基中不加药组相比，加0.02%、0.05%和0.5%的雪灵芝对果蝇的半数存活时间、平均寿命和最高寿命均有不同程度的延长作用。0.05%的剂量分别将雌雄果蝇的平均寿命延长了32.3%和31.6%，对照组相比，延长效果明显，差异具有统计学意义（P＜0.05），初步推断这个浓度的雪灵芝最适合果蝇的生长。结果见表1。

表1雪灵芝对果蝇寿命的影响

注：与对照组相比，*P＜0.05，**P＜0.01

3.2实验期小鼠状态观察

正常组小鼠精神状态良好、行动敏捷、毛发光泽、不易抓取；模型组小鼠精神不振、行动迟缓、毛色枯槁不光泽、脱毛抓取时不反抗，易于抓取；给药组小鼠上述表现较模型组有良性逆转；雪灵芝大剂量组较正常组小鼠外形无变化，活动如常。

3.3雪灵芝对脾指数的影响

D-半乳糖模型组小鼠脾脏系数明显下降，与正常对照组相比有显著性差异（P<0.05），说明D-半乳糖模型诱导的衰老小鼠免疫器官脾脏的重量明显下降。灌胃雪灵芝后，中、高剂量组与模型组相比，脾脏指数明显增高，有显著性差异（P<0.05)）；低剂量组与模型组相比，差异无统计学意义（P＞0.05），说明脾脏指数随着雪灵芝剂量增大而明显升高。结果见表2。

表2小鼠脾脏指数

注：与模型组相比，*P＜0.05，**P＜0.01

3.4雪灵芝对小鼠SOD含量的影响

正常小鼠组织的SOD含量较高，而衰老小鼠组织的SOD含量较低。雪灵芝能够提高小鼠脑组织SOD含量，与模型组相比，低剂量组的差异无统计学意义（P＞0.05），中剂量组的差异具有统计学意义（P＜0.05），高剂量组的差异具有显著的统计学意义（P＜0.01），接近正常水平。灌胃雪灵芝后，能够提高小鼠肾组织SOD含量，与模型组相比，低剂量组的差异无统计学意义（P＞0.05），中剂量组的差异具有统计学意义（P＜0.05），高剂量组的差异具有显著的统计学意义（P＜0.01）。雪灵芝能够明显提高小鼠肝组织SOD含量，与模型组相比，低、中、高剂量组的差异均具有显著的统计学意义（P＜0.01）。结果见表3。

表3雪灵芝对D-半乳糖衰老模型SOD含量的影响

注：与模型组相比，*P＜0.05，**P＜0.01

3.5雪灵芝对小鼠MAD含量的影响

正常小鼠组织的MAD含量较低，而衰老小鼠组织的MAD含量较低。雪灵芝能够降低小鼠脑组织MAD含量，与模型组相比，低剂量组的差异无统计学意义（P＞0.05），中剂量组的差异具有统计学意义（P＜0.05），高剂量组的差异具有显著的统计学意义（P＜0.01），接近正常水平。灌胃雪灵芝后，能够降低小鼠肾组织MAD含量，与模型组相比，低剂量组的差异无统计学意义（P＞0.05），中、高剂量组的差异均具有显著的统计学意义（P＜0.01）。

雪灵芝能够明显降低小鼠肝组织MAD含量，与模型组相比，低剂量组差异具有统计学意义（P＜0.05），中、高剂量组的差异均具有显著的统计学意义（P＜0.01），高剂量组超过正常水平（P＜0.01）。结果见表4。

表4雪灵芝对D-半乳糖衰老模型MAD含量的影响

4讨论

本实验先通过果蝇生存实验，初步表明雪灵芝具有一定的抗衰老作用，并进一步探讨其对D－半乳糖衰老小鼠模型的抗衰老作用。实验中采用注射D－半乳糖的经典方法造衰老小鼠模型，长期注射D－半乳糖可造成全身代谢紊乱、免疫器官退化、自由基过剩等。实验结果显示，模型小鼠出现明显的衰老体征行为，比如精神不振、行动迟缓、毛色枯槁不光泽、易于抓取等，脾脏出现萎缩，脑、肾、肝中SOD含量下降，MAD含量含量增高，表明经D－半乳糖注射造衰老小鼠模型是成功的。

现已知由自由基引起的老化，不仅威胁到人的寿命，还伴随与衰老有关的疾病，比如老年痴呆症、癌症、心脑血管疾病等，甚至患者日益年轻化，这已逐渐成为人类健康的大敌和社会繁荣的沉重负担。正常情况下，机体内自由基的生成与消除保持平衡，但随着年龄的增长或疾病的影响，体内抗氧化酶的活性逐渐减弱，不能及时清除自由基而导致脂质过氧化物的过度生成，使细胞的膜结构与功能发生障碍，引起细胞的衰老及死亡。SOD是体内清除自由基的重要抗氧化酶，其含量高低能直接反应出机体清除自由基的能力，而MDA是过氧化脂质的降解产物，与年龄增长呈正相关，其含量高低能间接反应机体细胞受自由基攻击的严重程度。

本实验研究表明，D－半乳糖衰老模型小鼠体内产生了氧化损伤，脂质过氧化物的体内蓄积量增大。雪灵芝能够对衰老模型小鼠体内SOD的活性有促进作用，同时能够抑制MDA含量增加，说明抗老化作用与其提高抗氧化酶的活性和抑制脂质过氧化物的产生等有关。实验数据显示，雪灵芝提高衰老小鼠肝组织SOD含量、降低MDA含量作用最为明显，说明雪灵芝保护肝细胞的作用最明显。过氧化脂质大部分由肝细胞产生，其分解也主要在肝脏，MDA是过氧化脂质的主要降解产物。本实验还表明雪灵芝能提高衰老小鼠的脾指数，能明显抑制小鼠在衰老过程中脾脏出现的萎缩，有保护免疫器官、增强免疫系统的作用。这表明，雪灵芝可提高机体免疫能力，清除体内氧自由基，抑制脂质过氧化，能够抗衰老，对与自由基有关的疾病有防治作用。

试验例2雪灵芝对亚急性衰老小鼠脑组织NOS、GSH-Px、AChE活力的影响

本实验采用不同浓度的雪灵芝溶液干预治疗亚急性衰老小鼠，测定其脑组织中NOS、GSH-Px、AChE活力的变化，以探讨雪灵芝抗衰老作用的初步机制。

1材料和方法

1.1材料动物选用昆明种小鼠60只，体重18～22克，雌雄各半，由成都中医药大学动物实验中心提供。各组小鼠颗粒饲料喂养，自由饮食、饮水，昼夜自然交替。

1.2药品与试剂雪灵芝全草干粉剂：西藏金珠制药厂；D-半乳糖（批号：L101029）：Sigmar公司；NOS测试盒（批号：20100715）、GSH-PX测试盒（批号：20100713）、ACHE测试盒（批号：20100708）：南京建成生物工程研究所。1.3主要仪器MS-500E型半自动生化分析仪：四川美生科技有限公司；722光栅-可见分光光度计：上海第三分析仪器厂；冷却远心分离机：久保田制作所；

电热恒温水箱：上海一恒科学仪器有限公司；DY-89-Ⅰ型电动玻璃匀浆机：宁波新芝科器研究所；MA110型电子分析天平：上海第二天平仪器厂。

1.4实验方法

1.4.1分组与模型建立将60只小鼠随机分为五组：空白对照组、衰老模型组、雪灵芝低、中、高剂量组，每组12只。模型组和给药组小鼠颈背部皮下注射10%D-半乳糖0.1ml/10g·d（生理盐水配制），连续51天，对照组注射等量生理盐水；实验第二周，给药组小鼠每日定时灌胃8%、4%、2%浓度的雪灵芝溶液0.125ml/10g·d（生理盐水配制），连续44天，对照组和模型组小鼠灌胃等量生理盐水。

1.4.2指标检测

每日定时观察小鼠活动情况，采食程度，对刺激反应的灵敏度，嗜睡程度等。

实验第52天，脱臼法处死小鼠，立即断头，迅速取出小鼠脑，用冰冷的生理盐水洗掉血水，滤纸拭干并称重。称重后，迅速将小鼠脑置于预冷的小烧杯中，用冰冷的不锈钢眼科剪将其剪成小碎片，移入预冷的匀浆瓶中，并在匀浆瓶中倒入小鼠脑重量9倍的冷生理盐水，在0℃条件下用玻璃匀浆机制成10%脑组织匀浆。随后，在0℃、3500r/min条件下，离心10分钟，取上清液，严格按照试剂盒操作测定NOS、GSH-Px、AChE活力。

1.5数据处理与统计学分析

所得数据用均数±标准差表示，用SPSS15.0统计软件进行单因素方差分析。

2实验结果

空白对照组小鼠脑组织NOS、GSH-Px活力较高，与模型组、低剂量组、中剂量组相比差异具有显著差异（P<0.01），与高剂量组相比有差异（P<0.05）；模型组小鼠脑组织NOS活力较低，与低剂量组、中剂量组相比差异不明显（P>0.05），与高剂量组相比差异显著（P<0.01）；模型组小鼠脑组织GSH-Px活力较低，与低剂量组、中剂量组、高剂量组相比差异均具有显著差异（P<0.01）。空白对照组小鼠脑组织AChE活力较低，与模型组、低剂量组、中剂量组相比差异均具有显著的统计学意义（P<0.01），与高剂量组相比差异具有统计学意义（P<0.01）；模型组小鼠脑组织AChE活力较高，与低剂量组、中剂量组、高剂量组相比差异均具有显著的统计学意义（P<0.01）。具体数据见表5。

表5雪灵芝对亚急性衰老小鼠脑组织NOS、GSH-Px、AChE活力的影响

注：与对照组相比，*P<0.05，**P<0.01；与模型组相比，^▲P<0.05，^▲▲P<0.01。

3讨论

机体在衰老过程中，体内的细胞、组织、器官逐渐发生退行性变，与衰老相关酶类的活性也会随之发生改变。从本实验检测指标看来，雪灵芝可以提高亚急性衰老小鼠脑组织NOS、GSH-Px活力，降低AChE活力。NOS在体内起到催化生成NO的作用，而NO既是一种神经递质，也是一种极不稳定的强氧化剂。本实验结果，证实了小鼠在衰老的过程中，NOS活力下降，相应脑内NO含量有所下降；同时，雪灵芝对衰老过程中NOS活力发挥了一定的影响作用，雪灵芝高剂量组NOS活力增强，使衰老过程中NO的产生。GSH-Px是体内清除H₂O₂和许多过氧化物的重要酶类。雪灵芝能够提高亚急性衰老小鼠脑组织GSH-Px活力，并随着剂量的增高酶活性有增加的趋势，说明雪灵芝具有良好的抗氧化能力，能够增强机体对自由基的清除，从而在抗衰老进程中发挥作用。AChE是在胆碱能神经元的突触处水解神经递质ACh的酶类，AChE含量变化在一定程度上可体现出胆碱能神经元的功能活性，中枢胆碱能系统的损伤是导致衰老功能性缺陷的关键因素。雪灵芝能够降低亚急性衰老小鼠脑组织AChE活力，以提高小鼠脑内ACh含量。

实验显示，雪灵芝可通过促进脂类过氧化物、有机氢过氧化物等的清除，增强脑组织抗氧化能力，提高脑内ACh含量，从而改善胆碱能系统在学习和记忆中的作用等方面来实现抗衰老的作用。

试验例3雪灵芝对D-半乳糖致亚急性衰老小鼠学习记忆能力的影响

本实验立足于学习记忆能力的改善来研究雪灵芝抗衰老的作用。

1材料和方法

1.1材料动物选用昆明种小鼠60只，体重18～22克，雌雄各半，由成都中医药大学动物实验中心提供。各组小鼠颗粒饲料喂养，自由饮食、饮水，昼夜自然交替。

1.2药品与试剂雪灵芝全草干粉剂：西藏金珠制药厂；D-半乳糖：Sigmar公司，批号：L101029。

1.3仪器Morris水迷宫视频跟踪分析系统：成都泰盟科技有限公司；DT-200小鼠跳台自动测试箱：成都泰盟科技有限公司；DT-200小鼠跳台自动测试仪：成都泰盟科技有限公司。

1.4实验方法

1.4.1分组与模型建立分组前，对所有小鼠进行一次Morris水迷宫定位航行实验，按照小鼠找到平台的时间（潜伏期）和体重，将60只小鼠随机分为五组：空白对照组、衰老模型组、雪灵芝低、中、高剂量组，每组12只。模型组和给药组小鼠颈背部皮下注射10%D-半乳糖0.1ml/10g·d（生理盐水配制），连续51天，对照组注射等量生理盐水；实验第二周，给药组小鼠每日定时灌胃8%、4%、2%浓度的雪灵芝溶液0.125ml/10g·d（生理盐水配制），连续44天，对照组和模型组小鼠灌胃等量生理盐水。

1.4.2学习记忆能力测试

1.4.2.1Morris水迷宫

1.4.2.1.1定位航行实验（Place navigation test）

Morris水迷宫主要由圆形水池、可移动圆柱形透明有机玻璃平台、自动记录系统组成。圆形水池直径80cm，高度为50cm，水温25±2℃，并将水池分为四个象限。平台直径5cm，高度18cm，置于第三象限，且位于圆心和池壁连线中心，实验过程中位置保持不变，没于水下1cm。

实验第45天，于小鼠注射、灌胃后进行训练，上、下午各一次，历时5天。将小鼠面向池壁，从第一象限固定入水点轻轻放入水中，记录其在120s内找到平台的时间（潜伏期），找到平台后让小鼠在平台上停留20s。如果小鼠在120s内未能找到平台，则将其引至平台，同时让其在平台上停留20s，再放回笼中，潜伏期记为120s。实验前四天为训练期，不计入统计分析。实验第五天，以上、下午两次潜伏期的算术均值作为学习成绩。

1.4.2.1.2空间探索实验（Spatial probe test）

定位航行实验结束后24小时，移出平台，仍以第一象限固定入水点将小鼠面向池壁轻轻放入水中，测定小鼠在120s内穿越平台相应位置的次数和在平台所在象限停留的时间。

1.4.2.2跳台实验（Step down test）

小鼠跳台仪是32cm×22.5cm×33cm透明的被动回避条件反射箱，用不透明黑色塑料板隔成六间，箱底由数根间距0.5cm的细铜栅组成。每间的左后角放置了一个高4.5cm，直径4.5cm的圆柱形橡皮垫。实验时，将小鼠在反应箱中，适应3min，然后立即通24V交流电，小鼠受到电击，其正常反应为跳回橡皮垫以躲避电击，通电5min。第一天为跳台训练，记录小鼠在5min内从平台跳至铜栅的次数（错误次数），作为小鼠学习成绩。24h后，重复测验，记录小鼠第一次跳下平台的时间（潜伏期）和5min内的错误次数，作为记忆成绩。如果5min内小鼠未跳下平台，则潜伏期记为300s，错误次数记为0次。本实验在空间搜索实验结束后进行。

由于衰老模型组有3只小鼠、低剂量组有2只小鼠行为过于迟缓，不利于进行行为学测试，故在实验中这5只小鼠未参加测试。

1.5数据处理与统计学分析

所得数据用均数±标准差表示，用SPSS15.0统计软件进行单因素方差分析。

2结果

2.1Morris水迷宫

2.1.1雪灵芝对昆明种小鼠定位航行能力的影响

实验结果显示：各组潜伏期存在一定差异，D-半乳糖致衰老小鼠定位航行能力降低，雪灵芝对衰老小鼠在定位航行实验中的学习记忆能力有一定改善作用。空白对照组平均潜伏期较短，与模型组、低剂量组相比均有显著差异（P<0.01），与中剂量组相比有差异（P<0.05），与高剂量组相比差异不明显（P>0.05）。模型组平均潜伏期较长，与低剂量组相比差异不明显（P>0.05），与中、高剂量组相比均存在显著差异（P<0.01）。具体数据见表6。

表6雪灵芝对亚急性衰老小鼠定位航行实验的影响

注：与对照组相比，*P<0.05，**P<0.01；与模型组相比，^▲P<0.05，^▲▲P<0.01。

2.1.2雪灵芝对昆明种小鼠空间搜索能力的影响

实验结果显示：雪灵芝对于亚急性衰老小鼠在空间搜索时间中的记忆能力有一定改善作用。穿越原平台次数的实验：空白对照组穿越的次数高于其余四组，模型组、低剂量组、中剂量组穿越次数均显著低于空白对照组（P<0.01），高剂量组穿越次数也低于空白对照组（P<0.05）；模型组与低剂量相比无显著差异（P>0.05），与中剂量组相比存在差异（P<0.05），与高剂量组相比存在显著差异（P<0.01）。停留原平台象限的时间：空白对照组停留时间最长，与其余四组均有显著差异（P<0.01）；模型组小鼠停留时间，与低剂量组、中剂量组均无显著差异（P>0.05），与高剂量组相比差异（P<0.01）。具体数据见表7。

表7雪灵芝对亚急性衰老小鼠空间探索实验的影响

注：与对照组相比，*P<0.05，**P<0.01；与模型组相比，^▲P<0.05，^▲▲P<0.01。

2.2.2雪灵芝对昆明种小鼠跳台实验被动反应能力的影响

实验结果显示：雪灵芝对D-半乳糖致衰老小鼠的学习记忆能力有一定改善作用。第一天错误次数的测试代表了小鼠的学习能力，空白对照组与模型组、低剂量组相比存在差异、具有统计学意义（P<0.05），与中剂量组、高剂量组相比差异不明显、无统计学意义（P>0.05）；模型组与低剂量组相比差异不明显（P>0.05），与中剂量组、高剂量组相比存在差异（P<0.05）。第二天错误次数的测试代表了小鼠的记忆能力，空白对照组与模型组、低剂量组相比均存在显著差异（P<0.01），与中剂量组、高剂量组相比差异不明显、无统计学意义（P>0.05）；模型组与低剂量组相比差异不明显（P>0.05），与中剂量组相比存在差异（P<0.05），与高剂量组相比存在显著差异（P<0.01）。第二天潜伏期测试：空白对照组与模型组相比均存在显著差异（P<0.01），与低剂量组相比存在差异（P<0.05），与中剂量组、高剂量组相比差异不明显（P>0.05）；模型组与低剂量组相比差异不明显（P>0.05），与中剂量组、高剂量组相比存在差异（P<0.05）。具体数据见表8。

表8雪灵芝对亚急性衰老小鼠跳台实验的影响

注：与对照组相比，*P<0.05，**P<0.01；与模型组相比，^▲P<0.05，^▲▲P<0.01。

3讨论

本实验采用颈背部皮下注射D-半乳糖的方法构建亚急性衰老小鼠模型，通过行为学测试发现模型组小鼠的学习记忆能力明显下降。同时，实验结果显示：给药组在灌胃给予不同剂量的雪灵芝溶液后，在Morris水迷宫实验中，中、高剂量组不同程度的缩短了找到平台的潜伏期，增加了跨越平台的次数及在原平台象限停留时间；在小鼠跳台实验中，中、高剂量组第一天、第二天错误次数有所减少，第二天潜伏期有所延长。实验结果显示出给药组在辨别学习能力和被动反应能力有不用程度的提高。实验提示：雪灵芝具有一定改善D-半乳糖致亚急性衰老模型小鼠学习记忆能力的作用。

综上所述，本发明通过果蝇生存实验，证明雪灵芝具有一定的抗衰老作用，可以提高亚急性衰老小鼠脑组织NOS、GSH-Px活力，降低AChE活力，对D-半乳糖致衰老小鼠的学习记忆能力有一定改善作用，药效明确，为临床提供了一种新的选择。

Claims (5)

1.雪灵芝在制备提高亚急性衰老脑组织NOS、GSH-Px活力，降低AChE活力的药物或保健食品中的用途。

2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于：所述的雪灵芝为石竹科蚤缀属Areneria kensuensis var ovatipetala tsui的全草。

3.根据权利要求1所述的用途，其特征在于：所述的雪灵芝为雪灵芝原生药粉。

4.根据权利要求1所述的用途，其特征在于：所述药物是由有效量的雪灵芝原生药粉为活性成分，加入药学上可接受的辅料或辅助性成分制备而成的药剂。

5.根据权利要求4所述的用途，其特征在于：所述的药剂是片剂、胶囊剂、颗粒剂、丸剂或口服液。